Изучение факторов патогенности Pasteurella multocida с целью разработки нового поколения противопастереллезных вакцин тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Шубина, Елена Анатольевна

• Шубина, Елена Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шубина, Елена Анатольевна

1. Введение 4 стр.

1.1. Актуальность темы 4 стр.

1.2. Цель и задачи исследований 5 стр.

1.3. Научная новизна 6 стр.

1.4. Практическая ценность 6 стр.

1.5. Апробация полученных результатов 7 стр.

1.6. Публикации 7 стр.

1.7. Объем и структура диссертации 7 стр.

2. Обзор литературы 8 стр.

2.1. Распространение и экономическая значимость пастереллезов 8 стр.

2.2. Историческая справка 9 стр.

2.3. Возбудители пастереллезов 13 стр.

2.4. Факторы патогенности Р.ти11ос1с1а 14 стр.

2.5. Культивирование пастерелл 21стр.

2.6. Специфическая профилактика пастереллезов 25 стр.

3. Собственные исследования 31стр.

3.1. Материалы и методы 31стр.

3.2. Результаты исследований 35 стр.

3.2.1. Динамика накопления поверхностных антигенов пастерелл в процессе глубинного культивирования 35 стр.

3.2.2. Испытание возможности использования флокулянтов для концентрирования поверхностных антигенов пастерелл 46 стр.

3.2.3. Концентрирование поверхностных антигенов пастерелл методом ультрафильтрации на полых волокнах 56 стр.

3.2.4. Токсичность и реактогенность . минеральных масел и эмульгаторов, входящих в состав эмульгированных вакцин 57 стр.

3.2.5. Токсические свойства соматических антигенов пастерелл 60 стр.

3.2.6. Иммуногенная активность соматических антигенов Р.тикос1с1а трех серологических вариантов 63 стр.

3.2.7. Разработка контроля иммуногенной активности противопастереллезной вакцины 65 стр.

3.2.8. Испытание иммуногенной активности и реактогенности опытных серий вакцины против пастереллеза свиней 70 стр.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение факторов патогенности Pasteurella multocida с целью разработки нового поколения противопастереллезных вакцин»

1.1. Актуальность темы.

Внедрение промышленной технологии в животноводстве, как правило, сопровождается концентрацией большого поголовья скота на ограниченной территории. В трудных экономических условиях современной России необходима не только правильная организация технологического процесса, но и высокая эффективность профилактических мероприятий против инфекционных заболеваний.

Такими заболеваниями являются пастереллезы сельскохозяйственных животных, вызываемые различными вариантами Pasteurella multocida и Pasteurella haemolytica. Эти микроорганизмы обитают в верхних отделах пищеварительного и дыхательного трактов здоровых животных. Стрессы, связанные с транспортировкой, недостатками в условиях содержания, несбалансированного кормления, а также вирусные инфекции способствуют повреждению защитных механизмов организма, что создает благоприятные условия для развития пневмонийных пастереллезов.

Различные формы пастереллезов наносят большой экономический ущерб сельскому хозяйству многих стран мира, входит в число наиболее распространенных заболеваний (А. Н. Борисенкова, 1971, 1983, В. И. Геведзе и др., 1980, М. А. Сидоров, В. И. Геведзе, 1983, Н. А. Масимов, 1992, Д. Ф. Осидзе, 1987, G. R. Carter, 1967, 1981, N. Mashiro et al.,1992, К. R. Rhoades et. Al., 1992, G. Zhao et. Al., 1992, J. R. Brito et. Al., 1993). Разработка надежных средств специфической профилактики пастереллезов является актуальным вопросом в системе противоэпизоотических мероприятий.

Для борьбы с пастереллезами сельскохозяйственных животных учеными нашей страны и всего мира были разработаны живые и инактивированные вакцины, нашедшие широкое применение (Н. М. Никифорова, 1977, А. Н. Борисенкова, 1986, G. R. Carter, 1957, A. W. Confer et al., 1985, R. D. Olson et al., 1986, M. W. Azam et al., 1991, A. Myint, 1992). Однако существующие вакцины изготавливаются из бактериальной массы пастерелл, выращенной без учета факторов патогенности, имеют ряд недостатков.

Поэтому целесообразно усовершенствовать технологию промышленного изготовления противопастереллезных препаратов с учетом распределения и накопления поверхностных антигенов при выращивании в жидких питательных средах, с учетом токсичности и перекрестной протективной активности соматических антигенов.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Шубина, Елена Анатольевна

5. ВЫВОДЫ.

1. При производственном глубинном культивировании Р.тикос1с1а создаются условия для распределения в культуральной жидкости растворимых поверхностно расположенных компонентов клеток. Серологическими методами максимальное количество поверхностных антигенов обнаруживается в бесклеточной культуральной жидкости к 10-му часу культивирования (для всех трех штаммов), к 12-му часу их уровень снижается в 2 раза. При этом оптическая концентрация клеток продолжает незначительно расти.

2. Однопроцентные растворы хитозана с молекулярным весом от 50 до 500 Кда эффективно осаждали клетки пастерелл трех серовариантов в кислой среде. При этом наиболее выражено разделение на фракции в культуральной жидкости в стадии торможения роста (10 - 12 час.). Лучшие результаты осаждения клеток хитозаном получены для серовариантов А и Д при 4 "С, для сероварианта В при 22 "С.

3. При исследовании обработанной хитозаном бесклеточной культуральной жидкости серологическими методами не выявлено снижения титра капсульных антигенов по сравнению с исходным уровнем. Таким образом, хитозан не связывает капсульные антигены пастерелл.

4. Ультрафильтрация культуральной жидкости на полых волокнах позволяет концентрировать поверхностные антигены пастерелл всех трех серологических вариантов в 6 - 10 раз.

5. При изучении токсичности соматических антигенов пастерелл для белых мышей установлено, что дозы клеточных стенок от 1 до 6 млрд. / см3 не обладали токсичностью и не вызывали падежа животных. Увеличение концентрации до 7,5 млрд. / см3 и выше сопровождалось гибелью белых мышей. Концентрация клеточных стенок пастерелл до 20 - 30 млрд. / см3 обуславливало 100 % - ную гибель опытных животных.

6. При испытании токсичности, безвредности и реактогенности большого количества адъювантов установлено, что адъювант, состоящий из 92 % минерального масла Маркол 52 и 8 % эмульгатора 139, не токсичен и умеренно реактогенен. Эмульсия, приготовленная на его основе, стабильна и обладает небольшой вязкостью, что обуславливает легкость введения этих препаратов животным.

7. Иммуногенность препаратов клеточных стенок пастерелл в дозе 3 млрд. / см3 достаточно высока: штамма А - 42, В - 86 %, Д — 50 %. Не выявлено иммунологического родства между штаммами А и Д. Перекрестная активность при иммунизации препаратами клеточных стенок пастерелл трех штаммов наблюдалась между штаммами А и В (36 %), В и А(20 %); В и Д (14,3 %), Д и В (41,6%).

8. Контроль иммуногенной активности противопастереллезных препаратов методом сывороточной защиты мышей позволяет контролировать иммуногенность всех трех штаммов Р.тикос1с1а. Установлена корреляция между титром капсульных антигенов пастерелл в РПГА и степенью защиты животных от экспериментального заражения.

9. Опытные серии противопастереллезной вакцины со сниженным количеством клеток были менее токсичными, слабо реактогенными. Иммуногенность опытных серий была на уровне производственных в отношении серологических вариантов А и Д и выше в отношении серологического варианта В за счет сохранения поверхностных антигенов.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Полученные данные позволяют внести изменения в технологию промышленного изготовления вакцины поливалентной инактивированной эмульгированной против пастереллеза свиней, кроликов и пушных зверей, проводить производственное глубинное культивирование пастерелл с учетом оптимального соотношения накопления количества клеток и наиболее полного сохранения поверхностных антигенов.

2. Проведенные исследования служат основанием для оптимальной компоновки вакцины и использования минерального масла Маркол 52 и эмульгатора 139 в составе адъюванта.

3. На основании проведенной работы разработана методика контроля иммуногенной активности противопастереллезной поливалентной вакцины, позволяющая контролировать иммуногенность всех серологических вариантов пастерелл, включенных в состав препарата.

4. Полученные данные позволяют в ближайшее время приступить к разработке компонентной вакцины против пастереллеза сельскохозяйственных животных, в которой учитываются все факторы патогенности возбудителя.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шубина, Елена Анатольевна, 2003 год

1. Аванян А. А., Кад Л. П., Павлова И. Б. Атлас анатомии бактерий, патогенных для человека и животных. М., 1972.

2. Агаева Э. М., Сидоров М. А. Антигенные и типоспецифические свойства фракций капсульного антигена Р.тииос1с1а. // Труды ВИЭВ, 1979, т. 50 с.95 -101.

3. Андросик Н. Н., Лях Ю. Г. Методические указания по диагностике, профилактике и мерам борьбы с пастереллезом сельскохозяйственных животных. Минск, 1999 22 с.

4. Андросик Н. Н., Лях Ю. Г. Профилактика пастереллеза сельскохозяйственных животных на современном этапе. // Весщ акадэмп навук Рэспублш Беларусь. Мшск, 2000, № 4 с. 62 64.

5. П.Ашмарин И. П., Воробьев А. А. Статистические методы в бактериологических исследованиях. М., 1962.

6. Баран А. А. Электроповерхностные явления и устойчивость полимерсодержащих систем. Автореф.докт.дисс. Ленинград, 1982.

7. Блехерман Б. Е., Галибина Н. В., Александрова М. П., Ковальская. Влияние дегидратации и восстановления на ультраструктуру Раз1еиге11а тикоас1а. М., 1985 в. 2.

8. Бовкун Г. Ф. Антигенные свойства различных структур возбудителя пастереллеза. // Бюллетень ВИЭВ, 1976, в. 26 с. 57 -58.

9. Бовкун Г. Ф., Сидоров М. А. Иммунологическая характеристика антигенов возбудителя пастереллеза. // Ветеринария. 1977 № 7 с. 44 46.

10. Большаков И. Н., Насибов С. М. Связывание бактериального липополисахарида хитозаном при энтеросорбции в эксперименте. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана. М., 1999 с. 120.

11. Борисенкова А. Н. Значение соматических и капсульных антигенов Р.тикос1с1а в иммунологической специфичности вакцин. // Ветеринария. 1978 №5 с. 40-42.

12. Борисенкова А. Н. Изучение капсульных антигенов штаммов пастерелл (птичьих А вариантов) от кур методом преципитации в агаровом геле. // Болезни птиц. 1967 т. № 5 с. 75 80.

13. Борисенкова А. Н. Профилактика пастереллеза. // Птицеводство. 1983 № 12 с. 26.

14. Борисенкова А. Н. Роль клеточных компонентов Р.тиИос!с1а в развитии у птиц иммуногенности к пастереллезу. // Ветеринария. 1976 № 2 с. 45 46.

15. Борисенкова А. Н., Лебедева А. И., Гаврилова В. С. Новое в борьбе с болезнями птиц. 1984 с.21.

16. Борисенкова А. Н., Мошкин С. А. Токсические, антигенные и протективные свойства морфологических структур, выделенных из возбудителей пастереллеза кур. // Научные вопросы производства яиц и мяса птицы. 1975 т. 39 с. 146- 149.

17. Вайсман И. Ж. Предпосылки комплексной оценки физиологического состояния бактерий и их популяции. ЖМЭИ. 1984, 4,с.З.

18. Вайсман Э. И., Геведзе В. И. Степень антигенного родства пастерелл, выделенных от здоровых и больных пастереллезом животных. // Достижения вет.науки и передового опыта животноводству. 1976 в. 2 с. 140.

19. Вейцер Ю. И., Минц Д. М. Высокомолекулярные флокулянты в процессах очистки природных и сточных вод. М., 1981 201 с.

20. Ветеринарные препараты. Справочник под ред. Д. Ф. Осидзе. М., 1981 448 с. .

21. Ветеринарные препараты. Справочник. Сост.: Ю. Ф. Борисович, Л. В. Кириллов. Под ред. Д. Ф. Осидзе. М., 1981 448 с.

22. Власкина О. В. Патогенность серовариантов А, В и Э Р.тикос1с1а и фильтратов надосадочной жидкости их бульонных культур. // Ветеринария. 1999 №5 с. 30-32.

23. Воробьев А. А. Механизм действия адъювантов. // Успехи соврем.биологии. 1969 т. 68, вып. 1 (4) с. 72 89.

24. Воробьев А. А., Васильев Н. Н. Адъюванты. М., 1969,205 С.

25. Геведзе В. И., Вайсман Э. И. Эпизоотическая эффективность химической вакцины против пастереллеза свиней. // Достижения вет.науки и передового опыта животноводству. 1980 в. 5 с 38 — 40.

26. Геведзе В. И., Левченко И. Д. Вайсман Э. И. Изучение иммуногенных свойств химических и биофабричных вакцин против пастереллеза свиней в лабораторных и производственных условиях. // Труды Белорусского НИИЭВ. 1979 т. 17 с. 55-59.

27. Григорьева Г. И. Игнатов П. Е. Факторы патогенности как протективные антигены при конструировании вакцин. // Сельхоз.биология. 1987 № 2 с. 100- 104.

28. Гублер Е. В. Вычислительные методы анализа и распознавание патологических процессов. М., 1978 372 с.

29. Гуславский А. И., Попова В. М. Вопросы очистки, разделения и концентрирования биологических жидкостей. // Тезисы докл. Всерос.научно-практ.конф. Научные основы производства вет.биол.препаратов. Щелково, 2000 с. 308 309.

30. Доморадский И. В. Возбудители пастереллезов и близких к ним заболеваний. М., 1971.

31. Душук Р. В. Сравнительная оценка иммуногенности вакцин против пастереллеза уток и гусей. // Тезисы докладов научно проиводст.конф.г. Ломоносов. Ленинград, 1985 ч. 2 с. 70 - 71.

32. Езепчук Ю. В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий. М. 1977.

33. Езепчук Ю. В. Патогенность как функция биомолекул. М., 1985.

34. Иванов В. Н. Энергетика роста микроорганизмов. Киев, 1981, с. 137.

35. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины поливалентной эмульгированной против пастереллеза свиней. ТУ 10.09 152 - 91.

36. Кадымов Р. А., Кунаков А. А., Седов В. А. Инфекционные болезни овец. М., 1987 с. 119, 126.

37. Калмыкова Л. И. Токсин Р.тииос1с1а серологического варианта Э и его свойства. Автореф.дисс.канд.вет.наук. М., 1992.

38. Карпухин Г. И., Шапиро Н. И. Химические вакцины для профилактики кишечных инфекций. Ленинград, 1979, 192 с.

39. Кац Л. Н. Некоторые особенности субмикроскопической организации поверхностных и мембранных структур бактериальных клеток в связи с их функцией. Автореф.дисс.докт.биол.наук. М., 1971. •

40. Каширин В. В. Биологический принцип стандартизации штаммов бактерий возбудителей пастереллеза птиц. // Тезисы докладов Всеросс.н.-пр.конф. «Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификациивет.препаратов.» М., 2001с.57 58.

41. Каширин В. В. Характеристика птичьих штаммов по капсульным антигенам и патогенности. // Методы и средства диагностики, профилактики и лечения инфекционных болезней животных. Сб.научн.тр. М., 1985 с. 96.

42. Коломнина Г. Ф., Антонова Н. И., Галибина Н. В., Лукьянова Е. М., Блехерман Б. Е., Рогожин С. П. Капсула и капсульный антиген Раз1еиге11а тикос1с1а сероварианта В. // Сб.научн.тр. ВГНКИ. М., 1989 с. 83 89.

43. Кольчан В. В. Изучение антигенного строения пастерелл в РДП. // Эпизоотология и патогенез болезней сельхоз.ж-х на Дальнем Востоке. Тр. Дальневост. ЗНИВИ. 1979 т. 10 с. 30.

44. Костюкова Н. Н., Езепчук Ю. В. Методологические подходы к конструированию химических вакцин против бактериальных инфекций. // Журнал микробиол., эпидемиол.и иммунол. 1984 № 8 с. 3 8.

45. Курбанов Ш. К. Характеристика серологических вариантов P.multocida, выделенных от телят. // Проблемы лейкоза и инф.заболеваний сельхоз.ж-х. 1988 с. 103- 105.

46. Курбанов Ш. К. Эпизоотологическое' значение различных серотипов P.multocida при массовых респираторных инфекциях телят в откормочных хозяйствах Автореф.дисс.канд.вет.наук. Самара, 1994.

47. Лабинская А. С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М., 1978 с. 33.

48. Литвин В. Ю., Пушкарева В. И. Факторы патогенности бактерий: функция в окружающей среде. // Журнал микробиол., эпидемиол., и иммунол. 1994 № 5 с. 84-87.

49. Лях Ю. Г. Особенности специфической профилактики пастереллеза свиней в Белоруссии. // Материалы междунар.н.-пр.конф. «Н.основы производства вет.биол.препаратов.» Щелково, 2003 с. 103 105.

50. Лях Ю. Г. Пастереллез свиней (эпизоотология и меры борьбы). // Аналитический обзор. Минск, 2000 36 с.

51. Лях Ю. Г. Пастереллез свиней в Белоруссии. Минск, 2002, 201 с.

52. Мазур Т. Типирование культур P.multocida ' методом капсульной деполимеризации мукополисахаридов. // Тезисы докл. Всеросс.н.-пр.конф. «Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации вет.препаратов». М., 2001, с. 55 56,

53. Масимов H. А. Значение пастерелл при остром респираторном синдроме парагриппа 3 у телят откормочных хозяйств ' промышленного типа. Автореф.дисс.канд.вет.наук. М., 1992.

54. Масимов Н. А. Значение пастереллоносительства при респираторных инфекциях телят. // Проблемы лейкоза и инф.заболеваний сельхоз.ж-х. 1988 с. 97-99.

55. Медуницын Н. В. Вакцинология. М., 1999 с. 15.

56. Мельников Н. И., Мельников В. Н., Гимранов М. Г. Ферменты патогенности и токсины бактерий. М., 1969.

57. Мертвецов Н. П., Беклемишев А. Б., Савич И. М. Современные подходы к конструированию молекулярных вакцин. Новосибирск, 1987. 207 с.

58. Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям. Методические указания. МУК 4.1/ 4.2. 588 96. М., 1998 с. 51.

59. Мусил Я., Новакова О., Кунц К. Современная биохимия в схемах. М., 1981 с. 213.

60. Никифорова H. М. Итоги и перспективы борьбы с пастереллезами животных и рожей свиней. // Тр. ВГНКИ, М., 1977 т. 24 с. 74 -80.

61. Никифорова H. М., Соломатин В. И., Кузнецова О. В. Сравнительное изучение иммуногенной активности противопастереллезных вакцин. // Тр. ВГНКИ. M., 1977 т. 25 с. 197 201.

62. Осидзе Д. Ф. Инфекционные болезни животных. М., 1987 с. 188.

63. Основы общей биологии. Под ред. Э. Либберти. М., 1982 с. 148 160.

64. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М., 1978.

65. Петров О. В. Некоторые антигенные и структурные компоненты капсул Р.тиИоас1а. //Тр. ВИЭВ, 1971 с.39, с. 189.

66. Петровская В. Г. Проблема патогенности бактерий. М., 1967.

67. Петровская В. Г. Современные направления в изучении факторов, определяющих патогенные свойства бактерий. // Вестн. АМН СССР. 1976 № 1 с. 3 8.

68. Плохинский Н. А. Биометрия. М., 1970.

69. Подкопаев В. М., Степанов А. В., Муравьев В. Н., Белоусова Р. В. Инфекционные и инвазионные болезни молодняка крупного и мелкого рогатого скота. М., 1985 с. 45.

70. Попова Т. Е. Характеристика капсульных антигенов Р.тикос1с1а различных серологических вариантов. Автореф.дисс.канд.вет.наук. М., 1997.

71. Попова Т. Е., Ставцева Л. Я. Динамика образования антител к поверхностным антигенам пастерелл. // Диагностика и профилактика и меры борьбы с особоопасными и экзотическими болезнями животных. Покров, 1998 с. 366.

72. Раевский А. А. Перспективное технологическое направление культивирования бактерий при производстве вакцин. // Материалымеждунар.н.-пр.конф. «Н.основы производства вет.биол.препаратов.» Щелково, 2003 с.61 -64.

73. Раевский А. А., Анисимова Л. В., Коротеева Л. А., Бушуева Н. Б. Разработка управляемого процесса культивирования стрептококков. // Материалы междунар.н.-пр.конф. «Н.основы производства вет.биол.препаратов.» Щелково, 2003 с.68-71.

74. Раевский А. А., Рубан Е. А.и др. Об оптимальных условиях культивирования пастерелл на- логарифмической стадии роста. // ЭИ. Передовой н.-пр.опыт в биол.промышленности. М., 1984 № 10 с. 3 5

75. Раевский А. А., Ярцев М. Я. Влияние парциального давления растворенного кислорода на рост пастерелл. // Пр-во и контроль мед., вет.препаратов, опыт применения и реализации их в странах СНГ. Вольгинский, 1999 с. 67.

76. Рождественская Т. Н. Гиалуронидаза Р.тиНоасЬ и ее ингибирование. Автореф.канд.дисс. Тарту, 1992.

77. Рубан Е. А., Самуйленко А. Я. Гомогенность культуральной среды микроорганизмов в биореакторе в процессе глубинного культивирования. // Материалы междунар.н.-пр.конф. «Н.основы производства вет.биол.препаратов.» Щелково, 2003 с.74 76.

78. Рубан Е. А., Ярцев М. Я., Разумова Н. А. Динамика потребления глюкозы при периодическом культивировании пастерелл. // ЭИ. Передовой н.-пр.опыт в биол.промышленности. М., 1985 в. 10.

79. Руководство по вакцинному и сывороточному делу. Под ред. П. Н. Бургасова. М., 1978 с. 53.

80. Самуйленко А. Я., Рубан Е. А., Самуйленко С. А. Влияние растворенного кислорода на рост культур микроорганизмов и клеток животных. // Материалы междунар.н.-пр.конф. «Н.основы производства вет.биол.препаратов.» Щелково, 2003 с.77 80.

81. Самуйленко С. А., Рубан Е. А., Самуйленко А. Я. Влияние концентрации парциального давления С02 на жизнедеятельность микроорганизмов и клеток животных. // Материалы междунар.н.-пр.конф. «Н.основы производства вет.биол.препаратов.» Щелково, 2003 с.80 83.

82. Сапегина Е. П., Анисимова Л. В., Раевский А. А. Динамика роста пастерелл при глубинном культивировании. // ЭИ. Передовой н.-пр.опыт в биол.промышленности. М., 1983 № 2 с. 5 10.

83. Сафронова Т. М., Бойцова Т. М. Хитозан как флокулянт нативного рыбного белка. // Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана. М., 1999 с. 251.

84. Саркисян X. В., Нерсесян С. Е., Егоян С. Г., Гаспарян Т. Э., Шекоян К. И. Сравнительное изучение эффективности противопастереллезной вакцины для свиней. // «Ветеринарная патология» № 1, 2003 с 135 137.

85. Сергеев В. А. Вирусные вакцины. Киев, 1993 с. 158.

86. Сидоров М. А., Геведзе В. И. Пастереллезы животных. // Ветеринария. 1983 № Юс. 43-47.

87. Сидоров М. А., Скородумов Д. И., Федотов В. Б. Под ред. Сидорова М. А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. М., 1995 319 с.

88. Сосницкий А. И., Потехин А. В., Ручнова О. И. Реактивность организма белых мышей на пастереллезную инфекцию в зависимости от возраста. // Пр-во и контроль мед., вет.препаратов, опыт применения и реализации их в странах СНГ. Вольгинский, 1999 с. 70.

89. Сосов Р. Ф. Эпизоотология. М., 1974 с. 99.

90. Ставцева JI. Я., Попова Т. Е. Применение РПГА для серологической идентификации пастерелл. // Диагностика и профилактика и меры борьбы с особоопасными и экзотическими болезнями животных. Покров, 1998 с. 365.

91. Ставцева Л. Я., Попова Т. Е. Серологические методы для выявления капсульных антигенов пастерелл. // Тезисы докл. Всеросс. Н.-пр.конф. Научные основы производства вет.биол.препаратов. Щелково, 2000 с. 255 -257.

92. Станиславский Е. С. Бактериальные структуры и их антигены. М., 1971.

93. Сюрин В. Н.и др. Актуальная проблема ветеринарной вирусологии. // Ветеринария. 1977 № 4 с. 45 48.

94. Тесленко А. Я., Гирфанова Т. ф., Медведев Ю. В. Концентрирование суспензий микроорганизмов с помощью флокулянтов. М., 1984 48 с.

95. Тесленко А. Я., Попов В. Г. Хитин и его производные в биотехнологии. Обзор. М., 1982 39 с.

96. Тутов И. К., Ситьков В. И. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов. Ставрополь, 1997 с. 75, 212 -213.

97. Шегидевич Э. А. Роль пастерелл в респираторной патологии овец и крупного рогатого скота. Автореф.дисс.докт.вет.наук. М., 1993.

98. Шегидевич Э. А. Состояние и перспективы изучения пастереллезов сельскохозяйственных животных. // Труды ВИЭВ. 1984 т. 60 с. 58.

99. Шегидевич Э. А., Федотов В. Б., Крючков В. Я. Серотиповой состав P.multocida при пневмонии ягнят. //Труды ВИЭВ. 1983 т. 58 с. 15.

100. Юдаев А. П. Иммунобиологическая специфичность пастерелл, биохимическая и серологическая характеристика некоторых антигенных фракций, выделенных из них. Автореф.канд.дисс. М., 1975.

101. Ярцев М. Я. Перспективы современного производства бактериальных вакцин. // Тезисы докл. Всеросс.н.-пр.конф. Научн.основы производства вет.биол.препаратов. Щелково, 2000 с. 124—125.

102. Ярцев М. Я., Белоусов В. И., Главацкая О. В.и др. Пастереллезы животных и птиц: специфическая профилактика, лечение и методы борьбы. М., 1989 57 с.

103. Ярцев М. Я., Сапегина Е. П., Анисимова Л. В.и др; Морфология, культуральные и биохимические свойства пастерелл на разных стадиях роста при управляемом культивировании. // ЭИ. Передовой н.-пр.опыт в биол.промышленности. М., 1985 в. 8.

104. А1 Lebban Z. S., Corbeil L. В. et al. Rabbit pasteurellosis : Induced disease and vaccination. II Am. J. Vet. Res. 1988 v. 49 № 3 p. 312 - 316.

105. Aldova E., Frederiksen W. Et al. Aerogenic pasteurellas and Pasteurella Like organism isolated in Czechoslovakia. // Zentrabblatt fur Bacteriologie. 1992 v. 277 № lp. 139- 143.

106. Azam M. W., Hussain I., Ashfaque H. Comparative immunogenity of sonicated P.multocida and formalized in rabbits. // Pakistan Vet .J. 1991 v. 11 №3 p. 120- 122.

107. Baba T. Immunogenic Activity of Ribosomal Fraction Obtained from Pasteurella multocida. // Infekt. Immun. 1977 v. 15 № 1 p. 1 6.

108. Bain R. V. S. Studies on hemorrhagie septicemia of cat IV. A preliminary examination of antigens of P.multocida type I. // Brit. Vet. J. 1955. Ill, p. 492 -498.

109. Bakulina L. I. Isolation of the agent of hemorrhagic septicemia from sick gerbils. J. Microbiol. Epidemiol, and Immunol. 1961 № 5 p. 112 123.

110. Barnum D. A. Socioeconomic Significance of the HAP Group. // Can. J. Vet. Res. 1990v. 54 p. 1-5.

111. Batty M. A. Bullet. //Epizootic of Africa, 1973, 21, 2,p. 171 174.

112. Biberstein E. L. Our understanding of the Pasteurellaceae. // Can. J. Vet. Res. 1990 v 54 p. 78-82.

113. Bjorge R., Bolinbroke D. Fowl cholera in overwinterized mallard ducks. // Can. Vet. J. 1988 v. 29 № 5 p. 666 667.

114. Brito J. B., Piffer I. A., Wentz I., Brito M. A. Capsular types and toxin producing by strain of P.multocida isolated from pigs in Southern Brazil. // Rev. microbiol., 1993 v. 24 № 2 p. 94 97.

115. Cameron C. M., Bester F. J. Formulation on effective P.multocida vaccine for sheep. // J. Vet.Res. 1984 v. 54№ 3 p. 189-191.

116. Carter G. R. A bacterin for prevention of shipping fever in Canada. // Vet. Med. 1957 v. 32 № 5 p. 254 255.

117. Carter G. R. A new serological type of P.multocida from Central Africa. //t

118. Vet. Rec. 1961 v. 73 № 9 p. 1052.

119. Carter G. R. Further observation typing P.multocida by the indirect hemagglutination test. // Can. J. Med. 1962 v. 26 № 2 p. 238 240.

120. Carter G. R. Hyaluronidase production by B P.multocida from cases of hemorrhagic septicemia. // J. Clin. Microb. 1980 v. 11 № 1 p. 94 96.

121. Carter G. R. Observation on the pathology and bacteriology of shipping fever in Canada. // Can. J. Comp. Med. Vet. Sc. 1954 v. 18 № 10 p. 359 364.

122. Carter G. R. Pasteurella. Hadbuch der bacteriallen infektionen bei Tieren. 1981, p. 557-593.

123. Carter G. R. Pasteurello'sis : P.multocida and P.haemolytica . // In "Advances in veterinary science" VII New York - London, 1967 p. 321 - 379. •

124. Carter G. R. Some characteristic of type A strains of P.multocida . // Brit. Vet, J. 1958 v. 114 № 9 p. 356-357.

125. Carter G. R. Studies on P.multocida. I. A hemagglutination test for the identification of serological types. // Amer. J. Vet. Res. 1955 v. 16 № 3 p. 481 -484.

126. Carter G. R. Studies on P.multocida. II. Identification of antigenic characteristics and colonial variants. // Am. J. Vet. Res. 1957 v. 18 № 66 p. 210 -213.

127. Carter G. R. Studies on P.multocida. IV. Serological types from species other than cattle and swine. // Am. J. Vet. Res. 1959 v. 20 № 2 p. 173 175.

128. Carter G. R. The type specific capsular antigen of P.multocida. // Can. J. Med. Sc. 1952v. 30 № 1 p. 48-53.

129. Carter G. R., Bain R. V. S. Pasteurellosis (P.multocida ) a review stressing recent developments. // Vet. Rev. An. 1960 v. 6 № 2 p. 105 128.

130. Carter G. R., Byrne J. H. A serological study of hemorrhagic septicemia. // Cornell. Vet. 1953 XLIII № 1 p. 223 230.

131. Chengappa M. M. , Carter G. R., Chang T. S. A streptomycin dependent live Pasteurella multocida type 3 vaccine for the prevention of fowl cholera in turkey. // Avian Dis. 1979.

132. Confer A. W., Panciera R. J., Fulton R. W., Gentry M. J., Rummage J. A. Effect of vaccination with live or killed Pasteurella haemolytica on resistance to experimental bovine pneumonic pasteurellosis. // Am. J. Vet. Res. 1985 v. 46 № 2 p. 342 347.

133. Dhanda M. R., Das M. S., Lall J. M. , Seth R. N. Immunological studies on Pasteurella septica. I. Trials on adjuvant vaccine. Ind. J. Vet. Sci. Anim. Husb., 1956,28, p. 273-284.

134. Dubrenil J. D., Gilbert L., Jacques M. Cell surface characteristics and virulence in mice of P.multocida . // Zentralblatt fur Bakteriologie. 1992 v. 276 № 3 p. 366-373.

135. Fengsheng L., Jonglin W. A study on isolation and identification of pathogen of pasteurellosis and capsular antigen type. // J. North East Forest. Univ. 1993 v. 21 № 1 p. 49-53.

136. Fodor L., Donachie W. ELISA for the measurement of sheep antibodies to the capsular antigens of Pasteurella haemolytica serotypes. // Res. Vet. Science. 1985 № 45 p. 414-415.

137. Friedlander R. C., Olson L. D. Comparison of live avirulent M 9, Minnesota and CU fowl cholera vaccines. // Avian. Dis. 1991 v. 35 № 2 p. 251 - 256.

138. Ganiere J. P., Francoise E. Characterization of P.multocida from gingival scraping of dogs and cats. // Comp. Imm. Micr. and Inf. Dis. 1992 v. 16 № 1 p. 77-85.

139. Gaunt G., Moffat R. And Mukkur T. K. S. Fowl cholera: Immunization of chicken with potassium thiocynate (KSCN) extract of Pasteurella multocida serotype 3. // Avian Diseases. 1978, 21 (4), p. 543 548.

140. Gilmour N. J. et al. Pasteurellosis Vaccines. // Patent of G. R. № 0209219, date 19.03. 1980.

141. Gilmour N. J. The role pasteurellae in respiratory diseases of cattle. In Respiratory Diseases in cattle. // Ed. by W. B. Martin. Boston 1978 v. 3 p. 356 -362.

142. Heddleston K. L., Reisinger R. C. Studies on pasteurellosis. Ill Control of experimental fowl cholera in chickens and turkey with an emulsified killed vaccine. // Avian Dis. 1959 v. 3 p. 387 404.

143. Heddleston K. L., Walkol P., Rebers P.A. Dissociation of fowl cholera strain of P.multocida. // Avian Dis. 1964 v. 8 № • 7 p. 649 657.

144. Hetzman T., Michael A., Markenson T. Fowl cholera Vaccine. I I USA, Patent № 2003029, date 23.08.78.

145. Iwamtsu S., Sawada T. Relationship between serotypes dermonecrotic toxin production of P.multocida isolation and pneumonic lesion of porcine lung. // Jap. J. Vet. Sci. 1988 v. 50 p. 1200 1206.

146. Jacques M., Foiry B. Electron Microscopy Visualization of Capsular Material of P.multocida Types A and D labeled with Polycationic Ferritin. // J. Bacteriol. 1987 v. 1169 № 8 p. 3470 3472.

147. Jericho K. W. F., Cho H. Y., Kozub G. C. Protective effect of inactivated Pasteurella haemolytica bacterin challenged in bovine herpesvirus 1 experimentally infected calves. // Vaccine, 1990,v. 8 p. 315 - 320.

148. Kajikowa O., Matsumoto M. A protective antigen for turkey purified from a type I strain of P.multocida. // Vet. Micr. 1984 v. 10 № 1 p. 43 55.

149. Kim J. Y., Park J. M. and Kin D. N. Studies on the immunogenicity of Pasteurella multocida isolated from swine in Korea. // Res. Rep. of the Rural Development Adm. (Live stock and Veterinary) 1986, 28 (1), p. 77-93.

150. Knox K. W., Bain R. V. S. The antigens of P.multocida type 1.1. Capsular lipopolisaccharides. // Immun. 1960 v. 3 № 5 p. 352 362.

151. Kucera C. T., Wong T. C., Eis R. L. Development of chemically altered P.multocida vaccinal strain. // Am. J. Vet. Rec. 1981 v. 42 № 8 p. 1386 1394.

152. Larriviere S., Lebbanc L., Mittal K. R., Martinean G. R. Characterization of P.multocida from nasal cavities of piglets from farms with or without atrophic rhinitis. //J. Clinic. Med. 1992 v. 30 № 6 p. 2398 1401.

153. Lin S. T., Chen Y. Y., Yang S. Studies on a capsular subunit vaccine against fowl cholera IV. Some of the physical and chemical properties of the capsular antigen of the P.multocida. // Acta Vet. et Zootech. Sinica. 1988 v. 19 № 3 p. 195-200.

154. Little P. A., Lyon B. M. Demonstration of serological types within the nonhemolytic Pasteurellae. // Am. J. Vet. Res. ,1943,4, p. 110-112.

155. London S. A., You K. Antigenic analysis of dissociation and serological types of P.multocida. // Can. J. of Med. 1957 v. 3 № 7 p. 1021 1024.

156. Lu O., Rhoades K. R., Rimler R. B. A virulent of capsular strains of P.multocida for turkey.//Av. Diseases. 1988 v. 32 № 1 p. 121 125.

157. Maheswaran S. K., Thies E. S. Influence of encapsulation on phagocytosis of Pasteurella multocida by bovine neutrophils. // Infect. Immun. 1979 № 26 p. 76 -81.

158. Mashiro N., Motoru O., Yuichi A., Kiken O., Tomoatsu K. The first Outbreak of fowl cholera an Muslovy Ducks in Japan. // J. Vet. Med. Sci. 1992 v. 54 № 6 p. 1215-1217.

159. Maskell D. F., Donan Y. Strategies in bacterial vaccine development. // Immunochem. And Mol. Genet. Anal. Bact. Patogens.: Proc. Hab. Workshop, Amsterdam, 1988,p. 147- 157.

160. McKinney K. L., Rebers P. A. Purification of P.multocida antigens by ultracentrifugation and isoelectrofocusing. // Can. J. Microbiol. 1982 v. 28 № 3 p. 511-523.

161. Moller O. A new method for straining bacteria capsules. // Acta Pathol. Micr. Scad. 1951 v. 28 p. 127-131.

162. Mosier D. A., Confer A. W. The evaluation of vaccines for bovine pneumonic pasteurellosis. //Res. Vet. Sci. 1989 v. 47 № 1 p. 1 10.

163. Mukkur T. K. S. Immunogic and physiologic responses of calves inoculated with potassium thiocynate extract of P.multocida type A. // Am. J. Vet. Res. 1978 v. 39 № 8 p. 1263- 1273.

164. Mukkur T. K. S., Poliotis N. Possible immunological synergism among the protective antigens of P.multocida, type A. // J. Comp. Path. 1982 v. 92 № 2 p. 249-260.

165. Myint A. A live vaccine against hemorrhage septicemia. // Asian Live Stock. 1992v. 17 № 1 p. 1-4.

166. Myint A., Carter G. R. Prevention of haemorrhagic septicemia in buffaloes and cattle with a live vaccine. // Vet. Rec. 1989 v. 124 № 19 p. 508-509.

167. Nakai T., Kume K., Joslukawa H., Oyamada T. Et. Al. Changes in the nasal mucosa of specific pathogen fur neonatal pigs infected with P.multocida or B. bronchiseptica. // Jap. J. Vet. Sci. 1986 v. 48 № 2 p. 693-701.

168. Namioka S., Murata M. Serological studies of Pasteurella multocida. II. Characteristics of somatic (O) antigen of the organism. // Cornell Vet. 1961, 51 p. 507-521.

169. Namioka S., Murata M. Serological studies of Pasteurella multocida. III. O antigenic analysis of cultures isolated from various animals. // Cornell Vet. 1961, 51 p. 522-528.

170. Nocmier G., Rinel A. M., d'Hinterlond L. D., Wigzell A. Ribosomes as carriers for antigenic determinant of the surface of microorganisms. // Stand. Immunopharm. Natur. Und Synth. Immynomodul: Proe. Symp. 1992 p. 79-85.

171. Olson R. D., Schlink G. T. On stand duration of immunity and minimum dosage with CU cholera vaccine in turkeys via drinking water. // Avian. Dis. 1986 v. 30 №2 p. 87-92.

172. Ose E. E., M. S., and O. A Muenster, B. S. A method for evaluation of vaccines containing Pasteurella multocida. // Am. J. Vet. Res., 1968, vol. 29 N 9, p. 1863 1866.

173. Panciera R. J. Cortvet R. Et. Al. Bovine pneumotic pasteurellosis: Effect of vaccination with live P. species. // Am. J. Vet. Rec. 1984 v. 45 № 12 p. 25382542.

174. Paster L. Sur les maladies virulentes et en particulier sur la maladie appelée vulgarirement choiera des poules. // Acad. Sci., 1880, 90, 239, 952, 1030.

175. Phillips M., Rimler R. B. Protection of chickens by ribosomal vaccines from P.multocida: Dependence on homologies lipopolysaccharide. // Am. J. Vet. Rec. 1984 v. 45 №9 p. 1785-1789.

176. Pijoan C. Diseases of swine Pneumonic Pasteurellosis. 1992 p. 552-559.

177. Pijoan C., Trigo F. Bacterial adhesion of mucosal surfaces with special reference to P.multocida isolated from atrophic rhinitis. // Can. J. Vet. Rec. 1990 v. 54 p. 16-21.

178. Prince G. H. Antigenic studies on P.multocida using immunodiffusion techniques. III. Relationships between strains of P.multocida. // J. Comp. Path. 1966 v. 76 № 2 p.321-332.

179. Prince G. H., Smith J. E. Antigenic studies on P.multocida. I. Identification and nomenclature of the soluble antigens of a bovine haemorrhagic septicemia strains. // S. Comp. Path. 1966 v. 76 № 2 p. 303-314.

180. Pyliotis N. A., Mukkur T. K. S. Ultrastructural observation on P.multocida type A(bovine origin). // Res. Vet. Sci. 1981 v. 31 № 1 p. 87-89.

181. Rangel M. F., Aguadi C. P. P.multocida como agente desensade wante de pleuritis y pneumonia fibrinosa en cerdos. // Vet. Mex. 1992 v. 23 № 3 p. 231 -232.

182. Ramon G.C.//R. Acad. Sci, 1923, 177, 1338.

183. Rebers P. A., Heddleston K. L., Rhoades K. R. Isolation from P.multocida a LPS antigen with immunity and toxic properties. // J. Bacter. 1967 v. 93 № 1 p. 7-14.

184. Reilly L. L. Atrophic rhinitis in swine. Swine pasteurellosis. // Con. Anim. Health. 1981 p. 16

185. Rhoades K. R., Rimler R. B. Serological characterization of P.multocida strain isolate from wild ruminants as capsular serogroup B. // Vet. Rec. 1992 v. 130 №5 p. 331-332.

186. Rimler R. B., Angus R. D. et al. Evaluation of the specificity of P.multocida somatic antigen-typing antisera prepared in chickens, using ribosomelipopolisaccharide complexes as unocula. // Am. J. Vet. Rec. 1989 v. 50 №l p. 29-31.

187. Ringler D. H., Peter G. K., Chisp C. E., Keren D. F. Protection of rabbits against experimental pasteurellosis by vaccination with potassium thiocynate extract of P.multocida. // Inf. and Immun. 1985 v. 49 № 3 p. 498 504.

188. Roberts R. S. An immunological study of Pasteurella septica. // J. Comp. Patroll., 1947, 57 p. 261 -278.

189. Rosenbusch C. T., Merchant I. A. A study of the hemorragic septicemia Pasteurellae. J Bacteriol., 1939, 37 p. 69 -89.

190. Rutter J. M. Atrophic rhinitis in swine. // Ads. Vet. Sci. 1985 v.29 p. 239-279

191. Saif Edin M. Immunization of duck against P.multocida infection by avirulent CU strain. // Ass. Vet. Med. 1992 v. 27 № 53 p. 289-294.

192. Shewen P. E., Wilkie B. N. Antibody Titers to P.haemolytica A I in Ontario Beef Cattle. // Can. J. Comp. Med. 1982 v. 46 p. 354-356.

193. Shewen P. E., Wilkie B. N. Prevention of bovine pneumonia pasteurellosis. //

194. Highlights. 1985 v. 8 № 3 p.4-6.

195. Singh N., D. S. Sambyal, G. L. Soni and S. S. Sodni. Immunogenicity trial of Pasteurella multocida. // Indian J. of Animal Sciences, 1990, 60 (9), p. 1067 -1068.

196. Smith J. E. Studies on P. septica II. Some cultural and biochemical properties of strains from different host species. // J. Comp. Path. 1958 v. 68 p.315-323.

197. Smith R. H. Solid enzyme immunoassay of bovine antibody responses following immunization against natural infected with P.haemolytica . // Vet. Immun. Immunoplat. 1983 v. 5 № 1 p. 33-45.

198. Sriveslava K. K., Foster J. W. Characterization of an immunogenic fraction of P.multocida culture. // Can. J. Microb. 1977 v. 23 p. 197-201.

199. Stepheus I. R. Positive and Negative Aspects of Host Immune Response to Haemophilus, Actinobacillus and Pasteurella. // Can. J. Vet. Rec. 1990 v. 54 p. 41-44.

200. Syuto B., Matsumoto M. Purification of a protective antigen from a saline extract of P.multocida. // Inf. And Immun. 1982 v. 37 №3 p.1218-1226.

201. Trevisan V. Sul micrococco della rabia e sulla possibility di riconoscere durante il periodo d'meubazione, dall'esame del sangue della persona morsicata, si ha contratta l'infezione rabbica. Rend 1st Lombardo Ser. II, 1887, 20 p. 88 -105.

202. Trola V. L., Kazadzhov J. Neuraminidase activity of P.multocida. // Docl. Bolg. Med. Akad. Nank. 1969 v. 22 №5 p.517.

203. Tsuji M., Matsumoto M. Immunochemical relationship of the antigens purified from P.multocida strain 1059. // Am. J. Vet. Rec. 1988 v. 49 № 9 p.1510 — 1515.

204. Wei B. D., Carter G. R. Live streptomycindependent P.multocida vaccine for prevention of hemorragic septicemia. // Am. J. Vet. Rec. 1978 v. 39 p. 1534-1537.

205. Мы, нижеподписавшиеся, директор ФГУП «Щелковский биокомбинат» Скичко Н. Д., заместитель директора по производству Зснов I I. И., начальникi

206. ОБК Ольхов В. В., начальник цеха*№ 10 Ерохип В. И., старший микробиолог *

207. Заражение проводили подкожно по 0,5 мл одновременно стаким же количеством аналогичных по весу контрольных мышей. Наблюдение за животными 10 дней, смерть регистрировали. Результаты опыта учтены комиссионно и приведены в таблице № 1.

208. Далее полученная сыворотка крови вакцинированных и контрольного поросят тестировалась в РИГА с разработанными лабораторией бактериологии ВИЭВ эритроцитарными диагностикумами для определения титров антител к капсульным антигенам пастерелл.

209. О чем и составлен настоящий акт.1. 02.2002 г.1. Зенов Н. И.1. Начальник ОБК1. Ольхов В. В.1. Начальник цеха № 101. Ерохин В. И.1. Старший микроб*