«Изучение противоопухолевой активности мезенхимальных стволовых клеток, экспрессирующих цитозиндезаминазу, на моделях меланомы и аденокарциномы легких in vivo» тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат наук Красикова Людмила Сергеевна

• Красикова Людмила Сергеевна
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Красикова Людмила Сергеевна

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫ Х СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. История и опыт применения МСК

1.2. Характеристика МСК

1.2.1. Оценка характеристик МСК

1.2.2 Клоногенность

1.2.3. Мультипотентность

1.2.4. Самообновление в культуре

1.2.3. Фенотипирование МСК

1.3 Свойства МСК

1.3.1 Противовоспалительные и иммуномодулирующие свойства

1.3.2 Выделение трофических факторов

1.4. МСК и опухоль

1.4.1. Онкогенные свойства МСК

1.4.2. Противоопухолевые свойства МСК

1.4.3 Иммуномодулирующие онкогенные свойства МСК

1.4.4. Хоуминг МСК

1.5. Генная терапия

1.5.1 Противоопухолевые агенты

1.5.2 Введение генов

1.6.Система ЦДА/5-ФЦ

1.7 Лизомустин

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.Культуры клеток, методы культивирования и получения

2.1.1. Культуры клеток

2.1.2 Культивирование клеток

2.1.3. Выделение МСК

2.2. Оценка биологических свойств МСК

2.2.1. Иммунофенотипирование МСК

2.2.2. Дифференцировка МСК

2.2.2.1. Адипогенная дифференцировка

2.2.2.2. Остеогенная дифференцировка

2.2.3. Оценка миграционной способности МСК in vitro

2.3. Создание плазмидных конструкций

2.3.1. Клонирование плазмидных конструкций

2.3.2. Выделение плазмидной ДНК для трансфекции

2.4. Методы доставки, плазмидных и лентивирусных конструкций

2.4.1.Электропорация

2.4.2. Химическая трансфекция

2.4.2.1. Химическая трансфекция с помощью X-treme GENE HP DNA (Roche)

2.4.2.2.Химическая трансфекция с помощью Polyethylenimine (PEI, Sigma)

2.4.2.3.Химическая трансфекция с помощью Lipofectamine 3000 (Invitrogene)

2.4.3. Вирусная инфекция МСК

2.4. Методы оценки экспрессии генов

2.4.1. Вложенная ПЦР (Nested PCR)

2.5. Оценка чувствительности клеток к воздействию 5-ФЦ, 5-ФУ или системы ЦДА-UPRT/5-ФЦ

2.5.1. Оценка чувствительности клеток к воздействию 5-ФЦ и 5-ФУ

2.5.2. Оценка цитотоксического воздействия системы T^A-TTPRT/5^T^

2.6. Методы оценки динамики изменения содержания МСК в тканях опухоли in vivo

2.6.1. Оценка динамики изменения содержания МСК по люциферазной активности в лизатах опухолевой ткани

2.6.2 Анализ динамики изменения содержания МСК с помощью метода биолюминесцентного in vivo имиджинга

2.7. Перевиваемые опухоли мышей, методы их трансплантации и оценки противоопухолевого эффекта

2.7.1. Лабораторные животные

2.7.2. Модели опухолевого роста

2.7.3. Методы оценки противоопухолевого эффекта

2.8.Статистическая обработка

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Характеризация мезенхимальных стволовых клеток

3.1.1. Иммунофенотипирование МСК

3.1.2. Дифференцировка МСК in vitro

3.1.3. Оценка миграционной активности МСК in vitro

3.2. Создание плазмидных конструкций, отработка методик их введения,

получение трансфицированных МСК

3.2.1. Получение плазмидных конструкций, несущих гены ЦДА-UPRT и ЦДА-UPRT-VP22

3.2.2. Сравнительная химическая трансфекция

3.2.3.Электропорация

3.3. Оценка экспрессии терапевтических генов

3.3.1. Экспрессия гена ЦДА-UPRT в МСК

3.3.2. Экспрессия гена ЦДА в HEK293T

3.4. Оценка чувствительности клеток к 5-ФЦ и 5-ФУ

3.5. Оценка цитотоксического эффекта системы ЦЦА-и?КТ/5-ФЦ in vitro

3.5.1. Оценка цитотоксической активности системы ЦДА-ЦРКШ-ФЦ при монокультивировании

3.5.2. Оценка опосредованного цитотоксического эффекта системы ТТДА-ЦР"ЯТ/5-Ф"Ц при совместном культивировании

3.6. Оценка динамики изменения содержания МСК в тканях опухоли in vivo

3.6.1. Анализ люциферазной активности в лизатах опухоли

3.6.2. Биолюминесцентный анализ динамики изменения содержания МСК в опухоли LLC (биолюминесцентный in vivo имиджинг)

3.7. Оценка противоопухолевого эффекта модифицированных МСК на моделях меланомы B16 и аденокарциномы легких Льюис LLC

3.7.1. Противоопухолевый эффект генетически модифицированных МСК на модели мышиной меланомы B16

3.7.1.1. Противоопухолевый эффект МСК, продуцирующих ЦДА-UPRT и ЦДА-UPRT-VP22, на модели мышиной меланомы B16

3.7.1.2. Противоопухолевая активность МСК, продуцирующих ЦДА-UPRT в комбинации с лизомустином на модели мышиной меланомы B16

3.7.2. Противоопухолевая активность генетически модифицированных МСК на модели аденокарциномы легких Льюис LLC

3.7.2.1. Противоопухолевая активность МСК, продуцирующих ЦДА-UPRT и ЦДА-UPRT-VP22, на модели аденокарциномы легких LLC

3.7.2.2. Противоопухолевый эффект МСК, продуцирующих ЦДА-UPRT, в комбинации с лизомустином на модели аденокарциномы легких Льюис LLC

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

5-ФУ- 5-фторурацил 5-ФЦ- 5-фторцитозин CD - кластер дифференцировки CMV - цитомегаловирус человека

DMEM - минимальная среда Игла, модифицированная Дульбекко EDTA - этилендиаминтетраацетат натрия EGF- эпидермальный фактор роста EGFP - ген зеленого белка

HER2 - эпидермальный фактор роста рецептора человека

HGF- фактор роста гепатоцитов

HSP70- белок теплового шока 70 кДа

HSV1 - вирус простого герпеса типа

KOE- колониеобразующие единицы

LB - среда Лурия-Бертани

MEM - минимальная среда Игла

MMP- матриксные металлопротеиназы

MTT -3-(4,5-диметил-2-тиазолил-)-2,5-дифенил-2н- бромид тетразолил

NK- клетки - естественные киллеры

PBS - фосфатно-солевой буфер

TGF- трансформирующий фактор роста

TRAIL- цитокин семейства факторов некроза опухоли, лиганд, вызывающий апоптоз (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)

UPRT- урацил фосфорибозилтрансфераза

УБОБ - эндотелиальный фактор роста сосудов УР22-белок оболочки вируса герпеса чека (ШУ1) В- вольт

ГСК-гемопоэтические стволовые клетки

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИЛ- интерлейкин

ИФ - интерферон

кДНК - комплементарная ДНК

кмМСК - мезенхимальные стволовые клетки, выделенные из костного мозга

мРНК - матричная РНК

МСК - мезенхимальные стволовые клетки

мФ - миллифарад

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РНК - рибодезоксинуклеиновая кислота

ТАF - опухолеассоциированные фибробласты

УАП - урокиназный активатор плазминогена

УАПР - рецептор к урокиназному активатору плазминогена

ФНО - фактор некроза опухолей

ЦДА - цитозиндезаминаза

Введение диссертации (часть автореферата) на тему ««Изучение противоопухолевой активности мезенхимальных стволовых клеток, экспрессирующих цитозиндезаминазу, на моделях меланомы и аденокарциномы легких in vivo»»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования

Каждый год по всему миру регистрируются миллионы случаев заболевания раком. В частности, в США, по данным Национального центра статистики заболеваний, прогнозируется регистрация около 168 5210 новых случаев заболеваний и 595 690 случаев гибели пациентов от онкологических заболеваний. [171]. Согласно некоторым данным, около 20% онкобольных с зарегистрированным диагнозом умирают в течение первых 5 лет. Особое опасение вызывает тот факт, что у некоторых форм рака, таких как лейкемия и рак мозга средний возраст пациентов начинает значительно снижаться [171, 5]. На сегодняшний день, в России порядка 2,5 миллионов пациентов состоит на учете с онкологическими заболеваниями. Каждый год от рака в России гибнут около 300 тыс. человек [5]. В среднем, пятилетняя выживаемость онкобольных составляет 4% рак поджелудочной железы, 15% рак легких, 7% рак печени, 5% глиобластомы. Даже для рака простаты и молочной железы, отличающихся хорошей пятилетней выживаемостью (порядка 80%), лечение на поздних стадиях остается малоэффективным [41]. Несмотря на обилие информации о различных противораковых агентах, современные методы лечения в клинической практике имеют тяжелые и длительные побочные эффекты. И хотя, современные режимы химиотерапии уже не оказывают таких тяжелых системных токсических эффектов, как прежде, до сих пор часто наблюдаются острые и отсроченные побочные эффекты такие, как появление язв слизистой ротовой полости, тошноты, когнитивных нарушений [22].

Успешное применение многих противоопухолевых препаратов возможно только в высоких концентрациях, вызывающих тяжелые системные токсические эффекты. Одним из способов решения этой проблемы, может быть разработка системы адресной доставки противоопухолевых препаратов к опухолям и их метастазам. Это позволит не только повысить эффективность терапии, но и свести к минимуму системные токсические эффекты. Перспективным направлением в этой области является генная терапия -терапия, основанная на адресной доставке различных терапевтических генов. Продукт экспрессии этих генов оказывает определенное противоопухолевое действие. Поиск оптимального средства доставки этих генов представляется ключевым моментом в разработке нового перспективного терапевтического направления [181,163].

Подавляющее большинство подходов, представленных в исследовательской литературе, основано на использовании вирусных векторов в качестве средства доставки необходимых терапевтических генов. Этот метод имеет ряд преимуществ, например, высокий уровень трансфекции и экспрессии генов, как ex vivo, так и, in vivo. Однако вирусная доставка обладает и серьезными недостатками, важными из которых являются, реакция иммунной системы организма и повышенный риск мутагенности. Вирусные вектора могут подвергаться биологической элиминации еще до того момента, как успеют достигнуть цели. Исходя из этого, использование в качестве средства доставки аутологичных/ аллогенных клеток, обладающих определенным тропизмом к опухоли, можно рассматривать как альтернативный и более безопасный подход. Основными направлениями в этой области являются использование клеток иммунной системы и стволовых клеток организма [70].

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК)- это мультипотентные «взрослые» стволовые клетки, обладающие определенным тропизмом к опухоли и ее метастазам, а также, низкой иммуногенностью. Немаловажным преимуществом их использования является относительная легкость выделения МСК из различных источников, в том числе из костного мозга, жировой ткани, пуповины, фетальной печени, мышечной и легочной ткани. После выделения, МСК можно легко размножить их ex vivo для дальнейшей трансфекции и введения в организм [68, 207].

Ген цитозиндезаминазы (ПДА) относят к, так называемым, суицидальным генам (его экспрессия ведет к гибели клетки хозяина). Представленный только у прокариот и грибов, в обычных условиях, этот фермент катализирует превращение цитозина в урацил, способствуя функционированию пиримидинового «спасательного пути», помогающего организмам использовать экзогенные пиримидиновые основания и нуклеозиды. Интересным свойством данного фермента является его способность превращать относительно нетоксичный субстрат 5-фторцитозин (5-ФЦ) в мощный противоопухолевый агент 5-фторурацил (5-ФУ), уже применяющийся в онкологии. Сочетание адресной доставки гена ПДА с системным введением ее субстрата 5-ФЦ рассматриваться как весьма перспективная схема в противоопухолевой генной терапии. Однако, как отмечалось ранее, подавляющее большинство работ, посвященных системе ЦДА/5-ФЦ, использует, в качестве средства доставки генов в МСК ex vivo, вирусные вектора [120,101]. В связи с этим, разработка и доклиническая оценка эффективности генетически модифицированных МСК, как средства доставки гена цитозиндезаминазы, является актуальной задачей для генной терапии рака.

Цели и задачи исследования

Цель исследования - изучение противоопухолевой активности генетически модифицированных МСК, экспрессирующих цитозиндезаминазу, на экспериментальных моделях перевиваемых солидных опухолей мышиной меланомы В16 и аденокарциномы легких Льюис LLC.

Задачи:

1. Создание, отработка методики трансфекции и оценка экспрессии плазмидных конструкций кодирующих гибридный фермент, состоящий из цитозиндезаминазы слитой с ферментом урацилфосфорибозилтрансферазой (ЦДА-UPRT), а также данный гибридный фермент, слитый с белком оболочки вируса простого герпеса 1 типа- VP22 (ЦДА-UPRT-VP22);

2. Отработка условий культивирования МСК, оценка их биологических свойств, а также получение трансфицированных МСК, экспрессирующих заявленные плазмидные конструкции;

3. Оценка цитотоксического эффекта гибридного фермента ЦДА-UPRT в присутствии 5-фторцитозина in vitro;

4. Оценка противоопухолевой активности трансфицированных МСК in vivo на моделях мышиной меланомы и аденокарциномы легких;

5. Оценка эффективности комбинированной терапии, сочетающей введение трансфицированных МСК и химиопрепарата лизомустина in vivo на моделях мышиной меланомы и аденокарциномы легких.

Научная новизна

Впервые подобраны эффективные условия для временной плазмидной трансфекции МСК, экспрессирующих противоопухолевые белки. Впервые изучена противоопухолевая активность МСК, экспрессирующих цитозиндезаминазу слитую с урацилфосфорибозилтрансферазой (ЦДА-UPRT) и ЦДА-UPRT слитую с белком оболочки вируса простого герпеса 1 типа -VP 22 (ЦДА-UPRT-VP22) на перевиваемых моделях мышиной меланомы В16 и аденокарциномы легких Льюис LLC. Впервые показана эффективность и подобраны режимы введения для комбинированной терапии, включающей МСК, экспрессирующие ЦДА-UPRT, и химиотерапевтический агент -лизомустин на перевиваемых моделях мышиной меланомы В16 и аденокарциномы легких Льюис LLC.

Практическая значимость

Полученные данные об эффективности терапии с использованием МСК, несущих гены ПДА-UPRT и ТТД A-HPRT-VP22, с системным введением 5-ФЦ на опухолевых моделях мышиной меланомы В16 и аденокарциномы легких LLC могут послужить основанием для проведения клинических испытаний. Разработанные методики выделения, культивирования и доставки генов в МСК могут послужить основанием для разработки противоопухолевой генной терапии, с использованием генов других противоопухолевых агентов, клиническое применение которых было ограничено из-за их высокой токсичности. Кроме того, данная методика может послужить основанием для разработки дизайна генной терапии в регенеративной и иммуномодулирующей терапии, с доставкой широкого спектра генов.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 124 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, заключение, выводы и список используемой литературы (207 источников). Работа содержит 1 таблицу и 25 рисунков.

Апробация работы

Основные положения диссертации были доложены на межлабораторном коллоквиуме ИМБ имени Энгельгардта РАН (2016 г) и на следующих конференция:

1. 16-я Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология -наука 21 века», Пущино, 16-21 апреля 2012 г.

2. 17-я Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология -наука 21 века», Пущино, 22-26 апреля 2013 г.

3. Federation of European Biochemical Societies CONGRESS 2013 "Mechanisms in Biology" July 6th - 11th 2013, St. Petersburg, RUSSIA

Публикации

По теме научного исследования было опубликовано 7 научных работ в т.ч. 3 тезиса, 3 статьи, 2 из которых в рекомендованном ВАК РФ журнале «Молекулярная биология» и 1 в журнале «Journal of Gene Medicine», официальном журнале Японского общества генной терапии (Japan Society of Gene Therapy) и Австралийского общества

генной терапии (Australasian Gene Therapy Society), индексируемого базами данных Web

of Science и Scope. Получен 1 патент РФ.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

Статьи в рецензируемых журналах и патенты

1. Каршиева С.Ш., Красикова Л.С., Белявский А.В. Мезенхимные стволовые клетки как средство противоопухолевой терапии.//Молекулярная биология, 2013, т. 47, №1, с. 50-60.

2. Красикова Л.С., Каршиева С.Ш., Чеглаков И.Б., Белявский А.В. Мезенхимные стволовые клетки, экспрессирующие цитозиндезаминазу, ингибируют рост мышиной меланомы in vivo.ll Молекулярная биология, 2015, том 49, № 6, с. 10071015.

3. Krassikova LS, Karshieva SS, Cheglakov IB, Belyavsky AV. Combined treatment, based on lysomustine administration with mesenchymal stem cells expressing cytosine deaminase therapy, leads to pronounced murine Lewis lung carcinoma growth inhibition. J Gene Med., 2016. 18(9):220-33. doi: 10.1002ljgm.2894.

4. Каршиева С.Ш., Красикова Л.С., Белявский А.В. Патент на изобретение «Рекомбинантная плазмида рCрG-CytDalupp для экспресси гибридного белка цитозиндезаминаза-урацилфосфорибозилтрансфераза, рекомбинантная плазмида рCрG-CytDalupplVP22 для экспрессии гибридного белка цитозиндезаминаза-урацилфосфорибозилтрансфереза- vp22, лечебная композиция для терапии онкологических заболеваний и способ ее применения» №2580220, приоритет от 07.11.2012.

Тезисы

5. Красикова Л.С., Далина А. А., Каршиева С. Ш., Винокуров М.Г., Белявский А. В. Противоопухолевая активность генетически модифицированных мезенхимальных стволовых клеток, экспрессирующих цитозиндеаминазу и TRAIL, in vitro. 1116-я Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология -наука XXI века», Пущино, 16-21 апреля 2012 г., Сборник тезисов, с. 261-262.

6. Красикова Л.С., Каршиева С.Ш., Винокуров М.Г., Белявский А.В. Противоопухолевый эффект мезенхимальных стволовых клеток, экспрессирующих цитозиндеаминазу, на модели мышиной аденокарциномы легких Льюис.//17-я

Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология -наука XXI века», Пущино, 22-26 апреля 2013 г., Сборник тезисов, с.426.

7. Krasikova L., Karshieva S., Krasnov V., Vinokurov M., Belyavsky A. Mesenchymal stem cells expressing cytosine deaminase inhibit growth of murine melanoma in vivo. FEBS Congress, Saint Petersburg, Russia, July 6-11, 2013. SW04. S21-18 http ://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1111 /feb s.12340/pdf

Личный вклад автора в исследование

Автор непосредственно участвовал в разработке и корректировке выполненного исследования. Самостоятельно проведен анализ специальной современной отечественной и зарубежной литературы в области заявленной проблемы. Участвовал в проведении всех экспериментальных исследований in vitro и in vivo. По результатам проведенной работы был сделан анализ полученных данных и сформулированы достоверные обоснованные выводы.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Показана эффективность противоопухолевой терапии in vivo с использованием МСК, несущих гены ЦДА-UPRT и ЦДА-UPRT-VP22, при системном введения 5-ФЦ на перевиваемых опухолевых моделях мышиной меланомы В16 и аденокарциномы легких Льюис LLC;

2. Показана эффективность комбинированной противоопухолевой терапии in vivo, с использованием МСК, экспрессирующих гены ЦДА-UPRT, при многократном системном введении 5-ФЦ и однократном системном введении лизомустина, на опухолевых моделях мышиной меланомы В16 и аденокарциномы легких Льюис LLC.

Внедрение результатов исследования

Материалы диссертации послужили основанием для создания патента «Рекомбинантная плазмида рсрg- сytda/upp для экспресси гибридного белка цитозиндезаминаза-урацилфосфорибозилтрансфераза, рекомбинантная плазмида рсрg-сytda/upp/vp22 для экспрессии гибридного белка цитозиндезаминаза-урацилфосфорибозилтрансфереза- vp22, лечебная композиция для терапии онкологических заболеваний и способ ее применения» (RU 2580220).

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. История и опыт применения МСК

Впервые термин «стволовая клетка» был введен русским гистологом Александром Максимовым на заседании Берлинского гематологического общества в 1909 г. Доклад был посвящен описанию возможных кандидатов в «гемопоэтические стволовые клетки» (ГСК) и их предполагаемых свойств [115]. Начиная с конца 19 века, в науке начинают появляться упоминания о концепции стволовых клеток. В то время это была скорее теория объясняющая способность определенных типов тканей в организме к самообновлению, притом, что период жизни специализированных клеток в этих тканях сравнительно недолгий. Многие годы спустя, название «стволовые клетки» уже использовалось для вполне конкретного типа клеток, при этом началось активное исследование методов и источников для выделения потенциальных стволовых клеток. В это же время начинается разработка анализов, позволяющих определить и стандартизировать конкретные свойства стволовых клеток.

Важным этапом в исследовании стволовых клеток стали работы исследовательской группы Фриденштайна (Friedenstein) и его коллег в 1960-1970 х годах. В этих работах исследователями проводилась гетеротопическая трансплантация клеток, полученных из аспиратов костного мозга крыс, и оценивался их остеогенный, хондрогенный и фиброгенный потенциал in vitro и in vivo. Авторы исследования помешали образцы костного мозга в культуральные условия, на пластиковые культуральные чашки, спустя 4 часа, все не прикрепившиеся клетки удалялись из среды. Как теперь известно, это было подавляющее большинство ГСК и их более зрелых потомков. Оставшееся на пластике незначительное количество клеток имело разнообразную гетерогенную морфологию, но клетки, демонстрировавшие наиболее выраженную адгезию к культуральному пластику обладали веретенообразной формой и формировали «островки» по 2-4 клетки. Спустя примерно 3-4 дня, эти клетки начинали активно делиться, и вся популяция приобретала однообразную веретенообразную (фибробластоподобную) морфологию, а при разрастании колонии in vitro некоторые из клеток стали приобретать признаки остеоцитов и хондроцитов. В результате проведенных исследований авторы пришли к выводу, что во всей массе клеток, находящихся в костном мозге, остеогенным потенциалом обладает лишь очень небольшая субпопуляция клеток. Эти клетки явно отличались от ГСК костного мозга, обладали фибробластоподобной морфологией и хорошей адгезией. Кроме того, при высевании in vitro всей популяции клеток, полученной из костного мозга, в

сравнительно небольшой плотности (клональная плотность), образовывались отдельные колонии, инициированные единичными клетками, что привело к употреблению термина КОЕф (колониеобразующая единица фибробластов) [50, 51,4 ]. Оценка динамики процессов, происходящих in vitro, и доказательства клональной природы происхождения увеличивающейся массы клеток проводилось путем введения в хромосомы клеток, радиоактивно меченного 3Н-тимидина и последующего фотографирования, через фиксированные промежутки времени [51,53].

В период с конца 1980х по 1990е годы в ряде работ была определена связь МСК, выделенных из костного мозга, с тканями, развивающимися из мезенхимы, а также определены первые поверхностные маркеры -CD73 и CD105 [72,74]. Трансплантация этих клеток в условия in vivo привела к образованию целого ряда клеток, участвующих в образовании костей, хрящей, жировой ткани и связок. Это привело к тому, что к 1988 году в литературе для этого типа клеток стал применяться термин «остеогенные стволовые клетки» или «костномозговые стромальные стволовые клетки» [135]. Однако наиболее впечатляющим открытием была способность МСК дифференцироваться в фиброзную, костную и хрящевую ткань в условиях in vivo, даже после 30 клеточных удвоений в условиях in vitro[52].

Определенный вклад в концепцию МСК также был внесен рядом классических экспериментов по трансплантации костного мозга летально облученным животным и гетеротопическая трансплантация аспиратов костного мозга животным в брюшную полость, с последующим образованием остеоцитов и хондроцитов de novo. Сам термин «мезенхимальная стволовая клетка» был впервые введен в работах Каплана [17]. МСК иногда называют, как мезенхимальные стромальные клетки, подчеркивая тем самым, что эти клетки относятся к подтипу не гемопоэтических «взрослых стволовых клеток», берущих свое начало из мезодермы [148].

В настоящее время, под термином МСК в литературе понимаются постнатальные («взрослые») стволовые клетки, обладающие способностью к самообновлению в течение длительного времени без значительных изменений их основных свойств, а также к дифференцировке в различные специализированные клеточные линии и типы, при определенных физиологических или экспериментальных условиях. Как и эмбриональные стволовые клетки, МСК обладают способностью к дифференцировке как в клетки мезодермального происхождения (хондроциты, остеоциты, адипоциты), так и экто - и энтодермального типа. МСК присутствуют во всех типах тканей организма. Источниками

для получения МСК могут быть: костный мозг, жировая ткань, пуповина (Вартонов студень, пуповинная кровь), эмбриональная печень, мышечная ткань, ткань легкого. Сравнительно простая методика культивирования МСК позволяет легко размножать этот тип клеток в условиях in vitro. Возможные варианты применения этих клеток в будущем представляются гораздо шире, чем предполагалось учеными ранее, во многом, из-за отсутствия этических ограничений при получении и работе с МСК, как, например, в случае эмбриональных стволовых клеток.

Несмотря на то, что в литературе накоплено довольно много информации о свойствах МСК, информации о характеристиках самих МСК по- прежнему недостаточно. МСК выделенные из различных источников (по различным методикам), могут обладать весьма различающимися характеристиками. В связи с этим, в 2006 году Международным Сообществом Клеточной Терапии (International Society for Cellular Therapy) был разработан список минимальных требований, которым должны удовлетворять клетки человека, чтобы называться МСК [37]:

1. МСК должны обладать хорошей адгезией к культуральному пластику, при стандартных условиях культивирования;

2. на поверхности МСК должны присутствовать маркеры CD73, CD90, CD105 и отсутствовать CD45, CD34, CD14, CD11b, CD79-a или CD19, а также HLA-DR;

3. МСК должны обладать способностью к дифференцировке в остеобласты, адипоциты и хондроциты при стандартных культуральных условиях.

Следует отметить, что применение этого стандарта на практике связано с рядом трудностей. К примеру, в литературе упоминаются случаи получения неадгезивной популяции МСК человека из аспиратов костного мозга. Причем, при сравнении пролиферативной способности, а также способности к остеогенной и хондрогенной дифференцировке у адгезивной и неадгезивной субпопуляции МСК, полученных из одного образца аспирата костного мозга, отличий не выявлено [191]. Кроме того, следует учитывать, видоспецифичность (данный стандарт был разработан для МСК человека), время нахождения в культуре и источник выделения.

1.2. Характеристика МСК

1.2.1. Оценка характеристик МСК

На сегодняшний день, технический уровень анализов, применяющихся для оценки свойств и характеристик МСК, позволяет собрать довольно много данных об этих

клетках. Основной проблемой является отсутствие единой концепции оценки для этой информации. Большинство существующих подходов базировались на концепции, разработанной для ГСК т.к. исторически, именно ГСК раньше попали в поле зрения ученых, МСК же рассматривались больше как субпопуляция клеток, составляющих строму и микроокружение для ГСК. Согласно основному критерию оценки ГСК, единичная гемопоэтическая стволовая клетка должна обладать способностью последовательно восстанавливать кроветворение у летально облученных мышей в течение длительного периода времени. Исходя из этого, к МСК могут применяться следующие требования [15]:

1. «Стволовость» или клоногенность клеток в условиях не только in vitro, но и при трансплантации in vivo;

2. Мультипотентность (с уверенностью доказать мультипотентность клетки возможно, только при проведении анализов на уровне единичных клеток);

3. Самообновление, т.е. способность популяции стволовых клеток поддерживать без изменений свой фенотип и функции, как у их предшественников.

1.2.2 Клоногенность

Согласно классическим представлениям, костномозговые МСК (кмМСК), обладают клоногенностью, если их единичные клетки способны давать начало колониям фибробластоподобных клеток в условиях in vitro культуры. В современных анализах, руководствуются представлением, что кмМСК обладают клоногенностью, если они способны образовывать колонии при высевании в низкой плотности, т.е. плотности исключающей возможность межклеточного контактного взаимодействия. Важным моментом является тот факт, что кмМСК должны обладать клоногенностью, даже при высевании в высокой плотности, однако в данном случае, любой количественный анализ единичных колоний станет невозможным.

Пока не выявлено специальных маркеров, которые бы позволили выделить мультипотентные КОЕф от их более коммитированных потомков. Утверждение о том, что любая стволовая клетка в костном мозге является клоногенной, не свидетельствует о том, что все полученные in vitro КОЕф автоматически будут являться стволовыми клетками. Единственная установленная зависимость на сегодняшний день, это прямая корреляция между количеством КОЕф и количеством МСК в образцах. Клоногенность фракции кмМСК может быть повышена, при положительной селекции клеток по маркерам STRO-1 и MCAM [172,160]

При анализе полученных первичных культур МСК, следует учитывать, что, хотя все выделенные клетки являются потомками КОЕф, в полученной культуре будут также присутствовать клетки с ограниченным, но четко выраженным потенциалом к росту в культуре. Поэтому первичные культуры клеток, полученные при высевании клеток в клоногенной и не в клоногенной плотности, так сильно отличаются друг от друга, однако, ни одна из них не может называться стопроцентной культурой МСК. Конечно, в культуре, полученной от одной или всего нескольких КОЕф возможно более гомогенное распределение определенных маркеров. Однако даже в культуре, теоретически полученной из одной КОЕф, клетки начинают стохастически делиться до определенного момента, а затем, часть клеток может начать дифференцироваться в культуре или же перейти в состояние старения или сенесенса («senescence») [160 ]. В связи с этим, однозначно утверждать, о сохранения КОЕф потенциала в культуре МСК возможно, только если единичные клетки, потомки изначально выделенной и размноженной в условиях in vitro КОЕф, при помещении их в условия in vivo начинают дифференцироваться и давать начало новым тканям. Подобный подход к оценке клоногенности МСК хотя и является общепризнанным, однако, практически не реализуемым на практике. Поэтому, на сегодняшний день, нельзя с уверенностью утверждать, что, в полученных из аспиратов костного мозга или других тканей, адгезивных культурах клеток действительно происходит размножение именно МСК, а не просто рост определенной популяции клеток, при одновременном истощении пула стволовых клеток [172,160].

1.2.3. Мультипотентность

МСК, полученные из разных источников должны обладать мультипотентностью. Еще в ранних работах Фриденштайна и Каплана было показано, что МСК способны дифференцироваться в остеоциты, хондроциты, адипоциты, фибробласты (периостеум), а также в клетки стромы костного мозга. Кроме того, в литературе встречается множество работ с гетеротопической трансплантацией МСК, дифференцировавшихся в клетки скелетной, гладкой и мышечной мускулатуры, а также клетки эндотелия. Данный подход уже не является новым, однако, не настолько общепризнанным как предыдущий [14]. Независимо от источника выделения МСК, их способность к дифференцировке в большинстве случаев оценивается только в условиях in vitro. Однако как было показано в одной из работ, способность МСК дифференцироваться в условиях in vitro не обязательно коррелирует с их способностью дифференцироваться in vivo, даже при проведении этих анализов параллельно на образцах одной культуры МСК [13]. Хотя в литературе часто

встречается утверждение, что МСК, выделенные из разных источников, обладают одинаковой способностью к дифференцировке, в ряде работ проявляются также данные противоречащие этой теории. В частности было показано, что при трансплантации МСК, выделенных из разных источников, происходит преимущественная дифференцировка клеток в те типы тканей, из которых эти МСК были выделены. Так, при трансплантации в одинаковых условиях, МСК, выделенных из пульпы зуба и из аспиратов костного мозга, в первом случае, гораздо чаще образовывался дентин, а не костная ткань [61 ]. Таким образом, можно предположить, что в организме скорее присутствует не один тип «универсальных» МСК, а множество классов тканеспецифичных МСК с тканеспецифичной предрасположенностью к дифференцировке.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Красикова Людмила Сергеевна, 2017 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алексеенко И.В., Кузьмин Д.В., Плешкан В.В., Зиновьева М.В., Свердлов Е.Д. Цитотоксические эффекты генов цитозиндезаминазы и тимидинкиназы вируса простого герпеса в клетках меланомы не зависят от силы промоторов // Биоорган. химия.- 2013.- V.39.-P. 745-748.

2. Дементьева Н.П., Корман Д.Б. Нитрозометилмочевина- 30 лет изучения и применения для лечения онкологических больных// Вопросы онкологии.- 2001.-V.47.№6.-P.655-661.

3. Сидорин Г.И., Дьякова Л.И., Луковникова Л.В., Сходкина Н.И., Битти М.А., Черкащенко О.С. Токсикологическая характеристика противоопухолевого препарата лизомустина // Медицина труда и промышленная экология.- 2010.- №4. -P. 19-24.

4. Скоробагатова Н.Г., Волкова Н.А., Петренко А.Ю. Остеогенные и адипогенные свойства фибробластоподобных клеток-предшественников фетальной печени человека// Цитология.- 2008.-V.50. №4.- Р.317-322.

5. Статистика онкологических заболеваний [Электронный ресурс].-Всемирная Медицинская Корпорация, 2016.-Режим доступа: http://womco.ru/onkologiya

6. Стрелков Р.Б. Экспресс-метод статистической обработки экспериментальных и клинических данных:учебно-методическое пособие для студентов, аспирантов и клинических ординаторов//- М.: МОЛГМИ.- 1986.-86 с

7. A Phase I Study of Cytosine Deaminase-Expressing Neural Stem Cells in Combination with Oral 5-Fluorocytosine and Leucovorin for the Treatment of Recurrent High-Grade Gliomas. Research Study Summary [Электронный ресурс].-Режим доступа: http://clinicaltrials.coh.org/study_display.aspx?pid=13401&lan=EN

8. A Study ofTNFerade™ Biologic With 5-FU and Radiation Therapy for First-Line Treatment of Unresectable Locally Advanced Pancreatic Cancer [Электронный ресурс ].- Режим доступа: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00051467

9. Abdul Halim N.S., Fakiruddin K.S., Ali S.A., Yahaya B.H. A comparative study of non-viral gene delivery techniques to human adipose-derived mesenchymal stem cell // Int. J. MolSci.- 2014.- V.15.- P.15044-15060.

10. Aggarwal S., Pittenger M.F. Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses // Blood.- 2005.- V.105,№4.- Р.1815-22.

11. Bagci-Onder T., Wakimoto H., Anderegg M., Cameron C., Shah K. A dual PI3K/mTOR inhibitor, PI-103, cooperates with stem cell-delivered TRAIL in experimental glioma models // Cancer Res.- 2011.- V.71, №1.- P.154-63.

12. Beltinger C., Fulda S., Walczak H., Debatin K.M. TRAIL enhances thymidine kinase/ganciclovir gene therapy of neuroblastoma cells // Cancer Gene Ther.- 2002.- V.9, №4.- Р.372-81.

13. Bianco P., Kuznetsov S.A., Riminucci M., Gehron Robey P. Postnatal skeletal stem cells // Methods Enzymol.- 2006.- V.419.-P.117-48.

14. Bianco P., Robey P.G. Skeletal stem cells. In Handbook of Adult and Fetal Stem Cells // San Diego: Lanza RP., CA: Academic Press, 2004.- pp. 415-424.

15. Bianco P., Robey P.G., Simmons P.J. Mesenchymal stem cells: revisiting history, concepts, and assays // Cell Stem Cell.- 2008.-V.2,№4.- Р.313-9.

16. Birnbaum T., Roider J., Schankin C.J., Padovan C.S., Schichor C., Goldbrunner R., Straube A. Malignant gliomas actively recruit bone marrow stromal cells by secreting angiogenic cytokines // J. Neurooncol.- 2007.- V.83, №3.- Р.241-7.

17. B16-F0. ATCC CRL6322 [Электронный резурс].- База данных ATCC.-2016.-Режим доступа: http://www.lgcstandards-atcc.org/products/all/CRL-6322.aspx?geo_country=ru

18. Caplan A.I. Mesenchymal stem cells // J. Orthop. Res.- 1991.- V.9, №5.- Р. 641-50.

19. Cavarretta I.T. Altanerova V., Matuskova M., Kucerova L., Culig Z., Altaner C. Adipose Tissue-derived Mesenchymal Stem Cells Expressing Prodrug-converting Enzyme Inhibit Human Prostate Tumor Growth // Molecular Therapy.- 2010.- V.18, №1.- Р.223-231.

20. Chang D.Y., Yoo S.W., Hong Y., Kim S., Kim S.J., Yoon S.H., Cho K.G., Paek S.H., Lee Y.D., Kim S.S., Suh-Kim H. The growth of brain tumors can be suppressed by multiple transplantation of mesenchymal stem cells expressing cytosine deaminase // Int. J. Cancer.- 2010.- V.127, №8.- Р.1975-83.

21. Cheah P.L., Looi L.M. p53: an overview of over two decades of study // Malays J. Pathol.- 2001.- V.23, №1.- Р.9-16.

22. Chemotherapy and you: A guide to self-help during cancer treatment. [Электронный ресурс].- National Institutes of Health Web, 2016.-Режим доступа: http://www.cancer.gov/publications/patient-education/chemo-and-you

23. Chen L., Tredget E.E., Wu P.Y.G., Wu Y. Paracrine factors of mesenchymal stem cells recruit macrophages and endothelial lineage cells and enhance wound healing // PLoS.ONE- 2008.- V.3, №4.- P.e1886

24. Chung S., Andersson T., Sonntag K.C., Björklund L., Isacson O., Kim K.S. Analysis of different promoter systems for efficient transgene expression in mouse embryonic stem cell lines // Stem. Cells.- 2002.-V.20, №2.- Р.139-45.

25. Coffelt S.B., Marini F.C., Watson K., Zwezdaryk K.J., Dembinski J.L., LaMarca H.L., Tomchuck S.L., Honer zu Bentrup K., Danka E.S., Henkle S.L., Scandurro A.B. The proinflammatory peptide LL-37 promotes ovarian tumor progression through recruitment of multipotent mesenchymal stromal cells // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 2009.- V.106, №10.- Р.3806-11.

26. Colin M., Moritz S., Schneider H., Capeau J., Coutelle C., Brahimi-Horn M.C. Haemoglobin interferes with the ex vivo luciferase luminescence assay: consequence for detection of luciferase reporter gene expression in vivo // Gene Ther.- 2000.- V.7, №15.-Р.1333-6.

27. Corcione A., Benvenuto F., Ferretti E., Giunti D., Cappiello V., Cazzanti F., Risso M., Gualandi F., Mancardi G.L., Pistoia V., Uccelli A. Human mesenchymal stem cells modulate B-cell functions // Blood.- 2006.- V.107, №1.- Р.367-72.

28. Covas D.T., Panepucci R.A., Fontes A.M., Silva W.A.Jr., Orellana M.D., Freitas M.C., Neder L., Santos A.R., Peres L.C., Jamur M.C., Zago M.A. Multipotent mesenchymal stromal cells obtained from diverse human tissues share functional properties and geneexpression profile with CD146+ perivascular cells and fibroblasts // Exp. Hematol.-2008.- V.36, №5.- Р.642-54.

29. Cselenyak A. Pankotai E., Horvath E.M., Kiss L., Lacza Z. Mesenchymal stem cells rescue cardiomyoblasts from cell death in an in vitro ischemia model via direct cell-to-cell connectionsю // BMC Cell Biol.- 2010.- V.11.- P.29.

30. Cunningham C.C., Chada S., Merritt J.A., Tong A., Senzer N., Zhang Y., Mhashilkar A., Parker K., Vukelja S., Richards D., Hood J., Coffee K., Nemunaitis J. Clinical and local biological effects of an intratumoral injection of mda-7 (IL24; INGN 241) in patients with advanced carcinoma: a phase I study // Mol. Ther.- 2005.- V.11, №1.- Р.149-59.

31. Cyclophosphamide and Fludarabine Followed By Interleukin-2 Gene-Modified Tumor Infiltrating Lymphocytes in Treating Patients With Metastatic Melanoma [Электронный ресурс ].- Режим доступа: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00062036

32. Dai J., Rabie A.B., Hagg U., Xu R. Alternative gene therapy strategies for the repair of craniofacial bone defects // Curr. Gene. Ther.- 2004.- V.4, №4.- Р.469-85.

33. Dalberto T.P., Nardi N.B., Camassola M. Mesenchymal stem cells as a platform for gene therapy protocols // Sci. Prog.- 2010.- V.93- P.129-40.

34. Davies L.A., Hyde S.C., Nunez-Alonso G., Bazzani R.P., Harding-Smith R., Pringle I.A., Lawton A.E., Abdullah S., Roberts T.C., McCormick D., Sumner-Jones S.G., Gill DR. The use of CpG-free plasmids to mediate persistent gene expression following repeated aerosol delivery of pDNA/PEI complexes // Biomaterials.- 2012.-V.33, №22.- Р.5618-27.

35. Direkze N.C., Hodivala-Dilke K., Jeffery R., Hunt T., Poulsom R., Oukrif D., Alison M.R., Wright N.A. Bone marrow contribution to tumor-associated myofibroblasts and fibroblasts // Cancer Res.- 2004.- V.64, №23.- Р.8492-5.

36. Djouad F., Plence P., Bony C., Tropel P., Apparailly F., Sany J., Noel D., Jorgensen C. Immunosuppressive effect of mesenchymal stem cells favors tumor growth in allogeneic animals // Blood.- 2003.- V.102, №10.- Р.3837-44.

37. Dominici M., Le Blanc K., Mueller I., Slaper-Cortenbach I., Marini F., Krause D., Deans R., Keating A., Prockop Dj., Horwitz E. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement // Cytotherapy.- 2006.-'.8,№4.-Р.315-7.

38. Doorn J., van de Peppel J., van Leeuwen J.P., Groen N., van Blitterswijk C.A., de Boer J. Pro-osteogenic trophic effects by PKA activation in human mesenchymal stromal cells // Biomaterials.- 2011.- V.32.- P.6089-6098.

39. Duarte S., Carle G., Faneca H., de Lima M.C., Pierrefite-Carle V. Suicide gene therapy in cancer: where do we stand now? // Cancer Lett.- 2012.- V.324, №2.- Р.160-70.

40. Dwyer R.M., Potter-Beirne S.M., Harrington K.A., Lowery A.J., Hennessy E., Murphy J.M., Barry F.P., O'Brien T., Kerin M.J. Monocyte chemotactic protein-1 secreted by primary breast tumors stimulates migration of mesenchymal stem cells // Clin Cancer Res.- 2007.- V.13, №17.- Р.5020-7.

41. Edwards B.K., Brown M.L., Wingo P.A., Howe H.L., Ward E., Ries L.A., Schrag D., Jamison P.M., Jemal A., Wu X.C., Friedman C., Harlan L., Warren J., Anderson R.N., Pickle L.W. Annual report to the nation on the status of cancer, 1975-2002, featuring population-based trends in cancer treatment // J. Natl. Cancer. Inst.- 2005.-V.97.- P.1407-1427.

42. Eliopoulos N., Stagg J., Lejeune L., Pommey S., Galipeau J. Allogeneic marrow stromal cells are immune rejected by MHC class I- and class II-mismatched recipient mice // Blood.- 2005.- V.106, №13.- Р.4057-65.

43. Evaluation of Safety of Rexin-G Gene Transfer for Advanced Pancreatic Cancer [Электронный ресурс].- Режим доступа: :

https ://clinicaltrials. gov/ct2/show/NCT00121745

44. Ezquer F., Ezquer M., Contador D., Ricca M., Simon V., Conget P. The antidiabetic effect of mesenchymal stem cells is unrelated to their transdifferentiation potential but to their capability to restore Th1/Th2 balance and to modify the pancreatic microenvironment // Stem Cells.- 2012.- V.30, №8.- P.1664-74.

45. Fakiruddin K.S., Baharuddin P., Lim M.N., Fakharuzi N.A., YusofN.A., Zakaria Z. Nucleofection optimization and in vitro anti-tumourigenic effect of TRAIL-expressing human adipose-derived mesenchymal stromal cells // Cancer Cell. Int.- 2014.- V.14, №1.- P.122.

46. Farquhar D., Pan B.F., Sakurai M., Ghosh A., Mullen C.A., Nelson J.A. Suicide gene therapy using E. coli beta-galactosidase // Cancer Chemother. Pharmacol.- 2002.- V.50, №1.- P.65-70.

47. Fortunati E., Bout A., Zanta M.A., Valerio D., Scarpa M. In vitro and in vivo gene transfer to pulmonary cells mediated by cationic liposomes // Biochim. Biophys. Acta.-1996.- V.1306, №1.- P.55-62.

48. Frank O., Rudolph C., Heberlein C., von Neuhoff N., Schröck E., Schambach A., Schlegelberger B., Fehse B., Ostertag W., Stocking C., Baum C. Tumor cells escape suicide gene therapy by genetic and epigenetic instability // Blood.- 2004.- V.104, №12.-P.3543-9.

49. Freytag S.O., Khil M., Stricker H., Peabody J., Menon M., DePeralta-Venturina M., Nafziger D., Pegg J., Paielli D., Brown S., Barton K., Lu M., Aguilar-Cordova E., Kim J.H. Phase I study of replication-competent adenovirus-mediated double suicide gene therapy for the treatment of locally recurrent prostate cancer // Cancer Res.- 2002.- V.62, №17.- P.4968-76.

50. Friedenstein A.J., Deriglasova U.F., Kulagina N.N., Panasuk A.F., Rudakowa S.F., Luria E.A., Ruadkow I.A.. Precursors for fibroblasts in different populations of hematopoietic cells as detected by the in vitro colony assay method // Experimental hematology.- 1974.-V.2,№2.- P.83-92.

51. Friedenstein A. J., Chailakhjan R.K., Lalykina K.S. The development of fibroblast colonies in monolayer cultures of guinea-pig bone marrow and spleen cells // Cell Tissue Kinet.- 1970.-V.3.- P.393-403.

52. Friedenstein A.J., Chailakhyan R.K., Gerasimov U.V. Bone marrow osteogenic stem cells: in vitro cultivation and transplantation in diffusion chambers // Cell Tissue Kinet.-1987.- V.20, №3.- P.263-72.

53. Friedenstein A.J., Chailakhyan R.K., Latsinik N.V., Panasyuk A.F., Keiliss-Borok I.V. Stromal cells responsible for transferring the microenvironment of the hemopoietic

tissues.Cloning in vitro and retransplantation in vivo // Transplantation.- 1974.-V.17, №4.-Р.331-40.

54. Gene Therapy for the Treatment of Brain Tumors [Электронный ресурс].- Режим доступа: : https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00001328

55. Gnecchi M., He H., Noiseux N., Liang O.D., Zhang L., Morello F., Mu H., Melo L.G., Pratt R.E., Ingwall J.S., Dzau V.J. Evidence supporting paracrine hypothesis for Akt-modified mesenchymal stem cell-mediated cardiac protection and functional improvement // FASEB J.- 2006.- V.20,№6.- Р.661-9.

56. Gordon E.M., Cornelio G.H., Lorenzo C.C. 3rd, Levy J.P., Reed R.A., Liu L., Hall F.L.. First clinical experience using a 'pathotropic' injectable retroviral vector (Rexin-G) as intervention for stage IV pancreatic cancer // Int. J. Oncol.- 2004.- V.24, №1.- Р.177-85.

57. Gordon E.M., Hall F.L. Nanotechnology blooms, at last (Review) // Oncol Rep.- 2005.-V.13, №6.- Р.1003-7.

58. Grisendi G., Bussolari R., Veronesi E., Piccinno S., Burns J.S., De Santis G., Loschi P., Pignatti M., Di Benedetto F., Ballarin R., Di Gregorio C., Guarneri V., Piccinini L., Horwitz E.M., Paolucci P., Conte P., Dominici M. Understanding tumor-stroma interplays for targeted therapies by armed mesenchymal stromal progenitors: the Mesenkillers // Am. J. Cancer. Res.- 2011.- V.1, №6.- Р. 787-805.

59. Grivennikov S.I., Greten F.R., Karin M. Immunity, inflammation, and cancer // Cell.-2010.- V.140,№6.- Р.883-99.

60. Gronthos S, Graves SE, Ohta S, Simmons PJ. The STRO-1+ fraction of adult human bone marrow contains the osteogenic precursors // Blood.- 1994.- V.84,№12.- Р.4164-73.

61. Gronthos S., Brahim J., Li W., Fisher L.W., Cherman N., Boyde A., DenBesten P., Robey P.G., Shi S. Stem cell properties of human dental pulp stem cells // J. Dent. Res-2002.- V.81, №8.- Р.531-5.

62. Gronthos S., Simmons P.J., Graves S.E., Robey P.G. Integrin-mediated interactions between human bone marrow stromal precursor cells and the extracellular matrix // Bone.- 2001.-V.28, №2.- Р.174-81.

63. Gutova M., Najbauer J., Frank R.T., Kendall S.E., Gevorgyan A., Metz M.Z., Guevorkian M., Edmiston M., Zhao D., Glackin C.A., Kim S.U., Aboody K.S. Urokinase plasminogen activator and urokinase plasminogen activator receptor mediate human stem cell tropism to malignant solid tumors // Stem Cells.- 2008.- V.26, №6.- Р.406-13.

64. GVAX in Advanced Prostate Cancer Patients Made Lymphopenic [Электронный ресурс ].- Режим доступа: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00122005

65. Haaz M.C., Fischel J.L., Formento P., Renée N., Etienne M.C., Milano G. Impact of different fluorouracil biochemical modulators on cellular dihydropyrimidine dehydrogenase // Cancer Chemother Pharmacol.- 1996.- V.38, №1.-P.52-8.

66. Hackett P.B., Ekker S.C., Largaespada D.A., McIvor R.S.. Sleeping beauty transposon-mediated gene therapy for prolonged expression // Adv. Genet.- 2005.- V.54.- P.189-232.

67. Hall B., Andreeff M., Marini F. The participation of mesenchymal stem cells in tumor stroma formation and their application as targeted-gene delivery vehicles // Handbook of Experimental Pharmacology.- 2007.- P. 263-283

68. Hamada H., Kobune M., Nakamura K., Kawano Y., Kato K., Honmou O., Houkin K., Matsunaga T., Niitsu Y. Mesenchymal stem cells (MSC) as therapeutic cytoreagents for gene therapy // Cancer Sci.- 2005.-V.96,№3.- P.149-56.

69. Hara T., Tan Y., Huang L. In vivo gene delivery to the liver using reconstituted chylomicron remnants as a novel nonviral vector // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 1997.-V.94, №26.- P.14547-52.

70. Harrington K., Alvarez-Vallina L., Crittenden M., Gough M., Chong H., Diaz R.M., Vassaux G., Lemoine N., Vile R. Cells as vehicles for cancer gene therapy: the missing link between targeted vectors and systemic delivery? // Hum. Gene. Ther.- 2002.-V.13,№11.- P.1263-80.

71. Hayden M.S., Linsley P.S., Wallace A.R., Marquardt H., Kerr D.E. Cloning, overexpression, and purification of cytosine deaminase from Saccharomyces cerevisiae // Protein. Expr. Purif- 1998.- V.12, №2.- P.173-84.

72. Haynesworth S., Baber M., Caplan A. Cell surface antigens on human marrow-derived mesenchymal cells are detected by monoclonal antibodies // Bone.- 1992.-V.13.- P.69-80.

73. Haynesworth S.E., Baber M.A., Caplan A.I. Cytokine expression by human marrow-derived mesenchymal progenitor cells in vitro: effects of dexamethasone and IL-1 alpha // J. Cell. Physiol.- 1996.- V.166.- P.585-592.

74. Haynesworth S.E., Goshima J., Goldberg V.M., Caplan A.I. Characterization of cells with osteogenic potential from human bone marrow // Bone.- 1992.-V.13.-P.81-88.

75. Helledie T., Nurcombe V., Cool S.M. A simple and reliable electroporation method for human bone marrow mesenchymal stem cells // Stem Cells Dev- 2008.- V.17, №4.-P.837-48.

76. Hemmi H., Takeuchi O., Kawai T., Kaisho T., Sato S., Sanjo H., Matsumoto M., Hoshino K., Wagner H., Takeda K., Akira S. A Toll-like receptor recognizes bacterial DNA // Nature- 2000.- V.408, №6813.- P.740-5.

77. Hingtgen S., Ren X., Terwilliger E., Classon M., Weissleder R., Shah K. Targeting multiple pathways in gliomas with stem cell and viral delivered S-TRAIL and Temozolomide // Mol. Cancer. Ther.- 2008.-V.7, №11.- P.3575-85.

78. Hirschowitz E.A., Ohwada A, Pascal W.R., Russi T.J., Crystal R.G. In vivo adenovirus-mediated gene transfer of the Escherichia coli cytosine deaminase gene to human colon carcinoma-derived tumors induces chemosensitivity to 5-fluorocytosine // Hum. Gene Ther.- 1995.-V.6, №8.-P.1055-63.

79. Ho I.A., Chan K.Y., Ng W.H., Guo C M., Hui K.M., Cheang P., Lam P.Y. Matrix metalloproteinase 1 is necessary for the migration of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells toward human glioma // Stem Cells.- 2009.- V.27, №6.- P.1366-75.

80. Horwitz E.M., Gordon P.L., Koo W.K., Marx J.C., Neel M.D., McNall R.Y., Muul L., Hofmann T. Isolated allogeneic bone marrow-derived mesenchymal cells engraft and stimulate growth in children with osteogenesis imperfecta: Implications for cell therapy of bone // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 2002.-V.99, №13.- P.8932-7.

81. Huber B.E., Richards C.A., Krenitsky T.A. Retroviral-mediated gene therapy for the treatment of hepatocellular carcinoma: an innovative approach for cancer therapy // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 1991.- V.88, №18.- P.8039-43.

82. Hurford J.R.K., Dranoff G., Mulligan R.C., Tepper R.I. Gene therapy of metastatic cancer by in vivo retroviral gene targeting // Nat. Genet.- 1995.- V.10.- P.430-5.

83. Hyde S.C., Pringle I.A., Abdullah S., Lawton A.E., Davies L.A., Varathalingam A., Nunez-Alonso G., Green A.M., Bazzani R.P., Sumner-Jones S.G., Chan M., Li H., Yew N.S., Cheng S.H., Boyd A.C., Davies J.C., Griesenbach U., Porteous D.J., Sheppard D.N., Munkonge F.M., Alton E.W., Gill D.R. CpG-free plasmids confer reduced inflammation and sustained pulmonary gene expression // Nat. Biotechnol.- 2008.- V.26, №5.- P.549-51.

84. Immonen A., Vapalahti M., Tyynelä K., Hurskainen H., Sandmair A., Vanninen R., Langford G., Murray N., Ylä-Herttuala S. AdvHSV-tk gene therapy with intravenous ganciclovir improves survival in human malignant glioma: a randomised, controlled study // Mol. Ther.- 2004.- V.10, №5.- P.967-72.

85. Ireton G.C., Black M.E., Stoddard B.L. Crystallization and preliminary X-ray analysis of bacterial cytosine deaminase // Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr.- 2001.- V.57, №11.- P.1643-5.

86. Ishii M., Koike C., Igarashi A., Yamanaka K., Pan H., Higashi Y., Kawaguchi H., Sugiyama M., Kamata N., Iwata T., Matsubara T., Nakamura K., Kurihara H., Tsuji K.,

Kato Y. Molecular markers distinguish bone marrow mesenchymal stem cells from fibroblasts // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 2005.- V.332,№1.- P.297-303.

87. Iyer S., Rojas M. Anti-inflammatory effects of mesenchymal stem cells: nov el concept for future therapies // Expert. Opin. Biol. Ther.- 2008.- V.8.- P. 569-582.

88. Johann P.D., Vaegler M., Gieseke F., Mang P., Armeanu-Ebinger S., Kluba T., Handgretinger R., Müller I. Tumour stromal cells derived from paediatric malignancies display MSC-like properties and impair NK cell cytotoxicity // BMC Cancer.- 2010.-V.10.- P.501.

89. Jones E., McGonagle D. Human bone marrow mesenchymal stem cells in vivo // Rheumatology (Oxford).- 2008.- V.47,№2.- P.126-31.

90. Jones E.A., Kinsey S.E., English A., Jones R.A., Straszynski L., Meredith D.M., Markham A.F., Jack A., Emery P., McGonagle D. Isolation and characterization of bone marrow multipotential mesenchymal progenitor cells // Arthritis Rheum.- 2002.-V.46,№12.- P.3349-60.

91. Kean T.J., Lin P., Caplan A.I., Dennis J.E. MSCs: Delivery Routes and Engraftment, Cell-Targeting Strategies, and Immune Modulation // Stem. Cells Int.- 2013.-V.732742.

92. Khakoo A.Y., Pati S., Anderson S.A., Reid W., Elshal M.F., Rovira I.I., Nguyen A.T., Malide D., Combs C.A., Hall G., Zhang J., Raffeld M., Rogers T.B., Stetler-Stevenson W., Frank J.A., Reitz M., Finkel T. Human mesenchymal stem cells exert potent antitumorigenic effects in a model of Kaposi's sarcoma // J. Exp. Med.- 2006.- V.203, №5.- P.1235-47.

93. Kidd S., Spaeth E., Dembinski J.L., Dietrich M., Watson K., Klopp A., Battula V.L., Weil M., Andreeff M., Marini F.C. Direct evidence of mesenchymal stem cell tropism for tumor and wounding microenvironments using in vivo bioluminescent imaging // Stem Cells.- 2009.- V.27, №10.- P.2614-23.

94. Kidd S., Spaeth E., Klopp A., Andreeff M., Hall B., Marini F.C. The (in) auspicious role of mesenchymal stromal cells in cancer: be it friend or foe // Cytotherapy.- 2008.- V.10, №7- P.657-67.

95. Kievit E., Bershad E., Ng E., Sethna P., Dev I., Lawrence T.S., Rehemtulla A. Superiority of yeast over bacterial cytosine deaminase for enzyme/prodrug gene therapy in colon cancer xenografts // Cancer Res.- 1999.-V.59, №7.- P.1417-21.

96. Kikugawa M., Kaneko M., Fujimoto-Sakata S., Maeda M., Kawasaki K., Takagi T., Tamaki N. Purification, characterization and inhibition of dihydropyrimidinase from rat liver // Eur. J. Biochem.- 1994.- V.219 (1-2).- P.393-9.

97. Kim J.H., Kim J.Y., Kim S.U., Cho K.G. Therapeutic effect of genetically modified human neural stem cells encoding cytosine deaminase on experimental glioma // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 2012.-V.417, №1.- P.534-40.

98. Kim SM., Kim D.S., Jeong C.H., Kim D.H., Kim JH., Jeon HB., Kwon S.J., Jeun S.S., Yang Y.S., Oh W., Chang J.W. CXC chemokine receptor 1 enhances the ability of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells to migrate toward gliomas // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 2011.- V.407, №4.- P.741-6.

99. Kong Q.F., Sun B., Bai S.S., Zhai D.X., Wang G.Y., Liu Y.M., Zhang S.J., Li R., Zhao W., Sun Y.Y., Li N., Wang Q., Peng H.S., Jin L.H., Li H.L. Administration of bone marrow stromal cells ameliorates experimental autoimmune myasthenia gravis by altering the balance of Th1/Th2/Th17/Treg cell subsets through the secretion of TGF-beta // J. Neuroimmunol.- 2009.- V.207, №1-2.- P.83-91.

100. Kowalczyk D.W., Wysocki P.J., Mackiewicz A. Cancer immunotherapy using cells modified with cytokine genes // Acta Biochim. Pol.- 2003.- V.50, №3.- P.613-24.

101. Koyama F., Sawada H., Fuji H., Hamada H., Hirao T., Ueno M., Nakano H. Adenoviral-mediated transfer of Escherichia coli uracil phosphoribosyltransferase (UPRT) gene to modulate the sensitivity of the human colon cancer cells to 5-fluorouracil //Eur. J. Cancer.- 2000.- V.36, №18.-P.2403-10.

102. Lazarus H.M., Koc O.N., Devine S.M., Curtin P., Maziarz R.T., Holland H.K., Shpall E.J., McCarthy P., Atkinson K., Cooper B.W., Gerson S.L., Laughlin M.J., Loberiza F.R. Jr., Moseley A.B., Bacigalupo A. Cotransplantation of HLA-identical sibling culture-expanded mesenchymal stem cells and hematopoietic stem cells in hematologic malignancy patients // Biol. Blood Marrow Transplant.- 2005.- V.11, №5.-P.389-98.

103. Lee O.K., Kuo T.K., Chen W.M., Lee K D., Hsieh S.L., Chen T.H. Isolation of multipotent mesenchymal stem cells from umbilical cord blood // Blood.- 2004.- V.103, №5.- P.1669-75.

104. Lee R.H., Pulin A.A., Seo M.J., Kota D.J., Ylostalo J., Larson B.L., Semprun-Prieto L., Delafontaine P., Prockop D.J. Intravenous hMSCs improve myocardial infarction in mice because cells embolized in lung are activated to secrete the antiinflammatory protein TSG-6 // Cell Stem Cell.- 2009.- V.5, №1.- P.54-63.

105. Lemken M.L., Graepler F., Wolf C., Wybranietz W.A., Smirnow I., Schmidt U., Gregor M., Bitzer M., Lauer U.M.. Fusion of HSV-1 VP22 to a bifunctional chimeric Super CD suicide gene compensates for low suicide gene transduction efficiencies // Int. J. Oncol.- 2007.- V.30.- P. 1153-1161.

106. Li N., Sarojini H., An J., Wang E. Prosaposin in the secretome of marrow stroma-derived neural progenitor cells protects neural cells from apoptotic death // J. Neurochem.- 2010.- V.112, №6.- P.527-38.

107. Li Q., Yu Y., Bischoff J., Mulliken J.B., Olsen B.R. Differential expression of CD146 in tissues and endothelial cells derived from infantile haemangioma and normal human skin // J. Pathol.- 2003.- V.201, №2.- P.296-302.

108. Li S. Optimizing electrotransfection of Mammalian cells in vitro // CSH Protoc.-2006.- V.2006(1).

109. Lindberg M.F., Le Gall T., Carmoy N., Berchel M., Hyde S.C., Gill D.R., Jaffres P.A., Lehn P., Montier T. Efficient in vivo transfection and safety profile of a CpG-free and codon optimized luciferase plasmid using a cationic lipophosphoramidate in a multiple intravenous administration procedure // Biomaterials.- 2015.- V.59.- P.1-11.

110. Longley D.B., Harkin D.P., Johnston P.G. 5-fluorouracil: mechanisms of action and clinical strategies // Nat. Rev. Cancer.- 2003.- V.3, №5.-P.330-8.

111. Madeira C., Ribeiro S.C., Pinheiro I.S., Martins S.A., Andrade P.Z., da Silva C.L., Cabral J.M.. Gene delivery to human bone marrow mesenchymal stem cells by microporation // J. Biotechnol.- 2011.-V.151, №1.- P.130-6.

112. Mahmood A., Lu D., Lu M., Chopp M. Treatment of traumatic brain injury in adult rats with intravenous administration of human bone marrow stromal cells // Neurosurgery.- 2003.- V.53, №3.- P.697-702.

113. Manzyuk, L.V., Gorbunova V.A, Kharkevich G.Yu., Baryshnikov A.Yu. Experimental Oncology at the Turn of the Century. Edited by Davydov M.I., Baryshnikov A.Yu.// Moscow: Izdat. Gruppa RONTs im. N.M.Blokhina RAMN.- 2003.-pp. 179-198.

114. Matuskova M., Kozovska Z., Toro L., Durinikova E., Tyciakova S., Cierna Z., Bohovic R., Kucerova L.. Combined enzyme/prodrug treatment by genetically engineered AT-MSC exerts synergy and inhibits growth of MDA-MB-231 induced lung metastases // J. Exp. Clin. Cancer Res.- 2015.- V.34.- P.33.

115. Maximow A. The Lymphocyte as a stem cell common to different blood elements in embryonic development and during the post-fetal life of mammals. Originally in German // Folia Haematologica.- 1909.- V.8.-P.125—134.

116. Mirotsou M., Zhang Z., Deb A., Zhang L., Gnecchi M., Noiseux N., Mu H., Pachori A., Dzau V. Secreted frizzled related protein 2 (Sfrp2) is the key Akt-mesenchymal stem cell-released paracrine factor mediating myocardial survival and repair // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 2007.- V.104, №5.- P.1643-8.

117. Mitchell J.B., McIntosh K., Zvonic S., Garrett S., Floyd Z.E., Kloster A., Di Halvorsen Y., Storms R.W., Goh B., Kilroy G., Wu X., Gimble J.M. Immunophenotype of human adipose-derived cells: temporal changes in stromal-associated and stem cell-associated markers // Stem Cells.- 2006.- V.2.- P.376-85.

118. Mokarram N., Merchant A., Mukhatyar V., Patel G., Bellamkonda R. V. Effect of modulating macrophage phenotype on peripheral nerve repair // Biomaterials.- 2012.-V.33, №34.-P.8793-801.

119. Morandi F., Raffaghello L., Bianchi G., Meloni F., Salis A., Millo E., Ferrone S., Barnaba V., Pistoia V. Immunogenicity of human mesenchymal stem cells in HLA-class I-restricted T-cell responses against viral or tumor-associated antigens // Stem Cells.-2008.- V.26, №5.- P.1275-87.

120. Morris S.M. The genetic toxicology of 5-fluoropyrimidines and 5-chlorouracil //Mutat. Res.- 1993.-V.297,№1.-P.39-51.

121. Multhoff G., Hightower L.E. Distinguishing integral and receptor-bound heat shock protein 70 (Hsp70) on the cell surface by Hsp70-specific antibodies // Cell Stress Chaperones.- 2011.- V.16, №3.- P.251-5.

122. Murphy M.E. The HSP70 family and cancer // Carcinogenesis.- 2013.- V.34, №6.- P.1181-8.

123. Mussauer H., Sukhorukov V.L., Zimmermann U. Trehalose improves survival of electrotransfected mammalian cells // Cytometry.- 2001.- V.45.- P.161-169.

124. Nakamizo A., Marini F., Amano T., Khan A., Studeny M., Gumin J., Chen J., Hentschel S., Vecil G., Dembinski J., Andreeff M., Lang F.F. Human bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the treatment of gliomas // Cancer Research.- 2005.-V.65.- P.3307 -3318.

125. Nawrocki S., Mackiewicz A. Genetically modified tumor vaccines — where are we today // Cancer Threat Rev.- 1999.- V.25.- P.29-46.

126. Nawrocki S., Wysocki P.J., Mackiewicz A. Genetically modified tumour vaccines: an obstacle race to break host tolerance to cancer // Expert. Opin. Biol. Ther.-2001.- V.1, №2.- P.193-204.

127. Nemunaitis J., Schiller J., Ross H., Jablons D., Harper H., Sterman D., Kelly K., Carbone D., Lin A., Maslyar D., Hege K. 630. A phase 2 randomized study of GM-CSF gene-modified autologous tumor cell immunotherapy (CG8123) with and without low-dose cyclophosphamide in advanced stage non-small cell lung cancer (NSCLC) // Mol. Ther.- 2006.- V.13.- P.243.

128. Neumann E., Schaefer-Ridder M., Wang Y., Hofschneider P.H. Gene transfer into mouse lyoma cells by electroporation in high electric fields // EMBO J.- 1982.- V.1, №7.-Р.841-5.

129. Nijnik A., Hancock R.E.W. The roles of cathelicidin LL-37 in immune defences and novel clinical applications // Curr. Opin. Hematol.- 2009.- V.16.- P.41-47.

130. Ning H., Yang F., Jiang M., Hu L., Feng K,. Zhang J., Yu Z., Li B., Xu C., Li Y., Wang J., Hu J., Lou X., Chen H. The correlation between cotransplantation of mesenchymal stem cells and higher recurrence rate in hematologic malignancy patients: outcome of a pilot clinical study // Leukemia.- 2008.- V.22, №3.- Р.593-9.

131. Nishiyama T., Kawamura Y., Kawamoto K., Matsumura H., Yamamoto N., Ito T., Ohyama A., Katsuragi T., Sakai T. Antineoplastic effects in rats of 5-fluorocytosine in combination with cytosine deaminase capsules // Cancer Res.- 1985.- V.45, №4.-Р.1753-61.

132. Ochsenbein A.F., Klenerman P., Karrer U., Ludewig B., Pericin M., Hengartner H., Zinkernagel R.M. Immune surveillance against a solid tumor fails because of immunological ignorance // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1999.- V.96.- P.2233-8.

133. Ohlfest J R., Demorest Z.L., Motooka Y., Vengco I., Oh S., Chen E., Scappaticci F.A., Saplis R.J., Ekker S.C., Low W.C., Freese A.B., Largaespada D.A. Combinatorial antiangiogenic gene therapy by nonviral gene transfer using the sleeping beauty transposon causes tumor regression and improves survival in mice bearing intracranial human glioblastoma // Mol Ther.- 2005.- V.12, №5.- Р.778-88.

134. Osawa M., Hanada K., Hamada H., Nakauchi H. Long-term lymphohematopoietic reconstitution by a single CD34-low/negative hematopoietic stem cell // Science.- 1996.-V.273.- P.242-245.

135. Owen M., Friedenstein A.J. Stromal stem cells: marrow-derived osteogenic precursors // Ciba Found Symp.- 1988.-V.136.- P.42-60.

136. PANVAC™-VF Vaccine for the Treatment of Metastatic Pancreatic Cancer After Failing a Gemcitabine-Containing Regimen [Электронный ресурс].- Режим доступа: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00088660

137. Parekkadan B., Milwid J.M. Mesenchymal stem cells as therapeutics // Annu. Rev. Biomed. Eng.- 2010.- V.12.- Р.87-117.

138. Park KS., Kim YS., Kim J.H., Choi B., Kim S.H., Tan A.H., Lee M.S., Lee M.K., Kwon C.H., Joh J.W., Kim S.J., Kim K.W. Trophic molecules derived from human mesenchymal stem cells enhance survival, function, and angiogenesis of isolated islets after transplantation // Transplantation.- 2010.- V.89, №5.- Р.509-17.

139. Partridge K.A., Oreffo R.O. Gene delivery in bone tissue engineering: progress and prospects using viral and nonviral strategies // Tissue Eng.- 2004.- V.10.- P.295-307.

140. Patil S.D., Rhodes D.G., Burgess D.J. DNA-based therapeutics and DNA delivery systems: a comprehensive review // AAPS J.- 2005.- V.7, №1.- P.E61-77.

141. Peister A., Mellad J.A., Larson B.L., Hall B.M., Gibson L.F., Prockop D.J. Adult stem cells from bone marrow (MSCs) isolated from different strains of inbred mice vary in surface epitopes, rates of proliferation, and differentiation potential // Blood.- 2004.-V.103.- P.1662-1668.

142. Peretolchina N.M., Gerasimova G.K., Belousov A.K., Baryshnikov A.Y. Preclinical study of antitumor activity and mechanism of action of lysomustine. In Experimental oncology at the turn of the century. Edited by Davydov M. I., Baryshnikov A.Yu.// Moscow: The RSSC publishing group n.a. N. N. Blochin RAMs Russia- 2003.- P 147-160.

143. Peretolchina N.M., Radina L.B., L B. Gorbacheva [et al.]. RF Patent No. 1834006 // Byull. Izobret.- 1996.- No. 30.-P. 14.

144. Petrulio C.A., Kaufman H.L. Development of the PANVAC-VF vaccine for pancreatic cancer // Expert. Rev. Vaccines.- 2006.- V.5,№1.- P.9-19.

145. Plumas J., Chaperot L., Richard M.J., Molens J.P., Bensa J.C., Favrot M.C. Mesenchymal stem cells induce apoptosis of activated T cells // Leukemia.- 2005.- V.19.-P.1597-1604.

146. Pratt W.P., Ruddon R.W., Ensminger W.D., Maybaum J., The Anticancer Drugs // New York, Oxford: Oxford University Press- 1994.-450 p.

147. Prevosto C., Zancolli M., Canevali P., Zocchi M.R., Poggi A. Generation of CD4+ or CD8+ regulatory Tcells upon mesenchymal stem cell-lymphocyte interaction // Haematologica.- 2007.-V.92, №7.- P.881-888.

148. Prockop D.J. Marrow stromal cells as stem cells for nonhematopoietic tissues // Science.- 1997.-V.276,№.5309.-P.71-4.

149. Pulkkanen K.J., Yla-Herttuala S. Gene therapy for malignant glioma: current clinical status // Mol. Ther.- 2005.- V.12, №4.- P.585-98.

150. Rabie A.B., Dai J., Xu R. Recombinant AAV-mediated VEGF gene therapy induces mandibular condylar growth // Gene Ther.- 2007.-V.14, №12.- P.972-80.

151. Rasmussen H., Rasmussen C., Lempicki M. TNFerade Biologic: preclinical toxicology of a novel adenovector with a radiation-inducible promoter, carrying the human tumor necrosis factor alpha gene // Cancer Gene Ther.- 2002.- V.9, №11.- P.951-7.

152. Rehman J., Traktuev D., Li J., Merfeld-Clauss S., Temm-Grove C.J., Bovenkerk J.E., Pell C.L., Johnstone B.H., Considine R.V., March K.L. Secretion of angiogenic and antiapoptotic factors by human adipose stromal cells // Circulation.- 2004.- V.109, №10.-Р.1292-8.

153. Reid T., Warren R., Kirn D. Intravascular adenoviral agents in cancer patients: lessons from clinical trials // Cancer Gene Ther.- 2002.- V.9, №12.- Р.979-86.

154. Reynolds P.N., Zinn K.R., Gavrilyuk V.D., Balyasnikova I.V., Rogers B.E., Buchsbaum D.J., Wang M.H., Miletich D.J., Grizzle W.E., Douglas J.T., Danilov S.M., Curiel D.T. A targetable, injectable adenoviral vector for selective gene delivery to pulmonary endothelium in vivo // Mol Ther.- 2000.- V.2.- P.562-78.

155. Richardson J.D., Nelson A.J., Zannettino A.C., Gronthos S., Worthley S.G., Psaltis P.J. Optimization of the Cardiovascular therapeutic properties of mesenchymal stromal/stem cells-taking the next step // Stem Cell Rev.- 2012.- V.9.- P.281-302.

156. Rols M.P. Electropermeabilization, a physical method for the delivery of therapeutic molecules into cells // Biochim. Biophys. Acta.- 2006.- V.1758., №3.- Р.423-8.

157. Rozov F.N., Grinenko T.S., Levit G.L., Grishakov A.N., Beliavski A.V., Krasnov V.P. Cytotoxicity of lysomustine and its isomers, and their potential use for selection of cells // Bioorg. Khim.- 2011.-V.37, №6.- Р.786-92.

158. Russell K.C., Phinney D.G., Lacey M.R., Barrilleaux B.L., Meyertholen K.E., O'Connor K.C. In vitro high-capacity assay to quantify the clonal heterogeneity in trilineage potential of mesenchymal stem cells reveals a complex hierarchy of lineage commitment // Stem Cells.- 2010.- V.28,№4.- Р.788-98.

159. Rutella S., Danese S., Leone G. Tolerogenic dendritic cells: cytokine modulation comes of age // Blood.- 2006.- V.108.- P.1435-1440.

160. Sacchetti B., Funari A., Michienzi S., Di Cesare S., Piersanti S., Saggio I., Tagliafico E., Ferrari S., Robey P.G., Riminucci M., Bianco P. Self-renewing osteoprogenitors in bone marrow sinusoids can organize a hematopoietic microenvironment // Cell.- 2007.- V.131, №2.- Р.324-36.

161. Sadeghi H., Hitt M.M. Transcriptionally targeted adenovirus vectors // Curr. Gene Ther.- 2005.- V.5, №4.- Р.411-27.

162. Safety and Efficacy Study of INGN 241 Gene Therapy in Patients With In Transit Melanoma [ Электронный ресурс].- Режим доступа:

https ://clinicaltrials. gov/ct2/show/NCT00116363

163. Sasportas L.S., Kasmieh R., Wakimoto H., Hingtgen S., van de Water J.A., Mohapatra G., Figueiredo J.L., Martuza R.L., Weissleder R., Shah K. Assessment of therapeutic efficacy and fate of engineered human mesenchymal stem cells for cancer therapy // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 2009.- V.106,№12.-P.4822-7.

164. Schadendorf D. Gene-based therapy of malignant melanoma // Semin. Oncol.-2002.- V.29, №5.- P.503-12.

165. Schichor C., Birnbaum T., Etminan N., Schnell O., Grau S., Miebach S., Aboody K., Padovan C., Straube A., Tonn J.C., Goldbrunner R. Vascular endothelial growth factor A contributes to glioma-induced migration of human marrow stromal cells (hMSC) // Exp Neurol.- 2006.- V.199, №2.- P.301-10.

166. Shah K., Bureau E., Kim D.E., Yang K., Tang Y., Weissleder R., Breakefield X.O. Glioma therapy and real-time imaging of neural precursor cell migration and tumor regression // Ann. Neurol.- 2005.- V.57, №1.- P.34-41.

167. Shah K., Tung C.H., Yang K., Weissleder R., Breakefield X.O. Inducible release of TRAIL fusion proteins from a proapoptotic form for tumor therapy // Cancer Res-2004.- V.64, №9.- P.3236-42.

168. Shi M., Li J., Liao L., Chen B., Li B., Chen L., Jia H., Zhao R.C. Regulation of CXCR4 expression in human mesenchymal stem cells by cytokine treatment: role in homing efficiency in NOD/SCID mice // Haematologica.- 2007.- V.92, №7.- P.897-904.

169. Shirakawa T., Gardner T.A., Ko S.C., Bander N., Woo S., Gotoh A., Kamidono S., Chung L.W., Kao C. Cytotoxicity of adenoviral-mediated cytosine deaminase plus 5-fluorocytosine gene therapy is superior to thymidine kinase plus acyclovir in a human renal cell carcinoma model // J. Urol.- 1999.- V.162.- P. 949-54.

170. Siegel G., Schafer R., Dazzi F. The immunosuppressive properties of mesenchymal stem cells // Transplantation.- 2009.- V.87.- P.45-49.

171. Siegel R.L., Miller K.D., Jemal A. Cancer statistics, 2016 // CA Cancer. J. Clin.-2016.-V.66, №1-P.7-30.

172. Simmons P.J., Torok-Storb B. Identification of stromal cell precursors in human bone marrow by a novel monoclonal antibody, STRO-1 // Blood.- 1991.-V.78, №1.-P.55-62.

173. Smith C.L., Chaichana K.L., Lee Y.M., Lin B., Stanko K.M., O'Donnell T., Gupta S., Shah S.R., Wang J., Wijesekera O., Delannoy M., Levchenko A., Quinones-Hinojosa A.. Pre-exposure of human adipose mesenchymal stem cells to soluble factors enhances their homing to brain cancer // Stem. Cells Transl. Med.- 2015.- V.4, №3.- P.239-51.

174. Soria G., Ben-Baruch A. The inflammatory chemokines CCL2 and CCL5 in breast cancer // Cancer Lett.- 2008.- V.267, №2.- Р.271-85.

175. Spaeth E., Klopp A., Dembinski J., Andreeff M., Marini F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells // Gene Ther.- 2008.- V.15, №10.- Р.730-8.

176. Spaeth E.L., Dembinski J.L., Sasser A.K., Watson K., Klopp A., Hall B., Andreeff M., Marini F. Mesenchymal stem cell transition to tumor-associated fibroblasts contributes to fibrovascular network expansion and tumor progression // PLoS. ONE-2009.- V.4.- P.e4992.

177. Stangl S., Gehrmann M., Riegger J., Kuhs K., Riederer I., Sievert W., Hube K., Mocikat R., Dressel R., Kremmer E., Pockley A.G., Friedrich L., Vigh L., Skerra A., Multhoff G. Targeting membrane heat-shock protein 70 (Hsp70) on tumors by cmHsp70.1 antibody // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 2011.-V.108, №2.-Р.733-8.

178. Study to Compare the Overall Survival of Patients Receiving INGN 201 (Study Drug) With Patients Receiving Methotrexate [Электронный ресурс].- Режим доступа: https ://clinicaltrials. gov/ct2/show/NCT00041613

179. Sun B., Roh K.H., Park JR., Lee SR., Park SB., Jung J.W., Kang S.K., Lee Y.S., Kang K.S. Therapeutic potential of mesenchymal stromal cells in a mouse breast cancer metastasis model // Cytotherapy.- 2009.- V.11, №3.- Р.289-98.

180. Sun S., Guo Z., Xiao X., Liu B., Liu X., Tang P.H., Mao N. Isolation of mouse marrow mesenchymal progenitors by a novel and reliable method // Stem Cells.- 2003.-V.21, №5.- Р.527-35.

181. Sun Y., Peng D., Lecanda J., Schmitz V., Barajas M., Qian C., Prieto J. In vivo gene transfer of CD40 ligand into colon cancer cells induces local production of cytokines and chemokines, tumor eradication and protective antitumor immunity // Gene Ther.-2000.-V.7,№17.- Р.1467-76.

182. Thomas C.E., Ehrhardt A., Kay M.A. Progress and problems with the use of viral vectors for gene therapy // Nat. Rev. Genet.- 2003.- V.4, №5.- Р.346-58.

183. Tyciakova S., Matuskova M., Bohovic R., Polakova K., Toro L., Skolekova S., Kucerova L. Genetically engineered mesenchymal stromal cells producing TNFa have tumour suppressing effect on human melanoma xenograft // J. Gene. Med.- 2015.- V.17, №1-2.- Р.54-67.

184. Universal Granulocyte Macrophage-colony Stimulating Factor (GM-CSF)-Producing and GM.CD40L for Autologous Tumor Vaccine in Mantle Cell Lymphoma

[Электронный ресурс].- Режим доступа: : https ://clinicaltrials. gov/ct2/show/NCT00101101

185. Vaccine Study of MVA-MUC1-IL2 in Patients With Prostate Cancer [Электронный ресурс].- Режим доступа: :

https ://clinicaltrials. gov/ct2/show/NCT00040170

186. Vaccine Treatment for Hormone Refractory Prostate Cancer [Электронный ресурс ].- Режим доступа: https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00105053

187. Varma M.J., Breuls R.G., Schouten T.E., Jurgens W.J., Bontkes H.J., Schuurhuis G.J., van Ham S.M., van Milligen F.J. Phenotypical and functional characterization of freshly isolated adipose tissue-derived stem cells // Stem. Cells Dev.- 2007.- V.16,№1.-Р.91-104.

188. Vattemi E., Claudio P.P. Gene therapy for lung cancer: practice and promise // Ann.Ital.Chir.- 2004.-V.75, №3.- Р.279-89.

189. Vile R.G., Nelson J.A., Castleden S., Chong H., Hart I.R. Systemic gene therapy of murine melanoma using tissue specific expression of the HSVtk gene involves an immune component // Cancer Res.- 1994.-V.54.- P. 6228-34.

190. Vile R.G., Russell S.J., Lemoine N.R. Cancer gene therapy: Hard lessons and new courses // Gene Ther.- 2000.- V.7.- P.2-8.

191. Wan C., He Q., McCaigue M., Marsh D., Li G. Nonadherent cell population of human marrow culture is a complementary source of mesenchymal stem cells (MSCs) // J. Orthop. Res.- 2006.-V.24,№1.- Р.21-8.

192. Wang H., Cao F., De A., Cao Y., Contag C., Gambhir S.S., Wu J.C., Chen X. Trafficking mesenchymal stem cell engraftment and differentiation in tumor-bearing mice by bioluminescence imaging // Stem Cells.- 2009.- V.27, №7.- Р.1548-58.

193. Wang R., Liang J., Jiang H., Qin L.J., Yang H.T. Promoter-dependent EGFP expression during embryonic stem cell propagation and differentiation // Stem Cells Dev.- 2008.- V.17, №2.- Р.279-89

194. Weissman I.L. Translating stem and progenitor cell biology to the clinic: barriers and opportunities // Science.- 2000.-V.287,№5457.- Р.1442-6.

195. Wilson W.R., Pullen S.M., Hogg A., Helsby N.A., Hicks K.O., Denny W.A. Quantitation of bystander effects in nitroreductase suicide gene therapy using three-dimensional cell cultures // Cancer Res.- 2002.- V.62, №5.- Р.1425-32.

196. Wood K.V., Lam Y.A., McElroy W.D. Introduction to beetle luciferase and their applications // J. Biolum. Chemilum.- 1989.- V.4.- P.289-301.

197. Wybranietz W.A., Gross C.D., Phelan A., O'Hare P., Spiegel M., Graepler F., Bitzer M., Stähler P., Gregor M., Lauer U.M. Enhanced suicide gene effect by adenoviral transduction of a VP22-cytosine deaminase (CD) fusion gene // Gene Ther.- 2001.- V.8, №21.- P.1654-64.

198. Wynn R.F., Hart C.A., Corradi-Perini C., O'Neill L., Evans C.A., Wraith J.E., Fairbairn L.J., Bellantuono I. A small proportion of mesenchymal stem cells strongly expresses functionally active CXCR4 receptor capable of promoting migration to bone marrow // Blood.- 2004.- V.104, №9.- P.2643-5.

199. Yalvac M.E., Ramazanoglu M., Gumru O.Z., Sahin F., Palotas A., Rizvanov A.A. Comparison and optimisation of transfection of human dental follicle cells, a novel source of stem cells, with different chemical methods and electro-poration // Neurochem. Res-. 2009.- V.34, №7.- P.1272-7.

200. Yan C., Li S., Li Z., Peng H., Yuan X., Jiang L., Zhang Y., Fan D., Hu X., Yang M., Xiong D. Human umbilical cord mesenchymal stem cells as vehicles of CD20-specific TRAIL fusion protein delivery: a double-target therapy against non-Hodgkin's lymphoma // Mol. Pharm- 2013.- V.10, №1.- P.142-51.

201. Yoshimura K., Shigeura T., Matsumoto D., Sato T., Takaki Y., Aiba-Kojima E., Sato K., Inoue K., Nagase T., Koshima I., Gonda K. Characterization of freshly isolated and cultured cells derived from the fatty and fluid portions of liposuction aspirates // J. Cell. Physiol.- 2006.- V.208,№1.- P.64-76.

202. Yu Z., Restifo N.P. Cancer vaccines: progress reveals new complexities // J. Clin. Invest.- 2002.- V.110.- P.289-94.

203. Zhou J H., Tang B., Liu X.L., He D.W., Yang D T. hTERT-targeted E. coli purine nucleoside phosphorylase gene/6-methylpurine deoxyribose therapy for pancreatic cancer // Chin. Med. J. (Engl).- 2007.- V.120, №15.- P.1348-52.

204. Zhu W., Xu W., Jiang R., Qian H., Chen M., Hu J., Cao W., Han C., Chen Y. Mesenchymal stem cells derived from bone marrow favor tumor cell growth in vivo // Exp. Mol. Pathol.- 2006.- V.80, №3.- P.267-74.

205. ZhuY., Cheng M., Yang Z., Zeng C.Y., Chen J., Xie Y., Luo S.W., Zhang K.H., Zhou S.F., Lu N.H. Mesenchymal stem cell-based NK4 gene therapy in nude mice bearing gastric cancer xenografts // Drug. Des. Devel. Ther.- 2014.-V.8.- P.2449-62.

206. Zimmerlin L., Donnenberg V.S., Rubin J.P., Donnenberg A.D. Mesenchymal markers on human adipose stem/progenitor cells // Cytometry A.- 2013.- V.83, №1.-P.134-140.

207. Zuk P.A., Zhu M., Mizuno H., Huang J., Futrell J.W., Katz A.J., Benhaim P., Lorenz H.P., Hedrick M.H. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies // Tissue Eng.- 2001.-V.7,№2.-P.211-28.