Характеристика колонизационной резистентности слизистых оболочек дыхательного тракта при бронхитах у детей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат биологических наук Метельская, Валерия Алексеевна

• Метельская, Валерия Алексеевна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Метельская, Валерия Алексеевна

Оглавление

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Классификация, этиология, патогенез и факторы риска развития бронхитов у детей

1.2. Микроэкология дыхательных путей здоровых детей, методы оценки её состояния и колонизационной резистентности

1.3. Роль микробного фактора в возникновении бронхообструктивного синдрома у детей, больных бронхитами

1.4. Гуморальный иммунитет у детей в норме и при бронхитах

1.4.1. Возрастные особенности иммунитета в детском возрасте. Данные о гуморальном иммунитете здоровых детей. Понятие о «местном иммунитете» и «колонизационной резистентности»

1.4.2. Показатели гуморального иммунитета при бронхитах

1.5. Взаимодействие ТЫ1 с лигандами (РАМР) инфекционных агентов различной природы

1.5.1.Экспрессия ТЫ1 у человека

1.5.2. Роль ТЬЯ в развитии защитных реакций при инфекционных заболеваниях

Глава 2. Материалы и методы исследований

2.1. Характеристика обследованных детей

2.2. Лабораторные методы исследования

2.2.1. Микробиологические методы

2.2.2.Методы исследования нативной и экспериментальной адгезии

2.2.2.1. Расчет индексов ИЕКНЭ и ИЕКБЭ

2.2.2.2. Подсчет количества лейкоцитов в мазках

2.2.2.3. Расчет индексов ИИКНЭ и ИИКБЭ

2.2.2.4. Расчет коэффициента адгезии (К)

2.2.3. Иммунологические методы исследования

2.2.3.1. ИФА- исследования для выявления антител к инфекционным агентам

2.2.3.2. Определение цитокинов в слюне детей

2.2.3.3. Количественное определение секреторных иммуноглобулинов в слюне детей

2.2.3.4. Определение содержания общего 1§Е в слюне

2.2.4. Определение коэффициента сбалансированности (Кеб) факторов местного иммунитета полости рта

2.2.5. Молекулярно-генетические методы определения экспрессии мРНК генов ТЬК-2, ТЫ1-4, ТЫ1-3 и ТЬЯ-8

2.2.6. Биохимические методы исследования

2.2.6.1. Количественное определение содержания альбумина в слюне

2.2.6.2. Количественное определение содержания общего белка в слюне

2.2.6.3. Определение активности фермента лизоцима слюны

2.2.9. Статистическая обработка полученных данных

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1. Клиническая характеристика пациентов

3.2. Оценка микробиоценоза слизистой ЗСГ у клинически здоровых детей

3.3. Характеристика микробиоценоза слизистой ЗСГ у детей, больных бронхитами

3.4. Результаты исследований на инфицирование вирусными и внутриклеточными патогенами

3.5. Нативная и экспериментальная адгезия УПМ к назофарингеальным и буккальным эпителиоцитам больных бронхитами и клинически здоровых детей

3.6. Результаты сравнительного исследования уровней экспрессии мРНК генов ТЬЯ-2, ТЬЯ-4, ТЬИ-З и ТЫ1-8 у пациентов с бронхитами и здоровых

детей контрольной группы

3.7. Результаты определения местной продукции цитокинов у пациентов с бронхитом и здоровых детей

3.8. Результаты сравнительного исследования показателей местного иммунитета пациентов с бронхитами и здоровых детей контрольной группы

Заключение

Выводы

Список литературы

Список сокращений

АТ антитела

БАЛЖ бронхоальвеолярная жидкость

БЭ буккальный (щечный) эпителий

ВДП верхние дыхательные пути

ВГТГ вирус простого герпеса

ГМ-КСФ гранулоцитарно - макрофагальный колониестимулирующий фактор

ДГКБ детская городская клиническая больница

ДК дендритные клетки

ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота

ЕКБЭ естественная колонизация буккального эпителия

ЕКНЭ естественная колонизация назофарингеального эпителия

ЖКТ желудочно-кишечный тракт

ЗСГ задняя стенка глотки

ИЕКБЭ индекс естественной колонизации буккального эпителия

ИЕКНЭ индекс естественной колонизации назофарингеального эпителия

ИИКБЭ индекс искуственной колонизации буккального эпителия ИИКНЭ индекс искуственной колонизации назофарингеального эпителия

ИЛ интерлейкин

ИНФ-у интерферон гамма

ИНФ-а интерферон альфа

ИФА иммуноферментный анализ

КДЛ клинико-диагностическая лаборатория

КОЕ колониеобразующая единица

КР колонизационная резистентность

Кеб коэффициент сбалансированности факторов местного иммунитета полости рта

ЛПС липополисахарид

мРНК матричная РНК

НК нормальные клетки - киллеры

НДП нижние дыхательные пути

НЭ назофарингеальный эпителий

ОМЧ общее микробное число

ОРВИ острые респираторные вирусные инфекции

ПЦР полимеразная цепная реакция

РИД радиальная иммунодиффузия по Манчини

РИФ реакция прямой иммунофлуоресценции

РНК рибонуклеиновая кислота

PCB респираторно-синцитиальный вирус

СОЭ скорость оседания эритроцитов

УПМ условно-патогенная микрофлора

ФНО-а фактор некроза опухолей альфа

ЧБР часто болеющий ребенок

ЦМВ цитомегаловирус

CD клеточные рецепторы

Ig иммуноглобулин

IgA иммуноглобулин А

IgM иммуноглобулин М

IgG иммуноглобулин в

IgE иммуноглобулин Е

PAMP (Pathogen-associated molecular patterns) консервативные молекулярные структуры

PRR (Pattern recognition receptors) образ распознающие рецепторы

slgA секреторный иммуноглобулин А

sc свободный секреторный компонент

TLR (Toll-like receptor) То11-подобный рецептор

ГИСК - Государственный институт стандартизации и контроля

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеристика колонизационной резистентности слизистых оболочек дыхательного тракта при бронхитах у детей»

Введение

Бронхит - одно из наиболее частых после ОРВИ заболеваний органов дыхания у детей. Регистрируемая заболеваемость бронхитами у детей в среднем около 100 заболеваний на 1000 детей в год (у детей от 1 до 3 лет этот показатель 200, а у детей первого года жизни - 75) [77,82]. Широкий диапазон в показателях распространенности бронхитов, судя по всему, объясняется тем, что при обращении в поликлинику зачастую диагностируется не острый бронхит, а ОРВИ. Расширенное использование понятия «часто болеющие дети» ведет к гиподиагностике рецидивирующих форм бронхитов [74].

Проведенный анализ литературных данных показывает, что поражения нижних дыхательных путей регистрируются более чем у 25% детей, больных ОРВИ, причем большинство из них составляют бронхиты различной этиологии [75].

Из общего числа детей, находящихся на диспансерном учете в поликлиниках, больных с рецидивирующим и с обструктивными формами бронхитов фактически имеется в 2,2 - 2,8 больше, чем регистрируется. Это ведет к недостаточному и, нередко, неадекватному лечению этой категории детей [68,72].

В настоящее время ряд авторов считает, что под диагнозом «рециди-вурующий бронхит», как правило, скрывается недиагностированная бронхиальная астма [61].

Основную роль в развитии бронхитов играют вирусы и вирусно-бактериальные ассоциации. Отмечается рост роли внутриклеточных возбудителей [75].

Начало большинства заболеваний органов дыхания, в том числе бронхитов, связано с развитием патологических процессов в слизистых оболочках дыхательных путей, которые в норме задерживают и элиминируют около 70% поступающих извне патогенов. Барьерные функции слизистых оболочек осуществляются с помощью механизма колонизационной резистентности

(KP). Это физиологический феномен, который направлен на поддержание микроэкологического гомеостаза. Термин колонизационная резистентность впервые введен Van der Waaij D. в 1971 году, под которым понимают совокупность взаимосвязанных физиологических, микробиологических и иммунологических факторов организма, придающих стабильность индиген-ной (нормальной) микрофлоре и препятствующих колонизации организма посторонними микроорганизмами [87, 88].

До настоящего времени не существует общепринятой классификации нормальной микрофлоры, однако чаще ее принято разделять на индигенную, транзиторную и факультативную. В то время как роль транзиторной микрофлоры в настоящее время активно изучается, основная функция индигенной микрофлоры известна и заключается в поддержании колонизационной резистентности организма.

Функции индигенной микрофлоры разнообразны. Она способствует синтезу незаменимых аминокислот, продуцирует различные витамины, пан-тетоновую кислоту, биотин. Микроорганизмы принимают активное участие в синтезе разнообразных биологически активных веществ. Они регулируют газообразование, водно-солевой обмен, выполняют дезинтоксикационную, им-муногенную роль. Полагают, что сложившиеся симбиотические отношения макроорганизма с индигенной микрофлорой являются основой иммунологического гомеостаза [89, 165, 167].

В норме, находясь в состоянии динамического равновесия с индигенной микрофлорой, представители патогенной и условно-патогенной микрофлоры не оказывают отрицательного влияния на организм. Однако, вследствие различных нарушений (сдвиг иммунобиологического статуса, прием антибактериальных препаратов, инфекционный процесс, стресс, травма, гнойные раны, сепсис и т.д.), патогенные и условно-патогенные бактерии начинают усиленно размножаться и, вследствие транслокации, могут засе-

лять нетипичные для них экологические ниши, становясь причиной инфекционных процессов различной локализации [66,161].

Бронхит является аэрогенной инфекцией, поэтому именно в верхних отделах респираторного тракта после ингаляционной антигенной стимуляции на слизистых оболочках происходит нарушение иммунологического гомео-стаза и запускаются локальные защитные реакции для поддержания колонизационной резистентности организма. Для обозначения связи между этими реакциями был предложен термин «местный иммунитет слизистых оболочек»^].

В связи с этим, последние годы ознаменовались значительным повышением интереса к мукозальному эпителию. Это связано с признанием его координирующей позиции в реакциях, объединяющих механизмы врожденного (неспецифического) и специфического, приобретенного иммунитета. Это позволяет использовать мукозальный эпителий для изучения физиологии и реактивности слизистых оболочек, в том числе в качестве индикатора нарушений гомеостаза [149].

Защита на местном уровне развивается путем формирования типичной воспалительной реакции после взаимодействия патогенов с мембранными То11-подобными рецепторами, которые являются представителями системы рецепторного врождённого иммунного ответа и присутствуют на мембранах любых клеток человеческого организма, участвующих в формировании колонизационной резистентности. Затем происходит активация белков системы комплемента, генов цитокинового каскада, ответственных за активацию фагоцитов и других иммунокомпетентных клеток, иммуноглобулинов. Все эти процессы определяют уровень мукозальной колонизационной резистентности, благодаря которой, в дальнейшем, происходит блокирование жизнедеятельности, дезинтеграция и удаление инфекционного агента из организма [2].

Вместе с тем, система рецепторного врождённого иммунного ответа в интеграции с гуморальными (мукозальными) факторами иммунитета и балансом цитокинов при бронхитах у детей исследована недостаточно.

Известно, что показатели местного иммунитета слизистых оболочек достаточно разнообразны и включают в себя как микробный, так и иммунный компонент, необходимый для нормального функционирования колонизационной резистентности организма. Среди факторов местной иммунной защиты слизистых оболочек ротоглотки, которые участвуют в формировании колонизационной резистентности, значительная роль отводится как индиген-ной микрофлоре, так и цитокинам, интерферонам, факторам роста, комплементу, альфа - 1 антитрипсину, лизоциму, лактоферрину, бс, б^А, муцину. Все эти защитные механизмы слизистых оболочек дыхательных путей обуславливают баланс воспалительно - противовоспалительных реакций респираторного тракта [57,135].

Но, несмотря на это, клиническому изучению саливарного уровня цитокинов посвящены единичные работы, связанные, в основном, с патологией слизистой оболочки ротовой полости. А большинство исследователей при оценке местного иммунитета слизистых ротоглотки ограничиваются анализом содержания только б^А. Соотношение и содержание других биологически активных веществ слюнной жидкости, вносящих значительный вклад в резервы иммунной адаптации организма и придающих стабильность инди-генной микрофлоре в формировании колонизационной резистентности организма, мало изучены, особенно у детей.

Идея диагностического использования слюны является привлекательной не только в связи с неинвазивным способом получения исследуемой жидкости, но и в связи с высокой чувствительностью ее показателей к воздействию неблагоприятных факторов. Многими исследователями показана высокая информативность и обоснована перспективность изучения секреторного иммунитета, так как это позволяет улучшить раннюю диагностику заболевания

с помощью простых и безопасных методов оценки воспаления дыхательных путей, что даёт возможность проводить как первичную, так и вторичную профилактику бронхитов у детей [67].

Буккальные эпителиоциты так же могут быть индикатором нарушений саливарного иммунологического и микробиологического гомеостаза. Их ре-цепторный аппарат подвергается воздействию протеолитических и гликози-дазных ферментов секрета ротовой полости, влияющих на поверхностные структуры эпителиальных клеток. Содержание таких ферментов подвержено колебаниям, заметно повышаясь во время тяжелых заболеваний. Результатом может быть ослабление стабильности индигенной микрофлоры, т.е. происходит нарушение колонизационной резистентности на слизистых оболочках, которое проявляется в колонизации организма посторонними микроорганизмами и тем самым создается угроза инфекционных осложнений. Это ведет к изменениям эпителиоцитов, которые проявляются в качественных и количественных нарушениях показателей микробиоценоза слизистой оболочки. Результатом может быть ослабление КР к условно-патогенной микрофлоре (УПМ), создающее угрозу инфекционных осложнений [179].

Функциональная характеристика эпителиоцитов включает и такой важный показатель, как способность к адгезивным взаимодействиям с микроорганизмами. От этого зависит не только характер микробной колонизации эпителия и состояние местного иммунитета [85], но и гомеостаз всего клеточного сообщества, ассоциированного со слизистыми оболочками [133]. В облигатной микрофлоре буккальных клеток доминируют стрептококки, прежде всего S. oralis и S. sangius [140]. Их количество является максимальным у детей до 10 лет [176] и рассматривается как один из индикаторов неспецифической резистентности слизистой оболочки полости рта [85] и «общего здоровья» [57,58]. Присутствие (а тем более преобладание) менее типичных и нетипичных для данного биотопа микроорганизмов отражает ослабление колонизационной резистентности, сигнализируя о дестабилиза-

ционных процессах, сфокусированных на уровне слизистых оболочек. Чаще всего об этом судили по адгезивным реакциям с Candida albicans [85].

В последние годы сформировался новый подход к пониманию механизмов противоинфекционной защиты организма. Речь идет о врожденном компоненте иммунной системы, который особенно важен в детском возрасте, когда система адаптивного или приобретенного иммунитета еще не сформирована. Особое значение приобретают в этих процессах клеточные, рецеп-торные и молекулярные механизмы врожденного иммунитета. Избыточная активность или, наоборот, недостаток компонентов врожденного иммунитета могут привести к воспалительному процессу в любом органе организма (например, в бронхах). В этом аспекте важным является своевременное выявление факторов, способствующих реализации патологического процесса или его препятствию, таких как экспрессия распознающих рецепторов системы врожденного иммунитета - То11-подобных рецепторов (TLR) [98]. TLR способны распознавать РАМР - консервативные молекулярные структуры, распространенные среди определенного класса микроорганизмов и отсутствующие у человека [128].

Актуальность работы заключается в необходимости изучения факторов, которые участвуют в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек ротоглотки, и установления их роли в патогенетических механизмах развития бронхитов у детей.

Цель исследования Изучение системы мукозального иммунитета и микробиоценоза ротоглотки у детей с разными формами бронхитов и их роли в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек.

Задачи исследования

1. Изучить этиологически значимых возбудителей бронхитов у детей.

2. Оценить состояние колонизационной резистентности слизистых оболочек респираторного тракта у здоровых и больных бронхитами детей по показате-

лям естественной и экспериментальной адгезии с применением в качестве тест-объектов клеток назофарингеального и буккального эпителия.

3. Провести комплексный анализ бактериологических посевов с задней стенки глотки и показателей клеточных и гуморальных факторов местного иммунитета в слюне у здоровых и больных бронхитами детей.

4. Оценить роль микрофлоры и саливарных иммунологических факторов в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек ротоглотки.

Научная новизна

Впервые проведено комплексное изучение антиинфекционной резистентности детей, больных бронхитами, базирующееся на оценке колонизационной резистентности слизистой оболочки задней стенки глотки.

Установлено, что колонизационная резистентность слизистой оболочки задней стенки глотки является интегрирующей составляющей мукозального иммунитета.

Показано, что при остром и хроническом бронхите наблюдается снижение уровня естественной колонизации буккального эпителия «оральными» стрептококками и, как следствие этого, отмечается снижение устойчивости назофарингеального эпителия к экспериментальной адгезии с использованием тест-культур.

Выявлена взаимосвязь показателей местного иммунитета (секреторных иммуноглобулинов, лизоцима и цитокинов) с уровнями экспрессии эпите-лиоцитами задней стенки глотки То11-подобных рецепторов. При высокой инфекционной нагрузке (микст-инфекции) у пациентов с острым бронхитом наблюдались более высокие уровни экспрессии генов ТЬИ.-2, -3, -4 и -8, показателей 81§А, бс, лизоцима и провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-8, ИНФ-у, ФНО-а , ГМ-КСФ, чем у детей с хроническим бронхитом.

Установлено, что по комплексной оценке уровней экспрессии эпителиальными клетками задней стенки глотки генов ТЫ1-2, ТЫ1-4, ТЬЯ-З, ТЫ1-8 и продукции цитокинов ИЛ-1, ИЛ-8, ИНФ-у, ФНО-а и ГМ-КСФ при бронхитах у детей можно охарактеризовать стадию течения заболевания. Так, при бронхите пятикратное повышение уровней этих показателей свидетельствует, чаще всего, об его остром течении, а отсутствие значительного повышения указывает на хроническое течение бронхита.

Впервые разработаны комплексные информативные критерии оценки нарушения микробиоценоза задней стенки глотки, которые помогут усовершенствовать диагностику и терапию бронхитов у детей.

Полученные результаты позволили расширить знания о микробиологических и иммунологических факторах организма, которые вместе с индиген-ной (нормальной) микрофлорой участвуют в формировании колонизационной резистентности слизистых оболочек дыхательного тракта при бронхитах у детей.

Практическая значимость

Выведенные нормативы показателей микробиологических, иммунологических и биохимических факторов, вносящих значительный вклад в формирование индигенной микрофлорой колонизационной резистентности слизистых оболочек верхних дыхательных путей в детском возрасте, могут помочь в совершенствовании диагностики и лечении бронхитов у детей, а также использоваться в научно-исследовательской работе.

Метод определения уровней экспрессии генов ТЬЯ с использованием ПЦР в реальном времени, совмещенной с обратной транскрипцией с применением специфических праймеров (патент РФ № 2327995 «Способ диагностики хронического урогенитального хламидиоза», зарегистрирован 27.06.2008 г.), был апробирован на эпителиальных клетках задней стенки глотки и может быть введен в клинико-диагностическую практику при диа-

гностике бронхитов для определения стадии заболевания. Метод воспроизводится в условиях стандартной ПЦР-лаборатории.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Нарушение антиинфекционной резистентности слизистой оболочки задней стенки глотки при бронхитах у детей проявляется в количественных изменениях ее микробиологических и иммунологических показателей, которые в норме вместе с индигенной микрофлорой участвуют в формировании колонизационной резистентности и препятствуют колонизации организма посторонними микроорганизмами.

2. Изменения систем врожденного и приобретенного иммунитета при бронхитах сопровождаются выраженным дисбалансом иммунологических показателей мукозального иммунитета.

3. Состояние микробиоценоза ротоглотки у детей с бронхитами взаимосвязано с уровнем мукозального иммунитета.

Внедрение результатов работы в практику По материалам диссертации издано учебное пособие «Микроэкология и гуморальный иммунитет слизистых открытых полостей человека в норме и при патологических состояниях», рекомендованное учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России в качестве учебного пособия для системы послевузовского профессионального образования врачей. Издано также пособие для врачей «Роль инфекции в развитии патологии верхнего отдела дыхательных путей у детей» (утверждено проректором по учебной работе и международному сотрудничеству Российской медицинской академии последипломного образования, член-корр. РАМН, профессором И.В. Поддубной).

Апробация работы

Диссертация апробирована на совместном заседании секций «Медицинская биотехнология» и «Общая и прикладная иммунология» Ученого со-

вета ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора, протокол №2 от 28 февраля 2013 г.

Результаты диссертационной работы были представлены на Научно-практической конференции, посвященной 50-летию детского инфекционного отделения МОНИКИ (Москва, 2008); Юбилейной Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н.Блохиной Роспотребнадзора и 20-летию Приволжского окружного центра по профилактике и борьбе со СПИД (Нижний Новгород, 2009); Юбилейной научно-практической конференции, посвященной 100-летию Ростовского научно-исследовательского института микробиологии и паразитологии (Ростов-на-Дону, 2009); XIV научно-практической конференции ГОУ ДПО «Пензенский институт усовершенствования врачей» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию (Пенза, 2009); XVI, XVII, XVIII Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2009, 2010, 2011).

Личный вклад автора

Автором лично проводилась разработка программы лабораторного обследования детей, а также проведение следующих исследований: определение наличия антител к аденовирусу, вирусу гриппа А и В, респираторно-синцитиальному вирусу в сыворотке крови, определение содержания общего IgE, альбумина и общего белка в слюне, весь объем исследований по изучению нативной адгезии микрофлоры и адгезии тест-культур in vitro к клеткам буккального эпителия и эпителию задней стенки глотки, а также статистическая обработка и полный анализ клинического материала.

Ряд исследований при выполнении диссертационной работы проводился в соавторстве с сотрудниками ФБУН МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского Роспотребнадзора к.м.н. Топтыгиной А.П., к.х.н. Затеваловым A.M., к.м.н.

Скирдой Т.А., к.м.н. Капустиным В.В., к.м.н. Новиковой Л. И., к.м.н. Наумовой М.А., к.б.н. Егоровой Е.А, к.б.н. Матвеевской Н.С., к.б.н. Слободенюком В.В., к.б.н. Бичучер A.M., м.н.с. Урбан Ю.А. и врачом КДЛ Истринской районной больницы Федоровой О.П. (г. Истра, Московская область).

Сбор клинико-анамнестических данных и лабораторную трактовку результатов анализов проводили совместно с врачом-педиатром Истринской районной детской поликлиники Юдиной И.В. и врачами ДГКБ Святого Владимира (МОНИКИ, г. Москва) к.м.н. Савицкой Н.М. и к.м.н. Целипановой Е.Е. под руководством д.м.н. профессора Феклисовой Л.В.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе 5 - в рецензируемых изданиях; 7- в сборниках материалов конференций; 1- учебное пособие для системы послевузовского профессионального образования врачей; 1- пособие для врачей. Получен 1 патент на изобретение.

Структура и объём диссертации

Диссертация изложена на 119 страницах печатного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы (глава 1), материалы и методы исследований (глава 2), результаты собственных исследований (глава 3), заключение, выводы, список цитируемой литературы. Диссертация иллюстрирована 5 рисунками и 9 таблицами. В библиографическом указателе приведено 185 источников, из них 93 - на русском и 92 - на иностранном языках.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Метельская, Валерия Алексеевна

Выводы

1. Этиологически значимыми возбудителями бронхитов у детей преимущественно являются: аденовирус, Chlamydophila pneumoniae, вирус гриппа A, Mycoplasma pneumoniae. Меньший вклад в развитие бронхитов вносят: PCB, вирус гриппа В, вирус Эпштейна-Барр и вирус простого герпеса 1 типа.

2. Адгезия как компонент колонизационной резистентности слизистых у клинически здоровых детей проявляется в устойчивости назофарингеаль-ного эпителия к Streptococcus salivarius, Staphylococcus aureus и Klebsiella pneumoniae при нормальном уровне естественной колонизации клеток бук-калыюго эпителия «оральными» стрептококками. При остром и хроническом бронхите колонизационная резистентность проявляется в снижении уровня естественной колонизации клеток буккального эпителия «оральными» стрептококками, а клетки назофарингеального эпителия слабо устойчивы к адгезии тест-штаммами.

3. При комплексном анализе микробиоценоза задней стенки глотки у детей с острым и хроническим бронхитом регистрируются преимущественно 2 типа микроэкологических нарушений данного биотопа: дисбиоз и выраженный воспалительный процесс. Высеваемость условно-патогенной микрофлоры в титре 106 КОЕ/г и выше свидетельствует об её участии в развитии патологического процесса.

4. При остром бронхите наблюдаются более высокие уровни (в 5 и более раз) экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-З, TLR-8 эпителия слизистой задней стенки глотки, цитокинов ИЛ-1, ИЛ-8, ИНФ-у, ФНО-а и ГМ-КСФ, показателей slgA и sc, в сравнении с группой контроля и детьми с хроническом бронхитом. Также было выявлено достоверное увеличение уровней IgG, IgM, IgA, IgE, а также соотношений slgA/IgG, sIgA/альбумин, ИЕКНЭ, и Кеб по сравнению с показателями клинически здоровых детей. У детей с хроническим бронхитом выявлено достоверное увеличение по сравнению с клинически здоровыми детьми уровней ^М, ^Е, бс, ИЕКНЭ, б^А.

5. Выявлена корреляционная связь уровней экспрессии То11-подобных рецепторов с уровнями естественной колонизации назофарингеального эпителия «оральными» стрептококками, условно-патогенными микроорганизмами и с саливарными показателями местного иммунитета ротоглотки -б^А, бс, ^М, лизоцимом, цитокинами. Эта связь отражает состояние врождённого иммунитета и свидетельствует о взаимозависимости микрофлоры и мукозального иммунитета при формировании ими колонизационной резистентности слизистых оболочек дыхательного тракта при бронхитах у детей.

Заключение

У детей при бронхитах изменения микробиоценоза связаны с нарастанием обсеменённости слизистых нормофлорой и УПМ. Наибольшая обсеме-нённость наблюдается в группе детей с острым бронхитом, затем следует группа детей с хроническим бронхитом. Выявлены достоверные различия по частоте инфицирования S.aureus и грибами рода Candida между группой детей с острым бронхитом по сравнению с группой детей с хроническим бронхитом и клинически здоровыми пациентами. У клинически здоровых детей наблюдается наименьшая обсемененность ЗСГ микрофлорой.

Различия в обсемененности слизистой задней стенки глотки индигенны-ми микроорганизмами в контрольной группе и у больных бронхитами детей не были достоверны как по количественному содержанию, так и по частоте встречаемости.

У детей с острым и хроническим бронхитом по сравнению с клинически здоровыми детьми (нормоценоз - у 48,2% пациентов, промежуточный тип - у 44,4% пациентов, дисбиоз - у 7,4%) пациентов) выявлены достоверные различия. При остром бронхите нормоценоз регистрировался у 21,6% (р<0,05), промежуточный тип микробиоценоза - у 11,8%о (р<0,01), дисбиоз- у 35,3% (р<0,05), выраженный воспалительный процесс - у 31,3%о (р<0,01) пациентов. При хроническом бронхите нормоценоз регистрировался у 20,0%о (р<0,05), промежуточный тип микробиоценоза- у 20,0%) (р<0,01), дисбиоз- у 33,3% (р<0,05), выраженный воспалительный процесс- у 26,7% (р<0,01) пациентов. Достоверных различий по типу микробиоцепоза ротоглотки между группой детей с острым и группой детей с хроническим бронхитом не выявлено. Патогенетическое действие ассоциации обусловлено суммированием воздействий каждого из ассоциатов с разнонаправленными механизмами их влияния на клетки макроорганизма. При остром и хроническом бронхите нарушения микробиоценоза слизистых сдвигаются в сторону дисбиоза и выраженного воспалительного процесса. Высокие уровни показателей IgG, IgM, slgA, sc, IgE и ИЕКНЭ свидетельствуют об остроте инфекционного процесса (при остром бронхите), а при хроническом бронхите не резко выраженное повышение перечисленных показателей свидетельствует о вяло текущем процессе. У клинически здоровых детей установлена зависимость между естественной адгезией «оральными» стрептококками и искусственной адгезией S. salivarius, S. aureus и К. pneumoniae на БЭ и на НЭ: при нормальной обсеме-ненности «оральными» стрептококками БЭ, обсемененносгь НЭ была также небольшой. У детей с бронхолегочными заболеваниями: чем меньше бактерий было адгезировано на БЭ, тем их больше было адгезировано на НЭ, то есть у больных детей существует обратная зависимость между показателями естественной и искусственной адгезии. Известно, что грамположительные и грамотрицательные бактерии имеют разные адгезины, которые взаимодействуют с разными рецепторами эпителиальных клеток. Как правило, «оральные» стрептококки проявляют антагонистические свойства по отношению к К. pneumoniae или занимают экологическую нишу, препятствуя адгезии несвойственных биотопу ротоглотки микроорганизмов, или же меняют фено-типический профиль клеток (в том числе и их адгезивные свойства), которые они колонизируют [39]. При сравнении показателей естественной и искусственной адгезии К. pneumoniae на эпителиоцитах клинически здоровых детей и детей с бронхитами выявлены обратные корреляционные связи или отсутствие таковых, что указывает па агрессивность микроба, его способность преодолевать колонизационный барьер и активно вмешиваться в микроэкологический баланс слизистых. Это необходимо учитывать в лабораторной практике при верификации и прогнозе течения бронхолегочных заболеваний. Высеваемость УПМ в титре 6 Ig КОЕ/г и выше может свидетельствовать о приобретении ею фенотипических маркёров вирулентности.

При анализе ассоциаций патогенных вирусных агентов при бронхитах у детей выявлено, что значительный удельный вес принадлежит: аденовирусу - у 34,8% (п=23), С. pneumoniae - у 10,6% (п=7) , вирус гриппа А - у 10,6% (п=7) и М. pneumoniae - у 7,5% (п=5) детей. Меньший вклад в развитие острой респираторной патологии вносят: РСВ - у 4,5% (п=3), вирус гриппа В-у 4,5%) (п=3) и вирус Эпштейна-Барр - у 4,5% (п=3) детей. Вирус простого герпеса 1 типа в стадии острой инфекции выявлен только у 3,0% (п=2) детей.

У клинически здоровых детей уровни экспрессии генов TLR, гуморальных факторов КР, выраженная прямая зависимость между генами TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8, а также между TLR и лизоцимом, между TLR и ИЕКНЭ объясняются антигенной стимуляцией поступающими извне микроорганизмами в обычных условиях.

Таким образом, при острых бронхитах в ответ на высокую инфекционную нагрузку (в виде микст-инфекции вирусными и условно-патогенными микроорганизмами) наблюдаются более высокие уровни экспрессии генов TLR-2, TLR-4, TLR-3, TLR-8, провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-8,

ИНФ-у, ФНО-а и ГМ-КСФ, показателей б^А, бс и лизоцима, чем у детей с хроническим бронхитом. Это свидетельствует о хорошей местной антиинфекционной резистентности, а отсутствие повышения указывает на её нарушение и хроническое течение заболевания (носит диагностический и прогностический характер).

Выявление в слюне повышенных уровней общего ^Е при остром и хроническом бронхитах указывает на активизацию и количественное повышение инфекционного компонета, подтверждает общепризнанную роль бронхов как «шокового органа» при аллергических состояниях.

Установлена достоверная корреляция уровней экспрессии генов То11-подобных рецепторов с показателями б^А, бс, лизоцимом и естественной колонизацией назофарингеального эпителия «оральными» стрептококками, что свидетельствует об их взаимосвязи как компонентов колонизационной резистентности, отражающих состояние врождённого иммунитета. Всё вместе указывает на важную роль колонизационной резистентности как интегрального показателя мукозального иммунитета.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Метельская, Валерия Алексеевна, 2013 год

Список литературы

1.Абаджижи М.А., Молодцов С.А., Ашкинази В.И. и др. Микрофлора бук-кального эпителия у детей, часто болеющих респираторными инфекциями. // Рос. педиатр, журнал.- 2002.- № 1.- С. 56-57.

2.Абатуров А.Э. Молекулярные механизмы неспецифической защиты респираторного тракта: распознавание патоген-ассоциированных молекулярных структур. // Журнал здоровье ребеика.-2006.-Т.2, № 2.- С. 14-18.

3.Аверьянов А.В. Роль хламидийных инфекций в патологии органов дыхания. // Пульмонология и аллергология. - 2006. - № 1. - С. 24-28.

4.Алимов А.В., Шамансурова Э.А., Мазинова Д.Э. Роль Chlamydia pneumoniae в возникновении респираторной патологии у детей школьного возраста. // Педиатрия. - 2005. - № 4. - С. 119-120.

5.Артамонов Р.Г. Бронхиты. // Медицинский научный и учебно-методический журнал. - 2008. - № 42. - С. 3-24.

6.Ахунова А. М. Некоторые патогенетические механизмы развития бронхиальной астмы инфекционно-аллергической формы. // Клиническая медицина. - 2000. - N 9. - С. 35-40.

7.Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. // JI., Медзиз.-1962.- 356 с.

8.Бакулев А.Л., Василенко Л.В., Оркин В.Ф., Степанов С.А. Воспалительные заболевания гениталий инфекционной природы у женщин. Учебное пособие. // М., Изд. Дрофа.-2008.- 152 с.

9.Бастид Д. Интерлейкин-17 во взаимодействии с В-клетками. Влияние В-клеток в патофизиологии системной красной волчанки. // Природа иммунологии .- 2009.- №10. - С. 778-785.

Ю.Бартлетт Д.Д. Инфекции дыхательных путей. // М., Бином; СПб., Невский Диалект.- 2000,- 192 с.

1 ЬБериет Ф. Клеточная иммунология. // М., Мир.-1971. - 542 с. 12.Богунович М.Д. Экспрессия и функции толл-лайк рецепторов в эпителии

кишечника человека.-Автореф. дис. канд. мед. наук.-М., ИЭМ им. Н.Ф. Гамалея. -2004.- 28 с.

13.Бондаренко В. М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса. // Журнал микробиологии. - 1999. - № 5. - С. 34-39. Н.Боровский Е.В., Леонтьев В.К. // Биология полости рта; М., Медицина.-1991.-304 с.

15.Ботвиньева В.В. Развитие иммунной системы здорового ребенка. // Детский доктор. - 1999.- № 3.- С. 26-31.

16.Бочков И. А. Особенности формирования аутомикрофлоры у новорожденных детей в раннем неонатальном периоде (эпидемиологические и микробиологические аспекты). // Автореферат дисс. докт. мед. наук. - М.,-1998. -36 с.

17.Бочков И.А., Семина H.A. Роль Streptococcus salivarius в поддержании экологического баланса человеческого назофарингса. // Журн. микробиол,-1981.-№ 10.- С. 38-41.

18.Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер A.A. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов. // Лабораторное дело.- 1986.-№ 4,- С. 210-212.

19.Брилис В.И., Брилене Т.А., Левков Л.А. и др. Некоторые аспекты влияния антибиотиков на адгезивные свойства микроорганизмов и доступная модель его изучения. //Лабораторное дело.- 1986.-№ 5.- С. 353-357.

20.Варюшина Е.А., Котов А.О., Симбирцев A.C. и др. Изучение влияния местного применения препарата рекомбинантного интерлейкина на продукцию цитокинов и функцию лейкоцитов в очаге воспаления. // Иммунология. -1998.-№6.-37 с.

21 .Вельтищева Е.Ю. Иммунитет новорожденного, повышенная чувствительность к некоторым вирусным инфекциям. // Российский Вестник Перинато-логии и Педиатрии. - 1993.-Т.38. - №5.- С.9-11.

22.Воробьев А. А., Лыкова Е. А. Бактерии нормальной микрофлоры. Биологические свойства и защитные функции. //ЖМЭИ. - 1999. - №6. - С. 102-105.

23.Воропаева Е.А., Афанасьев С.С., Алешкин В.А., Воробьев A.A. и др. Микробиологические и иммунологические аспекты дисбиогических нарушений биотопов слизистых респираторного и урогенитального трактов. Москва ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского Роспотребнадзора. // Вестник Российской Академии Наук. - 2006.-№1.-С. 3-5.

24.Гажва С.И., Савельева О.И., Адаева С.А. Состояние местного иммунитета полости рта у детей, страдающих сахарным диабетом 1-го типа. // Нижегородский медицинский журнал.-2006.-№8.-С. 262-264.

25.Ганковская O.A., Ковальчук Л.В., Ганковская JI.B. и др. Роль Toll-подобных рецепторов и дефензинов в противомикробной защите урогенитального тракта женщин. // Журн. микробиол.-2008.-№ 1.-С. 46-50.

26.Гланц С. Медико-биологическая статистика. // Практика.-1998.- 455 с.

27.Глисон М., Криппс А., Клэнси Р., Хенсли М. Онтогенез секреторной иммунной системы человека. // Медицинский журнал Австралии и Новой Зеландии.- 1982.- №12.- С. 255-258.

28.Глисон М., Криппс А. Развитие иммунитета слизистой в течение первого года жизни. // FEMS иммунологии и медицинской микробиологии. - 2004.-№ 42.-С. 21-33.

29.Гомес П.С., Фернандес М.Н. Дефенсины в полости рта. Распределения и биологическая роль. // FEMS иммунологии и медицинской микробиологии. -2010.-№ 39.- С.1-9.

30.Дажо Р. Основы экологии (пер. с фр.). // М.,-1975. - 412 с.

31.Дейл Б.А. Антимикробные пептиды ротовой полости. Функции в норме и при патологии. // Актуальные вопросы в области молекулярной биологии . -2005.- №7. -С. 119-134.

32.Дорофейчук В.Г. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом. // Лабораторное дело.- 1968.- №1.- 28 с.

33.Дубровская М.И., Мухина Ю.Г., Кафарская Л.И., Шумилов П.В. Современные представления о механизмах формирования иммунного ответа ели-

зистой оболочки кишечника у детей раннего возраста. // Журн. трудный па-циент.-2006.-Т. 4, № 6,- С. 9-14.

34.3айцева О. В., Левшин И. Б., Лаврентьев А. В., Зайцева С. В., Мартынова В.Р., Колкова Н. И. Частота встречаемости и особенности течения бронхиальной астмы у детей, ассоциированной с Chlamydia pneumoniae. // Педиатрия. - 1999.-N 1.-С. 29-33.

35.3игангирова Н.А., Гинцбург А.Л. Молекулярные подходы к созданию медикаментозных средств для борьбы с хроническими инфекциями. //Журн. микробиол.-2007.-№ 4.- С. 103-109.

Зб.Землин М. Онтогенез кишечной иммунной системы. // Иммунология и инфекции,- 2006.-№ 2. - С. 18-26.

37.Иванова В.В., Железникова Г.Ф., Шилова И.В. Состояние клеточного и гуморального иммунитета при инфекциях у детей и его регуляция с помощью иммуномодуляторов. // Сборник научных статей. -2006.- С.4-18.

38.Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфек-тологии. // под ред. Г.Г. Онищенко, В.А. Алешкина, С.С. Афанасьева, В.В. Поспеловой.- М., ГОУ ВУНМЦ МЗ РФ.-2002.- 608с.

39.Интерфероновый статус, препараты интерферона в лечении и профилактике инфекционных заболеваний и реабилитации больных. // под.ред. С.С. Афанасьева, Г.Г. Онищенко, В.А. Алешкина и др.-М., Триада-Х.-2005.- 766 с.

40.Инфекции респираторного тракта у детей раннего возраста. Под редакцией профессора Г.А. Самсыгиной. // Педиатрия. - 2006. - С. 111-136.

41.Каганов С.Ю., Розинова Н.Н., Богорад А.Е. Различные формы бронхоле-гочной патологии в Международной статистической классификации болезней. // Педиатрия. - 2003. - № 4. - С. 42-46.

42.Карякина Е.В., Белова С.В. Молекулы средней массы как интегральный показатель метаболических нарушений (обзор литературы). // Клиническая лабораторная диагностика. -2004. -№3.- С.3-8.

43.Керопян Г. А. Роль нейссериальной флоры в этиопатогенезе инфекцион-но-аллергической бронхиальной астмы. // Автореф. дис. канд. мед. наук.- М.,-1998. - 19 с.

44.Клиническая иммунология. Под ред. Караулова A.B. // Медицинское информационное агентство.- 1999.- 604 с.

45.Ковальчук JI.B. Врожденный и приобретенный иммунитет: клинические проблемы.-XIII российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Москва, 3-7 апреля 2006г. Лекции для практикующих врачей.-2006.-М.,-С. 103-121.

46.Ковальчук Л.В., Хорева М.В., Варивода A.C. и др. Рецепторы врожденного иммунитета: подходы к количественной и функциональной оценке Toll-подобных рецепторов человека. // Иммунология.-2008.-Т. 29, № 4.- С. 223227.

47.Колотилова Л. В., Акишииа Т. М., Заргарян О. П., Ломницкая В. Б., Пружняк О. В., Луцик Т. С. Нормальная микрофлора слизистой глотки. // Антибиотики и химиотерапия. - 1989. - Т. 34. - № 10. - С. 751-755.

48.Кухтинова Н.В., Кротов С.А., Кротова В.А. Рецидивирующие и хронические формы хламидофилеза у детей. // Кольцово. - 2004.- 88 с.

49.Ларина О. Н. Специфическая гипосенсибилизирующая терапия при нейссериальной и стафилококковой инфекционно-аллергической бронхиальной астме. // Дис. канд. мед. наук. - М.,- 1989. - 186 с.

50.Ланкина М.В. Микрофлора зева человека как показатель определения резистентности организма. // Журнал микробиологии. - 2002. -№ 3.- С. 97-99.

51.Лебедев К.А. Физиологическая целесообразность функций образраспо-знающих рецепторов в иммунологии. // Журн. физиология человека.-2007.-Т.ЗЗ, № 5.-С. 133-137.

52.Люк О'Нил. Врожденный иммунитет: система раннего оповещения. // Журнал в мире науки.-2005.-№ 4.-С. 32-39.

53.Майер Jl. Иммунитет слизистой оболочки. // Педиатрия. - 2003.-№ 111 (6).-С. 1595-1600.

54.Маянский А. Н., Воробьева О. Н., Малышева Э. Ф., Малышев Ю. В. Взаимоотношения между естественной колонизацией и адгезией бактерий к бук-кальному эпителию у человека. // Журнал микробиологии. - 1987. - № 2. - С. 18-20.

55.Маянский А.Н., Пичугина Л.П., Малышева Э.Ф. Естественная колонизация буккального эпителия у больных с пародонтитом // Нижегород. мед. журнал.- 1991.-№ 3.- С. 20-22.

56.Маянский А.Н., Заславская М.И., Салина Е.В., Абаджижи М.А. Феномен избирательного ослабления колонизационной (адгезивной) резистентности в системе «Candida albicans- буккальные эпителиоциты» // Журн. микробиол.-2002.-№ 4.- С. 17-20.

57.Маянский А.Н. Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. // Казань: Магариф. -1993.- 192с.

58.Маянский А.Н. Дисбактериоз: иллюзии и реальность. // Педиатрия.- 2000.-№.4.-С.80-88.

59.Медведев Ю.А., Алсынбаев М.М. Основы иммунных и иммунонаправлен-ных методов терапии и профилактики. // Уфа: РИО ГУН «Иммунопрепарат».-2000. - 100 с.

60.Медицинская микробиология (Гл. ред. акад. РАМН В. И. Покровский, проф. О. К. Позднеев). - 1998. - 1184 с.

61.Ю.Л.Мизерницкий А.Д.Царегородцев. Пульмонология детского возраста: проблемы и решения - Сборник включает лекции и доклады на Всероссийской научно-практической конференции педиатров пульмонологов и аллергологов в г. Ростове-на-Дону (май 2003г.) и другие материалы по актуальным проблемам пульмонологии детского возраста.- Выпуск 3.- М,- 2003.- 250 с.

62.Мусалимова Г.Г., Саперов В.Н., Никонорова Т.А. Диагностика и лечение микоплазменной и хламидийной пневмоний. // Лечащий врач. - 2004. - № 8. -С. 19-24.

63.Ноников В.Е. Диагностика и лечение атипичных пневмоний. // Consilium medicum. - 2001.- № 3(12). - С. 7-584.

64.0дум Ю. Экология. // М.: Мир. - 1986. - Т.2. - 376 с.

65.Палеев Н.Р., Ильченко В.А. Хронический бронхит. Болезни органов дыхания. // Руководство по внутренним болезням.- М., «Медицина»,- 2000.- Т.З.-С. 110-179.

66.Парфенов А. И., Калоев Ю. К. Дисбактериоз кишечника. // Московский медицинский журнал. - 1998. - № 1. - С. 12-18.

67.ПеченкинаЮ.О. Иммунологические показатели секреторного иммунитета слюны и клинико-экономический анализ эффективности противовоспалительного лечения на ранних стадиях хронической обструктивной болезни легких// дисс. канд. мед. наук.- 2008.- Самара.- 171с.

68.Почивалов A.B., Никифорова С.А. Современные подходы к терапии бронхитов и эффективность применения препарата Эреспал при острых бронхитах у детей. // Педиатрия.- 2002.-№ 6.- С. 58-61.

69.Приложение 1 к приказу МЗ СССР № 535 от 22.04.85 г. «Методические указания по применению унифицированных микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений». // Москва.-1989.- 127с.

70.Пружняк О. В. Антагонистическая активность стрептококков и её роль в сохранении экологической стабильности микробиоценоза носоглотки. // Антибиотики и химиотерапия. - 1989. - № 2. - С. 437-439.

71.ПЦР «в реальном времени». Под редакцией д.б.н. Д.В. Ребрикова. // М., Бином.- Лаборатория знаний. -2009. - 215 с.

72.Рачинский С. В. и соавт. Бронхиты у детей. // Л., Медицина.- 1978,- 211с.

73.Самсыгина Г.А. Острый бронхит у детей и его лечение. // Педиатрия. -2008.-№2.- С. 25-32.

74.Самсыгина Г.А., Коваль Г.С. Часто болеющие дети: проблемы диагностики, патогенеза и терапии. //Леч. врач,- 2009.-№ 1.- С. 5-10.

75.Самсыгина Г. А., Охлопкова К. А., Суслова О. В. Болезни органов дыхания у детей. Матер, конф. // М.- 1999.- 112 с.

76.Семенов Б.Ф., Зверев В.В. Концепция создания быстрой иммунологической защиты от патогенов. // Журн. микробиол.-2007-№ 4.-С. 93-100.

77.Середа Е.В., Рачинский С.В., Волков И.К. и др. Лечение пороков развития легких и бронхов у детей. // Рус. мед. журнал. -1999.-№ 11 (93).- С. 510-514.

78.Сидоренко М.Г. Статистика: учебное пособие. // Москва. Форум.- 2007.158 с.

79.Симбирцев A.C. Толл-белки: специфические рецепторы неспецифического иммунитета. // Иммунология.-2005.-№ 6.-С. 368-376.

80.Скала Л.З., Сидоренко С.В., Нехорошева А.Г., Лукин И.Н., Грудинина С.А. Практические аспекты современной клинической микробиологии. // Москва.- 2004.- С. 69-79.

81.Смирнова М.О., Сорокина Е.В. Бронхиты у детей: принципы современной терапии. // Трудный пациент. - 2009. - № 8-9. - С. 19-23.

82.Таточенко В.К. Бронхиты у детей (пособие для врачей). // М.- 2004.- 94 с.

83.Хаитов М.Р. Острые респираторные вирусные инфекции и бронхиальная астма. Клеточные и молекулярные аспекты проблемы. // Журнал микробиологии. - 2002. - №4. - С. 84-93.

84.Хотенко Е. В. Клиническая и лабораторная характеристика больных ин-фекционно-зависимой бронхиальной астмой. // Автореф. дис. канд. мед. наук. - Санкт-Петербург.-1997. - 18 с.

85.Цепов Л.М., Левченкова Н.С., Золотарева О.Н., Васильева Е.И., Хромчен-ков А.П., Николаев А.И., Жажков E.H. Цитогенетические показатели и элек-

трокинетическая подвижность ядер клеток буккального эпителия в оценке состояния пародонта. // Стоматология.- 1999.-№ 3.- С.7-8. 86.Чернохвостова Е.В., Герман Г.П., Котова Т.С. и др. Исследование иммуноглобулинов и других белков в секретах человека (методические рекомендации).//Москва.- 1987.-С. 1-34.

87.Шендеров Б. А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. // М.,-1998. - Т. I. - 288 с.

88.Шендеров Б. А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. // М.,-1998. - Т. И. - 420 с.

89.Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека. // Рос. журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопрокголо-гии.- 1998.-№ 1.-С. 61-66.

90.Шуберт С., Борте М. Иммунитет слизистой оболочки полости рта у недоношенных детей в первые 9 месяцев жизни. // Европейский журнал Pediatrics

2000. -№ 10.-789 с. 91.10инг Р., Кид Д., Глисон М., Криппс А. Развитие иммунитета слизистой оболочки у детей дошкольного возраста. // Клиническая иммунология. - 2010.

92. Юлиш Е.И., Волосовец А.П., Абатуров А.Е. Хламидиозы у детей. // Донецк, Регина.-2009. - 195 с.

93.Юнкеров В.И., Григорьев С.Г. Математико-статистическая обработка данных медицинских исследований. // СПб., ВМедА.-2005.- 292 с.

94.Abreu М.Т., Vora P., Faure E. et al. Desreased expression of Toll-like receptor-4 and MD-2 correlates with intestinal epithelial cell protection against dysregulat-ed proinflammatory gene expression in response to bacterial lipopolysacaride //J. Immunol.-2001.-Vol. 167,№3-P. 1609-1616.

95.Akdis C.A., Barlan I.В., Bahceciler N., Akdis M. Иммунологические механизмы сублингвальной иммунотерапии. // Аллергия. - 2006. -№ 61. - Р. 11-14.

96.Aflatoonian R., Fazeli A. Toll-like receptors in femule reproductive tract and their menstrual cycle dependent expression. //J. of Reproductive lmmunole.-2008.-

Vol 77, № l.-P. 7-13.

97.Alexopoulou L., Holt A.C., Medzhitov R., Flavell R.A. Recognition of double-stranded RNA and activation of NF-kappaB by TOLL-like receptor 3. // Nature.-2001.-Vol. 413.-P. 732-738.

98.Aliprantis A.O., Yang R.B., Mark M.R., Suggett S., Devaux B. et al. Cell activation and apoptosis by bacterial lipoproteins through toll-like receptor-2. // Science 1999.- Vol. 285.- P. 9-736.

99.Antal-Szalmas P., Van Strijp J.A.G., Weersink A.J.L. et al. Quantitation of surface CD14 on human monocytes and neutrophils. //J. Leukoc. Biol.-1997.-Vol. 6l.-P. 721-728.

100.Barlett J.G. Management of Respiratory Tract Infections. // Philadelfia.-2001.-P. 142-65.

101.Barton G. M., Medzhitov R. Toll-like receptor signaling pathways. // Science.-2003,-Vol. 300.-P. 1524-1525.

102.Beuth J., Ko Y. L., Roszkowski W. et al. Lectins: Mediators of Adhesion for Bacteria in Infectioous Disaeses and for Tumor Cells in Metastasis. // 1990. - V. 274.-P. 35-38.

103. Bibel D. J., Aly R., Bayles Ch., Strauss W. G., Shinefield H. R. Maibach H. I. Competitive adherence as a mechanism of bacterial interference. // Can. J.Microbiol. - 1983. - V.29. - № 6. - P.700-703.

104.Charles A. Janeway, P. Travers, M. Walport, M. Sclomchik. Immunobiology. The immune system in health and disease. // Current biology lim.-1999.- P. 138174.

105.Chmura K., Bai X., Nakamura M., Kandasamy P. et al. Induction of IL-8 by Mycoplasma pneumoniae membrane in BEAS-2B cells. // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. -2008.- №295.- P. 220-230.

106.Claeys S., de Beider T., Holtappels G. et al. Human beta-defensins and tolllike receptors in the upper airway. //Allergy.-2003.-Vol. 58.-P. 748-753.

107.Costerton J. W., Cheng K. J., Geesey G. G. et al. Bacterial biofilms in Nature and Disease. // Ann. Rev. Microbiol. - 1987. - Vol. 41. - P. 435-464.

108.Costerton J. W., Marrie T. J., Cheng K. L. Phenomena of Bacterial Adhesion. // Plenum. Publ. Corporastion. -1985. - P. 3-43.

109.Droemann D., Goldmann T., Branscheid D. et al. Toll-Like receptor 2 is expressed by alveolar epithelial cells type II and macrophages in the human lung. //Histochem. Cell. Biol.-2003.-Vol. 119.-P. 103-108.

11 O.Eberhard J., Jepsen S., Tiemann M. et al. Leucotriene A(4)-hydrolase expression and leucotriene B(4) levels in chronic inflammation of bacterial origin: im-munohistochemistry and reverse-phase high-performance liquid chromatography analysis of oral mucosal epithelium. // 2002. - P. 627- 634.

11 l.Ellmerich S., Djouder N., Scholler M., Klein J.P. Production of cytokines by monocytes, epithelial and endothelial cells activated by Streptococcus bovis. // Cytokine. - 2000. - №12. - P. 26-31.

112.Ehl S., Bischoff R., Ostler T. et al. The role of Toll-like receptor 4 versus in-terleukin-12 in immunity to respiratory syncytial virus. // Eur. J. Immunol.-2004.-№ 4.-P. 53-1 146.

113.Farmer I., Freysdottir J., Dalghous A.M., Fortune F. Expression of adhesion and activation molecules in human buccal spithelial cell lines and normal human buccal epithelium in situ. //J. Oral. Pathol. Med. - 2001. - №30. - P. 13-120.

1 H.Feghaly R.E., McGann L., Bonville C.A., Branigan P.J. et al. Local production of inflammatory mediators during childhood parainfluenza virus infection. Pediatr. Infect. Dis. // 2010.- № 29.- P. 26-31.

115.Frank P.M., Jakob P. Cramer, Hamann L. et al. Toll-like receptor (TLR) polymorphisms in African children: Common TLR-4 variants predispose to severe malaria.//Microbiology.-2006.-Vol. 103, № 1,- P.178-182. 1 lö.Gewirtz A.T., Navas T.A., Lyons S. et al. Cutting edge: bacterial flagellin activates basolaterally expressed TLR5 to induce epithelial proinflammatoty gene expression.//J. Immunol.-2001.-Vol. 167,№4.-P. 1882-1885.

117.Godaly G., Bergsten G., Hang L., Fiscer H., Frendeus В., Lundstedt A.-C., Samuelsson M., Samuelsson P., Svanborg C. Neutrophil recruitment, chemokine receptors, and resistance to mucosal infection. // J. Leukoc. Biol. - 2001. - №69. -P. 899- 906.

118.Goertz J., О. Олафссон, A. Haraldsson. Выработка иммуноглобулинов в младенчестве и детстве. // Скандинавский журнал иммунологии. - 2003. - № 58 (6). - Р. 642-648.

119.Gombart A.F. Витамин D-антимикробный пептид, его роль в защите от инфекции. //Будущее микробиологии. - 2009. -№ 4 (9). - Р.1151-1165.

120.Guerina N. G., Neutra М. R. Mechanism of Bacterial Adherence. // Microecol. Therapy. - 1984. - Vol. 14. - P. 183-199.

121.Gustafsson В. E., Karlsson K. A., Larson G. et al. Glycosphingolipid Patterns of the Gastrointestinal Tract of Germ-free and Conventional Rats. // J. Biol. Chem. - 1986.-V. 261.-№32.-P. 123 -157.

122.Haberstok J., Т. Бибер, Аллам J.P. Иммунология слизистой оболочки полости рта. // Тенденции в области молекулярной медицины. - 2008. - №14 (5). -Р. 191-198.

123.Hajishengallis G., Lambris J.D. Перекрестные пути между То11-подобными рецепторами и системой комплемента. // Тенденции в иммунологии. - 2010. -№31(4). - Р. 154-163.

124.Heil F., Ahmad-Nejad P., Hemmi H. et al. The Toll-like receptor 7 (TLR7)-specific stimulus loxoribine uncovers a strong relationship within the TLR 7, 9 and 9 subfamuly. // Eur. J. Immunol.-2003.-Vol. 33.-P. 2987-2997.

125.Hertz C.J., Wu Q., Porter E.M. et al. Activation of Toll-like receptor 2 on human tracheobronchial epithelial cells induces the antimicrobial peptide human beta defensin-2. // J. Immunol.-2003.-Vol. 171, № 12.-P. 6820-6826.

126.Homma Т., Kato A., Hashimoto N. et al. Corticosteroid and cytokines syner-gistically enhance Toll-like receptor-2 expression in respiratory epithelial cells. // Am. J. Respir. Cell. Moll. Biol. -2004.- № 4.- P.9-463.

127.Hornung V., Rothenfusser S., Britsch S. et al. Quantitative expression of Tolllike receptor 1-10 mRNA in cellular subsets of human peripheral blood mononuclear cells and sensitivity to CpG oligodeoxynucleotides. //J. Immunol.-2002.-Vol. 168, № 9.-P. 4531-4537.

128.Janeway Jr C.A., Medzhitov R. Innate immune recognition. // Annu Rev. Immunol.- 2002,-№20.-P. 197-216.

129.Jansses S., Beyart R. Role of Toll-like receptors in Patogen Recognition. //Clin. Microbiol. Rev.-2003.-Vol. 16.- P. 1-19.

130.Jebrak G., Brugiere O., Uffredi M. L. Impact des infections a Chlamydia pneumoniae sur la maladie asthmatique. // Presse-Med. - 2000. - V. 29.- № 25. - P. 1425-1431.

131.Johnston S. L. The role of viral and atypical bacterial pathogens in asthma pathogenesis. //Pediatr.-Pulmonol.-Suppl. - 1999. - P. 18141-18143.

132.John G., Rubin B.K., Henke M.O. et al. TLR-4- mediate innate immunity is reduced in cystis fibrosis airway cells. // J. Respir. Cell. Moll. Biol. -2010. - № 4. -P. 31-424.

133.Kagnoff M.F., Eckmann L. Epithelial cells as sensors for microbial infection. // J. Clin. Ivest.- 1997.- V. 100,- P.6-10.

134.Klaffenbach D., Rascher W., Rollinghoff M. et al. Regulation and signal transduction of Toll-like receptors in human chorioncarcinoma cell lines. //Am. J. Reprod. Immunol.-2005.-Vol. 53.- P.77-84.

135.Kowalski M.L., Sliwinska-Kowalska M., Igarashi Y. et al. Nasal secretions in response to acetylsalicylic acid. // J. Allergy Clin. Immunol.- 1993,- Vol. 91( 2).-P.580-598.

136.M.F. Kramer, G. Burow, E. Pfrogner, G. Rasp/ In vitro diagnosis of chronic nasal inflammation.//Clin. Exp. Allergy. 2004 Jul. -Vol.34(7). - Vol. 1086-1092.

137.Kuitonen M., Savilahti E. Роль секреторного IgA в проницаемости желудочно-кишечного тракта у детей раннего возраста. // Журнал детской аллергологии и иммунологии. - 1995. -№ 6(1).- Р.30-35.

138.Koff J.L., Shao M.X., Ueki I.F., Nadel J.A. Multiple TLRs activate EGFR via a signaling cascade to produce innate immune responses in airway epithelium. // Am. J. Physiol. Lung. Cell. Moll. Physiol. - 2008. - №6.- P. 75-1068.

139.Liew F.Y., Xu D, Brint E.K., O'Neill L.A.J. Negative regulation of Toll-Like receptor-mediated immune responses. //Nat. Rev. Immunol.-2005.-Vol. 5.-P. 446458.

HO.Macrotte H., Lavoie M.C. Oral microbial ecology and the role of salivary immunoglobulin A. //Microbiol. Mol. Biol. Rev.- 1998,- Vol. 62.- P. 71-109.

141.Mahon L., К. Шварц, E. Брауп, Diamond Г. Витамин D - опосредованная индукция врожденного иммунитета в клетках эпителия десны. // Инфекции и иммунитет. - 2011. - №79 (6). - Р. 2250-2256.

142.Mockenhaupt F.P., Gramer J.P., Hammann L. et al. Toll-Like receptor (TLR) polymorphisms in African children: Common TLR-4 variants predispose to severe malaria.//J. microbiology.-2006.-Vol. 103, № l.-P. 177-182.

143.Nagase H., Okugawa S., Ota Y. et al. Expression and function of Toll-like receptors in eosinophils: activation by Toll-like receptor 7 ligand. //J. Immunol.-2003.-Vol. 171, № 8.-P. 3977-3982.

144.Neuman M. G., Nisengard R. Oral microbiology and immunology.//1988.- P. 534.

145.0rtqvist A. Treatment of community-acquired lower respiratory tract infections in adults. // Eur. Respir. J. - 2002. -№ 20. - P. 40-53.

146.Polito A.J., Proud D. Epithelil cells as regulators of airway inflammation. // J. Allergy Clin. Immunol. - 1998. - №102. - P. 714-718.

147.Protnoy D.A. Manipulation of innate immunity by bacterial pathogens. //Current. Opin. Immunol.-2005-Vol. 17.-P. 25-28.

148.Rakoff-Nahoum S., Paglino J., Eslami-Varzaneh F. et al. Recognition of commensal microflora by Toll-Like receptors is required for intestinal homeostasis. //Cell.-2004.-Vol. 118.-P. 229-241.

149.Rastogi D., Rather A.G., Prince A. Host-bacterial interactions in the initiations of inflammation. // Paediatr. Respir. Rev. - 2001. - Vol. 2,- Issue 3,- P. 245-252.

150.Rouabhia M., Ross G., Page N., Chakir J. Interleukin-18 and gamma interferon production by oral epithelial cells in response to exposure to Candida albicans or lipopolysaccaride stimulation. // Infect. Immun. - 2002. - №70. - P. 7073-7080.

151.Richman-Eisenstat J.B.Y., Jorens P.G., Hebert C.A., Ueki I., et al. Interleukin-8: an important chemoattractant in sputum of patients with chronic inflammatory airway diseases. //Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.- 1993.- №264.- P. 413418.

152.Sabroe I., Jones E.C., Usher L.R. et al. Toll-like receptor (TLR)2 and TLR4 in human peripheral blood granulocytes: a critical role for monocytes in leukocyte lipopolysaccharide responses. //J. Immunol.-2002.-Vol. 168, № 9.-P. 4701-4710. 153.Sandor F., Buc M. Toll-Like receptors II. Distribution and involved in TLR signaling.//Folia Biologica (Praha).-2005.-Vol. 51.-P. 188-197. 154.Salangue C. Castella Infections a Chlamidia du nouveaune et nourisson. // Archives de pediatric. - 2005. - №12. - P. 32-34.

155.Sandor F., Buc M. Toll-Like receptors III. Biological significance and impact for human medicine. // Folia Biologica (Praha).-2005.-Vol. 51 .-P. 198-203. 156.Sandor F., M. Buc. Toll-Like receptors I. Structura, function and their ligands. //Folia Biologica (Praha).-2005.-Vol. 51.-P. 148-156.

157.Samsom J.N. Адаптивные реакции Т-клеток, регулирующих оральную толерантность к белку антигена. // Аллергии .- 2011. - № 66 (4). - Р. 478-490. 158.Sakakura Y., I larada Т., Hamaguchi Y., Jin С. S. Interaction of bacteria with the immune system of Waldeyers ring in otitis media with effusion. // Acta-Otolaryngol-Suppl-(Stockh). - 1988. - V. 454. - P. 222-226. 159.Sanchez Palacios A., Garcia Marrero J. A., Schamann F. Valoración clínica inmunologica de un modificador de la respuesta biologica, AM3, en el tratamiento de la patología respiratoria infecciosa infantil. // Allergol-Immunopathol-(Madr). -1992. -Vol. 20. -№1.-P 35-39.

160.Schnare M., Rollinghoff M., Qureshi S. Toll-Like Receptors: Sentinels of Host Defence against Bacterial Infection. //Allergy Immunol.- 2006.-Vol. 139.-P. 75-85. 161.Shibusawa Т., Tsurumizu Т., Hashimoto T. Prevalence of Streptococcus mutans as an oral flora of dogs kept indoors. // J. Japan Veter. Med. Assn, 1991. - T. 44. - № 5. - P.512-514.

162.Shimosato Т., Kitazawa H., Katoh S. et al. Augmentation of Ти-1 type response by immunoactive AT oligonucleotide from lactic acid bacteria via Toll-like receptors 9 signaling. // Biochemical and biophysical research communication.-2005.-Vol. 326.-P. 782-787.

163.N.Soler, S. Ewig et al. Airway inflammation and bronchial patterns in patients with stable chronic obstructive pulmonary disease. // Eur. Respir.J. -1999. -Vol.14. - P. 1015-1022.

164.Spitzer J.H., Visintin A., Mazzoni A. et al. Toll-like receptor I inhibits Toll like receptor 4 signaling in endothelial cells. //Eur. J. Immunol.-2002.-Vol. 32.-P. 1182-1187.

165.Stepanovic S.; Dimitrijevic V.; Vukovic D.; Dakic I.; Savic В.; Svabic-Vlahovic M. Staphylococcus sciuri as a part of skin, nasal and oral flora in healthy dogs. // Veter. Microbiol. - 2001. - Vol.82. - P. 177-185.

166.Strobel С. Оральная толерантность в раннем возрасте. // Материалы по питанию общества. - 2001. -№ 60 (4). - Р.437- 442.

167.Sierra P.; Guillot J.; Jacob Н.; Bussieras S.; Chermette R. Fungal flora on cutaneous and mucosal surfaces of cats infected with feline immunodeficiency virus or feline leukemia virus.// Am. J. veter. Res. - 2000. - Vol.61. - №2. - P. 158-161. 168.Smith J.R., Tailor-Robinson D. infection due to chlamydia trachomatis in pregnancy and the newborn. // Bailliers Clin. Obstet. Gynecol. - 2003. - 7(1). - P. 237-255.

169.Smith J.K., Siddiqui A.A., Krishnaswamy G.A., Dykes R., Berk S.L., Magee M., Joiner W., Cummins J. Oral use of finterferon-alpha stimulates ISG-15 tran-

scription and production by human buccal epithelial cells. // J. Interferon. Cytokine Res. - 1999. - № 19. - P. 923-928.

170.Smith J.K., Chi D.S., Krishnaswamy G., Srikanth S., Reynolds S., Berk S.L. Effect of interferon alpha on HLA-DR expression by human buccal epithelium. // Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). - 1996. - № 44. - P.83-88.

171.Tabeta K., Georgel P., Janssen E. et al. Toll-Like receptors 9 and 3 as essential components of innate immune defense against mouse cytomegalovirus infection. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2004.-Vol. 101 .-P. 3516-3521.

172.Takeuchi O., Kawai Т., Muhlradt P.F. et al. Discrimination of bacterial lipoproteins by of Toll-like receptor 6. // Int. Immunol.-2001.-Vol. 13.-P. 933-940.

173.Taro Kawai, Shizuo Akira. Review Toll-like receptor downstream signaling. //Arthritis Research &. Therapy.- 2005.-Vol. 7, № l.-P. 12-19.

174.Tulic M.K., Hurrelbrink R.J., Laing I.A., Upham J.W., Sly P.D. et al. TLR-4 polymorphisms mediate impaired responses to respiratory syncytial virus and lipo-polysaccharide. //J. Immunol.- 2007,- №1.- P.40-132.

175.Thrane P.S., Rognum K., Brandtzaeg П. Онтогенез секреторной иммунной системы и врожденные защиты околоушной железы. // Клиническая и экспериментальная иммунология. - 1991. -№ 86 (2). -Р. 342-348.

176.Vaahtoniemi L.H., Raisanen S., Stenfors L-E. The age-dependence of bacterial presence on oral epithelial surfaces in vivo. // Oral. Microbiol. Immunol.- 1992.-№ 7.- P. 263-266.

177.Vazquez-Torres A., Vallance B.A., Bergman M.A. et al. Toll-like receptor 4 dependence of innate and adaptive immunity to Salmonella of the Kupffer cell network. //J. Immunol.-2004.-Vol. 172, № 10.-P. 6202-6208.

178.Wang J., Matsukura S., Watanabe S., Adachi M., Suzaki II. Involvement of Toll-like receptors in the immune response of nasal polyp epithelial cells. // Clin. Immunol.- 2007,- № 3.- P. 52-345.

179.Weinmeister K.D., Nogare A.R. Dal Buccal cell carbohydrates are altered during critical illness / // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1994. - Vol. 150. - P. 131134.

ISO.Welte T., O.Wiesner et al. Cytokine profiles in alveolar macrophages of patients with acute pneumonia. // Clin. Immunol. - 1999. - P. 2088.

181.Werling D., Jungi T.W. Toll-like receptors linking innate and adaptive immune response. // Vet. Immunol. Immunopathol.-2003.-Vol. 91, № l.-P. 1-12.

182.West A.P., Koblansky A.A., Ghosh S. Recognition and Signaling by Toll-Like Receptors. //Annu Rev. Cell. Dev. Biol.-2006.-№ 22.-P.37-409.

183.Wetzler L.M. The role of Toll-like receptor 2 in microbial disease and immunity. // Vaccine.-2003.-№ 21 .-P. 55-60.

184.Zarember K., Godowski P. Tissue expression of human Toll-like receptors and differential regulation of Toll-like receptor mRNAs in leukocytes in response to microbes, their products, and cytokines. // J. Immunol. - 2002. -Vol. 168, № 2.- P. 554-561.

185.Zhang D., Zhang G., Hayden M. S. et al. A toll-like receptors that prevents infection by uropathogenic bacteria. //Science.-2004.-Vol. 303.-P. 1522-1526.