Изучение влияния иммуномодулятора "Бестим" на активность иммунокомпетентных клеток in vitro и течение экспериментальной стафилококковой инфекции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Зурочка, Владимир Александрович

• Зурочка, Владимир Александрович
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Зурочка, Владимир Александрович

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1. Иммунотропные препараты и их характеристика.

1.1 Иммунотерапия и иммунотропные препараты.

1.2 Определение иммунотерапии.

1.3. Виды иммунотропных воздействий.

1.4 Классификация иммунотропных препаратов.

1.5. Характеристика иммунотропных препаратов группы тимические факторы.

1.5.1. Биологические гормоноподобные тимические факторы.

1.5.2. Синтетические тимомиметики.

1.5.3. Синтетические гормоноподобные тимические факторы.

2. Механизм действия "Бестима" в норме и при патологии.

2.1.Характеристика препарата.

2.2. Экспериментальное действие "Бестима" на иммунокомпетентные клетки животных.

2.3. Клиническое применение "Бестима".

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1 .Иммунологические методы.

2.1.1. Забор исследуемого материала и выделение клеток из крови.

2.1.2. Количественное определение субпопуляций лимфоцитов с помощью моноклональных антител.

2.1.3. Определение лизосомальной активности нейтрофилов и моноцитов крови.

2.1.4. Метод оценки внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофилов крови с помощью НСТ-теста.

2.1.5. Метод исследования фагоцитарной активности нейтрофилов крови.

2.1.6. Метод количественного определения уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови.

2.1.7. Оценка концентрации циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

2.1.8. Определение общей гемолитической активности комплемента (СН 50) и уровня компонентов комплемента: CI, С2, СЗ, С4, С5.

2.1.9. Индукция цитокинов мононуклеарами периферической крови и постановка реакции бластной трансформации лимфоцитов in vitro.

2.1.10. Оценка реакции бластной трансформации лимфоцитов морфологическим методом.

2.1.12. Определение спонтанной и митоген-индуцированной продукции цитокина ИНФу в супернатантах методом иммуноферментного анализа.

2.1.12. Определение спонтанной и митоген-индуцированной продукции цитокина ИЛ4 в супернатантах методом иммуноферментного анализа.

2.1.13. Определение спонтанной и митоген-индуцированной продукции цитокина ИЛ1Р в супернатантах методом иммуноферментного анализа.

2.1.14. Определение спонтанной и митоген-индуцированной продукции цитокина ИЛ8 в супернатантах методом иммуноферментного анализа.

2.1.15. Определение спонтанной и митоген-индуцированной продукции цитокина ИЛ 10 в супернатантах методом иммуноферментного анализа.

2.1.16. Расчетные коэффициенты оценки цитокинов.

2.1.17. Оценка миграционной активности нейтрофилов на хемоаттрактанты с учетом активности неспецифических эстераз и иммуноморфологии нейтрофилов.

2.1.17.1. Приготовление агарозного геля для проведения хемотаксиса нейтрофилов.

2.1.17.2. Приготовление градиента плотности фиколл-урографина.

2.1.17.3. Выделение лейкоцитов крови.

2.1.17.4. Оценка локомоторной функции нейтрофилов.

2.1.17.5. Выявление активности неспецифических эстераз методом одновременного азосочетания по Пирсу (в модификации лаборатории неспецифического иммунитета института Иммунологи МЗ СССР,

1986).

2.1.17.6. Иммуноморфологическое исследование фагоцитов в зоне хемотаксического ответа.

2.2. Методы изучения активности иммунокомпетентных клеток в эксперименте у мышей.

2.2.1. Морфометрические методы.

2.2.1.1. Методы оценки фагоцитарной функции клеток перитонеального экссудата мышей в эксперименте.

2.2.1.2. Определение лизосомальной активности нейтрофилов крови.

2.2.2.2. Метод оценки внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофилов перитонеального экссудата мышей с помощью НСТ-теста.

2.2.2.3. Метод исследования фагоцитарной активности нейтрофилов перитонеального экссудата мышей в эксперименте.

2.1. Статистические методы исследования.

Глава 3. Выбор оптимальной дозы "Бестима" по результатам исследования хемотаксической активности фагоцитов in vitro.

Глава 4. Изучение влияния "Бестима" на активность фагоцитарных клеток интактных животных и при развитии стафилококковой инфекции in vivo.

Глава 5. Изучение действия "Бестима" на различные субпопуляции клеток in vitro.

Глава 6. Влияние иммуномодулятора "Бестим" на спонтанную и индуцированную продукцию цитокинов ИНФу, ИЛ 1(3, ИЛ4, ИЛ8, ИЛ 10 иммунокомпетентными клетками крови условно-здоровых

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение влияния иммуномодулятора "Бестим" на активность иммунокомпетентных клеток in vitro и течение экспериментальной стафилококковой инфекции»

Актуальность проблемы.

Лечение больных с иммунодефицитными состояниями (ИДС) является одной из актуальных проблем современной медицины. Поэтому одной из важных научных задач является поиск новых способов и средств лечения заболеваний, связанных с патологией иммунной системы. В настоящее время значительно расширяется спектр иммунотропных лекарственных препаратов и показаний к их применению. Наиболее активно развиваются в этом направлении препараты тимического происхождения. Особое место среди них занимают синтетические препараты, такие как имунофан, тимоген, тимомодулин, тимостимулин, тимопентин ТР-5 (Карсанова М.И. и соавт., 1998, 2000; Лебедев В. В. и соавт., 1998,1999; Назаровым И. П. и соавт., 1999; Немцова Е. Р. и соавт., 1999; Нестерова И.В. и соавт., 2002; Старченко A.A., 2002). В последние годы спектр этих препаратов пополнился новым синтетическим иммуномодулятором "Бестимом", синтезированным в ГНЦ ГосНИИ ОЧБ г. Санкт-Петербург (Колобов Л. А., Симбирцев А. С, Куликов С. В. и соавт., 1997).

Бестим" (у-О-глутамил-Ь-триптофан натриевая соль) представляет собой дипептид с выраженными иммуностимулирующими свойствами.

Экспериментальные исследования "Бестима" были начаты в 1999 году. В эксперименте на мышах, было доказано стимулирующее действие "Бестима" на фагоцитарную активность макрофагов. При этом оказалось, что отсутствие выраженного влияния "Бестима" на продукцию свободных радикалов предохраняет ткани от повреждения, возникающего вследствие стимуляции фагоцитов, что делает применение препарата относительно безопасным.

При изучении действия "Бестима" в культуре лимфоцитов, после введения лабораторным животным Пигаревой Н.В. и соавт. (2000г.), было показано, что "Бестим" усиливает дифференцировку Т-лимфоцитов на разных этапах созревания, а также увеличивает функциональную активность зрелых лимфоцитов мыши, крысы и человека. Под действием "Бестима" возрастала доля клеток-предшественников Т-лимфоцитов костного мозга, и увеличивалось содержание зрелых Т-лимфоцитов среди клеток тимуса, а в зрелых Т-лимфоцитах крови он активировал синтез ИЛ-2 и экспрессию рецептора ИЛ-2. Таким образом, действие "Бестима" направлено главным образом на усиление созревания Т-хелперов, так как данный пептид избирательно усиливал экспрессию антигена ЬЗТ4 и стимулировал продукцию Т-лимфоцитами ИЛ-2. Исследования, проведенные Нестеровой И.В. и соавт. (2002), доказали, что "Бестим" обладает выраженным иммунотропными эффектами в отношении нейтрофилов, поврежденных при экспериментальной иммунизации мышей аллергеном, а также ингибирует продукцию ^ Е. Результаты изучения биологической активности "Бестима" на модели экспериментального туберкулеза у мышей показали повышение эффективности противотуберкулезной терапии за счет активации иммунного ответа (Заболотных Н.В. и соавт., 2003). "Бестим" существенно повышает эффективность этиотропной терапии экспериментального туберкулеза у мышей, восстанавливает пролиферативную активность спленоцитов и продукцию ими ИЛ-2, ингибированных при экспериментальном туберкулезе; повышает индуцированную КонА продукцию ИНФу и снижает индуцированную продукцию ИЛ-4 спленоцитами, препарат так же влияет на функциональную активность макрофагов (Заболотных Н. В. и соавт., 2001). В современной литературе имеются данные о клиническом применении "Бестима". При использовании "Бестима" в комплексной терапии туберкулеза, повышается угнетенная НСТ-активность макрофагов при остропрогрессирующей инфекции и снижается повышенный уровень продукции супероксида при вялотекущем туберкулезе. Введение препарата приводило к снижению уровня внеклеточной 5-нуклеотидазы при классическом и остропрогрессирующем течении инфекции, стимулировало адгезивную активность перитонеальных Мф при вялотекущем туберкулезе (Заболотных Н.В. и соавт., 2003).

Препарат эффективен для терапии вирусных инфекций и ряда бактериальных (туберкулез, листериоз, лепра и др.). Введение "Бестима" в комплексную терапию больных деструктивными формами туберкулеза легких существенно повышает показатели клеточного иммунитета и как следствие - эффективность лечения. При комплексной терапии инфильтративного туберкулеза легких предпочтительнее применение "Бестима" в суточной дозе 100 мкг (Васильева Г.Ю. и соавт., 2002; Пигарева Н. В. и соавт., 2000). Изучено положительное влияние Бестима при включении его в комплексную терапию язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки (Ткачева А.Г. и соавт., 2003, 2004; Ткачева А.Г., 2004, 2005). Изучена клинико-иммунологическая эффективность бестима в комплексной терапии хронической урогенитальной хламидийной инфекции у мужчин (Зиганшин О.Р. и соавт., 2003; Ковалев Ю.Н. и соавт., 2003; Корнеев A.B. и соавт., 2005).

Высокая эффективность "Бестима" была показана при лечении больных нейроинфекцией хламидийной этиологии (Лобзин Ю.В. и соавт., 2001, 2004). При сравнительном исследовании влияния иммуномодуляторов "Бестим" и "Беталейкин" (рекомбинантного ИЛ-1Ь) на иммунный статус больных с вторичными иммунодефицитами (ВИД) и хроническим инфекционным синдромом (ХИС) на фоне вакцинации против вирусного гепатита В (ВГВ) через один месяц после введения первой дозы вакцины Энджерикс В, было показано, что "Бестим" увеличивает содержание зрелых Т-лимфоцитов в крови, повышают индекс соотношения CD4/CD8, нивелируют отрицательное влияние вакцины против ВГВ на функциональную активность нейтрофилов. Таким образом, современный иммуномодулятор "Бестим" повышает иммунологическую безопасность вакцины против вирусного гепатита В, увеличивает эффективность вакцинации против вирусного гепатита В у пациентов с ВИД и ХИС (Абрамова H.H., Симбирцев A.C., Долгушин И.И., 2004; Абрамова H.H., 2005).

Таким образом, полученные экспериментальные и клинические данные свидетельствуют о иммунокорригирующих эффектах Бестима.

Оценивая в целом изученное влияние препарата in vivo, можно сказать, что основной механизм его действия связан либо с активацией Thl иммунного ответа, либо с изменением функции макрофагов. В то же время, многие аспекты действия "Бестима" остаются неизученными. Во многом остается неясным влияние "Бестима" на различные типы клеток, как человека, так и животных, участвующих в иммунных реакциях (лимфоциты, моноциты, нейтрофилы) и продукцию этими клетками цитокинов. Во многом остаются неизученным действие "Бестима" на других экспериментальных моделях, в том числе при остром гнойном воспалительном процессе. Не исследовалось влияние "Бестима" на характер иммунологических реакций при развитии стафилококковой инфекции. Вместе с тем, стафилококковая инфекция очень распространена, стафилококк является одним из основных возбудителей раневой и вторичной бактериальной инфекции (Эберт Л.Я. и соавт., 1983; Чукичев A.B., 1996). В тоже время влияние этого препарата на течение гнойно-воспалительного процесса, вызванного стафилококком, остается не исследованным.

Цель исследования:

Изучение влияния иммуномодулятора "Бестим" на активность иммунокомпетентных клеток in vitro и на течение стафилококковой инфекции in vivo в эксперименте на животных.

Для решения поставленной цели исследования были сформированы следующие задачи исследования:

1. Исследовать влияние различных концентраций "Бестима" на хемотаксическую активность фагоцитов in vitro для определения его оптимальной дозы.

2. Изучить влияние "Бестима" в оптимальной дозе на функции нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов периферической крови in vitro.

3. Оценить влияние иммуномодулятора "Бестим" in vitro на продукцию иммунокомпетентными клетками цитокинов в норме.

4. Исследовать влияние "Бестима" на иммунную реактивность и выживаемость животных со стафилококковой инфекцией.

Научная новизна результатов исследования.

Впервые изучено влияние "Бестима" на лабораторные показатели иммунной системы in vitro, включая число лимфоцитов с различными типами CD-рецепторов, продукцию цитокинов, функции фагоцитарных клеток. Впервые изучено действие "Бестима" на иммунологическую реактивность и выживаемость животных со стафилококковой инфекцией. Выявлено, что "Бестим" обладает хемоаттрактантными свойствами, что оптимальные концентрации "Бестима", вызывающие хемотаксис in vitro, находятся в диапазоне от 10"5 до 10~4 мг/мл. Одним из механизмов действия "Бестима" в норме, и при развитии гнойной стафилококковой инфекции, является активация фагоцитарных клеток, которая реализуется через хемотаксические рецепторы фагоцитов, в частности через рецептор CDllb (рецептор к комплементу), и увеличение экспрессии интегриновых и лектиновых рецепторов. "Бестим" увеличивает экспрессию рецепторов CD 10, CD 16, CD34, HLA-DR, что свидетельствует о влиянии препарата на клеточное звено иммунной системы. В тоже время "Бестим" не влияет на активность или число FAS + лимфоцитов (CD95) и основных субпопуляций лимфоцитов (CD4, CD8, CD20, CD56).

Бестим" в смешанной культуре клеток in vitro увеличивает спонтанную выработку ИЛ 10, снижает индуцированную продукцию ИЛ4. "Бестим", с учетом спонтанной продукции РШФу и ИЛ8, стимулирует ФГА- и ЛПС- индуцированную продукцию ИНФу и снижает ЛПС- индуцированную секрецию ИЛ 8. Выявленное воздействие "Бестима" приводит к снижению активности ТЫ- и к усилению Thl- иммунного ответа.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. "Бестим" обладает хемоаттрактантными свойствами для нейтрофилов, максимально выраженными в концентрации от 10"5 до 10~4 мг/мл.

2. "Бестим" в норме и при развитии гнойной стафилококковой инфекции вызывает активацию фагоцитарных клеток.

3. Механизм действия "Бестима" связан с активацией фагоцитарных клеток через рецептор CD1 lb (рецептор к комплементу).

4. "Бестим" увеличивает экспрессию рецепторов CD 10, CD 16, CD34, HLA-DR, что свидетельствует о влиянии препарата на клеточное звено иммунной системы.

5. При воздействии in vitro на смешанную культуру клеток "Бестим" увеличивает спонтанную выработку ИЛ 10, снижает индуцированную продукцию ИЛ4, и, с учетом спонтанной продукции цитокинов, стимулирует ФГА- и ЛПС- индуцированную продукцию ИНФу и снижает ЛПС- индуцированную секрецию ИЛ8. Выявленное воздействие "Бестима" приводит к снижению активности Th2- и к усилению Thl- иммунного ответа.

Практическая значимость исследования:

Несмотря на преимущественно фундаментальную направленность работы, проведенное исследование действия иммуномодулятора "Бестим" in vitro на активность иммунокомпетентных клеток позволило разработать подходы к проведению коррекции нарушений функции клеток иммунной системы при развитии острого гнойно-воспалительного процесса, вызванного стафилококком.

Полученные данные о механизме действия "Бестима" на иммунокомпетентные клетки, а именно стимуляция продукции ИЛ 10 и снижение секреции ИЛ4, стимуляция индуцированной продукции ИНФу и снижение ЛПС- индуцированного синтеза ИЛ8, с учетом спонтанной выработки цитокинов, уточняют механизм его действия на иммунокомпетентные клетки, что позволяет использовать полученные данные при назначении данного препарата для целенаправленной коррекции заболеваний, связанных с нарушением регуляции иммунного ответа.

Апробация работы.

Основные положения работы были доложены на VIII Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2004), на объединенном иммунологическом форуме: III Съезд иммунологов России, VI Национальный конгресс РААКИ, III Российская конференция: «Цитокины, Воспаление, Иммунитет» (Екатеринбург, 2004), на конференции, посвященной 10-летию НПЦ диагностики, лечения и профилактики дисбактериозов НИИ иммунологии ЧелГМА и 60-летию ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия МЗ РФ» (Челябинск, 2004). На юбилейной научной конференции КГМУ и сессии ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН "Университетская наука: взгляд в будущее", посвященный 70- летию КГМУ (Курск, 2005г.), на IX Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2005г.), на IV конференции иммунологов Урала (Уфа, 2005 г.), на VI Международной научно-практической конференции "Здоровье и образование в XXI веке" (Москва, 2005г.)

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 173 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы материалы и методы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 162 источника, из них 30 иностранных. Работа иллюстрирована 22 таблицами и 1 рисунком.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Зурочка, Владимир Александрович

ВЫВОДЫ

1. "Бестим" обладает хемоаттрактантными свойствами для нейтрофилов, что свидетельствует о наличии на этих клетках к данному веществу хемотаксических рецепторов. Хемотаксический эффект "Бестима" связан с его преимущественным действием на CD11Ь+ нейтрофилы. Оптимальное влияние "Бестим" оказывает в диапазоне концентраций от 10"5 до 10"4 мг/мл.

2. У интактных мышей и мышей с гнойной стафилококковой инфекцией "Бестим" повышает функциональную активность фагоцитарных клеток, механизм этого влияния во многом связан с активацией клеток через хемотаксические рецепторы фагоцитов.

3. "Бестим" не оказывает влияние на выживаемость мышей при введении летальной дозы St. aureus.

4. Одним из механизмов действия "Бестима" является активация фагоцитарных клеток через рецептор CD lib (рецептор к комплементу). В результате этого увеличивается связывание иммунных комплексов (которые сами являются активаторами комплемента), повышаться метаболическая активность фагоцитов, усиливается поглощение и утилизация ЦИК и, как следствие, падение IgA, IgM, IgG. Все это сопровождается потреблением комплемента.

5. "Бестим" приводит к снижению активности Th2- и к усилению Thl- иммунного ответа за счет снижения индуцированной продукции ИЛ4, стимуляции ФГА- и ЛПС- индуцированной продукции ИНФу, с учетом его спонтанного синтеза. Снижает ЛПС- индуцированную секрецию ИЛ8 и увеличивает спонтанную выработку ИЛ 10.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Исходя из полученных данных о механизме действия "Бестима", мы рекомендуем применение данного препарата при патологии фагоцитарного звена иммунной системы. Результаты проведенных исследований дают основание рекомендовать изучение клинической эффективности Бестима при стафилококковой инфекции, сопровождающейся гнойно-воспалительными процессами, а так же заболеваниях, связанных с активацией ТЬ2-ответа (аллергические заболевания).

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Зурочка, Владимир Александрович, 2006 год

1. Абелев Г.И. Воспаление /Г.И. Абелев// Соросовский образовательный журнал. 1996. - №10. - С. 28-32.

2. Абрамова H.H. Влияние Бестима и Беталейкина на эффективность вакцинации против вирусного гепатита В: Автореф. дис. . канд. мед. наук : 14.00.36 / H.H. Абрамова. Челябинск, 2005. - 20 с.

3. АрионВ.Я. Взаимодействие Т-активина с перитонеальными макрофагами / В.Я. Арион, И.В. Санина //Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1989. - №6. - С. 52-57.

4. АрионВ.Я. Исследование методом спиновых зондов действия Т-активина на мембраны лимфоцитов селезенки тимэктомированных мышей / В.Я. Арион, Л. Н. Падюков, М. Н. Короткова, В.А. Таранов, // Биол. мембраны. 1989. - Т.6. - №11. -С. 1203-1207.

5. АрионВ.Я. Тактивин и его иммунобиологические свойства: Автореф. дис. .докт. наук / В.Я. Арион. М., 1990. - 23 с.

6. Арион В.Я., Зимина И.В., Лопухин Ю.М. Современные взгляды на природу и использование препаратов тимуса. //Аллергология и клиническая иммунология. 1994. -N 2. - С. 4-17.

7. Арипов У.А. Клеточные основы иммунного ответа и иммунодепрессия. / У.А. Арипов, Д.Л. Арустамов, P.M. Хаитов. -Ташкент: "Медицина", 1976. 198 с.

8. Ю.Бажанов Н.Н. Тактивин в комплексном лечении острых воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области / Н.Н. Бажанов, В.Я. Арион, О.П. Сысоева, Е.П. Круглякова // Стоматология. 1996. -N 2. - С. 31-33.

9. П.Беляев Д.Л., Кузнецов В.П., Бабаянц А.А. и др. Лейкинферон -препарат для иммунокоррекции при чрезвычайных сутуациях.-Тезисы докладов III Российского национального конгресса "Человек и лекарство". Москва, 1996. - С. 254.

10. Боровиков В. STATISTIC А: искусство анализа данных на компьютере. Для профессионалов./ В. Боровиков. СПб., 2001. -656с.

11. Васильева Г.Ю. Иммунокоррекция терапии больных деструктивным туберкулезом легких препаратом Бестим / Г.Ю. Васильева, Г.С. Баласанянц // 12 Национальный конгресс по болезням органов дыхания. Москва, 2002. - С. 32-34.

12. Васильева Г.Ю. Эффективность различных доз препарата Бестим у больных инфильтративным туберкулезом легких / Г.Ю. Васильева, Г. С. Баласанянц, И.Я. Сахарова // Материалы VII Российского съезда фтизиатров 3-5 июня 2003 г. С. 27-29.

13. Возианов А. Ф., Бутенко А. К., Зак К.П. Цитокины: Биологические и противоопухолевые свойства. К.: Наукова думка, 1998. -317 с.

14. Воспаление: руководство для врачей / под ред. В.В. Серова, B.C. Паукова. -М.: Медицина, 1995. 636 с.

15. Войткевич К. JI. Определение общей окислительно-восстановительной активности нейтрофилов с помощью гистохимического красителя нитросинего тетразолия// Лаб. дело. — 1977. -N3.- С. 147-148.

16. Галактионов В.Г. Иммунология / В.Г. Галактионов. М.: Изд-во МГУ, 1998.-479 с.

17. Гланц С. Медико-биологическая статистика: Пер. с англ./ С. Гланц. М., Практика. 1998. - 459 с.

18. Голощапов P.M. Диуцифон. Научно-клинические данные. М: Медицинская книга, 1991. - 132 с.

19. Гриневич Ю.А. Иммунотерапия в противоопухолевом и противорецидивном лечении онкологических больных /Ю.А. Гриневич и соавт. К.: Наукова думка, 1990. - 318 с.

20. Грязнова И.М. Тактивин в комплексном лечении больных раком яичников. / И.М. Грязнова, О.В.Макаров и соавт. //Акуш. и гинекология. 1988. - № 8. -С. 57-61.

21. Долгих В.Т. Основы иммунологии М: Медицинская книга, Н. Новгород: Изд-во НГМА, 2000. - 204 с.

22. Долгушин И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. Екатеринбург: УрО РАН, 2001. - 278 с.

23. Демьянов A.B. Диагностическая ценность исследования уровней цитокинов в клинической практике /A.B. Демьянов, А.Ю.Котов, A.C. Симбирцев //Цитокин. 2003. - С. 4.

24. Дранник Г.Н., Гриневич Ю.А., Дызик Г.М. Иммунотропные препараты. К: Здоров'я, 1994. - 250 с.

25. ЗЗ.Злобина Ж.М., Маркова Т.П., Коломийцев А.Н. Динамика иммунологических показателей при проведении иммунокоррекции миелопидом у больных лимфогранулематозом. Аллергия, астма и клиническая иммунология. 1999. — № 7. — С. 3-6.

26. Иммунодефицитные состояния: под ред. В. С. Смирнова. СПб: Фолиант, 2000. - 680 с.

27. Игнатьева E.B. Влияние тактивина на продукцию кортикостерона суспензией клеток надпочечников мышей //Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1990. - Т. 109. - №1. - С. 53-55.

28. Йегер Л. Клиническая иммунология и аллергология / Л. Йегер -М.: "Медицина", 1986. Т.2. - С. 286-289.

29. Карсанова М.И. Иммунопрофилактика и иммунотерапия хирургических инфекций / М.И. Карсанова, Б.В. Пинегин, P.M. Хаитов // Практический врач. 1998. -N 12. - С. 5-9.

30. Карсанова М.И. Иммунопрофилактика и иммунотерапия хирургических инфекций. / М.И. Карсанова, Б.В. Пинегин, P.M. Хаитов // Иммунология. 2000. - №1. - С. 61-64.

31. Квятковская C.B. Иммунные механизмы и критерии прогноза развития аллергического процесса у здоровых лиц с "латентной сенсибилизацией" и у больных с аллергопатологией: автореф. дис. . канд. мед. наук / C.B. Квятковская. Челябинск, 2004. - 22с.

32. Кетлинский С.А. Иммунология для врача / С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина. СПб.: Гиппократ, 1998. - 156с.

33. Кетлинский С. А., Симбирцев А. С, Воробьев А. А. Эндогенные иммуностимуляторы. СПб.: Гиппократ, 1992. - 256 с.

34. Клиническая иммунология: Руководство для врачей/ Под. ред. Соколова Е. И. М.: Медицина, 1998. - 272 с.

35. Клиническая иммунология. Медицинское информационное агентство. Москва, 1999. - 604 с.

36. Кнорпиг Б. В. Сибирцев А. С, Сахарова И. Я. и др// Пробл. туберкулеза. -1998. № 3. - С. 67.

37. Ковалев Ю.Н. применение новой схемы лечения (таваник+бестим) у мужчин с хроническими уретритами, простатитами и уретропростатитами хламидийной этиологии / Ю.Н. Ковалев, A.B.

38. Корнеев, O.P. Зиганшин, М.А. Захарова // Актуальные вопросы дерматовенерологии: тез. регион. науч.-практ. конф. дерматовенерологов. Челябинск, 2003. - С. 27-29.

39. Колобов Л.А. Симбирцев А.С, Куликов C.B. и др. Пептид, обладающий иммуномодулирующей активностью. Пат. РФ №2091389 от 27.09.97.

40. Корнеев A.B. Сравнительная оценка влияния бестима и циклоферона на показатели системного иммунитета у больных хроническим хламидийным простатитом /A.B. Корнеев, И.И. Долгушин, O.P. Зиганшин // Цитокины и воспаление. 2005. - Т. 4.-ЖЗ.-С. 136-137.

41. Кост Е.А. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. М.: Медицина, 1975. - 383 с.

42. Красильников А.П. Методы изучения бактерицидных свойств сыворотки крови и фагоцитов: Метод. Рекомендации / А.П. Красильников. Минск, 1984. - 17с.

43. Кузнецов В.П., Беляев Д.Л., Бабаянц A.A. Иммунокорригирующая терапия лейкинфероном: результаты, перспективы. // Тезисы докладов III Российского национального конгресса "Человек и лекарство".-Москва, 1996-С. 147.

44. Кузник Б.И. Цитомедины: 25-летний опыт экспериментальных и клинических исследовании. /Б.И.Кузник, В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон. СПб. Наука, 1998. - 310 с.

45. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник./ Менщиков В.В., Дилекторская Л.Н., Золотницкая Л.П. с соавт.: Под ред. В.В. Менщикова. М.: Медицина, 1987. - 386 с.

46. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К.Стимуляторы иммунитета. М., Медицина, 1985. - 146 с.

47. Лебедев В.В. "Имунофан регуляторный пептид в терапии инфекционных и неинфекционных болезней" / В.В. Лебедев и соавт. // под редакцией академика РАМН В.И. Покровского. - М., 1998.-128 с.

48. Лебедев В.В. "Имунофан синтетический пептидный препарат нового поколения" / В.В. Лебедев, В.И. Покровский // Вестник Российской Академии Медицинских Наук, 1999. - №4. -С.56-61.

49. Лебедев В.В. "Имунофан синтетический пептидный препарат нового поколения: иммунологические и патогенетические аспекты клинического применения"// Иммунология, 1999. - №1. - С.25-30.

50. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике. М.: Наука, 1990. - 224 с.

51. Лебедев К. А. Иммунология в клинической практике: Электронная книга, 1996. 500 с.

52. Лобзин Ю. В. Эффективность применения иммунопрепарата Бестим при острой нейроинфекции хламидийного генезаУ Ю.В. Лобзин, А.Л. Позняк, A.C. Симбирцев, А.Ю. Котов, A.A. Колобов, В.М. Мудрицкий // Цитокины и воспаление. 2004. - №4. - С. 2426.

53. Макарова Е.С., Доскин В.А., Малиновская В.В. и др. Применение виферона у детей раннего возраста в зависимости от сезонных ритмов интерферонообразования. Тезисы докл. Росс. науч. Конгр. "Человек и лекарство". Москва, 2001. - С. 272.

54. Маркова Т.П. Применение топических иммуномодуляторов в группе длительно и часто болеющих детей. / Т.П.Маркова, Д.Г. Чувиров //нокоррекция в педиатрии под редакц. М.В.Костинова. — М., Медицина для всех, 2001. С. 91-99.

55. Махонова Л.А., Лопухин Ю.М., Петров Р.В. Иммунология. 1986. - № 2. - С. 50-53.

56. Машковский М.Д. Лекарственные средства: пособие для врачей : в 2 т. / М.Д. Машковский. 10-е изд. Харьков: Торсинг, 1994.

57. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новосибирск: Наука, Сиб. отд., 1989. - 344 с.

58. Маянский А.Н. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинеготетразолия: Метод, рекомендации /А.Н.Маянский, М.К.Виксман. -Казань, 1979.-11с.

59. Маянский А.Н. Клинические аспекты фагоцитоза / А.Н. Маянский, О.КПикуза. Казань: Магариф, 1993. - 192 с.

60. Михайлова A.A. Индивидуальные миелопептиды лекарства "нового поколения", используемые для иммунореабилитации. Int.Jimmunoreabil. - 1996. - №2. - С. 27-31.

61. Медуницын Н.В. Вакцинология. -М.: «Триада-Х», 1999. -272с.

62. Медик В.А. Статистика в медицине и биологии. «Теоретическая статистика» / В.А. Медик, М.С. Токмачев, Б.Б. Фишман; Под ред. Ю.М. Комарова. -М.: Медицина, 2000. Т. 1. - 454 с.

63. Медицинские и лабораторные технологии и диагностика: Справочник. Медицинские лабораторные технологии / Под ред. Карпищенко А.И. СПб: Интермедика, 1998. - Т.1. - С. 290-292.

64. Методы изучения фагоцитирующих клеток при оценке иммунного статуса человека: Учеб. Пособие / Под ред. И.С. Фрейдлин. — JL, 1986.-37с.

65. Морозов В.Г., Рыжак Г.А., Малинин В.В. Цитамины (биорегуляторы клеточного метаболизма). СПб.: ПКФ «Фолиант», 1999. - 120 с.

66. Нестерова И. В. Иммунотерапия и иммунные препараты / И. В. Нестерова, A.A. Старченко, С.А. Иванова, A.C. Симбирцев // В кн. Справочник по иммунотерапии для практического врача. -Спб.: Из-во «Диалог», 2002. С. 88-99.

67. Насонова В.А., Астапенко М.Г. Клиническая ревматология. -Москва, 1989. 592 с.

68. Новиков Д.К. Медицинская иммунология. Минск, Витебск: БАА-КИ, 1999. - 175 с.

69. Новиков Д. К., Новикова В. И. Оценка иммунного статуса. — Витебск, 1996.-282 с.

70. Новиков Д. К., Новикова В. И., Деркач Ю. Н„ Новиков П. Д. Основы иммунокоррекции. Витебск, 1998. - 105 с.

71. Павлович С. А. Основы иммунологии. Москва, 1998. - 265 с.

72. Петров Р.В., Михайленко A.A. Оценка состояния здоровья практически здоровых лиц с помощью иммунологических показателей. // Иммунология. 1990. - №1. - С. 60-64.

73. Петров Р.В., Хаитов P.M., Некрасов A.B. и др. Полиоксидоний -иммуномодулятор последнего поколения: итоги трехлетнего клинического применения. Аллергия, астма и клиническая иммунология, 1999. N3. - С. 3-6.

74. Петрова И.В., Лещенко Г.М., Быстрицкая Т.Ф. Эффективность нового иммуномодулятора миелопида при комплексном, лечении больных хронической пиодермией. Вестн. дерматол. 1989. - N 4. -С. 67.

75. Пигарева Н. В. Изучение иммуномодулирующей активности нового пептидного соединения Бестима / Н. В. Пигарева, А. С.Симбирцев, А. А. Колобов, Н. М. Калинина, O.A. Каурое, С. А.Кетлинский // Иммунология. 2000. - №1. - С. 33-35.

76. Пинегин Б. Ф. Современные проблемы иммунодиагностики и иммунотерапии // Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. Москва, 1997.-С. 145-152.

77. Пинегин Б.В., Андронова Т.М. Некоторые клинические и практические вопросы клинического применения иммуномодулятора Ликопид// Иммунология. 1998. - С. 60-63.

78. Позняк A.JI., Лобзин Ю.В., Симбирцев A.C., Смирнов М.Н. Принципы рациональной иммунотерапии больных генерализованными формами хламидийной инфекции у лиц молодого возраста // Terra Medica, 2000. №2. - С. 5-10

79. Понякина И. Д. Взаимосвязи в иммунной системе./ТИммунология. 1985.-№ 6.-С. 15-20.

80. Раны и раневая инфекция: Руководство для врачей / Под ред. М.И. Кузина, Б. М. Костюченока. 2е изд. перераб. и доп. — М.: Медицина, 1990. С. 592

81. Резникова Л.С. Комплемент и его значение в иммунологических реакциях. / Л.С. Резникова. М.: Медицина, 1967. - 272 с.

82. Ройт А. Иммунология, пер. с англ. / А. Ройт , Дж. Бростофф, Д. Мейл. М.: Мир, 2000. - 592 с.

83. Руководство по иммунофармакологии: пер. с англ. М.: Медицина, 1998.-332 с.

84. Сепиашвили Р.И. Классификация и основные принципы применения иммуномодулирующих препаратов в клинической практике, Аллергол. и иммунология. 2002. - Т.З. - №3. -С. 325-331.

85. Сенцова Т.Б. Современные иммуномодуляторы / Т.Б.Сенцова. -М: Оториноларингология, 2004. Т.З. - №5.

86. Сибиряк C.B. Иммунофенотипирование лимфоцитов в клинической практике: Краткое метод, руководство /C.B. Сибиряк, Р.Ш. Юсупов, Н.Н.Курчатова. Уфа, 1997. - 24с.

87. Скороходкина О.В., Горбунова Н.В., Дычек A.B. Отечественный препарат Ронколейкин в комплексной терапии ожоговой болезни // Мед. иммунология. 2000. - Т.2. - №2. - С.233.

88. Стандарты иммунологического обследования // Медицинская иммунология. Спб: 2002. - Т. 4 №2. - С. 380-394

89. Старченко A.A. Общая характеристика иммунотропных препаратов / A.A. Старченко // Справочник по иммунотерапии. — Спб., 2002.-С. 108-116.

90. Тихомиров A.A. Модификация метода Манчини для количественного определения иммуноглобулинов. / Лаб. дело. — 1977. № 1.-С. 45-47.

91. Ткачева А.Г. Бестим в комплексной терапии язвенной болезни / А.Г. Ткачева // Материалы IX российского национального конгресса «Человек и лекарство». Москва, 2004. - С.367.

92. Ткачева А.Г. Влияние Бестима на иммунологический статус и клиническое течение язвенной болезни / А.Г. Ткачева, О.Ф. Калев, Т.В. Антипина, А.И. Долгушина // Эксперим. и клинич. гастроэнтерология. 2004. - №6. - С.27-30.

93. Юб.Тотолян A.A. Клетки иммунной системы / A.A. Тотолян, И.С. Фрейдлин. СПб.: Наука, 2000. - Т. 1-2. - 231с

94. Трунов А.Н. Методология оценки функционального состояния иммунной системы при инфекционно-воспалительных заболеваниях. Новосибирск, 1997. - 147с.

95. Туманян М. А. Иммунология. / М. А. Туманян, Г. В. Киримичева. 1984.-№5.-С. 29.

96. Фрейдлин И.С. Система мононуклеарных фагоцитов. М.: Медицина, 1984.-271 с.

97. Фрейдлин И.С. Цитокины в клинике // Сборник Трудов 2-го Национального Конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии». Москва, 1998. - С. 104-112.

98. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты: Руководство для врачей. СПб., 1998. - 113 с.

99. ПЗ.Фрейдлин И.С. Иммунные комплексы и цитокины / И.С. Фрейдлин, С.А., Кузнецова, // Мед. Иммунология. 1999. - Т.1. -№1-2. - С.27-36.

100. Хаитов P.M. Синтетические антигены в иммунодиагностике и иммунопрофилактике. // "ВИНИТИ АН СССР",- М.,1988. 172 с.

101. Хаитов P.M. Основные задачи клинической иммунологии по изучению функциональной активности фагоцитирующих клеток / Р.М.Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 1995. - № 3. - С. 610.

102. Хаитов P.M. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса /P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 1995. - № 4. - С. 3-8.

103. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Андронова Т.М. Отечественные иммунотропные лекарственные средства последнего поколения и стратегия их применения// Лечащий врач. — 1998. №4. - С. 46-51.

104. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Основные принципы иммуномодулирующей терапии. Аллергия, астма и клиническая иммунология. 2000. - № 1. - С. 9-16.

105. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология: Учебник. М.: Медицина, 2000. - 432 с.

106. Хаитов P.M. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Сборник трудов 4-го Конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». — Москва, 2001. Т.1. — С.411.

107. Хаитов P.M. Миграция и кооперация клеток иммунной системы: физиология иммунитета в контексте современных данных //Сб.трудов Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии. -М., 2001. Т.1. - С. 11-41.

108. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы. М., ВИНИТИ, 2001.-220с.

109. Хаитов P.M. Оценка иммунного статуса в норме и патологии / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин// Иммунология, 2001.- №4.- С.4-6.

110. Чеботарева Т.А. Тимина В.П. Малиновская В.В. Виферон: применение при гриппе и др. ОРВИ у детей в кн. "Иммуномодулирующий и противовирусный препарат виферон в лечении детей и взрослых, часто болеющих вируснобактериальными инфекциями". -М., 2003. 124 с.

111. Чернутенко Е. Ф., Кадан Я. П., Ильинская И. Ф. и др. // Мед. иммунология. 2002. - Т. 4. -№ 2. - С. 266.

112. Чипепс Г.И. Структурные основы действия пептидных и белковых иммунорегуляторов / Г.И.Чипепс, И.И. Веретенникова, Р.Э. Ветер и др. Рига. 1990.

113. Чувиров Г.Н. Мат-лы 4-го конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». М., 2002 — Т.2. -С.412.

114. Яковлев Г. М. Резистентность, стресс, регуляция. / Г.М. Яковлев, B.C. Новиков, В. X. Хавинсон // JL: Наука. 1990. 238 с.

115. Ярилин А.А. Основы иммунологии. /А.А. Ярилин. М.: Медицина, 1999. - 608 с.

116. Ярилин А. А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / А.А. Ярилин // Иммунология. 1997. - №5. - С. 7-14.

117. Abbas A. Cellular and molecular immunology / A.Abbas, A. Lichtman, J.Rober // New York: W.B. Saunder Company. 1991. -P.420.

118. Baxevimis C. N., Fritlingos S., Seferiadis K. et al. // Immunopharmacol. and Imnumotoxicol. 1990. - Vol. 12. - P. 595617.

119. Cavaillon J.M. Interleukines et inflammation // Pathol, biol. 1990. -Vol. 38.-№1.-P. 36-42.

120. Chapel H., Haeney M., Misbah S., Snowden N. //Clinical Immunology. 4thed. -1999. P. 463

121. Dong X, Wu D. Methods for studying neutrophil chemotaxis. Methods Enzymol. 2006. - P. 406.

122. Gillis S., Farm M. M. On W. et al. // J. Immunol. 1978 - Vol. 120. - P. 2027-2032.

123. HaMen L. M-. Make P., Soso M. et al. // Cell. Immunol. 1992. -Vol. 144.-P. 228-236.

124. Hadden J., Kashimoto T. Introduction to immunopharmacology // Immunoparasitol. Today. 1993. - V. 14. - № 6. - P. 242

125. Ml.Hesset, Modolell M, La Flamme A C.//J. Immunol — 2001. Vol. 167.-№2.-P. 6533.

126. Holers V.M. Complement in clinical immunology. Principles and practice. / Ed. Rich. R. R. St. Louis, ect: Mosby. - 1996. - P. 363391.

127. Holers VM, Boackle SA, Morris MA, Karp DR: Complement opsonization is required for presentation of immune complexes by resting peripheral blood B cells J Immunol. 1998. - P. 6537-6543.

128. Hunter C., Chizzonite R., Remington J., ILlb is required for IL-12 to induce production of IFNg by NK cells: a role for ILlb in the T-cell-independent mechanism of resistance against intracellular pathogens /

129. C. Hunter, R.Chizzonite, J.Remington // J. Immunol., 1995. Vol. 155. p. 4347-4354.

130. Hung SL, Lee YY, Liu TY, Peng JL, Cheng YY, Chen YT. Modulation of Phagocytosis, Chemotaxis, and Adhesion of Neutrophils by Areca Nut Extracts. J Periodontol. 2006. - Vol. 77(4). - P. 579585.

131. Kawai K, Tsuno NH, Matsuhashi M, Kitayama J, Osada T, Yamada J, Tsuchiya T, Yoneyama S, Watanabe T, Takahashi K, Nagawa H. CD lib-mediated migratory property of peripheral blood B cells. J Allergy Clin Immunol. 2005. - Vol. 116(1). - P. 192-207.

132. Ketlinsky S., Simbircev A., Poliomck A. et al. // Enr. Cytokine Nctw. 1991. - Vol. 2.-P. 17-26.

133. Lester M. Down-regulating effects of IL-4 and IL-10 on the IFNy response in atopic dermatitis / M.Lester, M.Hofer, M.Gately, A.Trumble, D.Leung // J. Immunol. 1995. - Vol. 154. - P. 61746181.

134. Malinovskaya V.V. "Interferon a2b antivirus action modulation with the help of antioxidant action preparation" International Conference on Interferons Biology and Clinical Applications. 1998.- Vol. 77, P. 234- 236.

135. Malysheva NS, Shuikina EE, Lebedeva MN, Fedianina LV. The effect of leukinferon on the invasive process in experimental helminthiases : Med Parazitol (Mosk). 1998. - Vol. (1). - P. 17-20.

136. Mancini G., Caronara A.O., Heremans J. F. Immunochemical quantitation of angens by single radial immunodiffusion // Immunochemistry. 1965. -N 3. - P. 235- 254.

137. Mc. Markewin A., Fuclin D. et al. // Ann. Suij. 1991. - Vol. 214. -P. 264-275.

138. Nizharadze GI, Kuznetsov VP, Gamkhitashvili ASh, Chitaishvili KG, Pavlenishvili IV. Leukinferon in the combined therapy of infection in neonates and infants : Pediatriia. 1989 - Vol. 6. - 46-49.

139. Nelson R.D., et al. Chemotaxis under agarose: a new and simpl method for measuring chemotaxis and spontanequs migration of human polymorphonuclean leukocytes and monocytes. // J. Immunol. 1975. - № 115.-P. 1650- 1656.

140. Peck R. J. Immunol. Methods. -1995. Vol.10, № 1. - 131 p.

141. Solov'ev MM, Alekhova TM, Grintsevich II, Golubev BG, Morozov VG. Use of thymalin in treating severe forms of inflammatory diseases of the maxillofacial area. / Stomatologiia (Mosk). 1984. -Vol. 63(3). -P. 19-22.

142. Szleiu M., Scram S. // Int. J. Imnuinopharmacol. 1989. - Vol. 2. -P. 789-800.

143. Terasaki. Microdropicl Lymphocyte Cyioloxicity Test: Manual of Tissue Typing Techniques. / Terasaki, McCunly B., et al. Maryland, 1972.-P. 50-55.

144. Thomson A. The Cytokine Handbook / A. Thomson. London: Acad. Press., 1992.-418 p.

145. Quie P. Disorders of polymorphonuclear phagocytic system. In. Immunologic disorders in Infants and Children / 4thed. WB Saunders. -1996.-P. 76

146. Xu G, Shao JY. Double tether extraction from human neutrophils and its comparison with CD4+ T-lymphocytes. Biophys J. 2005. - Vol. 88(1).-P. 661-669.