Изучение гена D-глюкуронил C5-эпимеразы как возможного гена-супрессора опухолевого роста тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Прудникова, Татьяна Юрьевна

• Прудникова, Татьяна Юрьевна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Прудникова, Татьяна Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Протеогликаны.

1.1.1. Строение и классификация гликозаминогликанов.-.

1.1.2. Локализация и функции протеогликанов.

1.1.3. Состав протеогликанов в трансформированных клетках.

1.1.4. Биосинтез протеогликанов.

1.2. D-глюкуронил С5-эпимераза.

1.2.1. Субстратная специфичность D-глюкуронил С5-эпимеразы.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы.

2.2. Методы.

2.2.1. Выделение РНК.

2.2.2. Обратная транскрипция.

2.2.3. Анализ экспрессии генов методом мультиплексной ОТ-ПЦР.

2.2.4. Горизонтальный электрофорез нуклеиновых кислот в агарозном геле.

2.2.5. Количественная ПЦР в реальном времени.

2.2.6. Вестерн-блот анализ.

2.2.7. Иммуногистохимия.

2.2.8. Клонирование.

2.2.9. Трансфекция и отбор клонов, стабильно экспрессирующих эпимеразу.

2.2.10. Определение клеточной пролиферации in vitro.

2.2.11. Определение влияния D-глюкуронил С5-эпимеразы на рост экспериментальных опухолей in vivo.

2.2.12. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Экспрессия D-глюкуронил С5-эпимеразы.

3.1.1. Экспрессия D-глюкуронил С5-эпимеразы в различных тканях человека.

3.1.2. Подбор условий ПЦР с различными праймерами для изучения экпрессии D-глюкуронил С5-эпимеразы.

3.1.3. Анализ экспрессии гена D-глюкуронил С5-эпимеразы в нормальной и опухолевой тканях молочной железы человека методом мультиплексной ОТ-ПЦР.

3.1.4. Анализ экспрессии гена D-глюкуронил С5-эпимеразы в нормальной и опухолевой тканях молочной железы человека методом количественной ПЦР в реальном времени.

3.1.5. Анализ экспрессии D-глюкуронил С5-эпимеразы в доброкачественных опухолях молочной железы методом мультиплексной ОТ-ПЦР и количественной ПЦР в реальном времени.

3.1.6. Определение присутствия белка D-глюкуронил С5-эпимеразы в тканях молочной железы человека методом Вестерн-блота.

3.1.7. Анализ экспрессии гена D-глюкурнил С5-эпимеразы в злокачественных опухолях и гиперплазиях предстательной железы человека.

3.2. Ген-инактивирующий тест (GIT - Gene Inactivaion Test).

3.2.1. Клонирование гена D-глюкуронил С5-эпимеразы.

3.2.2. Влияние экспрессии D-глюкуронил С5-эпимеразы на рост стабильно трансфицированных клонов.

3.2.3. Изучение влияния экспрессии гена D-глюкуронил С5-эпимеразы на рост экспериментальных опухолей in vivo.

3.2.4. Анализ экспериментальных опухолей.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ:.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение гена D-глюкуронил C5-эпимеразы как возможного гена-супрессора опухолевого роста»

В настоящее время открыто множество биологических молекул, которые участвуют в процессах злокачественной трансформации. К таким молекулам относятся и протеогликаны (ПГ) - сложные макромолекулы, состоящие из белкового кора и присоединённых к ним цепей гликозаминогликанов (ГАГ). Протеогликаны находятся на клеточной поверхности и во внеклеточном мат-риксе (ВКМ), выполняя разнообразные функции, в том числе связанные с участием в межклеточных взаимодействиях и во взаимодействиях клетки с ВКМ за счет связывания с различными компонентами ВКМ, включая факторы роста и их рецепторы (Ori et al., 2008; Lindahl et al., 2007, Santra et al., 2002). Изменения экспрессии или локализации этих молекул, так же как и ферментов, вовлеченных в их биосинтез и деградацию, ассоциированы с измениями пролиферативной активности клеток (Yip et al., 2006; Li et al., 2008), изменениями их подвижности (Gordon et al., 2008; Giordano et al., 2008) и ангиогене-за (Bix et al., 2008).

Известно, что при злокачественной трансформации меняется структура, состав, степень сульфатирования (Theocharis et al., 2003; Achilleas et al., 2002) и эпимеризации протеогликанов - замещения остатков глюкуроновой кислоты (GlcUA) на идуроновую (IdoUA) (Timar et al., 2002; Valla et al., 2001). Содержание остатков идуроновой кислоты в составе протеогликанов (ПГ) имеет важное значение для нормального функционирования гепарансульфат протеогликанов (ГСПГ) (Westergren-Thorsson et al., 1991). Показано, что содержание идуронового компонента коррелирует с антипролиферативным эффектом гепарансульфат протеогликанов - ГС, богатые остатками идуроновой кислоты (IdoUA) оказывали значительный антипролиферативный эффект на клетки мезотелиомы, тогда как ГС, имеющие в своем составе в основном остатки глюкуроновой кислоты, не имели подобного эффекта (Syrokou et al., 1999). При опухолях прямой кишки (Tsara et al., 2002), толстого кишечника (Theocharis, 2002), опухолях поджелудочной железы (Skandalis et al., 2006а) и карциномы гортани (Skandalis et al., 2006b) содержание идуроновой кислоты в углеводных цепях ГАГ версикана и декорина снижается. Изменения в структуре и соотношении GlcUA/IdoUA в опухоли могут свидетельствовать о том, 5 что, возможно, при злокачественной трансформации происходит нарушение в процессе биосинтеза ПГ, в частности в процессе эпимеризации.

D-глюкуронил С5-эпимераза (GLCE) является одним из ключевых ферментов биосинтеза гепарансульфат протеогликанов. Этот фермент проводит реакцию эпимеризации остатков глюкуроновой кислоты в идуроновую в углеводных цепях ГСПГ, участвующих в поддержании межклеточного контакта и передаче сигнальной информации. Эпимераза является единственным ферментом биосинтеза ГСПГ, о котором практически ничего не известно. До настоящего времени эпимераза изучалась исключительно как фермент биосинтеза ПГ — определена ее субстратная специфичность, кинетические свойства (Hagner-McWhirter et al., 2000b), механизмы эпимеризации глюкуронила (Pri-har et al., 1980; Backstrom et al., 1979), клонирована кДНК эпимеразы из легкого быка (Li et al., 1997), мышиной печени (Li et al., 2001) и клеток мышиной мастоцитомы (Crawford et al., 2001).

Разрушение гена, кодирующего D-глюкуронил С5-эпимеразу у мыши, приводило к гибели эмбрионов, у которых были обнаружены дефекты развития почек, легких, нарушения в костной ткани (Hagner-McWhirter et al., 2004). Эти данные свидетельствуют о том, что экспрессия/акивность эпимеразы может иметь важное значение для правильного формирования органов.

Отсутствие других данных о D-глюкуронил С5-эпимеразе не позволяет получить представление о том, есть ли какая-либо тканеспецифичность в экспрессии D-глюкуронил С5-эпимеразы у человека, изменяется ли экспрессия/активность этого фермента при злокачественной трансформации и существует ли связь между изменением состава ПГ и изменением экспрессии/активности D-глюкуронил С5-эпимеразы.

Нами была высказана гипотеза, что при злокачественной трансформации клеток происходит нарушение экспрессии либо активности D-глюкуронил С5-эпимеразы, что приводит к изменению структуры и состава ГСПГ и пролифе-ративной активности клеток.

Цель данной работы: исследовать роль D-глюкуронил С5-эпимеразы в регуляции клеточной пролиферации и злокачественной трансформации.

В соответствии с целью, были поставлены следующие задачи:

1. Определить уровень экспрессии гена D-глюкуронил С5-эпимеразы в различных тканях человека.

2. Исследовать экспрессию D-глюкуронил С5-эпимеразы в клинических образцах злокачественных и доброкачественных опухолей и культурах опухолевых клеток рака легкого, молочной и предстательной желез человека.

3. Изучить влияние экспрессии гена D-глюкуронил С5-эпимеразы на пролиферативную активность опухолевых клеток карциномы молочной железы (MCF7), карциномы предстательной железы (LNCaP) и мелкоклеточного рака легкого (U2020) in vitro.

4. Изучить влияние D-глюкуронил С5-эпимеразы на формирование экспериментальных опухолей in vivo (мыши SCID) и провести анализ ее экспрессии в выросших опухолях.

Научная новизна работы

В данной работе впервые было показано, что:

• ген D-глюкуронил С5-эпимеразы экспрессируется во всех изученных нормальных тканях человека (молочная железа, легкое, тимус, щитовидная железа, почка, кишечник, предстательная железа) и показана тканеспецифичность экспресии данного гена

• при злокачественной трансформации ткани молочной железы и предстательной железы человека происходит снижение экспрессии гена D-глюкуронил С5-эпимеразы по сравнению с нормальной тканью. Снижение экспрессии гена эпимеразы детектируется даже в неизмененной ткани, окружающей опухоль молочной железы

• восстановление экспрессии D-глюкуронил С5-эпимеразы оказывает антипролиферативное влияние на культуру опухолевых клеток различного происхождения - культуру клеток рака молочной железы линии MCF7, рака предстательной железы линии LNCaP и мелкоклеточного рака легкого линии U2020

• восстановление экспрессии D-глюкуронил С5-эпимеразы оказывает су-прессирующий эффект на формирование и рост экспериментальных опухолей у иммунодефицитных мышей линии SCID.

Практическая значимость

Полученные данные о снижении гена D-глюкуронил С5-эпимеразы не только в опухоли молочной железы, но и в неизмененной ткани, окружающей опухоль, привлекает внимание к этому гену как новому возможному маркеру доклинической диагностики рака молочной железы.

Способности эпимеразы супрессировать пролиферацию опухолевых клеток in vitro и рост экспериментальных опухолей in vivo дают основу для дальнейших исследований гена D-глюкуронил С5-эпимеразы как возможного кандидата для генотерапии злокачественных новообразований.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Ген D-глюкуронил С5-эпимеразы человека экспрессируется во всех исследованных тканях человека, с наивысшим уровнем экспрессии в молочной железе и легком и меньшей экспрессией в тканях почки, тимуса и щитовидной железы.

2. В злокачественных опухолях молочной и предстательной железы человека происходит значительное снижение экспрессии гена D-глюкуронил С5-эпимеразы, при гиперплазии и в доброкачественных опухолях экспрессия гена в большинстве случаев сохраняется на нормальном уровне.

3. Усиление экспрессии D-глюкуронил С5-эпимеразы в опухолевых клетках при введении плазмидной конструкции, несущей полноразмерную кДНК эпимеразы, супрессирует пролиферацию опухолевых клеток in vitro для клеточных линий MCF7 (рак молочной железы), LNCaP (рак предстательной железы) и U2020 (мелкоклеточный рак легкого).

4. D-глюкуронил С5-эпимераза подавляет формирование экспериментальных опухолей in vivo у мышей SCID - при инокуляции экспрес-сирующих эпимеразу клеток U2020 опухоли образовались лишь у 5 из 10 экспериментальных мышей, в выросших опухолях экспрессия D-глюкуронил С5-эпимеразы практически отсутствует.

Апробация работы

Результаты работы были представлены и обсуждены на 42ой

Международной Научной Студенческой Конференции «Студент и научнотехнический прогресс» (Новосибирск, Россия, 14 апреля 2004), на 8ой

Международной школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, Россия, 17-21 апреля 2004), на Мировом конгрессе по онкологии и Симпозиуме по молекулярной медицине (The World Congress on

Advances in Oncology, and International Symposium on Molecular Medicine),

Крит, Греция, октябрь 2004, 2005, 2006, 2007, 2008), на 6ой Европейской конференции по раку молочной железы (6th Europeam Breast Cancer

Conference ), (Белин, Германия, 15-19 апреля 2008), на 8ой Международной th конферении по исследованию рака (8 International Conference of Anticancer Research ) (Кос, Греция, октябрь 2008), на Всероссийской конференции с международным участием «Молекулярная Онкология» (Новосибирск, Россия, 1-3 октября 2008).

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Прудникова, Татьяна Юрьевна

выводы

1. Экспрессия гена D-глюкуронил С5-эпимеразы показана для всех исследованных тканей человека, с наивысшим уровнем экспрессии в тканях молочной железы и легкого и меньшей экспрессией в тканях почки, тимуса и щитовидной железы.

2. В злокачественных опухолях молочной и предстательной железы человека происходит значительное снижение экспрессии D-глюкуронил С5-эпимеразы (84% пациентов в случае молочной железы и 45% пациентов в случае предстательной железы), при гиперплазии и доброкачественных новообразованиях экспрессия гена значительно снижается только у 7-20% пациентов.

3. Усиление экспрессии гена D-глюкуронил С5-эпимеразы при введении плазмидной конструкции, несущей полноразмерную кДНК эпимеразы супрессирует пролиферацию опухолевых клеток in vitro для всех исследованных клеточных линий - аденокарциномы молочной железы (MCF7), предстательной железы (LNCaP) и мелкоклеточного рака легкого человека (U2020).

4. D-глюкуронил С5-эпимераза подавляет формирование опухолей у мышей SCID - при инокуляции экспрессирующих эпимеразу опухолевых клеток U2020, опухоли образовывались лишь у 5 из 10 мышей SCID, тогда как в контроле опухоли образовывались у 5 из 6 мышей. В выросших опухолях экспрессия D-глюкуронил С5-эпимеразы практически отсутствовала как на уровне мРНК так и на белковом уровне.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Прудникова, Татьяна Юрьевна, 2009 год

1. Achilleas, D., Theocharis, A.D. Human colon adenocarcinoma is associated with specific post-translational modifications of versican and decorin. // Biochim Biophys Acta. 2002. - Vol. 1588. - No. 2. - P. 165-172.

2. Aikawa Т., Whipple C.A., Lopez M.E., Gunn J., Young A., Lander A.D., Korc M. // Glypican-1 modulates the angiogenic and metastatic potential of human and mouse cancer cells. J Clin Invest. 2008 - Vol. 118 - No. 1 - P. 89-99.

3. Alexopoulou A.N., Multhaupt H.A., Couchman J.R. Syndecans in wound healing, inflammation and vascular biology. // Int J Biochem Cell Biol. 2007 - Vol. 39 - No. 3 - P. 505-28.

4. Backen A.C., Cole C.L., Lau S.C., Clamp A.R., McVey R., Gallagher J.T., Jayson G.C. Heparan sulphate synthetic and editing enzymes in ovarian cancer. // Br J Cancer. 2007 - Vol. 96. -No. 10. - P. 1544-1548.

5. Backstrom G., Hook M., Lindahl U., Feingold D.S., Malmstrom A., Roden L., Jacobsson I. Biosynthesis of heparin. Assay and properties of the microsomal uronosyl C-5 epimerase. // J Biol Chem. -1979. Vol 254. -No 8. - P. 2975-2982.

6. Bernfield M., Gotte M., Park P.W., Reizes O., Fitzgerald M.L., Lincecum J., Zako M. Functions of cell surface heparan sulfate proteoglycans. // Annu Rev Biochem. -1999. Vol. 68 - P. 729-777.

7. Bernfield M., Sanderson R.D. Syndecan, a developmentally regulated cell surface proteoglycan that binds extracellular matrix and growth factors. // Philos Trans R Soc Lond В Biol Sci. 1990 - Vol. 1239. - No. 1239.-P. 171-86.

8. Berto A.G., Sampaio L.O., Franco C.R., Cesar R.M. Jr, Miche-lacci Y.M. A comparative analysis of structure and spatial distribution of decorin in human leiomyoma and normal myometrium. Biochim Biophys Acta.-2003 -Vol. 1619.-No. 1.-P. 98-112.

9. Bezakova G., Ruegg M.A. New insights into the roles of agrin. // Nat Rev Mol Cell Biol. 2003. - Vol.4. -No. 4. - P. 295-308.

10. Bix G., Iozzo R.V. Novel interactions of perlecan: unraveling perlecan's role in angiogenesis. Microsc Res Tech. 2008. -Vol. 71. No. 5. -P. 339-348.

11. Boyd F.T., Cheifetz S., Andres J., Laiho M., Massague J. Transforming growth factor-beta receptors and binding proteoglycans. // J Cell Sci Suppl.-1990.-Vol. 13.-P. 131-138.

12. Brown T.A., Bouchard Т., St John Т., Wayner E., Carter W.G. Human keratinocytes express a new CD44 core protein (CD44) as a heparin-sulfate intrinsic membrane proteoglycan with additional exon. // J Cell Biol. -1991.-Vol. 113.-No. l.-P. 207-221.80

13. Bulow H.E., Hobert О. Differential sulfations and epimerization define heparan sulfate specificity in nervous system development. // Neuron -2004. Vol. 41 - No. 5. - P. 723-736.

14. Bullock S.L., Fletcher J.M., Beddington R.S., Wilson V.A. Renal agenesis in mice homozygous for a gene trap mutation in the gene encoding heparan sulfate 2-sulfotransferase // Genes Dev. 1998. - Vol. 12. - No. 12. - P. 1894-906.

15. Campbell P., Feingold D.S., Jensen J.W., Malmstrom A., Roden L. New assay for uronosyl 5-epimerases // Anal Biochem. 1983. - Vol. 131. -No. l.-P. 146-52.

16. Capurro M., Wanless I.R., Sherman M., Deboer G., Shi W., Mi-yoshi E., Filmus J. Glypican-3: a novel serum and histochemical marker for hepatocellular carcinoma. // Gastroenterology. 2003. - Vol. 125. - No. l.-P. 81-90.

17. Capurro M.I., Xu P., Shi W., Li F., Jia A., Filmus J. Glypican-3 inhibits hedgehog signaling during development by competing with Patched for Hedgehog binding. // Dev Cell. 2008. - Vol. 4. - No. 5. - P. 700-711.

18. Chang, J. W., Kang, U.-B., Kim, D. H. Identification of circulating endorepellin LG3 fragment: Potential use as a serological biomarker for breast cancer. Proteomics Clin. 2008. - Vol. 2. - No. 1. - P. 23-32.

19. Christian J.L. BMP, Wnt and Hedgehog signals: how far can they go? // Curr Opin Cell Biol. 2000. - Vol. 12. - No. 2. - P.244-249.

20. Cohen I.R., Murdoch A.D., Naso M.F., Marchetti D., Berd D., Iozzo R.V. Abnormal expression of perlecan proteoglycan in metastatic melanomas. // Cancer Res. 1994. - Vol. 54. - No. 22. - P. 5771-5774.

21. Crawford B.E., Olson S.K., Esko J.D., Pinhal M.A. Cloning, Golgi localization, and enzyme activity of the full-length heparin/heparan sulfate-glucuronic acid C5-epimerase. // J Biol Chem. 2001. - Vol. 276. - No. 24.-P. 21538-21543.

22. Dong M., How Т., Kirkbride K.C., Gordon K.J., Lee J.D., Hem-pel N., Kelly P., Moeller B.J., Marks J.R., Blobe G.C. The type III TGF-beta receptor suppresses breast cancer progression. // J Clin Invest. -2007. Vol. 117.-No. 1.-P. 206-17.

23. Elliott R.L., Blobe G.C. Role of transforming growth factor Beta in human cancer. // J Clin Oncol. 2005. - Vol. 23. - No. 9. - P. 2078-2093.

24. Embry J.J., Knudson, W. G1 domain of aggrecan cointernalizes with hyaluronan via a CD44-mediated mechanism in bovine articular chondrocytes. // Arthritis Rheum. 2003. - Vol. 48. - No. 12. - P. 3431-3441.

25. Essner J.J., Chen E., Ekker S.C. Syndecan-2. // Int J Biochem Cell Biol. 2006. - Vol. 38. - No. 2. - P. 152-156.

26. Eugster C., Panakova D., Mahmoud A., Eaton S. Lipoprotein-heparan sulfate interactions in the Hh pathway.// Dev Cell. 2007. - Vol. 13. -No. l.-P. 57-71.

27. Filmus J., Capurro M., Rast J. Glypicans. // Genome Biol. -2008.-Vol. 9.-No. 5.-P. 224.

28. Finger E.C., Turley R.S., Dong M., How Т., Fields T.A., Blobe G.C. TbetaRIII suppresses non-small cell lung cancer invasiveness and tu-morigenicity. // Carcinogenesis. 2008. - Vol. 29. No. 3. - P. 528-535.

29. Fleischmajer R., Fisher L.W., MacDonald E.D., Jacobs L. Jr, Perlish J.S., Termine J.D. Decorin interacts with fibrillar collagen of embryonic and adult human skin. // J Struct Biol. 1991. - Vol. 106. - No. 1. - P. 8290.

30. Giordano RJ. Heparanase-2 and syndecan-1 in colon cancer: the ugly ducklings or the beautiful swans? // Eur J Gastroenterol Hepatol. 2008. -Vol. 20.-No. 8.-P. 716-718.

31. Ghiselli G., Agrawal A. The human D-glucuronyl C5-epimerase gene is transcriptionally activated through the beta-catenin-TCF4 pathway. // Biochem J. 2005. - Vol. 390. - No. 2. - P. 493-499.

32. Habuchi O. Diversity and functions of glycosaminoglycan sul-fotransferases. // Biochim Biophys Acta. 2000. - Vol. 1474. - No. 2. - P. 115-127.

33. Haggerty J.G., Bretton R.H., Milstone L.M. Identification and caracterisation of a cell surface proteoglycan on keratinocytes. // J Invest Dermatol. 1992. - Vol. 99. - No. 4. - P. 374-380.

34. Hagner-McWhirter A., Li J.P., Oscarson S., Lindahl U. Irreversible Glucuronyl C5-epimerization in the Biosynthesis of Heparan Sulfate. // J Biol Chem. 2004. - Vol. 279. - No. 15. - P. 14631-14638.

35. Hagner-Mcwhirter A., Lindahl U., Li J. Biosynthesis of heparin/heparan sulphate: mechanism of epimerization of glucuronyl C-5. // Bio-chem J. 2000b. - Vol. 347. - No. 1. - P. 69-75.

36. Hardingham Т.Е., Fosang A.J. Proteoglycans: many forms and many functions. // FASEB J. 1992. - Vol. 6. - No. 3. - P. 861-870.

37. Hempel N„ How Т., Dong M., Murphy S.K., Fields T.A., Blobe G.C. Loss of betaglycan expression in ovarian cancer: role in motility and invasion. // Cancer Res. 2007. -Vol. 67. - No. 11. - P. 5231-5238.

38. Hempel N., How Т., Cooper S.J., Green T.R., Dong M., Copland J.A., Wood C.G., Blobe G.C. Expression of the type III TGF-beta receptor is negatively regulated by TGF-beta. // Carcinogenesis. 2008. -Vol. 29. -No. 5.-P. 905-912.

39. Hirose J., Kawashima H., Yoshie O., Tashiro K., Miyasaka M. Versican interacts with chemokines and modulates cellular responses. // J Biol Chem. 2001. - Vol. 276. - No. 7. - P. 5228-5234.

40. Ilan N., Elkin M., Vlodavsky I. Regulation, function and clinical significance of heparanase in cancer metastasis and angiogenesis. // Int J Bio-chem Cell Biol. 2006. - Vol. 38. - No. 12. - P. 2018-2039.

41. Iozzo RV, Cohen IR, Grassel S, Murdoch AD. The biology of perlecan: the multifaceted heparan sulphate proteoglycan of basement membranes and pericellular matrices. // Biochem J. 1994. - Vol. 302. - No. 3. - P. 625-639.

42. Jacobsson I., Lindahl U., Jensen J.W., Roden L., Prihar H., Feingold D.S. Biosynthesis of heparin. Substrate specificity of heparosan N-sulfate D-glucuronosyl 5-epimerase. // J Biol Chem. 1984. - Vol. 259. - No. 2.-P. 1056-1063.

43. Kawashima H., Hirose M., Hirose J., Nagakubo D., Plaas A.H., Miyasaka M. Binding of a large chondroitin sulfate/dermatan sulfate proteoglycan, versican, to L-selectin, P-selectin, and CD44. // J Biol Chem. -2000. Vol. 275. - No. 45. - P. 35448-35456.

44. Kjellen L., Lindahl U. Proteolycans: structure and interactions. // Annu Rev Biochem. 1991. - Vol. 60. - P. 443-475.

45. Knox S.M., Whitelock J.M. Perlecan: how does one molecule do so many things? // Cell Mol Life Sci. 2006. - Vol. 63. - No. 21. - P. 24352445.

46. Kugelman L.C., Ganguly S., Haggerty J.G., Weissman S.M., Milstone L.M. The core protein of epican, a heparin sulfate proteoglycan or keratniocytes, is an alternative form of CD44. // J Invest Dermatol. 1992. -Vol. 99.-No. 6.-P. 886-891.

47. Lamanna W.C., Kalus I., Padva M., Baldwin R.J., Merry C.L., Dierks T. The heparanome-the enigma of encoding and decoding heparan sulfate sulfation. // J Biotechnol. 2007. - Vol. 129. - No. 2. - P. 290-307.85

48. Lewis K.A., Gray P.C., Blount A.L., MacConell L.A., Wiater E., Bilezikjian L.M., Vale W. Betaglyean binds inhibin and can mediate functional antagonism of activin signalling. // Nature. 2000. - Vol. 404. - No. 6776.-P. 411-414.

49. Li J.P., Gong F., El Darwish K., Jalkanen M., Lindahl U. Characterization of the D-glucuronyl C5-epimerase in the biosynthesis of heparin and heparan sulfate. // J Biol Chem. 2001. - Vol. 276. - No. 23. - P. 2006920077.

50. Li J.P. Heparin, heparan sulfate and heparanase in cancer: remedy for metastasis? // Anticancer Agents Med Chem. 2008. - Vol. 8. - No. 1. - P. 64-76.i

51. Li J., Hagner-McWhirter A., Kjellen L., Palgi J., Jalkanen M., Lindahl U. Biosynthesis of heparin/heparan sulfate. cDNA cloning and expression of D-glucuronyl C5-epimerase from bovine lung. //J Biol Chem. -1997. Vol. 272. - No. 44. - P. 28158-28163.

52. Lindahl U., Backstrom G., Malmstrom A., Fransson L.A. Biosynthesis of L-iduronic acid in heparin: Epimerization of D-glucuronic acid on the polymer level. // Biochem Biophys Res Comm. 1972. - Vol. 46. - No. 2.-P. 985-991.

53. Lindahl U. Heparan sulfate-protein interactions—a concept for drug design? // Thromb Haemost. 2007. - Vol. 98. - No. 1. - P. 109-115.

54. Lindahl U., Jacobsson I., Hook M., Backstrom G., Feingold D.S. Biosynthesis of heparin. Loss of C-5 hydrogen during conversion of D-glucuronic to L-iduronic acid residues // Biochem Biophys Res Commun. -1976. Vol. 70. - No. 2. - P. 492-499.

55. Lopez-Casillas F., Wrana J.L., Massague J. Betaglycan presents ligand to the TGF beta signaling receptor. // Cell. 1993. - Vol. 73. - No. 7. -P. 1435-1444.

56. Lyon M., Gallagher J.T. Bio-specific sequences and domains in heparan sulphate and the regulation of cell growth and adhesion. // Matrix Biol. 1998. - Vol. 17. - No. 7. - P. 485-493.

57. Malmstrom, A. Biosynthesis of dermatan sulphate. Substrate specifity of the C-5 uronosyl epimerase. // J Biol Chem. 1984. - Vol. 259. -No. l.-P. 161-165.

58. Matsumoto K., Shionyu M., Go M., Shimizu K., Shinomura Т., Kimata K., Watanabe H. Distinct interaction of versican/PG-M with hyaluronan and link protein. 11 J Biol Chem. 2003. - Vol. 278. - No. 42. - P. 41205-41212.

59. Melrose J., Hayes A.J., Whitelock JM, Little CB. Perlecan, the "jack of all trades" proteoglycan of cartilaginous weight-bearing connective tissues. // Bioessays. 2008. - Vol. 30. - No. 5. - P. 457-469.

60. Merry C.L., Wilson V.A. Role of heparan sulfate-2-О-sulfotransferase in the mouse. // Biochim Biophys Acta. 2002. - Vol. 1573. -No. 3.-P. 319-327.

61. Mulloy В., Forster M. J. Conformation and dynamics of heparin and heparan sulfate. // Glycobiology. 2000. - Vol. 10. - No. 11. - P. 11471156.

62. Muramatsu Т., Saitoh M., Ro Y., Uekusa Т., Iwamura E., Ohta K., Kohno Y., Abiko Y., Shimono M. Inhibition of syndecan-1 expression and function in oral cancer cells. // Oncol Rep. 2008. - Vol. 20. - No. 60. - P. 1353-1357.

63. Nadanaka S, Kitagawa H. Heparan sulphate biosynthesis and disease. // J Biochem. 2008. - Vol. 144. - No. 1. - P. 7-14.

64. Oldberg A., Antonsson P., Lindblom K., Heinegard D. A collagen-binding 59-kd protein (fibromodulin) is structurally related to the small interstitial proteoglycans PG-S1 and PG-S2 (decorin). // EMBO J. 1989. -Vol. 8. - No. 9. - P. 2601-2604.

65. Ori A., Wilkinson M.C., Fernig D.G. The heparanome and regulation of cell function: structures, functions and challenges. // Front Biosci. -2008.-Vol. 13.-P. 4309-4338.

66. Prihar H.S., Campbell P., Feingold D.S., Jacobsson I., Jensen J.W., Lindahl U., Roden L. Biosynthesis of heparin. Hydrogen exchange at carbon 5 of the glucuronosyl residues. // Biochemistry. 1980. - Vol. 19. -No. 3. - P. 495-500.

67. Prydz K., Dalen K.T. Synthesis and sorting of proteoglycans. // Journal of Cell Science. 2000. - Vol. 113. - No. 2. - P. 193-205.

68. Ricciardelli С., Rodgers R.J. Extracellular matrix of ovarian tumors. // Semin Reprod Med. 2006. - Vol. 24. - No. 4. - P. 270-282.

69. Santra M., Reed C.C., Iozzo R.V. Decorin binds to a narrow region of the epidermal growth factor (EGF) receptor, partially overlapping but distinct from the EGF-binding epitope. // J Biol Chem. 2002. - Vol. 277. -No. 38.-P. 35671-35681.

70. Schamhart D.H., Kurth K.H. Role of proteoglycans in cell adhesion of prostate cancer cells: from review to experiment. // Urol Res. 1997. -Vol. 25. - No. 2. - P. 89-96.

71. Sharma В., Handler M., Eichstetter I., Whitelock J.M., Nugent M.A., Iozzo R.V. Antisense targeting of perlecan blocks tumor growth and an-giogenesis in vivo. // J Clin Invest. 1998. - Vol. 102. - No. 8. - P. 1599-608

72. Schonherr E., Witsch-Prehm P., Harrach В., Robenek H., Rau-terberg J., Kresse H. Interaction of biglycan with type I collagen. //J Biol Chem. 1995. - Vol. 270. - No. 6. - P. 2776-2783.

73. Seidler D.G., Breuer E., Grande-Allen K.J., Hascall V.C., Kresse H. Core protein dependence of epimerization of glucuronosyl residues in galactosaminoglycans. // J Biol Chem. 2002. - Vol. 277. - No. 44. - P. 42409-42416.

74. Silbert J.E., Sugumaran G. Biosynthesis of chondroitin/dermatan sulfate. // IUBMB Life. 2002. - Vol. 54. - No. 4. - P. 177-186.

75. Song H.H., Shi W., Xiang Y.Y., Filmus J. The loss of glypican-3 induces alterations in Wnt signaling. // J Biol Chem. 2005. - Vol. 280. -No. 3.-P. 2116-2125.

76. Theocharis AD. Human colon adenocarcinoma is associated with specific post-translational modifications of versican and decorin. // Biochim Biophys Acta. 2002. - Vol. 1588. - No. 2. - P. 165-172

77. Tiedemann K., Larsson Т., Heinegard D., Malmstrom A. The glucuronyl C5-epimerase activity is the limiting factor in the dermatan sulfate biosynthesis. // Arch Biochem Biophys. 2001. - Vol. 391. - No. 1. - P. 65-71.

78. Timar J., Lapis K., Dudas J., Sebestyen A., Kopper L., Koval-szky I. Proteoglycans and tumor progression: Janus-faced molecules with contradictory functions in cancer. // Semin ancer Biol. 2002. - Vol. 12. - No. 3.-P. 173-186.

79. Tsara M.E., Theocharis A.D., Theocharis D.A. Compositional and structural alterations of proteoglycans in human rectum carcinoma with special reference to versican and decorin. // Anticancer Res. 2002. - Vol. 22. -No. 5.-P. 2893-2898.

80. Tumova S., Woods A., Couchman J.R. Heparan sulfate proteoglycans on the cell surface: versatile coordinators of cellular functions. // Int J Biochem Cell Biol. 2000.- Vol. 32. - No. 3. - P. 269-288.

81. Turley R.S., Finger E.C., Hempel N., How Т., Fields T.A., Blobe G.C. The type III transforming growth factor-beta receptor as a novel tumor suppressor gene in prostate cancer. // Cancer Res. 2007. - Vol. 67. -No. 3. - P. 1090-1098.

82. Valla S., Li J., Ertesvag H., Barbeyron Т., Lindahl U. Hexuronyl C5-epimerases in alginate and glycosaminoglycan biosynthesis. // Biochimie. 2001. - Vol. 83. - No. 8. - P. 819-30.

83. Varjosalo M., Taipale J. Hedgehog: functions and mechanisms. // Genes Dev. 2008. - Vol. 22. - No. 18. - P. 2454-2472.

84. Vijayagopal P., Figueroa J.E., Levine E.A. Altered composi-tionand increased endothelial cell proliferative activity of proteoglycans isolated from breast carcinoma. // J Surg Oncol. 1998. - Vol. 68. - No. 4. - P. 250-254.

85. Vlodavsky I., Ilan N., Naggi A., Casu B. Heparanase: structure, biological functions, and inhibition by heparin-derived mimetics of heparan sulfate. // Curr Pharm Des. 2007. - Vol. 13. - No. 20. - P. 2057-2073.

86. Vreys V., David G. Mammalian heparanase: what is the message? // J Cell Mol Med. 2007. - Vol. 11. - No. 3. - P. 427-452.

87. Westergren-Thorsson G., Onnervik P.O., Fransson L.A., Malm-strom A. Proliferation of cultured fibroblasts is inhibited by L-iduronate-containing glycosaminoglycans. // J Cell Physiol. 1991. - Vol. 147. - No. 3. -P. 523-530.

88. Whitelock J.M., Melrose J., Iozzo R.V. Diverse cell signaling events modulated by perlecan. // Biochemistry. 2008. - Vol 47. - No. 43. - P. 11174-11183.

89. Whipple C.A., Lander A.D., Korc M. Discovery of a novel molecule that regulates tumor growth and metastasis. // Scientific World Journal. -2008. Vol. 8. - P. 1250-1253.

90. Wilson I.B. The never-ending story of peptide O-xylosyltransferase. // Cell Mol Life Sci. 2004. - Vol. 61. - No. 6. - P. 794-809.

91. Williams S., Ryan C., Jacobson C. Agrin and neuregulin, expanding roles and implications for therapeutics. // Biotechnol Adv. 2008. - Vol. 26. - No. 3.-P. 187-201.

92. Wu Z.L., Zhang L., Yabe Т., Kuberan В., Beeler D.L., Love A., Rosenberg R.D. The involvement of HS in FGF1/HS/FGFR1 signaling complex. // J Biol Chem. 2003. - Vol. 278. - No. 19. - P. 17121-17129.

93. Yamanaka K., Ito Y., Okuyama N., Noda K., Matsumoto H., Yo-shida H., Miyauchi A., Capurro M., Filmus J., Miyoshi E. Immunohistochemical study of glypican 3 in thyroid cancer. // Oncology. 2007.- Vol. 73. - No. 6. - P. 389-394.

94. Yip G.W., Smollich M., Gotte M. Therapeutic value of glycosami-noglycans in cancer. // Mol Cancer Ther. 2006. - Vol. 5. - No. 9. - P. 2139-2148.

95. Yuan D.H., Xie H.H., Wang Y., Meng C.Y., Yang L.P., Feng Y.C., Song J.G., Zou X., Wu K.C., Liu J. Expression and significance of glypican-3 in colorectal cancer. // Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2008. - Vol. 88. - No. 22. - P. 1540-1542.1. ОТ АВТОРА

96. Автор искренне благодарит кандидата биологических наук, Григорьеву Эльвиру Вительевну за научное руководство работой.