Изучение вертикального переноса генов от биозащищенных растений к их диким сородичам и традиционно возделываемым сортам тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.11, кандидат биологических наук Крутенко, Дмитрий Викторович

• Крутенко, Дмитрий Викторович
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Крутенко, Дмитрий Викторович

Введение

Глава 1. 1.

1.2 1.2.

1.6.1 1.6.

Глава 2. 2.1. 2.2. 2.2.

Обзор литературы

Трансгенные культуры: распространение и использование в сельскохозяйственном производстве Вертикальный перенос генов

Факторы, определяющие степень риска переноса генов

Перенос генов к другим возделываемым сортам растений

Биобезопасность трансгенного картофеля

Биобезопасность трансгенной кукурузы

Биобезопасность трансгенной сои

Методические подходы к определению наличия трансгенов в пищевых продуктах и кормах

Методы оценки содержания генетическимодифицированных источников

Методы на основе полимеразной цепной реакции

ПЦР-идентификация трансгенов Неспецифическая ПЦР-детекция генетически-модифицированных источников Другие методы детекции модифицированных источников Апробация методов ГМ-детекции Материалы и методы исследований Объект исследования

Использованные материалы и оборудование Химические реактивы генетическиф 2.2.2 Оборудование

2.3 Использованные методы

2.3.1 Выделение ДНК из различных тканей растения

2.3.2 Амплификация геномной ДНК

2.3.3 Электрофорез ДНК в агарозном геле

2.3.4 Фотодокументирование продуктов амплификации

• Глава 3. Результаты и обсуждение

3.1 ПЦР-детекция трансгенных растений

3.2 ПЦР-идентификация трансгенных растений

3.3 Влияние различных веществ на специфичность и

• (или) выход ПЦР-реакции

3.4 Полуколичественная оценка генетическимодифицированных источников (ГМИ)

3.5 Оценка риска вертикального переноса генов от ГМкартофеля

3.6 Оценка риска вертикального переноса генов от ГМкукурузы

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение вертикального переноса генов от биозащищенных растений к их диким сородичам и традиционно возделываемым сортам»

Актуальность работы. Успехи современной биотехнологии привели к созданию генно-модифицированных (ГМ) растений и их широкому внедрению в практику сельскохозяйственного производства.

Перспективным направлением в биологической защите растений является использование генно-модифицированных биозащищенных от вредителей сортов, а также сортов, устойчивых к гербицидам. Это особенно важно, если учесть, что многие вредители сельскохозяйственных культур приобрели резистентность к большинству химических инсектицидов, следствием чего является увеличение объемов их внесения, загрязнение окружающей среды и в итоге потери урожая.

Значительный вред урожаю также наносит конкуренция со стороны сорных растений. В данной ситуации имеет большое значение использование раундап-защищенных сортов сои и кукурузы, так как Раундап широко применяемый гербицид, известный своей очень высокой эффективностью и имеющий высокие показатели безопасности. Широкое использование ГМ-растений в сельскохозяйственном производстве ставит на повестку дня вопросы их биобезопасности.

Одним из аспектов биобезопасности ГМ-культур является оценка вертикального переноса генов от ГМ-растений к культурным сортам и диким сородичам. Потенциальная опасность здесь заключается в том, что новые привнесенные признаки устойчивости дадут дополнительные преимущества диким видам растений, и будут способствовать их быстрому распространению.

В этой связи актуальность наших исследований определяется необходимостью инструментального контроля ГМ-растений и получаемых на их основе продуктов и кормов для животноводства. Основным методом для быстрого и эффективного мониторинга ГМ-растений в настоящее время является ПЦР (полимеразная цепная реакция). Однако используемые в нашей стране методики ПЦР-детекции не достаточно эффективны и требуют доработки. До сих пор не разработаны рекомендации по безопасному выращиванию ГМ-культур, и, в частности, не исследованы вопросы переноса генов от трансгенных растений другим представителям биоценоза.

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы - оценить риск вертикального переноса генов от трансгенных биозащищенных растений кукурузы и картофеля к культурным сортам и диким сородичам. Для достижения поставленной цели в задачи исследований входило:

- модифицировать методику выделения препаратов ДНК из семян растений, для их анализа методом полимеразной цепной реакции (ПНР);

- модифицировать методы ПЦР-детекции и идентификации трансгенных растений; разработать методы полуколичественной оценки генетически-модифицированных источников (ГМИ);

- разработать методику оценки риска вертикального переноса трансгенов на примере ГМ-кукурузы, устойчивой к гербициду Раундап, и ГМ-картофеля, устойчивого к колорадскому жуку;

- определить степень риска и разработать меры по предотвращению вертикального переноса генов от раундап-защищенной кукурузы и ЕИ;-защищенного картофеля к культурным сортам и диким сородичам.

Научная новизна. В настоящей работе: представлена модифицированная методика выделения ДНК по Дорохову и Клоке (1997) применительно к семенам растений, пригодная для проведения ПЦР;

- повышена эффективность методов детекции и идентификации трансгенных растений посредством оптимизации условий проведения ПЦР-реакции и подбора специфичных праймеров, а также использованием в реакции дополнительных положительных контролей;

- разработана методика полуколичественной оценки генетическимодифицированных источников на основе амплификации участка целевого гена;

- оценен риск и разработаны меры по предотвращению вертикального переноса генов от генно-модифицированных биозащищенных растений к диким сородичам и другим культурным сортам.

Научно-практическая ценность работы. Результаты опытов по вертикальному переносу генов от генно-модифицированных биозащищенных растений к культурным сортам и диким сородичам позволяют оценить риски интродукции трансгенных растений в окружающую среду, определить особенности их выращивания, а также защиты от вредителей и сорняков. Внедрение в сельскохозяйственное производство генно-модифицированных биозащищенных от колорадского жука сортов картофеля и Раундап-защищенных сортов сои и кукурузы будет способствовать сокращению использования химических средств защиты, что приведет к уменьшению потерь урожая и к улучшению состояния окружающей среды. Для целей более эффективного мониторинга ГМ-растений и продукции на их основе рекомендуется использовать модифицированные методы ПЦР-детекции, а также разработанные методы полуколичественной оценки ГМИ.

Основные положения, выносимые на защиту:

ПЦР-детекцию необходимо проводить с дополнительным положительным контролем, для сои - амплификация участков генов актина (350 п.н.) и лектина (318 п.н.), для кукурузы - генов актина (350 п.н.) и зеина-19 (387 п.н.) и для картофеля - пататина (216 п.н.), что позволяет проверить качество (чистоту) препарата выделенной ДНК, а также проверить другие химические компоненты ПЦР-реакции во избежание ложно отрицательных результатов;

- разработанный нами метод полуколичественной оценки ГМИ позволяет проводить не только детекцию трансгенов в зерне и семенах, но и определять их количественное содержание без использования дорогостоящего оборудования;

- риск вертикального переноса генов от трансгенного картофеля можно считать минимальным, изоляция трансгенного картофеля от других сортов не требуется. Риск вертикального переноса генов от ГМ-кукурузы к культурным сортам существует. Поля с трансгенными сортами кукурузы должны быть удалены не менее чем на 200 м от полей с традиционными сортами. При этом рекомендуется использовать защитные мероприятия, а частности, путем создания барьеров на пути движения пыльцы.

Апробация работы. Результаты работы докладывались на Всероссийской научно-технической конференции "Биотехнология 2003" (Сочи 22-26 сентября 2003), на Всероссийском конгрессе «Здоровое питание населения России» (Москва 12-14 ноября 2003), на 2-м Московском международном Конгрессе "Биотехнология: состояние и перспективы развития" (Москва, 10-14 ноября 2003), на 5-й региональной научно-практической конференции молодых ученых «Научная обеспечение агропромышленного комплекса» (Краснодар, 1819 декабря 2003 г.), на II региональной научно-практической конференции молодых ученых и студентов Краснодарского края «Медицина и здравоохранение». - Анапа, 21-23 апреля 2004, на III ВОГиС) Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития (Москва 6-12 июня 2004), на международной научно-практической конференции «Биологическая защита растений - основа стабилизации агроэкосистем» (Краснодар, 29 сентября - 1 октября 2004 г), на 7-й региональной научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса».-Краснодар, 8-9 декабря 2005 г.

Декларация личного участия автора. Диссертация содержит фактический материал, полученный лично автором в течение 2002-2005 гг. Полевые опыты по вертикальному переносу генов кукурузы и определению видового состава насекомых проводились совместно с лабораторией гербологии ГНУ ВНИИБЗР РАСХН. Личный вклад автора в получение результатов исследований составляет 80%.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, методики проведения исследований, результатов исследования, выводов, практических рекомендаций, приложений. Содержит 8 таблиц и 30 рисунков. Список использованной литературы включает 171 источник, в том числе 157 на иностранном языке. Диссертация является самостоятельным завершенным научным трудом.

Заключение диссертации по теме «Защита растений», Крутенко, Дмитрий Викторович

ВЫВОДЫ

1. Модифицированный метод выделения ДНК по Дорохову и Клоке (1997) позволяет получить пригодные для проведения ПЦР препараты ДНК из семян сои, кукурузы и картофеля;

2. Во избежание ложно отрицательных результатов ПЦР-детекцию проводят с дополнительным положительным контролем, для сои - амплификация участков генов актина (350 п.н.) и лектина (318 п.н.), для кукурузы генов -актина (350 п.н.) и зеина-19 (387 п.н.) и для картофеля - пататина (216 п.н.), что позволяет проверить качество (чистоту) препарата выделенной ДНК, а также проверить другие химические компоненты ПЦР-реакции;

3. ПЦР-идентификацию при концентрациях ГМ-компонента в образце ниже 0,5% проводят при добавлении в реакцию хлорида аммония в конечной концентрации 15мкМ, что приводит к увеличению выхода ПЦР-реакции, отсутствию неспецифических полос при гель-электрофорезе и повышению чувствительности данного метода;

4. Разработан метод полуколичественной оценки ГМ-компонента, основанный на амплификации участка целевого гена СР4 ЕР8Р8 с использованием пары праймеров: Ю101 и ЯШМ, фланкирующих участок целевого гена размером 356 п.н.;

5. У растений кукурузы линии ЫК 603 (Монсанто, США) гены желтозерности и устойчивости к Раундапу не сцеплены между собой, так как зависимость между количеством ксений и удаленностью участка-реципиента от донора не совпадает с зависимостью между количеством растений, выращенных из желтых семян и устойчивых к гербициду, и удаленностью участка-реципиента от донора;

6. Риск вертикального переноса генов от В^картофеля к его диким сородичам и культурным сортам минимален, так как ботанические семена образовывались только на диких формах картофеля, и ПЦР-анализ не выявил наличия трансгенной вставки в данных образцах. Вследствие того, что картофель является в основном самоопылителем, а в качестве посадочного материала используют клубни, изоляции полей с трансгенным картофелем не требуется;

7. Риск вертикального переноса генов от Ш1-кукурузы к ее культурным сортам существует. Факт переноса генетической конструкции на расстояние до 200 м подтвержден результатами проведения ПЦР-реакции и обработки гербицидом Раундап. Поля с трансгенными сортами кукурузы должны быть удалены не менее чем на 200 м от полей с культурными сортами, а также необходимо создание барьеров на пути движения пыльцы. В России дикие сородичи кукурузы не встречаются, поэтому риск вертикального переноса генов от ЯЯ-кукурузы к ее диким видам маловероятен.

Практические рекомендации

В целях быстрого и эффективного мониторинга ГМ-растений на полях и получаемых на их основе продуктов и кормов использовать модифицированный нами метод выделения ДНК по Дорохову и Клоке (1997) из различных растительных тканей, а также предлагаемые нами методы детекции и идентификации трансгенной вставки.

ПЦР необходимо проводить с использованием двух положительных и двух отрицательных контролей.

При предварительном определении количества ГМИ в образцах использовать предложенный нами метод полуколичественной оценки.

Поля с трансгенными сортами кукурузы должны быть удалены не менее чем на 200 м от полей с культурными сортами, а также необходимо создание барьеров на пути движения пыльцы. Изоляции полей с трансгенным картофелем не требуется.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Крутенко, Дмитрий Викторович, 2006 год

1. Ала, А .Я. Использование спонтанного опыления у сои при межвидовой гибридизации Текст. / А.Я. Ала // Доклады ВАСХНИЛ. -1988. -Т.6. -С. 10-12.

2. Дорохов, Д.Б. Быстрая и экономичная технология RAPD-анализа растительных геномов Текст. / Д.Б. Дорохов, Э. Клоке // Генетика. -1997. -Т. 33. -№4. -С.443-450.

3. Медико-биологическая оценка пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников: методические указания

4. Минздрава Российской Федерации (МУК2.3.2.970-00) Текст. -М: Минздрав России, 2000. -С. 94.

5. Российская газета Текст. / Учредитель Правительство Российской Федерации. -Краснодар, 30 января 2002 год: отп. ОАО изд. Советская Кубань. -№ 18 (2886).

6. Уайтхед, Т. Картофель здоровый и больной Текст. / Т. Уайтхед, Т. МакИнтош, У. Финдлей; пер. с англ. под ред. Пушкарева И. И. М.: Иностранная литература, 1955. - 608 с.

7. Ahmad, Q.N. Inversion bridges and meiotic behavior in species hybrids of soybeans Текст. / Q.N. Ahmad, E.J. Britten, D.E. Byth // J Hered. -1977. -V.68. -P. 360-364.

8. Allmann, M. Polymerase chain reaction (PCR): a possible alternative to immunochemical methods ensuring Safety and quality of food Текст. / M. Allmann, U. Candrian, C. Hofelein, J. Luthy // Z.Lebensm.Unters.Forsch.-1993196.-P.248-251.

9. Anon. The Regulatory Directive Dir94-ll: The biology of Zea mays L. (Corn/Maize) Текст. / Anon // Plant Biotechnology Office, Plant Health and Production Division, Canadian Food Inspection Agency. -1994.

10. Arias, D.M. Gene Flow between cultivated and wild sunflower Текст. / D. M. Arias, L. H. Rieseberg // Theor. Appl. Genet. 1994. - V. 89. - P. 655-660.

11. Arnold, M.L. Natural hybridization and evolution Текст. / M. L. Arnold. -N. Y.: Oxford University Press. -1997.

12. Bateman, A. J. Contamination in seed crops — I. Insect pollination Текст. / A. J. Bateman II J. Genet. -1947. -48. -P. 257-275.

13. Bateman, A.J. Contamination of seed crops — II. Wind pollination / A. J. Bateman Текст. II Heredity. 1947. -1. -P. 235-246.

14. Blake, N.K. Polymerase chain reaction used for monitoring multiple gene integration in Agrobacterim-mediated transformation Текст. / N.K. Blake, R.L. Ditterline, R.G. Stout // Crop Science.-1991. -№31. -P. 1686-1688.

15. Bonnett, O.T. Development of the corn kernel Текст. / О. Т. Bonnett // In: Growth and development of the corn plant. American Seed Trade Association. -1947. -P. 32-36.

16. Burdon, J.J. Diseases and plant population biology Текст. / J. J. Burdon. -New York : Cambridge University Press, 1987.

17. Carpenter, J. E. Agricultural biotechnology: Updated benefit estimates Текст. / J. E. Carpenter, L. P. Gianessi // National Center for Food and Agricultural Policy. -2001. http://www.ncfap.org/pub/biotech/updatedbenefits.pdf.

18. Carpenter, J. E. Comparing Roundup Ready and conventional soybean yields: 1999 Текст. / J. E. Carpenter; National Center for Food and Agricultural Policy, Washington, D.C. 2001. www.ncfap.org.

19. Coble, H.D. Weed control investigations in corn, cotton, crop rotations, soybean, small grain Текст. / H. D. Coble, L. S. Warren // Annu Rep Dept Crop Sci NCSU. -1997. -28. -P.103-113

20. Comparison of the ABI 7700 system (TagMan) and competitive PCR for quantitation of IS6110 DNA in sputum during treatment of tuberculesis Текст. //J.Clin.Microbiol. -1998. -№36. -P.1964-1968.

21. Conway, G. Crop Biotechnology: Benefits, Risks and Ownership Текст. / G. Conway // The Rockefeller Foundation. 8-30-2000. http://www.Rockfound.Org/News/03062000Cropbiotech.Html#Intro: 1 -7.

22. Cote, M.J. Identification of genetically modified potato (Solanum tuberosum) cultivars using event specific polymerase chain reaction Текст. / M.J. Cote, A.J. Meldrum, P. Raymond, C. Dollard // J Agric Food Chem. -2005 Aug 24. -№53(17). -P. 6691-6696.

23. Crawley, M. J. Transgenic crops in natural habitats Текст. / M. J. Crawley, S. L. Brown, R. S. Hails, D. D. Kohn, M. Rees // Nature. -2001. -№409. -P. 682-683.

24. Culpepper, A.S. Weed management in glufosinate- and glyphosate-resistant soybean (Glycine max) Текст. / A. S. Culpepper, A. C. York, R. B. Batts, K. M. Jennings // Weed Technol. -2000. -14.-P.77-88.

25. Daniell, H. Containment of herbicide resistance through genetic engineering of the chloroplast genome Текст. / H. Daniell, R. Datta, S. Varma // Nat. Biotechnol. 1998. - V. 16. - P. 345-348.

26. Dunwell IIJ Experiment Bot. 2000. -51. -P.487-496.

27. Ellstrand, N.C. Gene flow and introgression from domesticated plants into their wild relatives Текст. / N. С. Ellstrand, H. C. Prentice, J. F. Hancock // Ann. Rev. Ecol. Syst. 1999. - V. 30. - P. 539-563.

28. Ellstrand, N.C. Gene Flow by pollen: implications for plant conservationgenetics Текст. / N. С. Ellstrand // Oikos. 1992. - V. 63. - P. 77-86.

29. Ellstrand, N.C. Hybridization as an avenue for the escape of engineered genes Текст. / N. С. Ellstrand, С. A. Hoffman // Bioscience. 1990. - V. 40. - P. 438-442.

30. Ellstrand, N. С. Pollen as a vehicle for the escape of engineered genes? Текст. / N. С. Ellstrand // Trends in Ecology and Evolution. 1988. - № 3.ф P. 30-32.

31. Ellstrand, N.C. Population genetic consequences of small population size: Implications for plant conservation / N. C. Ellstrand, D. R. Elam // Annu. Rev.• Ecol. Syst. 1993. - V. 24. - P. 217-242.

32. Elmore, R.W. Glyphosate-resistant soybean cultivar yields compared with sister lines Текст. / R. W. Elmore, F. W. Roeth, L. A. Nelson, C. A. Shapiro, R. N. Klein, S. Z. Knezevic, A. Martin II Agron J.-2001.-V. 93.-P.408-412

33. Erickson, E.H. Soybean pollination and honey production—A research progress report Текст. / E. H. Erickson II Am Bee J. -1984. -124. -P. 775-779.

34. European Commission Official Journal L 006 Текст.; 13-14 (2000).

35. Fagan, L. Performance assessment under field conditions of a rapid IMMUNOLOGICAL TEST FOR TRANSGENIC SOYBEANS Текст. / L. Fagan, B. Schoel, A. N Haegert e.a. // Int.J.of Food Science and Technology.-2001.-№36. -P.357-367.

36. Fredshaven, J.R. Growth behavior and competitive ability of transgenic crops Текст. / J. R. Fredshaven, G. S. Poulsen // Field Crops Res. 1996. -54. -P. 11-18.

37. Frutos, R. Managing insect resistance to plants producing Bacillus thuringiensis toxins Текст. / R. Frutos, C. Rang, M. Royer // Crit Rev Biotechnol.- 1999.-V.19.-P.227-276.

38. Gasser, C. S. Genetically engineered plants for crop improvement Текст. / С. S. Gasser, N.H. Fraley // Science. 1989. - V. 244. - P. 1293-1299.

39. Goodman, M.M. Maize Zea mays (Gramineae — Maydeae) Текст. / M. M. Goodman // In: immonds, N. W. (Ed.). Evolution of crop plants. -Longman, London.-1976. -P. 128-136.

40. Gould, F.W. Grass systematics Текст. /F. W. Gould // McGraw Hill. -New York.-1968.-P. 381-382.

41. Grant, V. Plant speciation Текст. / V. Grant. -N. Y. : Columbia University Press, 1981.• 60 Gray, A. J. Environmental risks of herbicide-tolerant oilseed rape Текст. / A.

42. J. Gray, A. F. Raybould // DETR Research Report.-London. -1999. -№ 15.

43. Gray, P. J. The transfer of traits to wild relatives Текст. / P. J. Gray // BCPC Symp. Proc. Predicting field performance in crop protection. 2000. -No. 74. -P. 165-174.

44. Gressel, J. Tandem constructs: preventing the rise of superweeds Текст. / J.

45. Gressel // Trends Biotechnol. 1999. - V. 17. - P. 361-366.

46. Gresswel, J. E. Predicted pollen dispersal by honey-bees and three species of bumble bee foraging on oilseed rape: A comparison of three models Текст. / J. E. Gresswel, A. P. Bassom, S. A. Bell [et. all.] // Funct. Ecol. 1995. - V. 9. - P. 829-842.

47. Guretzky, J.A. Evidence for natural biological control: insects decreasesurvival and growth of native thistle Текст. / J. A. Guretzky, S. M. Louda // Ecol. Appl. 1997. - V. 7. - P. 1330-1340.

48. Hancock, J. The opportunity for escape of engineered genes from trans genie crops Текст. / J. Hancock, R. Grumet, S. Hokanson. // Hortsci. -1996. -31. -P. 1080-1085.

49. Handel, S.N. Pollination ecology, plant population structure, and gene flow Ф Текст. / S. N. Handel // Pollination biology (L. Real ed.) : Academic Press,

50. Orlando, FL.- 1983.-P. 163-211.

51. Harding, K. Risk assessment of the release of genetically modified plants % Текст. / К. Harding, P. S. Harris; A review. MAFF. -1994.

52. Hassan-Hauser, C. Detection of the starch modifying gbss-antisense construct in transgenic potatoes Текст. / С. Hassan-Hauser, W. Mayer, H. Hortner // Z.Lebensm.Unters.Forsch. -1998. -№206. -P.83-87.

53. Hemmer, W. Foods derived from genetically modified organisms and defection methods Текст. / W. Hemmer // BATS.-1997.

54. Hernandez, M. Interlaboratory transfer of a PCR multiplex method for simultaneous detection of four genetically modified maize lines: Btll, MQN810, T25, and GA21 Текст. / M. Hernandez, D. Rodriguez-Lazaro, D.

55. Hokanson, S.C. Effect of border rows and trap/donor ratios on pollenmediated gene movement Текст. / S. C. Hokanson, R. Grumet, J. F. Hancock // Ecol. Appl.- 1997.-V. 7.-P. 1075-1081.

56. Holt, J. Prevalence and management of herbicide-resistant weeds Текст. / J. Holt // Scientific Methods Workshop: Ecological and Agronomic Consequences of Gene Flow from Transgenic Crops to Wild Relatives

57. Ф (Meeting Proceedings, The Ohio State University, March 5, 6. 2002). - P.47.51.

58. Hood, M.J. Interspecific hybridization studies between cultivated soybean,• Glycine max and a perennial wild relative Текст. / M. J. Hood, F. L. Allen // G. falcata. Proc Am Soc Agron. -1980. -P. 58.

59. Hupfer, C. Detection of genetic modification in heat treated products of Bt-maize by polymerase chain reaction Текст. / С. Hupfer, H. Hotzel, K. Sachse, K.H. Engel // Z.Lebensm.Unters.Forsch. -1998. -№206. -P.203-207.

60. Johnson, W.G. Efficacy and economics of weed management in glyphosate-resistant corn (Zea mays) Текст. / W. G. Johnson, P. R. Bradley, S. E. Hart, M. L. Buesinger, R. E. Massey // Weed Technol. -2000. -V.14. -P. 57-65.

61. Johnston, S.A. The significance of genie balance to endosperm development in interspecific crosses Текст. / S. A. Johnston, Т. P. M. den Nijs., S. J. Peloquin, R. E. Hanneman, Jr. // Theoretical and Applied Genetics. 1980. -V. 57.-P. 5-9.

62. Jones, M.D. Effect of tree barriers on outcrossing in corn. Oklahoma

63. Agricultural Experimental Station Текст. / M. D. Jones, J. S. Brooks // Technical Bulletin.-\952. No T-45.

64. Jones, M.D. Effectiveness of distance and border rows in preventing outcrossing in corn Текст. / M. D. Jones, J. S. Brooks; Oklahoma Agricultural Experimental Station, Technical Bulletin. -1950. -No. T-38.

65. Kapteijns, A.J. Risk assessment of genetically modified crops. Potential of Ф four arable crops to hybribize with the wild flora Текст. / A. J. Kapteijns //

66. Euphytica. -1993. -66. -P. 145-149.

67. Kapusta, G. Yield response of soybeans (Glycine max) to injury from t postemergence broadleaf herbicides Текст. / G. Kapusta, L. A. Jackson, D. S.

68. Mason// WeedSci.- 1986.-34.-P.304-307.

69. Kareiva, P. Can we use experiments and models in predicting the invasiveness of genetically engineered organisms? Текст. / P. Kareiva, I. M. Parker, M. Pascual II Ecology. -1996. -№77. -P. 1670-1675.

70. Kleppe, K. Studies on polynucleotides. Repair replication, of short synthetic DNAs as catalysed by DNA polymerase Текст. / К. Kleppe, E. Ohtsuku, R. Kleppe [et.all.] //J.Mol.Biol.-1971.-V.56.-P.341-361.

71. Klinger, Т. Engineered genes in wild populations: fitness of weed-crop hybrids of Raphanus sativus Текст. / Т. Klinger, N. С. Ellstrand // Ecological Application. -1994. -V. 4.-P.117-120.

72. Kovarova, M. New specificity and yield enhancer of polymerase chain reaction Текст. / M. Kovarova, P. Draber // Nucleic Acids Research. -2000.

73. Vol. 28.-No. 13.-P. 134-138.

74. Kuvshinov, V. Molecular control of transgene escape from genetically modified plants Текст. / V. Kuvshinov, K. Koivu, A. Kanerva, E. Pehu // Plant science. 2001. - V. 160. - P. 517-522.

75. Kwon, S. H. Studies on the diversity of seed weight in the Korean soybean land races and wild soybean Текст. / S. H. Kwon, К. H. Im, J. R. Kim. //ф Korean J Breed. -1972. -4. -P. 70-74.

76. Ladizinsky, G. Wild crosses in soybeans: Prospects and limitations Текст. / G. Ladizinsky, C. A. Newell, T. Hymowitz // Euphytica. -1979. -28. -P. 421423.

77. Langevin, S.A. The incidence and effects of hybridization between cultivated rice and its related weed red rice (Oryza sativa L.) Текст. / S.A. Langevin, K. Clay, J. Grace // Evolution. 1990. - V. 44. - P. 1000-1008.

78. Lee, D. Evaluating genetic containment strategies for transgenic plants Текст. / D. Lee, E. Natesan // Trends Biotechnol.-2006.-V. 24(3).-P. 109-114.

79. Lefol, E. Predicting hybridization between transgenic oilseed rape and wild• mustard Текст. / E. Lefol, V. Danielou, H. Darmency // Field Crops• Research.-1996.-V45.-P. 153-161.

80. Lopez-Perez, G.C. Dynamics of pesticides in potato crops Текст. / G.C. Lopez-Perez, M. Arias-Estevez, E. Lopez-Periago, B. Soto-Gonzalez, B. Cancho-Grande, J. Simal-Gandara // J Agrie Food Chem.-2006.-V.54(5).-P. 1797-1803.

81. Losey, J.E. Transgenic pollen harms monarch larvae Текст. / J. E. Losey, L. S. Rayor, M. E. Carter // Nature. 1999. -399. -P. 214.

82. Marshall, M.W. Weed community shifts associated with continuous glyphosate applications in corn and soybean rotation Текст. / M. W. Marshall, K. Al-Khatib, L. Maddux // Proc Western Soc Weed Sci.-2000.- 53.-P.22-25.

83. Messean, A. Impact du development des plantes transgeniques dans les systemes de culture: rapport final Текст. / A. Messean // Dossier. -B: Impact des plantes transgeniques-1999.-No. 96/15.

84. Meyer, R. Detection of genetically engineering plants the FLAVR SAVR tomato as an example Текст. / R. Meyer // Z.Lebensm.Unters.Forsch.-1995.-№201.-P.583-586 (German).

85. Meyer, R. Polimerase chain reaction (PCR) in the quality and safety assurance * of food: detection of soya in processed meat products Текст. / R. Meyer, F.

86. Chardonnens, P. Hubner, J. Luthy // Z.Lebensm.Unters.Forsch.-1996.-203.-P.339-344.

87. Meyer, R. Tierartbestimmung und Soyanachweis in erhitzten Fleischprodukten mittels der Polymerase Kettenreaktion Текст. / R. Meyer, U. Candrian, J. Lüthy // Mitt.Gebiete Lebensm.Hyg. -№199384. -P. 112-121.

88. Mikkelsen, T.R. The risk of crop transgene spread Текст. / T. R. Mikkelsen, B. Andersen, R. B. Jorgensen // Nature. 1996. - V. 380. - P. 31.

89. Mooney, S. Environmental concerns and risks of genetically modified crops: Economic contributions to the debate Текст. / S. Mooney, К. К. Klein // Canadian JAgric Econ. -2000. -47. -P.437-444.

90. Moschini, G. "Roundup Ready Soybeans and Welfare Effects in the Soybean Complex" Текст. / Moschini, G., H. Lapan and A. Sobolevsky // Agribusiness.-2000. -Vol. 16. -no.l. -P. 33-55.

91. Moyes, C. L. Gene flow from oilseed rape to Sinapis arvensis : variation at the population level Текст. / С. L. Moyes, J. Lilley, C. Casais, P. J. Dale // British Crop Protection Council. BCPC Symposium Proceedings. -1999. -№ 72. -P. 143-148.

92. Murray, M.G. Rapid isolation of high-molecular-weight plant DNA Текст. / M.G. Murray, W.F. Thompson // Nucl. Acids Res. -1980. -№8. -P. 4321-4325.

93. NAS (National Academy of Sciences). Genetically Modified Pest-Protected Plants: Science and Regulation Текст. -Washington, D.C. : Nat.Acad.Press.-2000.-V.1.

94. National Research Council. Genetically modified pest-protected plants: Science and regulation Текст. -Washington. DC: National Academy Press.2000.-V. 1-P. 81-93.

95. Owen, M.D.K. Current use of transgenic herbicide-resistant soybean and corn in the USA Текст. / M. D. К. Owen // CropProtection.- 2000.-19.-P.765-771.

96. Owen, M.D.K. World maize/soybean and herbicide resistance Текст. / M. D. К. Owen // In S. В. Powles and D. L. Shaner (eds.). Herbicide Resistance and World Grains. -CRC Press, Boca Raton, Florida. -2001. -P. 101-163.щ

97. Owen, M.D. Herbicide-resistant crops and weed resistance to herbicides Текст. / M.D. Owen, I.A. Zelaya // Pest Manag Sci. -2005 Mar. -№61(3). -P. 301-311.

98. Palmer R.G. Genetics and Cytology of Chromosome Inversions in Soybean Germplasm Текст. / R.G. Palmer, H. Sun, L.M. Zhao // Crop Sci. -2000. -V.40. -P.683-687.

99. Paterniani, E. Effective maize pollen dispersal in the field Текст. / E. Paterniani, A. C. Stort II Euphytic. 1974. -№23. -P. 129-134.

100. Peakall, R. A new technique for monitoring pollen flow in orchids Текст. / R. Peakall //Oecologia (Berl.) 1989. -V. 79. - P. 361-365.

101. Perry, L. Early maize agriculture and interzonal interaction in southern Peru Текст. / L. Perry, D.H. Sandweiss, D.R. Piperno, K. Rademaker, M.A. Malpass A. Umire, P. de la Vera // Nature.-2006.-V.440.-P.76-79.

102. Pietsch, К. Screeningverfahren zur Identifizierung "gentechnish veränderter" pflanzlicher Lebensmittel Текст. / К. Pietsch, H.U. Waiblinger, P. Brodman, A. Würz // Dtsch.Lebensm.Rundsch. -1997. -№93. -P.35-38.

103. Plaisted, R. L. Potato Текст. / R. L Plaisted // In: W. R Fehr, H. H Hadley; Hybridisation of crop plants. American Society of Agronomy, Madison .-1980. -P. 483-494.

104. Pleasants, J.M. Pollen deposition on milkweed leaves under natural conditions Текст. / J. M. Pleasants, R. L. Hellmich, L. C. Lewis // Presentation at the Monarch Butterfly Research Symposium. -Chicago, 1999.

105. Raybould, A.F. Genetically modified crops and hybridization with wild relatives: a UK perspective Текст. / A. F. Raybould, A. J. Gray // Journal of Applied Ecology. -1993. -№ 30. -P. 199-219.

106. Raynor, G.S. Dispersion and deposition of corn pollen from experimental sources Текст. / G. S. Raynor, E. C. Ogden, J. V. Hayes // Agron. J. 1972. -V. 64.-P. 420-427.

107. Rieseberg, L.H. Introgression and its consequences in plants. Hybrid zones and the evolutionary process (Harrison R. ed.) Текст. / L. H. Rieseberg, J. Wende. -London : Oxford University Press. 1993. -P. 70-102

108. Saiki, R.H. Enzymatic amplification of beta-globulin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of Sickle cell anemia Текст. / R.H. Saiki, S. Scharf, F. Faloona [et.all.] // Science. -1985. -V.230. -P.1350-1354.

109. Salamov, A.B. About isolation in corn Текст. / A. B. Salamov // (Russian translation by Michael Afanasiev in 1949). -Sel. I. Sem. -1940. P. 3.

110. SAP. Bt-Plant-pesticides risk and benefit assessments Текст. // Report No 2000-07.-March 12.-2001.

111. SAP. Gene Flow. Outcrossing questions Текст. // Report № 2000-07. March 12. -2001. http://www.epa.gov.

112. Schreiber, G.A. Foods produced by means genetic engineering, 2nd Status report Текст. / G.A. Schreiber, K.W. Bogl // Federal Institute for Health protection of consumers and veterinary medicine. -Berlin, 1997; BgVV Hefte 1.

113. Scientific Methods Workshop: Ecological and Agronomic Consequences of Gene Flow from Transgenic Crops to Wild Relatives Текст. -Meeting Proceedings, The Ohio State University, March 5, 6. 2002.

114. Scott, S. E. Transgene risk is low Текст. / S. E. Scott, M. J. Wilkinson // Nature. -1998. -№ 393. -P. 320.

115. Sears, M.K. Impact of Bt corn pollen on monarch butterfly populations Текст. / M. К. Sears, D. Stanley-Horn // In: C. Fairbairn, G. Scoles, A.

116. McHughen (Eds.) Proceedings of the 6th International Symposium on The

117. Biosafety of Genetically Modified Organisms. -Canada: University Entension Press, 2000.

118. Seiler, G.J. Utilization of wild sunflower species for the improvement of cultivated sunflower Текст. / G. J. Seiler // Field Crops Res. 1992. - V. 30. -P. 195-230.

119. Shirai, N. Safety assessment of genetically engineered food: detection and monitoring of glyphosate-tolerant soybean Текст. / N. Shirai, K. Momma, S. Ozawa [et.all.] // Biosci Biotechnol. Biochem. -1998. -№62(7). -P.l461-1464.

120. Singh, R.J. Intersubgeneric hybridization of soybeans with a wild perennial species, Glycine clandestina Wendl Текст. / R.J. Singh, K.P. Kollipara, T. Hymowitz// Theor. Appl. Genet. -1987. -V.74. -P. 391-396.

121. Singh, R.J. The genomic relationship between Glycine max (L.) Merr. And G.soja Sieb.and Zucc. as revealed by pachytene chromosome analysis Текст. / R.J. Singh, T. Hymowitz // Theor. Appl. Genet. -1988. -V.76. -P. 705-711.

122. Skvortzow, В. V. The soybean—wild and cultivated in Eastern Asia Текст. / В. V. Skvortzow // Proc Manchurian Res Soc. -Publ Ser A. Natural History Sect. -1972. -No. 22. -P. 1-8.

123. Sluyter, A. Early maize (Zea mays L.) cultivation in Mexico: dating sedimentary pollen records and its implications Текст. / A. Sluyter, G. Dominguez // Proc Natl Acad Sci U S A.-2006.-V. 103(4).-P. 1147-1151.

124. Snow, A. A. Fitness costs associated with transgenic glufosinate tolerance introgressed from Brassica napus ssp oleifera (oilseed rape) into weedy Brassica rapa Текст. / A. A. Snow, R. Jorgensen // In: Gene Flow and

125. Agriculture: Relevance for Transgenic Crops. -1999. -Lutman, P. (ed). BCPC

126. Symposium Proceedings No. 72.

127. Snow, A.A. Fecundity, phenology and seed dormancy of Fi wild-crop hybrids in sunflower (Helianthus annuus, Asteraceae) Текст. / A. A. Snow, P. Moran-Palma, L. H. Rieseberg, A. Wszelaki // Am. J. Bot. 1998. - V. 85. - P. 794801.

128. Steward, C.N. Increased fitness of transgenic insecticidal rapeseed under insect selection pressuse Текст. / С. N. Steward, J. N. All, P. L. Raymer, Ramachadrans // Mol. Ecol. 1997. - V. 6. - P. 773-779.

129. Stewart, C.N. Chloroplast transgenic plants are not a gene flow panacea Текст. / С. N. Stewart, С. S. Prakesh // Nat. Biotechnol. - 1998. - V. 16. - P. 401.

130. Studer, E. Quantitative competitive PCR for the detection of genetically modified soybean and maize Текст. / E. Studer, C. Rhuner, J. Ltithy, P. Hubner// Z.Lebensm.Unters.Forsch. -1998. -№207. -P.207-213.

131. Taylor, B. Isolation of plant DNA and RNA Текст. / Taylor В., Powell A. // BRL Focus 4(3). 1982. -P.4-6.

132. U.S.Department of Agricultural. Implications of Testing and Segregating Nonbiotech Crops for Grain Grades and Standarts Текст. / Economic Research Service, Economic Issues in Agric.Biotechnology // AIB-762.

133. USDA / APHIS. Petition 94-257-01 for determination of nonregulated status for Colorado potato beetle-resistant potato lines ВТ 6, ВТ 10, ВТ 12, ВТ 16,

134. ВТ 17, ВТ 18, ВТ 23 Текст. Environmental Assessment and Finding of No Significant Impact (March 2, 1995).

135. Weatherwax, P. Structure and development of reproductive organs Текст. / P. Weatherwax // In: Sprague, G. F. (ed.), Corn and corn improvement. -New York: Academic Press, 1955. -Chap. III. P. 89-121.

136. Weil, J.H. Are genetically modified plants useful and safe? Текст. / J.H. Weil // IUBMB Life. -2005. -Apr-May. -57(4-5). -P. 311-314.

137. White, T.J. The future of PCR technology: diversification of technologies and applications Текст. / T.J. White // Trends in Biotech.-1996.-14.-P.478-483.

138. Wilkes, H.G. Hybridisation of maize and teosinte, in Mexico and Guatemala and the improvement of maize Текст. / H. G. Wilkes // Economic Botany. -1977.-31.-P. 254-293.

139. Wilkinson, M. J. A direct regional scale estimate of transgene movement from GM oilseed rape to its wild progenitors Текст. / M. J. Wilkinson, J. Davenport., Y. M. Charters [et. all.] // Molecular Ecology. -2000. -№ 9. -P. 983-991.

140. Wozniak, C.A. Gene Flow assessment for Plant-Incorporated Protectants by the biopesticide and pollution prevention division, U. S. EPA Текст. / С. A. Wozniak // Gene Flow Workshop, The Ohio State University, March 5, 6, 2002.-P. 146-161.