Изучение тканеспецифической экспрессии сплайс-вариантов МРНК и IL-4 и IL-6 у мыши и человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.09, кандидат медицинских наук Яценко, Ольга Петровна

• Яценко, Ольга Петровна
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Яценко, Ольга Петровна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. АЛЬТЕРНАТИВНЫЙ СПЛАЙСИНГ - УНИВЕРСАЛЬНЫЙ МЕХАНИЗМ ФОРМИРОВАНИЯ РАЗНООБРАЗИЯ МАТРИЧНЫХ РНК.

1.1.1. Альтернативный сплайсинг - ключевое посттранскрипционное событие. Определение. Классификация.

1.1.2. Распространение альтернативного сплайсинга.

1.1.3. Значение альтернативного сплайсинга.

1.2. ХАРАКТЕРИСТИКА ИНТЕРЛЕЙКИНА-4 (1Ь-4) И РОЛЬ АЛЬТЕРНАТИВНОГО СПЛАЙСИНГА В ЭКСПРЕССИИ ЕГО ГЕНА.

1.2.1. Интерлейкин-4. Роль в регуляции иммунных реакций.

1.2.2. Характеристика белка 1Ь-4 и его гена.

1.2.3. Роль АС в экспрессии гена 1Ь-4.>.

1.2.4. Клиническое значение экспрессии изоформ 1Ь-4.

1.2.5. Рецептор 1Ь-4.

1.2.6.1Ь-4 у других видов.

1.3. ХАРАКТЕРИСТИКА ИНТЕРЛЕЙКИНА-6 (1Ь-6) И РОЛЬ АЛЬТЕРНАТИВНОГО СПЛАЙСИНГА В ЭКСПРЕССИИ ЕГО ГЕНА.

1.3.1. Роль 1Ь-6 в регуляции иммунных реакций.

1.3.2. Характеристика белка 1Ь-6.

1.3.3. Ген 1Ь-6 и регуляция экспрессии.

1.3.4. Рецептор 1Ь-6 (1Ь-6Я).

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Альтернативный сплайсинг гена 1Ь-4 у мышей.

3.2. Альтернативный сплайсинг гена 1Ь-6 у мышей.

3.3. Альтернативный сплайсинг гена 1Ь-4 у человека.

3.4. Альтернативный сплайсинг гена 1Ь-6 у человека.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение тканеспецифической экспрессии сплайс-вариантов МРНК и IL-4 и IL-6 у мыши и человека»

Актуальность исследования.

Общее количество генов, обнаруженное в геноме человека, в процессе выполнения проектов по секвенированию всего генома по разным подсчётам не превышает 30-40 тысяч, в то же время база экспрессирующихся последовательностей человека на порядок больше. Причины этого многообразия кроются в посттранскрипционных событиях. Одним из наиболее значимых посттранскрипционных событий является альтернативный сплайсинг. Альтернативный сплайсинг пре-мРНК, благодаря комбинированию порядка и количества экзонов, наряду с альтернативным полиаденилированием позволяют продуцировать' различные зрелые транскрипты от одного единственного гена без изменения его геномной организации. Белки, образующиеся вследствие трансляции альтернативно сплайсированных мРНК, могут выполнять как сходные, так и различные функции. Сплайсинг транскриптов некоторых генов может происходить по-разному в зависимости от типа ткани, стадии развития организма, пола [147]. Опубликовано много работ подтверждающих, что альтернативный сплайсинг представляет собой явление характерное именно для транскриптов генов цитокинов. Так, было продемонстрировано, что альтернативный сплайсинг вовлечен в процессинг пре-мРНК генов IL-lp, IL-la, IL-IRa, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-15, M-CSF, G-CSF, TGF-a, c-kit, LIF, SCF, FasL, онкостатина M, IL-2R, IL-4R, IL-5R IL-6R IL-9R GM-CSF эритропоэтина, некоторых хемокинов (VCAM) и т.д., приводя к образованию тканеспецифических изоформ различной локализации (мембрансвязанных, секреторных, внутриклеточных) и функции [143].

В этом отношении представляют интерес два иммунорегуляторных медиатора IL-4 и IL-6. Эти медиаторы имеют важное значение для регуляции многих клеточных процессов, в том числе гемопоэза и иммунопоэза на рйзных этапах онтогенетического развития [24, 95, 12, 27, 28, 102], и для этих медиаторов показано, что их экспрессия происходит с участием альтернативного сплайсинга [3, 61, 14]. Так, например, показано, что ген 1Ь-4 у человека экспрессируется в виде двух форм мРНК: полноразмерной формы, содержащей все 4 экзона и альтернативно сплайсированной, не содержащей экзона 2 мРНК, названной 1Ь-482 [3, 41, 109]. Установлено, что мРНК 1Ь-452 детектируется в различных типах иммунокомпетентных клеток [63]. Образование изоформ мРНК 1Ь-4 у взрослого человека имеет тканеспецифический характер: обычно мРНК 1Ь-452 обнаруживается в МНК ПК человека в минорных количествах [3], однако в ряде случаев в МНК ПК [3, 7], а также в клетках тимуса и бронхо-альвеолярного лаважа [7], клеточных линиях В95/8 и НЬ60 [63] обнаруживается преобладание мРНК 1Ь-452 над полноразмерной формой. Рекомбинантный человеческий белок 1Ь-452 (гЫЬ-452) способен связываться с рецептором 1Ь-4 и ингибировать действие гЫЬ-4 на иммунекомпетентные клетки [5, 7]. В то же время, в отношении фибробластов легких и кожи человека гЫЬ-482 выступает как агонист 1Ь-4 [8] Установлено, что при ряде патологических состояний изменяется соотношение полноразмерной - 1Ь-4 и альтернативной - 1Ь-482 форм мРНК [41, 104, 110, 109] что, по мнению авторов, может играть существенную роль в патогенезе этих заболеваний. Для гена 1Ь-6 показано существование у человека пяти сплайс-вариантов мРНК 1Ь-6: ЫЬ-6 мРНК, ЫЬ-баН мРНК, ЫЬ-6А2 мРНК, ЫЬ-6А2,4 мРНК и ЫЬ-6Д4 мРНК [14, 60]. Данных об их экспрессии мало, а сведения по биологической активности противоречивы. Только в двух альтернативных сплайс-вариантах мРНК -ЫЬ-6ак и ЫЬ-6Д4, как было показано, сохраняется рамка считывания. Остаётся невыясненным имеет ли сплайсинг мРНК генов 1Ь-4 и 1Ь-6 особенности в различных тканях на разных этапах онтогенеза и как их экспрессия может меняться под действием других регуляторных молекул.

В то же время систематизированные данные по тканеспецифической экспрессии сплайс-вариантов мРНК могут прояснить физиологическую роль альтернативных вариантов этих цитокинов.

При отсутствии антител способных специфически связывать изоформы или метода анализа мРНК in situ, который тоже может быть использован для оценки уровней экспрессии, оптимальным считается широко применяемый метод ОТ-ПЦР. Учитывая трудности получения образцов тканей от человека, представляется возможным в ряде экспериментов исследовать особенности экспрессии генов на животных. Исследование на животных моделях, является одним из эффективных подходов для понимания функциональной роли альтернативного сплайсинга генов в силу ряда преимуществ, поскольку позволяет исключить использование тканей человека и трудности связанные с их получением, сводит к минимуму внутривидовые вариации (при использовании инбредных линий животных), позволяет быстро получить выборку особых состояний и стандартизовать условия исследований. Оптимальной моделью для исследований в иммунологии является мышь, поскольку имеет значительное сходство с человеком в геномной организации иммунной системы. Использование мышиной модели допустимо для изучения спектра сплайс-вариантов мРНК, поскольку имеющиеся в литературе данные о механизмах сплайсинга, говорят о том, что он происходит однотипно у человека и мыши в случае некоторых мРНК интерлейкинов [124, 115]. В частности в работе Sorek R. and Ast G. было показано, что последовательности интронов, фланкирующих экзоны, предназначенные для регулирования сплайсинга, аналогичны у ¡мыши и человека [115]. Thanaraj ТА с соавт. показали, что более половины альтернативных сплайс-вариантов человека обнаружены и у мыши. Это говорит о высокой гомологии процесса альтернативного сплайсинга у человека и мыши. Следовательно, сравнительный анализ транскрибируемых последовательностей генов человека и мыши может быть полезен для изучения альтернативного сплайсинга [124]. Изучение тканеспецифического распределения различных сплайс-вариантов мРНК цитокинов в онтогенезе может во многом поменять наши взгляды на регуляцию иммунных и дифференцировочных процессов.

В связи с вышеизложенным актуальным представляется изучение роли альтернативного сплайсинга в экспрессии генов интерлейкина-4 и интерлейкина-6 как ключевых цитокинов в регуляции иммунных процессов. Цель и задачи исследования Цель работы

Поиск новых сплайс-вариантов мРНК IL-4 и IL-6 и изучение особенностей их экспрессии в разных тканях и на разных этапах онтогенеза у мыши и человека

Задачи исследования

1. Изучить экспрессию в клетках мышей сплайс-вариантов мРНК IL-4 и влияние митогенной стимуляции на уровень их транскрипции.

2. Исследовать тканеспецифичность в экспрессии сплайс-вариантов мРНК IL-4 на разных этапах онтогенеза мышей.

3. Выявить в клетках мышей сплайс-варианты мРНК IL-6 и изучить особенности их экспрессии в разных тканях и на разных этапах онтогенеза.

4. Изучить спектр сплайс-вариантов мРНК интерлейкина-4 в фетальных тканях человека и оценить уровень их экспрессии в тимусе, печени и селезёнке.

5. Исследовать влияние цитокинов in vitro на спектр экспрессируемых мРНК IL-4 в МНК периферической крови здоровых людей.

6. Изучить спектр сплайс-вариантов мРНК IL-6 в различных тканях человека.

Научная новизна работы

Впервые продемонстрировано наличие специфических мРНК IL-452, IL-653 и IL-685 в клетках мыши и выполнено систематизированное исследование экспрессии сплайс-вариантов мРНК IL-4 и IL-6 в различных тканях мыши. Установлено, что кинетика экспрессии сплайс-вариантов IL-4 при митогенной стимуляции аналогична в клетках мыши и человека. Впервые продемонстрирована экспрессия мРНК IL-4alt3 и мРНК IL-65284 в мононуклерных клетках человека. Доказан тканеспецифический характер экспрессии мРНК 1Ь-4 и 1Ь-6 в фетальных тканях человека. Теоретическая и практическая значимость работы.

В работе продемонстрировано, что экспрессия генов 1Ь-4 и 1Ь-6 в клетках человека и мышей происходит с участием альтернативного сплайсинга. При этом у мышей альтерантивно сплайсированные варианты мРНК этих генов экспрессируются как минорные варианты, а у человека наблюдается тканеспецифическая экспрессия сплайс-вариантов, которая имеет качественные и количественные различия. Полученные результаты расширяют представление об экспрессии генов цитокинов клетками различных органов и тканей, позволяют глубже понять взаимосвязи внутри цитокиновой сети и их взаиморегуляцию. В частности в период фетального развития человека экспрессия альтернативных сплайс-вариантов мРНК 1Ь-4 и 1Ь-6 может быть доминантной, что отражает особенности тканеспецифической регуляции гистогенеза. Представленные в работе факты экспрессии генов цитокинов в виде нескольких форм существенно дополняют представления о структуре и функционировании цитокиновой сети. Эти данные позволяют иначе взглянуть на организацию цитокин-опосредованных взаимодействий, поскольку механизм альтернативного сплайсинга также активно используется генами рецепторов 1Ь-4 и 1Ь-6. Из полученных данных можно сделать вывод о возможности непосредственного участия изоформ цитокинов в иммунорегуляции. Выяснение спектра экспрессии генов цитокинов в различных тканях также может быть полезным для определения роли изоформ в норме и патологии. Положения, выносимые на защиту:

1. Экспрессия генов 1Ь-4 и 1Ь-6 в клетках человека и мышей происходит с участием альтернативного сплайсинга, причем характер экспрессирующих последовательностей имеет как качественные, так и количественные различия.

2. Экспрессия мРНК IL-4 и IL-6 в клетках человека имеет тканеспецифический характер. Апробация материалов диссертации

Материалы диссертации доложены и обсуждены на: 1) Международной научно-практической школе-конференции «Цитокины. Воспаление. Иммунитет» (Новосибирск, 2002г.), 2) 6-й отчетной конференции ГУ НИИКИ СО РАМН (Новосибирск, 2003г.), 3) 7-ом Всероссийском научном форуме с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2003г.), 4) 8-ом Всероссийском научном форуме с международным участием имени В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2004г.), 5) Всероссийской научной конференции «Молекулярно-генетичекие основы функционирования цитокиновой сети в норме и при патологии» (Новосибирск, 2010г.), 6) Семинаре экспериментального отдела НИИ Клинической Иммунологии СО РАМН (Новосибирск, 2011г.). По теме диссертации опубликовано 14 работ, в том числе 4 статьи в журналах рекомендованных ВАК для кандидатских диссертаций. Самостоятельность выполненной работы

Результаты, представленные в данной работе, получены лично автором на базе лаборатории молекулярной иммунологии ГУ НИИ КИ СО РАМН и группы фармакогеномики ИХБФМ СО РАН, г. Новосибирск (руководитель к.б.н. М.Л. Филипенко).

Секвенирование неизвестных последовательностей полученных фрагментов ДНК было осуществлено сотрудниками группы фармакогеномики ИХБФМ СО РАН.

Автор выражает благодарность Самарину Д.М. (Лаб.Клеточных биотехнологий РЖИ СО РАМН) за любезно предоставленные для исследований образцы фетальных тканей человека.

Большую признательность автор выражает научному руководителю работы профессору, д.м.н. C.B. Сенникову и к.б.н. М.Л.Филипенко за конструктивные предложения по содержанию работы и подробное обсуждение полученных результатов, а также всем сотрудникам лаборатории молекулярной иммунологии НИИКИ СО РАМН и группы фармакогеномики ИХБФМ СО РАН за благожелательное отношение в ходе выполнения работы.

Заключение диссертации по теме «Клиническая иммунология, аллергология», Яценко, Ольга Петровна

ВЫВОДЫ

1. Показано, что в спленоцитах и мононуклеарных клетках костного мозга мышей ген интерлейкина-4 экспрессируется в виде двух форм мРНК: полноразмерной и альтернативно сплайсированной по 2 экзону.

2. Продемонстрировано, что в культуре спленоцитов, стимулированных Конканавалином А происходит индукция как мРНК ш1Ь-4, так и мРНК ш1Ь-482, причем максимальный уровень мРНК 1Ь-482 наблюдается через 3 часа после добавления КонА с последующим резким падением уровня экспрессии, а пик индукции мРНК т1Ь-4 наблюдается через 6 часов после начала стимуляции, и далее уровень мРНК постепенно снижается. Соотношение мРНК ш1Ь-4 / мРНК т1Ь-482 на пике индукции мРНК т1Ь-4 составляет 14:1.

3. Установлено, что ген 1Ь-6 экспрессируется в клетках мышей в виде трех форм матричных РНК: мРНК т1Ь-6, соответствующей полноразмерному белку интерлейкина-6, и двух альтернативных сплайс-вариантов, которые не обнаруживаются у человека, мРНК ш1Ь-6АЗ - с делецией экзона 3 и мРНК ш1Ь-6А5 - с делецией участка экзона 5.

4. Во всех исследованных образцах тканей мыши, как во взрослом состоянии, так и в фетальных тканях экспрессия альтернативно сплайсированных мРНК интерлейкина-4 и интерлейкина-6 носит минорный характер.

5. Продемонстрировано, что в фетальных тканях человека экспрессия гена интерлейкина-4 происходит с участием альтернативного сплайсинга и имеет качественные и количественные отличия в экспрессии мРНК 1Ь-4 и мРНК 1Ь-462, что отражает наличие тканеспецифичной регуляции альтернативного сплайсинга этого гена.

6. Обнаружен ранее не описанный у человека вариант мРНК интерлейкина-4 со сплайсированным участком третьего экзона 1Ь-4акЗ в мононуклеарных клетках, культивированных в присутствии гЫЬ-18.

7. Показано, что в мононуклеарных клетках человека экспрессируются мРНК 1Ь-6, мРНК 1Ь-682 и мРНК 1Ь-65254, ранее описанная только в клетках ткани легкого и фибробластах, причем после 6 часового культивирования мононуклеаров мРНК 1Ь-68254 не определяется.

8. Установлено, что в фетальных тканях человека экспрессия гена интерлейкина-6 происходит с участием альтернативного сплайсинга с образованием мРНК 1Ь-6, мРНК 1Ь-652 и мРНК 1Ь-65254 и имеет качественные и количественные отличия в разных тканях, что может говорить о тканеспецифической регуляции альтернативного сплайсинга этого гена.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Обобщая полученные результаты можно заключить, что экспрессия генов IL-4 и IL-6 в клетках человека и мышей происходит с участием альтернативного сплайсинга, причем характер экспрессирующих изоформ мРНК имеет как качественные, так и количественные различия. Так в стимулированных in vitro спленоцитах и мононуклеарных клетках костного мозга мышей ген интерлейкина-4 экспрессируется в виде двух форм мРНК: полноразмерной и альтернативно сплайсированной по 2 экзону, как и у человека. При изучении кинетики экспрессии изоформ этого гена в культуре спленоцитов стимулированных Конконавалином А наблюдается индукция как мРНК IL-4, так и мРНК IL-482, причем максимальный уровень мРНК IL-482 наблюдали через 3 часа после добавления КонА с последующим резким падением уровня экспрессии, а пик индукции мРНК mIL-4 наблюдался через 6 часов после начала стимуляции, и далее уровень мРНК постепенно снижался. Но на этом общие моменты в регуляции экспрессии этого гена с участием альтернативного сплайсинга заканчиваются. Экспрессия мРНК mIL-482 носит минорный характер не только в спленоцитах и клетках костного мозга, но и в различных тканях мышей, в т.ч. фетальных, что не позволяет говорить о тканеспецифической регуляции альтернативного сплайсинга этого гена. При изучении экспрессии гена IL-6 в клетках мышей показаны три формы матричных РНК, мРНК mIL-б, соответствующая полноразмерному белку интерлейкина-6, и два сплайс-варианта, аналоги которых не обнаруживаются у человека: мРНК mIL-бДЗ - с делецией экзона 3 и мРНК mIL-6A5 - с делецией участка экзона 5. Таким образом, альтернативный сплайсинг гена IL-6 у мышей происходит иначе. Также при изучении их экспрессии в разных тканях, в том числе фетальных, установлено, что экспрессия изоформ мРНК IL-6 у мышей носит минорный характер, что также не позволяет говорить о тканеспецифической регуляции альтернативного сплайсинга этого гена. Наиболее интересные данные об участии альтернативного сплайсинга в экспрессии генов 1Ь-4 и 1Ь-6 обнаружены в клетках человека, что позволяет говорить об их возможном участии в регуляции иммунных процессов. Так, в отличие от мышей, в фетальных тканях человека экспрессия гена интерлейкина-4 происходит с участием альтернативного сплайсинга и имеет тканеспецифический характер, поскольку в некоторых тканях обнаруживался только полноразмерный вариант мРНК ИЛ-4 (в образцах тканей сердечной мышцы и лёгкого), в других - только альтернативный, мРНК 1Ь-482 (в образцах тканей ребра и скелетной мышцы), в третьей группе (образцы тканей яичника и мозга) - оба сплайс-варианта матричных РНК интерлейкина-4. Кроме того, в фетальных тканях, имеющих непосредственное отношение к гемопоэзу и иммунопоэзу (тимус, печень, селезёнка) количественно охарактеризован уровень матричных РНК 1Ь-4 и 1Ь-482. Показано, что экспрессия полноразмерного варианта в тимусе в среднем на 1-2 порядка выше, чем в печени и селезёнке. Количественный анализ мРНК 1Ь-482 показал, что в печени его в среднем в 2-5 раз больше чем в селезёнке или тимусе. В то же время в тимусе у эмбрионов мРНК 1Ь-482 даже чуть больше, чем в селезёнке. Эти данные позволяют говорить о тканеспецифической регуляции альтернативного сплайсинга гена 1Ь-4 и предполагать о возможном регуляторном влиянии этих изоформ, учитывая тот факт, что их биологические эффекты на функциональную активность клеток могут носить различный характер. Также представляют определенный интерес и тот факт, что у 2 из 5 доноров в клетках, культивированных в присутствии гЫЬ-18, был обнаружен дополнительный фрагмент кДНК соответствующий не описанной ранее у человека формы матричной РНК интерлейкина-4 со сплайсированным третьим экзоном 1Ь-4акЗ (215 п.о.), что подтверждено прямым секвенированием. Эти данные говорят о том, что иммунорегуляторные молекулы (в частности 1Ь-18) могут влиять на альтернативный сплайсинг гена 1Ь-4. Для гена 1Ь-6 человека также получен ряд интересных данных, говорящих в пользу возможного участия изоформ этого цитокина в регуляции. В частности показано, что в фетальных тканях человека экспрессия гена интерлейкина-6 происходит с участием альтернативного сплайсинга с образованием мРНК 1Ь-6, мРНК 1Ь-652 и мРНК 1Ь-65284, уровень экспрессии которых имеет качественные отличия. Кроме того, в мононуклеарных клетках человека были обнаружены мРНК 1Ь-6, мРНК 1Ь-682 и мРНК 1Ь-68284, причём последняя ранее обнаруживалась только в клетках ткани легкого и фибробластах. В процессе культивирования МНК ПК человека происходит изменение спектра экспрессируемых сплайс-вариантов матричных РНК интерлейкина-6: изоформа мРНК 1Ь-68254 (373 п.о.) исчезает.

Исходя из полученных данных о том, что экспрессия генов интерлейкина-4 и интерлейкина-6 у человека в разных тканях происходит с участием альтернативного сплайсинга, качественно и количественно различается в разных тканях, можно говорить о тканеспецифической регуляции альтернативного сплайсинга и о возможных тканеспецифических эффектах продуктов этих генов, имеющих важное значение в онтогенетическом становлении иммунной системы и других систем в организме.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Яценко, Ольга Петровна, 2011 год

1. Abe Е., de Waal Malefyt R., Matsuda I., Arai K., Arai N. An 11-base-pair DNA sequence motif apparently unique to the human interleukin 4 gene confers responsiveness to T-cell activation signals // Proc Natl Acad Sci USA. -1992. -V. 89(7). -P. 2864-2868.

2. Akashi K., Richie L.I., Miyamoto Т., Carr W.H., Weissman I.L. В lymphopoiesis in the thymus // J Immunol. -2000. -V. 164(10). -P. 52215226.

3. Akira S., Taga Т., Kishimoto T. Interleukin-6 in biology and medicine //Adv Immunol. -1993. -V. 54. -P. 1-78.

4. Alms WJ, Atamas SP, Yurovsky W Wite В Generation of variant of human interleukin-4 by alternative splicing// Mol Immunol. -1996. -V. 33.(4/5). -P. 361-370.

5. Atamas S.P., White B. Interleukin-4 in systemic sclerosis: not just an increase // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. -1999.,-P. 658-659.

6. Atamas S.P., Choi J., Yurovsky V.V., Wite B. An alternative splice variant of human IL-4, IL-4delta 2, inhibits IL-4-stimulated T cell proliferation // J Imimmol. -1996. -V. 156(2). -P. 435-441.

7. Banchereau J., Rousset F. Functions of interleukin-4 on human B lymphocytes // Immunol Res. -1991. -V. 10. -P. 423-427.

8. Basu A. The potential of protein kinase C as a target for anticancer treatment. // Pharmac.Ther. -1993. -V.59. -P. 257-280.

9. BihI M.P., Heinimann Rudiger J.J., Eickelberg O., Perruchoud A.P., Tamm M., Roth M. Identificdtion of a novel IL-6 isoform binding to the endogenous IL-6 receptor // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. -2002. -V.27. -P. 48-56.

10. Blum H., Wolf M., Enssle K. Rollinghoff M., Gessner A. Two distinct stimulus-dependent pathways lead to the production of soluble murine interleukin-4 receptor//J Immunol. -1996. -V.157(5). -P. 1846-1853.

11. Boue S., Letunik I., Bork P. Alternative splicing and evolution // BioEssays. -2003.-V. 25.-P. 1031-1034.

12. Boulay J.L., Paul W.E. The interleukin-4 family of lymphokines // Curr Opin Immunol. -1992. -V. 4(3). -P.294-298.

13. Boyum A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow. Introduction // Scand J Clin Lab Invest Suppl. -1968. -V.97. -P.7.

14. Brakenhoff J.P., de Hon F.D., Fontaine V., ten Boekel E., Schooltink H., Rose-John S., Heinrich P.C., Content J., Aarden L.A. Development of a human interleukin-6 receptor antagonist // J Biol Chem. -1994. V. 269(1). -P. 86-93.

15. Chen R., Lewis K.A., Perrin M.H., Vale W.W. Expression cloning of human corticotrophin-releasing-factor receptor // Proc Natl Acad Sci USA. -1993. -V.90. -P. 8967-8971.

16. Chilton P.M., Fernandez-Botran R. Regulation of the expression of the soluble and membrane forms of the murine IL-4 receptor // Cell Immunol. -1997. -V. 180(2).-P. 104-115.

17. Chomarat P., Banchereau J. An update on interleukin-4 and its receptor // Eur Cytokine Netw. -1997. -V. 8. -P. 333-344.

18. Chomozynski P., Sacchi N. Singl-step method of RNA isolation by acid guanidinum thiocyanate-phenol-chlorophorm extraction // Anal Biocem. -1987.-V. 162(1). -P. 156-159.

19. Chrousos G.P., Torpyy D.J., Gold P.W. Interactions between the hypothalamic-pituitary-adrenal axis and the female reproductive system: clinical implication // Ann Intern Mad. -1998. -V.129. -P. 229-240.

20. Defrance T., Vanbervliet B., Aubry J.P., Takebe Y., Arai N. B cell growth-promoting activity of recombinant human interleukin 4 // J Immunol. -1987. -V. 139. -P. 1135-1141.

21. Deichmann K., Bardutzky J., Forster J., Heinzmann A., Kuehr J. Common polymorphisms in the coding part of the IL4-receptor gene // Biochem Biophys Res Commun. -1997. -V. 231. -P. 696-697.

22. J2.Demartis A., Bernassola F., Savino R., Melino G., Ciliberto G. Interleukin 6 receptor superantagonists are potent inducers of human multiple myeloma cell death // Cancer Res. -1996. -V. 56(18). -P. 4213-4218.

23. Dinarello C.A. Targeting interleukin 18 with interleukin 18 binding protein // Ann Rheum Dis. -2000. -V. 59(1). -P. 17-20.

24. Douay L., Giarratana M.C., Mary J.Y., Gorin N.C. Interleukin 2 interacts with myeloid growth factors in serum-free long-term bone marrow culture // Br J Haematol. -1994. -V.86(3). -P. 475-482.

25. Doucet C., Brouty-Boye D., Pottin-Clemenceau C., Jasmin C., Canonica

26. G.W., Azzarone B. IL-4 and IL-13 specifically increase adhesion molecule and inflammatory cytokine expression in human lung fibroblasts // Int Immunol. -1998. -V. 10. -P. 1421-1433.

27. Ehlers M., de Hon F.D., Bos H.K., Horsten U., Kurapkat G., van De Leur

28. Galizzi J.P., Zuber C.E., Harada N., Gorman D.M., Djossou O., Kastelein R., Banchereau J., Howard M., Miyajima A. Molecular cloning of a cDNA encoding the human interleukin 4 receptor // Int Immunol. -1990. -V. 2(7). -P. 669-675.

29. Glare E.M., Divjak M., Rolland J.M., Walters E.H. Asthmatic airway biopsy specimens are more likely tu express the IL-4 alternative splice variant IL-482 // J Allergy Clin Immunol. -1999. -V. 104. -P. 978-982.

30. Granzier H.L., Labeit S. The giant protein titin: a major player in myocardial mechanics, signaling, and disease // Circ Res. -2004. -V. 94. -P. 284-295.

31. Harauz G., Ladizhansky V., and Boggs J. M.Structural polymorphism and multifunctionality of myelin basic protein // Biochemistry. -2009. -V. 48. -P. 8094—8104.

32. Henkel G., Weiss D.L., McCoy R., Deloughery T., Tara D., Brown M.A. A DNase I-hypersensitive site in the second intron of the murine IL-4 gene defines a mast cell-specific enhancer // J Immunol. -1992. -V. 149(10). -P.3239-3246.

33. Herbert J.M., Savi P., Laplace M.C., Lale A. IL-4 inhibits LPS-, IL-1 beta-and TNF alpha-induced expression of tissue factor in endothelial cells and monocytes // FEBS Lett. -1992. -V. 310. -P. 31-33.

34. Honda M., Yamamoto S., Cheng M., Yasukawa K., Suzuki H., Saito T., Osugi Y., Tokunaga T., Kishimoto T. Human soluble IL-6 receptor: its detection and enhanced release by HIV infection // J Immunol. -1992. -V. 148. -P. 21752180.

35. Howard M., Farrar J., Hilfiker M., Johnson B., Takatsu K., Hamaoka T., Paul W.E. Identifikation of a T cell-derived cell growth factor distinct from interleukin-2 //J Exp Med. -1982. -V. 155. -P. 914-923.

36. Jones S.A., Horiuchi S., Topley N., Yamamoto N., Fuller G.M. The soluble interleukin 6 receptor: mechanisms of production and implications in disease // FASEB J. -2001. -V. 15(1). -P. 43-58.

37. Jung T., Wagner K., Neumann C., Heusser C.N. Enhancment of human IL-4 activity by soluble IL-4 receptor in vitro // Eur J Immunol. -1999. -V. 29. -P. 864-871.

38. Keller E.T. , Wanagat J., Ershler W.B. Molecular and cellular biology of interleukin-6 and its receptor // Frontiers in Biosciens. -1996. -V.l. -P. 340357.

39. Kestler D.P, Agarwal S., Cobb J., Goldstein KM, Hall R. Detection and analysis of an alternatively spliced isoform of interleukin-6 mRNA in Peripheral blood mononuclear cells // Blood. -1995. -V. 86(12). -P. 45594567.

40. Klein S.C., Golverdingen J.G., van Wichen D.F., Bouwens A.G., Stuij I., Tilanus M.G., Bast E.J., de Weger R.A. Expression of two Interleukin-4 mRNA isoforms in B lymphoid Cells // Cell. Immunol. -1996. -V.167. -P. 259-268.

41. Kruse N., Lehrnbecher T., Sebald W. Site-directed mutagenesis reveals the importance of disulfide bridges and aromatic residues for structure and proliferative activity of human interleukin-4 // FEBS Lett. -1991. -V. 286(1-2). -P. 58-60.

42. Kruse S., Forster J., Kuehr J., Deichmann K.A. Characterization of the membrane-bound and a soluble form of human IL-4 receptor a produced by alternative splicing // Int Immunol. -1999. -V. 11(12). -P. 1965-1969.

43. Kumar G., Gupta S., Wang S., Nel A.E. Involvement of Janus kinases, p52shc, Raf-1, and MEK-1 in the IL-6-induced mitogen-activated protein kinase cascade of a growth-responsive B cell line // J Immunol. -1994. -V. 153(10). -P.4436-4447.

44. Lahmers S., Wu Y., Call D.R.,Labert S., Granzier H. Developmental control of titin isoform expression and passive stiffness in fetal and neonatal myocardium // Circ Res. -2004. -V.94. -P. 505-513.

45. Ledru E., Fevrier M., Lecoeur H., Garcia S., Boullier S., Gougeon M-L. A nonsecreted variant of interleukin-4 is associated with apoptosis: implication for the T helper-2 polarization in HIV infection // Blood. -2003. -V. 101. -P. 3102-3105.

46. Liaw C.W., Lovenberg T.W., Barry G., Oltersdorf T., Grigoriadis D.E., de Souza E.B. Cloning and characterization of the human corticotrophin-releasing-factor-2 receptor complementary deoxyribonucleic acid // Endocrinology. -1995. -V. 137(1). -P. 72-77.

47. Li-Weber M., Eder A., Krafft-Czepa H., Krammer P.H. T cell-specific negative regulation of transcription of the human cytokine IL-4 // J Immunol. -1992.-V. 148(6).-P. 1913-1918.

48. Li-Weber M., Krafft H., Krammer P.H. A novel enhancer element in the human IL-4 promoter is suppressed by a position-independent silencer // J Immunol. -1993. -V. 151(3). -P. 1371-1382.

49. Lo D., Sprent J. Exogenous control of I-A expression in fetal thymus explants // J Immunol. -1986. -V. 137(6). -P. 1772-1775.

50. Maniatis T. Mechanisms of alternative pre-mRNA splicing // Science. -1991. V. 251.-P. 33-34.

51. McDonald N. Q., Panayotatos N., Hendrickson W. A. Crystal structure of dimeric human ciliary neurotrophic factor determined by MAD phasing // EMBO J. -1995. -V.14. -P. 2689-2699.

52. Mercatante D.R., Kole R. Control of alternative splicing by antisense oligonucleotides as a potential chemotherapy, effects on gene expression // Biochim Biophys Acta. -2002. -V.1587. -P. 126-132.

53. Metcalf D., Moore M.A. Haemopoietic Cell // North-Holland Publ. Co. Amsterdam. -1971.

54. Mitchell L.C., Davis L.S., Lipsky P.E. Promotion of human T lymphocyte proliferation by IL-4 // J Immunol. -1989. -V. 142. -P. 1548-1557.

55. Modrek B., Lee C. J. Alternative splicing in the human,mouse and rat genomies is assotiated with an increased frequency of exon creation and/or lossy // Nature genetics. -2003. -V.34(2). -P. 177-180.

56. Mullberg J., Schooltink H., Stoyan T., Heinrich P. C., Rose-John, S. Protein kinase C activity is rate limiting for the shedding of the interleukin-6 receptor // Biochem Biophys Res Commun. -1992. -V. 189. -P. 794-800.

57. Murakami M., Hibi M., Nakagawa N., Nakagawa T., Yasukawa K., Yamanishi K., Taga T., Kishimoto T. IL-6-induced homodimerization of gpl30 and associated activation of a tyrosine kinase // Science. -1993. -V. 260(5115). -P.1808-1810.

58. Murata T., Obiri N.I., Puri R.K. Structure of and signal transduction through interleukin-4 and interleukin-13 receptors // Int J Mol Med. -1998. -V.l. -P. 551-557.

59. Naka T., Nishimoto N., Kishimoto T. The paradigm of IL-6:from basic science to medicine // Arthritis Res. -2002. -V.4(3). -P. 233-242.

60. Nishizuka Y. The molecular geterogeneity of protein kinase C and its implications for cellular regulation//Nature. -1988. -V. 334. -P. 661-665.

61. Noguchi M., Adelstein S., Cao X., Leonard W.J. Characterization of the human interleukin-2 receptor gamma chain gene // J Biol Chem. -1993. -V. 268(18). -P. 13601-13608.

62. Novick D., Engelmann H., Wallach D., Rubinstein M. Soluble cytokine receptors are present in normal human urine // J Exp Med. -1989. -V. 170. -P. 1409-1414.

63. Owens J.J., Nemeroff C.B. Physiology and pharmacology of corticotrophin-releasing-factor // Pharmacol Rev. -1991. -V.43. -P. 425-473.

64. Pannonen J., Aversa G.G., Vandekerckhove B., Roncarolo M.G., de Vries J.E. Induction of isotype switching and Ig production by CD5+ and CD 10+ human fetal B cells // J Immunol. -1992. -V. 148(11). -P. 3398-3404.

65. Paul W.E. Interleukin-4: prototypic immunoregulatory lymphokine // Blood. -1991.-V. 77.-P. 1859-1870.

66. Perkins H.D., van Leeuwen B.H., Hardy C.M., Kerr P.J. The complete cDNA sequences of IL-2, IL-4, IL-6 AND IL-10 from the European rabbit (Oryctolagus cuniculus) // Cytokine. -2000. -V. 12(6). -P.555-565.

67. Powers R., Garrett D.S., March C.J., Frieden E.A., Gronenborn A.M., Clore G.M. Three-dimensional solution structure of human interleukin-4 by multidimensional heteronuclear magnetic resonance spectroscopy // Science. -1992 -V. 256(5064). -P. 1673-1677.

68. Prinz M., Hanusch Y.K., Kettenmann H., Kirchhoff F. Alternative splicing of mouse IL-15 is due to the use of an internal splice site in exon 5 // Mol Brain Res.-1998.-V. 63(1). -P. 155-162.

69. Pritchard M.A., Baker E., Whitmore S.A, et al. The interleukin-4 receptor gene (IL-4Ra) maps to 16pl 1.2.pl2.1 in the human and to the distal region of mouse chromosome 7 // Genomics. -1991. -V. 10. -P.801-806.

70. Renne C., Kallen K.J., Miillberg J., Jostock T., Grotzinger J., Rose-John S. A new type of cytokine receptor antagonist directly targeting gpl30 // J Biol Chem. -1998. -V.273(42). -P.27213-27219.

71. Ryan D.H., Nuccie B.L., Ritterman I., Liesveld J.L., Abboud C.N. Cytokine regulation of early human lymphopoiesis // J Immunol. -1994. -V. 152. -P. 5250-5258.

72. Saito M., Yoshida K., Hibi M., Taga T., Kishimoto T. Molecular cloning of a murine IL-6 receptor-associated signal transducer, gpl30, and its regulated expression in vivo//J Immunol. -1992. -V.148(12):4066-71

73. Sato TA, Widmer MB, Finkelman FD, Madani H, Jafcobs CA, Grabstein KH, Maliszewski CR. Recombinant soluble murine IL-4 receptor can inhibit or enhance IgE responses in vivo // J Immunol. -1993. -V. 150(7). rP. 27172723.

74. Schooltink H., Stoyan T.,Lenz D.,Schmitz H., Hirano T., Kishimoto Henrich P and Rose-John Structural and functional studies of the human hepatic interleukin-6 receptor// Biocem J. -1991. -V. 277. -P.659-664.

75. Seah G.T., Gao P.S., Hopkin J.M., Rook G.A. Interleukin-4 and its alternatively spliced variant (IL-452) in patients with atopic asthma // Am J Respir Crit Care Med. -2001. -V.164. -P. 1016-1018.

76. Seah G.T., Scott G.M., Rook G.A. Type 2 cytokine gene activation and relationship to extend of disease in patients with tuberculosis // J Infect Dis. -2000. -V.181. -P. 385-389.

77. Settmacher U., Volk H.D., von Baehr R., Wolff H., Jahn S. In vitro stimulation of human fetal lymphocytes by mitogens and interleukins //Immunol Lett. -1993. -V. 35(2). -P. 147-152.

78. Shanafelt A.B., Forte C.P., Kasper J.J., Sanchez-Pescador L., Wetzel M., Gundel R., Greve J.M. An immune cell-selective interleukin 4 agonist // Proc Natl Acad Sci USA. -1998. -V.95(16). -P.9454-9458.

79. Shapira S.K., Vercelli D., Jabara H.H., Fu S.M., Geha R.S. Molecular analysis of the induction of immunoglobulin E synthesis in human B cells by interleukin 4 and engagement of CD40 antigen // J Exp Med. -1992. -V. 175. -P. 289-292.

80. Smith C.W., Pattern J.G., Nadal-Ginard B. Alternative splicing control gene expression. //Annu Rev Genet. -1989. -V. 23. -P.527-577.

81. Sorek R., Ast G. Intronic Sequences Flanking Alternatively Spliced Exons Are Conserved Between Human and Mouse // Genome Res. -2003. -V.13(7). -P. 1631-1637.

82. Sorek R., Shamir R., Ast G. How prevalent is functional alternative splicing in the human genome? // Trends in Genetics. -2004. -V. 20(2). -P. 68-71.

83. Sorg R.V., Enczman J., Sorg U.R., Schneider E.M., Wernet P. Identification of en alternatively spliced transcript of human interleukin-4 lacking the sequence encoded by exon 2 // Exp Hematol. -1993. -V.21(4). -P.560-563.

84. Taga T., Hibi M., Hirata Y., Yamasaki K., Yasukawa K., Matsuda T., Hirano T., Kishimoto T. Interleukin-6 triggers the association of its receptor with a possible signal transducer, gpl30 // Cell. -1989. -V.58(3). -P.573-581.

85. Tavernier J., Tuypens T., Plaetinck G., Verhee A., Fiers W., Devos R., Molecular basis of the membrane-anchored and two soluble isoforms of the human interleukin 5 receptor alfa subunit // Proc Natl Acad Sci USA. 1992. -V.89(15). -P. 7041-7045.

86. Taylor S.L., Renshaw B.R., Garka K.E., Smith D.E., Sims J.E. Genomic organization of the interleukin-1 locus // Genomics. -2002. -V.79(5). -P.726-733.

87. Thanaraj T.A., Stamm S. Prediction and statistical analysis of alternatively spliced exons // Prog Mol Subcell Biol. -2003. -V.31. -P. 1-31.

88. Thanaraj T.A., Clark F., Muilu J. Conservation of human alternative splice events in mouse // Nucleic Acids Res. -2003. -V.31(10). -P.2544-2552.

89. Webster E.L., Torpy D.J., Elenkov I.J., Chrousos G.P. Corticotropin-releasing gormone and nflammation // Ann NY Acad Sci. -1998 -V.840. -P. 21-32.

90. Weissbach L., Tran K., Colquhoun S.A.,Champliaud M.F.,Towle C.A. Detection of an interleukin-1 intracellular receptor antagonist mRNA variant // Biochem Biophys Res Commun. -1998. -V.244(l). -P.91-95.

91. Wrighton N., Campbell L.A., Harada N., Miyajima A., LeeF. The murine interleukin-4 receptorgene: genomic structure, expression and potential for alternative splicing // Growth Factors. -1992. -V.6(2). -P. 103-118.

92. Yamasaki K., Taga T., Hyrata Y., Yawata H., Kawanzihi Y., Seed B., Taniguchi T., Hirano T., Kishimoto T. Cloning and expression of the human interleukin-6 (BSF-2/IFNp2) receptor// Science. -1998. -V.241. -P.825-828.

93. Zhang J-L. , Foster D., Sebald W. Human IL-21 and IL-4 bind to partially overlapping epitopes of common y-chain // Biochem And Biophys Res Communication. -2003. -V. 300. -P.291-296.

94. Zhang J-L., Simenova I., Wang Y., Sebald W. The higt-affinity interaction of human IL-4 and the receptor a chain is constituted by two independent binding clusters // J Mol Biol. -2002. -V.315. -P. 399-407.

95. Zou J., Bird S., Truckle J., Bols N., Home M., Secombes C. Identification and expression analysis of an IL-18 homologue and its alternatively spliced form in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) // Eur J Biochem. -2004. -V.271(10). -P.1913-1923.

96. Андреев С. M., Башкатова Ю. Н., Петрухина А. О., Дубинкин И. В., Васильев А. М., Абрамов В. М., Хлебников В. С., Куликова Н. Д., Хаитов М. P. IL-482 человека: структура и количественный анализ // Иммунология №1. -2010. -С. 18-25.

97. Маниатис Т., Фрич Э. и Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование // М.: Мир. -1984.-С.480.

98. Свердлов Е.Д. Микрокосм генома // Молекулярная биология. -1999. Т. 33(6). -С. 917-940.

99. Сенников C.B., Силков А.Н., Козлов В.А. Роль альтернативного сплайсинга генов цитокинов в формировании полиморфной структуры цитокиновой сети // Мед Иммунол. -2001. -Т.З(З). -С.389-400.

100. Силков А.Н., Гавриленко В.А., Денисова В.В., Гришина JI.B., Козлов В.А., Сенников C.B. Двойственность эффектов рекомбинантного IL-4Ô2 на мононуклеарные клетки периферической крови человека // БЭБМ -2007. -Том. 143(1). -С.78-80.

101. Силков А.Н., Инжелевская Т.В., Крысов C.B., Сенников C.B., Козлов В.А. Экспрессия сплайс-вариантов мРНК генов IL-4 и IL-6 в эритроидных клетках человека // Бюллетень СО РАМН. -2007. -Т.4(126). -С. 129-131.

102. Силков А.Н. Экспрессия сплайс-вариантов мРНК гена IL-4 в мононуклеарных и эритроидных клетках человека и функциональная характеристика рекомбинантного IL-452 Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук, 2005 г.

103. Сингер М., Берг П. Гены и геномы. В 2-х т. Пер. с англ. -М.: Мир. -1998. Т. 2. -С. 104-125.