Изучение метаболома листьев березы с целью создания лекарственного препарата тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.01, кандидат фармацевтических наук Раева, Анастасия Анатольевна

• Раева, Анастасия Анатольевна
• кандидат фармацевтических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Раева, Анастасия Анатольевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор литературы. Береза как лекарственное растение.

1.1. Распространение и ботанико-морфологическая характеристика видов березы, применяемых в медицине.

1.2. Фармакологическая активность и применение в медицине препаратов листьев березы.

1.3. Химический состав листьев березы и фармакологическое действие основных биологически активных веществ.

1.4. Современные методы анализа метаболитов растений.

1.5. Особенности технологии получения твердых лекарственных форм с сухими растительными экстрактами.

Выводы к главе 1.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Материалы.

2.1.1. Лекарственное растительное сырье — березы листья.

2.1.2. Березы листьев экстракт сухой (БЛЭС).

2.1.3. Вспомогательные вещества и реактивы.

2.2. Изучение состава метаболитов БЛЭС производства ЗАО ВИЛАР.

2.2.1. Идентификация и количественное определение фенольных соединений в БЛЭС методом ВЭЖХ.

2.2.2. Идентификация и количественное определение соединений нефенольной природы в БЛЭС методом ГХ-МС.

2.3. Физико-химические методы исследования березы листьев и БЛЭС.

2.3.1. Определение подлинности и показателей качества березы листьев.

2.3.2. Определение фракционного состава березы листьев.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение метаболома листьев березы с целью создания лекарственного препарата»

Актуальность проблемы. Препараты растительного происхождения по сравнению с синтетическими лекарственными средствами обладают мягким терапевтическим действием и низкой токсичностью, вследствие чего могут применяться в течение длительного времени. Сложность и многообразие химического состава препаратов растительного происхождения обусловливает их широкий спектр действия на организм и способность комплексно влиять на различные звенья патологического процесса.

В настоящее время развитие новых инструментальных высокочувствительных методов анализа пробудило интерес ученых к более детальному изучению фотохимического состава хорошо известных и широко применяемых в медицине лекарственных растений для выделения новых биологически активных веществ.

Одним из перспективных видов сырья для разработки новых препаратов различного фармакологического действия является береза повислая (Betula pendula Rhoth), сем. Березовые (Betulaceae). Вместе с березой пушистой {Betula pubescens Ehrh) данный вид разрешен к медицинскому применению на территории Российской Федерации. Листья березы имеют богатый химический состав, что делает их ценным источником биологически активных веществ (БАВ), из которых наиболее значимы фенольные соединения, главным образом,, флавоноиды, обладающие противовоспалительной, антиоксидантной, спазмолитической и капилляроукрепляющей активностью. Препараты из листьев березы применяются официальной медициной в качестве мочегонного средства, но их фармакологическое действие на организм человека гораздо шире и в настоящее время активно исследуется. Так, в Университете г. Турку в

Финляндии В.И. Осиповым и др. [120] из листьев березы горной (Betula pubescens ssp. czerepanovii) был получен сухой экстракт с содержанием проантоцианидинов около 20 %. Также установлено наличие этих веществ в б листьях других видов березы [123]. Проантоцианидины (конденсированные танины) - комплексные флавоноидные полимеры широко распространенные в растительном мире. Эти соединения проявляют антирадикальную активность и иммуномодулирующее действие, поэтому поиск их отечественных источников перспективен для дальнейшего создания препаратов, предупреждающих заболевания, связанные с дисбалансом окислительных процессов.

Во Всероссийском НИИ лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) на основе листьев березы (В. pendula Rhoth или В. pubescens Ehrh) разработан и производится сухой экстракт, обладающий умеренным желчегонным, мочегонным, спазмолитическим, противовоспалительным и антимикробным действием. Экстракт листьев березы входит в состав комплексного препарата растительного происхождения "Сибектан", но самостоятельно в качестве лекарственного препарата до настоящего времени не используется. Глубокое изучение состава экстракта с целью идентификации всего спектра биологически активных веществ позволит установить наличие в экстракте различных групп ценных БАВ, что представляет интерес для расширения спектра его возможного терапевтического- действия и, создания лекарственного препарата на его основе.

Полученные результаты покажут целесообразность оптимизации технологии получения сухого« экстракта с целью обогащения продукта биологически активными веществами (флавоноидами и проантоцианидинами) и разработки твердых лекарственных препаратов на основе березы листьев экстракта сухого (БЛЭС).

Целью настоящей работы является изучение состава метаболитов и научно обоснованная разработка лекарственного препарата на основе БЛЭС, а также оптимизация технологии получения БЛЭС для повышения содержания в нем БАВ - флавоноидов и проантоцианидинов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

• Провести детальное фитохимическое исследование БЛЭС с применением методов высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и газовой хроматографии с масс-спектрометрической детекцией (ГХ-МС);

• Разработать инструментальные методики количественного определения отдельных групп БАВ (флавоноидов и проантоцианидинов) в БЛЭС;

• Провести оптимизацию технологии экстракции листьев березы с целью получения продуктов, обогащенных проантоцианидинами и флавоноидами.

• Обосновать состав и разработать технологию получения твердой лекарственной формы БЛЭС для перорального применения;

• Определить показатели качества и установить нормы допустимых отклонений в процессе производства и хранения разработанного лекарственного препарата;

• На основе результатов исследований разработать проекты нормативно-технической документации (фармакопейной статьи предприятия (ФСП) и лабораторного регламента) на полученный лекарственный препарат "Экстракт березы листьев", капсулы, 0,2.

Научная новизна:

С помощью современных инструментальных методов, таких как высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) и газовая хроматография с масс-спектрометрической детекцией (ГХ-МС), проведен детальный фитохимический анализ и установлен состав метаболитов БЛЭС. В экстракте присутствуют в большом количестве фенольные соединения, основными из которых являются флавоноиды, а также полярные и липофильные вещества нефенольной природы. Также в БЛЭС обнаружены проантоцианидины.

Разработаны методики стандартизации БЛЭС методом спектрофотометрии по сумме фенольных соединений в пересчете на гиперозид и по проантоцианидинам в пересчете на цианидин.

При производстве лекарственной1 формы, содержащей БЛЭС, - твердых желатиновых капсул - впервые разработан метод влагоактивизированной грануляции, позволяющий получить однородный по размеру частиц, хорошо сыпучий гранулят. Предложенный метод грануляции позволяет минимизировать количество гранулирующей жидкости (по сравнению с методом традиционной влажной грануляции) и исключить стадии термической сушки и последующей калибровки гранулята, что существенно сокращает время технологической переработки экстракта при гранулировании и снижает дестабилизирующее действие технологических факторов на экстракт.

На основании экспериментальных данных по изучению возможности обогащения» продукта проантоцианидинами впервые предложена интенсивная технология- процесса экстрагирования листьев березы, позволяющая увеличить выход целевых веществ - флавоноидов и проантоцианидинов - при одновременном существенном снижении времени экстракции в 3 раза.

Практическая значимость.

Разработана технология получения лекарственного препарата, содержащего БЛЭС, в виде твердых желатиновых капсул с применением влагоактивизированной грануляции.

На основе проведенных комплексных лабораторных исследований разработана следующая нормативно-техническая документация:

• проект ФСП на лекарственный препарат "Экстракт березы листьев", капсулы, 0,2;

• проект лабораторного регламента лекарственный препарат "Экстракт березы листьев", капсулы, 0,2;

Разработанный метод влагоактивизированной грануляции используется в учебном процессе на кафедре фармацевтической технологии фармацевтического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, о чем свидетельствует акт внедрения результатов научных достижений в учебный процесс № 04/11 от 08.04.2011 г.

Апробация работы.

Основные положения диссертации представлены на Межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых "Фармация в XXI веке: эстафета поколений в Санкт-Петербургской ХФА" (2009 г), VII Международном симпозиуме по фенольным соединениям (2009 г), X международном конгрессе "Здоровье и образование в XXI веке" "Инновационные технологии в биологии и медицине" (2009 г), 66-й региональной конференции по фармации и фармакологии (2011 г.).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 3 в печатных изданиях, рекомендованных ВАК.

Положения, выдвигаемые на защиту.

• Результаты детального фитохимического исследования состава БЛЭС, проведенного методами ВЭЖХ и ГХ-МС;

• Методики и результаты стандартизации БЛЭС по сумме фенольных соединений в пересчете на гиперозид и по проантоцианидинам в пересчете на цианидин;

• Результаты исследований по оптимизации технологии получения БЛЭС для получения сухого экстракта березы листьев с повышенным содержанием флавоноидов и проантоцианидинов;

• Результаты исследований по разработке состава и технологии получения твердых желатиновых капсул БЛЭС;

• Методы анализа и результаты определения показателей качества для твердых желатиновых капсул БЛЭС в процессе производства и хранения.

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов (глава 2), результатов собственных экспериментальных исследований (главы 3-5), общих выводов, списка литературы и приложения. Содержит 162 страницы печатного текста, 28 таблиц, 32 рисунка. Список использованной литературы включает 143 источника, в том числе 89 на иностранных языках.

Заключение диссертации по теме «Технология получения лекарств», Раева, Анастасия Анатольевна

Общие выводы.

1. С помощью методов ВЭЖХ и ГХ-МС установлен состав* метаболитов БЛЭС. Установлено присутствие в большом количестве полярных фенольных соединений, основными из которых являются флавоноиды, галлоил-глюкоза и производные п-кумароил-хинной кислоты.

Фракция полярных соединений нефенольной природы содержит в наибольшем количестве мио-инозитол, В-хинную кислоту, производные п-кумароил-хинной кислоты, а также сахара (фруктоза, галактоза, глюкоза, манноза, мальтоза, изомальтоза, гулоза, сахароза, тураноза).Во фракции липофильных соединений нефенольной природы основную долю составляют р-ситостерол, даммарановые тритерпеноиды, 1-докозанол, гексадекановая; октадекановая и Р-фенилуксусная кислоты и.их производные.

2. На основании результатов исследований- состава БЛЭС, показывающих высокое содержание гиперозида в экстракте, разработана методика стандартизации экстракта березы листьев по сумме фенольных соединений в пересчете на гиперозид. Установлена норма содержания, суммы фенольных соединений в пересчете на гиперозид для БЛЭС производства ВИЛАР - не менее 4%.

Предложена методика стандартизации. БЛЭС по проантоцианидинам методом* спектрофотометрии по продуктам цветной« реакции кислотного гидролиза в пересчете на цианидин. Для БЛЭС прозводства ВИЛАР норма-содержания этих веществ' составляет не менее 2%.

3. Экспериментально обоснованы оптимальные условия экстрагирования, позволяющие получить БЛЭС, обогащенный целевыми БАВ: однократная экстракция порошка березы листьев спиртом этиловым 50% влечение 1 часа при 40 °С и перемешивании быстроходной мешалкой.

4. На основании всестороннего изучения физико-химических свойств

БЛЭС обоснована необходимость минимизации воздействия влаги в технологии получения лекарственной формы, содержащей его в качестве основного компонента. В связи с этим разработан метод

145 влагоактивизированной грануляции с использованием осушающих: вспомогательных веществ, что позволило получить однородный по размеру частиц, хорошо сыпучий гранулят при меньшем количестве гранулирующей жидкости (по' сравнению с методом традиционной влажной грануляции) и отсутствии стадий термической сушки и последующего измельчения гранулята. Научно обосновано применение спирта этилового 95% в качестве увлажняющего, агента и вспомогательных веществ; обеспечивающих стабильность гранулята при хранении (Avicel® PH 112, FMG BioPolymer и Aerosil® 200 Pharma,Degussa).

5. В соответствии; с современными требованиями разработаны методики определения: показателей качества и установлены: их нормы для. полученного лекарственного препарата. Средняя масса невскрытых капсул должна составлять 0,406 ± 10%, содержимого капсул 0,308 ±10%, суммы фенольных соединений в пересчете на гиперозид в одной капсуле должно содержаться 8,0 ± 5% мг. Нормы по показателям "Распадаемость" и "Растворение" составляют 100% за не более чем 20 мин и не менее 75% за 45 мин соответсвенно.

6. На основе проведенных комплексных лабораторных исследований разработана следующая нормативно-техническая документация: проекты ФСП и лабораторного регламента на полученный лекарственный препарат

Экстракт березы листьев", капсулы, 0,2.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Раева, Анастасия Анатольевна, 2011 год

1. Аносова О.Г. Совершенствование анализа и технологии настоев и отваров, содержащих флавоноиды // Фармация. — 1992.- №1. с. 30 -34. . ■ .' .•. '.:.:'' . ■•.;. :;

2. Антимикробная активность гликозидов бетулафолиентриола и; его 3-эпимера / С.И^Стехова<идр;.;// Растительные Ресурсы. 19891 - Т.25; вып. 1. — с. 103 - 105. V , '

3. АрзамасцевА.ЩСадчикова Н.П., Харитонов Ю.Я. Валидация аналитических методов // Фармация. 2006. - №4. - с. 8-12.

4. Балвочюте Я1ТТ., '.\(,1оркунас' А.!.В. .Сравнительное изучениеэфирномаеличности почек березы пушистой и бородавчатой // Охрана; среды и рациональное; использование растительных ресурсов;-М:, 1970 ' -с. 180. ' ' ' •: . .■';.•' ;■.';■•■. .

5. Баслпнов С.Д., Шемерянкина Т.Н., Сокольская Т.А., Тохтабаева Г.М. Фенольные соединения сухого экстракта листьев березы // Материалы VII Международного симпозиума по фенольным соединениям: — М. — 2009. с.27-28.

6. Береза как источник-фармакологически активных веществ Электронный.ресурс.t/ ЖВШоздрин [и др>]1 -Режимщоступа:' http:/Av\v\v.retinoids.ru/novisl-statl/ (дата обращения 01.0912009).

7. Биологически активные вещества флоры и фауны Дальнего Востока и Тихого Океана: тез. конф. / отв. ред. К.А. Мещерская. Владивосток; 1971.- с. 21. :

8. Ветчинникова JI1B. Морфо-физиологические и биохимические особенности различных видов и разновидностей березы семенного и вегетативного происхождения в условиях Фенноскандии. Диссер.; на соиск. учен, степ.,д.б.н: Петрозаводск, 2002 — 366 с.

9. Влияние мио-инозитола на судороги, вызванные пентилентетразолом и каиновой кислотой'у крыс / Р. Соломония и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2007. - Vol.143. - №1. - с. 64-67.

10. Временная инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода "ускоренного старения" при повышенной температуре И-42-2-82. М., 1983.

11. Галашкина Н.Г. Флавоноиды и терпеноиды спиртового экстракта почек березы Betula pendula Roth. Диссер. на соиск. учен. степ, к.ф.н. СПб., 2005.- 173 с.

12. Саранск: Мордовское книжное издательство Управления по печати при Совете Министров МАССР; 1971. с. 237-254.

13. Гончарова Н.Е. Фотохимическое исследование листьев березы повислой, технология лекарственных препаратов и их фармакологическая оценка: Автореф. диссер. на соиск. ученой степени к.ф.н. Л., 1975.-19 с.

14. Государственная Фармакопея Российской Федерации XII изд., часть 1 -М.: Медицина. 2008. - 696 с.

15. Государственная Фармакопея СССР XI изд., вып. 1 -М.: Медицина. -1987.-334 с.

16. Государственная Фармакопея СССР XI изд., вып. 2 -М.: Медицина. -1990.-385 с.

17. Демина JI.H. Процессы экстракции и совершенствование оборудования для получения эфирных масел и экстрактов из биомассы березы и смородины. Автореф. диссер. на соиск. Ученой степени к.т.н. Томск, 2007. -22 с.

18. Денисова С.Б., Карачурина JI.T., Муринов Ю.И., Хайруллина В.Р. Антиоксидантное и гепатозащитное действие флавоноидов корня солодки // Материалы II Всероссийской конференции "Химия и технология растительных веществ". — Казань, 2002. с. 67- 68.

19. Егошина Ю.А., Поцелуева JI.A. Современные вспомогательные вещества в таблеточном производстве // Успехи современного естествознания. 2009. - №10. - с. 30-33.

20. Еремина A.B. Фитохимическое изучение и стандартизация лекарственных средств и БАД из продуктов переработки винограда культурного (Vinis vinifera L.): Дисс. на соиск. ученой степени к.ф.н. -М.: 2005.- 153 с.

21. Ешманова C.B. Обеспечение качестваотечественных лекарственных средств (оптимизация технологии и совершенствование стандартизации таблетированных лекарственных форм). Автореф. диссер. на соиск. ученой степени д.ф.н — М., 2007. 48 с.

22. Емшанова C.B. Промышленный контроль формы и размера частиц лекарственных субстанций // Фармацевтические технологии и упаковка. -2007.-N 10.-С. 48 -57.

23. Качалина T.B. Разработка технологии получения твердых лекарственных форм, содержащих растительные экстракты: Дисс. на соиск. ученой степени к.ф.н. М.: 2005. - с. 155.

24. Климова Е.И. Разработка составов и технологий получения лекарственных форм Декоп. Диссер. на соиск. ученой степенИ'К.ф.н. -М.: 2008.- 128 с.28'.Куцик Р.В., Зузук Б.М. Берёза бородавчатая (Берёза повислая) // Провизор. -2001. -№ 10 с.34-41.

25. Лекарственные растения Государственной Фармакопеи / под ред. И.А. Самылиной, В.А. Северцева / -М.: «АНМИ», 2001. с. 89-91.

26. Прида А.И. Вылку С.В.Танин из виноградных семян источник натуральных антиоксидантов (проантоцианидинов) Электронный ресурс. - Режим доступа: http://www.oeno.md/ru/article2 (дата обращения 10.09.2008).I

27. Приказ Министерства здравоохранения и медицинской промышленности РФ от 09.07.1996г. №282"0 разрешении медицинского применения". Приложения 1,2. // Сайт

28. Минздравсоцразвития России. — Режим доступа:http ://www.minzdravsoc.ru/docs/mzsr/orders/93 8.

29. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химическийIсостав, использование: Семейства Magnoliaceae Limoniaceae / отв. ред. A.A. Федоров/- JL: Наука, 1984.- с. 158-163.

30. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Р 4.1.1672-03. — М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России. — 2003. — стр. 106-109.

31. Руководство по стандартизации лекарственных средств / под ред. Р.У. Хабриева, В.Л. Багировой, В.Б. Герасимова. М.-.Медицина, 2006. — с. 341-342.

32. Спрыгин В.Г., Кушнерова Н.Ф. Природные олигомерные проантоцианидины перспективные регуляторы метаболических нарушений // Вестник ДВО РАН. - 2006. - №2. - с. 81 - 90.

33. Стоянов Э.В. Воллмер Р. Опыт успешного применения ProSolv SMCC® в технологии прямого прессования препаратов, содержащих растительные экстракты // Промышленное обозрение. — 2009.- №4 (15).- стр. 48-49.'I

34. Химические трансформации и биологическая активность лупановых тритерпеноидов / О.Б. Флехтер И'Др. // Материалы II Всероссийской* конференции «Химия и технология растительных веществ». Казань, 2002. - с. 25.

35. Шигарова Л:В., Минина;С.А. Разработка гранулированнойлекарственной формы сухого экстракта корня женьшеня";в капсулах // Хим. фарм. журнал. 2000. - Т.34. - №7. - с. 38-40.

36. Application of metabolite profiling to the identification of traits in a population of tomato introgrcssion lines / S.A. Overy et al. // Journal of Experimental Botany. 2005. - Vol.56: - №410. - p. 287-296.

37. Application of metabolomics to genotype and phenot5фe discrimination of birch trees grown in a long-term open-field experiment / V. Ossipov et al. // Metabolomics. 2008. - №4. - p. 39-51.

38. Applications of metabolomics in agriculture / RiAi.Dixon et al:.J// Journal of Agriculture and Food Chemistry. 2006. N»54. - p. 8984-8994

39. AtopkmaL., UvarovaN.l.,.ElyakovG.B.Simplifiedpreparationof the ginsenoside-Rh2 minor saponin fi'om ginseng // Carbohydr. Res. 1997. -№303.-p. 449-451.

40. Augsburger L.L., Hoag S.W.Pharmaceutical dosage forms: Tablets. Rational design and formulation. Third edition. Volume 2. Tnforma Health

41. Care,US A. 2008. - p. 333-361.61 .Avicel® PH microcrystalline cellulose in wet granulation & MADG:

42. Техническая информация FMC BioPolymer. Электронный ресурс. . Режим доступа: •http://www.phexcorn.cn/UploadFiles/200899112520480.pdf. (дата обращения 01.09.2010).

43. Awad А.В., Downie D., Fink C.S. Inhibition of growth and stimulation of apoptosis by beta-sitosterol treatment of human breast cancer MDA-MB-231 cells in culture // Int. J. Mol. Med. 2000. - №5. - p. 541-545.

44. Berler J.M., Martin J.C. Inhibitory action of vitamin P compounds on hyahmmidase // J. Biol. Chem. 1947. - №171. - p. 507-511.

45. Bioavailability and bioefficacy of polyphenols in humans. I. Review of 97 bioavailability studies / C. Manach et al. // Am. J. Clin. Nutr. 2005. - №81. -p. 230S-242S.

46. Bito Т., Roy S., Sen C.K., Packer L. Pine bark extract pycnogenol downregulates IFN-gamma-induced adhesion of T cells to human keratinocytes by inhibiting inducible ICAM-1 expression // Free Radic. Biol. Med. 2000. - Vol.28. - №2. - p. 219 - 227.

47. Bors W., Michel C., Stettmaier K. Electron paramagnetic resonance studies of radical species of proanthocyanidins and gallate esters // Arch. Biochem. Biophys. 2000. - Vol. 374. -№2. - p. 347 - 355.

48. Carnat A., Lacouture I., Fraisse D., Lamaison J.L. Standardization of the birch leaf// Ann Pharm Fr. 1996. - Vol.56. -№5. - p. 231-235.

49. Catechins and their oligomers linked by C4—>C8 bonds are major cacao polyphenols and protect low-density lipoprotein from oxidation in vitro / N. Osakabe at al. // Exp. Biol. Med. 2002. - №227. - p. 51-56.

50. Cell protective antioxidants from the root bark of Lannea verrutina A. Rich., a Malian medicinal plant / A. Maiga et al. // Journal of Medical Plant Research. 2007. - Vol 1. - №4.- p. 66-79.

51. Chemical derivatization and mass spectral libraries in metabolic profiling by GC/MS and LC/MS/MS / J.M. Halket et al. // Journal of Experimental Botany. 2005. - Vol.56. - №410. - p. 219-243.

52. Christensen L.H., Johansen H.E., Schaefer T. Moisture-activated dry granulation in a high shear mixer // Drug Dev. Ind. Pharm. 1994. - Vol.20. -№14.-p. 2195-2213.

53. Comparison of moisture-activated dry granulation process with conventional granulation methods for scmotilide hydrochloride tablets / C.M. Chen et al. // Drag Dev. Ind. Pharm. 1990. - Vol.16. - №3. - p. 379 - 394.

54. Da Silva Porto P.A.L., Laranjinha J.A.N., deFreitasV.A.P: Antioxidant protection of low density lipoprotein by procyanidins: structure/activity relationship // Biochem. Pharmac. 2003. - №66. - p. 947-954!

55. Defensive effect of surface flavonoid aglycones of Betula pubescens,leaves against first instar Epirrita autumnata larvae / Mi Lahtinen et al. // J. Chem. Ecol. 2004. - Vol.30. - №11. - p. 2257-2268.

56. Discovery of betulinic acid as a selective inhibitor of human melanoma that functions by induction of apoptosis / E. Pisha et al. //Nat. Med. 1995. -№10.-p. 1046-1051.

57. Dykes L., Rooney L.W. Sorghum and millet phenols and antioxidants // Journal of Cereal Science. 2006. - №44. - p. 236-251.

58. Es-Safi N.E., Quyot S., Ducrot P.H. NMR, ESI/MS and MALDI-TOF/MS analysis of pear juice polymeric proanthocyanidins with potent free radical scavenging activity // J. Agric. Food Chem. 2006. - №54. - p. 6969 -6977.

59. Fiehn O. Combining genomics, metabolome analysis, and biochemical modelling to understand metabolic networks // Comp. Funct. Genomics. -2001.-№2.-p. 155-168

60. Fiehm O., Metabolomics—the link between genotypes and phenotypes / Plant. Mol. Biol. 2002. - Vol.48. - №1-2. - p. 155-71.

61. Fiehn O'. Study of metabolic control in plants by metabolomics. // Annual Plant Reviews. Control of Primary Metabolism in Plants ( eds. Plaxton W.C.iand McManusM.T. >- 2006. №22. - p. 60-84.

62. Free radicals scaveging action and antienzyme activities of procyanidins from Vitis vinifera. A mechanism for their capillary protective action / R. Maffei Facino at al. // Arzneimittelforschung. 1994. - №44. - p. 592 -601.

63. Gallic acid and hydrolysable tannins are formed in birch leaves from an intermediate compound of the shikimate pathway / V. Ossipov et al. // Biochem. Syst. Ecol. 2003. - №31. - p. 3-16.

64. Goodcare R. Making sense of the metabolome using evolutionary computation: seeing the wood with the trees // Journal of Experimental Botany. -2005. Vol.56. - №410. - p. 245-254.

65. Grape juice but not orange or grapefruit juice inhibits platelets activity in dogs and monkeys / H.E. Osman et al. // J. Nutr. 1998. - №128. - p. 2307-2312.

66. Grape seed extract proanthocyanidins downregulate HTV-1 entry coreceptors, CCR2b, CCR3 and CCR5 gene expression by normal peripheral blood mononuclear cells / M.P. Nair at al. // Biol. Res. 2002. - №35. - p. 421431.

67. Grape seed proanthocyanidins prevent plasma postprandial oxidative stress in humans / F. Natella at al. // J Agric Food Chem. 2002. - №50. - p. 7720 -7725.

68. Hammerstone J.F., Lazarus S.A., Schmitz H.H; Procyanidin content and variation in some commonly consumed foods // Journal of Nutrition. 2000. - 130. - p. 2086S-2092S.

69. Handbook of pharmaceutical granulation technology. Second edition / ed. D.M. Parikh. Taylor & Francis Group, USA. - 2005. - p. 195-200.