Изучение остеоиндуктивной активности остеопластических материалов, содержащих рекомбинантный морфогенетический белок кости rhBMP-2, в экспериментальных моделях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.14, кандидат наук Долинер, Михаил Эллевич

• Долинер, Михаил Эллевич
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Долинер, Михаил Эллевич

Введение...............................................................................................5

Актуальность проблемы..........................................................................5

Цель исследования.................................................................................6

Задачи исследования................................................................................6

Научная новизна работы..............................................................................................7

Практическая ценность работы.........................................................................8

Основные положения, выносимые на защиту...............................................8

Объем и структура диссертации................................................................10

1 .Обзор литературы..............................................................................11

1.1. Воспалительные и не воспалительные процессы в альвеолярных отростках верхней и нижней челюстей............................................................11

1.2. Виды материалов для замещения костных дефектов.............................14

1.3. Носители и фиксация на них BMP....................................................25

2. Материалы и методы исследования.....................................................29

2.1. Технология получения rhBMP-2.........................................................29

2.2.Технология получения остеопластического материала.............................29

2.3. По лучение эксплантационного материала в эксперименте на культуре клеток-предшественников стромальных фибробластов костного мозга.......................30

2.4. Подготовка остеопластического материала с выращенными на его поверхности костномозговыми стромальными клетками к электронному сканирующему микроскопированию........................................................32

2.5. Описание эксперимента на лабораторных животных...............................33

2.6. Описание экспериментальных групп...................................................34

2.7. Техника операции...........................................................................34

2.8. Оценка состояния животных после операции........................................37

2.9. Компьютерная томография...............................................................38

2.10. Морфологическое исследование.......................................................41

2.11. Документирование........................................................................42

2.12. Статистический анализ полученных данных........................................42

3. Результаты собственных исследований.......................................................43

3.1. Эксперимент со стромальными клетками-предшественниками костного мозга................................................................................................43

3.2. Результаты сканирования.................................................................44

3.3. Оценка клинических признаков в эксперименте на лабораторных животных..........................................................................................47

3.4. Результаты морфологического исследования через 1 месяц......................55

3.5. Результаты морфологического исследования через 2 месяца.......................61

3.6. Результаты морфологического исследования через 3 месяца.......................65

3.7. Оценка костеобразования во всех группах в течение всего срока наблюдения.......................................................................................71

3.8. Результаты компьютерной томографии..................................................73

4. Обсуждение....................................................................................77

Выводы...............................................................................................84

Практические рекомендации..................................................................85

Список сокращений Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение остеоиндуктивной активности остеопластических материалов, содержащих рекомбинантный морфогенетический белок кости rhBMP-2, в экспериментальных моделях»

Введение Актуальность проблемы

Существует большое количество работ, посвященных решению вопросов восстановления дефектов костной ткани путем усовершенствования остеопластических материалов и синтезирования новых, что свидетельствует об актуальности данной задачи в хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии.

Определенные дефекты костной ткани, ее возрастная утрата или патологические состояния не могут быть устранены путем ее репаративной регенерации. В таких случаях для восстановления костной ткани, как правило, применяются биоматериалы или их синтетические аналоги, способные выполнять механические функции кости. (Haid R.W., 2004; McKee M.D., 2004).

Несмотря на многообразие предложенных методик, наиболее перспективным направлением повышения остеоиндуктивности костных имплантатов и усиления регенерации соединительной ткани является создание биокомпозитных материалов, содержащих основные компоненты ткани и активные белковые субстанции - факторы роста.(Воложин А.И., 2006; Иванов С.Ю., 2000; Ожелевская С.А., 2006)

В настоящее время уже используются ростовой фактор тромбоцитарного происхождения (Graham S., 2009), трансплантация аутоклеток костного дифферона после их культивирования на соответствующих носителях (Tohrna Y., 2011), применяются полипотентные стволовые клетки, имплантация остеоиндуктивных матриц (Деев Р.В., 2007), интенсификация ангиогенеза и микроциркуляции в зоне регенерации (Cui Q., 2006;Lee, E.H., 2006). Одним из наиболее перспективных направлений в последнее время стало локальное использование костных морфогенетических белков (BMP), способных непосредственно воздействовать на предшественников остеобластов (Chen X., 2002; Cook S.D., 2000; Долинер М.Э., 2013). Усиление остеогенеза при локальном

применении неоднократно было показано как в экспериментальных, так и в клинических исследованиях (Бычков А.И., 2013; Cook S.D., 1994; Govender S., 2002; Jones A.L., 2004). Однако, отмечена возможность образования гетеротопических оссификатов при применении BMP (Brower R.S., 2008; Koide М., 1999), что сдерживает их широкое клиническое применение в качестве стимуляторов остеогенеза. Не решенным остается также вопрос об оптимальном носителе морфогенетического белка.

Анализ представленных работ подтверждает значимость имеющегося направления усиления остеоиндукции и необходимость продолжения дальнейших исследований, касающихся изучения возможности воздействия на метаболизм костной ткани препаратов, усиливающих остеогенез (морфогенетические белки кости), в зоне хирургического вмешательства

Цель исследования

Провести комплексную экспериментальную оценку остеогенной активности материала на основе недеминерализованного костного матрикса, содержащего рекомбинантный человеческий морфогенетический белок кости rhBMP-2, в экспериментальных моделях на лабораторных животных.

Задачи исследования

1. Изучить влияние остеопластического материала на основе недеминерализованного костного матрикса, насыщенного морфогенетическим белком кости, на процессы репарации костной ткани на модели остеотомии у экспериментальных животных с помощью гистоморфологического и гистоморфометрического методов.

2. Оценить влияние остеопластического материала на основе недеминерализованного костного матрикса, насыщенного морфогенетическим белком кости, на образование костной ткани.

3. Определить и спрогнозировать возможность применения остеопластического материала на основе недеминерализованного костного

матрикса, насыщенного рекомбинантным человеческим морфогенетическим белком кости гЬВМР-2, при стоматологических хирургических вмешательствах

4. Разработать показания и рекомендации к применению нового остеопластического материала на основе недеминерализованного костного матрикса, насыщенного морфогенетическим белком кости, в хирургической стоматологии.

Научная новизна работы

Впервые синтезирован и применен в эксперименте на лабораторных животных рекомбинантный человеческий морфогенетический белок кости гЬВМР-2 в составе остеопластического материала «Остеодент» на основе недеминерализованного костного матрикса.

Впервые в эксперименте доказано, что остеопластический материал «Остеодент» на основе недеминерализованного костного матрикса, насыщенный рекомбинантным человеческим морфогенетическим белком кости гЬВМР-2 не влияет на течение раневого процесса.

Установлено, что лучшее качество новообразованной костной ткани в дефекте свода черепа крысы наблюдается в экспериментальной группе при заполнении дефекта недеминерализованным костным матриксом, насыщенным рекомбинантным человеческим морфогенетическим белком кости гЬВМР-2 по отношению к группе сравнения при применении чистого недеминерализованного костного матрикса.

Впервые с помощью компьютерной томографии показано, что при применении рекомбинантного человеческого морфогенетического белка кости гЬВМР-2 в составе недеминерализованного костного матрикса «Остеодент» разницы в площади заполнения дефекта новообразованной костной тканью к 3 месяцу исследований в группе сравнения и экспериментальной группе не выявлено.

Практическая ценность работы

На основании изучения экспериментальных данных разработаны рекомендации к применению остеопластического материала для заполнения костных дефектов, созданного на основе недеминерализованного костного матрикса, насыщенного рекомбинантным человеческим морфогенетическим белком кости гЬВМР-2.

В результате проведенных исследований выявлена и обоснована способность к качественной репарации костной ткани при использовании нового остеопластического материала, насыщенного морфогенетическим белком кости.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Клетки-предшественники фибробластов прикрепляются на поверхности недеминерализованного костного матрикса, содержащего рекомбинантный человеческий морфогенетический белок кости гЬВМР-2.

2. Микрорельеф поверхности остеопластического материала в виде гранул с размерами 700-800 мкм на основе недеминерализованного костного матрикса является оптимальным для адгезии клеток-предшественников костного мозга.

3. Применение остеопластического материала на основе недеминерализованного костного матрикса, содержащего рекомбинантный человеческий морфогенетический белок кости гЬВМР-2 обеспечивает лучшее качество новообразованной костной ткани в эксперименте. Подтверждено морфологическим исследованием.

Личный вклад автора

• Автором по разработанной методике лично проведены экспериментальные исследования на 54 лабораторных животных на базе вивария МГМСУ имени А.И. Евдокимова.

• Изучены явления репарации костной ткани в области бикортикального дефекта свода черепа крыс с помощью морфологического исследования и компьютерной томографии.

• Зафиксированы и проанализированы изменения структурных характеристик новообразованной костной ткани с помощью морфологического исследования и компьютерной томографии.

Внедрение результатов исследования

По результатам исследования свойств рекомбинантного человеческого морфогенетического белка кости гЬВМР-2 в составе остеопластического материала разработаны рекомендации к клиническому применению данной композиции, внедрены в учебный процесс кафедры хирургии полости рта МГМСУ имени А.И. Евдокимова.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены, обсуждены и одобрены на совместном заседании сотрудников кафедры хирургии полости рта и кафедры пропедевтической стоматологии и материаловедения Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет имени А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации и лаборатории тканевой инженерии Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Институт теоретической и экспериментальной биофизики Российской академии наук». (Протокол №10 от 11 июля 2014 года).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 3 работы, 2 из них в издательствах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ России:

1. Бычков А.И. Замещение костных дефектов при помощи остеопластического материала, насыщенного морфогенетическим белком кости (rhBMP-2) / А.И. Бычков, М.Э. Долинер // Дентальная имплантология и хирургия. - 2013. - №1. - С.50-53.

2. Бычков А.И. Изучение остеоиндуктивной активности рекомбинантного морфогенетического белка кости (rhBMP-2) в составе остеопластического материала на основе деминерализованного матрикса в эксперименте / А.И. Бычков, М.Э. Долинер, А.И. Ситдикова, A.B. Волков, O.A. Рачинская // Стоматология для всех. - 2013. - №3. - С.16-20.

3. Долинер М.Э. Перспективы использования морфогенетического белка кости в составе остеопластического материала для ускорения остеоиндукции / М.Э. Долинер, А.И. Бычков, А.И. Ситдикова // DentalForum - 2013. - №4. - С.20-23.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, глав: «Обзор литературы», «Материалы и методы исследования», «Результаты собственных исследований», «Обсуждение», а также выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Материалы диссертации изложены на 107 страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 58 рисунками и содержит 8 таблиц. Список литературы содержит 183 источников, из них 92 отечественные и 91 иностранные.

1. Обзор литературы

1.1. Воспалительные и не воспалительные процессы в альвеолярных отростках верхней и нижней челюстей

Проблема восстановления костной ткани является актуальной задачей в современной хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии, о чем свидетельствуют непрекращающиеся поиски новых и совершенствование известных остеопластических материалов для восстановления дефектов костной ткани. (Анастасов А.Н., 2002; Беззубов А.Е., 2010)

Существует ряд воспалительных и не воспалительных процессов в челюстно-лицевой области, ведущих к деструктивным изменениям и образованию дефектов и полостей в костной ткани челюстей.(Jleyc П.А., 2002; Лобко С.С., 1997)

Выделяют несколько основных причин редукции альвеолярного гребня, сопровождающейся уменьшением объема и снижением высоты альвеолярного отростка верхней челюсти (Робустова Т.Г, 2003.), а именно: образование одонтогенных кист, травматичное удаление зубов, сопровождающееся повреждением стенок альвеолы, развитие осложнений инфекционно-воспалительного характера после удаления зуба (альвеолита, остеомиелита), заболевания пародонта: а) пародонтит, пародонтоз, сопровождающиеся резорбцией костной ткани альвеолярной части челюстей со снижением высоты межзубных, межкорневых перегородок; б) деструктивные формы периодонтита, сопровождающиеся резорбцией костной ткани вокруг апикальной части корней зубов и компактной пластинки дна верхнечелюстной пазухи.(Аснина С.А., 2004; Бакиев Б.А., 1985)

Длительное отсутствие функциональной нагрузки на альвеолярную часть челюсти после удаления зубов, некомпенсированной путем своевременного съемного протезирования так же ведет к атрофии костных структур и деформации альвеолярного отростка, по типу так называемой горизонтальной резорбции.(Безруков В.М., 2000; Кулаков А. А., 1997, 2008; Попов В.Ф., 2009)

Позднее вертикальная потеря кости стабилизируется на уровне 0,1 мм в год. Эта резорбция может ускоряться, и плотность кости будет уменьшаться из-за системных факторов, таких как гормональный дисбаланс, метаболические факторы, воспаление и системные заболевания. Возраст и пол так же влияют на объем потери кости. (МиИепёег, 2005; Лосев Ф.Ф., 2000). Возникает остеопороз, при котором происходит перестройка архитектоники костной ткани (регрессивная трансформация губчатой кости в компактную).

Данные дефекты костной ткани, ее возрастная утрата или патологические состояния затрудняют реабилитацию пациентов не только посредством имплантации из-за недостатка объема костной ткани, но и могут доставлять трудности при протезировании в связи с плохой фиксацией съемных протезов.

Необходимость в классификации ограниченных костных дефектов в области адентии возникла давно. Сведения о вмешательствах, направленных на регенерацию кости при наличии таких дефектов, стали появляться в литературе с 1957 г. Успешное устранение значительных костных дефектов (т.е. дефектов таких размеров и формы, когда вероятность самопроизвольной регенерации кости в области дефекта чрезвычайно мала) требует соблюдения определенных биологических принципов. При этом становится возможным получение запланированного объема кости.

Предлагаемая классификация костных дефектов относительно предполагаемой имплантации позволяет помочь хирургу-имплантологу составить оптимальный план лечения.

1. Лунка удаленного зуба.

2. Окончатый дефект.

3. Щелевидный дефект.

4. Дефицит ширины альвеолярного гребня.

5. Дефицит высоты альвеолярного гребня.

Лунка удаленного зуба

Выступающие вестибулярно корни зубов часто ассоциируются с тонкой вестибулярной костной пластинкой, которая подвергается выраженной резорбции в течение первого месяца после экстракции зуба.

Сохранение всех стенок лунки после удаления зуба означает, что «костный конверт» остался интактным. Потеря большей или меньшей части окружающей альвеолу кости означает, что защитный механизм стабилизации кровяного сгустка нарушен и может понадобиться применение специальных методик для получения достаточного объема кости.(Кузнецова H.H., 2005)

Окончатый дефект

Окончатым называют ограниченный со всех сторон дефект альвеолярного гребня с вестибулярной или язычной стороны, который образуется при установке имплантата в недостаточно широкий гребень. (Коротких Н.Г., 2004)

Щелевидные дефекты

Щелевидный дефект образуется при установке имплантата, когда обнажается не более 50% его диаметра от шейки в апикальном направлении.

Щелевидный дефект I класса образуется, когда имплантат не выступает за наружную границу «костного конверта». Щелевидным дефектом II класса называют такой дефект, когда имплантат выступает за наружную границу «костного конверта». (Барер Г.М., 1996)

Дефицит ширины альвеолярного гребня

Дефицит ширины альвеолярного гребня характеризуется тем, что при установке имплантата обнажение его будет более 50% диаметра от шейки в апикальном направлении.

При дефиците ширины альвеолярного гребня 1-го класса имплантат не выступает за наружную границу «костного конверта». Дефицит ширины альвеолярного гребня 11-го класса характеризуется тем, что имплантат выступает за наружную границу «костного конверта». (Григорьян A.C., 1997)

Дефицит высоты альвеолярного гребня

Под дефицитом высоты альвеолярного гребня понимают недостаток высоты альвеолярного гребня для установки имплантата должного размера. Недостаток высоты альвеолярного гребня менее 3 мм соответствует I классу дефицита высоты альвеолярного отростка. Если недостаток высоты более 3 мм, то это II класс дефицита высоты альвеолярного отростка.

1.2. Виды материалов для замещения костных дефектов

Костные дефекты не могут быть восполнены путем репаративной регенерации тканей. В таких случаях для восстановления ткани, как правило, применяются биоматериалы или их синтетические аналоги, способные выполнять механические функции кости.(Григорьянц JI.A., 2007; Дмитриева JI.A., 2006)

Большинство авторов сходятся в том, что используемые материалы должны быть легко доступны, просты в хранении, характеризоваться отсутствием пирогенных и иммуногенных свойств и обеспечивать органотипическую регенерацию костной ткани, по возможности в короткие сроки при полной биодеградации имплантатов. Учитывая эти классические требования, многие ученые предлагают свои варианты придания биокомпозиционным материалам биологической активности (Володина Д.Н., 2008; Воложин А.И., 2004; Журули Г.Н, 2001; Панасюк А.Ф., 2000; Панин A.M., 2003; Bruder, 1998; Bruder, 1999; Lamerigts, 1999; Spector, 1999). Учитывая структуру, происхождение, способ приготовления, стерилизации и консервации биокомпозиционного материала различают несколько его разновидностей. Прежде всего, необходимо выделить аутологичные трансплантаты (аутотрансплантаты) — при этом кость пересаживается из одной области тела в другую в пределах одного организма и аллотрансплантаты — когда кость пересаживается от одного индивидуума другому. В зависимости от структуры трансплантаты могут быть из компактной или губчатой кости (Айбестер П., 1998; Мешков Г.В., 1995; Becker W., 1995). Используются так же губчато-кортикальные аллотрансплантаты

(свежезамороженные или лиофилизированные), остеоиндуктивные костные имплантаты (деминерализованная костная матрица), массивные структурные костные аллотрансплантаты (свежезамороженные), керамика и керамические соединения (фосфат кальция, сульфат кальция), коллаген кальция (гидроксиапатит, трикальцийфосфат, коллаген I типа), биоактивное стекло (Балин В.Н., 1996; Безруков В.М., 1996; Чиркова Т.Д., 1992; Greenwald S., 2001; Kelly T.L., 2009; Lang, Т.F., 1997). Наиболее полное и систематизированное представление о видах костно-пластического материала дает классификация Bauer T.W. и MuschlerG.F. от 2000 года, подразделяющая их на три типа (Bauer T.W., 2000):

A. Аутотрансплантаты (выделенный костный мозг и костеобразующие клетки, губчатая кость, свободная кортикальная кость, васкуляризованная кость (на сосудистой ножке));

Б. Аллотрансплантаты классифицируются по следующим показателям:

1. Анатомическая характеристика (кортикальные, губчатые, костно-хрящевые);

2. Технология обработки (свежие, замороженные, заморожено-высушенные (лиофилизированные), деминерализованные);

3. Способы стерилизации (химическая (в процессе изготовления), радиационная, оксидом этилена (газообразная));

4. Форма имплантатов (порошок, гель, паста или «замазка», стружка, пластины или блоки, массивные);

B. Материалы из скелетных тканей.

1. Остеокондуктивные блоки или гранулы;

2. Остеокондуктивные цементы;

3. Остеоиндуктивные блоки;

4. Биокомпозиционные материалы.

Большинство хирургов используют аутоткани (примерно в 30-40% всех случаев костной пластики), несмотря на то, что при этом методе пластики объем получаемой кости зачастую недостаточен. К тому же, нередко у пациентов

длительное время сохраняется боль в месте забора тканей и рубцевание донорского участка, всегда существует риск его инфицирования (Вырупаев C.B., 2002; Губин М.А., 1998; Ходорковский М.А., 1998; Enneking W.F., 1991; TakaokaK., 1996). Количество осложнений при использовании аутотканей (по данным Aaron A.D. с соавторами) (Aaron A.D., 1994) составляет 39% от числа забранных аутотрансплантатов.

За последние десятилетия в качестве альтернативы аутотканям в восстановительных операциях все чаще стали использоваться имплантаты аллогенного происхождения. Не секрет, что успех любой пластической операции с использованием биологических имплантатов в значительной степени определяется качеством последних, и наличием остеоиндуктивных или остеокондуктивных свойств.(Дьякова C.B., 1999; Жарков A.B., 2007; Сысолятин П.Г., 1984)

В современной имплантологии можно выделить несколько уровней технологических разработок в изготовлении биопластических материалов, в данном случае костных алло- и ксеноимплантатов (ArtsJ.J., 2006). Так, I уровень не предусматривает глубокой переработки донорских тканей. На этом уровне ткани или забираются в асептических условиях и консервируются низкими температурами, либо очищаются, обезжириваются и обрабатываются химическими реагентами, достигая тем самым одновременной консервации и стерилизации (Salai M., 2000).

На II уровне ткани подвергают более серьезной обработке. Примером может служить процесс изготовления деминерализованных костных аллоимплантатов, где в костной ткани с помощью декальцинации растворами кислот меняют соотношение минерального и органического компонентов. В таких случаях материал приобретает наряду с остеокондуктивными и дополнительные остеоиндуктивные свойства. При этом деминерализация кости может быть поверхностной, частичной или полной. В зависимости от степени декальцинации материал имеет разные механические и пластические характеристики, что дает хирургу возможность выбирать материал в зависимости от конкретной

клинической ситуации (Волова J1.T., 1997; Загородний Н.В., 2006; Кириллова И.А., 2004).

III уровень предполагает создание биокомпозиционных материалов, содержащих как основные компоненты костной ткани, так и биоактивные субстанции, к которым относятся: факторы роста, морфогенетические белки и другие компоненты костного матрикса. Биоактивным субстанциям отводят роль активаторов и регуляторов физиологической регенерации тканей. Кроме того, на стадии имплантации в состав таких материалов могут быть включены и трансплантируемые различные клетки-предшественники фибробластов. В настоящее время создание биокомпозиционных материалов в России приобрело приоритетный характер (Абоянц Р.К., 1997; Григорьян A.C., 2000; Щепкина, Е.А., 2007).

Биоматериалы, претендующие на роль имплантатов, должны удовлетворять следующим требованиям по составу и свойствам костной ткани:

1) по химическим свойствам — отсутствие токсичности и нежелательных химических реакций с тканями и межтканевыми жидкостями, отсутствие коррозии;

2) по механическим характеристикам - материал должен обладать аналогичными механическими характеристиками по отношению к кости (например, различие в упругости может привести к утрате имплантата вследствие резорбции находящегося с ним в контакте костного вещества);

3) по биологическим свойствам — отсутствие реакций со стороны иммунной системы организма, срастание с костной тканью, стимулирование процесса образования костной ткани (остеосинтеза);

4) по свойству прорастания костной ткани в имплантат - необходимо наличие в имплантате сквозных пор размером 100-150 мкм. (Путляев В.И., 2004)

Среди используемых в настоящее время биологических, полусинтетических и синтетических материалов частично деминерализованные лиофилизированные костные имплантаты (ДЛКИ) являются наиболее перспективной и интересной разновидностью пластического материала. ДЛКИ, а также деминерализованный

лиофилизированный костный матрикс (ДЛКМ), который характеризуется высокой степенью деминерализации, содержат факторы роста кости(инсулиноподобные факторы роста, тромбоцитарный фактор роста, костные морфогенетические белки, фибробластический фактор роста, трансформирующий фактор роста), что обуславливает их хорошие остеоиндуктивные свойства в костном ложе (Воложин А.И., 2002; Сойфер В.В., 2005; Шехтер А.Б., 1997; Geesink R.G., 1999). В основном, данную способность деминерализованных имплантатов связывают с наличием в них неколлагенновых белков, которые потенцируют рост костной ткани. Разработанные, и во многом изученные ДЛКИ, явились эффективным материалом, который расширил возможности восстановительной хирургии (Калугин A.B., 1996; Меркулов В.Н., 2000) и нашел широкое применение в клинической практике (Killian J.T., 1998; Solheim Е., 1998). ДЛКИ сочетает в себе как остеоиндуктивные свойства, так и остеокондуктивные, но наиболее важным компонентом при этом, без сомнения, является остеоиндукция, осуществляемая через высвобождаемые из экстрацеллюлярного матрикса субстанции факторов роста кости. Этот механизм представляет интерес не только с экспериментальной, но и с клинической точки зрения, так как он, в отличие от процессов, протекающих при остеокондукции, позволяет активно воздействовать на слабое, в остеогенном отношении, ложе, побуждая кость к регенерации (Андрианов В.Л., 1986; Денисов В.М., 1993; Савельев В.И., 1993; Фон Верзен Р., 1993; BaasJ., 2006).

Деминерализованная кость может использоваться большими фрагментами, полосками, стружкой, пудрой и т.д. Уменьшение размеров частиц деминерализованной кости позволяет улучшить работу с материалом при заполнении костных дефектов, используя инъекционный способ введения (Адонина О.В., 2004; Панин A.M., 2004; Тенилин H.A., 1996; Aspenberg Р., 1986).

Вместе с тем, ряд экспериментальных исследований показал значительные отличия остеоиндуктивных возможностей готовых ДЛКИ, которые зависят от множества факторов, таких как возраст доноров, сроки забора тканей после их смерти, температура, при которой ткани сохраняются (Han В., 2003,Schwartz Z.,

1996), режим деминерализации, методы и условия стерилизации и многие другие параметры (Савельев В.И., 1996). В связи с этим, взгляды о преимуществе деминерализованной кости перед другими имплантатами разделяют не все авторы. Так, клинические данные японских исследователей показали, что аллоимплантаты, которые были полностью деминерализованы и стерилизованы оксидом этилена полностью резорбировались без образования новых костных структур (Kakiuchi M., 1987). Эти данные дали им достаточно оснований для того, чтобы исключить деминерализацию из процесса обработки имплантатов, используемых в клинике (Kakiuchi M., 1996). Анализируя результаты лечения 144 пациентов, Jorgenson S.S. с соавторами (Jorgenson S.S., 1994) отдали предпочтение аутотрансплантатам из гребня подвздошной кости деминерализованным имплантатам, используя их при пластике альвеолярного отростка верхней и нижней челюсти. Вполне справедливо мнение (Сивков С.Н., 1988; Денисов В.М., 1996), которые считают, что деминерализованный костный матрикс обладает менее выраженными антигенными свойствами, чем нативная кость, тем не менее, пересадка его вызывает определенные изменения иммунной системы реципиента. К тому же, в деминерализованных участках прочность кости снижается до 0; в то же время в зоне с сохраненным минералом она не изменяется по сравнению с контролем (Матвейчук И.В., 1987). В связи с этим в последние годы деминерализованный костный имплантат используется лишь в качестве носителя или депо для других остеогенных веществ, таких как факторы роста кости или морфогенетические белки.(BouxseinM.L., 2001)

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Долинер, Михаил Эллевич, 2015 год

материала

Рисунок 27.Срез свода черепа крысы экспериментальной группы через 1

месяц

Рисунок 28.Резорбция материала остеокластами инфильтрация лимфо- и плазмоцитами в дефекте свода черепа крысы экспериментальной группы через 1

месяц

На поверхности костных балок определялись остеобласты. В средней части костного регенерата обнаруживались частицы костного остеопластического материала, окруженного грубоволокнистой соединительной тканью {рисунок 27) с инфильтрацией ее лимфоцитами и плазмоцитами, гигантскими клетками инородных тел {рисунок 28). Среди полей фиброзной ткани встречались участки жировой ткани и местами кровоизлияния из полнокровных сосудов.

Остеобласты

Рисунок 29,30. Срезы свода черепа крыс группы сравнения через 1 месяц

При гистологическом исследовании образцов свода черепа крыс группы сравнения выявлено, что с краев материнской кости фронт костной регенерации распространяется к центру не симметрично, больше с одного из полюсов. На поверхности костных балок присутствуют остеобласты {рисунок 29, 30).

Рисунок 31 .Гигантские клетки, резорбирующие остеопластический материал в дефекте свода черепа крысы группы сравнения через 1 месяц

Рисунок 32. Остеобласты на поверхности костных балок в дефекте свода черепа

крысы группы сравнения через 1 месяц

В центральной части регенерата обнаруживаются частицы костного остеопластического материала, которые подвергаются резорбции гигантскими клетками инородных тел {рисунок 31, 32). В грубоволокнистом и ретикулярном фиброзном матриксе обнаруживается умеренная инфильтрация лимфоцитами и плазмоцитами.

3.5. Результаты морфологического исследования через 2 месяца

Рисунок 33,34. Срезы свода черепа крыс контрольной группы через 2 месяца

При исследовании образцов свода черепа крыс контрольной группы обращало на себя внимание, что костный регенерат распространяется с материнского ложа вплоть до центра дефекта, однако заполнение его полностью не происходит, а он имеет ячеистую структуру {рисунок 33, 34).

Рисунок 35. Остеобласты на трабекуле в дефекте свода черепа крысы контрольной группы через 2 месяца

Рисунок 36. Остеобласты на трабекуле в дефекте свода черепа крысы контрольной группы через 2 месяца

Новообразованная костная ткань принимают упорядоченную форму. На поверхности костных балок активные остеобласты {рисунок 35, 36).

Рисунок 37,38. Срезы свода черепа крыс экспериментальной группы через 2

месяца

Гистологическая картина в образцах свода черепа экспериментальной группы характеризовалась замедлением процессов неоостеогенеза {рисунок 37), созреванием новообразованной костной ткани и продолжающимся продуктивным воспалением, связанным с реакцией на инородное тело - остеопластический материал {рисунок 38).

Гигантская многоядерная клетка

Рисунок 39.Гигантская многоядерная клетка в грубоволокнистой соединительной ткани рядом с материалом в дефекте свода черепа крысы экспериментальной

группы через 2 месяца

Рисунок 40.Грубоволокнистая соединительная ткань в дефекте свода черепа крысы экспериментальной группы через 2 месяца

Грубоволокнистая соединительная ткань имеет зрелую структуру {рисунок 39, 40)

Рисунок 41, 42. Срезы свода черепа крыс группы сравнения через 2 месяца

При гистологическом исследовании образцов свода черепа крысы обращало на себя внимание, что аппозиционный рост костного регенерата не имеет значительного продолжения {рисунок 41).

Костный матрикс новообразованной кости представлен созревающей пластинчатой костной тканью с неактивными остеобластами на поверхности (рисунок 42).

Рисунок 43. Неактивные остеобласты на поверхности новообразованной кости в дефекте свода черепа группы сравнения через 2 месяца

В центре регенерата расположены гранулы остеопластического материала в окружении соединительной ткани, в которой отмечается инфильтрация плазмо- и лимфоцитами. На поверхности гранул материала располагаются очагово гигантские клетки инородных тел, резорбирующие материал {рисунок 43).

3.6. Результаты морфологического исследования через 3 месяца

Рисунок 44. Срез свода черепа крысы контрольной группы через 3 месяца

При гистологическом исследовании образцов свода черепа крысы контрольной группы обнаружено, что сформированные в центре регенерата костные балки имеют зрелый характер, однако ячеистая структура регенерата сохранена {рисунок 44).

Активные остеобласты

Рисунок 45.Репаративный остеогенез в дефекте свода черепа крысы контрольной группы через 3 месяца

На поверхности костных балок активные остеобласты {рисунок 45).

Рисунок 46, 47. Срезы свода черепа крыс экспериментальной группы через 3

месяца

При исследовании образцов свода черепа крысы экспериментальной группы обнаруживается, что костный регенерат у краев дефекта имеет зрелый характер (рисунок 46).

В центре регенерата обнаруживаются гранулы остеопластического материала с признаками резорбции гигантскими клетками {рисунок 47).

Рисунок 48.Резорбция гигантскими клетками материала на фоне хронического воспаления в дефекте свода черепа крысы экспериментальной группы через 3

месяца

С одного из краев обнаруживается образование костной ткани на гранулах {рисунок 48)

Рисунок 49.Новообразованная костная ткань на поверхности гранул в дефекте свода черепа крысы экспериментальной группы через 3 месяца

В окружающем материале соединительной ткани признаки продуктивного воспаления. Сосуды расширены, полнокровны {рисунок 49).

Рисунок 50. Срез свода черепа крысы группа сравнения через 3 месяца

При исследовании образцов свода черепа крысы группы сравнения обнаруживается, что костный регенерат у краев дефекта имеет зрелый характер. В центре регенерата отмечаются гранулы остеопластического материала с признаками резорбции гигантскими клетками {рисунок 50).

Рисунок 51 .Костная ткань на поверхности гранул в дефекте свода черепа крысы

На поверхности отдельных гранул обнаруживаются напластования костного матрикса {рисунок 51). В окружающем материале соединительной ткани признаки продуктивного воспаления. Сосуды расширены полнокровны. (Бычков А.И.,

Костная ткань

группы сравнения через 3 месяца

2013)

Таблица 6

Данные морфометрии в области дефекта черепа крысы через 1, 2, 3 месяца

(Р<0,05)

Срок наблюдения Группы Объем новообразованной костной ткани % Объем фиброзной ткани % Объем оставшегося костного материала %

Экспериментальная группа 32,27 47,02 28,79

1 месяц Группа сравнения 25,41 22,90 29,35

Контрольная группа 21,26 0 0

Экспериментальная группа 62,44 33,61 30,27

2 месяца Группа сравнения 34,35 47,00 37,5

Контрольная группа 16,00 27,56 0

Экспериментальная группа 76,18 55,31 20,73

3 месяца Группа сравнения 22,20 47,76 30,15

Контрольная группа 30,15 0 0

Рисунок 52.Морфометрия в области дефекта черепа крыс через 1, 2, 3 месяца

3.7. Оценка костеобразования во всех группах в течение всего срока

наблюдения

В данном разделе работы исследовалось влияние рекомбинантного человеческого морфогенетического белка кости гЬВМР-2 в составе недеминерализованного костного матрикса на процесс костеобразования как в зоне хирургического вмешательства, так и в сегменте в целом и была принята 3-х балльная система оценки:

1 балл — слабое костеобразование (область костного дефекта заполнена рыхлой волокнистой тканью и фрагментами костного имплантата, представленными безостеоцитными костными балками);

2 балла — умеренное костеобразование (в проекции дефекта имеются очаги новообразованной зрелой костной ткани вокруг костного имплантата или краевое костеобразование на основе хрящевой ткани с остатками костного имплантата);

3 балла — выраженное костеобразование (область дефекта заполнена новообразованной зрелой костной тканью без остатков костного имплантата).

Сравнение с группой контроля (дефект не заполнялся остеопластическим материалом) и группой сравнения (дефект заполнялся чистым остеопластическим материалом без гЬВМР-2) проводилось на сроке 1, 2, 3 месяца. Результаты оценки костеобразования представлены в таблице №7.Как видно из представленных данных различия между экспериментальной группой и группой сравнения отмечаются на всех сроках наблюдения в пользу экспериментальной группы.

Таблица 7

Оценка процесса костеобразования (трехбалльная система)

Группа животных Кол-во животных Оценка процесса костеобразовани я, баллы

(среднее значение)

1 -ая группа, контрольная 6 1,7

1 месяц 2-ая группа, группа сравнения 6 1,9

3-я группа, экспериментальная 6 2,2

1 -ая группа, контрольная 6 1,8

2 месяца 2-ая группа, группа сравнения 6 2,0

3-я группа, экспериментальная 6 2,3

1 -ая группа, контрольная 6 1,8

3 месяца 2-ая группа, группа сравнения 6 2,0

3-я группа, экспериментальная 6 2,3

I Контрольная группа

I Группа сравнения

I Экспериментальная группа

1 месяц

2 месяца

3 месяца

Рисунок 53. Процесс костеобразования в трех группах по результатам морфологического исследования в сроки 1, 2, 3 месяца

Через 1 месяц среднее значение костеобразования в контрольной группе составляет 1,7 балла, в группе сравнения 1,9 балла, в экспериментальной группе 2,2 балла. Через 2 месяца в контрольной группе среднее значение костеобразования составляет 1,8 балла, в группе сравнения 2,0 балла, в экспериментальной группе 2,3 балла. В срок наблюдения через 3 месяца морфологическая картина не изменилась по сравнению со сроком через 2 месяца и средние значения костеобразования во всех группах сохранились.

3.8. Результаты компьютерной томографии

Оценку результатов компьютерной томографии проводили по площади восстановления костного дефекта в следующие сроки: 1, 2, 3 месяца. Площадь созданного дефекта в своде черепа крысы составляла 50,24 мм2. Данную величину приняли за «0». После проведенной компьютерной томографии измеряли диаметр невосстановленного дефекта и вычисляли его площадь, после чего переводили в проценты и анализировали процент восполнения костного дефекта.

Через 1 месяц в экспериментальной группе дефект был восстановлен на 45%, в группе сравнения на41%, в то время как в контрольной группе восстановления костного дефекта выявлено не было.

Через 2 месяца в экспериментальной группе дефект восполнился на 65%, в группе сравнения на 59%, в контрольной группе на 15%.

Через 3 месяца в экспериментальной группе дефект восстановился на 91%, в группе сравнения на 87%, в контрольной группе на 17%.

■ Экспериментальная группа

■ Группа сравнения

■ Контрольная группа

1 месяц 2 месяца 3 месяца

Рисунок 54. Оценка площади восстановления костного дефекта через 1, 2,

3 месяца

Качество восстановленного костного дефекта оценивалось по шкале плотности Хаунсфилда.

Через 1 месяц в экспериментальной группе плотность восстановленного костного дефекта составила 245, в группе сравнения 223, в контрольной группе 53.

Через 2 месяца в экспериментальной группе плотность восполненного костного дефекта составила 355, в группе сравнения 282, в контрольной группе 136.

Через 3 месяца в экспериментальной группе плотность восстановленного костного дефекта составила 364, в группе сравнения 303, в контрольной группе 198.

Восстановление дефекта свода черепа

Рисунок 55.Компьютерная томография черепа крыс через 3 месяца

(экспериментальная группа)

Дефект свода черепа

Рисунок 56. Компьютерная томография черепа крыс через 3 месяца

(контрольная группа)

Рисунок 5 7. Оценка плотности восполненного костного дефекта по шкале

Хаунсфилда через 1, 2, 3 месяца.

4. Обсуждение

Дефекты костной ткани, ее возрастная утрата или потеря в связи с патологическими состояниями не могут быть полностью устранены путем физиологической регенерации или посредством хирургического вмешательства.

В таких ситуациях используются биоматериалы или их синтетические аналоги.

Имеющиеся методы далеко не всегда позволяют не только заполнить объем имеющегося дефекта, но и создать условия выполнения механической функции кости. Иными словами, мы приблизились к созданию достаточного объема костной ткани, но структурные характеристики получаемого костного регенерата далеки от желаемого. Возникшую проблему мы и попытались решить в представленном исследовании.

Метод, оказывающий влияние на механизмы ремоделирования костной ткани, связан с использованием рекомбинантного человеческого морфогенетического белка кости (гЬВМР-2), который, в свою очередь, активизирует функцию остеобластов. Изучение свойств и возможностей использования гЬВМР-2 проводится в настоящее время в большинстве медико-биологических центров мира.

На первом этапе исследования задача состояла в синтезе и получении непосредственно самого белка для планируемых исследований. Эта задача была успешно решена в содружестве с Институтом теоретической и экспериментальной биофизики РАН, лаборатория тканевой инженерии, руководитель лаборатории д.ф.-м.н Акатов Владимир Семенович.

Белок был получен методом генной инженерии, который включал следующие этапы:

1. Генноинженерная сборка биологической конструкции;

2. Введение созданной молекулы в клетки бактерии Е.СоН;

3. Наработка достаточного объема бактериальной массы для получения необходимого количества белка;

4. Выделение белка из бактериальной массы и его биохимическая очистка.

Проведенный анализ литературных данных позволил оптимально выбрать биоматериал, необходимый для совместного использования с гЬВМР-2. Таким материалом выступил «Остеодент», представляющий собой стерильный биопластический материал на основе костного ксеноколлагена, насыщенный сульфатированными гликозаминогликанами (сГАГ) для направленной костной регенерации, производитель ЗАО «ЭОЗ ВладМиВа»

В дальнейшем, получив необходимую композицию (биоматериал с гЬВМР-2), мы приступили к лабораторным исследованиям.

В лаборатории стромальной регуляции иммунитета ФГБУ НИИ им. Н.Ф. Гамалеи под руководством д.м.н. проф. Р.К. Чайлахяна был запланирован и успешно проведен эксперимент, целью которого ставилось выявление имеющееся митотической активности клеток-предшественников стромальных фибробластов костного мозга и визуально оценить их адгезивную активность на поверхности предложенного биоматериала, содержащего гЬВМР-2.

Клетки-предшественники стромальных фибробластов костного мозга получали следующим методом: крыс усыпляли эфиром. С соблюдением правил асептики через разрез на задней части бедра выделяли бедренные и большеберцовые кости. Эпифизы костей обрезали и шприцом выдували костный мозг во флакон с питательной средой. Фрагменты костного мозга пропускали через шприц с последовательно уменьшающимся диаметром игл при минимальном давлении в нем до получения гомогенной взвеси клеток. Взвесь дважды отмывали центрифугированием при 4°С (40(^), осадок ресуспендировали в свежей питательной среде, фильтровали через 4-х слойный капроновый фильтр.

Для получения штаммов стромальных клеток-предшественников костного мозга эксплантировали во флаконы. На 10-14 день культивирования, когда

колонии стромальных фибробластов были полностью сформированы, проводили I пассаж.

Для изучения взаимодействия штаммов остеогенных клеток-предшественников с остеопластическим материалом, насыщенным рекомбинантным человеческим морфогенетическим белком кости гЬВМР-2, его засеивали пассивированными клетками. Культивирование проводили в течение 57 дней. Затем производили фиксацию.

Перед фиксацией культуральную среду сливали, материал несколько раз промывали физиологическим раствором и на 30 мин. заливали 80% этанолом. Фиксированные на остеопластическом материале, содержащем рекомбинантный морфогенетический белок кости гЬВМР-2, культуры окрашивали по Гимзе. После этого оценивали полученный результат под микроскопом.

Визуальная оценка клеток-предшественников на остеопластическом материале с помощью сканирующего электронного микроскопа показала, что наличие гЬВМР-2 не препятствует прикреплению и фиксации клеточного материала на недеминерализованном костном матриксе. Данное исследование проводилось в лаборатории анатомии микроорганизмов ФГБУ НИИ им. Н.Ф. Гамалеи, руководитель лаборатории - д.м.н. Л.В. Диденко.

После завершения лабораторной части исследования приступили к эксперименту на животных.

Для проведения экспериментальной части нами была разработана экспериментальная модель критического дефекта в своде черепа крысы. Используемая нами экспериментальная модель дефекта, по мнению зарубежных исследователей, является максимально информативной и приближенной к естественным условиям функционирования остеоиндуктивного биоматериала в организме реципиента. Моделирование процесса восполнения дефекта дает возможность исследовать плотность, объем и качество образующегося регенерата и оценить остеоиндуктивные характеристики в цифровых значениях. Так же

исследовалось влияние рекомбинантного человеческого морфогенетического белка кости гЬВМР-2 в составе недеминерализованного костного матрикса на процесс костеобразования как в зоне хирургического вмешательства, так и в сегменте в целом.

В эксперименте использовано 54 половозрелых самцов белых крыс породы Вистар с массой тела 400-500 г в возрасте 4-5 месяцев. Животные были разделены на 3 группы: 1-я - контрольная, П-я - группа сравнения и Ш-я -экспериментальная (по 18 крыс в каждой). У животных Н-ой (экспериментальной) группы дефект заполняли чистым недеминерализованным костным матриксом «Остеодент», а у Ш-ей (экспериментальной) группы дефект заполняли недеминерализованным костным матриксом «Остеодент», содержащим гЬВМР-2. В контрольной группе дефект заживал под сгустком. Из эксперимента животные выводились в следующие сроки: 1, 2, 3 месяца, по 6 крыс из каждой группы.

В послеоперационный период животным производили антисептическую обработку раны раствором хлоргексидина 0,05% на первые, третьи, пятые и седьмые сутки. У животных всех групп швы снимали на седьмые сутки после операции. При осмотре отмечали признаки послеоперационных воспалительных явлений и проводили оценку течения раневого процесса на первые, третьи, пятые и седьмые сутки после операции и заносили результат в таблицы. Клиническая картина была оценена по набору клинических признаков, которые оценивали по системе «Да» и «Нет», что соответствовало баллам 1 и 0, и выражали в процентном соотношении.

Таблица 8

Частота встречаемости клинических признаков в послеоперационном периоде

Контрольная группа Группа сравнения Экспериментальная группа

Клинический признак (симптом) Сутки Сутки Сутки

1 3 5 7 1 3 5 7 1 3 5 7

% признаков % признаков % признаков

Повышение температуры тела 66,7 33,3 ПД 5,6 94,4 77,8 38,9 16,7 94,4 83.3 33,3 ПД

Отек мягких тканей 72,2 55,6 33,3 11,1 83,3 77,8 44,4 0 72,2 83,3 38,9 0

Увеличение регионарных лимфоузлов 0 0 0 0 5,6 5,6 5,6 5,6 5,6 5,6 5,6 5,6

Наличие гиперемии 11,1 5,6 5,6 0 27,8 66,7 27,8 11Д 27,8 61,1 27,8 5,6

Несостоятельность швов 0 0 0 0 0 0 0 11,1 0 0 0 5,6

Наличие гематомы 0 0 11,1 11,1 0 0 0 0 5,6 5,6 5,6 0

Нагноение раны 0 0 0 0 0 0 0 11Д 0 0 0 5,6

На первые сутки разница частоты встречаемости клинических признаков в экспериментальной группе и группе сравнения составила 0,8% в пользу экспериментальной группы.

На третьи сутки составила 3,2% в пользу экспериментальной группы.

На пятые сутки составила 0,8% в пользу экспериментальной группы.

На седьмые сутки составила 3,2% в пользу экспериментальной группы.

После проведенного анализа полученных данных выраженности клинических проявлений у лабораторных животных после вмешательства статистически значимых различий между группой сравнения и экспериментальной группой выявлено не было. Следовательно, наличие rhBMP-2 в составе костного материала не влияет на степень и течение воспалительного процесса.

Гистологическое исследование образцов свода черепа, включавших область хирургического вмешательства, проводили непосредственно после биопсии. Материал помещали в 10% раствор формалина на фосфатном буфере на 72 часа, после чего в течение 24 часов образцы ткани промывали в проточной воде. Декальцинацию проводили электролитическим способом в перенасыщенном растворе ЭДТА. По завершении процесса образцы ткани промывали в проточной воде в течение 24 часов. Промытые и обсушенные на фильтровальной бумаге кусочки помещали на 24 часа в 50% раствор этанола.

В результате проведенного морфологического исследования установлено, что имплантация материала с rhBMP-2 показывает разницу с группой сравнения в первые 2 срока наблюдения (1 и 2 мес.) в сторону более высокой эффективности образования костной ткани по сравнению с имплантацией материала не содержащего rhBMP-2, а также использованная модель критического дефекта костной ткани является адекватной и отвечает требованию к поставленным целям и задачам (Бычков А.И., 2013).

Исходя из полученных данных компьютерной томографии, выявлены различия между контрольной и опытными группами в пользу последних. Между экспериментальной группой и группой сравнения статистически значимых различий обнаружено не было.

Следовательно, наличие рекомбинантного человеческого

морфогенетического белка кости гЬВМР-2 в составе остеопластического материала не влияет на площадь восстановленной костной ткани. Что же относительно различий между контрольной и опытными группами, то это можно объяснить тем, что сформированный костный дефект <1=8мм. в своде черепа крысы является критическим и не имеет возможности восстановиться самостоятельно.

Проведенные нами исследования и оценка остеоиндуктивности отечественного рекомбинантного человеческого морфогенетического белка кости гЬВМР-2 показало высокую перспективу его клинического использования совместно с различными комбинациями остеопластических материалов.

Адгезия клеточного материала на поверхности остеопластического материала, насыщенного рекомбинантным человеческим морфогенетическим белком кости гЬВМР-2 доказывает целесообразность применения для заполнения костных дефектов и использования для реконструктивных операций на челюстных костях в ЧЛО.

Данные морфологических исследований изучаемых сегментов позволяет делать вывод о полноценной структуре костного регенерата, образующегося в дефекте. В дальнейшем это позволит полноценно и оптимально использовать данный участок в челюстных костях для различных видов лечения, в том числе и дентальной имплантации.

Выводы

1. Содержание рекомбинантного человеческого рекомбинантного морфогенетического белка кости г1гВМР-2 в составе остеопластического материала на основе недеминерализованного костного матрикса во время исследования на биологической модели не препятствует адгезии клеток-предшественников фибробластов на его поверхности.

2. По данным сканирующей электронной микроскопии микрорельеф поверхности остеопластического материала в виде гранул с размерами 700800 мкм на основе недеминерализованного костного матрикса является оптимальным для адгезии клеток-предшественников костного мозга.

3. Наличие рекомбинантного человеческого морфогенетического белка кости гЪВМР-2 в составе остеопластического материала на основе недеминерализованного костного матрикса не влияет на течение раневого процесса в послеоперационном периоде по отношению к группе сравнения.

4. С помощью гистроморфологического метода исследования установлено лучшее качество новообразованной костной ткани в дефекте свода черепа крысы в экспериментальной группе при заполнении дефекта недеминерализованным костным матриксом, насыщенным рекомбинантным человеческим морфогенетическим белком кости гЬВМР-2 (2,3 балла) по отношению к группе сравнения при применении чистого недеминерализованного костного матрикса (2 балла). Структурно оформленная костная ткань получена при применении рекомбинантного человеческого морфогенетического белка кости г1тВМР-2 в комплексе с носителем.

5. На основании результатов компьютерной томографии достоверной разницы в площади заполнения дефекта новообразованной костной тканью к сроку 3 месяца между группой сравнения и экспериментальной группой не выявлено.

Практические рекомендации

1. На основании данных сканирующей электронной микроскопии в качестве носителя рекомбинантного человеческого морфогенетического белка кости гЬВМР-2 рекомендовано использовать недеминерализованный костный матрикс «Остеодент» в виде гранул размерами 700-800мкм.

2. Рекомендуемая концентрация рекомбинантного человеческого морфогенетического белка кости гЬВМР-2 в остеопластическом материале составляет 0,6-0,8 мг/см3.

3. Целесообразно применение остеопластического материала, содержащего рекомбинантный человеческий морфогенетический белок кости гЬВМР-2 при восстановлении костных дефектов на верхней и нижней челюстях в случае дальнейшего протезирования с опорой на имплантаты.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БАД - биологически активная добавка ГАГ - гликозаминогликаны

ДЛКИ - деминерализованный лиофилизированный костный имплантат ДЛКМ - деминерализованный лиофилизированный костный матрикс КТ - компьютерная томография

НЛКИ - недеминерализованный лиофилизированный костный имплантат

РАН - Российская Академия Наук

СЭМ - сканирующий электронный микроскоп

ЧЛО - челюстно-лицевая область

BMP - bone morphogenetic protein

rhBMP-2 - recombinant human bone morphogenetic protein 2 TGF(3 - transforming growth factor beta

Списоклитературы

1. Абдуллаев, Ш.Ю. Использование новых биологически совместимых материалов при восстановлении дефектов челюсти / Ш.Ю. Абдуллаев, М.Х. Архипова // Стоматология. - 1999. - №3. - С. 37-38.

2. Абоянц, Р.К. Остеопластические и ранозаживляющие материалы нового поколения серии гидроксиапол и колапол / Р.К. Абоянц, А.И. Воложин, Л.П. Истранов // Тезисы докл. 1-й Всеросс. науч. конф. - М., 1997. - С. 5-6.

3. Адонина, О.В. Клинико-рентгенологическая оценка результатов операции внутрикостной имплантации с поднятием дна верхнечелюстных пазух : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.00.21 / О. В. Адонина. - М., 2004. - 21 с.

4. Айбестер, П. Деминерализованная лиофилизированная кость / П. Айбестер // Клиническая имплантология и стоматология. - 1998.- Т. 6, № 3. - С. 74-75.

5. Анастасов, А.Н. Разработка методов восстановления объема костной ткани альвеолярного отростка верхней челюсти при подготовке к дентальной имплантации: дис. ... канд. мед. наук : 14.00.21 / А.Н. Анастасов. - М., 2002. -127 с.

6. Андрианов, B.JI. Применение деминерализованного костного матрикса у детей / B.JT. Андрианов, В.И. Савельев, К.Н. Быстрый// Вестник хирургии. - 1986. -Т. 136, №2. - С. 78-82.

7. Арсеньев, П.А. Синтез и исследование материалов на основе гидроксиапатита кальция / П.А. Арсеньев, Н.В. Саратовская // Стоматология. - 1996. - № 5. - С. 74-79.

8. Аснина, С.А. Хирургическое лечение радикулярных кист челюстных костей с использованием биокомпозиционного материала «Остеоматрикс» / С.А. Аснина, B.C. Агапов, А.Ф. Панасюк // Институт стоматологии. - 2004. - №2. -С. 43-44.

9. Атлас сканирующей электронной микроскопии клеток, тканей, органов; под ред. О.В. Волковой, В.А. Шахламова, A.A. Мироновой. - М. : Медицина, 1987.-462 с.

10. Базарный, B.B. Регуляция дистаркционного остеогенеза иммуноактивными пептидами / В.В. Базарный //Клеточные и нанотехнологии в биологии и медицине : материалы Всерос. науч.-практ. Конф. - Курган, 2007.- С. 16-17.

11. Бакиев, Б.А. Хирургическое лечение одонтогенных кист челюстей : дис.канд.мед. наук : 14.00.21 / Б.А. Бакиев. - Фрунзе, 1985. - 233 с.

12. Балин, В.Н.Опыт клинической апробации материалов на основе биокерамики в стоматологии / В.Н. Балин, В.Ф. Черныш, А.М. Ковалевский // Стоматология. - 1996. - № 5. - С. 45-47.

13. Барер, Г.М. Болезни пародонта. Клиника, диагностика и лечение : учеб. пособие / Г.М. Барер, Т.И. Лемецкая / ММСИ; ВУНМЦ. - М. : ВУНМЦ,1996. -87 с.

14. Беззубов, А.Е. Сравнительная оценка применения костнопластических материалов для замещения дефектов челюстей (клинико-экспериментальное исследование) : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.01.14 / А. Е. Беззубов. -Самара, 2010.-20 с.

15. Безруков, В.М. Гидроксиапатит как субстрат для костной пластики: теоретические и практические аспекты проблемы / В.М. Безруков, A.C. Григорьян // Стоматология. -1996.-№5. -С. 7-12.

16. Безруков, В.М. Руководство по хирургической стоматологии и че-люстно-лицевой хирургии / В.М. Безруков, Т.Г. Робустова. - М.: Медицина, 2000.-С. 220-243.

17. Берлянд, A.C. Физико-химические и биологические свойства гидроксиапатита фирмы "Поликом" / A.C. Берлянд, А.И. Воложин, А.З. Книжник //Новое в стоматологии. -1992. - № 3. - С.9-12.

18. Булатов, A.A. Применение костных морфогенетических белков в эксперименте и клинике / A.A. Булатов, В.И.Савельев, А.В.Каменин // Травматология и ортопедия России,- 2005.- №1.-С. 46-54.

19. Бычков, А.И. Замещение костных дефектов при помощи остеопластического материала, насыщенного морфогенетическим белком кости (rhBMP-2) / А.И.

Бычков, М.Э. Долинер // Дентальная имплантология и хирургия. - 2013. - № 1. -С. 50-53.

20. Бычков, А.И. Изучение остеоиндуктивной активности рекомбинантного морфогенетического белка кости (rhBMP-2) в составе остеопластического материала на основе деминерализованного матрикса в эксперименте / А.И. Бычков, М.Э. Долинер, А.И. Ситдикова // Стоматология для всех. - 2013. - № З.-С. 16-20.

21. Волова, JI.T. Аллогенные деминерализованные костные матриксы в регуляции остеогенеза: автореф. дис. ...д-ра мед. наук : 14.00.15 / JI.T. Волова. - М., 1997.-33 с.

22. Володина, Д.Н. Морфологические исследования биосовместимости материалов на основе костного коллагена, насыщенных сульфатированными гликозаминогликанами / Д.Н. Володина, A.M. Панин, Е.В. Ларионов // Стоматология. - 2008. -№3.-С.9-12.

23. Воложин, А.И. Новые подходы к применению синтетического гидроксиаппатита в стоматологии, травматологии и хирургии / А.И. Воложин, В.Б. Лиханов, С.И. Гаража// Биомедицинские технологии : тр. науч.-практ. объединения. - 2002. - Вып.5.-С. 27-32.

24. Воложин, А.И. Оценка биосовлестимости остеопластических материалов с использованием длительных культур костного мозга / А.И. Воложин, И.С. Мальгинова, В.Г. Лебедев //Российский стоматологический журнал. - 2005. -№3. - С. 17-19.

25. Воложин, А.И. Создание нового поколения биосовместимых материалов на основе фосфатов кальция для широкого применения в медицинской практике /

A.И. Воложин, С.Г. Курдюмов, В.П. Орловский //Технологии живых систем. -2004.-Т. 1, № 1. -С.41-56.

26. Воложин, А.И. Этиология и патогенез воспалительных заболеваний / А.И. Воложин, В.В. Рогинский // Воспалительные заболевания челюстно-лицевой области у детей / В.В. Рогинский, А.И. Воложин, В.А. Вайлерт и др. ; под ред.

B.В. Рогинского. - М.: Детстомиздат, 1998. - С. 7-39. - Гл. 1.

27. Воложин, А.И. Экспериментальное обоснование эффективности применения остеопластического геля с морфогенетическими белками для оптимизации заживления костной ткани челюсти / А.И. Воложин, В.В. Гемонов, К.С. Десятниченко // Российский стоматологический журнал. -2006. - № 6.-С.4-7.

28. Вырупаев, C.B. Пластика нижней челюсти артериализированными костно-мышечными лоскутами / C.B. Вырупаев // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии. - 2002. - № 1. - С. 21-28.

29. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. - М.: Практика. -

1999.-С. 122-139.

30. Григорьян, A.C. Динамика заживления костных дефектов, заполненных композиционным материалов на основе полиакриламидного геля и гидроксиапатита / A.C. Григорьян, А.И. Воложин, Нидаль Аль Азмер // Проблемы нейростоматологии и стоматологии. -1997.-№2.-С. 6-11.

31. Григорьян, A.C. Остеопластическая эффективность различных форм гидроксиапатита по данным экспериментально-морфологического исследования / A.C. Григорьян, А.И. Воложин, B.C. Агапов // Стоматология. -

2000. - №3. - С.4-8.

32. Григорьянц, J1.A. Эффективность использования композиционных остеопластических материалов для пластики костных дефектов челюстей / JI. А. Григорьянц, C.B. Сирак, A.A. Слетов // Стоматология : спец. вып. к 45-летию ЦНИИС - 2007. - № 6 . - С. 60-64.

33. Губин, М.А. Замещение дефектов нижней челюсти васкуляризированным малоберцовым аутотрансплантатом / М.А. Губин, М.А. Ходорковский//Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии. - 1998. -№3. - С. 38.

34. Деев, Р.В. Клеточные технологии в травматологии и ортопедии: пути развития /Р.В. Деев, A.A. Исаев, А.Ю. Кочиш // Травматология и ортопедия России. -2007. - № 4. - С. 46.

35. Денисов, В.М. Некоторые иммунологические аспекты пересадки деминерализованных костных трансплантатов /В.М. Денисов, Н.Е. Анфимов,

H.С. Краснова // Деминерализованные костные трансплантаты и их использование в восстановительной хирургии : сб. науч. тр. - СПб., 1996. - С. 67-70.

36. Денисов, В.М. Некоторые иммунологические реакции при регенерации кости, индуцированной деминерализованным костным трансплантатом / В.М.Денисов, П.Е. Анфимов, Н.С. Краснова // Деминерализованный костный трансплантат и его применение : сб. науч. тр. - СПб., 1993. - С. 74-78.

37. Дмитриева, JI.A. Клинический опыт использования остеопластического материала «Остеопласт-К» при хирургических вмешательствах на пародонте / JI.A. Дмитриева, З.Э. Ревазова, Т.А. Яковлева // Пародонтология. - 2006. - № 2. - С. 38-42.

38. Долинер, М.Э. Перспективы использования морфогенетического белка кости в составе остеопластического материала для ускорения остеоиндукции /М.Э. Долинер, А.И. Бычков, А.И. Ситдикова // DentalForum - 2013. - № 4. - С. 2023.

39. Дробышев, А.Ю.Экспериментальное обоснование и практическое применение отечественных биокомпозиционных материалов при костно-восстановительных операциях на челюстях: дис. ... д-ра мед. наук: 14.01.14 / А.Ю. Дробышев. - М., 2001.-45 с.

40. Дьякова, C.B. Применение биологических аллогенных трансплантатов при костной пластике нижней челюсти у детей: метод, рекомендации / C.B. Дьякова, С.А. Ульянов, О.З. Топольницкий. - М., 1999. - 26 с.

41. Жарков, А. В. Направленная костная регенерация. Условия успеха / A.B. Жарков // Российский вестник дентальной имплантологии,- 2007/2008. - № 1/4. -С. 22-26.

42. Журули, Г.Н. Применение биокомпозиционного материала «Биоимплант» при хирургических стоматологических вмешательствах : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.01.14 / Г.Н. Журули. - М., 2001. - 26с.

43. Загородний, H.B. Использование остеоматрикса при дефектах костной ткани / Н.В. Загородний, В.И. Макунин, М.В. Банецкий // Сборник тезисов докладов VIII съезда травматологов-ортопедов России. - Самара, 2006. - С. 1049.

44. Иванов, С.Ю. Перспективы применения в стоматологии материалов «Биоматрикс» и «Алломатрикс имплант» в сочетании с остеогенными клетками предшественниками костного мозга /С.Ю. Иванов, Р.К. Кузнецов, Р.К. Чайлахян Р.К. // Клиническая имплантология и стоматология. - 2000. -№3-4.-С. 17-18.

45. Истранов, Л.П. Коллаген: состав, свойства, направлениеиспользования в технологии лекарств / Л.П. Истранов, Е.В. Истранова // Фармацея. - 1984. - № 5. - С. 76-79.

46. Калугин, A.B. Применение аллогенного деминерализованного костного матрикса при оперативном лечении костных опухолей /A.B. Калугин, СИ. Болтрукевич // Деминерализованные костные транс-плантаты и их использование в восстановительной хирургии : сб. науч. тр. - СПб., 1996. - С. 123-125.

47. Кириллова, И.А. Деминерализованный костный трансплантат как стимулятор остеогенеза / И. А. Кириллова // Хирургия позвоночника. - 2004.- Т.З.- С. 105110.

48. Коротких, Н.Г. Комплексная профилактика деформаций альвеолярного отростка после удаления зубов / Н.Г. Коротких, H.H. Лесных // Стоматология. -2004.-№ 1.-С. 23-25.

49. Крысъ-Пугач, А.Л. Применение керамического гидроксилапатита в детской и подростковой ортопедии / А.Л. Крысь-Пугач, Р.В. Лучко // Актуальные вопросы детской травматологии и ортопедии : материалы науч.-практ. конф. -СПб., 2000. - С. 226-228.

50. Кузнецова, H.H. Влияние дифференцированной местной терапии на заживление лунки зуба при альвеолите : дис. ... канд. мед. наук : 14.01.14 / H.H. Кузнецова. - Пермь, 2005. - С. 11 -13.

51. Кулаков, A.A. Реконструкция при значительной атрофии верхней и нижней челюсти с помощью аутокостных трансплантатов / A.A. Кулаков, М.А. Амхадова, В.М. Королев // Пародонтология. - 2008. -Т. 46, № 1. - С. 49-53.

52. Кулаков, A.A. Хирургические аспекты реабилитации больных с дефектами зубных рядов при использовании различных систем имплантатов: автореф. дис. ... д-ра мед. наук : 14.01.14 / A.A. Кулаков. - М., 1997. - 27с.

53. Курдюмов, С.Г. Гидроксиапол и колапол: применение в стоматологической и хирургической практике / С.Г. Курдюмов // Военно-медицинский журнал. -1997. -№ 6. - С. 48-49.

54. Лекишвили, М.В. Новые биопластические материалы в реконструктивной хирургии /М.В. Лекишвили, А.Ф. Панасюк // Вестник РАМН. - 2008. - № 9. -С. 33-36.

55. Леус, П.А. Эпидемиология и профилактика болезней периодонта: метод, рекомендации / П.А. Леус, C.B. Латышева, С.С. Лобко. - Минск: БГМУ,2002.-39 с.

56. Лобко, С.С. Профилактика болезней периодонта у подростков и молодых людей: автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.01.14 / С.С. Лобко. - Смоленск, 1997. - 16 с.

57. Лосев, Ф.Ф. Экспериментально-клиническое обоснование использования материалов для направленной регенерации челюстной костной ткани при ее атрофии и дефектах различной этиологии : дис. ... д-ра мед. наук : 14.01.14 / Ф.Ф. Лосев,- М., 2000. - 268 с.

58. Матвейчук, И.В. Влияние процесса деминерализации на механические характеристики образцов компактной кости взрослого человека / И.В. Матвейчук, Ю.И. Денисов-Никольский // Механика заменителей биологических тканей. - Рига : Зинатне, 1987. - Вып. 4. - С. 175-183.

59. Меркулов, В.Н. Использование поверхностно-деминерализованных имплантатов в лечении посттравматических ложных суставов у детей /В.Н. Меркулов, М.В. Лекишвили, А.И. Дорохин // Вестник травматологии ортопедии. - 2000. - № 4. - С. 22-25.

60. Мешков, Г.В. Использование расщепленных аутотрансплантатов черепных костей в черепно-челюстно-лицевой хирургии / Г.В. Мешков, В.П. Ипполитов // Восстановительная хирургия челюстно-лицевой области. - М., 1995. -С. 8991.

61. Ожелевская, С.А. Применение неколлагеновых белков кости и хондроитинсульфата для усиления остеопластических свойств остеопластического материала «Гапкол» / С.А. Ожелевская // Актуальные проблемы стоматологии : материалы Всеросс. науч.-практ. конф., посвящ. 105-летию со дня рождения проф. Е.Е.Платонова. - М., 2006. - С. 123-125.

62. Панасюк, А.Ф. Биоматериалы для восстановления костных дефектов на основе костных аллоколлагена, гидроксиапатита и сульфатированных гликозаминогликанов /А.Ф. Панасюк, М.В. Лекишвили, Е.В. Ларионов // Клинические и фундаментальные аспекты тканевой терапии : материалы II Всеросс. симп. с междунар. участием. - Самара, 2004. - С. 43-44.

63. Панасюк, А.Ф. Способ выделения сульфатиованных гликозаминогликанов /А.Ф. Панасюк, Е.В. Ларионов, Д.А. Саващук. - Патент РФ на изобретение №2162331 от 20.05.2000.

64. Панасюк, А.Ф. Хондроитинсульфаты и их роль в обмене хондроцитов и межклеточного матрикса хрящевой ткани /А.Ф. Панасюк, Е.В. Ларионов // Научно-практическая ревматология. - 2000. - № 2. - С. 46-55.

65. Панин, A.M. Биокомпозиционные остеопластические материалы. Применение и перспективы развития / A.M. Панин // Стоматология XXI века : сб. статей. -Н. Новгород, 2003. - С. 146-148.

66. Панин, A.M. Новое поколение остеопластических материалов (разработка, лабораторно-клиническое обоснование, клиническое внедрение) : дис. ... д-ра мед. наук : 14.00.21 / А. М. Панин. - М., 2004. - 209 с.

67. Попов, В.Ф. Зубное протезирование с использованием имплантации при выраженной атрофии челюстных костей: автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.00.21 / В.Ф. Попов. - Самара, 2009. - 22 с.

68. Путляев, В.И. Современные биокерамические материалы / В.И. Путляев // Соросовский образовательный журнал. - 2004. - Т. 8, № 1. - С. 44-50.

69. Робустова, Т.Г. Имплантация зубов. Хирургические аспекты: руководство для врачей. - М.: Медицина, 2003. - 560 с.

70. Савельев, В.И. Остеоиндуктивные свойства костных аллотрансплантатов, деминерализованных после их предварительной консервации низкими температурами /В.И. Савельев, Д.Е. Иванкин // Деминерализованные костные трансплантаты и их использование в восстановительной хирургии : сб. науч. тр. - СПб., 1996.-С. 37-40.

71. Савельев, В.И. Оценка остеоиндуктивных свойств костных аллотрансплантатов, деминерализованных при различных температурных режимах и консервированных разными способами /В.И. Савельев, Н.В. Корнилов, Д.Е. Иванкин // Деминерализованные костные трансплантаты и их использование в восстановительной хирургии : сб. науч. тр. - СПб., 1996. -С. 16-24.

72. Савельев, В.И. Первый опыт оценки индуктивных свойств костных трансплантатов, деминерализованных ортофосфорной кислотой / В.И. Савельев, Н.В. Хлебович // Деминерализованный костный трансплантат и его применения : сб. науч. тр. - С.Пб., 1993. - С. 125-129.

73. Савельев, В.И. Получение и сохранение деминерализованной костной ткани для клинического применения / В.И. Савельев // Деминерализованные костные трансплантаты и их использование в восстановительной хирургии : сб. науч. тр.-СПб., 1996.-С. 3-12.

74. Серов, В.В. Соединительная ткань / В.В. Серов, А.Б. Шехтер. -М.: Медицина, 1981. -312с.

75. Семихин, A.C. Получение компонентов иммунобиологических препаратов на основе микробиологического синтеза и технологии аффинных доменов: автореф. дис. ... канд. биол. наук : 03.02.03 / A.C. Семихин. - М., 2010. - 12 с.

76. Сивков, С.Н. Способ заготовки и консервации деминермизованных костных трансплантатов: автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.00.21 / С.Н. Сивков. - Д., 1988.- 19 с.

77. Снетков, А.И. Использование пластического материала «Перфоост» в клинике детской костной патологии / А.И. Снетков, М.В. Лекишвили, И.А. Касымов // Вестник травматологии и ортопедии им. Н.И. Приорова. - 2003. - № 4. - С. 7480.

78. Сойфер, В.В Экспериментальное обоснование эффективности применения остеоинтегративного геля при немедленной дентальной имплантации /В.В. Сойфер, А.И. Воложин, В.В. Рогинский //Стоматология для всех. - 2005. - № 2. . с. 44-47.

79. Соловьева, Л. Г. Возможности плазмы, обогащенной тромбоцитами (PRP), при пластике дефектов челюстей / Л.Г. Соловьева, А.И.Ушаков// Российский стоматологический журнал.- 2006.-№ 6. - С. 12-15.

80. Сысолятин, П.Г. Костная аллопластика нижней челюсти. Клинико-экспериментальное исследование : автореф. дис. ... д-ра мед. наук : 14.00.21 / П.Г. Сысолятин. - Новосибирск, 1984. - 31 с.

81. Тенилин, H.A. Применение мелкодисперсного костного матрикса при лечении костных кист у детей /H.A. Тенилин, В.М. Денисов // Хирургическая коррекция и восстановительное лечение повреждений и заболеваний опорно-двигательного аппарата у детей : материалы конф. -СПб. - Казань, 1996. - С. 94-96.

82. Топольницкий, О.З. Изучение влияния гидроксиапатита на формирование костного регенерата в эксперименте / О.З.Топольницкий, А.И. Воложин,С.В. Дьякова // Актуальные вопросы экспериментальной и клинической медицины : сб. тр. -М., 1993.-С. 47.

83. Фон Верзен, Р. Подготовка деминерализованного костного матрикса к клиническому использованию / Р. Фон Верзен // Деминерализованный костный трансплантат и его применение : сб. науч. тр. - СПб., 1993. - С. 4-11.

84. Фриденштейн, А.Я. Индукция костной ткани и остеогенные клетки-предшественники / А.Я. Фриденштейн, К.С. Лалыкина. - М. : Медицина, 1973. -224 с.

85. Фриденштейн, А.Я. Остеогенные клетки-предшественники костного мозга радиохимер. Анализ методом гетеротропной трансмиссии / А.Я. Фриденштейн, А.И. Куралесова // Онтогенез. - 1971. - Т. 2, №5.

86. Хилькин, A.M. Коллаген и его применение в медицине / A.M. Хилькин, А.Б. Шехтер, Л.П. Истранов, В.Л. Леменев. - М. : Медицина, 1976. - 228 с.

87. Ходорковский, М.А. Замещение дефектов нижней челюсти васкуляризированным малоберцовым аутотрансплантатом / М.А. Ходорковский, М.А. Губин // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии. - 1998.-№3.-С.38.

88. Чергештов, Ю.И. Клинико-иммунологические основы лечения больных с переломами нижней челюсти, их воспалительными осложнениями и при восстановительных операциях с использованием трансплантатов : автореф. дис. ... д-ра мед. наук : 14.00.21 / Ю.И. Чергештов. - М., 2000. - 32 с.

89. Чиркова, Т.Д. Применение трикальцийфосфата в комплексном лечении пародонтита : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.00.21 / Т.Д. Чиркова. -М.,1992. -21 с.

90. Шарапова, Н.Е. Получение рекомбинантного костного морфогенетического белка 2 человека в клетках Escherichia coli и тестирование его биологической активности in vitro и in vivo / Н.Е. Шарапова, А.П. Котнова, З.М. Шалушкина // Молекулярная биология. - 2010. - Т. 44, № 6. - С. 1036-1044.

91. Шехтер, А.Б. Инъекционный полиакриламидный гидрогель «Формакрил» и тканевая реакция на его имплантацию /А.Б. Шехтер, В.Б. Лопатин, С.А. Чочия // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии. - 1997. -№ 2. - С. 11-21.

92. Щепкина, Е.А. Трансплантация аутологичных мезенхимальных стволовых клеток на деминерализованном костном матриксе при пластике ложных суставов и костных дефектов / Е.А. Щепкина, П.В. Кругляков, Л.Н. Соломин

// Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии :материалыШ Всеросс. симп. с междунар. участием. - М., 2007. - С. 113-120.

93. Aaron, A.D. Allograftuseinorthopedicsurgery / A.D. Aaron, J.D. Wiedel // Orthopedics. - 1994. - Vol.17, N1. - P. 41-48.

94. Arts,J.J. Larger bone graft size and washing of bone grafts prior to impaction enhances the initial stability of cemented cups: experiments using a synthetic acetabular model / J.J. Arts, N. Verdonschot, P. Buma //Acta. Orthop. - 2006. -Vol.2, N 77. - P. 227-33.

95. Aspenberg, P. Pulverized bone matrix as an injectable bone graft in rabbit de-fects /Р. Aspenberg, J. Wittbjer, K.G. Thorngren // Clin. Orthop. - 1986. - N 206. - P. 261-269.

96. Astrand, J. Reduction of instability-induced bone resorption using bisphosphonates: high doses are needed in rats /J. Astrand, R. Aspenberg // Acta. Orthop. Scand. -2002. - Vol. 73. - P. 24-30.

97. Baas, J. The bovine bone protein lyophilisate Colloss improves fixation of allografted implants - an experimental study in dogs / J.Baas, A. Lamberg, T.B. Jensen / Acta. Orthop. - 2006. - Vol. 5, N 77. - P.791-798.

98. Bauer, T.W. Bone grafts materials. An overview of the basic science /T.W. Bauer, G.F. Muschler // Clin. Orthop. - 2000. - N 371. - P. 10-27.

99. Becker, W. Human demineralized freeze-dried bone: inadequate induced bone formation in athymic mice. A preliminary report /W.Becker, M.R. Urist, L.M. Tucker // J. Periodontoi. - 1995. - Vol.66, N 9. P. - 822-828.

100. Board, T.N. Impaction allografting in revision total hip replacement /T.N. Board, P. Rooey, J.N. Kearney // J. Bone Joint Surg. Br. - 2006. - Vol. 88. - P. 852857.

101. Boyde, A. Osteoconduction in large macroporous hydroxyapatite ceramic implants: evidence for a complementary integration and disintegration mechanism / A.Boyde // Bone. - 1999. -Vol.6. - P.579-589.

102. Boyne, P.J. Animal studies of application of rhBMP-2 in maxillofacial reconstruction / P.L.Boyne// Bone. - 1996. -Vol.19, N l(Suppl). -P.83-92.

103. Bostrom, M.P. Osteoinductive growth factors in preclinical fracture and long bone defects models/ M.P. Bostrom, K.J. Saleh, T.A. Einhorn // Orthop. Clin. North. Am. - 1999. - Vol. 3, N 4, Oct. - P.647-658.

104. Bouxsein, M.L. Recombinant human bone morphogenetic protein-2 accelerates healing in a rabbit ulnar osteotomy model / M.L. Bouxsein, T.J. Turek, C.A. Blake //J. Bone Joint. Surg. Am. - 2001. - Vol. 8, N 83-A. - P. 1219-1230.

105. Brower, R.S. A case of psoas ossification from the use of BMP-2 for posterolateral fusion at L4-L5 / R.S. Brower, N.J.M.L. Vickroy // Spine.- 2008. -Vol. 15, Aug.-P. 33.

106. Bruder, S.P. Mesenchymal stem cells in osteobiology and applied bone regeneration / S.P. Bruder, N. Jaiswal, N.S. Ricalton //Clin. Orthop. - 1998. - N 355S. - P. 247-256.

107. Bruder, S.P. The effect of implants loaded with autologous mesenchymal stem cell on the healing of canine segmental bone defects /S.P. Bruder, K.H. Kraus, V.M. Goldberg // J. Bone Jt. Surg. - 1998. - Vol. 80, N 7. - P. 985-996.

108. Bruder, S.P. Tissue engineering of bone: cell-based strategies / S.P. Bruder, N. Jaiswal, N.S. Ricalton // Clin. Orthop. - 1999. - N367S. - P. 68-83.

109. Burkus, J.K. Use of rhBMP-2 in combination with structural cortical allografts: clinical and radiographic outcomes in anterior lumbar spinal surgery / J.K.Burkus, H.S. Sanghu, M.F. Gornet // J. Bone Jt. Surg. - 2005. - Vol. 87A, N 6. - P. 827838.

110. Celil, A.B. BMP-2 and insulin-like growth factor-I mediate Osterix (Osx) expression in human mesenchymal stem cells via the MAPK and protein kinase D signaling pathways / A.B.Celil, P.G. Campbell // J. Biol. Chem. -2005. - Vol. 280, N36. - P. 31353-31359.

111. Chen, X. Osteogenic protein-1 induced bone formation in AN infected SEGmental defect in the rat femur / X. Chen, L.S. Kidder, W.D. Lew // J. Orthop. Res. -2002.-Vol. 20.-P. 142-150.

112. Convery, F.R. Acetabular augmentation in primary and revision total hip arthroplasty with cementless prosthesis /F.R. Convery, M. Minter-Convery // Clin. Orthop. - 1998. - Vol. 252. - P. 167-175.

113. Cook, S.D. Strut Allograft Healing to the Femur With Recombinant Human Osteogenic Protein-1 /S.D. Cook, R. Barrack, M. Santman // Clinical Orthopaedics & Related Research. - 2000. - Vol. 381, N1, Dec. - P. 47-57.

114. Cook, S.D. The effect of recombinant human osteogenic protein-1 on healing of large segmental bone defects /S.D. Cook, G.C. Baffes, M.W. Wolfe // J. Bone Joint Surg. [Am], - 1994. - Vol. 76-A. - P. 827-838.

115. Cui, Q. Use of Genetically Engineered Bone-Marrow Stem Cells to Treat Femoral Defects: An Experimental Study / Q. Cui, Z. Xiao, X. Li // J. Bone and Joint Surgery (Am). - 2006. - Vol. 88. - P. 167-172.

116. Damien, C.J. Bone graft and bone graft substitutes: A review of current technology and applications / C.J. Damien, J.R. Parsons // J. Appl. Biomech. -1991. -Vol.2. - P. 187-208.

117. Einhorn, T.A. Clinical applications of recombinant human BMPs: early experience and future development / T.A. Einhorn// J. Bone Joint Surg. Am.- 2003.-Vol. 85. - P. 82-88.

118. Emerson, R.H. Noncemented acetabular revision arthroplasty using allograft bone /R.H. Emerson, W.C. Head // Clin. Orthop. - 1989. - Vol. 249. - P. 30-43.

119. Enneking, W.F. Observations on massive retrieved human allografts /W.F. Enneking, E.R. Mindell // J. Bone Jt. Surg. (Am). - 1991. - Vol.73, N 8. -P. 11231142.

120. Geesink, R.G.T. Osteogenic activity of OP-1 bone morphogenetic protein (BMP-7) in human fibular defect /R.G.T. Geesink, N.H.M. Hoemagels, S.K. Bulstra // J. Bone Jt. Surg. (Br). - 1999. - Vol. 81, N 4. - P. 710-718.

121. Govender, S. Evaluation in surgery for tibial trauma (BESTT) Study Group: recombinant human bone morphogenetic protein-2 for treatment of open tibial fractures: a prospective, controlled, randomized study of four hundred and fifty

patients /S. Govender, C. Csimma, H.K. Genant // J. Bone Joint Surg [Am]. - 2002. -Vol. 84-A.-P. 2123-2134.

122. Graham, S. Investigating the role of PDGF as a potential drug therapy in bone formation and fracture healing / S. Graham // Expert. Opin. Investig. -2009. -Vol.11,N 18, Nov. - P. 1633-1654.

123. Greenwald, S. Bone-graft substitutes: facts, fictions and applications / S. Greenwald // J. Bone Joint Surg. (Am). - 2001. - Vol. 83-A. - P. 98-103.

124. Gross, A.E. Bone grafts in hip replacement surgery: The peine side /A.E. Gross, D.G. Allan // Orthop. Clin. North (Am). - 1993. - Vol. 24. - P. 679-687.

125. Haid, R.W. Posterior lumbar interbody fusion using recombinant human bone morphogenetic protein type 2 with cylindrical interbody cages / R.W.Haid, C.L.Jr. Branch, J.T. Alexander // Spine J. - 2004. - Vol.4. - P.527-539.

126. Hallman, M. Sinus floor augmentation with bovine hydroxyapatite mixed with fibrin glue and later placement of nonsubmerged implants: a retrospective study in 50 patients /M. Hallman, T. Nordin //Int. J. Oral Maxillofac. Implants. - 2004. -Vol. 2, N 19, Mar-Apr. - P. 222-227.

127. Han, B. Quantitative and sensitive in vitro assay for osteoinductive activity of demineralized done matrix /B. Han, B. Tang, M.E. Nimni // J. Orthop. Res. - 2003. -Vol. 21, N4. - P. 648-654.

128. Hollinger, J.O. Role of bone substitutes /J.O. Hollinger, J. Brekke, E. Gruskin // Clin. Orthop. - 1996. - N 324. - P. 55-65.

129. Jackson, R.L. Glycosaminoglycans: Molecular properties, protein interactions, and role in physiological processes / R.L.Jackson, S.J. Busch, A.D. Cardin //Physiol. Rev. - 1993. - Vol.71. - P.481-539.

130. Jeppson, C. BMP implants in bone formation. Studies in rabbits and rats / C. Jeppson / Department of Orthopedics. Lund University. - 2003.

131. Jones, A.L. Prospective, randomized comparison of rhBMP-2 ACS in combination with allograft versus autogenous bone graft in healing diaphyseal tibial fractures with traumatic bone loss / A.L. Jones // Annual Meeting of the Orthopedic Trauma Association. - Hollywood, FL, USA, 2004. - P. 123-124.

132. Jorgenson, S.S. A prospective analysis of autograft versus allograft in posterlateral lumbar fusion in the same patient / S.S. Jorgenson, T.G. Lowe // Spine.

- 1994.-Vol. 19, N 11.-P. 2048-2053.

133. Kakiuchi, M. Preparation of bank bone using defatting, freeze-drying and sterilisation with ethylene oxide gas. Part 1. Experimental evaluation of its efficacy and safety /M. Kakiuchi, K. Qno, A. Nishimura // Int. Orthopaed. - 1996. - Vol. 20, N3. - P. 142-146.

134. Kakiuchi, M. Preparation of bank bone using defatting, freeze-drying and sterilisation with ethylene oxide gas. Part 2. Clinical evaluation of its efficacy and safety /M. Kakiuchi, K. Qno // Int. Orthopaed. - 1996. - Vol. 20, N 3. - P. 147-152.

135. Kakiuchi, M. The relative clinical efficacy of surface-decalcified and wholly decalcified bone aloimplants /M. Kakiuchi, K. Ono // Int. Orthopaed. - 1987. - Vol. 11,N4.-P. 89-94.

136. Kandziora, F.L. Bone morphogenetic protein-2 application by a poly(D,L-lactide)-coated interbody cage: in vivo results of a new carrier for growth factors / F.L.Kandziora, H.P. Bail, G.D. Schmidmaier // J. Neurosurg. -2002. - Vol. 1, N 97.

- P. 40-48.

137. Kaneko, H. Direct stimulation of osteoclastic bone resorption by Bone Morphogenetic Protein (BMP-2) and expression of BMP receptors in mature osteoclasts / H. Kaneko, T. Arakawa, H. Mano // Bone. - 2000. - Vol.27, N 4. - P. 479-486.

138. Karrholm, J. Micromotion of femoral stems in total hip arthroplasty: a randomized study of cemented, hydroxyapatite-coated, and porous-coated stems with roentgen stereophotogrammetric analysis /J. Karrholm, H. Malchau, F. Snorrason // J. Bone Jt. Surg. (Am). - 1994. - Vol. 76. - P. 692-705.

139. Kelly, T.L. Dual energy X-Ray absorptiometry body composition reference values from NHANES /T.L. Kelly, K.J.E. Wilson, S.B. Heymsfield // PLoS ONE. -2009. - Vol. 4, Issue 9, Sept. - P. 7038.

140. Kenley, R.P. Osseous regeneration in the rat calvarium using novel delivery systems for recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) / R.P.

Kenley, L.K. Marden, T.M. Turek // J. Biomed. Mater. Res. - 1994. - N 28. - P. 1139-1147.

141. Kesteris, U. Rinsing morcellised bone grafts with bisphosphonate solution prevents their resorption: a prospective randowised double-blinded study /U. Kesteris, P. Aspenberg // J. Bone Jt. Surg. (Br). - 2006. - Vol. 88. - P. 993- 996.

142. Killian, J.T. Treatment of unicameral bone cyst with demineralized bone matrix /J.T. Killian, L. Wilkinson, S. White // J. Pediatric. Orthop. - 1998. - Vol. 18, N4. -P. 621-624.

143. Koide, M. Bone morphogenetic protein-2 enhances osteoclast formation mediated by interleukin-1 alpha through upregulation of osteoclast differentiation factor and cyclooxygenase-2 /M. Koide, Y. Murase, K. Yamato // Bio-chem. Biophys. Res. Commun. - 1999. - Vol. 259. - P. 97-102.

144. Kwong, F.N. Chordin knock-down enhances the osteogenic differentiation of human mesenchymal stem cells / F.N. Kwong, S.M. Richardson, C.H. Evans // Arthritis. Res. Ther. - 2008. - N 10. - P.65.

145. Lamerigts, N.M. Role of growth factors in the incorporation of unloaded bone allografts in the goat /N.M. Lamerigts, P. Buta, P. Aspenberg // Clin. Orthop. -1999.-N368.-P. 260-27.

146. Lane, J.M. Biosynthetic bone grafting /J.M. Lane, E. Tomin, M.P.G. Bostrom // Clin. Orthop. - 1999. - N 367 S. - P. 107-117.

147. Lane, J.M. Bone marrow and recombinant human bone morphogenetic protein-2 in osseous repair /J.M. Lane, A.W. Yasko, E. Tornin // Clin. Orthop. - 1999. - N 361. - P. 216-227.

148. Lang, T.F. Volumetric quantitative computed tomography of the proximal femur: precision and relation to bone strength /T.F. Lang, J.H. Keyak, M.W. Heitz // Bone. - 1997.-Vol. 21. - P. 101-108.

149. Lee, E.H. The potential of stem cells in thopaedic surgery /E.H. Lee, J.H. Hui // J. Bone Joint. Surg. (Br J.). - 2006. - Vol. 88, N 8. - P. 841 -51.

150. Linde, A. Recombinant bone morphogenetic protein-2 enhances bone healing, guided by osteopromotive e-PTFE membranes: an experimental study in rats / A. Linde, E. Hedner // Calcif. Tissue Int. - 1995. - Vol. 56.-P.549-553.

151. Malik, D.K. Recent advances in protein and peptide drug delivery systems /D.K. Malik, S. Baboota, A. Ahujia // Curr. Drug. Deliv. - 2007. - Vol. 2, N 4,Apr. - P. 141-51.

152. Marden, L.J. Recombinant human bone morphogenetic protein-2 is superior to demineralized bone matrix in repairing craniotomy defects in rats / L.J. Marden, J.O. Hollinge, A.L. Chaudhari // J. Biomed. Mater. Res. - 1994. - N 28. - P. 11271138.

153. McKee, M.D. The treatment of long bone nonunion with rhBMP: results of prospective pilot study/ M.D. McKee, E.H. Schemitsch, J.P. Waddell // Annual Meeting Am. Acad. Orthop. Surg. 71st. - San Francisco, 2004. - P. 242.

154. Moed,B.R. Calcium sulfate used as bone graft substitute in acetabular fracture fixation /B.R. Moed, S.E. Willson Carr, J.G. Craig // Clin. Orthop. - 2003. - N 410. - P. 303-309.

155. Mullender, M.G. Differences in osteocyte density and bone histomorphometry between men and women and between healthy and osteoporotic subjects / M.G. Mullender, S.D. Tan, L.Vico//Calcif. Tissue Int. - 2005. - Vol. 77. - P. 291-296.

156. Nakashima, M. The application of bone morphogenetic proteins to dental tissue engineering / M. Nakashima, A.H. Reddi // Nat. Biotechnol.- 2003. - Vol. 21.- P. 1025.

157. Oakeshott, R.D. Revision total hip arthroplasty with osseous allograft reconstruction: A clinical and roentgenjgraphic analysis /R.D. Oakeshott, D.A.F. Morgan // Clin. Orthop. - 1987. - Vol. 225. - P. 37-49.

158. Ochs, B.G. Acetabular bone reconstmction in revision Arthroplasty /B.G. Ochs, U. Schmid, J. Rieth // J. Bone Joint Surg. (Br). - 2008. - Vol. 90-B. - P. 1164-1171.

159. Paproski, W.G. Pinciples of bone grafting in revision total hip arthroplasty /W.G. Paproski, R.E. Magnus // Clin. Orthop. - 1994. - Vol. 298. - P. 147-155.

160. Paprosky, W.G. The treatment of acetabular bone defects with an associated pelvic discontinuity / W.G. Paprosky, M.O. Ttourke, S.J.M. Sporer // Clin. Orthop. Relat. Res. - 2005. - Vol. 441, Dec. - P. 216-220.

161. Paralkar, V.M. Cloning and characterization of a novel member of the transforming growth factor-beta bone morphogenetic protein family / V.M.Paralkar, A.L. Vail, W.A. Grasser // J. Biol. Chem. - 1998. - Vol. 273, N 22. - P. 1376013767.

162. Park, Y.J. Immobilization of bone morphogenetic protein-2 on a nanofibrous chitosan membrane for enhanced guided bone regeneration / Y.L. Park, K.H. Kim, J.Y. Lee // Biotechnol. Appl. Biochem. - 2006. - Vol. 43, N 1. - P. 17-24.

163. Piccaluga, F. Revision of the femoral prosthesis with impaction allografting and a Charnley stem /F. Piccaluga, A.Gonzalez Delia Valle, J.C-Encinas Fernandez // J. Bone Joint Surg. (Br). - 2002. - Vol. 84-B. - P. 544-549.

164. Reddi, A.H. Morphogenetic messages are in the extracellular matrix: biotechnology from bench to bedside/ A.H. Reddi // Biochem. Soc. Trans. - 2000. -Vol.28.-P. 345-349.

165. Ruhe, P.Q. In vivo release of rhBMP-2 loaded porous calcium phosphate cement pretreated with albumin / P.Q. Ruhe, O.C. Boerman, F.G.M. Russel // J. Mater. Sci. Mater. Med. - 2006. - Vol.17. - P.919-927.

166. Salai, M. The effects of prolonged cryopreservation on the biomechanical properties of bone allografts / M. Salai, T. Brosh, N. Keller // A microbiological, histological and mechanical study. Cell and Tissue Banking. - 2000. - Vol.1. - P. 6973.

167. Sampath, T.K. Recombinant human osteogenic protein-1 induces new bon formation in vivo with a cpecific activity comparable with natural bovine osteogenic protein and stimulates osteoblast proliferation and differentiation in vitro / T.K. Sampath,G.G. Maliakal, P.V. Hauschka // J. Biol. Chem. - 1992. - Vol.267, N 28. -P. 20352-20362.

168. Sellers, R.S. The effect of recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) on the healing of full-thickness defects of articular cartilage/ R.S. Sellers, D. Peluso, E.A. Morris // J. Bone Joing. Am. - 1997,-Vol. 79.-P. 1452-1463.

169. Schwartz, Z. Ability of commercial demineralized freeze-dried bone allograft to induce new bone formation /Z. Schwartz, J.T. Mellonig, D.L. Carnes // J. Periodontal. - 1996. - Vol. 67, N9. - P. 918-928.

170. Sciadini, M. Dose response characteristics of recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) in a canine segmental defect model (abstract) / M.Sciadini, J. Dawson, L. Berman // Trans. Orthop. Res. Socity. - 1995. - Vol. 20.

- P. 594

171. Solheim, E. Osteoinduction by demineralised bone /E. Solheim // Int. Orthopaed.

- 1998. - Vol.22, N5. — P. 335-342.

172. Spector, M. Basis principles of tissue engineering /M. Spector // Tissue Engineering. Applications in maxillofacial surgery and periodontics; ed. Lynch S.E. et al. - Quintessence Publishing Co, Inc., 1999. - P. 3-16.

173. Szpalski, M.P. Recombinant human bone morphogenetic protein-2: a novel osteoinductive alternative to autogenous bone graft?/ M.P. Szpalski, R.T. Gunzburg // Acta Orthop. Belg. - 2005. - Vol. 2, N71, Apr. - P. 133-148.

174. Takaoka, K. Bone-inducing factors in osteoinductive implants /K.TaKaoica, H. Yoshikawa, S. Miyamoto e // Human Biomaterials Application. - Totowa, New Jersey: Humana Press, 1996. - P. 91-98.

175. Tanner,K.E. Clinical-Applications of Hydroxyapatite Reinforced Materials / K.E. Tanner, R.N. Downes, W. Bonfield // British Ceramic Transactions. - 1994. - Vol. 93.-P. 104-107.

176. Tohrna, Y. Osteogenic activity of bone marrow-derived mesenchymal stem cells (BMSCs) seeded on irradiatted allogenic bone /Y. Tohrna, Y. Dohi, H. Ohqushi // J. Tissue Eng. Regen Med. - 2011. - Feb. 15. - Doi: 10.1002/term.401.

177. Vallet-Regi, M. Ceramics for medical applications /M. Vallet-Regi // J. Chem. Soc. - Dalton Trans., 2001, N 27. - P. 97-108.

178. Vargas, B. Acetabular revision with freeze-dried irradiated and chemically treated allograft: a minimum 5-year follow-up of 17 cases / B. Vargas, J. Caton // International Orthopaedics (SICOT). - 2009. - Vol. 33. - P. 35-39.

179. Wang, J.W. Acetabular revision with morsellised allogenic bone graft and a cemented metal-backed component /J.W. Wang, C.Y. Fong, Y.S. Su // J. Bans Joint Surg IBrl. - 2006. - Vol. 88-B. - P. 586-591.

180. Winn, S.R. Sustained release emphasizing recombinant human bone morphogenetic protein-2 / S.R. Winn, H. Uludag, J.O. Hollinger // Adv. Drug. Deliv. Rev. - 1998. - Vol. 31, N 3. - P. 303-318.

181. Wozney, J.M. Overview of bone morphogenetic proteins / J.M. Wozney // Spine. -2002. - Vol. 27, Suppl. I. - P. 2-8.

182. Wozney, J.M. Bone morphogenetic protein and bone morphogenetic protein gene familu in bone formation and repair / J.M. Wozney, V. // Clin. Orthop. - 2000. - N 346. - P.26-37.

183. Yannas, I.V. Design of an artificial skin: basic design principles / I.V. Yannas, J. Burke //J. Biomed. Matr. Res. - 1980. -Vol.19. - P.343-351.