Изучение молекулярного механизма ассоциации некоторых антибиотиков с сывороточным альбумином человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, Шрайбер, Наум Фридрихович

• Шрайбер, Наум Фридрихович
• 1984

Оглавление диссертации Шрайбер, Наум Фридрихович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Структура, физико-химические свойства и функции сывороточного альбумина

1.2. Ассоциация сывороточного шшбумина с лигандами.

1.3. Влияние малых молекул на конформацию альбумина.■.

1.4. Пенициллины и их связывание с сывороточным альбумином.

Глаза 2. МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМЕНТА И ОБРАБОТКИ ДАННЫХ.

2.1. Калориметрические методы исследования растворов биополимеров

2.2. Метод проточкой микрокалориметрии.

2.2.1. Обработка экспериментальных данных

2.3. Метод дифференциальной сканирующей калориметрии

2.3.1. Обработка экспериментальных данных

2.3.2. Контрольные опыты.

2.4. Определение температуры денатурации ЧСА по изменению оптической плотности

2.5. Кинетический анализ тепловой денатурации сывороточного альбумина человека

2.6. Объекты исследования

Глава 3. ШЗИШ-ХЙМИЧЕСКЯЕ ПАРАМЕТРЫ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ 1ШЩИЛЛИНОВ С СЫВОРОТОЧНЫМ АЛЬБУМИНОМ И ТЕПЛОВОЙ ДЕНАТУРАЦИИ ОБРАЗУЮЩИХСЯ КОМПЛЕКСОВ (результаты эксперимента)

Глава 4. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ АСПЕКТЫ АССОЦИАЦИИ В СИСТЕМЕ ПЕНИЦИМЙН-СЫВЕРОТОЧНШ АЛЬБУМИН ЧЕЛОВЕКА (Обсуждение результатов).

4.1. Природа активных центров альбумина

4.1.1. Пенициллины первой группы.

4.1.2. Пенициллины второй группы.

4.2. Изменение конформации молекулы сывороточного альбумина при связывании пенициллинов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение молекулярного механизма ассоциации некоторых антибиотиков с сывороточным альбумином человека»

Тот факт, что большинство антибиотиков, попадая в кровь млекопитающих, образуют комплекс с альбуминовой фракцией крови, известен давно. Уже в начале практики клинического применения пенициллинов было обнаружено уменьшение их антибактериальной активности в присутствии сыворотки крови. В дальнейшем установили, что пенициллины взаимодействуют только с сывороточным альбумином как In vivo , так и In vitro. Поскольку активным началом обладает свободная (несвязанная) фракция введенного лекарства, степень связывания имеет решающее значение при оценке его фармакологического действия. Молекулы лекарств конкурируют за активные центры белка с соединениями, участвующими в жизнедеятельности организма, для которых сывороточный альбумин осуществляет транспортную функцию. Все это вызвало появление большого количества работ, направленных на исследование механизма взаимодействия пенициллинов с сывороточным альбумином; расшифровка молекулярной природы сил, присутствующих в образовании комплекса, необходима как в плане понимания самого механизма ассоциации , так и для углубления представлений о транспорте антибиотиков в организме.

При ассоциации антибиотиков с сывороточным альбумином установлен обратимый характер такого взаимодействия; количественная информация ограничивается процентом связывания либо, в лучшем случае, константой ассоциации, определенной при одной температуре. Однако, в литературе единой точки зрения на природу такого взаимодействия на сегодня нет. Большинство исследователей сходятся во мнении о преобладающем значении гидрофобного связывания между компонентами комплекса; выводы относительно участия в комплексообразовании других сил противоречивы. В раде работ придается большое значение электростатическим взаимодействиям, другие исследователи отвергают их роль в образовании комплексов. Указывают также на существование водородных связей в рассматриваемой системе.

Упомянутые противоречия связаны с недостаточной информативностью применявшихся до настоящего времени методов исследования. Так, прямые калориметрические эксперименты, обеспечивающие получение достоверной информации о термодинамике взаимодействия в системе сывороточный альбумин человека - пенициллины, до настоящего времени не проводились.

Целью нашей работы было исследование природы молекулярных сил при ассоциации восьми пенициллинов (оксациллина, клоксацил-лина, диклоксациллина, феноксиметилпенициллина, нафциллина, бнн-зилпенициллина, метициллина и ампициллина) с сывороточным альбумином человека, определение количества активных центров белка для данного лекарства, расчет и сопоставление констант связывания в изучаемой системе, а также рассмотрение влияния связанных антибиотиков на конформацию белка-носителя.

В экспериментальной части работы наш впервые для исследования системы сывороточный альбумин человека - пенициллины были применены методы проточной микрокалориметрии и дифференциальной сканирующей калориметрии. Выбранные методы позволили непосредственно измерить энтальпию комплексообразования в изучаемой системе, температуру и энтальпию денатурации сывороточного альбумина и его комплексов с пенициллинами и рассчитать основные термодинамические параметры ассоциации.

Метициляин и ампициллин при взаимодействии с сывороточным альбумином человека не вызывают резких изменений конформации белка. При связывании первой молекулы оксациллина, клоксадилли-на, диклоксациллина, нафциллина, феноксиметилпенициллина и бен-зилпенициллина наблюдался конформационный переход макромолекулы, сопровождаемый появлением дополнительных активных центров белка. Впервые, определено количество первичных и вторичных центров сывороточного альбумина при связывании с изученными пенициллинами, константы связывания, а также получена полная термодинамическая информация о взаимодействии лиганда с таким активным центром.

Заключение диссертации по теме «Другие cпециальности», Шрайбер, Наум Фридрихович

ВЫВОДЫ

1. Изучена ассоциация восьми пенициллинов с сывороточным альбумином человека. Установлено, что связывание 1-й молекулы оксациллина, клокеациллина, диклоксациллина, феноксиметилпени-циллина, нафциллина и бензилпенициллина приводит к значительному изменению конформации молекулы ЧСА; для метициллина и ампициллина такой эффект не наблюдается.

2. Определено количество первичных и вторичных активных центров белка для каждого из исследованных пенициллинов; рассчитаны константы и термодинамические параметры ассоциации.

3. Произведена оценка вклада электростатических и гидрофобных взаимодействий с ЧСА для каждого лекарства; сделано предположение об отсутствии водородных связей в изучаемых системах.

4. Выявлен стабилизирующий характер связывания данных лекарств при тепловой денатурации белковой молекулы.

5. Установлено, что ассоциация исследованных антибиотиков с сывороточным альбумином не нарушает кооперативного характера его тепловой денатурации. . ,

6. Показано, что метод дифференциальной сканирующей калориметрии, впервые примененный нами для исследования в системе альбумин-- лекарство, применим для изучения взаимодействия сывороточного альбумина с антибиотиками пенициллинового рдда.

В заключении автор приносит глубокую благодарность руководителю работы - кандидату биологических наук Михаилу Николаевичу Марковичу за постоянное внимание и помощь на всех этапах работы. Автор выражает искреннюю признательность директору Научно-исследовательского института по биологическим испытаниям химических соединений член-корреспонденту АН СССР Льву Арамовичу Пирузяну, а также заведующему отделом структурной химии Института доктору химических наук Михаилу Александровичу Ландау за критические замечания и участие в творческих дискуссиях.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Подводя итоги работы, перечислим наиболее существенные ее результаты.

При проведении экспериментов были использованы калориметрические методики, что дало возможность непосредственно измерить тепловые эффекты, которыми сопровождаются изучаемые нами процессы. В работе определено количество активных центров белковой молекулы для исследованных пенициллинов и рассчитаны константы ассоциации в изучаемой системе. Таким образом, установлена потенциальная "емкость" человеческого сывороточного альбумина для конкретного лекарства. Использованные в работе методы позволили собрать достоверную термодинамическую информацию об изучаемой системе: энтальпию, свободную энергию и энтропию ассоциации пенициллинов с ЧСА, а также температуру и энтальпию денатурации образующихся комплексов. Заключение об отсутствии значительного изменения конформации белка при связывании мети-циллина и ампициллина и наличие такового для шести остальных исследованных пенициллинов основывалось на результатах, полученных двумя методами. Установлено, что ассоциация всех изученных антибиотиков стабилизирует белковую глобулу при воздействии тепла. Показано, что все изученные лиганды при взаимодействии с ЧСА не нарушают кооперативного характера тепловой денатурации этого белка: при плавлении как самого альбумина, так и всех исследованных комплексов на термограммах обнаружен лишь один четко выраженный пик поглощения тепла. Это свидетельствует о сохранении макромолекулой ее кооперативной единицы; воздействие данных антибиотиков на глобулу носит "мягкий" характер.

Все изученные пенициллины по характеру взаимодействия с сывороточным альбумином человека были разделены на две группы. Ассоциация с пенициллинами, отнесенными нами к первой группе (оксациллин, клоксациллин, диклоксациллин, феноксиметилпе-нициллин, нафциллин и бензилпенициллин) приводит к кооперативному изменению корформации биомолекулы, сопровождающемуся появлению вторичных активных центров. В свою очередь, внутри этой группы можно выделить в отдельную подгруппу оксациллин, клоксациллин и диклоксациллин. Доминирующий вклад энтальпии в изменение свободной энергии процесса однозначно свидетельствует о решающей роли электростатических взаимодействий по сравнению с гидрофобными в данной подгруппе. Движущей силой образования комплексов белка с нафциллином и феноксиметилпенициллином, отнесенных нами ко второй подгруппе, является положительное значение изменения энтропии процесса, свидетельствующее о преобладающем вкладе гидрофобных взаимодействий. Вклад дН в А 6 , а также зависимость дН 0т ионной силы раствора свидетельствуют тем не менее о наличии электростатических взаимодействий для феноксиметилпенициллина; нафциллин и бензилпенициллин показывают "чисто" гидрофобный характер взаимодействия с сывороточным альбумином человека.

Ассоциация белка с метициллином и ампициллином не сопровождается конформационньш переходом биомолекулы; сопоставление термодинамических параметров взаимодействия указывает на преимущественно гидрофобный характер процесса.

Таким образом, анализ термодинамических параметров ассоциации позволил сделать заключение о молекулярной природе сил при образовании комплекса ЧСА с конкретным антибиотиком.

Значения термодинамических параметров связывания сывороточного альбумина человека с изученными пенициллинами, количество первичных и вторичных центров белка и констант ассоциации для этих центров существенно отличаются от имеющихся в литературе данных для системы бычий сывороточный альбумин - пенициллины (в том числе, и определенных с помощью калориметрического метода /9/). Этот факт заставляет с большой осторожностью использовать бычий альбумин в качестве модели для изучения связывания антибиотиков в крови человека.

Константы ассоциации ряда пенициллинов, полученные в нашей работе, могут оказаться полезными при изучении конкуренции различных лекарств за активные центры альбумина как в случае рассмотрения внутрирядовой конкуренции, так и при исследовании конкурентного связывания с различными классами лекарственных препаратов, переносимых сывороточным альбумином.

Отметим еще одну возможность применения результатов данной работы. Известно, что при ряде патологий изменяются некоторые физико-химические свойства сывороточного альбумина, в том числе характер связывания с лигандами. Следовательно, использованные нами методики способны обнаружить отклонения от нормы при связывающей способности активных центров альбумина и, вероятно, выявления причины такого "патологического" поведения альбумина.

Список литературы диссертационного исследования Шрайбер, Наум Фридрихович, 1984 год

1. Блшенфельд Л.А. Проблемы биологической физики. М., "Наука", 1977.

2. Гольдштейн И.П., Гурьянова Е.Н., Карпович И.Р. Определение хеплот образования и констант ассоциации молекулярных соединений методом калориметрического титриро-вания. Ж.Ф.Х., 1965, т. 39, 4, 932-937.

3. Измайлова В.Н., Ребиндер П.А. Структурообразование в белковых системах. М., "Наука", 1974.

4. Кивман Г.Я., Рудзит Э.А., Яковлев ВЛ. Фармакокине-тика химиотерапевтических препаратов. М., "Медицина", 1982.

5. Кяйвяряйнен А.И. Динамическое поведение белков в водной среде и их функции. Л., "Наука", 1980.

6. Курский М.Д., Костерин С.А., Рыбальченко В.К. Биохимическая кинетика. Киев, "Высшая школа", 1977.

7. Ландау М.А., Маркович М.Н., Рудзит Э.А. Исследование термодинамики комплексообразования малых молекул с белками методом микрокалориметрии. Ж. физ. химии, 1977, б, 1495-1497.

8. Ландау М.А. Молекулярные механизмы действия физиологически активных соединений. М., "Наука", 1981.

9. Маркович М.Н. Исследование термодинамики и молекулярной природы сил при комплексообразовании пенициллинов с сывороточным альбумином. Дисс. канд., М., 1977.

10. Маркович M.H., Рудзит Э.А., Ландау М.А. Молекулярные аспекты взаимодействия пенициллинов с сывороточным альбумином. Антибиотики, 1978, 7, 654-664.

11. Маркович М.Н., Шрайбер Н.Ф., Аверьева Е.В. Возрастание термостабильности человеческого сывороточного альбумина при взаимодействии с оксациллином. в кн.: 6 Всесоюзный симпозиум "Химия белков и пептидов", Тез. докл., Рига, 1983, №-136.

12. Маркович М.Н., Шрайбер Н.Ф., Аверьева Е.В. Термодинамика изменения конформации сывороточного альбумина человека и его комплексов при тепловой денатурации. В кн.: 6 Всесоюзный симпозиум "Химия мелков и пептидов", Тез! докл., Рига, 1983, I38-I4I.

13. Маркович М.Н., Шрайбер Н.Ф., Аверьева Е.В. Кинетический анализ тепловой денатурации сывороточного альбумина методом дифференциальной сканирующей калориметрии. Рукопись представлена НИИ по БИХС. Деп. в ВИНИТИ 28 сент. 1983 г., № 5376-83.

14. Маркович М.Н., Шрайбер Н.Ф., Аверьева Е.В. Возрастание термостабильности альбумина при его связывании с оксациллином. Рукопись представлена НИИ по БИХС. Деп. в ВИНИТИ 28 сент. 1983 г., № 5375-83.

15. Маркович М.Н., Шрайбер Н.Ф., Аверьева Е.В. Калориметрическое изучение комплексообразования в системе лекарство белок, I. Связывание ыетициллина с сывороточный альбумином человека. Хим.-фары., 1984, 2.

16. Маркович М.Н., Шрайбер Н.§., Аверьева Е.В. Калориметрическое изучение комплексообразования в системе лекарство-белок. II Термостабилизация человеческого сывороточного альбумина при его ассоциации с оксациллином и метициллином. Хим.-фары, (в печати).

17. Макнаугтон И.Л. и Мартимер К.Т. Дифференциальная сканирующая калориметрия. Перкин Элмер корп., 1977.

18. Николаева Т.И., Розенфельд Г.С. Новые полусинтетические пенициллины и их аналоги. Сб. "Итоги науки и техники", сер. "Биологическая химия". М., ВИНИТИ, 1983.

19. Привалов П.Л., Хечинашвили Н.Н. Калориметрическое изучение тепловой денатурации цитохрома С. Биофизика, 1974, 19, 14-19.

20. Рудзит Э.А. Сравнительное изучение полусинтетических пенициллиров в эксперименте. Дисс. докт. М., 1971.

21. Харахонычева Н.В., Рудзит Э.А», Райхман Л.М., Мош-ковский Ю.Ш. Исследование взаимодействия сывороточного альбумина человека с пенициллинами методом спиновых меток. Антибиотики, 1975, т. 20, 917-922.

22. Эммануэль Н.М., Кнорре А.Г. Курс химической кинетики, М.,"Высшая школа", 1962.

23. Яковлев В.П. Фармакокинетика пенициллинов, тетрацикли-нов и некоторых других антибиотиков в организме. экспе-* риментальных животных и человека. Дисс. докт.,М.,1970.- из

24. Adams P.A. and Berman M.C. Kinetics and mechanism of the interaction between human serum albumin and mono-meric haemin. Farmacol. J. 1980, 191» 95-102.

25. Behrens P.Q., Speiekerman A.M., and Brown J.R. Structure of human serum albumin. Fed. Proc. 1975, 34, 591.

26. Benson E.S. and Hallway В.Б. On the mechanism of PH-de-pendent hydrogen exchange of bovine plasma albumin in the PH 5 to 8.5. J. Biol. Chem. 1970, 245, 4144-4149.

27. Benson E.S., Hallway B.E., and Lumry R.W. Deuterium-hydrogen exchange analysis of PH-dependent transitions in bovine plasma albumin. J. Biol. Chem, 1964, 239, 122-129.

28. Blauer G., Harmatz D., and Sink J. Optical properties of bilirubin serum albumin complexes in aqueous solution. I Dependence on PH. BBA. 1972, 276, 68-88.

29. Blanchard J. et al. Investigation of drug-albumin interaction using spin-labeled bovine serum albumin. Mol. Pharmacol, 1975, 11, 133-143.

30. Bleich H.E. et al. Conformational studies of angiotensin peptides in aqueous solution by proton magnetic resonance. Biochem., 1973, 12, 4950-4957.

31. Boyer P.D. et al. The combination of fatty acids and related compounds with serum albumin. II Stabilisation against urea and guanidine denaturation. J. Biol. Chem., 1976, 162, 199-208.

32. Brandt J. and Andersson Ъ.-О. Heat denaturation of human serum albumin. Migration of bound fatty acids. Int. J. Pept. Prot. Rew., 1976, 8, 33-37.

33. Brodersen R. Binding of bilirubin to albumin. Implication for prevention of bilirubin encephalopathy in the newborn. C.R.C. Crit. Rev. Clin. Lab. Sci., 1980, 11, 304-399.

34. Brown J.R. Structural origins of mammalian albumin. Fed. Proc. 1976, 35, 2141-2144.

35. Brown J.R. Serumalbumin: Amino Acid Sequence in Albumin Structure. Functions and Uses, ed. by Rosenger, Pergamon Press, Oxford, 1977, 27-51.

36. Brown J.R. Structure and evolution of serum albumin. In Albuminj Structure, Biosyntheses, Function. 11th F.E.B.S. Meet. Copenhagen, ed. by T. Peters and Sjo-holm, Pergamon Press. Oxford, 1977, 1-10.

37. Coassolo P., Sarrazin M., and Sari J.C. Comparison of an iterative microcalorimetric method and dialysis equilibrium for calculating thermodinamic parameters, Anal. Biochem. 1980, 104, 37-43.

38. Chakrabarty S.K. Cooperativity of warfarin binding with human serum albumin induced by fatty acid anion. Biochem. Pharmacol., 1978, 27, 739-743.

39. Chen R.F. Fluorescence stopped-flow study of relaxation processes in the binding bilirubin to serum albu min. Arch. Biochem. Biophys., 1974, 160, 106-112.

40. Chou P.V. and Fasman G.D. Prediction of protein conformation. Biochemistry, 1974, 13, 222-245.

41. Donovan J.W. and Beardslee R.A. Heat stabilization produced by protein-protein association. J. Biol. Chem. 1975, 250, 6, 1966-1971.

42. Donovan J.W. and Mapes C.J. Multiple phase transitions of starches and ITageli amylodextrins. Starch/Starke, 32, 1980, 6, 190-193.

43. Donovan J.W. and Ross X.D. Increase in the stability of avidin produced by binding of biotin. A. Differential scanning calorimetric study of denaturation by heat. Biochemistry, 1973, 12, 3, 512-517.

44. Donovan J.W. and Ross X.D. Nonequivalence of the metal binding sites of conalbumin. J. Biol. Chem. 1975, 250, 15, 6022-6025.

45. Donovan J.W. and Mapes C.J. A differential scanning calorimetric study of conversion of ovalbumin to S-oval-bumin in eggs. Y. Sci. Pd. Agric., 1976, 27, 197-204.

46. Donovan J.W. Phase transition of the starch-water system. Biopolymers. 1979, 18, 263-275.

47. Englander S.W. and Englander J.J. Hydrogen-tritium exchange in Methods of Enzimology, ed. by Hirs, Academie Press, New York, 1978, 49, 24-39.

48. Englander J.J. et el. Measurement and calibration of peptide group hydrogen-deuterium exchange by ultroviolet spectrophotometry. Anal. Biochem., 1979, 92, 517-524.

49. Paerch T. and Jacobsen J. Kinetics of the binding bilirubin to human serum albumin studied by stopped-flow technique. Arch. Biochem. Biophys. 1977, 184, 282-289.

50. Piseher J.J. and Jardetsky 0. HMR Study of intermolec-ular complexes. The mechanism of penecillin binding to SA, J. Am. Chem. Soc., 1965, 87, 3237-3244.

51. Jackson W.M. and Brands J.F. Thermodynamics of protein denaturation. A calorimetric study of the reversible denaturation of chymotrypsinogen and conclusions regarding the accuracy of the tyro-state approximations. Biochemistry, 1970, 9, 2294-2299.

52. Gumpen S. et el. Thermal stability of fatty acid serum albumin complexes studied by differential scanning cal-orimetry. Biochem. Biophys. Acta, 1979, 189-196.

53. Hvidt A.A. Hydrogen exhange in proteins. Adv. Protein Chem., 1966, 21, 287-336.

54. Hvidt A.A. and Wallevik K. Conformational changes in human serum albumin as revealed by hydrogen-deuterium exchange studies. J. Biol. Chem., 1972, 247, 1530-1535.

55. Karush P. Heterogenity of the binding sites of bovine serum albumin. J. Am. Chem. Soc., 1950, 72, 2705-2713.

56. Katz S. and Roberson L.C. Protein-metal ion interaction. Bioinorg. Chem., 1976, 6, 143-154.

57. Katz S. et al. The binding of bovine plasma albumin with thiocyanate and trichloracetate ions. J. Biol. Chem., 1974, 249, 7892-7895.

58. Katz S. et al. Volume and electrophoretic changes produced by sodium dodecyl sulfate reaction with bovine serum albumin. J. Biol. Chem., 1972, 247, 5228-5233.

59. Katz S. et al. Structure-volume relationships: Singular volume effects produced by Cupric ion-glubular protein interaction. Biochemistry, 1980, 19, 3805-3813.

60. Keen P.M. The binding of three penicillins in the plasma of several mammalian species as studies by ultrafiltration, Br. J. Pharmacol. 1965, 25, 507-514.

61. Krach-Hansen U. and Miller J.V. Protein binding of small molecules. I Effect of pH and inorganic salts on the combination of phenol red with proteins. Bio-chim. Biophys. Acta., 1973, 295, 438-446.

62. Krach-Hancen U. Molecular aspects of ligand binding to serum albumin (Review). Pharmacol. Rev., 1981, 33, 17-53.

63. Linderstrjtfm-Lang K.U. et al. Protein structure and en-zime activity. In: The Enzimes. 2nd ed., ed by Byer. 1959, vol. 1, 443-510.

64. Making S. et al. The binding of deozycholate and tritium X-100 to proteins. J. Biol. Chem., 1973, 248, 4926-4932.

65. Markus G. Protein substrate conformation and proteolysis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1965, 54, 253-258.

66. Markus G. et al. Mechanism of protection by anionic detergents agains denaturation of serum albumin. J. Biol. Chem., 1964, 239, 3687-3693.

67. Marcus G. et al. Ligand-stabilized conformations in serum albumin., J. Biol. Chem., 1967, 242, 4402-4408.

68. Mcbachlan A.D. and Walker J.E., Evolution of serum albumin, J. Mol. Biol., 1977, 112, 543-558.

69. Mcbachlan A.D. and Walker J.E. Serum albumin domain secondary structure prediction, Biochem. Biophys. Acta, 1978, 536, 106-111.

70. Meloun et al., Complete amino acid sequence of human serum albumin, P.E.B.S. Lett., 1975, 58, 134-137.

71. McDermott W. and Nelson R. Decreasing of antimicrobio-logical activity of penicillins in presents of plasma proteins, Syphilis, Gonorrhea, Veneral Diseases, 1945, 29, 315-403.

72. Molday R.S. et al. Primary structure effects on peptide group hydrogen exchange, Biochemistry, 1972, 11, 150158.

73. Monod J. et al. On the nature of allosteric transitions a plausible model, J. Mol. Biol., 1965, 12, 88-118.

74. Oakes J. and Cate M.C. Magnetic resonance study of the interactions between bovine serum albumin and surfactants. 2. Effect of surfactants on the structure of bovine serum albumin., Eur. J. Biochem., 1973, 36, 559-563.

75. Ozawa T. Kinetic analysis of derivative curves in thermal analysis J. Therm. Anal. 1970, 2, 301-324.

76. Ozawa T. Critical investigation of methods for kinetic analysis of thermoanalytical data. J. Therm. Anal.1975, 7, 601-617.

77. Ozawa T. A modified method for kinetic analysis of thermoanalytical data. J. Therm. Anal. 1976, 9, 369373.

78. Ozawa T. Some demonstrations of the effect of the heating rate of thermoanalytical curves. J. Therm. Anal.1976, 9, 217-227.

79. Peters T.Jr. Serum albumin. In: The Plasma Proteins, 2nd ed., ed. by P.W. Putnam. Academie Press, Hew Yore, 1975, vol. 1, 133-181.1.- 119

80. Peters Т.Jr. and Reed R.G. Serum albumin: Conformation and active sites. In Albumin: Structure, Biosyntheses, Function. 11th F.E.B.S. Meeting, Copenhagen, ed. by.

81. T. Peters and J. S^oholm, Pergamon Press. Oxford, 1977, 11-20.

82. Polet H. and Steinhard J. Binding-induced alterations in ultroviolet absoprtion of native serum albumin, Biochemistry, 1968, 7, 1348-1356.

83. Privalov P.L. Scanning calorimeters for studying macro-molecules. Pure & Appl. Chem., 1980, 52, 479-497.

84. Privalov P.L. et al. Thermodynamic analysis of thermal transitions in globular proteins. 1. Calorimetric study of chymotripsinogen, ribonuclease and mioglobin, Biopolymers, 1971, 10.

85. Philips G.O. et al. Interaction of bovin serum albumin with penecillines and cephalosporines. Pulsing radio-lysis study, Biochem. Biophys. Acta, 1973, 295, 8-17.

86. Philips G.O. et al. Ion binding penicillines with some proteins, Biochem. Biophys. Acta. 1970, 215, 491-502.

87. Reed R.G. Kinetics of bilirumbin binding to bovine serum albumin and the effects of palmitate, J. Biol. Chem., 1977, 252, 7483-7487.

88. Reed R.G. and Peters T.Jr. Fragments of bovine serum . albumin produced by limited proteolyses. Conformation and ligand binding. Biochemistry, 1975, 14, 4578-4583.

89. Reinolds J. et al. The binding of some long-chain fatty acids anions and alcohols by bovine serum albumin, Biochemistry, 1968, 7, 13-57-1361.

90. Rollo I.M. Bacteriological and pharmacological properties of phenoxybenzilpenicillin, Br. Med. J., 1962, 1, 76-80.

91. Ryan M.T. Examination of steroids protein interaction by ultraviolet difference spectroscopy, Arch. Biochem. Biophys., 1968, 126, 407-416.

92. Ryan M.T. Influence of steroid binding on the tryptic hydrolysis of serum albumin, Biochemistry, 1973, 12, 2221-2230.

93. Ryan M.T. et al. The paradoxial effect of fatty acids on steroid-albumin interactions, Biochim. Biophys. Acta, 1976, 427, 337-349.

94. Ryan M.T. and Gibbs G. Analysis of ultraviolet spectral perturbations arising in the interaction of steroids and human serum albumin. Arch. Biochem. Biophys., 1970, 65-72.

95. Saber et al. Disulfide bounds in human serum albumin, Collect. Czech. Commun., 1977, 42, 564-579.

96. Santos E.C. and Spector A.A. Effect of fatty acids on the binding of 1-anilino-8-sulfonate to bovine serum albumin, Biochemistry, 1972, 11, 2299-2302.

97. Santos E.C. and Spector A.A. Effect of fatty acids on the binding of 1-anilino-8-sulfonate to human serum albumin

98. Scatchard G. The attraction of proteins for small molecule and ions, Ann. H.Y. Acad. Sci., 1949, 51, 660-672.

99. Serille В, et el. Influence of fatty acids and sodium dodecilsulfate on warfarin-human serum albumin binding, J. Chromatogr., 1979, 180, 103-110.

100. Sjodin T. Circular dicroism studies on the inhibiting effect of oleic acid on the binding of diasepam to human serum albumin, Biochem. Pharmacol., 1977, 26, 2157-2161.

101. Sholtan W. Die binding der Penicilline an die Eiweib-korper des Plasmas und der Gewebsflussigheit. Antibiot. Chemoter. 1968, 14, 53-76.

102. Spink C.H. Analytical calorimetry in biochemical and clinical applications. CRC (Critical Reviews in Analytical Chemistry), 1980, 6, 1-54.

103. Sjohlm J. Binding of drugs to human serum albumin. In: Preceding of the 11th F.E.B.S. Meeting, Copenhagen, 1977, 50, Collog. B9: Albumin, 71-78.

104. Sogami M. and Poster, J.P. Isomerization reactions of bovine plasma albumin. The N-F transition and acid exp-antion, Biochemistry, 1968, 7, 2171-2182.

105. Spector A.A. et el. Influence of fatty acid on drug binding to plasma albumin, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1973, 226, 247-258.

106. Steinhardt J. and Reinolds J.A. Multiple Equilibria in Proteins, Academie Press, Hew York, 1969.

107. Steinhardt J. et al. Difference between bovine and human serum albumin: binding isotherms, Biochemistry, 1971, 10, 4005-4015.

108. Steinhardt J. et al. Effects of some ligands on the difference spectra of bovine and human serum albumin, Biochemistry, 1972, 11, 1809-1817.

109. Sturtevant J. Differential scanning calorimetry. Processes involving proteins, Bioenerget. Termodyn., 1980, 391-396.

110. Sturtevant J. Recent advances in biochemical calorimetry, Bioenerget. Termodyn., 1980, 397-403.

111. Tanford C. et al. Hydrogen ion equilibria of bovine serum albumin, J. Amer. Chem. Soc., 1955, 77, 6414-6421.

112. Wendlandt W. Thermal Methods of Analysis. John Wiley & Sons, New York, 1974.113» Weinbach E. and Garbus J. Structural changes inducedby uncoupling reagents, Biochem. J., 1968, 105, 711-717.

113. Wilding G. Concentration-dependent effects of fatty acids on warfarin binding to albumin, Biochem. Pharmacol., 1977, 26, 1143-1146.

114. Willumsen L. Hydrogen isotope exchange in the study of protein conformation. A quantitative test of an exhange mechanism, C.R. Trav. Lab. Carlsberg, 1971, 38, 223-295.

115. Wzight A. The penicilins, Mayo. Clin. Proc., 1983, 58, 21-32.

116. Zakrzewski K. and Goch H. Human serum albumin strongly binding sites, Biochemistry, 1968, 7, 1835-1842.