Изучение экспрессии микроРНК, модулирующих функциональную активность Р53-зависимой системы защиты генома, при формировании отдаленных последствий радиационного воздействия у экспериментальных животных и человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.01, кандидат наук Шуленина Лилия Викторовна

• Шуленина Лилия Викторовна
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Шуленина Лилия Викторовна

СПИСОК ТЕРМИНОВ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. р53-зависимая системазащиты генома и ее нарушение при развитии отдаленных последствий действия радиации

1.1.1. Контроль функциональной активности белка р53 на различных уровнях

1.1.2. Механизмы снижения эффективности функционирования белка р53

1.1.3. Функциональная активность системы Р53-МВМ2-МВМ4 после облучения

1.2. Роль микроРНК в функционировании р53-системы защиты генома в отдаленный период после облучения

1.2.1. МикроРНК, их биогенез и функции, а также причины нарушения экспрессии микроРНК, значение в диагностике и терапии заболеваний

1.2.2. МикроРНК и р53

1.2.3.МикроРНК, модулирующие активнсть р53 после воздействия ионизирующей радиации

1.3. Эксперименты по изучению экспрессии микроРНК, модулирующих активность р53-системы защиты генома, в отдаленные сроки после

облучения

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объект исследования

2.1.1. Животные

2.1.2. Пациенты, пренесшие ОЛБ, ОЛБ+МЛП и МЛП

2.1.3. Онкологические больные, перенесшие курс ЛТ

2.2. Методы исследования

2.2.1. Получение гомогената клеток костного мозга крыс

2.2.2. Получение гомогената ткани молочной железы крыс

2.2.3. Выделение общей РНК, содержащей фракцию зрелых микроРНК из гомогената костного мозга и молочной железы, а также цельной крови

2.2.4. Определение концентрации РНК

2.2.5. Обратная транскрипция для мРНК генов Р53, MDM2, MDM4 крыс и человека

2.2.6. Обратная транскрипция для зрелых miR-21, miR-34, miR-125b, miR-145, miR-16, let-7 крыс и человека со шпилькообразными праймерами «stem-loop»

2.2.7. Основные этапы подбора праймеров для целевых генов Р53, MDM2, MDM4, mir-34, mir-125b, mir-145, mir-16, mir-21, let-7 и конститутивного генов GAPDH, P-actin крыс и человека для постановки ПЦР в реальном времени

2.2.8. ПЦР в реальном времени

2.2.9. Анализ данных, полученных с помощью ПЦР в реальном времени

2.2.10. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Исследование экспрессии микроРНК, регулирующих р53- зависимую систему защиты генома, в опухолях молочных желез и костном мозге аутбредных крыс-самок после однократного у-облучения в дозе 2,5 Гр

3.1.1. Динамика возникновения опухолей молочной железы у аутбредных крыс-самок в условиях проведенного эксперимента

3.1.2. Экспрессия генов Р53, MDM2, MDM4 и зрелых miR-21, miR-34c, miR-125b, miR-145, miR-16-2, let-7i в гомогенате опухолей молочных желез аутбредных крыс-самок на 315 и 550 сутки после у-облучения в дозе 2,5 Гр

3.1.3. Экспрессия генов Р53, MDM2, MDM4 и экспрессия зрелых miR-21, miR-34c, miR-125b, miR-145, miR-16-2, let-7i в гомогенате костного мозга аутбредных крыс-самок на 75, 315 и 550 сутки после однократного у-облучения в дозе 2,5 Гр

3.1.4. Анализ соотношениия содержания мРНК гена Р53 и мРНК геновMDM2, MDM4, miR-34^ miR-145, miR-16-2, miR-125b, let-7a, miR-21 в гомогенате опухолей молочных желез и костного мозга аутбредных крыс-самок на 75, 315 и 550 сутки после однократного у-облучения в дозе 2,5 Гр

3.2. Исследование экспрессии микроРНК, регулирующих р53-зависимую системузащиты генома, в отдаленный период у лиц, перенесших ОЛБ, ОЛБ+МЛП и

МЛП

3.2.1. Анализ содержания мРНК генов Р53, MDM2, MDM4 и зрелых miR-21, miR-34c, miR-125b, miR-145, miR-16, let-7i в периферической крови лиц в отдаленный период после перенесения ОЛБ, ОЛБ+МЛП, МЛП с помощью метода ПЦР в реальном

времени со специально подобранными праймерами и условиями амплификации

3.2.2. Анализ соотношениия содержания мРНК гена Р53 и мРНК геновМБМ2, МБМ4, miR-34с, miR-145, miR-16, miR-125b, let-7a, miR-21 в периферической крови пациентов

в отдаленные сроки после перенесения ОЛБ, ОЛБ+МЛП, МЛП

3.3. Исследование экспрессии микроРНК, регулирующих р53- зависимую системусохранения стабильности генома, в крови онкологических больных до и после курса дистанционной у-терапии

3.3.1. Анализ содержания мРНК генов Р53, MDM2, MDM4 и зрелых miR-21, miR-34c, miR-125b, miR-145, miR-16, let-7i в периферической крови онкобольных с диагнозом РПЖ, РМЖ, РГШ до и после полного курса ЛТ с помощью метода ПЦР в реальном времени с теми же праймерами и условиями амплификации, которые были экспериментально подобраны при исследовании крови пациентов с диагнозом ОЛБ,

ОЛБ+МЛП и МЛП

3.3.2. Анализ соотношениия содержания мРНК гена Р53 и мРНК геновМБМ2, МБМ4, miR-34с, miR-145, miR-16, miR-125b, let-7a, miR-21 в периферической крови онкобольных с диагнозом РПЖ, РМЖ и РГШ до и после полного курса дистанционной

у-терапии

ГЛАВА 4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

БЛАГОДАРНОСТИ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ

ЛТ Лучевая терапия

МЛП Местные лучевые поражения

MDM2 (Murine double Ген, кодирующий белок, который обладает Е3-

лигазной активностью и ингибирует опухолевой супрессор р53.

minute 2)

MDM4 (MDMX)

МикроРНК (miR, mir)

МЖ

Ген, кодирующий белок на 90% гомологичный белку mdm2, который вносит свой вклад в общее ингибирование активности р53.

Класс малых некодирующих РНК, содержащих в зрелом состоянии около 22 нуклеотидов и специфично регулирующих активность, по крайней мере, около 35% генов.

Молочная железа

ОЛБ

Острая лучевая белезнь

п.н.

ПЦР

P53

РГШ РМЖ

Пара нуклеотидов Полимеразная цепная реакция

Ген, кодирующий белок р53 с молекулярной массой 53 кДа, опухолевой супрессор, который является транскрипционным фактором, регулирует клеточный цикл и апоптоз, контролирует целостность генома.

Рак головы и шеи Рак молочной железы

РПЖ

Рак предстательной железы

СПИСОК ТЕРМИНОВ

апрегуляция: Увеличение

биогенез микроРНК: Процесс образования микроРНК

ген Р53 «дикого типа»: Нуклеотидная последовательнось гена Р53, обеспечивающая его нормальную работу

гомогенат: Однородная масса из измельченных тканей животных и человека, используемая для медико-биологических задач даунрегуляция: Уменьшение

микроРНК-миметики: Вещества, похожие на естественно синтезированные в организме микроРНК и имитирующие их действие

нокаут гена: Метод молекулярной генетики, при котором из организма удаляют или делают неработоспособными определенные гены

нокдаун гена: Методика, позволяющая снизить экспрессию одного или нескольких генов при помощи изменения соответствующей последовательности нуклеотидов, либо при помощи короткого олигонуклеотида, комплементарного соответствующей молекуле мРНК

праймер: Олигонуклеотид, комплементарный участку ДНК- или РНК-мишени, служит затравкой для синтеза комплементарной цепи с помощью ДНК-полимеразы

промотер: Участок молекулы ДНК, к которому присоединяются молекулы РНК-полимеразы, что сопровождается инициацией транскрипции соответствующих генов

р53-респонсивные элементы: Определенные последовательности ДНК палиндромной структуры, с которыми связывается р53 и, как правило, активирует промотеры, содержащие эти элементы

сайленсинг: Процесс подавления экспрессии генов «ломкие сайты» ДНК: Участки ДНК, склонные к разрывам

экспрессия генов: Процесс, в ходе которого наследственная информация от гена преобразуется в функциональный продукт — РНК или белок

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В настоящее время научно-технический прогресс непосредственно связан с увеличением применения источников излучения, используемых в разных сферах деятельности человека. Однако техногенные катастрофы показали реальность развития тяжелых отдаленных последствий радиационных поражений. Пожизненное исследование когорты лиц, переживших атомную бомбардировку в Хиросиме и Нагасаки, является первым источником информации для оценки рисков формирования патологии от воздействия ионизирующего излучения [Folley J.H. et al. 1952, Preston D.L. et al. 1994]. Возможность возникновения техногенных катастроф на сегодняшний день подтверждается аварией на Фукусиме.

Известно, что использование медицинского облучения для лечения онкологических заболеваний осуществляется органо-специфическими дозами, достигающими 40 Гр и более. Связь лейкемии с терапевтическим облучением была впервые выявлена во время исследования пациентов, больных анкилозирующим спондилитом более 50 лет назад [Court-Brown W.M., Doll R. 1957]. Различные примеры применения радиации в медицине включают в себя маммографию, рентген, компьютерную томографию (КТ), сканирующую позитронно-эмиссионную томографию (ПЭТ), радионуклидные исследования щитовидной железы, костей, печени, селезенки. Технологии, использующие ионизирующие излучения, спасают тысячи жизней ежедневно. В 2012 г около половины среднегодового воздействия ионизирующего излучения на население США (около 6,2 мЗв) пришлось на радиологические диагностические процедуры. Компьютерная томография (КТ) является основным виновником увеличения численности облученного населения. В нашей стране также стремительно возрастает внедрение КТ в практику здравоохранения.

Для усиления эффективности лучевой терапии и снижения риска развития отдаленных последствий действия радиации у лиц, пострадавших от радиационных аварий, интенсивно проводятся исследования механизмов онкотрансформации, включая радиационный канцерогенез. Расшифровка молекулярно-генетических основ развития отдаленных эффектов облучения является причиной поиска средств, препятствующих формированию опасных для здоровья радиационных поражений, в первую очередь, злокачественных новообразований.

Эффективное функционирование клеток в организме осуществляется при помощи внутриклеточных сигнальных путей, управляющих основными процессами. Конечным звеном сигнального каскада часто оказываются транскрипционные факторы, вызывающие изменения профиля экспрессии генома. Установлено, что микроРНК модулируют активность генов на посттранскрипционном уровне, корректируя внутриклеточные программы. При

одинаковом генотипе профиль экспрессии генов в клетках различных тканей организма, так же, как и ответ этих клеток на экстремальные воздействия, существенно различаются. Глобально анализируются генетические и эпигенетические нарушения функционирования генов при канцерогенезе. При ряде онкологических заболеваний такие исследования позволяют осуществить направленные воздействия на экспрессию генов, приводящие к замедлению клеточного роста, снижению резистентности опухолевых клеток к лучевой и химиотерапии.

В последние годы интенсивно изучается активность генов после облучения. Установлено, что в первые сутки после радиационного воздействия наблюдаются значительные изменения профиля экспрессии сотен генов, вовлеченных в работу важнейших внутриклеточных регуляторных путей. Временная динамика пострадиационного изменения экспрессии генов, захватывающая отдаленные сроки после лучевого воздействия, на млекопитающих мало изучена. При всем разнообразии нарушений экспрессии генов, наблюдаемых при различных формах злокачественных новообразований, общим для них является изменение функционирования р53- зависимой системы защиты генома. Поэтому для оценки риска развития отдаленных последствий лучевого воздействия важным является длительное изучение динамики пострадиационных изменений состояния этой системы. Эффективность работы системы защиты генома определяется активностью онкосупрессора -белка р53, воздействующего на гены- мишени. Усиление активности белка р53, вызванное стресс-воздействием, является кратковременным. Содержание самого белка в клетке зависит от времени жизни его молекулы, скорости транскрипции, трансляции и деградации мРНК, а активность - от белок-белковых взаимодействий. Основными белковым регуляторами содержания р53 в клетке является Е3 лигаза mdm2 и ее структурный гомолог mdm4. mdm2 убиквинтилирует р53 и способствует его быстрой протеосомной деградации. mdm4 блокирует взаимодействие р53 с генами-мишенями и увеличивает время жизни белков mdm2 и р53. Время жизни белков и мРНК Р53, МОМ2, МВМ4 мало и составляет десятки минут, причем р53 является транскрипционным фактором для гена М0М2. Быстрая деградация белков и мРНК указанных генов увеличивает значимость определения содержания мРНК в клетках после облучения. На сегодняшний день активно исследуются микроРНК, которые связываются с мРНК генов-мишеней и останавливают трансляцию. Поэтому экспрессия мРНК не дает полной информации, так как при её высоком уровне синтез продукта может быть снижен при вмешательстве специфических для данного гена микроРНК. С другой стороны, сами микроРНК могут быть мишенями транскрипционных факторов [Chaudry M., Omaruddin R. 2012, Erson-Bensan A. 2014]. Эффективность функционирования p53-системы защиты генома после стресс-воздействий в клетке определяется балансом активации

транскрипционного фактора р53, а также экспрессией специфических микроРНК, модулирующих трансляцию мРНК генов этой системы. Изменение этого баланса в отдаленные сроки после лучевого поражения может повысить опасность развития канцерогенеза.

Цель и задачи исследования

Изучение экспрессии микроРНК, модулирующих функциональную активность р53-зависимой системы защиты генома, при формировании отдаленных последствий радиационного воздействия у экспериментальных животных и человека.

Для достижения сформулированной цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать содержание мРНК генов Р53, МБМ2, МБМ4 и экспрессию зрелых микроРНК miR-34c, miR-16-2, miR-125b, miR-145, miR-21, ^-7^ влияющих на функциональную активность р53, в клетках костного мозга аутбредных крыс-самок в отдаленные сроки (75, 315 и 550 сутки) после однократного кратковременного тотального у-облучения в дозе 2,5 Гр.

2. Оценить содержание мРНК генов Р53, МБМ2, МБМ4 и экспрессию зрелых микроРНК miR-34c, miR-16-2, miR-125b, miR-145, miR-21, ^-7^ влияющих на функциональную активность р53, в образовавшихся опухолях молочной железы у интактных и облученных в дозе 2,5 Гр аутбредных крыс-самок.

3. Выявить уровень содержания мРНК генов Р53, МБМ2, МБМ4 и экспрессии зрелых микроРНК miR-34a, miR-16, miR-125b, miR-145, miR-21, let-7a в крови у пациентов в отдаленные сроки (2-51 год) после перенесения острой лучевой болезни (ОЛБ) и местных лучевых поражений (МЛП).

4. Изучить уровень мРНК генов Р53, МБМ2, МБМ4, а также содержание зрелых микроРНК miR-34a, miR-16, miR-125b, miR-145, miR-21, ^^ в периферической крови онкологических больных с диагнозом рак предстательной железы (РПЖ), рак молочной железы (РМЖ) и рак головы и шеи (РГШ) до и после курса дистанционной у-терапии.

Положения, выносимые на защиту

1) В отдаленные сроки после радиационного воздействия в костном мозге и молочных железах экспериментальных животных и в периферической крови человека происходят изменения содержания зрелых микроРНК, модулирующих функциональную активность р53-зависимой системы защиты генома.

2) Изменения экспрессии зрелых микроРНК, модулирующих активность р53, оказывают влияние на патофизиологическое состояние организма в отдаленный период после облучения.

Научная новизна

Впервые изучены закономерности временной динамики изменения транскрипционной активности генов Р53, MDM2, MDM4, а также содержания зрелых miR-21, miR-34c, miR-125b, miR-145, miR-16-2, let-7i в костном мозге аутбредных крыс-самок в длительный период (550 суток), сопоставимый со временем их жизни, после острого у - облучения в дозе 2,5 Гр.

Впервые обнаружено изменение функционирования Р53- зависимой системызащиты генома в отдаленные сроки после облучения в период, предшествующий возникновению опухолей.

Впервые показаны изменения транскрипционной активности генов Р53, MDM2, MDM4, а также содержания зрелых miR-21, miR-34c, miR-125b, miR-145, miR-16-2, let-7i в периферической крови пациентов в отдаленные сроки после перенесения ОЛБ, ОЛБ+МЛП и МЛП.

Впервые исследована корреляция между содержанием зрелых miR-21, miR-34, miR-125b, miR-145, miR-16, let-7 и мРНК гена Р53 в костном мозге и молочных железах крыс-самок, а также в периферической крови человека в отдаленные сроки последействия радиации.

Практическая значимость результатов

Изучение изменений содержания микроРНК и мРНК генов р53- зависимой системы защиты генома в клетках крови после радиационного воздействия может представлять практический интерес для формирования групп риска развития отдаленных лучевых эффектов у лиц после профессионального облучения, вследствие катастроф и аварий. Экспрессия зрелых микроРНК имеет прогностическую значимость для индивидуальной оценки эффективности лечения опухолей и может быть полезна при отборе средств, способных снижать острые или поздние радиационныеэффекты.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение экспрессии микроРНК, модулирующих функциональную активность Р53-зависимой системы защиты генома, при формировании отдаленных последствий радиационного воздействия у экспериментальных животных и человека»

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены на VI ^езде по радиационным исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность) (Москва, 2010 г), научной конференции «Актуальные проблемы онкогенетики» (Москва, 2011 г.), Международной конференции «Медико-биологические проблемы действия радиации» (Москва, 2012), V Международной школе молодых ученых по молекулярной генетике «Непостоянство генома» (Звенигород, 2012 г), Международной конференции «Genome Instability, Evolution and Human Diseases» (Санкт-Петербург, 2013 г.), Международной научной конференции «Радиобиологические основы лучевой терапии опухолей» (Москва,

2013 г.), VII Съезде по радиационном исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность) (Москва, 2014 г.)

Диссертация апробирована на заседании секции №1 Ученого совета ФГБУ ГНЦ «ФМБЦ им А.И.Бурназяна» (протокол №3 от.29.05.2014 г).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 7 статей в российских изданиях, рекомендованных ВАК, а также 10 тезисов докладов в материалах отечественных и международных конференций.

Структура диссертации

Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования, их обсуждения, заключения и выводов, а также списка литературы. Работа содержит 17 таблиц, 17 рисунков. Список литературы включает 251 источников, из них 16 отечественных и 235 зарубежных.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. р53-зависимая система защиты генома и ее нарушение при развитии отдаленных последствий действия радиации

Белок р53 участвует в процессах нормального развития и роста, сохранении клеточного гомеостаза, а также в канцерогенезе [Kenzelmann B.D., Attardi L.D. 2010]. Он является центральным элементом сети, обрабатывающей входящие сигналы от различных путей, при воздействии генотоксического и цитотоксического стресса, блокирует распространение поврежденных клеток и индуцирует их апоптоз. Соответственно, p53 вызывает экспрессию генов-ингибиторов клеточного цикла и проапоптотических генов. Мутации и/или потери гена P53 индуцируют геномную нестабильность и способствуют неоплазии.

1.1.1. Контроль функциональной активности белка р53 на различных уровнях

Ген Р53 расположен в коротком плече человеческой хромосомы 17 в регионе 17p 13.1, который склонен к делециям в опухолевых клетках, и состоит из 11 экзонов, охватывающих 16-20 kb ДНК. Белковый продукт гена Р53 состоит из 392 аминокислотных остатков. Он образует тетрамерный комплекс, способный узнавать специфическую последовательность ДНК и регулировать транскрипцию ряда генов, имеющих в своём промоторе р53-респонсивный элемент [Чумаков П.М. 2007]. Молекулы белка р53 могут находиться в различных конформационных состояниях, в которых они проявляют разные биохимические активности. Кроме способности индуцировать экспрессию генов-мишеней, р53 обладает 3'-5' экзонуклеазной активностью и непосредственно участвует в узнавании поврежденных участков ДНК. Молекула белка р53 состоит из нескольких доменов. Транскрипционная активность р53 приходится на его N-терминальный домен - трансактивационный домен (TAD). Транскрипционные коактиваторы и корепрессоры воздействуют на транскрипционные свойства р53 путем влияния на связывание р53 с промоторами его генов-мишеней или благодаря активации или блокировки сложной ассамблеи транскрипционной машины. Транскрипционные коактиваторы и корепрессоры также содействуют регуляции р53- зависимого транскрипционного ответа за счет изменений структуры хроматина [Laptenko O., Prives C. 2012]. Этот же участок взаимодействует и с белком mdm2 [Kussie et al. 1996]. Фосфорилирование N-концевых аминокислот приводит к изменению связывания р53 с mdm2, а также к изменению взаимодействий с транскрипционным комплексом. Центральный домен р53 необходим для связывания со специфическими

последовательностями ДНК; пролин-богатый домен отвечает за проявление полной супрессорной активности р53; а-спиральный домен обеспечивает тетрамеризацию молекул р53; С-терминальный домен содержит сигналы ядерной локализации (аминокислоты 300323) и экспорта (аминокислоты 356-364) (NLS и NES, соответственно) и олигомеризационный домен (аминокислоты 324-355) [Okorokov A.L. et al. 2006].

Уровень белка р53 в клетке регулируется на уровне мРНК гена Р53, при помощи пострансляционного контроля времени жизни белка р53, аллостерической регуляции, как результата посттрансляционных модификаций [Bai L. et al. 2006]. После воздействия на клетки генотоксических агентов, таких как ионизирующая радиация, хемиотерапевтические препараты и химические канцерогены происходит активация р53, направленная на устранение повреждений в молекуле ДНК. Изменение ДНК может повлиять на целостность генома из-за образования двунитевых разрывов и за счет возникновения мутаций, приводящих к потенциальным перестановкам в геноме или потери генетической информации. Ответ на повреждения ДНК осуществляется благодаря инициации посттрансляционных модификаций р53, увеличения частоты пульсаций р53-оборота, постоянно происходящих в клетках, или за счет эндогенных процессов, связанный с репликацией и метаболизмом.

Контроль времени жизни белка р53

Контроль времени жизни белка р53 происходит благодаря посттрансляционным модификациям белков mdm2 и p53. Белок mdm2 катализирует перенос активированного убиквитина с фермента группы Е2 на белок р53. Полиубиквитилирование p53, в отличие от моноубиквитирования, приводит к протеасомной деградации р53 в цитоплазме [Waning D.L. et al. 2010]. Моноубиквитирование p53осуществляется, когда уровень mdm2 низкий, и p53 выносится в цитоплазму для дополнительного убиквитилирования и деградации. Однако, большая часть моноубиквитилированного p53 направляется в митохондрии. p53 может подвергаеться деубиквитилированию с помощью белка HAUSP (herpesvirus-associated ubiquitin-specific protease), кодируемого геном USP7 (Ubiquitin-specific-processing protease 7). Связь между mdm2 и HDAC1 (Histone deacetylase 1) способствует деацетилированию p53 и, как следствие, его деградации [Ito A. et al. 2002].

Белок p53 быстро стабилизируется и накапливается в клетке за счет освобождения от mdm2 в ответ на стресс-сигналы путем многочисленных механизмов, например, при связывании MDM2 с опухолевым супрессором ARF в ядрышке. Под влиянием стресс-сигналов ARF положительно контролирует стабильность и активацию p53 [Sui G. et al. 2004]. И наоборот, высокий уровень белка p53 ведет к образованию отрицательной обратной связи с ARF, уменьшая уровень ARF и увеличивая связывание mdm2 с p53.

Стресс-сигналы активируют ATM/CHK2 и ATR/CHK1-mHa3bi, которые

фосфорилируют p53, mdm2, и mdm4. В отличие от p53, фосфорилирование mdm2 приводит к его дестабилизации. Деградация фосфорилированного mdm2 и mdm4 приводит к стабилизации p53. Белок p53 напрямую активирует транскрипцию гена MDM2 за счет связывания с 2-мя соседними p53-респонсивными элементами в области его промотора, а увеличение экспрессии MDM2, в свою очередь, способствует деградации p53. Это обеспечивает отрицательную регуляторную связь, контролирующую экспрессию р53, и сдерживает активность р53 в нормальных клетках в отсутствии стресса [Moll U.M., Petrenko O. 2003].

Посттрансляционная регуляция р53

Известно, что более 36 аминокислот в р53 могут быть подвержены посттрансляционным модификациям, которые влияют на стабильность и активность р53, а также расширяют его возможности как транскрипционного фактора [Karve T.M., Cheema A.K. 2011]. Наиболее известными модификациями в р53 являются фосфорилирование серина и треонина, ацетилирование и метелирование лизина [Meek D.W., Anderson C.W. 2009].

Фосфорилирование N-терминального конца p53 участвует в его стабилизации. В ответ на многочисленные стрессы, включая повреждения ДНК, все треонины и серины N-теминального конца p53 в его первых 89 остатках способны фосфорилироваться и дефосфорилироваться. После фосфорилирования увеличивается транскрипционная активность p53 и время жизни белка. Фосфорилирование р53 по Ser15, Thr18, и Ser20 вызывает его последующее ацетилирование. HIPK2 (Homeodomain-interacting protein kinase 2) является киназой, которая фосфорилирует p53 по Ser46, что обеспечивает специфичность связывания р53 с промотором про-апоптотических генов и индуцирует апоптоз.

Регуляция р53 на уровне мРНК

Регуляции белка р53 на уровне мРНК в литературе уделяется не так много внимания. Помимо регулирования промотора р53 наблюдается посттранскрипционный контроль уровня мРНК гена Р53. Возможна регуляция через 5UTR и 3UTR -регионы. 5'UTR-регион имеет высокое содержание GC-оснований и образует структуру «стебель-петля» и может регулировать как трансляцию, так и стабильность мРНК p53. Рибосомальный белок RPL26 связывается с 5'UTR-регионом р53 и увеличивает трансляцию мРНК р53. Показано, что сверхэкспрессия RPL26 увеличивает р53-зависимый ответ на различные виды стресса [Takagi M. et al. 2005].

3'UTR - регионы в мРНК содержат сайты, комплементарные miRNA, а также AU-богатые элементы (AREs). Показано, что miR-125a и miR-125b, воздействуют на сайт внутри

3 'UTR-региона мРНК гена Р53, в результате чего уменьшается уровни мРНК и белка р53 [Le M.T. et al. 2009].

Большое значение для посттранскрипционной регуляции экспрессии генов имеет изменение длины 3 'UTR-региона. Около половины всех генов человека имеют альтернативные сайты полиаденилирования, использование которых генерирует мРНК с различными 3'UTR -регионами [Zhang H., Lee J.Y., Tian B., 2005]. Наличие длинных 3'UTR-форм генов ведет к уменьшению экспрессии белка [Sandberg R. et al. 2008]. Пролиферирующие и трансформированные клетки, также как эмбриональные клетки, демонстрируют глобальное укорачивание 3'UTR-конца [Ji Z. et al. 2009]. 1.1.2. Механизмы снижения эффективности функционирования белка р53 Мутации в гене Р53

В опухолевых клетках высока вероятность обнаружения мутаций в гене Р53. Обнаружение мутаций P53 сильно зависит от локализации первичного рака и его гистологического типа [Petitjean A. et al. 2007]. Частота проявления мутаций в гене Р53 для рака пищевода, толстой кишки, легкого, желудка, печени, РМЖ, РПЖ составляет 45.4%, 43.3%, 37.2%, 32.4%, 31.2%, 22.8% и 16.9% соответственно. Внутри одного вида рака некоторые типы опухолей демонстрируют увеличенную частоту мутаций в гене P53. Например, серозный рак яичников высокой гистологической степени имеет почти 100% мутации в Р53, в то время как суммарно рак яичников различного генеза имеет частоту мутации равную только 47,5%.

В некоторых случаях различия в частоте мутаций можно объяснить воздействием факторов окружающей среды. Например, при гепатоцеллюлярной карциноме выявлена G>T-замена в кодоне 249 ДНК-связывающего домена р53, обусловленная пищевым поступлением афлотоксина В1, содержащегося в плесневом грибе aspergillus [Bressac B. et al. 1991]. Бензопирен-диол-эпоксид (БПДЭ), который является одним из 3000 мутагенов, содержащихся в табаке, образует аддукты на G-остатках в ДНК, вызывая G>T -мутации и может быть причиной мутаций в Р53 у курильщиков, а также и у части больных при раке легкого [Patterson M. 2000, Rodin S.N., Rodin A.S. 2000].

В отличие от большинства других опухолевых супрессоров, которые обычно инактивируются за счет сдвига «рамки считывания» или нонсенс-мутаций, большинство мутаций в Р53 являются миссенс-мутации (~80%). Последствия мутаций в Р53 при раке имеют больший онкогенный эффект, чем фенотип, наблюдаемый при потере гена Р53 [Petitjean A. et al. 2007].

Субклеточная локализация р53

Абберантная локализация белка р53 в цитоплазме приводит к потере его функций. При воздействии стресса p53 обычно находится в ядре клеток, где выполняет свою роль, как фактор транскрипции.

В опухолевых клетках часто обнаруживается аберрантная локализация, например, при нейробластоме, раке прямой кишки, раке молочной железы и ретинобластоме [Nikolaev A.Y., Gu W. 2003].

Другие причины снижения эффективности функционирования белка р53

Для тех опухолей, которые сохраняют ген Р53 «дикого типа», функциональная активность р53 часто блокируется и на другом уровне [Vogelstein B. et al. 2000]. Показано, что метилирование промотора гена Р53 вызывает снижение транскрипции р53, а мутации в 5' UTR -регионе уменьшают трансляцию.

К снижению функциональной активности р53 приводит усиление экспрессии его ингибиторов. В 1992 году было показано, что mdm2 прочно связывается с р53 и ингибирует его биологическую активность, после чего этот белок получил название «привратник» р53. В настоящее время существуют около 22 миллионов человек с опухолями, которые содержат инактивированный р53 либо за счет мутаций [Brown C. J. et al. 2009], либо за счет большого содержания ингибиторов р53 - mdm2 и mdm4 [Halatsch M. E. et al. 2006].

Сверхэкспрессия отрицательных регуляторов р53 таких, как mdm2 и mdm4 обнаруживается, по крайней мере, в 10% человеческих опухолей [Toledo F., Wahl G.M. 2006]. Mdm2 сверхэкспрессирован в 14% остеосарком, а mdm4 сверхэкспрессирован в 4% глиобластомах, 5% рака молочной железы, 50% гепатоцеллюлярных карциномах, 60% ретинобластомах и 65% кожных меланом. Белок mdm2 может быть сверхэкспрессирован в результате генной амплификации. Кроме того, однонуклеотидный полиморфизм (SNP) в промоторе гена MDM2 увеличивает транскрипцию, приводящую к 2-4 кратному увеличению мРНК и белка mdm2.

Сверхэкспрессия mdm4 может быть результатом усиления трансляции его мРНК, или увеличения числа копий гена, особенно при ретинобластоме и гепатоцеллюлярной карциноме [Laurie N.A. et al. 2006, Schlaeger C. et al. 2008, Valentin-Vega Y.A et al. 2007].

После стресс-воздействия mdm2 самоубиквинтилируется и убиквинтилирует mdm4, что ведет к накоплению и активации р53 и, таким образом, р53 -зависимый транскрипционный ответ возрастает. Активированный р53 увеличивает транскрипцию гена MDM2, и, в свою очередь, аккумулированный mdm2 вызывает деградацию mdm4 еще более эффективно, что способствует полной активации р53, и транскрипционный стресс-ответ

достигает пика. После окончания стресса накопленный белок mdm2 снова воздействует на р53, уровень белка р53 падает, при этом уровень белка mdm4 растет, и активность р53 уменьшается. Небольшое количество p53 снижает количество белка mdm2, и цикл завершается [Khoury K. 2013].

Поиск средств, направленных на разобщение р53 от mdm2 и mdm4 в раковых клетках, идет полным ходом [Roxburgh P. 2013].

Стоит сказать, что в настоящее время уже признается, что mdm2 и mdm4 могут функционировать за пределами возможности ингибирования р53, и уже получены доказательства, свидетельствующие о специфике их влияния на гены-мишени р53 и других транскрипционных факторов. mdm2 сам может функционировать как транскрипционный кофактор через пострансляционную модификацию хроматина. Кроме этого, mdm2 может оказывать действие и на посттранскрипционном уровне, изменяя стабильность мРНК и трансляцию различных транскриптов.

1.1.3. Функциональная активность системы p53- mdm2- mdm2 после облучения

Транскрипционный фактор р53, необходим для защиты клеток от нестабильности генома и важен для формирования реакции клеток на радиационное воздействие. Уже в 1990-х годах было установлено, что в ответ на радиационное повреждение ДНК в клетках наблюдается активация онкосупрессора р53 [Kastan M.B. 1991, Lowe S.W. 1993]. После воздействия ионизирующей радиации и образования повреждений ДНК в клетках быстро мобилизуются р53-зависимые программы, обеспечивающие устранение повреждений генома и восстановление клеточного гомеостаза.

В экспериментах на клеточных культурах показано увеличение активности р53 через 2 ч после облучения, приводящее к реализации программ остановки клеточного цикла и репарации ДНК, и только через 6-8 ч появляется второй пик активности, который вызывает включение программ апоптоза [Batchelor E. 2008]. Дальнейшие исследования действия радиации, проведенные на культурах клеток человека и экспериментальных животных, показали пульсовое изменение активности р53, частота и длительность которой зависят от фенотипа клеток, вида и дозы радиационного воздействия и обеспечивает реализацию программ остановки клеточного цикла, раперацию ДНК, апоптозы, старение [Purvis, J.E. 2012]. Разнообразие клеточных р53-зависимых программ частично можно объяснить тем, что супрессор опухоли р53 имеет большое количество транскрипционных мишеней. В различных тканях клетки отличаются фенотипом, и транскрипционный фактор р53 активирует экспрессию тканеспецифических наборов генов-мишеней, ведущих к различному ответу клеток на радиационное воздействие (рисунок 1).

А, Система кроветворения

PUMA Ф ^ Вах, Вак ^ДлоптозыТ ^ Гибель (лрогениторные клетки) Радиация ^ Повреждения ДНК ^ рБЗ'Т4 ^ ? ^ Старение ^ Пригодность^ (стволовые клетки)

^ Р2114 ^ арест клеточного цикла выживание (стволовые клетки)

Р53 I- pZl ^ ? ^fci самовоспроизводство ^ выживание (стволовые клетки)

Б. Кишечный эпителий

Радиация-Повреждения ДНК —pS3"T*-^.PUIVIA Бах, Вак ^Апоптоэы^^ Гибель (транзитные клетки)

Р21ф^-арест клеточного цикла _^.выживание (стволовые клетки)

С. Сосудистый эндотелий

Радиация ^ Повреждения ДНК ji р53 •Т* —^ Р? 1 Т арест клеточного цикла ^ выживание

Рисунок 1. Роль р53 в регуляции клеточного ответа на радиационное воздействие in vivo в различных тканях [Lee C. et al. 2013].

Активность р53 в клетках, как это было описано выше, регулируется его взаимодействием с белками mdm2 и mdm4. После облучения взаимодействие p53-mdm2-mdm4 может изменяться [Perry M.E. 2010].

Сигнал двунитевых повреждений ДНК после действия радиации передается с помощью киназы ATM (ataxia telangiectasia mutated serine/threonine protein kinase) на p53, CHK2 и H2AX, вызывая остановку клеточного цикла, активацию репарации ДНК, апоптоз,

старение. ATM фосфорилирует аминокислотные концы человеческого белка р53 по Ser15, что ведет к разрыву связи р53 с mdm2 и mdm4 и накоплению р53 в клетке. Фосфорилирование С-терминальных концов белков mdm2 и mdm2 способствует их быстрой деградации. ATM также активирует вторую киназу c-Abl, фоосфорилирующую mdm2 по Tyr394 и mdm4 по Tyr 99, снижая их возможность ингибировать белок р53.

ATM-активированная киназа CHK2 фосфорилирует добавочные сайты внутри mdm4, облегчая его связь с 14-3-3-белками и его убиквинтилирование за счет mdm2. Более того CHK2-опосредованное фосфорилирование mdm4 нарушает его взаимодействие с деубиквинтилирующим ферментом убиквинтин-специфической протеазой HAUSP (herpesvirus associated ubiquitin-specific protease), что способствует беспрепятственному убиквинтилированию и протеосомной деградации. Важность фосфорилирования mdm4 для активации р53 после радиационного воздействия была показана в экспериментах на мышах, мутированных по Ala [Wang Y.V. et al. 2009]. По сравнению с мышами, несущими «дикий тип» р53, мыши с мутантным р53 обладали ослабленным р53-опосредованным

транскрипционным ответом и выдерживали большие дозы радиации. Таким образом, после воздействия радиации временно увеличивается активность р53 за счет изменения связи с mdm2 и mdm4. После реализации программы сохранения стабильности генома взаимодействие между р53 и его ингибиторами восстанавливается. Экспрессия mdm2 индуцируется в ответ на высокое содержание онкосупрессора р53 через р53-респонсивный элемент в гене MDM2, и образуется отрицательная регуляторная «петля», необходимая для функционирования клетки.

Другой механизм, который может быть критичным для периода восстановления клетки после радиационного поражения - это дефосфорилирование mdm2 за счет фосфатазы Wip1. Wipl дефосфорилирует mdm2 по Ser395, т.е. по сайту фосфорилирования ATM. В этом случае Wipl облегчает взаимодействие между mdm2 и p53 и подавляет аутоубиквинтилирование mdm2. Подобное функционирование регуляторной «петли» р53 -зависимой системы защиты генома подтверждено в экспериментах по исследованию уровня и активности р53, mdm2 и mdm4 в единичных клетках после действия ионизирующей радиации [Batchelor E. 2009].

Использование генетически сконструированных мышей с возможностью «переключения» экспрессии белка р53 из функциональной формы в неактивную форму, показало, что у мышей, на момент облучения обладающих функционально активной формой р53, возникали опухоли с той же частотой, что и у облученных мышей с неактивныой формой р53. Оказалось, что преобразование р53 в функциональную активную форму через 8 дней после облучения защищает мышей от развития гемобластозов даже, если острой гибели клеток не наблюдалось [Christophorou et al. 2006]. Это наблюдение предполагает, что ранний ответ р53 на облучение не участвует в формировании последствия, связанного с подавлением развития опухоли, или это ответ менее критичен, чем более позднее участие р53. Показано, что онкосупрессия р53 может зависеть от экспрессии ARF (alternative reading frame), который инактивирует mdm2, и, таким образом, увеличивает экспрессию p53.

Проведенные эксперименты говорят о том, что следует различать участие р53 в механизмах чувствительности клеток и организма к ближайшим и отдаленным последствиям действия ионизирующей радиации. Пострадиационная гибель клеток является наиболее важным ранним эффектом облучения, в то время как онкотрансформация - наиболее тяжкое отдаленное последствие.

В настоящее время установлено, что активация р53 направлена на сохранение стабильности генома и приводит к гибели клеток с поврежденной ДНК, и это вызывает

снижение выживаемости животных после лучевого воздействия. Анализ результатов экспериментов, проведенных на лабораторных животных, показал, что p53 после воздействия ионизирующего излучения, может приводить, например, к развитию костномозгового синдрома при острой лучевой болезни (ОЛБ), и во многом определять серьезные неблагоприятные эффекты, возникающие при лечении рака [Gudkov A.V. 2010].

Westphal C. et al. было показано, что снижение активности р53 увеличивает радиорезистентность животных по критерию их выживаемости. После у-облучения в дозе 10 Гр трансгенных мышей с полностью «выключенным» р53 все животные выживали, приблизительно половина гетерозиготных по гену P53 мышей умерла, в то время как все мыши с «диким типом» Р53 погибали в течение 1-2 недель [Westphal C.H. 1998].

Аналогичные результаты получены при использовании трансгенных мышей с уменьшенным уровнем mdm2, являющимся ингибитором р53. Все трансгенные мыши умирали в течение 12-22 дней после облучения в дозе 10 Гр, в то время как 50% мышей с «диким типом» mdm2 оставались живыми в течение 40 дней после облучения.

Для достижения адекватной активации р53 необходимо фосфорилирование mdm4 с помощью киназ ATM и Chk2. На мышиной модели 3SA, несущей мутации в генах ATM и Chk2, после тотального облучения 10 Гр показано увеличение выживаемости этих животных по сравнению с мышами, несущими «дикий тип» ATM и Chk2.

Таким образом, можно сделать вывод, что активация р53 сразу после облучения способствует гибели поврежденных клеток, а в более отдаленные сроки после радиационного воздействия данный онкосупрессор принимает участие в предотвращении канцерогенеза.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что после воздействия радиации р53-регулируемая система защиты генома может способствовать как гибели, так и выживанию клеток, и демонстрируют сложную организацию р53-сетей, регулирующих клеточный и тканевой ответ на облучение.

1.2. Роль микроРНК в функционировании Р53-системы защиты генома в отдаленный период после облучения

1.2.1. МикроРНК, их биогенез и функции, а также причины нарушения экспрессии микроРНК, значение в диагностике и терапии заболеваний

МикроРНК

В настоящее время открыто более 2000 микроРНК (mir, miR) человека. Номенклатура этих микроРНК основана на префиксе «mir» и «miR» с номером, присвоенным

последовательно на момент открытия: «mir» обозначает предшественника микроРНК, тогда как «miR» обозначает последовательность зрелых микроРНК. Похожим или идентичным последовательностям присваивается тот же номер. Различие осуществляется далее с помощью буквы (аналогичные последовательности, отличающиеся несколькими нуклеотидами) или цифры (идентичные последовательности). Например, mir-15a и mir-15b имеют идентичные 5'-концы, но отличаются четырьмя нуклеотидами в их З'-регионе. Напротив, miR-16-1 и miR-16-2 идентичны, но закодированы на двух отдельных хромосомах, хромосомах 13 и 3, соответственно.

Локализация и биогенез микроРНК

Гены микроРНК находятся либо в межгенных регионах, либо в интронах кодирующих белки генов. Результаты исследований показали, что транскрипция многих микроРНК регулируются по принципу белок-кодирующих генов.

Биогенез микроРНК включает в себя несколько этапов. Транскрипция генов микроРНК может идти с «чужих» или собственных промоторов в зависимости от локализации микроРНК в геноме и специфики самого гена. Гены микроРНК могут транскрибироваться в ядре поодиночке, или одним полицистронным транскриптом с помощью РНК-полимераз. Образованные первичные транскрипты, которые называются при-микроРНК (pri-microRNA), имеют длину от 70 до 200 нуклеотидов и более, с характерными множественными шпильками с неполной внутренней комплементарностью. Молекулы при-микроРНК подвергается кэпированию, полиаденилированию и редактированию. Зрелая микроРНК может быть локализована как на 3/ , так и на 5/-концах шпилечной структуры. Следующий этап биогенеза микроРНК - это превращение при-микроРНК в пре-микроРНК (pre-microRNA), осуществляемое микропроцессорным комплексом ядерной РНКазой III Drosha/ DGCR8 (область 8, критическая для синдрома Ди-Джорджи), в котором DGCR8 распознает особенности структуры двухцепочечной РНК и связывается с ней, а Drosha осуществляет разрезание нити при-микроРНК. Отрезанные фланкирующие элементы деградируют в ядре. Образующаяся пре-микроРНК имеет стеблепетлевую 70-нуклеотидную структуру и «липкий» 3-конец размером две нулеотидные пары. Этот конец необходим для взаимодействия с белком экспортином 5 Ran-GTP-зависимым (Exportin 5-Run-GTP), участвующим в переносе пре-микроРНК из ядра в цитоплазму [Bohnsack М.Т. et al. 2004]. Далее пре-микроРНК превращается в двухцепочечную микроРНК, длиною в 20-25 нуклеотидов с помощью фермента РНКазы III, названного Dicer, который вместе с его dsRBD-партнером TRBP осуществляют двухцепочечный разрез. На последнем этапе биогенеза одна цепь двухцепочечной микроРНК связывается с белком Argonaute (Ago),

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шуленина Лилия Викторовна, 2016 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Байсоголов Г. Д., Болотникова М.Г., Галстян И. А. и др. Злокачественные новообразования кроветворной и лимфатической тканей у персонала первого предприятия атомной промышленности // Вопросы онкологии. 1991. T. 37, вып. 5. С. 553-559.

2. Воробьев А.И., Домрачева E.B. Радиационно-индуцированные лейкозы // Проблемы гематологии и переливания крови. 2000. T 4. С. 515.

3. Галстян И.А. Состояние здоровья пострадавших в отдаленные сроки после перенесенной острой лучевой болезни: Дисс. ... докт. мед. наук. М. 2011.

4. Галстян И.А. Состояние здоровья пострадавших в отдаленные сроки после перенесенной острой лучевой болезни: Автореф. дис. ... докт. мед. наук. М., 2011.

5. Гребенюк А.Н., Стрелова О.Ю., Легеза В.И., Степанова Е.Н. Основы радиобиологии и радиационной медицины // Учеб. пособие. СПб. 2012. C. 232.

6. Гутковская Е.А., Готько О.В., Бабенко А.С., Смолякова Р.М. Молекулярно-генетическая оценка экспрессии микроРНК mir-125b и let-7c при раке молочной железы // Актуальные вопросы диагностики и лечения злокачественных новообразований. Минск. 2014. C. 30-32.

7. Жербин Е.А., Чухловин А.Б. Радиационная гематология // Медицина. Москва. 1989. C. 176.

8. Иванов С.Д., Корытова Л.И. Предскзательные маркеры эффективности лучевой химиолучевой терапии в онкологии // СПб. 2013. C. 112.

9. Кондратова В.Н., Ботезату И.В., Шелепов В.П., Лихтенштейн А.В. Внеклеточные нуклеиновые кислоты как маркеры опухолевого роста // Российский биотерапевтический журнал. 2013. Т. 12, N3. C. 3-11.

10. Кондратьева Т.М., Сафронова В.Г. О необратимых изменениях элементов крови облученных животных // В сб. « Восстановительные процессы при радиационных поражениях» М. Атомиздат. 1964. C. 172-178.

11. Москалев Ю.В., Стрельцова В.Н. Лучевой канцерогенез в проблеме радиационной защиты // М.:Энергоиздат. 1982. C. 120.

12. Муксинова К.Н., Мурзина Л.Д., Ревина В.С. Значение индивидуальных особенностей миелопоэза в реализации лейкемогенного действия ионизирующего излучения // Медицинский вестник Башкортостана. 2009. T. 4, вып. 2. C. 109-114.

13. Писклакова Т.П. Характеристика иммунного статуса больных базально-клеточным раком кожи // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2004. N3. C. 33-36.

14. Ситиков А.С. Антисмысловые РНК как посланники в межклеточной коммуникации: 20 лет спустя // Успехи биологической химии. 2012. T. 52. C. 157-176.

15. Чумаков П.М. Белок р53 и его универсальные функции в многоклеточном организме // Успехи биологической химии. 2007. Т. 47. C. 3-52.

16. Шмелева Н.И. Особенности эритропоэза у животных, перенесших острую лучевую болезнь // Радиобиология. 1962. T. 2, N7. C. 50-52.

17. Acharya S.S., Fendler W., Watson J. et. al. Serum microRNAs are early indicators of survival after radiatial-induced hematopoietic injury // Science transplantantial medicine. 2015. Vol. 7(287). P. 1 -11.

18. Alahari S. MicroRNA in cancer // ebook. 2013

19. Arora H., Qureshi R., Jin S., Park A.K., Park W.Y. miR-9 and let-7 g enhance the sensitivity to ionizing radiation by suppression of NF[kappa]B1 // Exp Mol Med. 2011. Vol. 43. P. 298-304.

20. Asangani I.A., Rasheed S.A., Nikolova D.A. et al. MicroRNA-21 (miR-21) post-transcriptionally downregulates tumor suppressor Pdcd4 and stimulates invasion, intravasation and metastasis in colorectal cancer // Oncogene. 2008. Vol. 27. P. 2128-2136.

21. Bai L., Zhu R., Chen Z. et al. Potential role of short hairpin RNA targeting epidermal growth factor receptor in growth and sensitivity to drugs of human lung adenocarcinoma cells // Biochem Pharmacol. 2006. Vol. 71(8). P. 1265-1271.

22. Bandi N., Vassella E. miR 34a and miR 15a/16 are co-regulated in non-small cell lung cancer and control cell cycle progression in a synergistic and Rb-dependent manner // Mol. Cancer. 2011. Vol. 10. P. 55.

23. Banzhaf-Strathmann J., Edbauer D. Good guy or bad guy: the opposing roles of microRNA 125b in cancer // Banzhaf-Strathmann and Edbauer Cell Communication and Signaling. 2014. Vol. 12. P. 30.

24. Barcellos-Hoff M.H., Ravani S.A. Irradiated mammary gland stroma promotes the expression of tumorigenic potential by unirradiated epithelial cells // Cancer Res. 2000. Vol. 60. P. 1254-1260.

25. Barjaktarovic Z., Anastasov N., Azimzadeh O. et al. Integrative proteomic and microRNA analysis of primary human coronary artery endothelial cells exposed to low-dose gamma radiation // Radiat Environ Biophys. 2013. Vol. 52. P. 87-98.

26. Bartel D P. MicroRNAs: target recognition and regulatory functions // Cell. 2009. Vol. 136(2). P. 215-233.

27. Batchelor E., Loewer A., Lahav G. The ups and downs of p53: Understanding protein dynamics in single cells // Nature Rev Cancer. 2009. Vol. 9. P. 371-377.

28. Batchelor E., Mock C.S., Bhan I., Loewer A., Lahav G. Recurrent initiation: A mechanism for triggering p53 pulses in response to DNA damage // Mol. Cell. 2008. Vol. 9. P. 277-289.

29. Bockmeyer C.L., Christgen M., Müller M. et al. MicroRNA profiles of healthy basal and luminal mammary epithelial cells are distinct and reflected in different breast cancer subtypes // Breast Cancer Res Treat. 2011. Vol. 130(3). P. 735-745.

30. Boeri M., Verri C., Conte D. et al. MicroRNA signatures in tissues and plasma predict development and prognosis of computed tomography detected lung cancer // Proc Natl Acad Sci USA. 2011. Vol. 108(9). P. 3713-3718.

31. Bohnsack M.T., Czaplinski K., Gorlich D. Exportin 5 is a anGTP-dependent dsRNA-binding protein that mediates nuclear export of pre-miRNAs // RNA. 2004. Vol. 10(2). P. 185-191.

32. Bonci D., Coppola V., Musumeci M. et al. The miR-15a-miR-16-1 cluster controls prostate cancer by targeting multiple oncogenic activities // Nat Med. 2008. Vol. 14. P. 1271-1277.

33. Bousquet M., Quelen C., Rosati R. et al. Myeloid cell differentiation arrest by miR-125b-1 in myelodysplastic syndrome and acute myeloid leukemia with the t (2; 11) (p21; q23) translocation // J Exp Med. 2008. Vol. 205. P. 2499-2506.

34. Brachova P., Mueting S.R., Devor E.J., Leslie K.K. Oncomorphic TP53 Mutations in Gynecologic Cancers Lose the Normal Protein:Protein Interactions with the microRNA Microprocessing Complex // Journal of Cancer Therapy. 2014. Vol. 5. P. 506-516.

35. Brenner D. Long-term risks - Carcinogenic, Hereditary and Teratogenetic Effects. // «ASTRO». 2001. Refresher course. 417 C.

36. Bressac B., Kew M., Wands J., Ozturk M. Selective G to T Mutations of P53 Gene in Hepatocellular Carcinoma from Southern Africa // Nature. 1991. Vol. 350. P. 429-431.

Brown C.J., Lain S., Verma C.S., Fersht A.R., Lane D.P. Awakening guardian angels: drugging the p53 pathway // Nat Rev Cancer. 2009. Vol. 9. P. 862.

37. Brueckner B., Stresemann C., Kuner R. et al. The human let-7a-3 locus contains an epigenetically regulated microRNA gene with oncogenic function // Cancer Research. 2007. Vol. 67. P. 1419- 1423.

38. Burkhanov R., Shrestha-Bhattarai T., Hebber N. et.al. Paracrine apoptotic effect of h53 mediated by tumor suppressor Par-4 // Cell reports. 2014. Vol. 6. P. 1-7.

39. Burnett J.C., Rossi J.J. RNA-based therapeutics: current progress and future prospects // Chem Biol. 2012. Vol. 19(1). P. 60-71.

40. Calin G.A. Croce C.M. MicroRNA signatures in human cancers // Nat Rev Cancer. 2006. Vol. 6(11). P. 857-866.

41. Calin G.A., Dumitru C.D., Shimizu M. et al. Frequent deletions and down-regulation of micro- RNA genes miR-15 and miR-16 at 13q14 in chronic lymphocytic leukemia // Proc Natl Acad Sci USA. 2002. Vol. 99. P. 15524-15529.

42. Calin G.A., Ferracin M., Cimmino A. et al. A MicroRNA signature associated with prognosis and progression in chronic lymphocytic leukemia // N Engl J Med. 2005. Vol. 353(17). P. 17931801.

43. Calin G.A., Ferracin M., Cimmino A. et al. A MicroRNA signature associated with prognosis and progression in chronic lymphocytic leukemia // N Engl J Med. 2005. Vol. 353. P. 1793-1801.

44. Calin G.A., Sevignani C., Dumitru C.D. et al. Human microRNA genes are frequently located at fragile sites and genomic regions involved in cancers // Proc Natl Acad Sci U S A. 2004. Vol.101(9). P.2999-3004

45. Cao M., Shikama Y., Anzai M. et al. Impaired Neutrophil Migration Resulting from Mir-34a and Mir-155 Overexpressed in Neutrophils from Myelodysplastic Syndrome Patients // 57th ASH Annual Meeting & Exposition. 2015.

46. Carbonneau C. L., Despars G. et al. Heterotopic bone formation derived from multipotent stromal cells is not inhibited in aged mice // Cytotherapy. 2014. Vol. 16. P. 1073-1079.

47. Carbonneau C.L., Despars G., Rojas-Sutterlin S. et al. Ionizing radiation-induced expression of INK4a/ARF in murine bone marrow-derived stromal cell populations interferes with bone marrow homeostasis // Blood. 2012. Vol. 119. P. 717-726.

48. Chan J.A., Krichevsky A.M., Kosik K.S. MicroRNA-21 is an antiapoptotic factor in human glioblastoma cells // Cancer Res. 2005. Vol. 65. P. 6029-6033.

49. Chan S.H., Wu C.W., Li A.F., Chi C.W., Lin W.C. miR-21microRNA expression in human gastric carcinomas and its clinical association // Anticancer Res. 2008. Vol. 28. P. 907-911.

50. Chang T.C., Wentzel E.A., Kent O.A. et al. Transactivation of miR 34a by p53 broadly influences gene expression and promotes apoptosis // Mol. Cell. 2007. Vol. 26(5). P. 745-752.

51.Chaudhry M.A., Omaruddin R.A. Differential regulation of microRNA expression in irradiated and bystander cells // Molekuliarnaia biologiia. 2012b. Vol. 46. P. 634-643.

52. Chen C., Ridzon D.A., Broomer A.J. et al. Real-time quantification of microRNAs by stem-loop RT-PCR // Nucleic Acids Res. 2005. Vol. 33(20). P. 179.

53. Cheng A.M., Byrom M.W., Shelton J., Ford L.P. Antisense inhibition of human miRNAs and indications for an involvement of miRNA in cell growth and apoptosis // Nucleic Acids Res. 2005. Vol. 33. P. 1290-1297.

54. Childs G., Fazzari M., Kung G. et.al. Low- Level Expression of MicroRNAs let-7d and miR-205 Are Prognostic Markers of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma // Am J Pathol. 2009. Vol. 174(3). P. 736-745.

55. Childs G., Fazzari M., Kung G.et al. Low-level expression of microRNAs let-7d and miR-205 are prognostic markers of head and neck squamous cell carcinoma // American Journal of Pathology. 2009. Vol. 174. P. 736- 745.

56. Chin L.J., Ratner E., Leng S. et.al. A SNP in a let-7 microRNA complementary site in the KRAS 3' untranslated region increases non-small cell lung cancer risk // Cancer Res. 2008. Vol. 68(20). P. 8535-8540.

57. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal Biochem. 1987. Vol. 162(1). P. 156-159.

58. Christophorou M.A., Ringshausen I., Ginch A.J., Brown-Swigart L., Evan G.I. The pathological response to DNA damage does not contribute to p53-mediated tumour suppression // Nature. 2006. Vol. 443. P. 214-217.

59. Cimmino A., Calin G.A., Fabbri M. et al. miR-15 and miR-16 induce apoptosis by targeting BCL2 // Proc Natl Acad Sci USA. 2005. Vol. 102. P. 13944-13949.

60. Concepcion C.P., Han Y.C., Mu P. et al. Intact p53-dependent responses in miR 34-deficient mice // PLoS Genet. 2012. Vol. 8(7). P. e1002797.

61. Cook G.J., Pardee T.S. Animal Models of Leukemia: Any closer to the real thing? // Cancer Metastasis Rev. 2013. Vol. 32(0). P. 63-76.

62. Court-Brown W.M, Doll R. Leukaemia and aplastic anaemia in patients irradiated for ankylogin sponylitis // Medical Research Council special Report Series. 1957. Vol. 27 (295). P. B15-B154

63. Coutinho-Camillo C.M., Louren9o S.V., de Araujo Lima L. Expression of apoptosis-regulating miRNAs and target mRNAs in oral squamous cell carcinoma // Cancer Genet. 2015. Vol. 208(7-8). P. 382-389.

64. Croce C.M. Causes and consequences of microRNA dysregulation in cancer , M.D. // Nat Rev Genet. 2009. Vol. 10(10). P. 704-714.

65. Cui W., Ma J., Wang Y., Biswal S. Plasma miRNA as biomarkers for assessment of total-body radiation exposure dosimetry // PLoS One. 2011. Vol. 6. P. e22988.

66. Curtis R.E., Ron E., Hoover R.N. // New Malignancies Following Breast Cancer. P. 181-205.

67. Czochor J. R., Glazer P. M. microRNAs in Cancer Cell Response to Ionizing Radiation. Antioxid // Redox Signal. 2014. Vol. 21(2). P. 293-312.

68. Davalos A.R., Coppe J.P., Campisi J., Desprez P. Senescent cells as a source of inflammatory factors for tumour progression // Cancer Metastasis Rev. 2010. Vol. 29. P. 273-283.

69. Duan W., Xu Y., Dong Y., Cao L., Tong J., Zhou X. Ectopic expression of miR-34a enhances radiosensitivity of non-small cell lung cancer cells, partly by suppressing the LyGDI signaling pathway // J Radiat Res. 2013. Vol. 54. P. 611-619.

70. Eichelser C., Flesch-Janys D., Chang-Claude J., Pantel K., Schwarzenbach H. Deregulated serum concentrations of circulating cell-free microRNAs miR-17, miR-34a, miR-155, and miR-373 in human breast cancer development and progression // Clin Chem. 2013. Vol. 59(10). P. 1489-1496.

71. Enders K.O., Li R., Shin V.Y. et al. Circulating microRNAs as Specific Biomarkers for Breast Cancer Detection // PLoS One. 2013. Vol. 8(1). P. e53141.

72. Erson-Bensan A.E. Introduction to microRNAs in Biological Systems // Methods in Molecular Biology. 2014. Vol.1107. P.1-14.

73. Fabian M.R., Sonenberg N., Filipowicz W. Regulation of mRNA translation and stability by microRNAs // Annu Rev Biochem. 2010. Vol. 79. P. 351-379.

74. Feng Z., Zhang C., Wu R. Tumor suppressor p53 meets microRNAs // J Mol Cell Biol. Vol. 3(1). P.44-50.

75. Folini M., Gandellini P., Longoni N. et al. miR-21: an oncomir on strike in prostate cancer // Mol Cancer. 2010. Vol. 9. P. 12.

76. Folley J.H., Borges W., Yamasaki T. Incidence of leukemia in survivors of the atom bomb in Hiroshima and Nagasaki, Japan // American Journal of Medicine. 1952. Vol. 13. P. 311-321.

77. Fujita S., Ito T., Mizutani T. et al. miR-21 Gene expression triggered by AP-1 is sustained through a double-negative feedback mechanism // J Mol Biol. 2008. Vol. 378. P. 492-504.

78. Fujita S., Ito T., Mizutani T. et al. miR-21 gene expression triggered by AP-1 is sustained through a double-negative feedback mechanism // J Mol Biol. 2008. Vol. 378. P. 492-504.

79. Gandellini P., Rancati T., Valdagni R., Zaffaroni N. miRNAs in tumor radiation response: bystanders or participants? // Trends in molecular medicine. 2014. Vol. 20 (9). P. 529-539

80. Gil J., Peters G. Regulation of the INK4b-ARF-INK4a tumour supressor locus: all for one and one for all // Nat Rev Mol Cell Biol. 2006. Vol. 7(9). P.667-677.

81. Girardi C., De Pitta C., Casara S. et al. Analysis of miRNA and mRNA expression profiles highlights alterations in ionizing radiation response of human lymphocytes under modeled microgravity // PLoS One. 2012. Vol. 7. P. e31293.

82. Goedeccke W. Double starnd break repair mechanisms in mammalian cells. In Chromoosmeal Alterations: Methods, Results and Importance in Human Health // Obe G., Vijayalaxmi, Eds. 2007. Vol. P. 55-66.

83. Gudkov A.V., Komarova E.A. Pathologies associated with the p53 response // Cold Spring Harb Perspect Biol. 2010. Vol. 2(7). P. a001180.

84. Guled M., Lahti L., Lindholm P.M. et al. CDKN2A, NF2, and JUN are dysregulated among other genes by miRNAs in malignant mesothelioma - A miRNA microarray analysis // Genes, Chromosomes & Cancer. 2009. Vol. 48. P. 615- 623.

85. Halatsch M.E., Schmidt U., Unterberg A., Vougioukas V.I. Uniform MDM2 overexpression in a panel of glioblastoma multiforme cell lines with divergent EGFR and p53 expression status // Anticancer Res. 2006. Vol. 26. P. 4191.

86. Hau A., Ceppi P., Peter M.E. CD95 is part of a let-7/p53/miR-34 regulatory network // See comment in PubMed Commons below PLoS One. 2012. Vol. 7. P. e49636.

87. He L., He X., Lim L.P. et al. A microRNA component of the p53 tumour suppressor network // Nature. 2007. Vol. 447(7148). P. 1130-1134.

88. Heneghan H.M., Miller N., Kelly R. et al. Systemic miRNA-195 differentiates breast cancer from other malignancies and is a potential biomarker for detecting noninvasive and early stage disease // Oncologist. 2010. Vol. 15(7). P. 673-682.

89. Hermeking H. MicroRNAs in the p53 network: micromanagement of tumour suppression // Nat. Rev. Cancer. 2012. Vol. 12(9). P. 613-626.

90. Hoffman Y., Pilpel Y., Oren M. microRNAs and Alu elements in the p53-Mdm2-Mdm4 regulatory network // J Mol Cell Biol. 2014. Vol. 6(3). P. 192-197.

91. Hu W., Chan C.S., Wu R. et al. Negative regulation of tumor suppressor p53 by microRNA miR 504 // Mol. Cell. 2010. Vol. 38(5). P. 689- 699.

92. Huang S., Guo W., Tang Y., Ren D., Zou X., Peng X. miR-143 and miR-145 inhibit stem cell characteristics of PC-3 prostate cancer cells // Oncol Rep. 2012. Vol. 28(5). P. 1831-1837.

93. Huang X., Taeb S., Jahangiri S. et al. miRNA-95 mediates radioresistance in tumors by targeting the sphingolipid phosphatase SGPP1 // Cancer Res. 2013. Vol. 73(23). P. 6972-6986.

94. Huang Z., Huang D., Ni S. et al. Plasma microRNAs are promising novel biomarkers for early detection of colorectal cancer // Int J Cancer. 2010. Vol. 127(1). P. 118-126.

95. Huynh C., Segura M.F., Gaziel-Sovran A. et al. Efficient In vivo microRNA targeting of liver metastasis // Oncogene. 2011. Vol. 30(12). P. 1481-1488.

96. Iliakis G., Wu W., Wang M., Terzoudi G.I., Pantelias G.E. Backup pathways of nonhomologous end joining may have a dominant role in the formation of chromosome aberrations. In Chromosmeal Alterations: Methods, Results and Importance in Human Health // Obe G.,Vijayalaxmi, Eds. 2007. Vol. P. 67-85.

97. Imaoka T., Yamashita S., Nishimura M. et al. Gene expression profiling distinguishes between spontaneous and radiation-induced rat mammary carcinomas // J Radiat Res. 2008. Vol. 49(4). P. 349-360.

98. Iorio M.V., Ferracin M., Liu C.G. MicroRNA gene expression deregulation in human breast cancer // Cancer Res. 2005. Vol.65(16).P. 7065-7070.

99. Iorio M.V., Visone R., Di Leva G. et al. MicroRNA signatures in human ovarian cancer // Cancer Res. 2007. Vol. 67. P. 8699-8707.

100. Israel A., Sharan R., Ruppin E., Galun E. Increased MicroRNA Activity in Human Cancers // PLoS One. 2009. Vol. 4(6). P. e6045.

101. Ito A., Kawaguchi Y., Lai C.H. et al. MDM2-HDAC1-mediated deacetylation of p53 is required for its degradation // EMBO J. 2002. Vol. 21(22). P. 6236-6245.

102. Ji Z., Lee J.Y., Pan Z., Jiang B., Tian B. Progressive lengthening of 3' untranslated regions of mRNAs by alternative polyadenylation during mouse embryonic development // Proc Natl Acad Sci USA. 2009. Vol. 106. P. 7028-7033.

103. John B., Enright A.J., Aravin A. et al. Human microRNA targets // PLoS Biol. 2004. Vol. 2(11). P. e363.

104. Juanjuan Z., Kailing W., Zhenyuan L. et al. Promoter mutation of tumor suppressor microRNA-7 is associated with poor prognosis of lung cancer // Molecular and clinical oncology. 2015. Vol. 3. P. 1329-1336.

105. Kareem K. Small Molecule Inhibitors of Protein-Protein Interactions // The dissertation of Doctor of Philosophy. 2013. Pittsburgh. P.1-229.

106. Karve T.M., Cheema A.K. Small changes huge impact: the role of protein posttranslational modifications in cellular homeostasis and disease // J Amino Acids. 2011.

107. Kasinski A.L., Slack F.J. miRNA-34 prevents cancer initiation and progression in a therapeutically resistant K-ras and p53-induced mouse model of lung adenocarcinoma // Cancer Res. 2012. Vol. 72(21). P. 5576-5587.

108. Kastan M.B., Onyekwere O., Sidransky D., Vogelstein B., Craig R.W. Participation of p53 protein in the cellular response toDNA damage // Cancer Res. 1991. Vol. 51. P. 6304-6311.

109. Kato M., Paranjape T., Ullrich R. et al. The mir-34 microRNA is required for the DNA damage response in vivo in C. elegans and in vitro in human breast cancer cell // Oncogene. 2009. Vol. 28. P. 2419-2424.

110. Kawai S., Amano A. BRCA1 Regulates MicroRNA Biogenesis via the DROSHA Microprocessor Complex // Journal of Cell Biology. 2012. Vol. 197. P. 201-208.

111. Keller A., Leidinger P., Bauer A., et al. Toward the blood-borne miRNome of human diseases // Nat Methods. 2011. Vol. 8(10). P. 841-843.

112. Kelly B.D., Miller N., Karl J. Sweeney K.J et al. A Circulating MicroRNA Signature as a Biomarker for Prostate Cancer in a High Risk Group // J Clin Med. 2015. Vol. 4(7). P. 13691379.

113. Kenzelmann Broz D., Attardi L.D. In vivo analysis of p53 tumor suppressor function using genetically engineered mouse models // Carcinogenesis. 2010. Vol. 31(8). P. 1311-1318.

114. Korpela E., Vesprini D., Liu S.K.. MicroRNA in radiotherapy: miRage or miRador? // British Journal of Cancer. 2015. Vol. 112. P. 777-782.

115. Kovalchuk I., Kovalchuk O. Epigenetics in Health and Disease. 2012, P. 478.

116. Krell J., Frampton A.E., Stebbing J. MicroRNAs in the cancer clinic // Front. Biosci. (Elite Ed.). 2013. Vol. 5. P. 204-213.

117. Krichevsky A.M., Gabriely G. miR-21: a small multi-faceted RNA // J. Cell. Mol. Med. 2009. Vol. 13(1). P. 39-53.

118. Kulawiec M., Safina A., Desouki M.M. et al. Tumorigenic transformation of human breast epithelial cells induced by mitochondrial DNA depletion // Cancer Biol Ther. 2008. Vol. 7. P. 17321743.

119. Kumar M., Lu Z., Takwi A.A. et al. Negative regulation of the tumor suppressor p53 gene by microRNAs // Oncogene. 2011. Vol. 30. P. 843-853.

120. Kumar M.S., Erkeland S.J., Pester R.E. Suppression of non-small cell lung tumor development by the let-7 microRNA family // PNAS. 2008. Vol. 105. P. 3903- 3908.

121. Kussie P.H., Gorina S., Marechal V. et al. Structure of the MDM2 oncoprotein bound to the p53 tumor suppressor transactivation domain // Science. 1996. Vol. 274(5289). P. 948-953.

122. Kutanzi K., Kovalchuk O. Exposure to estrogen and ionizing radiation causes epigenetic dysregulation, activation of mitogen-activated protein kinase pathways, and genome instability in the mammary gland of ACI rats // Cancer Biology & Therapy. 2013. Vol. 14(7). P. 564-573.

123. Kutanzia K.R., Koturbasha I., Bronsonb R.T., Pogribnyc I.P., Kovalchuk O. Imbalance between apoptosis and cell proliferation during early stages of mammary gland carcinogenesis in ACI rats // Mutation Research. 2010. Vol. 694. P. 1-6.

124. Landgraf P., Rusu M., Sheridan R. et al. A mammalian microRNA expression atlas based on small RNA library sequencing // Cell. 2007. Vol, 129(7). P. 1401-1414.

125. Lanford R.E., Hildebrandt-Eriksen E.S., Petri A. et al. Therapeutic silencing of microRNA-122 in primates with chronic hepatitis C virus infection // Science. 2010. Vol. 327(5962). P. 198-201.

126. Laptenko O., Prives C. The p53-HAT connection: PCAF rules? // Cell Cycle. 2012. Vol. 11(16). P. 2975-2976.

127. Laurie N.A., Donovan S.L., Shih C.S. et al. Inactivation of the P53 Pathway in Retinoblastoma // Nature. 2006. Vol. 444. P. 61-66.

128. Lawrie C.H., Chi J., Taylor S.et al. Expression of microRNAs in diffuse large B cell lymphoma is associated with immunophenotype, survival, and transformation from follicular lymphoma // Journal of Cellular and Molecular Medicine. 2008. Vol. 13. P. 1248- 1260.

129. Lawrie C.H., Gal S., Dunlop H.M. et al. Detection of elevated levels of tumourassociated microRNAs in serum of patients with diffuse large B-cell lymphoma // Br J Haematol. 2008. Vol. 141(5). P. 672-675.

130. Le M.T., Shyh-Chang N., Khaw S.L. et al. Conserved regulation of p53 network dosage by microRNA-125b occurs through evolving miRNA-target gene pairs // PLoS Genet. 2011. Vol. 7(9). P. e1002242.

131. Le M.T., Teh C., Shyh-Chang N. et al. MicroRNA-125b is a novel negative regulator of p53 // Genes Dev. 2009. Vol. 23. P. 862-876.

132. Lee C.L., Blum J.M., Kirsch D.G. Role of p53 in regulating tissue response to radiation by mechanisms independent of apoptosis // Translational Cancer Research. 2013. Vol. 2(5). P. 412-421.

133. Lee J.Y., Kim H.J., Yoon N.A. et al. Tumor suppressor p53 plays a key role in induction of both tristetraprolin and let-7 in human cancer cells // See comment in PubMed Commons below Nucleic Acids Res. 2013. Vol. 41. P. 5614-5625.

134. Lewis B.P., Burge C.B., Bartel D.P. Conserved seed pairing, often flanked by adenosines, indicates that thousands of human genes are microRNA targets // Cell. 2005. Vol. 120(1). P. 15-20.

135. Li L., Jin H., Feng M. Type I IFN Inhibits Innate IL-10 Production in Macrophages through Histone Deacetylase 11 by Downregulating MicroRNA-145 // The Journal of Immunology. 2013. Vol. 191 (7), P. 3896-3904

136. Liu C., Kelnar K., Liu B. et al. The microRNA miR-34a inhibits prostate cancer stem cells and metastasis by directly repressing CD44 // Nat Med. 2011. Vol. 17(2). P. 211-215.

137. Liu C., Li B., Cheng Y. MiR-21 plays an Important Role in Radiation Induced Carcinogenesis in BALB/c Mice by Directly Targeting the Tumor Suppressor Gene Big-h3 // Int J Biol Sci. 2011. Vol. 7(3). P. 347-363.

138. Livak K.J., Schmittgen T.D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method // Methods. 2001. Vol. 25(4). P. 402-408.

139. Loffler D., Brocke-Heidrich K., Pfeifer G. et al. Interleukin-6 dependent survival of multiple myeloma cells involves the Stat3-mediated induction of microRNA-21 through a highly conserved enhancer // Blood. 2007. Vol. 110. P. 1330-1333.

140. Lowe S.W., Schmitt E.M., Smith S.W., Osborne B.A., Jacks T. P53 is required for radiation-induced apoptosis in mouse thymocytes // Nature. 1993. Vol. 362(6423). P. 847-849.

141. Lu J., Getz G., Miska E.A. et al. MicroRNA expression profiles classify human cancers // Nature. 2005. Vol. 435(7043). P. 834-838.

142. Lu L., Katsaros D., de la Longrais I.A. et al. Hypermethylation of let-7a-3 in epithelial ovarian cancer is associated with low insulin-like growth factor-II expression and favorable prognosis // Cancer Research. 2007. Vol. 67. P. 10117- 10122.

143. Luzhna L., Kovalchuk O. Low dose irradiation profoundly affects transcriptome and microRNAme in rat mammary gland tissues // Oncoscience. 2014. Vol. 1(11). P.751-62

144. Luzhna L., Kutanzi K., Kovalchuk O. Gene expression and epigenetic profiles of mammary gland tissue:Insight into the differential predisposition of four rat strains to mammary gland cancer // Mutation Research. 2015. Vol. 779. P. 39-56.

145. Ma L., Reinhardt F., Pan E. et al. Therapeutic silencing of miR-10b inhibits metastasis in a mouse mammary tumor model // Nat Biotechnol. 2010. Vol. 28(4). P. 341-347.

146. Mabuchi K., Kusima Sh. Leukemia and A-incidence and risk / In: Effects of A-bomb radiation on the human body // Eds. I. Shigenatsu et al. -Tokio: Harwood Academ. Publishers, Bunkodo Co. Ltd. 1995. P. 40-44

147. Maes O.C., Sarojini H., Wang E. Stepwise up-regulation of microRNA expression levels from replicating to reversible and irreversible growth arrest states in WI-38 human fibroblasts // Journal of Cellular Physiology. 2009. Vol. 221. P. 109- 119.

148. Mao A., Liu Y., Zhang H., Di C., Sun C. microRNA Expression and Biogenesis in Cellular Response to Ionizing Radiation // DNA AND CELL BIOLOGY. 2014. Vol. 33(10). P. 667-679.

149. Mar-Aguilar F., Mendoza-Ramírez J.A., Malagón-Santiago I. et al. Serum Circulating microRNA Profiling for Identification of Potential Breast Cancer Biomarkers // Disease Markers Volume. 2013. Vol. 34(3). P. 163-169.

150. Mario Lauria. Rank-Based miRNA Signatures for Early Cancer Detection // BioMed Research International. 2014. Vol. 2014. P. 7.

151. Maroof H., Salajegheh A., Smith R.A. et al. MicroRNA-34 family, mechanisms of action in cancer: a review // Curr Cancer Drug Targets. 2014. Vol.14(8). P.737-751.

152. Martello G., Rosato A., Ferrari F. et.al. A MicroRNA targeting dicer for metastasis control // Cell. 2010. Vol. 141(7). P. 1195-1207.

153. Mayr C., Hemann M.T., Bartel D.P. Disrupting the pairing between let-7 and Hmga2 enhances oncogenic transformation // Science. 2007. Vol. 315. P. 1576- 1579.

154. Meek D.W., Anderson C.W. Posttranslational modification of p53: cooperative integrators of function // Cold Spring Harb Perspect Biol. 2009. Vol. 1(6). a000950.

155. Meng F., Henson R., Wehbe-Janek H. et al. MicroRNA-21 regulates expression of the PTEN tumor suppressor gene in human hepatocellular cancer // Gastroenterology. 2007. Vol. 133. P. 647658.

156. Mertens D., Philippen A., Ruppel M. et al. Chronic lymphocytic leukemia and 13q14: miRs and more // Leuk Lymphoma. 2009. Vol. 50. P. 502-505.

157. Moll U.M., Petrenko O. The MDM2-p53 interaction // Mol Cancer Res. 2003. Vol. 1(14). P. 1001-1008.

158. Monticelli S., Ansel K.M., Xiao C. et al. MicroRNA profiling of the murine hematopoietic system // Genome Biol. 2005. Vol. 6(8). P.R71

159. Moon K., Stukenborg G.J., Keim J. // Cancer. 2006. Vol. 107(5). P. 991-998.

160. Nadiminty N., Tummala R., Lou W. et al. MicroRNA let-7c suppresses androgen receptor expression and activity via regulation of Myc expression in prostate cancer cells // J Biol Chem. 2012. Vol. 287(2). P.1527-1537

161. Nie K., Gomez M., Landgraf P. MicroRNA-mediated down-regulation of PRDM1/Blimp-1 in Hodgkin/Reed-Sternberg cells: a potential pathogenetic lesion in Hodgkin lymphomas // American Journal of Pathology. 2008. Vol. 173. P. 242- 252.

162. Nikolaev A.Y., Li M., Puskas N., Qin J., Gu W. Parc: a cytoplasmic anchor for p53 // Cell. 2003. Vol. 112(1). P. 29-40.

163. Nishida N., Yokobori T., Mimori K. et al. MicroRNA miR 125b is a prognostic marker in human colorectal cancer // Int. J. Oncol. 2011. Vol. 38(5). P. 1437-1443.

164. Pan X., Wang Z.X., Wang R. MicroRNA-21.A novel therapeutic target in human cancer // Cancer Biology & Therapy. 2010. Vol. 10(12). P. 1224-1232.

165. Pan X., Wang Zh-X., Wang R. MicroRNA-21. A novel therapeutic target in human cancer // Cancer Biology & Therapy. 2010. Vol. 10(12). P. 1224-1232.

166. Patterson M. The Trouble with Smoking // Nat Rev Genet. 2000. Vol. 1. P. 168.

167. Paul S., Amundson S.A. Development of gene expression signatures for practical radiation biodosimetry // Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2008. Vol. 71. P. 1236-1244.

168. Pegtel D.M., Cosmopoulos K., Thorley-Lawson D.A. et al. Functional delivery of viral miRNAs via exosomes // Proc Natl Acad Sci USA. 2010. Vol. 107(14). P. 6328-6333.

169. Pellegrino L., Jacob J., Roca-Alonso L. et al., Altered expression of the miRNA processing endoribonuclease Dicer has prognostic significance in human cancers // Expert Rev. Anticancer Ther. 2013. Vol. 13(1). P. 21-27.

170. Perry M.E. The Regulation of the p53-mediated Stress Response by MDM2 and MDM4 // Cold Spring Harb Perspect Biol. 2010. Vol. 2(1). P. a000968.

171. Petitjean A., Achatz M.I., Borresen-Dale A.L., Hainaut P., Olivier M. Tp53 Mutations in Human Cancers: Functional Selection and Impact on Cancer Prognosis and Outcomes // Oncogene. 2007. Vol. 26. P. 2157-2165.

172. Petitjean A., Achatz M.I., Borresen-Dale A.L., Hainaut P., Olivier M. Tp53 Mutations in Human Cancers: Functional Selection and Impact on Cancer Prognosis and Outcomes // Oncogene. 2007. Vol. 26. P. 2157-2165.

173. Preston D.L., Kusumi S., Tomonaga M. et al. Cancer incidence in atomic bomb survivors. Part III: Leukemia, lymphoma and multiple myeloma, 1950-1987 // Radiation Research. 1994. Vol. 137. P. 68-97.

174. Purmessur N. The regulation of p53-dependent microNA expression in response to genotoxic stress // Thesis submitted for the degree of Doctor of Philosophy at the University of Leicester. 2013

175. Purvis J.E., Karhohs K.W., Mock C. et al. p53 dynamics control cell fate // Science. 2012. Vol. 336. P. 1440-1444.

176. Qian B., Katsaros D., Lu L. et al. High miR-21 expression in breast cancer associated with poor disease-free survival in early stage disease and high TGFbeta1 // Breast Cancer Res Treat. 2009. Vol.117(1). P.131-140

177. Reinhart B.J., Slack F.J.,Basson M. et al. The 21-nucleotide let-7 RNA regulates developmental timing in Caenorhabditis elegans // Nature. 2000. Vol. 403. P. 901- 906.

178. Robins H., Press W.H. Human microRNAs target a functionally distinct population of genes with AT-rich 3' UTRs // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 2005. Vol. 102(43). P. 15557-15562.

179. Rodin S.N., Rodin A.S. Human Lung Cancer and P53: The Interplay between Mutagenesis and Selection // Proc Natl Acad Sci USA. 2000. Vol. 97. P. 12244-12249.

180. Rokavec M., Li H., Jiang L., Hermeking H. The p53/miR-34 axis in development and disease // J Mol Cell Biol. 2014. Vol. 6(3). P.214-230.

181. Roush S., Slack F.J. The let-7 family of microRNAs // Trends in Cell Biology. 2008. Vol. 18. P. 505- 516.

182. Roxburgh P. Manipulating the p53 pathway for cancer treatment // PhD thesis, Glasgow. 2013.

183. Russo J., Mailo D., Hu Y.F., Balogh G., Sheriff F., Russo I.H. Breast differentiation and its implication in cancer prevention // Clin Cancer Res. 2005. Vol. 11. P. 931-936.

184. Russo J., Russo I.H. et al. Biological and molecular bases of mammary carcinogenesis // Lab Invest. 1987. Vol. 57. P. 112-137.

185. Sachdeva M., Zhu S., Wu F. p53 represses c-Myc through induction of the tumor suppressor miR-145 // Proc Natl Acad Sci U S A.. 2009. Vol. 106(9). P.3207-3212.

186. Saini D., Shelke S., Mani Vannan A. et al. Transcription profile of DNA damage response genes at Go lymphocytes exposed to gamma radiation // Mol Cell Biochem. 2012. Vol. 364(1-2). P. 271-281.

187. Saleh A.D., Savage J.E., Cao L. et al. Cellular stress induced alterations in microRNA let-7a and let-7b expression are dependent on p53 // See comment in PubMed Commons below PLoS One. 2011. Vol. 6. P. e24429.

188. Saleh A.D., Savage J.E., Cao L. et al. Cellular stress induced alterations in microRNA let-7a and let-7b expression are dependent on p53 // PLoS One. 2011. Vol. 6. P. e24429.

189. Sampson V.B., Rong N.H., Han J. MicroRNA let-7a down-regulates MYC and reverts MYC-induced growth in Burkitt lymphoma cells // Cancer Research. 2007. Vol. 67. P. 9762- 9770.

190. Sandberg R., Neilson J.R., Sarma A., Sharp P.A., Burge C.B. Proliferating cells express mRNAs with shortened 3'untranslated regions and fewer microRNA target sites // Science. 2008. Vol. 320. P. 1643-1647.

191. Sasaki A., Udaka Y., Tsunoda Y. et al. Analysis of p53 and miRNA expression after irradiation of glioblastoma cell lines // Anticancer Res. 2012. Vol. 32. P. 4709-4713.

192. Sathyan P., Golden H.B., Miranda R.C. Competing interactions between micro-RNAs determine neural progenitor survival and proliferation after ethanol exposure: evidence from an ex vivo model of the fetal cerebral cortical neuroepithelium // J. Neurosci. 2007. Vol. 27. P. 8546-8557.

193. Saunders M.A, Liang H., Li W.H. Human polymorphism at microRNAs and microRNA target sites // PNAS. Vol. 104(9). P. 3300-3305

194. Schlaeger C., Longerich T., Schiller C. et al. Etiology-Dependent Molecular Mechanisms in Human Hepatocarcinogenesis // Hepatology. 2008. Vol. 47(2). P.511-520

195. Schwarzenbach H., Hoon D.S., Pantel K. Cell-free nucleic acids as biomarkers in cancer patients // Nat Rev Cancer. 2011. Vol. 11(6). P. 426-437.

196. Selbach M., Schwanhausser B., Thierfelder N. et al. Widespread changes in protein synthesis induced by microRNAs // Nature. 2008. Vol. 455(7209). P. 58-63.

197. Serrano M., Collado M. Senescence in tumours: evidence from mice and humans // Nat Rev Cancer. 2010. Vol. 10. P. 51-57.

198. Shackleton M., Vaillant F., Simpson K.J. et al. Generation of a functional mammary gland from a single stem cell // Nature. 2006. Vol. 439. P. 84-88.

199. Sheedy F.J. Turning 21: induction of miR-21 as a key switch in the inflammatory response // Front. Immunol. 2015. P.6-19.

200. Shellabarger C.J., Bond V.P., Cronkite E.P. Studies on radiation-induced mammary gland neoplasia in the rat. 4. The response of females to a single dose of sublethal total-body gamma radiation as studied until the first appearance of breast neoplasia or death of the animals // Radiat. Res. 1960. Vol. 13. P. 242-249.

201. Shukla S., Sumaria C.S., Pradeepkumar P.I. Exploring chemical modifications for siRNA therapeutics: a structural and functional outlook // ChemMedChem. 2010. Vol. 5(3). P. 328-349.

202. Si M L., Zhu S., Wu H., Lu Z., Wu F., Mo Y.Y. miR-21-mediated tumor growth // Oncogene. 2007. Vol. 26. P. 2799-2803.

203. Siegwart D.J., Whitehead K.A., Nuhn L. et al. Combinatorial synthesis of chemically diverse core-shell nanoparticles for intracellular delivery // Proc Natl Acad Sci USA. 2011. Vol. 108(32). P. 12996-13001.

204. Smith G.H. Experimental mammary epithelial morphogenesis in an in vivo model: evidence for distinct cellular progenitors of the ductal and lobular phenotype // Breast Cancer Res. Treat. 1996. Vol. 39. P. 21-31.

205. Soderholml A.L., Pukkala E., Lindqvist C., Teppo L. // Br. J. Cancer. 1994. Vol. 69. P. 784787.

206. Sui G., Affar el B., Shi Y. et al. Yin Yang 1 is a negative regulator of p53 // Cell. 2004. Vol. 117(7). P. 859-872.

207. Sundaram P., Hultine S., Smith L.M. et al. p53 responsive miR 194 inhibits thrombospondin-1 and promotes angiogenesis in colon cancers // Cancer Res. 2011. Vol. 71(24). P. 7490-7501.

208. Suzuki H.I., Yamagata K., Sugimoto K. et al. Modulation of microRNA processing by p53 // Nature. 2009. Vol. 460(7254). P. 529-533.

209. Swarbrick A., Woods S.L., Shaw A. et al. miR-380-5p represses p53 to control cellular survival and is associated with poor outcome in MYCN-amplified neuroblastoma // Nat Med. 2010. Vol. 16(10). P. 1134-1140.

210. Takagi M., Absalon M.J., McLure K.G., Kastan M.B. Regulation of p53 translation and induction after DNA damage by ribosomal protein L26 and nucleolin // Cell. 2005. Vol. 123. P. 4963.

211. Takamizawa J., Konishi H., Yanagisawa K. et al. Reduced expression of the let-7 microRNAs in human lung cancers in association with shortened postoperative survival // Cancer Research. 2004. Vol. 64. P. 3753- 3756.

212. Thompson H.J., Singh M. Rat models of premalignant breast disease // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2000. Vol. 5. P. 409-420.

213. Thomson J.M., Newman M., Parker J.S. et al. Extensive post-transcriptional regulation of microRNAs and its implications for cancer // Genes Dev. 2006. Vol. 20. P. 2202-2207.

214. Tokumaru S., Suzuki M., Yamada H. Let-7 regulates Dicer expression and constitutes a negative feedback loop // Carcinogenesis. 2008 . Vol. 29. P. 2073- 2077.

215. Toledo F., Wahl G.M. Regulating the P53 Pathway: In Vitro Hypotheses, in Vivo Veritas // Nat Rev Cancer. 2006. Vol. 6. P. 909-923.

216. Trang P., Wiggins J.F., Daige C.L. et al. Systemic delivery of tumor suppressor microRNA mimics using a neutral lipid emulsion inhibits lung tumors in mice // Mol Ther. 2011. Vol. 19(6). P. 1116-1122.

217. Tsai K.K., Chuang E.Y., Little J.B., Yuan Z.M. Cellular mechanisms for low-dose ionizing radiation-induced perturbation of the breast tissue microenvironment // Cancer Res. 2005. Vol. 65. P. 6734-6744.

218. Tsang W.P., Kwok T.T. Let-7a microRNA suppresses therapeutics-induced cancer cell death by targeting caspase-3 // Apoptosis. 2008. Vol. 13. P. 1215- 1222.

219. Valentin-Vega Y.A., Barboza J.A., Chau G.P., El-Naggar A.K., Lozano G. High Levels of the P53 Inhibitor Mdm4 in Head and Neck Squamous Carcinomas // Hum Pathol. 2007. Vol. 38. P. 1553-1562.

220. Van't Veer L.J., Dal H., van de Vijver M.J. et al. // Nature. 2002. Vol. 415. P. 530-536.

221. Viswanathan S.R.,Daley G.Q., Gregory R.I. Selective blockade of microRNA processing by lin-28 // Science. 2008 . Vol. 320. P. 97- 100.

222. Vogelstein B., Lane D., Levine A.J. Surfing the P53 Network // Nature. 2000. Vol. 408. P. 307-310.

223. Volinia S., Calin G.A., Liu C.G. et al. A microRNA expression signature of human solid tumors defines cancer gene targets // Proc Nat Acad Sci USA. 2006. Vol. 103(7). P. 2257-2261.

224. Volinia S., Calin G.A., Liu C.G. et al. A microRNA expression signature of human solid tumors defines cancer gene targets // Proc Natl Acad Sci USA. 2006. Vol. 103. P. 2257-2261.

225. Wagner W., Horn P., Castoldi M. et al. Replicative senescence of mesenchymal stem cells: a continuous and organized process // PLoS ONE. 2008. Vol. 3. P. 2213.

226. Wang Y., Zhang Y., Pan C., Ma F., Zhang S. Prediction of Poor Prognosis in Breast Cancer Patients Based on MicroRNA-21 Expression: A Meta-Analysis // PLoS One. 2015. Vol. 10(2). P. e0118647.

227. Wang Y.V., Leblanc M., Wade M., Jochemsen A.G., Wahl G. Increased radioresistance and accelerated B cell lymphomas in mice with MDMX mutations that prevent modifications by DNA-damage-activated kinases // Cancer Cell. 2009. Vol. 16. P. 33-43.

228. Waning D.L., Lehman J.A., Batuello C.N., Mayo L.D. Controlling the MDM2-Mdmx-p53 Circuit // Pharmaceuticals (Basel). 2010. Vol. 3(5). P. 1576-1593.

229. Ward J.M., Rehm S., Reynolds C.W. Pathology of tumours in laboratory animals. Tumours of the rat. Tumours of the haematopoietic system: IARC // Sci Publ. 1990. P. 625-657.

230. Weidhaas J.B., Babar I., Nallur S.M. et al. MicroRNAs as potential agents to alter resistance to cytotoxic anticancer therapy // Cancer Res. 2007. Vol. 67. P. 11111-11116.

231. Westphal C.H. Hoyes K.P., Canman C.E. et.al. Loss of atm radiosensitizes multiple p53 null tissues // Cancer Res. 1998. Vol.58(24). P.5637-5639.

232. Willers H., Held K.D. Introduction to clinical radiation biology // Hematol Oncol Clin North Am. 2006. Vol. 20. P. 1-24.

233. Wu N., Lin X. et.al. MiR-125b acts as an oncogene in glioblastoma cells and inhibits cell apoptosis through p53 and p38MAPK-independent pathways // British Journal of Cancer. 2013. Vol. 109. P. 2853-2863.

234. Xie L., Zhou J., Zhang S. et al. Integrating microRNA and mRNA expression profiles in response to radiation-induced injury in rat lung Radiation // Oncology. 2014. Vol. 9(1). P. 111.

235. Xing L., Todd N.W., Yu L. et al. Early detection of squamous cell lung cancer in sputum by a panel of microRNA markers // Mod Pathol. 2010. Vol. 23(8). P. 1157-1164.

236. Xu N., Papagiannakopoulos T., Pan G., Thomson J.A., Kosik K.S. MicroRNA-145 regulates OCT4, SOX2, and KLF4 and represses pluripotency in human embryonic stem cells // Cell. 2009. Vol. 137(4). P. 647-658.

237. Xu N., Papagiannakopoulos T., Pan G., Thomson J.A., Kosik K.S. MicroRNA-145 regulates OCT4, SOX2, and KLF4 and represses pluripotency in human embryonic stem cells // Cell. 2009. Vol. 137(4). P. 647-658.

238. Yan H.L., Xue G., Mei Q. et al. Repression of the miR 17-92 cluster by p53 has an important function in hypoxia-induced apoptosis // EMBO J. 2009. Vol. 28(18). P. 2719-2732.

239. Yokoro K., Seyama T., Yanagihara K. Experimental radiation carcinogenesis in rodents. // Cancer in atomic bomb survivors. In A. Kagan, and I. Shigematsu, eds. 1986. P. 89-112.

240. Yu C.C., Tsai L.L., Wang M.L., et.al. miR145 targets the SOX9/ADAM17 axis to inhibit tumor-initiating cells and IL-6-mediated paracrine effects in head and neck cancer // Cancer Res. 2013. Vol. 73. P. 3425-3440.

241. Yu J., Vodyanik M.A., Smuga-Otto K. et al. bInduced pluripotent stem cell lines derived from human somatic cells // Science. 2007. Vol. 318. P. 1917- 1920.

242. Yuan A., Farber E.L., Rapoport A.L. et al. Transfer of microRNAs by embryonic stem cell microvesicles // PLoS One. 2009. Vol. 4(3). P. e4722.

243. Zhang H., Lee J.Y., Tian B. Biased alternative polyadenylation in human tissues // Genome Biol. 2005. Vol. 6. P. 100.

244. Zhang H.L., Yang L.F., Zhu Y. et al. Serum miRNA-21: elevated levels in patients with metastatic hormone-refractory prostate cancer and potential predictive factor for the efficacy of docetaxel-based chemotherapy // Prostate. 2011. Vol. 71(3). P. 326-331.

245. Zhang J., Sun Q., Zhang Z. et al. Loss of microRNA-143/145 disturbs cellular growth and apoptosis of human epithelial cancers by impairing the MDM2-p53 feedback loop // Oncogene. 2013. Vol.32(1). P.61-9.

246. Zhang J., Sun Q., Zhang Z., Ge S., Han Z., Chen W. Loss of microRNA-143/145 disturbs cellular growth and apoptosis of human epithelial cancers by impairing the MDM2-p53 feedback loop // Oncogene. 2013. Vol. 32. P. 61-69.

247. Zhang J., Wang Y., Chen X. et.al. MiR-34a suppresses amphiregulin and tumor metastatic potential of head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) // Oncotarget. 2015. Vol. 10 (6). P. 7454-7469.

248. Zhao L., Bode A.M., Cao Y., Dong Z. Regulatory mechanisms and clinical perspectives of miRNA in tumor radiosensitivity // Carcinogenesis 2012. Vol. 33. P. 2220-2227.

249. Zhu H., Dougherty U., Robinson V. et al. EGFR signals downregulate tumor suppressors miR 143 and miR 145 in western diet-promoted murine colon cancer: role of G1 regulators // Mol. Cell. Proteomics. 2011. Vol. 9(7). P. 960-975.

250. Zhu S., Wu H., Wu F., Nie D., Sheng S., Mo Y.Y. MicroRNA-21 targets tumor suppressor genes in invasion and metastasis // Cell Res. 2008. Vol. 18. P. 350-359.

251. zur Hausen H. Papillomaviruses and cancer:from basic studies to clinical application // Nat Rev Cancer. 2002. Vol. 2. P. 342-50.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор благодарит научного руководителя Михайлова В.Ф. и сотрудников лаборатории молекулярной биологии и генетики радиационных эффектов ФМБЦ имени А.И.Бурназяна за неоценимую помощь в выполнении исследований.