Изучение антигенной структуры поверхностных структурных белков вируса Западного Нила тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Богачек, Мария Владимировна

• Богачек, Мария Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Богачек, Мария Владимировна

Список использованных сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературных данных. Морфологическая, эпидемиологическая и клиническая характеристика ВЗН.

1.1. Общая характеристика ВЗН.

Классификация флавивирусов.

1.2. Эпидемиология ВЗН.

1.3. Клиническая картина ЛЗН.

1.4. Циркуляция ВЗН в природных очагах.

1.5. Структура вириона ВЗН и родственных флавивирусов.

1.6. Цикл репродукции флавивирусов в клетке хозяина.

1.7. Моноклональные антитела против структурных белков ВЗН 41 и их использование для изучения антигенной структуры.

1.8. Рекомбинантные белки, моделирующие структурные белки Е и М флавивирусов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение антигенной структуры поверхностных структурных белков вируса Западного Нила»

Актуальность проблемы.

Вирус Западного Нила (ВЗН), относящийся к семейству Flaviviridae, является возбудителем инфекционного заболевания человека - лихорадки Западного Нила (J13H). Клинические формы течения JT3H разнообразны, от бессимптомных форм заболевания до тяжелых менингоэнцефалитов с высокой летальностью (Campbell G.L. et al, 2002). В настоящее время отсутствуют специфические средства терапии и профилактики JT3H. Нерешенной остается проблема специфичности и чувствительности разрабатываемых диагностических систем для выявления данного заболевания.

Глобальное распространение ВЗН на территории Евразии, Африки, Австралии, Северной Америки сочетается с увеличением частоты вспышек J13H с преобладанием тяжелых форм течения заболевания (Petersen L.R. et al, 2001). На территории России вспышки JI3H были описаны в южных регионах европейской части: Астраханской, Волгоградской областей и Краснодарского края (Lvov D.K. et al, 2004). В 2002 году ВЗН был также обнаружен в южных регионах Западной Сибири (Терновой В.А. и др, 2004). Эпидемиологические данные позволяют предполагать дальнейшее расширение ареала и активацию природных очагов ВЗН. Высокая чувствительность широкого спектра млекопитающих, птиц и членистоногих обусловливает распространение ВЗН с высокой скоростью после вторжения на новые территории. Ярким примером быстрой экспансии ВЗН является его распространение по территории Северной Америки в период с 1999 года, когда была зафиксирована первая в истории Северной Америки вспышка J13H в Нью -Иорке, по 2005 год. В настоящее время ареал ВЗН охватывает полностью территорию США, южных провинций Канады, север Мексики и страны Карибского Бассейна (Dauphin G. et al, 2004). Ежегодно регистрируется высокая заболеваемость JI3H, в 2005 году выявлено 2819 случаев J13H со 105 летальными исходами (http://www.cdc.gov/ncidod/dvbid/westnile).

Повышению заболеваемости способствует наличие множества путей передачи ВЗН: наряду с заражением ВЗН посредством укуса комаров, описано инфицирование человека при переливании крови, кормлении грудью, трансплантации органов, пересадки стволовых клеток. Отсутствие диагностических систем для проверки донорской крови и органов на наличие ВЗН может привести к увеличению числа иатрогенных случаев заражения людей.

Таким образом, всемирное распространение ВЗН и рост заболеваемости J13H повышает актуальность задач по созданию специфических средств профилактики, диагностики и лечения данного заболевания. На современном этапе решение проблемы связано с исследованием антигенной структуры флавивирусов и выявлением наиболее иммунологически значимых участков структурных белков для последующего применения знаний в области создания полиэпитопных вакцин и систем диагностики.

Ранее картирование антигенных детерминант вирусов Марбург и Эбола было успешно проведено с использованием технологии создания рекомбинантных полипептидов (Sorokin A.V. et al, 2002; Рудзевич Т.Н. и др, 2003). В данной работе использовался этот же подход для картирования антигенных детерминант структурных белков ВЗН, формирующихся из различных фрагментов полипептидной цепи. Принципиальным отличием использованного подхода было наличие данных рентгеноструктурного анализа белка Е ВКЭ, что позволило, используя структурную схожесть белка Е флавивирусов, сконструировать короткие рекомбинантные полипептиды с минимальными нарушениями структуры доменов.

Цели и задачи исследования.

Основной целью нашей работы являлось изучение антигенной структуры поверхностных структурных белков Е и М ВЗН.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи: исследование иммунохимических свойств рекомбинантных полипептидов, моделирующих структуру белков Е и М ВЗН;

- создание коллекций гибридом, секретирующих моноклональные антитела (МКА) против эпитопов белков Е и М ВЗН;

- картирование белка Е ВЗН при помощи созданных МКА;

- исследование биологической активности полученных МКА посредством реакций нейтрализации (РН) и реакции торможения гемагглютинации (РТГА); изучение перекрестной реактивности МКА с другими флавивирусами: вирусом клещевого энцефалита (ВКЭ) и вирусом Японского энцефалита (ВЯЭ); поиск схожих по структуре эпитопов белков prM, М и белка Е взн.

Научная новизна и практическая ценность.

В результате проделанной работы впервые получены рекомбинантные полипептиды, соответствующие иммунологически значимым участкам поверхностного структурного белка Е Российского штамма LEIV-Vlg99-27889-human (Vlg 27889) ВЗН.

Получены оригинальные коллекции гибридом путем слияния клеток мышиной миеломы NS0 и клеток селезенки мышей линии Balb/C, иммунизированных полученными рекомбинантными полипептидами: двенадцать типов МКА распознавали участок 1-180 аминокислотных остатков (а.о.) и семь типов МКА - участок 260-466 а.о. белка Е ВЗН.

Впервые получены МКА, распознающие район 86-126 а.о. домена II, где расположен пептид слияния (98-110 а.о.) флавивирусов, который обеспечивает слияние вирусной и клеточной мембран.

Ранее Протопоповой Е.В. были получены МКА 10Н10 против эпитопа белка Е ВКЭ, распознающего клеточный рецептор - ламинин связывающий белок (Протопопова Е.В. с соавт., 1996). Картирование эпитопа для антирецепторных МКА 10Н10 между 53 и 86 а.о. домена II белка Е ВЗН показало пространственную близость пептида слияния и ко-рецепторного района белка Е, взаимодействующего с ламинисвязывающим белком (ЛСБ) на поверхности клеток.

Мозаичность взаимодействия МКА с короткими рекомбинантными полипептидами и белком Е вируса клещевого энцефалита позволила выявить не менее шести различных антигенных детерминант в составе доменов I и II гликопротеина Е ВЗН. Результаты конкурентного ИФА позволили идентифицировать не менее 7 различных эпитопов в составе участка 260 -466 а.о. гликопротеина Е ВЗН. Полученные данные показали, что полипептид Е260-466 содержит эпитопы, индуцирующие образование вируснейтрализующих антител и антител с антигемагглютинирующей активностью.

Впервые созданы рекомбинантные полипептиды с аминокислотной последовательностью, соответствующей белкам М и его предшественнику ргМ. Получены оригинальные МКА, распознающие эпитопы белка М ВЗН.

Показана возможность индуцирования вируснейтрализующих антител белком М ВЗН. Впервые описано наличие эпитопов со схожей структурой в пределах 260-466 а.о. белка Е и белка М ВЗН.

Полученные данные важны для разработки полиэпитопных вакцин, не несущих дополнительной антигенной нагрузки. В результате проведенной работы получены видоспецифические антитела и рекомбинантные полипептиды, которые могут быть использованы для разработки диагностических систем и терапевтических средств. Дальнейшее исследование ранних этапов взаимодействия ВЗН с клеткой хозяина с помощью созданных МКА поможет найти новые подходы к предотвращению заболевания ЛЗН.

Апробация работы и публикации.

Материалы диссертации были представлены на следующих конференциях:

- Международная школа - семинар "6th John Humphrey advanced summer programme in immunology", Пущино, 2002;

- Международная конференция " Прогресс в фундаментальных и прикладных науках для здоровья человека", Судак, 2004;

- Международная конференция "Chemical and Biological Problems of Proteomics", Новосибирск, 2004;

- Международная конференция FEBS "Frontiers of cellular microbiology and cell biology", Сан Фелиу, Испания, 2004;

- Международная школа - семинар DAAD ""Current trends in comparative immunology", Санкт - Петербург, 2005;

- Всероссийская научно - практическая конференция "Современная ситуация и перспективы борьбы с клещевыми инфекциями в XXI веке", Томск, 2006;

- Международная конференция FEBS "Interface of cell biology and cellular microbiology. Macromolecular complexes in microbial pathogenesis, membrane trafficking and cell signalling", Сан Фелиу, Испания, 2006;

- Российская научная конференция с международным участием "Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера", Новосибирск, 2006.

По материалам диссертации опубликована статья. Данные получены лично автором и в соавторстве с к.б.н. Протопоповой Е.В., к.б.н. Терновым В.А., Ивановой А.В., к.б.н. Качко А.В., к.ф.-м.н. Иванисенко В.А.

Положения, выносимые на защиту:

1. Рекомбинантные полипептиды ЕМ80, E53.I26, Ei-86, E26o-466, prM, М31.75-Е 1.зо имитируют соответствующие участки гликопротеина Е и белков М, ргМ ВЗН.

2. Получены три коллекции гибридом: из двенадцати типов гибридом, синтезирующих МКА против эпитопов участка 1-180 а.о. белка Е ВЗН; из семи типов гибридом, синтезирующих МКА против эпитопов участка 260-466 а.о. белка Е ВЗН; из шести типов гибридом, синтезирующих видоспецифические МКА против участка 31-75 а.о. белка М ВЗН.

3. Обнаружено 13 различных антигенных детерминант в структуре белка Е ВЗН: 6 эпитопов между 1-180 а.о. белка Е ВЗН, 7 эпитопов - в составе участка 260 - 466 а.о. белка Е ВЗН, включая индуцирующие образование вируснейтрализующих антител. Не менее четырех эпитопов в структуре участка 31-75 а.о. белка М ВЗН.

4. Локализован эпитоп для МКА 10Н10, распознающих сайт связывания гликопротеина Е ВКЭ с ламининсвязывающим белком, между 53 и 86 а.о. домена II белка Е ВЗН.

5. Локализованы группо - и типоспецифических эпитопы в пределах участков 1 - 180 и 260 - 466 а.о. белка Е ВЗН.

6. Показано сходство по структуре эпитопов, локализованных между

260 - 466 а.о. гликопротеина Е ВЗН и 31 - 75 а.о. белка М ВЗН.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Богачек, Мария Владимировна

Выводы.

1. Показано, что рекомбинантные полипептиды Ei180, E]g6, Е53-126, Е2бо-4бб, ргМ, М3].75 - Е]30 имитируют антигенную структуру соответствующих белков ВЗН.

2. Созданы коллекции: из двенадцати типов гибридом, синтезирующих МКА против эпитопов участка 1-180 а.о. белка Е ВЗН; из семи типов гибридом, синтезирующих МКА против эпитопов участка 260-466 а.о. белка Е ВЗН; из шести типов гибридом, синтезирующих видоспецифические МКА против участка 31-75 а.о. белка М ВЗН.

3. С помощью панели МКА изучена антигенная структура белка Е ВЗН:

- Не менее 6 эпитопов обнаружено на N - концевом фрагменте 1-180 а.о. белка Е ВЗН. Локализован группоспецифический эпитоп II-b для антирецепторных МКА 10Н10, распознающих сайт связывания белка Е ВЗН с предполагаемым клеточным рецептором - ЛСБ, между 53 и 86 а.о. домена II белка Е ВЗН.

- Методом КИФА было выявлено 7 эпитопов на С - концевом фрагменте 260466 а.о. белка Е ВЗН. Группоспецифический эпитоп I - 4С10 и видоспецифический эпитоп III - ЗВ9 вызывают образование вирус -нейтрализующих и тормозящих гемагглютинацию антител.

4. Исследование перекрестной реактивности МКА выявило:

- 4 видоспецифических эпитопа (I-a, I-b, II-а, П-с) и 2 группоспецифических (II-b, II-d) на N - концевом фрагменте 1-180 а.о. белка Е ВЗН,

- 2 видоспецифических эпитопа (III - 5А4, III - ЗВ9) и 5 группоспецифических (I - 8D9, I - 4С10, II - 8G8, II - ЗА6, II - 6Н4) на С -концевом фрагменте 260-466 а.о. белка Е ВЗН.

5. Не менее четырех видоспецифических эпитопа было обнаружено в структуре С - концевой части 31 - 75 а.о. белка М. Эпитоп I, распознаваемый МКА 7D11, связан с нейтрализацией инфекционности ВЗН.

6. Установлено наличие двух схожих эпитопов (I - 4С10; I - 8D9) в пределах 260-466 а.о. белка Е ВЗН и 3 эпитопов (I, III, IV) участка 31 - 75 а.о. белка М ВЗН.

Работа, опубликованная по теме диссертации:

Богачек М.В., Протопопова Е.В., Терновой В.А., Качко А.В., Иванова А.В. Иванисенко В.А., Локтев В.Б. Иммунохнмические свойства рекомбинантных полипептидов, моделирующих домены I и II белка Е вируса Западного Нила.// Молекулярная биология, №5, с. 813 - 822, 2005.

Участие в конференциях:

1. Богачек М.В., Протопопова Е.В., Терновой В.А., Качко А.В., Иванова А.В., Иванисенко В. А., Швалов А.Н., Локтев В.Б. Иммунохимические свойства белка ргМ и С - концевого фрагмента белка М вируса Западного Нила.// Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера, Российская научная конференция с международным участием, стр. 187, Новосибирск 2006.

2. Богачек М.В., Протопопова Е.В., Терновой В.А., Качко А.В., Иванова А.В. Иванисенко В.А., Локтев В.Б. Иммунохимические свойства рекомбинантных полипептидов, моделирующих домены I и II белка Е вируса Западного Нила. // Современная ситуация и перспективы борьбы с клещевыми инфекциями в XXI веке, Всероссийская научно-практическая конференция, стр. 22 - 23, Томск 2006.

3. Bogachek М. V., Protopopova Е. V., Ternovoy V. A., Kachko А. V., Ivanova

A.V., Ivanisenko V.A., Loktev V. В. Immunochemical properties of short recombinant polypeptides of protein E of West Nile virus bearing epitopes of domains I and II// Current trends in comparative immunology, DAAD Summer School, p. 12, St. Petersburg 2005.

4. Bogachek M. V., Protopopova E. V., Ternovoy V. A., Ivanova A. V., Loktev V.

B. Laminin-binding protein mediates West Nile virus-host cell binding as co-receptor. // Frontiers of cellular microbiology and cell biology, FEBS workshop, publication on-line: http://www.esf.org/esfeurescoconference.php, San Feliu de Guixols, Spain 2004.

5. Bogachek M. V., Protopopova E. V., Ternovoy V. A., Loktev V. B. Epitopes of 1-180 aa recombinant polypeptide and viral protein E of the West Nile virus are similar// Chemical and Biological Problems of Proteomics, International conference, p. 79, Novosibirsk 2004.

6. Bogachek M. V., Protopopova E. V. Investigation of immunogenic properties and variability of West Nile virus modern strains // Progress in fundamental and applied sciences for human health, International Congress, p.76, Sudak, Ukraine 2004.

7. Bogachek M.V. Receptor epitope on protein E of the West Nile and tick-borne encephalitis viruses react with the same monoclonal antibody // 6th John Humphrey advanced summer programme in immunology, p.20, Pushchino 2002.

Благодарности.

Автор выражает глубокую благодарность своему научному руководителю Локтеву Валерию Борисовичу за организацию работы и помощь в апробации полученных результатов. Искреннюю благодарность автор выражает Протопоповой Елене Викторовне за обучение практическим методам, консультации при написании совместных работ и помощь в организации экспериментов. Автор выражает глубокую благодарность проф. Львову Д.К. и сотрудникам его лаборатории за предоставление штаммов LEIV-Vlg99-27889-human ВЗН. Автор приносит благодарность соавторам и рецензентам, благодаря которым стало возможным опубликование результатов проделанной работы: Терновому В. А., Качко А. В., Ивановой А. В., Иванисенко В. А., Швалову А. Н., Гилевой И. П., Сиволобовой Г. Ф., Гашниковой Н. М., а также всем сотрудникам отдела молекулярной биологии флавивирусов и вирусных гепатитов за практическую и консультационную помощь.

Исследования были поддержаны грантом Международного научнотехнического центра [МНТЦ-2087] и Федеральной целевой научнотехнической программой Министерства промышленности, науки и технологий РФ. Исследования по построению пространственных моделей белков были поддержаны грантом РФФИ № 05-04-49283 и Госконтрактами 02.434.11.3004 от 01.04.2005 и № 02.467.11.1005 от 30.09.2005

Идентификация перспективных мишеней действия новых лекарственных препаратов на основе реконструкции генных сетей" с Федеральным агентством по науке и инновациям в рамках федеральной целевой научно-технической программы "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники" на 2002-2006 годы.

Заключение.

Полученные данные свидетельствуют об успешности применения рекомбинантных полипептидов для изучения антигенной структуры флавивирусов. Несмотря на обширный объем знаний, полученный в отношении строения белка Е Североамериканских штаммов ВЗН (Chu J.J.H. et al, 2005; Beasley D.W.C. et al, 2002; Volk D.E. et al, 2004; Nybakken G.E. et al, 2005), аналогичные исследования структуры отечественных штаммов отсутствовали. Кроме того, практически не проводилось исследования роли белков М и ргМ ВЗН в формировании противовирусного иммунитета.

Выбор участков моделирования 1-86, 53-126, 1-180, 260 - 466 а.о. белка Е ВЗН был основан на полученных ранее данных об иммунологически значимых участках белка Е флавивирусов. Выбранные участки включали: (1) пептид слияния (98 - 113 а.о.), обеспечивающий слияние мембран флавивирусов и клетки хозяина (Allison S.L. et al, 2001; Roehrig J.T. et al, 1989; Roehrig J.T. et al, 1990), (2) участки доменов II и III, индуцирующие образование вируснейтрализующих антител (Chu J.J.H. et al, 2005; Beasley D.W.C. et al, 2002; Volk D.E. et al, 2004; Nybakken G.E. et al, 2005), (3) RGD -мотив, обеспечивающий взаимодействие вируса и интегрина на поверхности клетки хозяина (Pytela R., 1987).

Проверка сохранности антигенной структуры рекомбинантными полипептидами подтвердила, что все полученные фрагменты успешно моделируют соответствующие участки белка Е ВЗН. Это позволило использовать в дальнейшем созданные полипептиды E].|g0 и Е2бо-4бб Для

131 создания уникальных коллекций гибридом, секретирующих МКА против иммунологически значимых участков белка Е ВЗН.

Классическим методом гибридизации были получены двенадцать типов МКА против Е]ш и семь типов МКА против Е2бо-4бб- Взаимодействие созданных МКА и белка Е ВЗН, подтвержденное методами ИФА и иммуноблотинга, подтвердило антигенную тождественность рекомбинантных полипептидов и участков белка Е ВЗН.

Ранее при исследовании взаимного расположения эпитопов широко применялся метод конкурентного ИФА. Успехи рекомбинантной технологии позволили нам совместить этот апробированный подход с изучением взаимодействия МКА с короткими фрагментами белка Е ВЗН, моделируемыми рекомбинантными полипептидами. Таким образом удалось картировать не менее тринадцати различных антигенных детерминант в структуре белка Е ВЗН: шесть эпитопов в пределах участка 1-180 а.о. и семь эпитопов в пределах участка 260-466 а.о. При этом не менее семи типов МКА распознавали участок 86-126 а.о. белка Е ВЗН, где расположен пептид слияния.

Дальнейшее изучение взаимодействия созданных МКА с вирусами ВКЭ и ВЯЭ позволило выявить перекрестно реагирующие МКА, распознающие эпитопы в пределах участков 1-180 и 260-466 а.о. белка Е ВЗН. Полученные данные важны при разработке полиэпитопных вакцин в районах совместной циркуляции флавивирусов.

Два типа полученных МКА против Е2бо-4бб и одиннадцать типов МКА против Ем go являлись видоспецифическими и могут быть успешно использованы при разработке высокоспецифичных тест систем.

Исследование биологической активности МКА показало, что два типа полученных МКА (ЗВ9 и 4С10) против участка 260-466 а.о. белка Е ВЗН обладали вируснейтрализующей активностью, при этом МКА ЗВ9 были активны в РТГА. Механизм блокирования проникновения ВЗН в клетки VERO данными МКА мог включать их взаимодействие с рецептор -распознающим эпитопом, расположенным в пределах домена III белка Е ВЗН. Полученные вируснейтрализующие МКА являются основой для разработки терапевтических рекомбинантных антител.

Проведенные исследования позволили получить новые знания о молекулярном механизме ранних этапов взаимодействия вируса и клетки. Картирование эпитопа для антирецепторных МКА 10Н10 между 53 и 86 а.о. домена II белка Е ВЗН показало пространственную близость пептида слияния и ко-рецепторного района белка Е, взаимодействующего с ламинисвязывающим белком на поверхности клеток. Пространственная модель белка Е позволила предположить, что Ьс-петля (73-89 а.о.) домена II взаимодействует с ЛСБ и вместе с cd-петлей (пептид слияния) участвует в ранних фазах проникновения вирионов флавивирусов в клетку. Информация о локализации участка, распознаваемого антирецепторными антителами МКА 10Н10, в пределах домена II белка Е ВЗН должна быть учтена при разработке вакцин нового поколения.

Последующие исследования иммунохимических свойств рекомбинантных полипептидов, моделирующих белок ргМ ВЗН и иммунодоминантный участок 31-75 а.о. белка М ВЗН, позволили получить целый комплекс знаний, важный для разработки полиэпитопных вакцин. Во-первых, следует обратить внимание на наличие эпитопов, индуцирующих вируснейтрализующие антитела в пределах участка 31-75 а.о. белка М ВЗН. Полученные данные подтверждаются результатами зарубежных исследователей о важной роли белков М и ргМ в развитии противовирусного иммунитета. Кроме того, были получены данные о наличии схожих эпитопов в пределах участка 31-75 а.о. белка М, белка ргМ и участка 260-466 а.о. белка Е ВЗН, включающего рецептор - распознающий эпитоп. Таким образом, участок 31-75 а.о. белка М ВЗН является иммунодоминантным и крайне привлекательным для включения в структуру полиэпитопных вакцин.

Суммарные данные о функциональной значимости участков белков Е и М ВЗН, полученные в ходе проведенного исследования, представлены в таблице 12.

Основываясь на данных зарубежных авторов о более высокой специфичности белков М и ргМ флавивирусов по сравнению с белком Е, можно было ожидать специфичность созданных МКА против данных белков.

Ожидания оправдались - все шесть типов полученных против белка ргМ

МКА являлись высокоспецифичными, не взаимодействуя с родственными флавивирусами - ВКЭ и ВЯЭ. Будущие системы детекции ВЗН,

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Богачек, Мария Владимировна, 2006 год

1. Белавин П.А. Нетесова Н.А., Решетников С.С., Иванисенко В.А., Ерошкин A.M., Протопопова Е.В., Локтев В.Б., Малыгин Э.Г. Экспрессия фрагментов гена Е вируса японского энцефалита в клетках Escherichia coli.// Биотехнология.- 1997.- № 3- С. 3-9.

2. Биокинетика: Практический курс. Под ред. Варфоломеев С. Д., Гуревич К. Г., Москва, "Фаир пресс", 1999.

3. Гайдамович С.Я., Локтев В.Б., Лаврова Н.А. Кросс-реактивность, выявленная при помощи моноклональных антител, между вирусом клещевого энцефалита и вирусом венесуэльского энцефаломиелита лошадей.// Вопр. Вирусологии,- 1990- № 3- С. 221-225.

4. Иммуноферментный анализ. Под ред. Нго Т.Т., Ленхоффа Г., Москва, "Мир", 1988, Иммунопероксидазные методы с использованием системы авидин-биотин.- С. 413 -423.

5. Моноклональные антитела. Под ред. Кеннет Р.Г., Мак-Керн Т.Дж., Бехтол К.Б., Москва, "Мир", 1983, Гибридомы: новый уровень биологического анализа. С. 365 - 375.

6. Общая и частная вирусология. Под ред. Гайдамович С .Я., Логинов Н.Б. 1982. Семейство Togaviridae,M., т.2 С. 49 - 94.

7. Протопопова Е.В., Хусаинова А.Д., Коновалова С.Н., Локтев В.Б. Получение и характеризация антиидиотипических антител несущих на своей поверхности гемагглютинирующие паратопы вируса клещевого энцефалита.// Вопр. Вирусологии 1996- №2- С. 50-53.

8. Adams S.C., Broom А.К., Sammels L.M., Hartnett A.C., Howard M.J., Coelen R.J., Mackenzie J.S. and Hall R.A. Glycosylation and antigenic variation among Kunjin virus isolates.// Virology.- 1995.- V. 206- P. 49-56.

9. Allison S. L, Stadler K., Mandl C. W., Kunz C. and F. X. Heinz. Synthesis and secretion of recombinant tick-borne encephalitis virus protein E in soluble and particulate form.// J. Virol.- 1995.- V. 69- P. 5816-5820.

10. Allison S.L., Schalich J., Stiasny K., Mandl C.W. and Heinz F.X. Mutational evidence for an internal fusion peptide in flavivirus envelope protein E.// J. Virology.- 2001,- V. 75- P. 4268-4275.

11. Allison S.L., Schalich J., Stiasny K., Mandl C.W., Kunz C. and Heinz F.X. Oligomeric rearrangement of tick-borne encephalitis virus envelope proteins induced by an acidic pH.// J. Virol.- 1995.- V. 69- P. 695-700.

12. Allison S.L., Stiasny К., Stadler К., Mandl C.W. and Heinz F.X. Mapping of Functional Elements in the Stem-Anchor Region of Tick-Borne Encephalitis Virus Envelope Protein E.// J. Virol.- 1999.- V.73- P. 5605— 5612.

13. Bakonyi Т., Hubalek Z., Rudolf I. and Nowotny N. Novel flavivirus or new lineage of West Nile virus, central Europe.// Emerg. Infect. Dis.- 2005.- V. 11-P. 225-231.

14. Beasley D.W.C. and Barrett A.D.T. Identification of neutralizing epitopes within structural domain III of the West Nile vims envelope protein.// J. Virol.- 2002.- V. 76- P. 13097 13100.

15. Besselaar T.G. and Blackburn N.K. Antigenic analysis of West Nile virus strains using monoclonal antibodies.// Arch. Virol.- 1988.- V. 99- P.75-88.

16. Butrapet S., Kimura-Kuroda J., Zhou D.-Sh. and Yasui K. Neutralizing mechanism of a monoclonal antibody against Japanese encephalitis virus glycoprotein E.//Am. J. Trop. Med. Hyg.- 1998,- V.58- P. 389-398.

17. Calisher C.H., Karabatsos N. (1988), Arbovirus serogroups: definition and geographic distribution., in The arboviruses: epidemiology and ecology.,ed.

18. Monath T.P., CRC Press, Inc., Baca Raton, FLA, p.19-57.

19. Campbell G.L., Ceianu C.S., Savage H.M. Epidemic West Nile encephalitis in Romania: waiting for history to repeat itself.// Ann. N. Y. Acad. Sci.-2001,-V. 951-P. 94-101.

20. Campbell G.L., Marfin A.A., Lanciotti R.S. and Gubler D.J. West Nile vims. //Lancet. Infect. Dis.- 2002,- V. 9- P. 519-529.

21. Cardosa M. J., Wang S. M., Sum M. S. H. and Tio P.H. Antibodies against PrM protein distinguish between previous infection with dengue and Japanese encephalitis viruses.// BMC Microbiology.- 2002.- V.5- P. 2-9.

22. Cecilia D. and Gould E.A. Nucleotide changes responsible for loss of neuroinvasiveness in Japanese encephalitis vims neutralization-resistant mutants.//Virology.- 1991.- V. 181- P.70-77.

23. Chambers T.J., Hanh C.H., Galler R. and Rice C.M. Flavivirus genome organization, expression and replication.// Annu. Rev. Microbiol.- 1990.-V.44- P. 649-688.

24. Chanas A.S., Johnson B.K. and Simpson D.I.H. Antigenic relationships of alfaviruses by a simple microculture cross-neutralizations method.// J. Gen. Virol.- 1976.- V. 32- P. 295-300.

25. Charrel R.N., Brault A.C., Gallian P., Lemasson J.-J., Murgue В., Murri S.,

26. Pastorino В., Zeller H., Chesse R., Micco P. and Lamballeriea X.

27. Evolutionary relationship between Old World West Nile virus strains. Evidence for viral gene flow between Africa, the Middle East, and Europe.// Virology.- 2003.- V.315- P. 381-388.

28. Chu J.J. and Ng M.L. Interaction of West Nile Virus with alphaVbeta3 integrin mediates virus entry into cells.// The J. Biol. Chem.- 2004. -V. 279-P. 54533-54541.

29. Chu J.J., Rajamanonmani R., Li J., Bhuvanakantham R., Lescar J. and Ng M.L. Inhibition of West Nile virus entry by using a recombinant domain III from the envelope glycoprotein.// J. Gen. Virol.- 2005.- V. 86- P. 405-412.

30. Clarke D.A. and Casals J. Techniques for hemagglutination and hemagglutination inhibition with arthropod-born viruses.// Amer. J. Trop. Med. Hyg.- 1958.- V.7- P. 561-573.

31. Crill W. D. and Roehrig J. T. Monoclonal antibodies that bind to domain III of dengue virus E glycoprotein are the most efficient blockers of virus adsorption to Vera cells.// J. Virol.- 2001.- V.75- P. 7769-7773.

32. Damle R.G., Yeolekar L.R. and Rao B.L. Strain analysis and epitope mapping of West Nile virus using monoclonal antibodies.// Act. Virol.- V. 42-P. 389-395.

33. Dauphin G., Zientara S., Zeller H. and Murgue B. West Nile: worldwide current situation in animals and humans.//Comp. Immunol. Microbiol. Infect.Dis. -2004.- V.27- P.343-355.

34. Elshuber S., Allison S.L., Heinz F. X. and Mandl C. W. Cleavage of protein prM is necessary for infection of BHK-21 cells by tick-borne encephalitis virus.//J. of Gen. Virology.- 2003,- V.84- P. 183-191.

35. Gao G.F, Hussain M.H., Reid H.W. and Gould EA. Identification of naturally occurring monoclonal antibody escape variants of louping ill virus.// J. Gen. Virol.- 1994.- V. 75- P. 609-614.

36. Gaunt M.W., Sail A.A., Lamballerie X., Falconar A.K., Dzhivanian T.I. and Gould E.A. Phylogenetic relationships of flaviviruses correlate with their epidemiology, disease association and biogeography.// J. Gen. Virol.- 2001.-V. 82-P. 1867-1876.

37. Gefter M.L., Margulies D.H. and Scharft M.D. A simple method for polyethylene glycol-promoted hybridization of mouse myeloma cells.// Somat. Cell. Genet.- 1977.- V.3- P.231-236.

38. Guirakhoo F., Hunt A.R., Lewis J.G. and Roehrig J.T. Selection and partial characterization of dengue 2 virus mutants that induce fusion at elevated pH.// Virology.- 1993,- V.194- P. 219-223.

39. Hall R.A., Burgess G.W., Kay B.H. and Clancy P. Monoclonal antibodies to Kunjin and Kokobera viruses.//Immunol. Cell. Biol.-1991.- V. 69- P. 47-49.

40. Hanna J.N., Ritchie S.A., Phillips D.A., Shield J., Bailey M.C., Mackenzie

41. J.S., Poidinger М., McCall В.J. and Mills P.J. Experience with WN virus in the Old World and SLE. An outbreak of Japanese encephalitis in the Torres Strait, Australia, 1995.//Med. J.- 1996,- V.165- P. 256-260.

42. Hasegawa H., Yoshida M., Shiosaka Т., Fujita S. and Kobayashi Y. Mutations in the envelope protein of Japanese encephalitis virus affect entry into cultured cells and virulence in mice.//Virology.- 1992,- V.191- P. 158165.

43. Hayes C.G. (1989), West Nile fever., in: The arboviruses: epidemiology and ecology., ed. Monath T.P., CRC Press, Inc., BocaRaton, Florida, p. 59-88.

44. Heinz F.X., Mandl C.W., Holzmann H., Kunz C., Harris B.A., Rey F. and Harrison S.C. The flavivirus envelope protein E: isolation of a soluble form from tick-borne encephalitis virus and its crystallization.// J. Virol.- 1991.-V. 65- P.5579-5583.

45. Holzmann H., Heinz F.X., Mandl C.W., Guirakhoo F. and Kunz C. A single amino acid substitution in envelope protein E of tick-borne encephalitis virus leads to attenuation in the mouse model.// J. Virol. 1990.- V. 64-P.5156-5159.

46. Hubalek Z. European experience with the West Nile virus ecology and epidemiology: could it be relevant for the new World?// Viral. Immunol.-2000.-V. 13-P. 415-426.

47. Jiang W.R., Lowe A., Higgs S., Reid H. and Gould E.A. Single amino acid codon changes detected in louping ill virus antibody-resistant mutants with reduced neurovirulence.// J. Gen. Virol.- 1993.- V.74- P.931-935.

48. Kawano H., Rostapshov V., Rosen L. and Lai C.J.Genetic determinants of dengue type 4 virus neurovirulence for mice.//J. Virol.- 1993.- V.67-P.6567-6575.

49. Kimura-Kuroda J. and Yasui K.J. Antigenic comparison of envelope protein E between Japanese encephalitis virus and some other flaviviruses using monoclonal antibodies.//Gen. Virol.- 1986.- V. 67- P. 2663-2672.

50. Klingberg M.S., Jasinka-Klingberg W. and Goldblum N. Certain aspects of the epidemiology and distribution of immunity to West Nile virus in Israel.// Proc. 6th Int. Congr. Trop. Med. Malaria.- 1959.- V.5- P. 132-140.

51. Kuno G., Chang G.J., Tsuchiya K.R., Karabatsos N. and Cropp C.B. Phylogeny of the genus Flavivirus.// J. Virol.- 1998.- V. 72- P. 73-83.

52. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.// Nature.- 1970,- V.227- P. 680-685.

53. Lambert C., Leonard N., De Bolle X. and Depiereux E. ESyPred3D: Prediction of proteins 3D structures.// Bioinformatics.- 2002.- V.18- P. 12501256.

54. Lanciotti R.S., Roehrig J.T., Deubel V., Smith J., Parker M., Steele K., Crise

55. В., Volpe K.E., Crabtree M.B., Scherret J.H, Hall R.A., MacKenzie J.S,

56. Cropp C.B., Panigrahy В., Ostlund E., Schmitt В., Malkinson M., Banet C.,

57. Weissman J., Komar N., Savage H.M., Stone W., McNamara T. and Gubler

58. D.J. Origin of the West Nile virus responsible for an outbreak of encephalitisin the northeastern United States.// Science.- 1999.- V. 286- P. 2333-2337.

59. Lee E. and Lobigs M.Substitutions at the putative receptor-binding site of an encephalitic flavivirus alter virulence and host cell tropism and reveal a role for glycosaminoglycans in entry.//! Virol.- 2000.- V.74- P.8867-8875.

60. Lee J.W., Chu J.J. and Ng M.L. Quantifying the specific binding between West Nile virus envelope domain III protein and the cellular receptor alphaVbeta3 integrin.// J. Biol. Chem.- 2006,- V.281- P.1352-1360.

61. Lindenbach B.D., Rice C.M. (2001), Flaviviridae: The viruses and their replication., in Fundamental Virology, 4-th ed. Knippe D.M., Howley P.M., Philadelphia: Lippincott Williams &Wilkins Press, p. 589-641.

62. Lu G. and Moriyama E.N. Vector NTI, a balanced all-in-one sequence analysis suite.//Brief Bioinform.- 2004.- V.5- P.378-388.

63. Mandl C. W., Heinz F. X. and C. Kunz. Sequence of the structural proteins of tick-borne encephalitis virus (Western subtype) and comparative analysis with other flaviviruses.// Virology- 1988.- V.l 66- P. 197-205.

64. Mandl C.W., Guirakhoo F., Holzmann H., Heinz F.X. and Kunz C. Antigenic structure of the flavivirus envelope protein E at the molecular level, using tick-borne encephalitis virus as a model.//J. Virol.- 1989.- V.63-P.564-571.

65. Mathiot C.C., Georges A.J. and Deubel V. Comparative analysis of West Nile virus strains isolated from human and animal hosts using monoclonal antibodies and cDNA restriction digest profiles.// Res. Virol.- 1990.- V. 141-P.533-543.

66. Mcintosh B.M., Jupp P.G., Dos Santos I. and Meenehan G.M. Epidemics of West Nile and Sindbis viruses in South Africa with Culex univittatus Theobald as vector.// S. Afr. J. Sci.- 1976.- V. 72- P. 295-300.

67. McMinn P.C. The molecular basis of virulence of the encephalitogenic flaviviruses.// J. Gen. Virol.- 1997.- V. 78- P. 2711-2722.

68. Modis Y., Ogata S., Clements D. and Harrison S.C. Structure of the dengue virus envelope protein after membrane fusion.// Nature.- 2004.- V. 427- P. 313-320.

69. Morvan J., Besselaar Т., Fontenille D. and Coulanges P. Antigenic variations in West Nile virus strains isolated in Madagascar since 1978.// Res. Virol.- 1990,- V.141- P. 667-676.

70. Mukhopadhyay S., Kuhn R.J. and Rossmann M.G. A structural perspective of the flavivirus life cycle.//Nat. Rev. Microbiol.- 2005,- V.3- P. 13-22.

71. Murgue В., Murri S., Triki H, Deubel V. and Zeller H.G. West Nile in the Mediterranean basin: 1950-2000.// Ann. N. Y. Acad. Sci.- 2001.- V. 951- P. 176-126.

72. Nash D., Mostashari F., Fine A., Miller J., O'Leary D., Murray K., Huang A., Rosenberg A., Greenberg A., Sherman M., Wong S. and Layton M. Outbreak of West Nile virus infection, New York City area, 1999.// N. Engl. J. Med.-2001.-V. 344-P. 1807-1814.

73. Niedrig M., Klockmann U., Lang W., Roeder J., Burk S., Modrow S. and Pauli G. Monoclonal antibodies directed against tick-borne encephalitisvirus with neutralizing activity in vivo .//Act. Virol.- 1994.- V. 38(3): 141149.

74. Nowak T. and Wengler G. Analysis of disulfides present in the membrane proteins of the West Nile flavivirus.// Virology- 1987,- V. 156- P. 127-137.

75. Nybakken G.E., Oliphant Т., Johnson S., Burke S., Diamond M.S. and Fremont D.H. Structural basis of West Nile virus neutralization by a therapeutic antibody.//Nature- 2005,- V. 437- P. 764-769.

76. Peiris J.S., Porterfield J.S. and Roehrig J.T. Monoclonal antibodies against the flavivirus West Nile.//J. Gen. Virol.- 1982.- V. 58- P. 283-289.

77. Petersen L.R. and Roehrig J.T. West Nile virus: a reemerging global pathogen.// Emerg. Infect. Dis.- 2001.- V.7- P.611-614.

78. Philip C.B. and Smadel J.E. Transmission of West Nile virus by infected Aedes albopictus.// Proc. Soc. Exp. Biol.- 1943,- V. 53- P. 49-50.

79. Pletnev A.G., Bray M. and Lai C.J. Chimeric tick-borne encephalitis and dengue type 4 viruses: effects of mutations on neurovirulence in mice.//J. Virol.- 1993,- V. 67- P. 4956-4963.

80. Protopopova E.V., Sorokin A.V., Konovalova S.N., Kachko A. V., Netesov S.V. and Loktev V.B. Human laminin binding protein as a cell receptor for tick-borne encephalitis virus.// Zentrablatt fur Bacteriologie.- 1999.- V. 289-P. 632-638.

81. Pytela R. and Pierschbacher M.D. Arginine-glycine-aspartic acid adhesion receptors.// Methods Enzymol.- 1987.- V. 144- P. 475-489.

82. Rey F.A., Heinz F.X., Mandl C., Kunz C. and Harrison S.C. The envelope glycoprotein from tick-borne encephalitis virus at 2 A resolution.// Nature.-1995.- V.375-P. 291-298.

83. Roehrig J.T., Hunt A.R, Johnson A.J. and Hawkes R.A. Synthetic peptidesderived from the deduced amino acid sequence of the E glycoprotein of

84. Murray Valley encephalitis virus elicit antiviral antibody.// Virology.- 1989.-V.171-P. 49-60.

85. Sanchez M.D. Characterization of neutralizing antibodies to WNV.//Virology.- 2005.- V. 336- P. 70-82.

86. Sardelis M.R, Turell M.J, Dohm D.J. and O'Guinn M.L. Vector competence of selected North American Culex and Coquillettidia mosquitoes for West Nile virus.//Emerg. Infect. Dis.- 2001. V. 7- P. 1018-1022.

87. Scherret J.H, Poidinger M, Mackenzie J.S, Broom A.K, Deubel V, Lipkin W.I, Briese, T, Gould E.A. and Hall R.A. The relationships between West Nile and Kunjin viruses.// Emerg. Infect. Dis.- 2001. V. 7- P. 697-705.

88. Shatsky M, Nussinov R, Wolfson H.J. MultiProt a multiple protein structural alignment algorithm.// Lecture Notes in Computer Science- 2002.-V.2452- P. 235-250.

89. Shindyalov I.N. and Bourne P.E. Protein structure alignment by incremental combinatorial extension (CE) of the optimal path.// Protein Engineering- 1998,- V. 11- P. 739-747.

90. Smithburn K.C. and Jacobs H.R. Neutralization-tests against neurotropic viruses with sera collected in Central Africa.// J. Immunol.- 1942.- V. 44- P. 25-31.

91. Smithburn K.C., Hughes T.P., Burke A.W. and Paul J.H. A neurotropic virus isolated from the blood of a native of Uganda.// Am. J. Trop. Med.- 1940.-V. 20-P. 471-492.

92. Solomon T. and Vaughn D.W. Pathogenesis and clinical features of Japanese encephalitis and West Nile virus infections.//Curr. Top. Microbiol. Immunol.- 2002,- V.267- P. 171-194.

93. Sorokin A.V., Kazachinskaia E.I., Ivanova A.V., Kachko A.V., Netesov S.V., Bukreyev A.A., Loktev V.B. and Razumov I.A. Mapping of Two Dominant Sites of VP35 of Marburg Virus.// Viral Immunol.- 2002.- V.15- P. 481-493.

94. Stadler K., Allison S.L., Schalich J. and Heinz F.X. Proteolytic activation of tick-borne encephalitis virus by furin.// J. Virol.- 1997.- V. 71- P. 84758481.

95. Stiasny K., Allison S.L., Marchler-Bauer A., Kunz C. and Heinz F.X. Structural requirements for low-pH-induced rearrangements in the envelope glycoprotein of tick-borne encephalitis virus.// J. Virol.- 1996.- V. 70- P. 81428147.

96. Suchetana M., Kuhn R.J. and Rossmann M.G. A structural perspective of the flavivirus life cycle.// Nat. Rev. Microbiol.- 2005,- V.3- P. 13-22.

97. Thepparit С. and Smith D.R. Serotype-specific entry of Dengue virus into liver cells: identification of the 37-Kilodalton/67-Kilodalton high-affinity laminin receptor as a Dengue virus serotype 1 receptor.// J. Virology.- 2004,-V.78-P. 12647-12656.

98. Towbin H.T. and Gordon J. Immunoblotting and dot immunobinding -current status and outlook.//J. Immunol. Meth.- 1984.- V.72- P. 313-340.

99. Towbin H.T. and Staehelin J.G. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications.// Proc. Nat. Acad. Sci. USA.- 1979.- V.76- P. 4350-4354.

100. Vazquez S., Guzmana M.G., Guillenb G., Chineab G., Pereza А. В., Pupoa

101. M., Rodrigueza R., Reyesb O., Garayb H. E., Delgadoa I., Garciaa G. andi

102. Alvareza M. Immune response to synthetic peptides of dengue PrM protein.// Vaccine.- 2002,- V. 20- P. 1823-1830.

103. Wang Т., Anderson J.F., Magnarelli L.A., Wong S.J., Koski R.A. and Fikrig E. Immunization of mice against West Nile virus with recombinant envelope protein.//J. Immunol.- 2001.- V.167- P.5273-5277.

104. Wang Т., Magnarelli L.A., Anderson J.F., Gould L.H., Bushmich S.L., Wong S.J., Fikrig E. A recombinant envelope protein-based enzyme-linked immunosorbent assay for West Nile virus serodiagnosis.// Vector Borne Zoonotic. Dis.- 2002.- V. 2- P. 105-109.

105. Wei-Ming L. J., Chu J. J. and Ng M. Quantifying the specific binding between West Nile virus envelope domain III protein and the cellular receptor alphaVbeta3 integrin.// J Biol Chem.- 2006,- V. 281- P.1352-1360.

106. Wengler G. and Wengler G. Cell-associated West Nile flavivirus is covered with E+Pre-M protein heterodimers which are destroyed and reorganized by proteolytic cleavage during virus release. //J. of Virology-1989.-V. 63-P. 2521-2526.