Изучение механизмов адсорбции белков плазмы крови на поверхности эмульсий перфторуглеродов, стабилизированных блоксополимерами полиоксиэтилена-полиоксипропилена тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Жалимов, Виталий Касимович

• Жалимов, Виталий Касимович
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Жалимов, Виталий Касимович

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Мелкодисперсные эмульсии на основе ПФОС, пригодные для внутривенного введения

1.2 Применение эмульсий на основе ПФОС

1.3 Биологическая активность ПФОС и эмульсий ПФОС

1.4 Выведение эмульсий ПФОС из кровотока

1.5 Сорбция белков на поверхности субмикронных дисперсных сред

1.6 Влияние свойств белков на их адсорбцию

1.7 Влияние свойств поверхности на белковую адсорбцию

1.8 Поведение белковых молекул при адсорбции

1.9 Изменение конформации белка при адсорбции

1.10 Овершут в кинетике адсорбции

1.11 Структура и функции ApoAI

1.12 Структура и функции ApoJ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Материалы

2.1.1 Реактивы

2.1.2 Красители

2.1.3 Антитела

2.2 Методы

2.2.1 Состав и приготовление экспериментальных ПФУ эмульсий

2.2.2 Методы работы с животными

2.2.3 Определение концентрации ПФОС в крови кролика после внутривенного введения методом 19Р-ЯМР-спектроскопии

2.2.4 Определение концентрации белка в супернатанте при отмывке эмульсии от неадсорбированных белков

2.2.5 Определение времени насыщения эмульсии белками плазмы человека in vitro

2.2.6 Определение зависимости максимальной сорбционной емкости эмульсии по белкам от соотношения инкубационных объемов эмульсии и

плазмы крови человека и кролика in vitro

2.2.7 Динамика изменения сорбционной емкости эмульсии от времени циркуляции в кровотоке кролика

2.2.8 Определение количества белка, адсорбированного на эмульсии в экспериментах in vitro и in vivo

2.2.9 Электрофорез

2.2.10 Экстракция липидов плазмы крови человека

2.2.11 Очистка ApoAI

2.2.12 Насыщение эмульсии белками плазмы

2.2.13 Отмывка эмульсии от адсорбированных плазменных белков водными растворами веществ, деадсорбирующих эти белки

2.2.14 Определение точки начала агрегации плазменных белков

2.2.15 Идентификация белков

2.2.16 Иммуноблоттинг

2.2.17 Измерение флуоресценции

2.2.18 Исследование адсорбции ApoAI в реальном времени

2.2.19 Методы in silico

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ

3.1 Усовершенствование метода выделения адсорбированных на частицах эмульсии белков плазмы

3.2 Определение оптимального времени инкубации эмульсии с плазмой

3.3 Влияние ПАВ и гидрофобного ядра на адсорбцию плазменных белков

3.4 Механизмы адсорбции белков на эмульсии

3.4.1 Выявление плазменных белков, сорбция которых происходит в результате электростатического взаимодействия

3.4.2 Выявление плазменных белков, сорбция которых происходит в результате гидрофобного эффекта

3.4.3 Влияние липидов в составе ApoAI на его сорбцию

3.4.4 Теоретический анализ возможных путей адсорбции ApoAI на поверхности ПФУ эмульсии

3.4.5 Изучение влияния адсорбции на флуоресценцию ApoAI

3.4.6 Динамика затухания флуоресценции ApoAI в процессе адсорбции на поверхности ПФУ эмульсии

3.4.7 Влияние ПФУ на флуоресценцию белков плазмы человека, связанных с поверхностью частиц эмульсии по гидрофобному типу

3.5 Сорбционная емкость эмульсии

3.5.1 Зависимость сорбционной емкости от соотношения эмульсии к плазме

3.5.2 Сорбционная емкость эмульсии по белкам плазмы кролика в условиях in vivo

3.5.3 Расчет сорбционной емкости эмульсии по белкам плазмы человека in vivo на основании соотношения данных по емкости in vitro для кролика и человека

3.5.4 Биологическое значение сорбции плазменных белков на частицах эмульсии

3.6 Использование эффекта сорбции белков на поверхности ПФУ эмульсий для препаративной очистки белков

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ПФУ - перфторугрероды

ПФОС - перфторорганические соединения

ПАВ - поверхностно-активное вещество

PEG - полиоксиэтилен

PPG - полиоксипропилен

ApoJ - аполипопротеин J

ApoAI - аполипопротеин А

IgG - иммуноглобулин G

HSA - человеческий сывороточный альбумин

PBS - фосфатный буфер

ЛПВП - липопротеины высокой плотности

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение механизмов адсорбции белков плазмы крови на поверхности эмульсий перфторуглеродов, стабилизированных блоксополимерами полиоксиэтилена-полиоксипропилена»

ВВЕДЕНИЕ

Появление в настоящее время широкого круга лекарственных препаратов на дисперсной основе, а также применение различных наноконтейнеров для адресной доставки лекарств к различным органам и тканям, могут дать хорошие клинические результаты. Однако применение таких лекарственных форм в медицинской практике ставит ряд очень важных вопросов.

Во-первых, успех лечения при применении дисперсных форм лекарственных препаратов зависит, прежде всего от того, насколько полную информацию о судьбе наночастиц в организме мы имеем. Поэтому очень важным является вопрос деградации наноносителей, которая в одних случаях может быть неполной, в других - полностью отсутствовать, что приводит к необратимому накоплению их в организме. Использование в качестве наносителей эмульсий ПФУ, которые сравнительно быстро (от 3-7 суток до 1,52 лет) покидают организм, дает неоспоримые преимущества. Во-вторых, в отличие от многих наноразмерных носителей, которые высвобождают липофильные препараты только после интернализации носителей в клетку или после разрушения носителей, ПФУ наночастицы могут высвобождать препараты при простом контакте поверхности наночастиц с плазмалеммой клетки-мишени [Winter et al. 2007].

В последнее время установлено также, что адсорбция лекарственных препаратов на поверхности ПФУ наночастиц может иметь существенное значение для обеспечения процесса "загрузки" этих препаратов в стволовые клетки. Стволовые клетки, содержащие комплекс "ПФУ частица -лекарственный препарат", могут быть использованы в качестве транспортной системы адресной доставки загруженных в них веществ [Темнов и др. 2010, Темнов и др. 2010].

Успех применения дисперсных форм лекарственных препаратов, а также наноконтейнеров в качестве носителей лекарственных веществ зависит также от того, насколько мы понимаем биофизическую основу механизмов взаимодействия наночастиц с различными физиологически активными соединениями и системами организма [М. Роко и др. 2002]. Так, при внутривенном применении дисперсий и эмульсий вводится большая чужеродная

поверхность дисперсных частиц, способная адсорбировать и, тем самым, на какое-то время частично выводить из кровотока различные компоненты плазмы крови (белки, липиды, липопротеидные комплексы и т.д.) [Склифас и др. 2002, Склифас и др. 2008, Goppert et al. 2005], что само по себе может привести к возникновению побочных реакций на введение мелкодисперсных эмульсий.

В настоящее время нет ясности относительно механизмов адсорбции плазменных белков на поверхности ПФУ наночастиц, а также практически отсутствуют сведения о том, в каком количестве и с какой динамикой происходит эта адсорбция. Известно лишь, что определенную роль в процессе адсорбции играет природа ПАВ, использованного в качестве стабилизатора эмульсии. Так in vitro на наночастицах, стабилизированных проксанолом 268, адсорбируется ряд плазменных белков, в то время как при замене проксанола на фосфолипиды яичного желтка, адсорбции белков плазмы не наблюдается [Склифас и др. 2002].

Несмотря на то, что в нашей стране свойства ПФУ эмульсий изучаются с 80-х годов, первые отечественные работы по исследованию адсорбции на таких эмульсиях были проведены лишь в 2000-х [Склифас и др. 2002, Склифас и др. 2008], вследствие чего процессы, происходящие при адсорбции белков на такого рода частицах, до сих пор остаются малоизученными.

Таким образом, в настоящее время актуальными являются исследования, нацеленные на изучение механизмов взаимодействия мелкодисперсных сред с различными компонентами плазмы крови, где в качестве модели использованы ПФУ эмульсии, стабилизированные проксанолами, для получения высокоэффективных, безопасных и стабильных дисперсных лекарственных форм и наноносителей лекарственных препаратов.

Цель

Исследование механизмы взаимодействия белков плазмы крови и ПФУ эмульсий, стабилизированных блоксополимерами полиоксиэтилена-полиоксипропилена.

Задачи

1. Определить состав плазменных белков, адсорбированных на поверхности частиц ПФУ эмульсий, стабилизированных блоксополимерами полиоксиэтилена-полиоксипропилена.

2. Определить временные характеристики процесса адсорбции белков в условиях in vivo и in vitro.

3. Изучить зависимость состава и количества адсорбированных белков от химической природы ПФУ ядра и химической природы ПАВ на поверхности частиц эмульсии.

4. Изучить механизмы адсорбции белков на поверхности частиц ПФУ эмульсии (определить тип взаимодействия, ответить на вопросы: влияет ли липидное окружение белков на их адсорбцию; происходит ли адсорбция белков непосредственно на гидрофобном ядре частицы или на ее поверхностно-активном слое; происходят ли изменение конформации белков при их адсорбции).

5. Определить сорбционную емкость эмульсии по белкам плазмы в экспериментах in vivo и in vitro.

Научная новизна

Впервые:

- определен состав плазменных белков, сорбированных на поверхности ПФУ эмульсий, стабилизированных различными ПАВ (проксанол 268, проксанол 168, Synperonic® F-108, Pluronic® Р-123).

- идентифицированы плазменные белки (фибронектин, фибриноген, иммуноглобулин G, кластерин, аполипопротеин AI, аполипопротеин AIV, аполипопротеин С2, аполипопротеин Е, сывороточный амилоидный белок А), сорбирующиеся на поверхности ПФУ эмульсии, стабилизированной проксанолом 268.

- определена сорбционная емкость различных эмульсий ПФУ по белкам плазмы крови in vitro (для человека и кролика) и in vivo - по белкам плазмы крови кролика;

- исследована динамика состава и количества адсорбированных белков плазмы на поверхности ПФУ эмульсии, стабилизированной проксанолом 268 в экспериментах in vivo и in vitro; показано, что в условиях in vitro состав сорбированных белков не зависит ни от времени инкубации, ни от соотношения эмульсия : плазма; показано, что в условиях in vivo с увеличением времени циркуляции происходит увеличение сорбционной емкости эмульсии, причем максимальное значение достигается после 24 часов Циркуляции; в течение первых 6 часов циркуляции не происходит изменения состава сорбированных белков, через 24 часа циркуляции состав сорбированных белков существенно изменяется;

- установлено, что состав сорбированных белков и сорбционная емкость эмульсии зависят от соотношения гидрофобных-гидрофильных блоков в молекуле ПАВ;

- установлено, что взаимодействие всех белков с массами ниже 200 кДа (за исключением белка с массой -55 к Да) на поверхности частиц происходит по гидрофобному, а белка с массой 200 кДа (IgG) - по электростатическому типу;

- показано, что липидное окружение белков препятствует полностью (белки плазмы человека с массой -50 и -60 кДа) или частично (аполипопротеин AI и фибриноген) адсорбции указанных белков на эмульсии;

- установлено, что флуоресценция белков, адсорбция которых идет по гидрофобному типу, является полностью или частично затушенной, что указывает на изменение конформации этих белков при их адсорбции.

Практическая значимость работы

Полученные данные представляют экспериментальные исследования механизмов сорбции белков на частицах эмульсий ПФУ, стабилизированных проксанолами, и имеют как теоретический, так и практический интерес. Они расширяют представления о взаимодействии белков со сложной структурой частицы эмульсии, приводящем к конформационным изменениям в молекуле белка. Данные по удельной сорбционной емкости эмульсии при циркуляции ее в кровотоке должны учитываться при введении больших объемов любых дисперсных препаратов, стабилизированных проксанолами, особенно при

определенных патологиях. Адсорбция на частицах белков плазмы, находящихся в небольших количествах, и изменение их физиологического состояния, пусть даже временно, может иметь негативные последствия для больного. В работе также показаны перспективы использования эмульсий ПФУ, стабилизированных проксанолами 268 и 168, для препаративного выделения и очистки отдельных плазменных белков, что убедительно показано на примере выделения Аро1.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Мелкодисперсные эмульсии на основе ПФОС, пригодные для внутривенного введения

Перфторорганические соединения, в основном, используются в виде субмикронных эмульсий, которые пригодны для внутривенного введения. В качестве эмульгаторов используются различные синтетические (плюроники и их отечественные аналоги проксанолы 168 или 268: блок-сополимеры окиси этилена и пропилена (Рис. 1)) и природные (яичного желтка, сои) ПАВ. [Апросин и др. 1983, Тзиёа & а1. 1988].

н н

I I

н-о-е-с-I I н н

н н

I I

о-с-с I I н н J

н

I

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Жалимов, Виталий Касимович

выводы

1. При инкубации плазмы крови с эмульсией, стабилизированной проксанолом 268, происходит быстрая адсорбция следующих плазменных белков на частицах: фибронектин, фибриноген, иммуноглобулин G, кластерин, аполипопротеин AI, аполипопротеин AIV, аполипопротеин С2, аполипопротеин Е, сывороточный амилоидный белок А. Предельная сорбционная емкость эмульсии по белкам плазмы достигается при соотношении эмульсии к плазме 1:10 и носит видоспецифичный характер: удельная сорбционная емкость по белкам плазмы кролика оказывается в 2 раза ниже, чем по белкам плазмы человека.

2. Сорбционная емкость эмульсии после 24 ч циркуляции in vivo в 4 раза превышает сорбционную емкость эмульсии in vitro.

3. Было определено, что состав сорбированных белков и сорбционная емкость эмульсии зависят от соотношения гидрофобных-гидрофильных блоков в молекуле ПАВ и не имеют выраженной зависимости от химической природы гидрофобного ядра эмульсии.

4. Наличие связанных с белками липидов частично (белки плазмы человека с массой -50 и -60 кДа) или полностью (аполипопротеин AI и фибриноген) препятствует адсорбции указанных белков на эмульсии.

5. Адсорбция белков плазмы крови человека с массой до 200 кДа на поверхности ПФУ эмульсии, стабилизированной проксанолом 268, основывается на гидрофобном эффекте. Взаимодействие иммуноглобулина IgG с поверхностью частицы основывается на электростатическом взаимодействии.

6. Методом собственной флуоресценции белка показано наличие изменений в конформации белков, взаимодействие с эмульсией которых проходит по гидрофобному типу, при их адсорбции на поверхности частиц эмульсии.

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи

Склифас А.Н., Жалимое В.К., Темное A.A., Кукушкин Н.И. Сорбционная емкость по белкам плазмы крови перфторуглеродных эмульсий, стабилизированных проксанолом 268 в экспериментах in vitro и in vivo II Биофизика, 2012, том 57, с. 317-324.

Жалимое В.К, Склифас А.Н., Кукушкин Н.И. Механизмы сорбции белков плазмы человека на поверхности перфторуглеродной эмульсии, стабилизированной проксанолом 268 //Биофизика, 2012, том 57, с. 308-316.

Жалимое В.К, Склифас А.Н., Капцов В.В., Кукушкин Н.И. Влияние ПАВ на основе полиоксиэтилена-полиоксипропилена, стабилизирующих эмульсию перфторуглеродов, на адсорбцию белков плазмы человека // Медлайн.ру, 2011, том 12, с. 1361-1371.

Тезисы докладов

Жалимое В.К, Склифас А.Н., Кукушкин Н.И. Белки плазмы крови, сорбированные на частицах перфто-руглеродных эмульсиий, стабилизированных проксанолом 268, механизмы сорбции // IV Российский симпозиум "Белки и пептиды". Казань, 2009, с. 340.

Жалимое В.К, Склифас А.Н., Кукушкин Н.И. Изучения механизмов сорбции белков плазмы крови на частицах перфторуглеродных эмульсий, стабилизиро-ванных проксанолом 268 в экспериментах in vitro II XIV международная Пущинская школа-конференция молодых ученых "Биология -наука XXI века". Пущино, 2010, с. 204-205.

Жалимое В.К. Влияние свойств пав на сорбцию белков плазмы крови на поверхности перфторуглеродных эмульсий стабилизированных различными ПАВ // IV международная конференция молодых ученых "Биология - от молекулы до биосферы". Харьков, 2011, с. 16-17.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Адсорбция белков на поверхности ПФУ эмульсий, стабилизированных проксанолами, является сложным и не до конца изученным процессом, многие стадии которого не выяснены до настоящего времени. Однако раскрытие некоторых механизмов этой адсорбции позволяет производить определенные прогнозы относительно взаимодействия плазменных белков с поверхностью наночастиц, вводимых в кровоток эмульсий. Так, полученные данные говорят о том, что в процессе циркуляции в кровотоке частиц эмульсии, стабилизированных проксанолами, происходит замещение его на компоненты плазмы крови (белки, липопротеидные комплексы) которые могут выступать в роли ПАВ. Необходимо при этом отметить, что адсорбция большинства белков на поверхности частиц эмульсии происходит за счет гидрофобного взаимодействия, при этом происходит значительное изменение в их конформации, и как следствие, становится невозможным предсказать, насколько значительно может изменяется функция этого белка. Однако можно смело утверждать, что белки-переносчики липидов в ассоциированном с частицей эмульсии состоянии теряют свои транспортные функции, а некоторые из этих белков (в частности АроА1), вполне вероятно, могут терять свою регуляторную функцию. Потеря липидного окружения (плазма без липидов) увеличивает количество сорбированного на эмульсии общего белка плазмы и изменяет его состав.

Анализ данных, полученных при исследовании адсорбции белков на эмульсиях, стабилизированных различными ПАВ, принадлежащими к группе проксанолов, но отличающимися лишь размерами гидрофобных и гидрофильных блоков в молекуле показал, что ПАВ, используемый для стабилизации эмульсии, оказывает влияние как на состав, так и на количество сорбированных на поверхности эмульсии белков. Полученные в работе данные расширяют наши познания в области адсорбции белков на поверхности наносфер, покрытых неионогенными ПАВ (проксанолами), что позволяет прогнозировать поведение таких субстанций при использовании их в качестве носителей при адресной доставке различных лекарственных средств, особенно пептидного происхождения. Так, например, можно предположить, что наличие в структуре белка амфипатических мотивов, сопряженных неструктурированными областями, может привести к его прочной адсорбции на поверхности эмульсии, что крайне важно при создании комплексов "наночастица-лекарственный препарат" на основе белков или пептидов, т.к. непрочно связанный белок быстро диссоциирует с поверхности (под действием термодинамических процессов, а также в связи с конкуренцией с плазменными белками при их внутривенном введении), что приведет к потере его лекарственных свойств.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Жалимов, Виталий Касимович, 2012 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ajees A A., Anantharamaiah G.M., Mishra V.K., Hussain М.М. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2006, Vol. 103(7), P. 2126-2131.

2. Al-Hanbali O., Rutt K.J., Sarker D.K., et al., J. Nanosci. Nanotechnol., 2006, Vol. 6(9-10), P. 3126-3133.

3. Anand G., Sharma S., Dutta A.K., Kumar S.K., Belfort G., Langmuir, 2010, Vol. 26, P. 10803-10811.

4. Anand G., Sharma S„ Kumar S.K., Belfort G., Langmuir, 2009, Vol. 25, P. 4998-5005.

5. Andrade J.D, Hlady V., AdVol. Polym. Sci., 1986, Vol. 79, P. 1.

6. Andrade J.D., Hlady V., Ann. N.Y., Acad. Sci., 1987, Vol. 516, P. 158172.

7. Andrade J.D., Hlady V., Wei A.P., Appl. Chem., 1992, Vol. 64, P. 17771781.

8. Asthagiri D., Lenhoff A.M., Langmuir, 1997, Vol. 13(25), P. 67616768.

9. Bailey R.W., Dunker A.K., Brown C.J. et al., Biochemistry, 2001, Vol. 40(39), P. 11828-11840.

10. Balantinou E., Trougakos I.P., Chondrogianni N. et al., Free Radic. Biol. Med., 2009, Vol. 46(9), P. 1267-1274.

11. Bartl M.M., Luckenbach Т., Bergner O. et al., ExP. Cell Res., 2001, Vol. 271(1), P. 130-141.

12. Bartlett D.W., Davis M.E., Bioconjugate Chem., 2007, Vol. 18(2), P. 456-468.

13. Bertholon I., Vauthier C., Labarre D., Pharm. Res., 2006, Vol. 23(6), P. 1313-1323.

14. Billsten P., Wahlgren M., Arnebrant Т., et al., J. Colloid. Interface Sci., 1995, Vol. 175(1), P. 77-82.

15. Blank M., Riess J., Nature, 1981, P. 9-16.

16. Borah B.M., Saha B., Dey S.K., Das G„ J. Colloid. Interface Sci., 2010, Vol. 349(1), P. 114-121.

17. Borges M.C., Small D.M., Dervichian D.G., Biochem. Biophys. Acta., 1967, Vol. 137, P. 157-167.

18. Bousquet Y., Swart P.J., Schmitt-Colin N., et al.„ Pharm Res, 1999, Vol. 16(1), P. 141-148.

19. Brash J.L., Ten Hove P., Thromb. Haemost., 1984, Vol. 51(3), P. 326330.

20. Brash J.L., Thibodeau J.A., J. Biomed. Mater. Res., 1986, Vol. 20. P. 1263-1275.

21. Brouillette C. G., Anantharamaiah G. M., 1995, Biochim. Biophys. Acta., Vol. 1256, P. 103-129.

22. Brouwers A.H., DeJong D.J., Dams E.T. et al., J. Drug. Target., 2000, Vol. 8, P. 225-233.

23. Caccamo A.E., Scaltriti M., Caporali A., et al., Ann. N. Y. Acad. Sci., 2003, Vol. 1010, P. 514-519.

24. Caccamo A.E., Scaltriti M., Caporali A., et al., Biochem. J., 2004, Vol. 382, P. 157-168.

25. Caccamo A.E., Scaltriti M., Caporali A., et al., Cell Death Differ., 2005, Vol. 12(1), P. 101-104.

26. Candiano G., Bruschi M., Musante L., et al., Electrophoresis, 2004, Vol. 25, P. 1327-1333.

27. Ceneviva A.C., Camargo M.E., Am. J. TroP. Med. Hyg., 1979, Vol. 28(4), P. 622-626.

28. Chanan-Khan A., Szebeni J., Savay S., et al., Ann. Oncol., 2003, Vol. 14(9) P. 1430-1437.

29. Chelmowski R., Prekelt A., Grunwald C., Woll C., J. Phys. Chem. A, 2007, Vol. 111(49), P. 12295-12303.

30. Chen Y.M., Guo L.H., Arch. Toxicol., 2009, Vol. 83, P. 255-261.

31. Choi-Miura N.H., Takahashi Y., Nakano Y., et al.; 1992, J. Biochem., Vol. 112, P. 557-561.

32. Clark L.C., Progr. in Clin, and Biol. Res., A.R. Liss Inc. N.Y., 1977.

33. Clark L.C., Becattini F„ Kaplan S. et al„ Science, 1973, Vol. 181, P. 680-682.

34. Clark L.C., Becattini F., Kaplan S„ J. Med.Sci., 1972, Vol. 9, P. 16-29.

35. Clark L.C., Moore R.E., Basis and txperimental aspects of oxygen transport by highly fluorinated organic compaunds. Biomedical aspects of fluorine chemistry, ed. R.Filler and Y. Kobayashi, 1982, p213-227.

36. Creighton T.E., Proteins: Structures and Molecular Properties, ed.; W. H. Freeman, New York, 1992.

37. Czeslik C., Royer C., Hazlett T., Mantulin W., Biophysical J., 2003, Vol. 84(4), P. 2533-2541.

38. Daly S.M., Przybycien T.M., Tilton R.D., Langmuir, 2003, Vol. 19(9), P. 3848-3857.

39. Daly S.M., Przybycien T.M., Tilton R.D., Langmuir, 2005, Vol. 21(4), P.1328-1337.

40. Davidson W.S., Thompson T.B., The J. Biol. Chem., 2007, Vol. 282(31), P.22249-22253.

41. De Vos W.M., Leermakers F.A.M., De Keizer A., et al., Langmuir, 2010, Vol. 26(1), P. 249-259.

42. Dowling S., Fischer J.J., Rockwell S. Biomaterials, Art.Cell and Immunobilization Biotechnology, 1991,Vol. 19(2), P. 377.

43. Dupont-Gillain C.C., Fauroux C.M.J., Gardner D.C.J., Leggett G.J., J. Biomed. Mater. Res. A, 2003, Vol. 67A, P. 548-558.

44. Elofsson U.M., Paulsson M.A., Arnebrant T., Langmuir, 1997, Vol. 13(6), P. 1695-1700.

45. Fang F., Szleifer I., J. Chem. Phys., 2003, Vol. 119(2), P. 1053-1065.

46. Filippov L.K., Filippova N.L., J. Colloid. Interface. Sci., 1996, Vol. 178(2), P. 571-580.

47. Fischer E. A., in: Affinity Chromatography and Related Techniques, Gribnau T. C. J., Visser J., Nivard R. J. F. (eds.), Elsevier, Amsterdam, 1982, poster A15.

48. Frank B.P., Beifort G„ Langmuir, 2001, Vol. 17, P. 1905.

49. Fujuta T., Suyama T., Yokoyama K., Eur.Surg.Res., 1971, Vol. 3, P. 436-453.

50. Gaulin High Pressure Technology. Gaulin worlwide N1, Holland, 1984.

51. Geyer R.P., Oxygen carrying colloidal blood substitutes / Ed. Freyet P. et al.

52. Geyer R.P., Drug.Design., Vol. 1 1, Ed.E. J.Ariens, Acad.Press, New York, 1976, P. 1-5.

53. Geyer R.P., Fed. Proc., 1975, Vol. 34(6), P. 1499-1505.

54. Geyer R.P., H.S. Symposium Karolinska Institute Res. Center Res. on perfluorochemicals inMed.Biol., 1977 P. 229-279.

55. Geyer R.P., Med. Biol., Huddige, 1977, P. 229-279.

56. Geyer R.P., Med. Ernähr. 1970, Vol. 11, P. 256-261.

57. Geyer R.P., Mourol R.G.,Taylor K., Fed. Proc., 1968, Vol. 27, P. 384 (Abstr.N952).

58. Geyer R.P., Mourol R.G., Taylor K., Fed.Proc., 1968, Vol. 27, P. 384.

59. Geyer R.P., Taylor K.,DuffetE., Fed. Proc., 1976, Vol. 35, P. 826-836.

60. Giacomelli C.E., Norde W„ J. Colloid. Interface Sei., 2001, Vol. 233(2), P. 234-240.

61. Göppert T.M., Müller R.H., Int. J. Pharm., 2005, Vol. 302(1-2), P. 172186.

62. Gray J.J., Curr. Opin. Struct. Biol., 2004, Vol. 14(1), P. 110-115.

63. Gursky O., Atkinson D., Proc. Natl. Acad. Sei. U. S. A., 1996, Vol. 93, P.2991-2995.

64. Harned R.K. Fruman S.A. et al. // Fcad Radiol.Fan. 1995, Vol. 2 (1), P. 38-42.

65. Hlady V., Buijs J., Curr. Opin. Biotechnol., 1996, Vol. 7(1), P. 72-77.

66. Hlady V., Buijs J., Jennissen H.P., Amyloid, Prions, and Other Protein Aggregates, 1999, Vol. 309, P. 402-429.

67. Hollmann O., Gutberiet T., Czeslik C., Langmuir, 2007, Vol. 23(3), P. 1347-1353.

68. Hollmann O., Reichhart C., Czeslik C., Z. Phys. Chem., 2008, Vol. 222(1), P. 205-215.

69. Hollmann O., Steitz R., Czeslik C., Phys. Chem. Chem. Phys., 2008, Vol. 10(10), P. 1448-1456.

70. Horbett T.A., Thromb. Haemost., 1984, Vol. 51(2), P. 174-181.

71. Huang N.-P., Michel R., Voros J., et al., Langmuir, 2001, Vol. 17(2), P. 489-498.

72. Huang R„ Cooper D.J., Sloviter H.A., Fed.Proc., 1987, Vol. 46, P. 2048-2052.

73. Jenne D.E., Löwin B., Peitsch M.C., at al., J. Biol. Chem., 1991, Vol. 266(17), P. 11030-11036.

74. Jeon S.I., Andrade J.D., J. Colloid. Interface Sei., 1991, Vol. 142(1), P. 159-166.

75. Jeon S.I., Lee J.H., Andrade J.D., De Gennes P.G., J. Colloid. Interface Sei., 1991, Vol. 142(1), P. 149-158.

76. Jiang X., Jiang J., Jin Y., et al., Biomacromolecules, 2005, Vol. 6(1), P. 46-53.

77. Jones S.E., Jomary C„ Int. J. Biochem. Cell Biol., 2002, Vol. 34(5), P. 427-431.

78. Jung S.-Y., Lim S.-M., Albertorio F., et al., J. Am. Chem. Soc., 2003, Vol. 125(42), P. 12782-12786.

79. Kathryn C. Partlow, Junjie Chen, Jason A. et al. //The FASEB Journal, 2007, Vol. 21, P. 1647-1654.

80. Kidoaki S., Matsuda T., Langmuir, 1999, Vol. 15, P. 7639-7646.

81. Kim H.R., Andrieux K., Delomenie C., at al., Electrophoresis, 2007, Vol. 28, P. 2252-2261.

82. Kirszbaum L, Bozas SE, Walker ID., FEBS Lett., 1992, Vol. 291 (1-2), P. 70-76.

83. Koehler J.A., Ulbricht M., Beifort G„ Langmuir, 1997, Vol. 13, P. 4162-4171.

84. Koehler J.A., Ulbricht M„ Beifort G., Langmuir, 2000, Vol. 16, P. 10419-10427.

85. Koutsopoulos S., Tjeerdsma A.-M., Lieshout J.F.T., et al., Biomacromolecules, 2005, Vol. 6(3), P. 1176-1184.

86. Ladbrook B.D., Williams R.M., Chapman D., BBa, 1968, Vol. 150, P. 333-339.

87. Lecuer H., Dervichian D.G., J. Mol. Biol., 1969, Vol. 45, P. 39-47.

88. Leermakers F.A.M., Ballauff M., Borisov O.V., Langmuir, 2007, Vol. 23(7), P. 3937-3946.

89. Leskov K.S., Klokov D.Y., Li J., et al., J. Biol. Chem., 2003, Vol. 278(13), P. 11590-11600.

90. Lowe K.C., Mc Naughton D.C., Hardy R.N. Experientia (Basel), 1985, Vol. 42, P. 1228-1231. 22, P. 15-16.

91. Lu J.R., Zhao X., Yaseen M., Curr. Opin. Colloid. Interface Sei., 2007, Vol. 12(1), P. 9-16.

92. Lück M., Paulke B.R., Schröder W., et al., J. Biomed. Mater. Res., 1998, Vol. 39(3), P. 478-485.

93. Lundqvist M., Sethson I., Jonsson H., Langmuir, 2004, Vol. 20(24), P. 10639-10647.

94. Lundqvist M., Stigler J., EliaProc G. et al., Nat. Acad. Sei. USA, 2008, Vol. 105(38), P. 14265-14270.

95. Malmsten M„ Colloid. Interface. Sei., 1998, Vol. 207(2), P. 186-199.

96. Marsh R.J., Jones R.A.L, Sferrazza M., Colloids Surf. B, 2002, Vol. 23(1), P. 31-42.

97. McColl J., Yakubov G.E., Ramsden J.J., Langmuir, 2007, Vol. 23, P. 7096-7100.

98. McGuire J., Wahlgren M.C., Arnebrant T., J. Colloid. Interface Sei.,

1995, Vol. 170(1), P. 182-192.

99. Mitsuno T., Kawa Y„ Kita A., Kohno N„ Int. Surg. 1981, Vol. 66, P. 355-358.

100. Moghini S.M., Hawley A.E., Christy N.M. et al., FEBS Lett., 1994, Vol. 344, P. 25-30.

101. Moretti R.M., Marelli M.M., Mai S., et al., Cancer Res., 2007, Vol. 67(21), P. 10325-10333.

102. Müller R.H., Maaben S., Weyhers H., Mehnert W., J. Drug Targetig.,

1996, Vol. 4(3), P. 161-170.

103. Nagayama S., Ogawara K., Fukuoka Y., et al., Int. J. Pharm., 2007, Vol. 342(1-2), P. 215-221.

104. Naito R., Yokoyama K., Technical Information, 1978, P. 8-136.

105. Noinville S., Bruston F., El Amri C., et al., Biophysical J., 2003, Vol. 85(2), P. 1196-1206.

106. Norde W., Biopolymers at Interfaces, 1998, Vol. 75, P. 27-54.

107. Norde W„ Colloids Surf. B, 2008, Vol. 61, P. 1-9.

108. Norde W., Giacomelli C.E., J. Biotechnol, 2000, Vol. 79, P. 259-268.

109. Norman M.E., Williams P., Ilium L., II Biomaterials. 1993. Vol. 14(3). P. 193-202.

110. Norman M.E., Williams P., Ilium L., II J. Biomed. Mater. Res. 1993. Vol. 27, P. 861-866.

111. Ohshima H., Fujita N., Kondo T., Colloid. Polym. Sei., 1992, Vol. 270(7), P. 707-710.

112. Ohshima H., Sato H., Matsubara H., et al., Colloid. Polym. Sei., 2004, Vol. 282(10), P. 1174-1178.

113. Okamoto H., Iwai M., Tsuda Y., Yokoyama K. Changes of particle size of perfluorochemical emulsion in circulation. Exchande of blood in dogs. ResP. Cir., 1974, Vol. 22, P. 380-394.

114. Okamoto H., Iwai M., Tsuda Y., Yokoyama K., Proc. X-th Intern.Congr. Nutrition SymP. on PFC Artificial Blood, Kyoto, 1975, P. 73-82.

115. Okamoto H., Iwai M., Tsuda Y., Yokoyama K., ResP. Cir., 1974, Vol. 22, P. 380-394.

116. Okamoto H., Yamanouchi H., Yokoyama K., Chem. Pharm. Bull. (Tokyo), 1975, Vol. 23, P. 1452-1457.

117. Pancera S.M., Gliemann H., Schimmel Th., Petri D.F.S., J. Colloid Interface Sei., 2006, Vol. 302(2), P. 417-423.

118. Poon S., Easterbrook-Smith S.B., Rybchyn M.S. et al., Biochemistry, 2000, Vol. 39(51), P. 15953-15960.

119. Poon S., Rybchyn M.S., Easterbrook-Smith S.B. et al., J. Biol. Chem., 2002, Vol. 277(42), P. 39532-39540.

120. Poon S., Treweek T.M., Wilson M.R. et al., FEBS Lett., 2002, Vol. 513(2-3), P. 259-266.

121. Rabe M„ Verdes D., Rankl M„ Chem. Phys. Chem., 2007, Vol. 8(6), P. 862-872.

122. Rabe M., Verdes D., Seeger S., AdVol. Colloid. Interface Sei., 2011, Vol. 162(1-2), P. 87-106.

123. Reddy S.T., Van der Vlies A.J., Simeoni E., et al., Nat. Biotechnol, 2007, Vol. 25(10), P. 1159-1164.

124. Reichhart C„ Czeslik C., Colloids Surf. B, 2010, Vol. 75(2), P. 612-616.

125. Riess J.G., 183 rd ACS National Meeting. Las-Vegas, 1982, Vol. 2, P. 2.

126. Riess J.G., Bancaster-Basel: Technomic, 1991.P.237.

127. Rizzi F., Caccamo A.E., Belloni L., Bettuzzi S., J. Cell. Physiol., 2009, Vol. 219(2), P. 314-323.

128. Rizzi F., Coletta M., Bettuzzi S., AdVol. Cancer. Res., 2009, Vol. 104, P. 9-23.

129. Rogers D.P., Roberts L.M., Lebowitz, et al., Biochemistry, 1998, Vol. 37, P. 11714-11725.

130. Rye, K. A., Barter, P. J., Arterioseler. Thromb. Vase. Biol., 2003, Vol. 24, P. 421-428.

131. Sant S., Poulin S., Hildgen P., J. Biomed. Mater. Res. A., 2008, Vol. 87(4), P. 885-895.

132. Santore M.M., Wertz C.F., Langmuir, 2005, Vol. 21(22), P. 1017210178.

133. Scaltriti M., Santamaría A., Paciucci R., Bettuzzi S., Cancer Res., 2004, Vol.64(17), P. 6174-6182.

134. Soulier J.P., Coune A., Brassinne C. et al., J. Clin. Oncol., 1986, Vol. 4, P. 789-797.

135. Sethuraman A., Beifort G., Biophys. J., 2005, Vol. 88(2), P. 1322-1333.

136. Sethuraman A., Vedantham G., Imoto T. et al., Proteins Struct. Funct. Bioinform., 2004, Vol. 56(4), P. 669-678.

137. Silva R.A., Huang R., Morris J. at al. // PNAS, 2008, Vol. 105(34), P. 12176-12181.

138. Skibla J.L., Sousalla J., Petroff R.J., Denor P., Eur. Surg. Res., 1985, Vol. 17(5), P. 301-309.

139. Slack S.M., Horbett T.A., Proteins at Interfaces., 1995, Vol. 602, P. 112128.

140. Sloviter H.A., Kamimoto T., Nature, 1967, Vol. 216, P. 458-459.

141. Sloviter H.A., Muknerji B., Prog, in Clinic, and Biol. Research, 1983, Vol. 122, P. 181-188.

142. Sloviter H.A., Petonovic T., Ogoshi S., Yamada H. J. Appl.Physiol.,1969, Vol. 27, P.666-668.

143. Sonesson A.W., Callisen T.H., Brismar H., Elofsson U.M., Colloids Surf. B, 2008, Vol. 61(2), P. 208-215.

144. Stewart E.M., Aquilina J.A., Easterbrook-Smith S.B., Biochemistry, 2007, Vol. 46(5), P. 1412-1422.

145. Suyama T., Matsumoto T., Watanade M. et al.l, Proc. X-th Intern. Congr. Nutrition-Sympos. on PFC Artificial Blood, Kyoto, 1975, P. 225-236.

146. Suyama T., Watanade M., Prog. Clin. Biol. Res., 1983, Vol. 122, P. 452.

147. Tie Y., Calonder C„ Van Tassel P.R., J. Colloid. Interface Sei., 2003, Vol. 268(1), P. 1-11.

148. Torsten M., Göppert T.M., Rainer H., Müller R.H., Journal of Drug Targeting, 2003, Vol. 11(4), P. 225-231.

149. TschopP. J., French L.E., Clin. ExP. Immunol., 1994, Vol. 2, P. 11-14.

150. Tsuda Y., Yamanouchi K., Yokoyama K. et. al.//Biomat.,Art.Cells. Art.Org., 1988, Vol. 16, P.473.

151. Tsuda Y„ Yamanouchi K„ Yokoyama K., et al., INC N.Y., 1989, P. 473-483.

152. Uniyal S., Brash J.L., Thromb. Haemostas., 1982, Vol. 47, P. 285-290.

153. Vonarbourg A., Passirani C., Saulnier P., et al., J. Biomed. Mater. Res. A, 2006, Vol. 78(3), P. 620-628.

154. Vroman L., Adams A.L., Fischer G.C., Munoz P.C., Blood, 1980, Vol. 55(1), P. 156-159.

155. Vroman L., Adams A.L., Klings M., Fed. Proc., 1971, Vol. 30(5), P. 1494-1502.

156. Vroman L„ Adams A.L., Surf. Sei., 1969, Vol. 16(C), P. 438-446.

157. Vroman L., Nature, 1962, Vol. 196, P. 476-477.

158. Wahr J. A., Trouwborst A., Spense R.K, et al., Anesth. Anaig. 1996, Vol. 82, 103-107.

159. Watanade M., Okamoto H., et al., Blood Substitutes, 1989, P. 547-556.

160. Wertz C.F., Santore M.M., Langmuir, 1999, Vol. 15(26), P. 8884-8894.

161. Wertz C.F., Santore M.M., Langmuir, 2001, Vol. 17(10), P. 3006-3016.

162. Wertz C.F., Santore M.M., Langmuir, 2002, Vol. 18(4), P. 1190-1199.

163. Wessler EP, litis R., Clark LC. // J. Fluorine. Chem., 1977, Vol. 9, P. 137-146.

164. Winter P.M., Cai K., Caruthers S.D. et al. // Expert. Re Vol. Med. Devices., 2007, Vol. 4(2), P. 137-145.

165. Wittemann A„ Ballauff M„ Phys. Chem. Chem. Phys., 2006, Vol. 8(45), P. 5269-5275.

166. Wu Z., Gogonea V., Lee X. et al., The J. of Biol. Chem., 2009, Vol. 284(52), P. 36605-36619.

167. Yamanouchi К., Tonaka M., Tsuda Y., Yokoyama K. et al., Chem. Pharm. Bull., 1985, Vol. 33(3), P. 1221-1231.

168. Yang C.R., Leskov K., Hosley-Eberlein K., et al., Proc. Natl. Acad. Sei., 2000, Vol. 97(11), P. 5907-5912.

169. Yokoyama K., Yamanouchi R., Murashima R., Chem.Pharm.Bull., 1978, Vol. 23(6), P. 1368-1373.

170. Yu-Chen Hu, Bentley W.E., Edwards G.H., Vakharia V.N. // Biotechnology And Bioengineering, 1999, Vol. 63(6), P. 721-729.

171. Zannis V.l., Chroni A., Krieger M., J.Mol.Med., 2006, Vol. 84, P. 276294.

172. Zoungrana Т., Findenegg G.H., Norde W., J. Colloid Interface Sei., 1997, Vol. 190(2), P. 437-448.

173. Апросин Ю.Д., Павлова-Веревкина Ю.Б., Новопашина JI.В. и др., 1990, Новосибирск, с. 65-69.

174. Апросин Ю.Д., Рыболовлев Ю.Р., Афонин Н.И. Исследование некоторых фармакокинетических характеристик эмульсий фторуглеродов. Сб. Медико-биологические аспекты применения эмульсий перфторуглеродов. Пущино, 1983, с. 96-101.

175. Аффинная хроматография: Методы: Пер. с англ. // Под ред. П. Дина, У. Джонсона, Ф. Мидла., М, Мир, 1988. С 278.

176. Васильев А.Э., Сб. Медико-биологические аспекты применения эмульсий перфторуглеродов., 1983, Пущино, с. 157-166.

177. Воробьев С.И, Иваницкий Г.Р., Ладиков Ю.В., и др., Докл. АН СССР, 1988, Т. 299 (1), с. 228-230.

178. Голубев A.M., Леонтьева Т.А., Коркмасова М.А. и др., Сб. Физиологическая активность фторсодержащих соединений. 1995. Пущино, с. 114-123.

179. Гришанова А.Ю., Образцов В.В., Шехтман Д.Г., Ляхович В.В., 1987, т. 52, вып. 7, с. 1138-1143.

180. Илларионов Э.Ф., Маевский Е.И., Кирш Ю.Э. и др. Физико-химическая и биологическая оценка свойств проксанолов - стабилизаторов эмульсий ПФОС. В сб.# Фторуглеродные газопереносящие среды. Пущино, 1984, с. 73-79.

181. Кирш Ю.Э., Панов В.П., Гельфер Ц.М. и др. Изучение состава, молекулярной массы и молекулярно - массового распределения блоксополимеров окиси этилена и окиси пропилена. Сб. Фторуглеродные газопереносящие среды. Пущино, 1984, с. 70-73.

182. Коваль Е.А., Маевский Е.И., Сб. Перфторированные углероды в биологии и медицине. Пущино. 1980, с. 81-85.

183. Лабадзе М.А., Сб. Фторуглеродные газопереносящие среды. 1984, Пущино, с. 44-50.

184. Метод собственной люминесценции белка. // Пермяков Е.А., М, Наука, 2003, 189с.

185. Методические рекомендации по некоторым физиологическим константам организма человека., Лукич В.Л., Усенко Л.В., Трофимова Т.Е., Лукич М.В., Зуева Л.Н., Москва-Днепропетровск, 1983г. С 8-9.

186. Молекулярная биология клетки. Т.1// Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж. и др., М, Мир, 1994, С 517.

187. Нанотехнология в ближайшем десятилетии. Прогноз направлений исследований. Ред. М. Роко, 3. Уильяме, П. Аливисатос. Мир, М, 2002.

188. Образцов В.В. Влияние физико-химических свойств фторуглеродов на скорость их выведения из организма. Сб. Пефторуглероды и медицина. 1990, с. 88-89.

189. Образцов В.В., Шехтман Д.Г. Склифас А.Н., Макаров К.Н., Биохимия, 1988, т.53, вып.4, с. 613-619.

190. Образцов В.В., Шехтман Д.Г., Склифас А.Н. и др., Доклады Академи наук. 1995 T.342,N 6, с. 819-822.

191. Образцов В.В., Шехтман Д.Г., Сологуб Г.Р., Белоярцев Ф.Ф., Биохимия, 1985, т.50, вып.7, с. 1220-1224.

192. Образцов В.В.,Тараховский Ю.С., Сб. Фторуглеродные газопереносящие среды. 1984, Пущино, с. 156—162.

193. Оксинойд О.Э., Романова М.Ж., Афонин Н.И., Вестник АМН СССР, 1990, №8, с. 87-91.

194. Основы флуоресцентной спектроскопии. // Джозеф Лакович, М, Мир, 1986, 496с.

195. Сидляров Д.П., Апросин Ю.Д., Афонин Н.И. и др., Гематология и трансфузиология, 1983, 7, с. 51-58.

196. Склифас А.Н., Исследование механизмов аккумуляции и выведения перфторорганических соединений в организме животных. Дисс. на звание к.б.н. по специальности биофизика. Пущино, 2000.

197. Склифас А.Н., Евдокимов В.А., Кукушкин Н.И. // Биофизика, 2008 ,том 53, вып.2, С. 359-366.

198. Склифас А.Н., Чаплыгина С.Л., Шехтман Д.Г., Кукушкин Н.И., Биофизика, 2007, том 52, вып.2, с. 367-371.

199. Склифас А.Н., Шехтман Д.Г., Евдокимов В.А., Темнов A.A., Анташов A.B., Капцов В.В., Кукушкин Н.И // Биофизика, 2002, т.47, вып.5, С. 926-932.

200. Склифас А.Н., Шехтман Д.Г., Образцов В.В., Воробьев С.И., Темнова И.В., Биофизика, 1998, т. 43, вып.1, стр. 171-176.

201. Темнов А.А, Склифас А.Н., Терещенко A.B., Белый Ю.А., Лысков Н.Б., Кукушкин Н.И. // Использование перфторуглеродной эмульсии для введения в стволовые клетки костного мозга фотосенсибилизирующих препаратов", Биофизика, 2010, т. 55, вып.6, С. 1063-1069.

202. Темнов A.A., Склифас А.Н., Терещенко A.B., Белый Ю.А., Лысков Н.Б.,Кукушкин Н.И. // "Радахлорин", адсорбированный на наночастицах перфторуглеродной эмульсии, проникает в стволовые клетки костного мозга", в материалах IV Всероссийского симпозиума с международным участием "Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии", г. Санкт-Петербург, 21-22 апреля 2010г., С. 188-189.

203. Терешина Е.В.. Доронина H.H., Хим-фарм. журнал, 1990, № 7, с. 16-18.

204. Фрейдин A.A., Кокоз Ю.М., Кобринский Е.М. и др., Сб. Медико-биологические аспекты применения эмульсиц перфторуглеродов. 1983, Пущино, с. 127-136.

205. Шерман Ф., Эмульсии., Ленинград, Химия, 1972.

206. Шехтман Д.Г., Сафронова В.Г., Склифас А.Н., Аловская A.A. и др., Биофизика. 1997, № 6, с. 1260-1266.