Изучение свойств трансгенных растений рапса (Brassica napus L.) со встроенным геном OSMYB4 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.05, кандидат биологических наук Айман Мохамед Эль Саед Гомаа

• Айман Мохамед Эль Саед Гомаа
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Айман Мохамед Эль Саед Гомаа

ВВЕДЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ГЛАВА II ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Систематика и происхождение, ботаническое описание и.особенности, биологии рапса.

Г.2.Общие представления о механизмах устойчивости растений к неблагоприятным факторам:.

1.3. Современные представления о повреиздающем действии холода и механизмах адаптации растений к низкотемпературному стрессу.

1.3.1. Повышение текучести клеточных мембран при холодовом стрессе.

1.3.2. Аккумуляция в растениях совместимых осмолитов при действии пониженных температур.

1.3.2.1. Аккумуляция углеводов.

1.3.2.2. Аккумуляция пролина в ответ на гипотермию.

1.3.3. Окислительный стресс и антиоксидантная система.

1.3.3.1. Ферменты антиоксидантного комплекса.

1.3.3.2. Неферментативные антиоксиданты.

1.3.3.3. Аккумуляция фенольных соединений и антоцианов под действием охлаждения.

1.3.3.4. Синтез фенилпропаноидов.

1.4. Регуляция экспрессии генов в процессе холодовой адаптации.

1.4.1. Стрессорные белки.

1.5. Факторы транскрипции.

1.5.1. Гены транс-факторов, регулируемые низкотемпературным стрессом.

1.5.2. Гены транс-факторов МУВ семейства.

1.5.3. Характеристика и классификация факторов транскрипции МУВ семейства.

1.5.4. Многофункциональность растительных факторов транскрипции МУВ.

1.5.5. Участие факторов транскрипции МУВ типа в стрессорных ответах.

1.5.6. МУВ трансфакторы вовлечены в регуляцию фенилпропаноидного биосинтетического пути.

1.5.7. Тканеспецифичная регуляция туЬ-телов.

1.6. Получение трансгенных холодустойчивых растений с использованием генов транскрипционных факторов.

ГЛАВА П. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

П.1. Реактивы, использованные в работе.

11.2. Растительный материал.

11.3. Среды для культивирования растений.

П.4. Выращивание растений рапса.

П.4.1. Выращивание растений рапса в условиях in vitro.

11.4.2. Выращивание растений рапса в водной культуре.

11.4.3. Выращивание растений из семян.

11.4.4. Условия роста при холодовой адаптации.

11.4.5. Условия роста в опытах по промораживанию растений.

11.5. Биометрические исследования растений.

II.5.1. Измерение биомассы и содержания воды.

11.6. Биохимическое исследование растений.

11.6.1. Определение содержания Сахаров.

11.6.2. Определение содержания МДА.

11.6.3. Определение активности СОД.

11.6.4. Определение активности пероксидазы.

11.6.5. Определение эндогенного содержания пролина.

11.6.6. Определение содержания растворимых общих фенолов.

11.6.7. Определение содержания флавоноидов.

11.6.8. Определение содержания антоцианов.

И.6.9. Определение содержания белка.

И.6.10. Определение холодоустойчивости растений по выходу электролитов.

11.7. Молекулярный анализ трансформированных растений-потомков.

11.7.1. Описание конструкции, использованной для трансформации растений рапса.

11.7.2. Трансформация растений.

И.7.3. Выделение тотальной ДНК.

11.7.4. Подбор праймеров для полимеразной цепной реакции.

11.7.5. Полимеразная цепная реакция.

11.7.6. Электрофорез в агарозном геле.

11.7.7. Выделение тотальной РНК.

11.7.8. Электрофорез РНК в агарозном геле.

11.7.9. Синтез кДНК.

11.8. Математическая обработка данных.

ГЛАВА Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ.

Ш.1. Наследование трансгена Osmyb4 в процессе генеративного развития растений рапса и регуляция его экспрессии при гипотермии.

Ш.2. Трансгенные растения рапса с геном Osmyb4 обнаруживают большую холодоустойчивость по сравнению с исходной формой.

1П.2.1. Накопление сырой биомассы и оводнённость растений.

Ш.2.2. Накопление МДА.

Ш.З. Аккумуляция совместимых осмолитов трансгенными растениями рапса при гипотермии.

Ш.З .1. Аккумуляция растворимых сахаров растениями рапса.

Ш.З .2. Аккумуляция свободного пролина.

Ш.4. Аккумуляция фенолов и антоцианов,аггакже изменение активности антиоксидантных ферментов в растениях рапса* в процессе холодовойадаптации.

1П.4.1. Накопление фенолов.

Ш.4.2. Аккумуляция антоцианов.

Ш.4.3. Изменение активностей супероксиддисмутазы (СОД) и гваякольной пероксидазы при холодовом стрессе.

Ш.5. Стрессорный ответ трансгенных растений рапса на действие отрицательной температуры.

Ш.5.1. Накопление биомассы в опыте по воздействию на растения отрицательной температуры.

Ш.5.2. Накопление МДА.

111.5.3. Аккумуляция растворимых Сахаров и пролина трансгенными растениями рапса при воздействии отрицательной температуры.

111.5.4. Аккумуляция общих фенолов и антоцианов.

111.5.5. Активность гваяколовой пероксидазы и супероксиддисмутазы.

Ш.5.6. Определение холодустойчивости по выходу электролитов из тканей растений рапса, подвергнутых воздействию отрицательной температуры.

Ш.5.7. Рост растений восстановленных после воздействия отрицательной температуры.

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение свойств трансгенных растений рапса (Brassica napus L.) со встроенным геном OSMYB4»

Актуальность проблемы. На протяжении онтогенеза растения подвергаются действию различных неблагоприятных факторов окружающей среды, таких как низкие положительные температуры, засуха, засоление, тяжелые металлы и другие, негативно влияющие на рост, развитие и продуктивность важнейших сельскохозяйственных культур. Растения отвечают на абиотические воздействия экспрессией стресс-специфических генов, продукты которых вызывают физиологические и биохимические изменения (Thomashow, 1999; Viswanathan, 2002), повышая устойчивость растений к неблагоприятным воздействиям.

Низкотемпературный стресс действует на растения как непосредственно, ингибируя метаболические реакции, так и косвенно, через индуцируемые холодом осмотический, а также окислительный и другие стрессы. Однако если растения предварительно адаптированы под воздействием низких положительных температур, то они приобретают устойчивость за счёт образования соединений, понижающих водный потенциал клеток, защищающих ферменты от инактивации и поддерживающих структурную целостность белковых макромолекул {Groppa, Benavides, 2008; Gusta et al., 1996; Dionne et al., 2001). К стресс-протекторным молекулам принадлежат аминокислоты (пролин, аланин), четвертичные ионы (бетаин, глицин бетаин), сахара (глюкоза, фруктоза, сахароза), сахароспирты (маннит, сорбит, трегалозы, и инозит) и другие углеводы {Dionne et al., 2001; Hare et al., 1998; Patton et al., 2007).

Экспрессию многих генов индуцируют трансфакторные белки, которые регулируют транскрипцию, специфически взаимодействуя с ДНК либо с другими белками, способными образовывать комплекс белок-ДНК (Latchman, 2007). Гены трансфакторных белков объединены в семейства по строению кодируемых ими белков. Одним из таких семейств является семейство MYB генов, общей особенностью белков которых является присутствие функционального ДНК-связывающего домена, консервативного среди животных, растений и дрожжей. К семейству MYB генов трансфакторных белков относится ген Osmyb4 (Y11414), выделенный из,генома растений риса (Pandolfi et al., 1997). Роль этого гена в холодовой адаптации и засухоустойчивости была выяснена по его-сверхэкспрессии в трансгенных растениях А. thaliana, показавших повышенную устойчивость к- холоду и засухе за счёт различных биохимических изменений, наблюдавшихся во время адаптации к неблагоприятным условиям окружающей среды {Vannini et al., 2004; Mattana et al., 2005). Кроме того, сравнение транскриптомов растений дикого типа и растений со сверхэкспрессией гена Osmyb4 показало, что экспрессия этого гена влияет на экспрессию других генов, которые могут регулироваться и другими абиотическими стрессорами (Vannini et al, 2006). При сравнении трансгенных растений Arabidopsis и растений дикого типа было обнаружено значительное повышение уровня ряда аминокислот, участвующих в процессах адаптации, а также было обнаружено активирование синтеза других осмолитов, что позволяет предположить, что Osmyb4 представляет собой важный узел в каскаде стрессовых ответов (Latchman, 2007).

Использование современных методов клеточной и молекулярной биологии, биотехнологии и генетической инженерии позволило достичь крупных успехов в повышении устойчивости растений к гербицидам и биопатогенам, но не к повреждающим абиотическим факторам. Это делает актуальным разработку теоретических основ для создания безопасных стресс-толерантных сельскохозяйственных растений. Одной из таких культур является рапс (.Brassica napus L. var. napus), который находит самое широкое применение в мире во многих сферах человеческой деятельности. Он является одной из основных масличных сельскохозяйственных культур, которая наряду с подсолнечником, соей и хлопком служит источником как: пищевого, так и технического масла. Масло рапса содержит самое низкое количество вредных для здоровья насыщенных жирных кислот и широко используется в пищевых и технических целях. Кроме того, рапс - ценная! кормовая- культура; содержащая большое; количество легкоусвояемых белков: От других: масличных растений рапс выгодно отличается способностью расти в зонах умеренного климата,, где у других подобных сельскохозяйственных культур семена не вызревают.

В настоящее время для повышения устойчивости к повреждающим воздействиям растения, как правило, трансформируют генами функциональных белков (ферментов синтеза и деградации защитных макромолекул и низкомолекулярных органических соединений, транспортеров, шаперонов и т. п.). Значительно более эффективным является использование для трансформации растений генов трансфакторов, в частности, гена ОзтуЬ4 риса. В этом случае один трансген контролирует целую кассету стресс-регулируемых генов и тем самым повышает устойчивость растений к различным абиотическим воздействиям, в том числе и к низким положительным и отрицательным температурам. Это сделало крайне актуальным изучение влияния экспрессии трансгена ОзтуЪ4 на функционирование защитных систем в растениях рапса при гипотермии. Тем более до сих пор данный ген использовали только для трансформации арабидопсиса, томатов, табака и яблони, что сопровождалось повышением их устойчивости к водному дефициту и биопатогенам. Однако повышение холодоустойчивости в данном случае носило видоспецифичный характер.

В этой связи было важно исследовать, сопровождается ли активная экспрессия гена ОзтуЪ4 риса в растениях рапса формированием защитных механизмов и повышением их устойчивости к холоду. Исследование данной проблемы представляет как большой теоретический, так и значительный практический интерес и позволяет не только лучше понять механизмы адаптации растений к низким положительным температурам, но и содействовать разработке современных технологий повышения стресс-толерантности растений.

Цель и задачи исследования. Цель данной работы заключалась в том, чтобы выяснить, сопровождается ли суперэкспрессия гена ОзтуЪ4 транскрипционного* фактора риса в трансгенных растениях рапса повышением устойчивости к низкотемпературному стрессу и, в случае если холодоустойчивость этих растений повышается, то исследовать ее возможные механизмы.

Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:

• Исследовать, передается ли в процессе генеративного развития растений рапса и экспрессируется ли трансген, кодирующий трансфакторный белок 08МУВ4 риса.

• Оценить уровень холодоустойчивости трансгенных растений рапса, экспрессирующих ген О8туЬ4 риса.

• Исследовать динамику изменений совместимых осмолитов (растворимых Сахаров и пролина) в трансгенных растениях рапса в процессе низкотемпературного стресса.

• Изучить аккумуляцию общих фенолов и флавоноидов, а также антоцианов, обладающих антиоксидантными свойствами, в трансгенных растениях рапса в процессе холодовой адаптации.

• Изучить действие отрицательной температуры.

Научная новизна работы. Показано, что в процессе генеративного размножения трансгенных растений рапса ген трансфакторного белка ОяпгуЬ4 наследуется и активно экспрессируется. Установлено, что экспрессия трансгена ОзтуЬ4 в растениях рапса сопровождается повышением устойчивости к низким положительным и отрицательным температурам. В основе повышения устойчивости растений к гипотермии лежит снижение интенсивности окислительного стресса в результате увеличения активности антиоксидантных ферментов и аккумуляции низкомолекулярных органических антиоксидантов, с одной стороны, а также накопление совместимых осмолитов, с другой. Впервые установлено, что интенсивная экспрессия гена ОятуЬ4 трансфактора риса в растениях рапса в ответ на гипотермию сопровождается активацией «работы» генов различных метаболических путей, реализация которых на уровне физиологических функций обеспечивает формирование важных защитных механизмов и повышение устойчивости к неблагоприятным температурам.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

2,4Д 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота

АБК абсцизовая кислота

БАЛ 6-бензиламинопурин

ДТТ дитиотрейтол

ИУК индолилуксусная кислота кДНК комплементарная ДНК

Кл клафоран

Км канамицин мРНК матричная РНК

МДА малоновый диальдегид

НУК нафтилуксусная кислота пдг пролиндегидрогеназа

Про пролин пол реакция перекисного окисления липидов

ЭДТА этилендиаминтетрауксусная кислота

ЬЕА гидрофильные полипептиды

ЫОБ нопалинсинтаза

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Айман Мохамед Эль Саед Гомаа

выводы

1. Показано ; что в процессе генеративного размножения растений рапса с гетерологической суперэкспрессией гена ОвтуЬ4 транс-фактора риса трансген наследуется и экспрессируется:

2. Представлены экспериментальные доказательства того, что полученные трансгенные растения рапса обладают повышенной устойчивостью к низким положительным и отрицательным температурам, о чем свидетельствует: (а) более активное, по сравнению с растениями дикого типа, накопление биомассы при +4°С; (б) сохранение трансгенными растениями, в отличие от нетрасформированных растений, жизнеспособности после 2-х суток экспозиции при -6°С; (в) меньший окислительный стресс, который испытывают трансгенные растения при +4°С по сравнению с формами дикого типа, и, наконец, (г) способность поддерживать водный статус при гипотермии.

3. Впервые продемонстрировано, что суперэкспрессия гена трансфакторного белка риса в растениях рапса в процессе холодовой адаптации сопровождается интенсивной аккумуляцией общих фенолов и флавоноидов; что, очевидно, лежит в основе снижения уровня МДА в условиях низкотемпературного стресса и повышения холодоустойчивости.

4. Показано, что при низкой положительной температуре трансгенные растения рапса в 20-30 раз больше накапливают пролина, чем ^трансформированные растения. При этом, в отличие от ранее исследованных трансгенных растений арабидопсиса, яблони и томатов с геном ОятуЬ4, в условиях гипотермии содержание растворимых Сахаров в трансгенных растениях рапса было ниже по сравнению с растениями дикого типа.

5. Полученные результаты свидетельствуют о том, что гетерологическая суперэкспрессия гена ОБтуЪ4 в растениях рапса сопровождается не только интенсивной аккумуляцией совместимых осмолитов, но и биосинтезом антиоксидантных соединений фенольной природы. Отсюда следует, что в условиях низкотемпературного стресса транскрипционный фактор 08МУВ4 регулирует гены различных метаболических путей, интегрируя тем самым защитные системы организма, которые лежат в основе повышения холодоустойчивости растений.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные результаты позволяют заключить, что гетерологическая экспрессия ОБтуЬ4 гена риса в растениях рапса сопровождается повышением их устойчивости к низкотемпературному стрессу. В основе этого явления лежит способность транскрипционного фактора 08МУВ4 стимулировать аккумуляцию совместимых осмолитов, прежде всего, пролина, а также антиоксидантных соединений фенольной природы и антоцианов. Это подтверждает идею, согласно которой продукт ОзтуЪ4 гена играет 0006500 интегрирующую роль в ответе растений на повреждающее воздействие, координируя экспрессию многих генов различных метаболических путей, обеспечивающих формирование стресс-защитных механизмов, следствием чего является формирование защитных механизмов и повышение стресс-толерантности.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Айман Мохамед Эль Саед Гомаа, 2011 год

1. Барабой В.А. (1991) Механизмы стресса и перекисное окисление липидов. Успехи современной биологии, 111, 21-28

2. Бараненко.В; В. (2006) Супероксиддисмутаза в клетках растений. Цитология, 48, 465-474.

3. Белоус A.M., Бондаренко В.А. (1982) Структурные изменения биологических мембран при охлаждении. Киев. наук. Думка, С. 255.

4. Вавилов П.П., Гриценко В.В., Кузнецов B.C., Третьяков H.H. (1986) Растениеводство М: Агропромиздат, С. 512

5. Гималов Ф.Р., Чемерис A.B., Вахитов В.А. О (2004) восприятии растением холодового сигнала. Успехи современной биологии, 124, 185196.

6. Жолкевич В.Н. К (1955) вопросу о причинах гибели растений при низких положительных температурах. Тр. Ин-та физиологии растений им. К.А. Тимирязева АН СССР, 9,3-8.

7. Жуковский П.М. (1971) Культурные растения и их сородичи. Л. Колос, С. 8-62.

8. Загоскина Н.В., Дубравина Г. А., Алявина А. К., Гончарук Е. А.2003) Влияние ультрафиолетовой (УФ-Б) радиации на образование и локализацию фенольных соединений в каллусных культурах чайного растения. Физиология растений, 50, 302-308

9. Зайцев Г. Н. (1963) Математическая статистика. в экспериментальной ботанике. Методика биометрических расчетов. Москва: Издательство Наука, С. 424.

10. Касперска-Палач А. (1983) Механизм закаливания травянистых растений. / Холодостойкость растений, под. Ред. Г.А. Самыгина, М.: Колос. С. 112-123.

11. Колупаев Ю.В., Трунова Т.И. (1992) Особенности метаболизма и защитные функции углеводов растений в условиях стрессов. Физиология и биохимия культурных растений, 24, 523-533.

12. Красавцев О. А. (1988) Свойства плазмалеммы морозостойких растительных клеток. Успехи соврем. Биологии, 106, 143-157.

13. Кузнецов Вл.В., Дмитриева Г. А. (2006) Физиология растений. Издание второе переработанное и дополненное. Учебник для вузов. М.: «Высшая школа». 742.

14. Кузнецов Вл.В., Шевякова Н.И. (1999) Пролин при стрессе: биологическая роль, метаболизм, регуляция. Физиология растений, 46, 321-336.

15. Лось Д.А. (2005) Молекулярные механизмы холодоустойчивости растений. Вестник Российской Академии Наук, 75, 338-345.

16. Малышенко С.И., Тюлькина Л.Г., Зверева С.Д., Ралдугина Г.Н. (2003) Получение трансгенных растений Brassica campestris, экспрессирующих ген gfp. Физиология растений, 5Q, 309-315.

17. Половникова М.Г. (2010) Экофизиология стресса. Марийский, государственный университет, кафедра экологии, http://new.marsu.ru/GeneralInforniation'

18. Пустовой и:в:, Филин ВЖ, Корольков A.B. (1995) Практикум по агрохимии. М.: Колос, С. 336.

19. Пыльнев В.В., Коновалов Ю.Б., Хупацария Т.И. (2005) Частная селекция полевых культур. М: Колос, С. 552

20. Радионов Н.В., Волков К.С., Холодова В.П. (2007)Сравнительный анализ устойчивости растений рапса к повышенным концентрациям меди и цинка. Вестник РУДН, 4, 21-30.

21. Синькевич М.С., Дерябин А.Н., Трунова Т.И. (2009)0собенности окислительного стресса растений картофеля с измененным углеводным метаболизмом. Физиология растений, 56, 186-192.

22. Третьякова H.H., Карнаухова Т.В., Паничкин Л.А. (1990) Практикум по физиологии растении. М. Агропромиздат, С. 271.

23. Трунова Т.И. (2007) Растение и низкотемпературный стресс., 64-е Тимирязевское чтение. М.: Наука, С. 54.

24. Трунова Т.И. (1984) Физиологические и биохимические основы адаптации растений к морозу. С-х. биология, 6, С.3-10.

25. Туманов И.И. (1979) Физиология закаливания и морозостойкости растений. М.: Наука, С. 352,

26. Туркина М.В., Соколова С.В. (1971) Методы определения моносахаридов и олигосахаридов, В» сб. «Биохимические методы в физиологии растений» под редакцией О.А. Навлиновой. Москва, Наука. С. 7-34

27. Фердман ДЛ; (1966) Учебник «Биохимия». М.; изд. Наука, С. 588.

28. Шевякова Н.И. (1983) Метаболизм и физиологическая роль пролина в растениях при водном и солевом стрессе. Физиология растений, 30, 743-751.

29. Abe Н., Urao Т., Ito Т., Seki М., Shinozaki К., Yamaguchi-Shinozaki К. (2003) Arabidopsis AtMYC2 (bHLH) and AtMYB2 (MYB) function as transcriptional activators in abscisic signaling. Plant Cell, 15, 63-78.

30. Ahmad J., Hellebust J.A. (1988) The Relationship between Inorganic Nitrogen Metabolism and Proline Accumulation in Osmoregulatory Response of Two Euryhaline microalgae. Plant Physiol, 88, 348-354.

31. Alia P., Sardhi P., and Mohanty P. (1993) Proline in relation to free radical production in seedlings of Brassica juncea raised under sodium chloride stress. Plant Soil, 155, 497-500.

32. Anchordoguy TJ, Rudolph AS, Carpenter JF, Crowe JH. (1987) Modes of interaction of cryoprotectants with membrane phospholipids during freezing. Cryobiol, 24, 324-331.

33. Araki S., Ito M., Soyano Т., Nishihama R., Machida Y. (2004) A-myb is Expressed in Bovine Vascular Smooth Muscle Cells during the Late Gl-to-S Phase Transition and Cooperates with с-myc to Mediate Progression to S Phase. Biol Chem. J, 279, 32979-32988.

34. Arrigoni O. (1994) Ascorbate system in plant development. J. Bioenerg. Biomembr, 26, 407-419

35. Asada K. (1992) Ascorbate Peroxidase a hydrogen peroxide scavenging enzymesinpIants.P/zj/szo/. Plant. 85, 235-241.421: . AsKrafti Ml (1994); Breeding for salinity tolerance: in plants. Grit: Rev: plant Sci, 13, 17-42.

36. Bates L.S. Waldren R.P., Teare I D. (1973) Rapid determination of free proline for water stress studies. Plant Soil, 39, 205-207.

37. Baudry A., Hcim M.A., Dubreucq B., Caboche M., Weisshaar B., Lepiniec L. TT2, TT8, and TTG1 (2004) synergistically specify the expression of BANYULS and proanthocyanidin biosynthesis in Arabidopsis thaliana. Plant J, 39, 366-380.

38. Beauchamp Ch., Fridovich I. (1971) Superoxide dismutase improved assays and an assay applicable to acrylamide gels. Analytical Biochemistry, 44, 276-287

39. Berbezy P., Legendre L.; (1997) Maujean, A. Alfa-amylase isoform pattern changes during the winter season in the winter-resting stem internodes of Vitis vinifera. Plant Physiol Bioch, 35, 685-691.

40. Borevitz, J.O., Xia, Y., Blount* J., Dixon, R.A., and Lamb, C. (2000) Activation Tagging Identifies a Conserved MYB Regulator of Phenylpropanoid Biosynthesis. Plant Cell, 12, 2383-2394.

41. Burbulis N., Kupriene R., Blinstrubiene A. (2008) Investigation of Cold Resistance of Winter Rapeseed in Vitro. Sodinink. Darzinink, 27, 223232.

42. Chalker-Scott L. (1999) Environmental Significance of Anthocyanins in Plant Stress Responses. Photochem. Photo bio I, 70, 1-9.

43. Chen Y., Patterson B.D, (1998) The effect of chilling temperature on the level of superoxide dismutase, catalase and hydrogen m some plant leaves Actaphytophysiol. Sin, 14; 323-328.

44. Chinnusamy V., Zhu J:, Zhu J.K. (2006) Gene Regulation, under Cold' Acclimation in Plants. Physiol. Plant, 126, 52-61.

45. Choi SM, Jeong SW, Jeong WJ, Kwon SY, Chow WS, Park YI. (2002) Chloroplast Cu/Zn-superoxide dismutase is a highly sensitive site in cucumber leaves chilled in the light. Planta, 216,315-324.

46. Choi Dong-Woog; Rodriguez E.M., Close T.J. (2002) Barley Cbf3 gene identification, expression pattern, and map locaiiori.Plant Physiology, 129, 1781-1787.

47. Choudhary NL, Sairam RK, Tyagi A. (2005) Expression of deltal-pyrroline-5-carboxylate synthetase gene during drought in rice (Oryza sativa L.). J. Biochem. Biophys., 42, 366—370

48. Cordoba* F., Gonzalez-Reyes J.A. (1994) Ascorbate and plant-cell growth. J. Bioenerg.Biomemb, 26,399-405.

49. Couee I., Sulmon L., Gouesbet G., Amrani A. (2006) nvolvment of soluble sugars in reactive oxygen species balance and responces to oxidative stress in plants. J. Exp. Bot., 57, 449-459.

50. Crowe JH, Crowe LM, Carpenter JF, Rudolph AS, Wistrom CA, Spargo BJ, Anchordoguy TJ. (1988) Interactions of sugars with membranes. Biochem. Biophy. Acta, 947, 367-384.

51. Cushman J, Bohnert HJ. (2000) Genomic approaches to plant stress tolerance. Curr. Opin. Plant Biol, 3,117-124.

52. Dalton D.A. (1995) Antioxidant defences of plants and fungi. In: Oxidant-induced stress and antioxidant Defences in biology. Ahman S. (Ed.)« Chapman & Hall: New York, pp. 298-355.

53. Deiting TJ.; Zrenner R.; Stitt M. (1998) Similar temperature requirement for sugar accumulation and for the induction of new forms of sucrose phosphate syntheses and amylase in cold-stored potato tubers. Plant, Cell and Environment, 21, 127-138.

54. Denekamp M., Smeekens S.C. (2003) Integration of Wounding and Osmotic Stress Signals Determines the Expression of the AtMYB102 Transcription Factor Genel. Plant Physiol., 32, 1415-1423.

55. Dionne J., Castonguay Y., Nadeau P., Desjardins Y. (2001) Freezing Tolerance and Carbohydrate Changes during Cold Acclimation of Green-Type Annual Bluegrass (Poa annua L.). Crop Science, 41, 443-451.

56. Dixon N., Paiva L. (1995) Stress-induced phenylpropanoid metabolism. The Plant Cell, 7, 1085- 1097.

57. Du H., Zhang L., Tang X.-F., Yang W.-J., Wu Y.-M., Huang Y.-B., Tang Y.-X. (2009) Biochemical and Molecular Characterization of Plant MYB Transcription Factor Family. Biochemistry (Moscow), 74, 1-11.

58. Duthie G., Crozier A. (2000) Plant-derived phenolic antioxidants. Curr. Opin. Lipidol, 11, 43-47.

59. Eagles CF, Williams J, Louis DV (1993) Recovery after freezing effect of sugar concentration on cold acclimation in Avena sativa L., Lolium perenne L. and L. multiorum lam. New Phytol., 123, 477-483.

60. Ellerstrom S. (1977) Interspecific hybrydisation in breeding work. Artkorsuingar i foradlingsorbeter. Sveriges Utsadesforenings Tibskrif, 87, 363367.

61. Esen A.A. (1978) Simple Method for Quantitative, Semiquantitative, and Qualitative Assay of Protein. Anal. Biochem, 89, 264-273.

62. Espley R.V., Hellens R.P., Putterill J., Stevenson D.E., Kutty-Amma S., Allan A.C. (2007) Red colouration in apple fruit is due to the activity of the MYB transcription factor, MdMYBlO. Plant J., 49, 414-427.

63. Fabro G., Kovacs I., Pavet V., Szabados L. Alvarez M. E. (2004) Proline accumulation and AtP5CS2 gene activation are induced by plant-pathogen incompatible interactions in Arabidopsis. Mol. Plant-Microbe Interact, 17, 343-350

64. Foyer C.H. (1993) Ascorbic Acid. In: Antioxidant in Higher Plants Alscher R.G., Hess J.L. (Eds) Boca Raton (FL); CRC Press., pp. 31-58.

65. Frankel E.N. (1985) Chemistry of free radical and singlet oxidation of lipids. Progress in lipid research, 23, 197-221.

66. Fridovich J. (1986) Biological effect of the superoxide radical. Arch. Biochem. Biophys., 2470, 1-11.

67. Fu P., Singh J., Keller W., Mc Gregor I. (1999) Sucrose content and freezing tolerance of Brassica napus canola (rapeseed) seedlings overexpressing an Escherichia coli inorganic pyrophosphatase. X Internat.

68. Rapeseed Congress, Canberra, Australia,http://www.regional.org.aU/au/gcirc/4/122.htm

69. Fulton T.M., Chunwongse J., Tanksley S.D. (1995) Micropreparative Protocol for Extraction of DNA from Tomato and Other Herbaceous Plants. Plant Mol. Biol. Rep., 13; 207-209.

70. Gage TvB;, Wendei S. H. (1950) Quantitive determination of certain flavonol 3-glycosides. Anal. Chem., 22, 708-711.

71. Gamborg OL, Eveleigh DE. (1968) Culture methods and detection of glucanases in suspension cultures of wheat and barley. Can J. Biochem., 46, 417-421.

72. Gao M-J; Allard G.; Byass L.; Flanagan A.M, Singh J. (2002) Regulation and characterization of four CBF transcription factors from Brassica napus. Plant Molecular Biology, 49, 459-471.

73. Gichohi E.G.; Pritchard M.K. (1995) Storage temperature and maleic hydrazide effects on sprouting, sugars, and fry color of Shepody potatoes. Am. Potato J., 72, 737-747.

74. Gilmour S.J.; Fowler S.G., Thomashow M.F. (2004) Arabidopsis transcriptional activators CBF1, CBF2, and CBF3 have matching functional activities. Plant Molecular Biology, 54, 767-781.

75. Gilmour S.J., Sebolt A.M., Salazar M.P., Everard J.D., Thomashow M.F. (2000) Overexpression of the Arabidopsis CBF3 transcriptional activator mimics multiple biochemical changes associated with cold acclimation. Plant Physiology, 124, 1854-1865

76. Griffith M, Ala P, Yang DSC, Hon WC, Moffat B. (1992) Antifreeze protein produced endogenously in winter rye leaves. Plant Physiol., 100, 593596.

77. Groppa M.D., Benavides M.P. (2008) Polyamines and Abiotic Stress: Recent Advances. Amino Acids, 34, 35-45

78. Gusta L.V., Wilen R.W., Fu P. (1996) Low Temperature Stress Tolerance: The Role of Abscisic Acid, Sugars, and Heat-Stable Proteins. HortScience, 31; 39-46.

79. Guy C. (1990) Gold Acclimation andFreezing Stress Tolerance: Role of Protein metabolism. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol., 41, 187-223.

80. Guy C., LI Qin Bao. (1998) the organization and evolution of the spinach stress 70 molecular chaperone gene family. Plant Cell, 10, 539-556.

81. Hajela RK, Horvath DP, Gilmour SJ, Thomashow MF. (1999) Molecular cloning and expression of cor (cold regulated) genes in Arabidopsis thaliana. Plant Physiol, 93, 1246-1252

82. Hare P.D., Cress W.A., van Staden J. (1998) Dissecting the Roles of Osmolytes Accumulation during Stress. Plant Cell Environ, 21, 535-553.

83. Hare P. Cress W. (1997) metabolic implications of stress induced proline accumulation in plants. Plant Growth Regul. 21, 79—102

84. Haudecoeur E., Planamente S., Cirou A., Tannieres M., Shelp B. J., Morera S., Faure D. (2009) Proline antagonizes GABA-induced quenching of quorum-sensing in Agrobacterium tumefaciens. Proc. Natl. Acad. Sci. JJ. S. A.,106, 14587-14592

85. Heath R.L., Packer L. (1968) Photoperoxidation in Isolated Cloroplasts. Kinetics and Stoichiometry of Fatty Acid Peroxidation. Arch. Biochem. Biophys, 125, 189-198.

86. Hepburn H.A., Naylor F.L., Strokes D.I. (1986) Electrolyte leakage from winter barley tissue as indicator of winterhardiness. Ann. Appl. Biol. 108, 164-165.

87. Herman P.L., Marks M.D. (1989) Trichoma Development in Arabidopsis thaliana. I. Isolation and Complementation of the glabrousi Gene. Plant Cell,1, 1051-1055.

88. Hess J.L. (1993)^ Vitamin E, a-tocopherol*. In: Antioxidant in Higher Plants, Alscher R.G., Hess J.L. (Eds) Boca Raton (FL): CRC Press, pp. 131134.

89. Higginson T., Li S.F., Parish R.W. (2003) AtMYB103 regulates tapetum and trichome development in Arabidopsis thaliana. Plant J., 35, 177179.

90. Higginson T., Li S.F., Parish R.W. (2003) AtMYB103 regulates tapetum and trichome development in Arabidopsis thaliana. Plant. J., 35. 177192.

91. Hincha D K., Heber U., Schmitt J. M. 1990Proteins from frost-hardy leaves protect thylakoids against mechanical freeze-thaw damage in vitro. Planta, 180, 416-419.

92. Holmberg N., B. (1998) Improving stress tolerance in plants by gene transfer. Trends in Plant Science, 3, 61-66.

93. Howarth CJ, Ougham HJ. (1993)Gene expression under temperature stress. New Phytologist, 125, 1-26.109. http://www.bio-soft.net/pcr/01igo. страница Канадского отделения

94. Hughes, М:А, Dun MIA. (1996) The molecular biology of plant acclimation to low temperature. J. Exp. Bot., 47, 291-305.

95. Ingram, J., Bartels D. (1996) The molecular basis of dehydration tolerance in plants. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 47, 377-403.

96. Inomata N. (1983)Hybrid progenies of the cross, Brassica campestris x

97. B.oleracea II. Crossing ability of F1 hybrids and their progenies. Jap. J. of Genet., 58; 433-449.

98. Ito M., Araki S., Matsunaga S., Itoh T., Nishihama R., Machida Y, Doonan J.H., Watanabe A. (2001) A Novel cis-Acting Element in Promoters of Plant В-Type Cyclin Genes Activates M Phase-Specific Transcription. Plant Cell, 13, 1891-1905.

99. Iturriaga G., Schneider K., Salamini F., Bartels D. (1992) Expression of desiccation-related proteins from the resurrection plant Craterostigma plantagineum in transgenic tobacco. Plant Molecular Biology, 20, 555-558.

100. Jin H., Cominelli E., Bailey P., Parr A., Mehrtens F., Jones J., Tonelli

101. C., Weisshaar В., Martin C. (2000) Transcriptional repression by AtMYB4 controls production of UV-protecting sunscreens in Arabidopsis. EMBO J., 19, 6150-6161.

102. Kasuga M., Liu Q., Miura S., Yamaguchi-Shinozaki K., Shinozaki K. (1999) Improving plant drought, salt, and freezing tolerance by gene transfer of a single stress-inducible transcription factor. Nature Biotechnology, 17, 287-291.

103. Kaye C., Neven L., Hofig A., LI Qin-Bao, Haskell D., Guy C. (1998) Characterization of a gene for spinach CAP 160 and expression of two spinach cold-acclimation proteins in tobacco. Plant Physiology., 116, 1367-1377.

104. Kholodova V., Volkov K., Kuznetsov YI. (2010) Plants under Heavy Metal Stress in Saline Environments. In: Soil Heavy Metals, Series "Soil

105. Biology", Heidelberg, Dordrecht, London New York: Springer-Verlag., 19; pp. 163-183.

106. Klempnauer K.-1I., Gonda T.J., Bishop J.M. (1982) Nucleotide sequence of the retroviral leukemia gene v-myb and its cellular progenitor c-myb: the architecture of a transduced oncogene: Cell, 31, 453-463.

107. Kohl D., Schubert K.R., Carter M.B., Hagedorn C.H:, Shearer G. (1988) Proline metabolism in N2-fixing root nodules: energy transfer and regulation of purine synthesis. Proc. Natl. Acad. Sei. U. S. A., 85, 2036-2040.

108. Koster KL, Lynch DV (1992) Solute accumulation and compartmentation during the cold acclimation of puma rye. Plant Physiol., 98; 108-113.

109. Kuk Y. I., Shin J. S., Burgos N., Hwang T., Han O., Cho B. H., Jung S., Guh J. O. (2003) Antioxidative enzymes offer protection from chilling damage in rice plants. Crop Sei., 43, 2109—2117.

110. Larsson R.A. (1988) The antioxidants of higher plants. Phytochem., 27, 969-978.

111. Latchman D.S. (2007) Eukaryotic Transcription Factors. Academic Press. New York. pp. 488.

112. Lee M.M., Schiefelbein J. (2001) Developmental^ distinct MYB genes encode functionally equivalent proteins in Arabidopsis. Development, 128, 1539-1546.

113. Lee M-Ml, Schiefelbein J;, Werewolf A. (1999) MYB-Related Protein' m> Arabidopsis is a Position-Dependent Regulatorof Epidermal Cell Patterning. Cell, 99, 473-4831

114. Levine A., Tenhaken R., Dixon R., Lamb C., (1994) H202 from the oxidative burst orchestrates the plant' hypersensitive disease resistance response. Cell, 79, 583- 593.

115. Levitt J. (1980) Responses of plants to environmental stresses. Chilling freezing and high temperatures stresses. New York etc. Acad. Press, 1, 426.

116. Lewin S. (1976) Vitamin C its molecular biology and medical potential. In: Plant cold hardiness, Li P.H. & LISS-ALAN R. (Eds) Academic Press, New York, pp. 5-39.

117. Leyva A., Jarrillo J.A., Salinas J., Marnez-Zapater M. (1995) Low temperature induces the accumulation of phenylalanine ammonia-lyase and chalcone synthase mRNA of Arabidopsis thaliana in light-dependent manner. Plant Physiol, 10, 839-846.

118. Li, J., Yang, X., Wang, Y., Li, X., GAO, Z., Pei, M., Chen, Z., Qu, L.J., and GU, H. (2006) Two groups of MYB transcription factors share a motif which enhances trans-activation activity. Biochem. Biophys. Res.Commun., 341, 1155-1163.

119. Lipsick J.S. (1996) One billion years of Myb. Oncogen, 13, 223-235.

120. Liu J., Zhu J.K. (1997) Proline accumulation and salt-stressinduced gene expression in a salt-hypersensitive mutant of Arabidopsis. Plant Physiol., 114, 591-596

121. Livingston D.P, Henson C.A. (1998) Apoplastic sugars, fructans, fructan exohydrolase, and invertase in winter oat: responses to second-phase cold hardening. Plant Physiology, 116, 403-408.

122. Lyons J.M. (1973) Chilling injury in plants. Annu. Rev. Plant. Physiol., 24, 445-466.

123. Mabry T.J., Markham K.R., Thoma M B. (1970) The Systematic Identification of Flavonoids. Springer-Verlag Publication, New York, pp. 261266.

124. Mandaokar A., Thines B., Shin Bi, Lange B.M., Choi G., Koo Y.J., Yoo YJ., Choi YD:, Choi G,. Browse J. (2006) Transcriptional regulators of stamen development in Arabidopsis identified by transcriptional profiling. Plant J., 46, 984-1008.

125. Mann T., Keilin D. (1938) Hemocuprein and hepatocuprein copperprotein compounds of blood and liver in mammals. Proc. R. Soc. Lond. B., 126,303—315.

126. Matsui, K., Hiratsu, K., Koyama, T., Tanaka, H., and Ohme-Takagi,

127. M. A. (2005) chimeric AtMYB23 repressor induces hairy roots, elongation of leaves and stems, and inhibition of the deposition of mucilage on seed coats in Arabidopsis. Plant Cell Physiol., 46,147-155.

128. Mattana M., Biazzi E., Consonni R., Locatelli F., Vannini C., Provera S., Coraggio I. (2005) Overexpression of Osmyb4 Enhances Compatible Solute Accumulation and Increases Stress Tolerance of Arabidopsis thaliana. Physiol. Plant, 125, 212-223.

129. Mattioli R., Marchese D., D'Angeli S., Altamura M.M., Costantino P., Trovato M. (2008) Modulation of intracellular proline levelsaffects flowering time and inflorescence architecture in Arabidopsis. Plant Mol. Biol, 66,277-288.

130. McKersie B.D., Leshem Y.Y. (1994) Stress and Stress Coping in Cultivated Plants. Kluwer Academic Publishers: Dordrecht, the Netherlands, pp. 104-131

131. McKown R, Kuroki G, Warren G. (1996) Cold responses of Arabidopsis mutants impaired in freezing tolerance. J. Exp. Bot., 47, 19191925.

132. Mehrtens, F., Kranz, Hi, Bednarek, P., and Weisshaar, B: (2005) The Arabidopsis Transcription Factor MYB12 is a Flavonol-Specific Regulator of Phenylpropanoid Biosynthesis. Plant Physiol, 138, 1083—1096.

133. Miyake K., Ito T., Sends M. (2003) Isolation of a subfamily of genes for R2R3-MyB transcription factors showing up reguranted expression under nitrogen nutrient-limited conditions. Plant Mol. Biol., 53, 237-245

134. Hughes M.A., Dunn M.A. (1996) The molecular biology of plant acclimation to low temperature. J. Exp. Bot., 47,291-305.

135. Monroy A.F., Castonguay Y., Leberge S., Sarhan F., Vezina L.P., Dhindsa R.S. (1993) A new cold-induced alfalfa gene is associated with enhanced hardening at subzero temperature. Plant Physiol., 102, 873-879.

136. Morris L.L. (1982) Chilling injury of horticultural crops: An overview. Hort Sei., 11, 161-162.

137. Moyano, E., Martinez-Garcia, J.F., Martin, C. (1996) Apparent redundancy in myb gene function provides gearing for the control of flavonoid biosynthesis in Antirrhinum flowers. Plant Cell, 8, 1519-1532.

138. Mullen R.T., Trelease R.N. (2000) The sorting signals for peroxisomal membrane-bound ascorbate peroxidase are within its C-terminal tail. J. Biol Chem., 275, 16337-16344

139. Müller-Thurgau H. (1882) Über Zuckerhäufung in Pflanzenteilen in Folge niederer Temperatur. Landw. Jahrb, 11, 751-828.

140. Mullineaux P.M., Creissen G.P. (1997) Glutathione reductase: regulation and role in oxidative stress. In: Oxidative stress and the molecularbiology of antioxidant defences, Scandalios J.G. (Ed.) Cold Spring Harbor Laboratory Press, pp. 667-714.

141. Murashige T., Skoog F.A. (1962) Revised medium for rapid growth and-bioassays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant, 15, 473-482.

142. Nagaoka S., Takano T. (2003) Salt tolerance-related protein* STO binds to a Myb transcription factor homologue and confers salt tolerance in Arabidopsis. J. Exp. Bot., 54; 2231-2237.

143. Nanjo T., Kobayashi M., Yoshiba Y., Kakubari Y. Yamaguchi Shinozaki K. and. Shinozaki K. (1999) Antisense suppression of proline degradation improves tolerance to freezing and salinity in Arabidopsis thaliana. FEBS Lett., 461, 205-210.

144. NDong C., Danyluk J.,. Wilson K.E., Pocock T., Huner N.P.A., Sarhan F. (2002) Cold-Regulated Cereal Chloroplast LEA-Like Proteins. Molecular Characterization and Functional Analyses. Plant Physiology, 129, 1-14.

145. Nesi N., Jond C., Debeaujon I., Caboclie M., Lepiniec L. (2001) The Arabidopsis TT2 Gene Encodes an R2R3 MYB Domain Protein That Acts as a Key Determinant for Proanthocyanidin Accumulation in Developing Seed. Plant Cell, 13,2099-2114.

146. Nishawar J., Mahboob-ul-Hussain, Khurshid I.A. (2009) Cold resistance in plants: A mystery unresolved. Electronic Journal of Biotechnology, 12, 1-43

147. Nomura K.; Ogasawara Y.; Uemukai H.; Yoshida M.; Hyodo H.; Watada A.E. (1995) Change of sugar content in chestnut during low temperature storage. Acta Hortic, 398, 265-276.

148. Nordin K, Vahala T, Palva ET. (1993) Differential expression of two related, low-temperature-induced genes in Arabidopsis thaliana (L.). Plant MolBiol., 21, 641-653.

149. Novillo F.A., Ecker J.M.; Joseph R, Salinas J. (2004) CBF2/DREB1C is a negative regulator of CBFl/DREBlBand CBF3/DREB1A expression andplays a central role in stress tolerance in Arabidopsis. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 101, 3985-3990.

150. Pandolfi D., Solinas G., Valle G., Coraggio I. (1997) Cloning of a cDNA Encoding a Novel myb Gene (accession no. yl 1414) Highly Expressed in Cold Stressed Rice Coleoptiles (PGR PGR97-079). Plant Physiol, 114; 747.

151. Pasquali G., Biricolti S., Locatelli F., Baldoni E., Mattana M. (2008) Osmyb4 Expression Improves Adaptive Responses to Drought and Cold Stress in Transgenic Apples. Plant Cell Rep., 27,1677-1686.

152. Patton A.J., Cunningham S.M., Yolenec J.J., Reicher Z.J. (2007) Differences in Freeze Tolerance of Zoysiagrasses: II. Carbohydrate and Proline Accumulation. Crop Sci., 47, 2170-2181.

153. Paul MJ, Driscoll SP, Lawlor DW. (1991) The effect of cooling on photosynthesis, amounts of carbohydrate and assimilate export in sunflower. J. Exp. Bot., 42, 845-852.

154. Paul MJ, Lawlor DW, Drisco. SP. (1990) The effect of temperature on photosynthesis and carbon fluxes in sunflower and rape. J. Exp. Bot., 41, 547555.

155. Pawlowski K., Kunze R., de Vries S., Bisseling T. (1994) Isolation of Total, poly(A) and Polysomal RNA from Plant Tissues. In: Plant Molecular Biology. Manual D5, Gelvin S.B., Schilperoort R.A. (Eds) the Dordrecht, Netherlands: Kluwer, pp. 1-13.

156. Paz-Ares, J., Ghosal D., Wienand U., Peterson P., Saedler H.1987)Molecular analysis of the C 1-1 allele from Zea mays:a dominant mutant of the regulatory C 1 locus. EMBOJ., 6, 3553-3558.

157. Penfield S., Meissner R.C., Shoue D.A., Carpita N.G., Bevan M.W. (2001)* MYB61 is required' for Mucilage Deposition and Extrusion in the Arabidopsis Seed Coat. Plant Cell, 13, 2777-2791.

158. Pennycooke JC, Cox S, Stushnoff C. (2005) Relationship of cold acclimation total phenolic content and antioxidant capacity with chilling tolerance in petunia (Petunia x hybrida). Environ Exp Bot., 53,225-32.

159. Pfannschmidt T., Nilsson A., Tullberg A., Link G., Allen J.F. (1999).Direct transcriptional control of the chloroplast genes psbA and psaAB adjusts photosynthesis to light energy distribution in plants. IUBMB Life, 48, 271-276.

160. Platt-Aloia K.A., Thomson W.W. (1987) Freeze-fracture evidence for lateral phase separation in the plasmalemma of chilling-injured avocado fruit. Protoplasma, 136, 71-80.

161. Prasad T.K., Anderson M.D., Martin B.A., Stewart C.R. (1994) Evidence for chilling-induced oxidative stress in maize seedlings and a regulatore role for hydrogen peroxide. Plant Cell, 6, 65-74.

162. Preston J., Wheeler J., Heazlewood J., Li S.F., Parish R.W. (2004) AtMYB32 is required for normal pollen development in Arabidopsis thaliana. Plant J., 40, 979-995.

163. Quaedvlieg, N., Dockx, J., Keultjes, G., Kock, P., Wilmering, J., Weisbeek, P., and Smeekens, S. (1996) Identification of a light regulated

164. MYB gene from an Arabidopsis thaliana transcription factor gene collection. Plant. Mol. Biol., 32, 987-993

165. Rains D.W. (1989) Plant tissue and protoplast culture: application to stress physiology and biochemistry .In: Plants under Stresses. Biochemistry. Physiology and Ecology. Their Application to Plant Improvement, pp. 181196.

166. Rice-Evans CA, Miller NJ; Paganga G. (1997).Antioxidant properties of phenolic compounds. Trends Plant Sci., 2, 151.

167. Ridge I., Osborne D.J. (1971) Role of peroxidase when hydroxyproline-rich protein in plant cell wall is increased by ethylene. Nature, New biol., 229 205-208

168. Ristic LA, Ashworth EN. (1993) Changes in leaf ultrastructure and carbohydrates in Arabidopsis thaliana L. (Heyn) cv. Columbia during rapid cold acclimation. Protoplasma, 172, 111-123.

169. Rivero R.M., Ruiz J., Bretones G., Baghour M., Ragala A., Belakbir A., Romero L. (1998) Relationship between boron and phenolic metabolism in tobacco leaves. Phytochemistry, 48, 269-272.

170. Rivero R.M., Ruiz J.M., Garci a P.C., Lo'pez-Lefebre L.R., Sa'nchez E., Romero L. (2001) Resistance to cold and heat stress: accumulation of phenolic compounds in tomato and watermelon plants. Plant Science, 160, 315-321

171. Rutten D, Santarius KA. (1992) Relationship between frost tolerance and sugar concentration of various bryophytes in summer and winter. Oecologia, 91, 260-265.

172. Saradhi P.P., Arora A.S., Prasad K.V. 1995Proline accumulates in plants exposed to UV radiation and protects them against UV induced peroxidation. Biochem. Biophys. Res. Commun, 209, 1—5.

173. Sasaki H., Ishimura K. Odo M. (1996) Changes in Sugar Content during Cold Acclimation and Deacclimation of Cabbage Seedlings. Ann. Bot., 78, 365-369.

174. Sasaki, H., Ichimura, K. and Oda; M. (1996) Changes in sugar content during cold acclimation and deacclimation of cabbage seedlings. Annals of Botany, 78, 365-369.

175. SasakiiH., IcKimura K., Okada K., ©da M. (1998) Freezing tolerance and soluble sugar contents affected, by water stress during cold-acclimation, and deacclimation in cabbage seedlings. Scientia Horticulturae, 16, 161-169;

176. Scandalios J.G. (1990) Response of plant antioxidant defense genes to environmental stress. Adv. Genet., 28, 1-41.

177. Schat, H., Sharma S.S, Voous R. (1997) Heavy metal-induced accumulation of free proline in a metal-tolerant and a nontolerant ecotype of Silene vulgaris. Physiol. Plant, 101, 477-482.

178. Schiefelbein J. (2003) Cell-fate specification in the epidermis: a common patterning mechanism in the root and shoot. Plant Biol., 6, 74-78.

179. Schijlen E.G., Ricde V.C.H., van Tunen A.J., Bovy, A.G. 2004Modefecation of flavonoid biosynthesis in corp plants. Phytochemistry, 65,2631-2648.

180. Schmitz G., Tillmann E., Carriero F., Fiore C., Theres K. (2002) The tomato Blind gene encodes a MYB transcription factor that controls the formation of lateral meristems. Proc. Natl. Acad. Sci. XJSA., 99, 1064-1069.

181. Seki M., Shinozaki K., Yamaguchl-Shinozaki K. (2003) OsDREB genes in rice, Oryza sativa L., encode transcription activators that function in drought, high-salt- and cold-responsive gene expression. The Plant Journal, 33, 751763.

182. Sen A.G., Heinen J.L., Holaday A.S., Burke J.J., Allen R.D. (1993) Increased resistance to oxidative stress in transgenic plants that overexpresschloroplastic Cu/Zn superoxide dismutase. Proc. Natl. Sci. USA., 90, 16921633.

183. Shalaev EY, Steponkus PL. (2001) Phase behavior and glass transition of 1,2-dioleoylphosphaditylethanolamine (DOPE) dehydrated in the presence of sucrose. Biochem. Biophy. Acta-Biomembr, 1514, 100-116.

184. Shao HB; Jiang SY, EiiFMJ Gliu LY, Zhao GX, Shao MA, Zhao XN, Li F. (2007) Some advances in plant stress physiology and their implications in the systems biology. Era. Biointer, 54, 33-36.

185. Shao HB, Shao MA, Liang ZS. (2006) Osmotic adjustment comparison of 10 wheat (Triticum aestivum L.) genotypes at soil water deficits. Colloids Surf B Biointerfaces, 47, 132-139.

186. Sharma P.1, Sharma N., Deswal R. (2005) The molecular biology of the low-temperature response in plants. Bioessays, 27, 1048-1059.

187. Shaw B.P., Rout N.P. (2002) Hg and Cd induced changes in proline content and activities of proline biosynthesizing enzymes in Phaseolus aureus and Triticum aestivum. Biol. Plantarum, 45, 267—271.

188. Shin B., Choi G., Yi H., Yang S., Cho I., Kim J., Lee S., Paek N.C., Kim J.H., Song P.S., Choi G. (2002) AtMYB21, a gene encoding a flower-specific transcription factor, is regulated by COR1. Plant J., 30,23-32.

189. Shinozaki K, Yamaguchi-Shinozaki K. (2000) Molecular responses to dehydration and low temperature: differences and cross-talk between two stress signaling pathways. Curr Opin Plant Biol., 3, 217-223.

190. Shinozaki K., Yamaguchi-Shinozaki K. (2003) Monitoring expression profiles of rice genes under cold, drought, and high-salinity stresses and abscisic acid application using cDNA microarray and RNA gel-blot analyses. Plant Physiology, 133, 1755-1767.

191. Solecka D, Boudet AM, (1999) Kacperska A. Phenylpropanoid and-anthocyanin.changes in low temperature treated winter oilseed rape leaves. Plant Physiol Biochem37, 491-496.

192. Solecka D, Kacperska A. (1995) Phenylalanine ammonia-lyase activity in leaves of winter oilseed rape plants as affected by acclimation of plants to low temperature. Plant Physiol Biochem., 33, 585—91.

193. Steiner-Lange, S., Unte, U.S., Eckstein, L., Yang, C., Wilson, Z.A., Schmelzer, E., Dekker, K., and Saedler, H. (2003) Disruption of Arabidopsis thaliana MYB26 results in male sterility due to non-dehiscent anthers. Plant J., 34. 519-528.

194. Steponkus, P.L. (1984) Role of the plasma membrane in freezing injury and cold acclimation. Annu. Rev. Plant Physiol, 35, 543-584.

195. Stracke, R., Werber, M., and Weisshaar, B. (2001) The R2R3-MYB gene family in Arabidopsis thaliana. Curr. Opin.Plant Biol, 4; 447-456.

196. Thomashow M.F. (1999) Plant Gold Acclimation: Freezing Tolerance Genes and Regulatory Mechanisms. Annu. Rev. Plant Physiol., 50, 571-599.

197. Thomashow M.F. (2001) So what's new in the field of plant cold acclimation? Lots!. Plant Physiology, 125, 89-93.

198. Timmermans, M.C., Hudson, A., Becraft, P.W., and Nelson, T. (1999) Rough Sheath2: A Myb protein that represses Knox homeobox genes in maize lateral organ primordial. Science, 284, 151-153:

199. Trunova T. I. (1982) Mechanisms of winter wheat hardening at low temperature. In: Plant cold hardiness and freezing stress, Li PH, Sakai A. (ed.) New York: Academic Press, pp. 41-47.

200. Uemura M, Joseph RA, Steponkus PL. (1995) Cold acclimation of Arabidopsis thaliana: Effect on plasma membrane lipid composition and freeze-induced lesions. Plant Physiol., 109, 15-30.

201. Vagujfalvi A., Galiba G., Cattivelli L., Dubcovsky J. (2003) The cold regulated transcriptional activator Cbf3 is linked to the frost-tolerance locus

202. Fr-A2 on wheat chromosome 5A. Molecular Genetics and Genomics, 269- 6067.

203. Van Camp* W., Capiau K., van Montagu M., Inze D., Slooten* L. (1996) Enhancement of oxidative stress tolerance in transgenic tobacco plants overproducing Fe-superoxide dismutase in chloroplasts. Plant Physiol., 1, 1703-1714.

204. Van Hasselt P.R., van Berlo H.A.C. (1980) Photooxidative damage to the photosynthetic apparatus during chilling. Physiol. Plantarum, 50, 52-56.

205. Vannini C, Locatelli F, Bracale M, Magnani E, Marsoni M, Osnato M, Mattana M, Baldoni E, Coraggio I. (2004) Overexpression of the Rice Osmyb4 Gene increases Chilling and freezing Tolerance of Arabidopsis thaliana Plants. Plant J. 31, 115-127.

206. Vannini C., Campa M., Iriti M., Genga A., Faoro F., Carraviere S., Rotino G.L., Rossoni V., Spinardi A., Bracale M. (2007) Evaluation of Transgenic Tomato Plants Ectopically Expressing the Rice Osmyb4 Gene. Plant Sci., 173, 231-239.

207. Verbruggen N. and Hermans G. (2008) Proline accumulation in plants. A Review. Amino Acids, 35, 753-759.

208. Viswanathan C., Zhu J.K. (2002) Molecular Genetic Analysis of Cold-Regulated Gene Transcription, Philos. Trans. R. Soc. Lond. B357, 877-886.

209. Wang, Si, Wang, J.W, Yu, N., Li, G.H;, Luo, B:, Gou, JiY., Wang; L.J., Chen, X.Y. (2004) Control- of plant trichome development by a cotton fiber MYB gene. Plant Cell, 16, 2323-2334.

210. Westhoff P., Nelson N., Bunemann H., Herrman B.G. (1981) Localization of genes for coupling factor subunits on the spinach plastid chromosome. Curr. Genet., 4, 109-120.

211. Weston K. (1998) Myb proteins in life, death and differentiation. Curr. Opin Genet. Dev. 8, 76-81.

212. Wingsle G, Hiillgren J.-E. (1993) Influence of S02 and N02 exposure on glutathione, Superoxide dismutase and glutathione reductase activities in Scots pine needles. J. Exp. Bot., 44, 463-470.

213. Wise, R.R. (1995) Chilling-enhanced photooxidation: The production, action and study of reactive oxygen species during chilling in the light. Photosynthesis Research, 45. P. 79-97.

214. Wu F., Zhang G., Dominy P. (2003) Four barley genotypes respond differently to cadmium: lipid peroxidation and activities of antioxidant capacity. Environ. Exp. Bot., 50, 67-78.

215. Xin, Z. and Browse, J. (1998) Eskimo 1 mutants of Arabidopsis are constitutively freezing-tolerant. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 95, 7799-7804.

216. Xue G-P. (2003) The DNA-binding activity of an AP2 transcriptional activator HvCBF2 involved in regulation of low-temperature responsive genes in barley is modulated by temperature. The Plant Journal, 33, 373-383.

217. Yamaguchi-Shinozaki K., Shinozaki K. (2005) Organization of cis-Acting Regulatory Elements in Osmotic and Cold Stress Responsive Promoters. Trends Plant Sci., 10, 88-94.

218. K. (1995) Correlation between the induction of a gene for delta l-pyrroline-5-carboxylate synthetase and the accumulation of proline in Arabidopsis thaliana under osmotic stress. Plant J., 7, 751—760.

219. Zrenner, R., Willmitzer L., Sonnewald U. (1993) Analysis of the expression of potato uridinediphosphate-glucose pyrophosphorylase and its inhibition by antisense RNA. Planta, 190, 247-252.