Изучение антибактериального действия низкомолекулярного поликатионного пептида варнерина на антибиотикорезистентные штаммы Staphylococcus epidermidis тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Титова, Анастасия Владимировна

• Титова, Анастасия Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Титова, Анастасия Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

Обзор литературы

Глава 1. УСТОЙЧИВОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБИОТИКАМ. АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ ПЕПТИДЫ И ПЕРСПЕКТИВА ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ДЛЯ БОРЬБЫ С АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНЫМИ ШТАММАМИ МИКРООРГАНИЗМОВ.

1.1. Проблема формирования антибиотикоустойчивости у микроорганизмов.

1.1.1. Антибиотикорезистентность и механизмы ее появления у микроорганизмов.

1.1.2. Механизмы устойчивости бактерий к антибактериальным средствам

1.1.3. Пути преодоления устойчивости бактериальных клеток к антибиотикам.

1.2. Антибактериальные пептидные соединения как природные факторы ингибирования роста микроорганизмов.

1.2.1. Пептиды млекопитающих.

1.2.2. Пептиды земноводных.

1.2.3. Пептиды насекомых.

1.2.4. Пептиды растений.

1.2.5. Пептиды бактерий.

1.2.6. Механизмы антибактериального действия поликатионных пептидов

1.2.7. Практическое использование поликатионных пептидов.

Экспериментальные исследования

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Бактериальные штаммы.

2.2. Среды и условия культивирования.

2.3. Определение антибиотикочувствительности исследуемых штаммов.

2.4. Получение антибиотикорезистентных штаммов S. epidermidis.

2.5. Определение интенсивности роста и количества жизнеспособных клеток.

2.6. Получение препарата низкомолекулярного катионного пептидного антибактериального фактора.

2.7. Количественное определение антибактериального пептида в использованных препаратах.

2.8. Определение антибактериальной активности варнерина.

2.9. Выделение плазмидной ДНК.

2.10. Анализ плазмидного спектра.

2.11. Анализ липидного состава цитоплазматических мембран клеток.

2.12. Статистическая обработка данных.

Глава 3. ИЗУЧЕНИЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ДЕЙСТВИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНОГО ПОЛИКАТИОННОГО ПЕПТИДА ВАРНЕРИНА НА АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНЫЕ ШТАММЫ STAPHYLOCOCCUS EPIDER-MIDIS.

3.1. Получение антибиотикорезистентных штаммов S. epidermidis.

3.2. Бактерицидное действие антибактериального пептида варнерина на различные штаммы S. epidermidis.

3.3. Влияние варнерина на антибиотикочувствительность клеток различных штаммов S. epidermidis.

3.4. Влияние различных по механизму действия антибиотиков на чувствительность клеток S. epidermidis к варнерину.

3.5. Роль трансмембранного потенциала клеток S. epidermidis в реализации бактерицидного эффекта варнерина.

3.6. Действие варнерина на клетки S. epidermidis в комбинации с лизоцимом.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение антибактериального действия низкомолекулярного поликатионного пептида варнерина на антибиотикорезистентные штаммы Staphylococcus epidermidis»

Актуальность проблемы. Открытие антибиотиков явилось началом новой эры развития медицины, эффективно использующей для лечения инфекционных заболеваний большую группу низкомолекулярных соединений с различным механизмом действия и спектром антибактериальной и противогрибковой активности (Bryan, 1984).

Однако широкое внедрение антибиотиков в ветеринарную и медицинскую практику привело к тому, что у микроорганизмов сформировались разнообразные механизмы устойчивости, нейтрализующие действие антибиотиков (Murray et al., 1983; Leclerc et al., 1988). Как следствие, резистентность к антибактериальным препаратам обнаружена практически у всех доминирующих патогенных бактерий (Leclerc et al., 1988; Castro et al., 1993), и в настоящее время эта проблема приобретает глобальный масштаб (Fox, 1997).

В последние годы главенствующее место в этиологии инфекционных заболеваний вновь занимает грамположительная микрофлора, в том числе бактерии рода Staphylococcus (Бухарин и др., 2002). Применение антибиотиков как в условиях стационаров, так и при амбулаторном лечении постоянно формирует новые штаммы стафилококков, отличающиеся повышенной устойчивостью к антибактериальным химиопрепаратам. Так, метициллино-резистентные стафилококки в отдельных регионах России могут составлять до 65 % от общего числа выделенных от пациентов штаммов. Высокая частота устойчивости среди клинических штаммов стафилококков отмечена также к эритромицину (39,6 %), тетрациклину (37,1 %), гентамицину (30,7 %), ципрофлоксацину (13,1 %) и особенно к хлорамфениколу (43,1 %) (Страчун-ский, 2002). Кроме того, наблюдается тенденция возрастания роли коагулазонегативных стафилококков, в частности, S. epidermidis в патологии человека (Сидоренко, 1995). Важно отметить, что по результатам многоцентровых исследований для коагулазонегативных штаммов стафилококков характерен существенно больший уровень резистентности к традиционным антибиотикам в сравнении с S. aureus (Сидоренко и др., 1998).

Особую опасность представляют штаммы стафилококков, устойчивые к нескольким антибиотикам, поскольку они отличаются повышенной вирулентностью, способностью быстрого распространения среди больных и персонала, устойчивостью к неблагоприятным внешним факторам, а обусловленные ими заболевания с трудом поддаются антибактериальной терапии и требуют использования новых, более сильных и часто более токсичных антибиотических препаратов (Акатов, Зуева, 1983).

В связя с этим встает проблема поиска новых эффективных как синтетических, так и природных противомикробных агентов, который ведется в различных направлениях. В частности, в настоящее время интенсивно исследуются низкомолекулярные катионные пептиды (Silver et al, 1993; Tytler et al., 1995; Hancock, 1997).

Антибиотические катионные пептиды являются важнейшим компонентом природной защиты всех живых организмов. Они обладают антибактериальными, противогрибковыми, антиэндотоксичными, а также иммунорегулирующими свойствами (Кокряков, 1990; Ginsburg, 1987; Gough et al., 1996). Кроме того, будучи факторами проницаемости, антибиотические пептиды способны усиливать действие традиционно используемых антибиотиков (Hancock, Lehrer, 1998), поэтому перспективным является изучение их как факторов, повышающих чувствительность бактериальных клеток к другим противомикробным препаратам. Наиболее сильнодействующие из обнаруженных к настоящему времени антибактериальных пептидов, обладают бактерицидной активностью в концентрациях от 0,25 до 4 мкг/мл. Несмотря на существование более сильных антибиотиков, пептиды имеют определенные преимущества благодаря быстрому киллингу клеток-мишеней, а также высокой активности против некоторых наиболее серьезных антибиотикоустойчивых патогенов в клинике (Severina et al., 1998; Mota-Meira et al., 2000).

Таким образом, в настоящее время поликатионные пептиды могут рассматриваются как перспективные средства противомикробной химиотерапии в качестве альтернативы традиционным антибиотикам в борьбе с антибиотикорезистентными штаммами микроорганизмов.

На данный момент описано более 500 пептидных поликатионных факторов различного происхождения, однако пока еще очень мало известно о механизме их действия, чувствительности к ним антибиотикорезистентных бактерий, а также их способности усиливать действие других антибактериальных агентов.

В лаборатории биохимии развития микроорганизмов Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН выделен штамм грамположительных кокков, который был идентифицирован и депонирован как Staphylococcus warneri IEGM KL-1 - продуцент низкомолекулярного пептидного соединения, названного варнерином. Варнерин представляет собой поликатионный пептид, молекулярная масса которого составляет 2999. Наличие в его составе аминокислоты лантионина позволяет рассматривать варнерин как новый пептид семействи лантибиотиков.

Цель настоящей работы - изучение антибактериального действия низкомолекулярного поликатионного пептида варнерина в отношении штаммов Staphylococcus epidermidis.

Конкретные задачи исследования:

1. Изучить антибиотическое воздействие варнерина на штаммы Staphylococcus epidermidis с различной степенью выраженности антибиотико-чувствительности.

2. Исследовать влияние варнерина на антибиотикочувствительность культур S. epidermidis, характеризующихся различной устойчивостью к антибиотикам.

3. Изучить влияние различных антибиотиков на проявление антибактериального эффекта варнерина для углубления понимания механизма действия пептида.

4. Оценить роль трансмембранного потенциала бактериальных клеток в реализации антибактериального эффекта пептида.

5. Изучить возможности повышения эффективности антибактериального действия варнерина.

Научная новизна и практическое значение работы.

Впервые выявлено антибактериальное действие варнерина на штаммы S. epidermidis, устойчивые к одному или нескольким антибиотикам. Обнаружено, что бактерицидный эффект варнерина проявляется с первых минут его взаимодействия с бактериальными клетками. Показано, что антибактериальное действие варнерина в значительно меньшей степени выражено в условиях, когда уровень трансмембранного электрохимического потенциала снижен. Активность пептида значительно ингибируется при пониженной температуре. Клетки S. epidermidis стационарной фазы роста обладают большей устойчивостью к действию варнерина. Кроме того, предварительная экспозиция клеток S. epidermidis с ионофорами (пентахлорфенолом, карбонилцианид-ж-хлорфенилгидразоном, валиномици-ном) вызывает снижение их чувствительности к антибактериальному действию варнерина. Показано, что валиномицин - соединение, вызывающее диссипацию ДЧ7-компоненты трансмембранного электрохимического потенциала оказывает значительно более сильно выраженное действие на чувствительность клеток стафилококков к варнерину по сравнению с нигерицином -соединением, снижающим значение ДрН-составляющей потенциала.

Обнаружена способность варнерина потенцировать действие широко используемых антибиотиков. Показано, что под действием варнерина наиболее сильно повышается чувствительность клеток S. epidermidis к антибиотикам (ампициллину, оксациллину и цефалексину), действующим на клеточную стенку бактерий. Установлено, что данные антибиотики, в свою очередь, усиливают антибактериальный эффект варнерина. Варнерин также усиливает действие антибиотиков, ингибирующих синтез белка. Показано значительное 8 возрастание антибиотического эффекта варнерина на клетки S. epidermidis при сочетанном применении его с лизоцимом.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что поликатионный пептид варнерин может быть рассмотрен как перспективное средство противомикробной химиотерапии, в частности для лечения заболеваний, вызванных антибиотикоустойчивыми штаммами Staphylococcus epidermidis.

Апробация работы и публикации.

Основные положения диссертационной работы представлены и доложены на Конференции молодых ученых-экологов Уральского региона "Современные проблемы популяционной, исторической и прикладной экологии", Екатеринбург, 1998; IV International conference "Environmental pollution'98", Moscow, 1998; 18th International Congress of Biochemistry and Molecular Biology, Birmingham, 2000; III Региональной научно-практической конференции "Охрана природы и здоровья человека", Оренбург, 2000; V International conference "Environmental pollution-2001", Volgograd-Perm, 2001; Юбилейной научной конференции молодых ученых "Молодые ученые Волго-уральского региона на рубеже веков", Уфа, 2001; Международной научной конференции "Микробиология и биотехнология XXI столетия", Минск, 2002.

По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Титова, Анастасия Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что низкомолекулярный катионный антибактериальный пептид варнерин, продуцируемый клетками S. warneri IEGM KL-1, обладает бактерицидным эффектом в отношении штаммов S. epidermidis, различающихся чувствительностью к антибиотикам. Бактерицидное действие пептида проявляется с первых минут контакта с бактериальными клетками.

2. Выявлено, что антибиотикорезистентные штаммы S. epidermidis характеризуются различной чувствительностью к варнерину. Снижение чувствительности к варнерину полирезистентного штамма S. epidermidis 33-Cdr сопровождается повышением содержания в цитоплазматических мембранах клеток кардиолипина и лизилфосфатидилглицерола, а также увеличением копийности плазмиды размером 2,7 т.п.н.

3. Обнаружено, что варнерин потенцирует действие ампициллина, оксациллина, цефалексина, гентамицина, рифампицина, тетрациклина, линкомицина, левомицетина и эритромицина на клетки S. epidermidis. В наибольшей степени варнерин усиливает антибактериальный эффект |3-лактамных антибиотиков.

4. Установлено, антибиотики группы (3-лактамов значительно усиливают антибактериальное действие варнерина в отношении клеток S. epidermidis, тогда как ингибиторы синтеза белка левомицетин, линкомицин, тетрациклин и эритромицин не оказывают потенцирующего эффекта на антибактериальную активность варнерина, за исключением штамма S. epidermidis 33-Ampr.

5. Показано, что на проявление антибактериального эффекта варнерина оказывает влияние уровень трансмембранного потенциала клеток-мишеней: в условиях, когда значение потенциала снижено, активность пептида существенно падает, при этом бактерицидное действие пептида в большей степени зависит от величины электрической компоненты (Д\[у) электрохимического потенциала атакуемой клетки.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние годы исследования поликатионных пептидов приобретают все больший размах. Это связано с тем, что на фоне постоянно возрастающего количества антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов, антибактериальные пептиды могут стать альтернативой традиционным антибиотикам.

Помимо того, что поликатионные пептиды сами по себе способны выступать в роли антибактериальных агентов, перспективным является изучение их как факторов, повышающих чувствительность бактериальных клеток к другим антибиотикам (Scott, 1999).

В настоящее время описано уже более 500 пептидных поликатионных факторов (Hancock, Scott, 2000), однако пока еще очень мало известно о механизме их действия, а также их способности усиливать действие других антибактериальных агентов.

Изучение поликатионного пептида варнерина, впервые выделенного в 1996 году в Лаборатории биохимии развития микроорганизмов ИЭГМ УрО РАН, показало, что он обладает выраженным антибиотическим эффектом в отношении штаммов Staphylococcus epidermidis, характеризующихся различной чувствительностью к антибиотикам.

Установлено, что бактерицидное действие пептида начинается быстро, в течение нескольких минут, что может свидетельствовать о том, что первичной мишенью варнерина, как и большинства поликатионных пептидов, служит цитоплазматическая мембрана.

Следует отметить, что скорость антибактериального действия варнерина в отношении всех использованных штаммов S. epidermidis приблизительно одинакова, несмотря на то, что значения МПК и МБК пептида для всех штаммов разные.

Наибольшей устойчивостью к бактерицидному действию варнерина обладает штамм S. epidermidis 33-Cdr, устойчивый к кадмию, а также левомицетину, линкомицину и эритромицину. Согласно данным литературы гены, обусловливающие резистентность к ионам кадмия, как правило, имеют плазмидную локализацию и детерминируют в большинстве случаев синтез АТФ-зависимых систем, ответственных за быстрый выброс ионов кадмия из клеток в окружающую среду (Lebrun et al., 1994). Помимо этого, повышенная устойчивость стафилококков к солям кадмия, как правило, сопровождается множественной устойчивостью к антибиотикам, благодаря общей детерминированности плазмидными генами (Самсонова и др., 1982).

Изучение плазмидого спектра исходного штамма и штамма, устойчивого к кадмию, показало, что формирование резистентности бактерий к высоким концентрациям ионов кадмия сопровождается увеличением копийности плазмиды размером 2,7 т.п.н. В связи с тем, что системы активного выброса ионов тяжелых металлов не являются высокоспецифичными, мы сделали предположение о том, что взаимосвязь между повышением устойчивости клетки к ионам кадмия и снижением чувствительности к варнерину может быть обусловлена общим защитным механизмом, который детерминирован плазмидными генами.

В то же время, изучение состава мембранных липидов штаммов S. epidermidis 33 и S. epidermidis 33-Cdr, показало, что появление резистентности к ионам кадмия приводит к изменению липидного состава цитоплазматических мембран бактериальных клеток. В клетках штамма S. epidermidis 33-Cdr возрастает количество кардиолипина - с 6 до 17,4%, а также более, чем в 5 раз увеличивается содержание лизил-фосфатидилглицерола, который в исходном штамме обнаруживается в небольших количествах. В связи с этим, повышение устойчивости к варнерину у клеток полирезистентного штамма S. epidermidis 33-Cdr может быть обусловлено также изменением липидного состава мембран клеток.

Помимо того, что варнерин сам по себе обладает бактерицидным эффектом, он также способен потенцировать действие других антибиотиков на клетки S. epidermidis. В результате проведенных экспериментов было установлено, что в наибольшей степени пептид усиливает антибактериальный эффект Р-лактамных антибиотиков: ампициллина, оксациллина, цефалексина, что было показано для всех использованных в работе штаммов S. epidermidis.

В то же время, изменение чувствительности клеток стафилококков к ингибиторам синтеза белка, таким как левомицетин, линкомицин, тетрациклин и эритромицин под действием варнерина наблюдается не у всех штаммов. Пептид потенцирует действие этих антибиотиков на клетки штаммов S. epidermidis 33, S. epidermidis 33-Ampr и S. epidermidis 33-Cdr. Чувствительность к данным антибиотикам клеток остальных штаммов не изменялась.

Для более детального изучения механизма действия варнерина были поставлены эксперименты, в которых клетки всех модельных штаммов S. epidermidis сначала обрабатывали суббактерицидными концентрациями различных антибиотиков, после чего вносили варнерин. Было показано, что все Р-лактамные антибиотики, в свою очередь, значительно повышают чувствительность клеток всех использованных в работе штаммов S. epidermidis к варнерину.

В то же время, такие антибиотики как левомицетин, линкомицин, тетрациклин и эритромицин потенцируют антибактериальный эффект варнерина только в отношении клеток штамма, устойчивого к ампициллину. Достоверного изменения чувствительности к пептиду после обработки этими антибиотиками у клеток штаммов S. epidermidis 33, S. epidermidis 33-Rif \ S. epidermidis 33-Err, S. epidermidis 33 -Cdr не наблюдается.

Согласно литературным данным, встраивание внутрь цитоплазмати-ческой мембраны лантибиотиков А-типа, к которым, по-видимому, может быть отнесен варнерин, и их последующая мультимеризация с образованием пор требует энергии трансмембранного потенциала (Benz et al., 1991; Bruno, Montville, 1993). Известно, что клетки либо стационарной фазы роста, либо находящиеся под воздействием пониженных температур имеют более низкое значение трансмембранного потенциала, что обусловлено снижением интенсивности энергогенерирующих процессов в указанных условиях (Shimoda et al., 1995).

Действительно, проведенные нами исследования показали, что антибактериальный эффект варнерина существенно снижается при низкой температуре (4°С), а клетки стационарной фазы роста характеризуются большей устойчивостью к действию пептида по сравнению с клетками логарифмической фазы роста.

В специальных экспериментах было установлено, что предварительная экспозиция клеток S. epidermidis с ионофорами (пентахлорфенолом, карбонилцианид-ж-хлорфенилгидразоном и валиномицином) приводит к значительному снижению чувствительности бактерий к пептиду. Показано, что валиномицин - соединение, вызывающее диссипацию Д\|/-компоненты трансмембранного электрохимического потенциала оказывает значительно более сильно выраженное действие на чувствительность клеток стафилококков к варнерину по сравнению с нигерицином - соединением, снижающим значение ДрН-составляющей потенциала. Кроме того, действие пентахлорфенола, карбонилцианид-л/-хлорфенилгидразона и валиномицина на клетки S. epidermidis было пролонгированным: количество клеток уменьшалось лишь в течение первого часа после внесения варнерина, в последующие 4 часа снижения количества клеток не происходило вне зависимости от количества внесенного пептида.

В то же время, эффект нигерицина был непродолжительным: снижение чувствительности клеток S. epidermidis к варнерину наблюдалось лишь в течение 1 часа после обработки нигерицином. Спустя 2 часа инкубирования в присутствии пептида, действие варнерина становилось концентрационно-зависимым.

Таким образом, согласно нашим экспериментам, составляющие трансмембранного потенциала - Д\|/ и ДрН по-разному влияют на антибактериальную активность варнерина. В большей степени бактерицидный

106 эффект варнерина, по-видимому, зависит от величины электрического потенциала (Д\у).

Известно, что некоторые поликатионные пептиды проявляют синергидные взаимодействия друг с другом, а также с другими факторами внутренней защиты организмов (McCafferty et al., 1999; Yan, Hancock, 2001). В частности, ряд пептидов способны потенцировать антибактериальный эффект лизоцима (Hancock et al., 2000; Patrzykat et al, 2001).

Проведенные нами эксперименты показали, что варнерин в сочетании с лизоцимом обнаруживают выраженный синергизм действия, дополняя антибактериальный эффект друг друга. Синергидный эффект варнерина и лизоцима наблюдался в отношении всех использованных штаммов S. epidermidis.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Титова, Анастасия Владимировна, 2001 год

1. Блинкова А.П. Перспективы использования бактериоцинов для профилактики и терапии инфекций/УМикробиол., эпидемиол., иммунол. 1984.- N. 5.-С. 10-15.

2. Бриан Л.Е. Бактериальная резистентность и чувствительность к химиопрепаратам. Пер. с англ. М.: Медицина, 1984. - 272 с.

3. Бухарин О.В., Васильев Н.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине. -Томск, 1974.-208 с.

4. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Карташова О.Л. Биология патогенных кокков.- М.: Медицина, 2002. 283 с.

5. Бухарин О.В., Черешнев В.А., Сулейманов К.Г. Антимикробный белок тромбоцитов. Екатеринбург, 2000. - 200 с.

6. Вильяме Д. Резистентность к беталактамным препаратам//Антибиотики и химиотерапия. 1997. - N. 5. - С. 5-9.

7. Дудник Ю.В. Перспективы создания препаратов, активных в отношении устойчивых форм бактерий//Антибиотики и химиотерапия. 1999. - N. 12. -С. 15-18.

8. Егоров Н.С. Микробы-антагонисты и биологические методы определения антибиотической активности. М.: Высшая школа, 1965. - 212 с.

9. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: изд-во МГУ, 1994. -512с.

10. Егоров Н.С., Баранова И.П. Бактериоцины. Образование, свойства, применение//Антибиотики и химиотерапия. 1999. -N. 6. - С. 33-40.

11. Игнатов В.В. Биохимия стафилококка. Саратов: изд-во Сарат. ун-та, 1975.- 149 с.

12. Кагава Я. Биомембраны. М., 1985. - 303 с.

13. Кейтс М. Техника липидологии. Пер. с англ. М.: изд-во "Мир", 1975. -324 с.

14. Кокряков В.Н. Биология антибиотиков животного происхождения.- СПб.: Наука, 1999. 162 с.

15. Кокряков В.Н. Катионные белки лизосом нейтрофильных гранулоцитов при фагоцитозе и воспалении//Вопр. мед. химии. 1990. - N. 6. - С. 13-16.

16. Кокряков В.Н., Стефанов В.Е., Алешина Г.М. Дефенсины и родственные им антибиотические пептиды в эволюции защитных систем животных//Журн. эволюц. биохимии и физиологии. 1997. - N. 1. - С. 109-123.

17. Коробов В.П., Еремина А.А., Кузнецов В.П. Изменение антибиотикочувствительности стафилококков под действием препаратов интерферона. Сб. научн.трудов "Физиология и биохимия микроорганизмов". -Екатеринбург, 1992. С. 92-96.

18. Кудлай Д.Г., Лиходед В.Г. Бактериоциногения. Л.: Медицина, 1966.- 204 с.

19. Ланчини Д., Паренти Ф. Антибиотики. Пер. с англ. М.: Мир, 1985. - 272 с.

20. Лохвицкий С.В., Абеузов М.Е., Щепеткина Л.В. Лизоцимообразовательная функция печени при осложненном остром холецистите/ЛВестник хирургии им. Грекова. 1989. - N. 5. - С. 29-30.

21. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. Пер. с англ. М.: Мир, 1984. - 480 с.

22. Медведев П.И. Физическая и коллоидная химия. М.: Гос. изд. с/х лит-ры, 1957.-320 с.

23. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков/М-во здравоохранения СССР; Разраб. Н.И. Гивенталь и др. М., 1983.- 16 с.

24. Навашин С.М. Наука об антибиотиках: ретроспектива и взгляд в будущее//Антибиотики и химиотерапия. 1997. - N. 5. - С. 3-9.

25. Навашин С.М., Сазыкин Ю.О. Антибиотики: новые механизмы передачи резистентности//Антибиотики и химиотерапия. 1998. - N. 6. - С. 3-6.

26. Сазыкин Ю.О., Швец А.В., Иванов В.П. Антибиотикорезистентность и системы активного выброса ксенобиотиков у бактерий//Антибиотики и химиотерапия. 1999. - N. 9. - С. 3-6.

27. Самсонова Т.М., Акатов А.К., Хотеневер М.Л., Джаврова И.К. Устойчивость к антибиотикам и солям тяжелых металлов среди коагулазопозитивных стафилококков, относящихся к разным биотипам (эковарам)//Антибиотики. 1982. - N. 12. - С. 902-906.

28. Сидоренко С.В. Метициллинорезистентные стафилококки//Антибиотики и химиотерапия. 1995. - N. 11/12. - С. 57-69.

29. Сидоренко С.В. Перспективы в области создания препаратов для лечения инфекций, вызываемых грамположительными микроорганизмами// Антибиотики и химиотерапия. 2000. - N. 10. - С. 3-4.

30. Сидоренко С.В., Резван С.П., Грудинина С.А., Кротова Л.А., Стерхова Г.В. Результаты многоцентрового исследования чувствительности стафилококков к антибиотикам в Москве и Санкт-Петербурге//Антибиотики и химиотерапия. -1998.-N. 7. С. 15-25.

31. Франклин Т, Сноу Дж. Биохимия антимикробного действия. М., 1984. -240 с.

32. Abee Т. Pore-forming bacteriocins of gram-positive bacteria and self-protection mechanisms of producer organisms//FEMS Microbiol. Lett. 1995. - V. 129. - P. 1-10.

33. Amsterdam D. Susceptibility testing of antimicrobials in liquid media//In: Antibiotics in laboratory medicine. Ed. V. Lorian. Baltimor: Williams&Wilkins. -1996.-P. 52-111.

34. Andrews J.M. Determination of minimum inhibitory concentration//J. Antimicrob. Chemother. 2001. - V. 48. - P. 5-16.

35. Atlas R.M. Handbook of Microbiological Media. Boca Raton, Ann Arbor, London, Tokyo.: CRS Press, 1993. - 1080 p.

36. Baba Т., Schneewind O. Instruments of microbial warfare: bacteriocin synthesis, toxicity and immunity//Trends Microbiol. 1998. - V. 6. - P. 66-71.

37. Bach A.C., Selsted M.E., Pardi A. Two-dimensional NMR studies of the antimicrobial peptide NP-5//Biochemistry. 1987. - V. 26. - P. 4389-4397.

38. Bechinger B. Structure and functions of channel-forming peptides: magainins, cecropins, melittin and alamethicin//J. Membr. Biol. 1997. - V. 156. - P. 197-211.

39. Bechinger В., Zasloff M., Opella S.J. Structure and dynamics of the antibiotics peptide PGLa in membranes by solution and solicitat magnetic resonance spectroscopy//!. Biophys. 1998. - V. 74. - P. 981-987.

40. Bello J., Bello H.R., Granados E. Conformation and aggregation of melittin: dependence onpH and concentration//Biochemistry. 1982. - V. 21. - P. 461-465.

41. Benz R., Jung G., Sahl H-G. Mechanism of channel formation by lantibiotics in black lipid membranes//In: Nisin and novel lantibiotics. Ed. G. Jung, H-G. Sahl. Leiden: Escom. 1991. - P. 359-372.

42. Bernheimer A.W., Rudy B. Interaction between membranes and cytolytic peptides//Biochim. Biophys. Acta. 1986. - V. 864. - P. 123-141.

43. Bevins C.L., Zasloff M. Peptides from frog skin//Annu. Rev. Biochem. 1990. -V. 59.-P. 395-414.

44. Bierbaum G., Sahl H-G. Autolysis system of Staphylococcus simulans: influence of cationic peptides on activity of N-Acetylmuramoyl-L-alanine amidase//J. Bacteriol. 1987. - V. 169. - P. 5452-5458.

45. Bierbaum G., Sahl H-G. Induction of autolysis of staphylococci by the basis peptide antibiotics Pep 5 and nisin and their influence on the activity of autolytic enzymes//Arch. Microbiol. 1985. - V. 141. - P. 249-251.

46. Bierbaum G., Sahl H-G. Influence of cationic peptides on the activity of the autolytic endo-(3-N-acetylglucosamidase of Staphylococcus simulans 22//FEMS Microbiol. Lett. 1988. - V. 58. - P. 223-228.

47. Birnboim H.C., Doly J. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA//Nucleic Acids Res. 1979. - V. 7. - P. 1513.

48. Bligh E.G., Dyer W.J. A rapid method of total lipid extraction and purification//Can. J. Biochem. Physiol. 1959. - V. 37. - P. 911-917.

49. Boheim G., Hanke W., Jung G. Alamethicin pore formation: voltage-dependent flip-flop of a-helix dipoles//Biophys. Struct. Mech. 1983. - V. 9. - P. 181-191.

50. Boman H. Peptide antibiotics and their role in innate immunity//Ann. Rev. Immunol. 1995. - V. 13. - P. 61-92.

51. Breukink E., de Kruijff B. The lantibiotic nisin, a special case or not?//Biochim. Biophys. Acta. 1999. - V. 1462. - P. 223-234.

52. Breukink E., van Kraaij C., Demel R.A., Siezen R.J., Kuipers O.P., de Kruijff B. The C-terminal region of nisin is responsible for the initial interaction of nisin with the target membrane//Biochemistry. 1997. - V. 36. - P. 6968-6976.

53. Breukink E., Wiedemann I., van Kraaij C., Kuipers O.P., Sahl H-G., de Kruijff B. Use of the cell wall precursor lipid II by a pore-forming peptide antibiotic//Science. -1999. V. 286. - P. 2361-2364.

54. Broekaert W., Cammue В., Debolle M., Thevissen K., Desamblanx., Osborn R. Antimicrobial peptides from plants//Crit. Rev. Plant Sci. 1997. - V. 16. -P. 297-323.

55. Broekaert W., Terras F., Cammue В., Osborn R. Plant defensins: novel antimicrobial peptides as components of the host defense system//Plant Physiol.- 1995. V. 108. - P. 1353-1358.

56. Brotz H., Bierbaum G., Leopold K., Reynolds P.E., Sahl H-G. The lantibiotic mersacidin inhibits peptidoglycan synthesis by targeting lipid II//Antimicrob. Agents Chemother. 1998. - V. 42. - P. 154-160.

57. Brotz H., Bierbaum G., Markus A., Molitor E., Sahl H-G. Mode of action of the lantibiotic mersacidin inhibition of peptidoglycan synthesis via a novel mechanism?//Antimicrob. Agents Chemother. - 1995. - V. 39. - P. 714-719.

58. Brotz H., Bierbaum G, Reynolds P.E., Sahl H-G. The lantibiotic mersacidin inhibits peptidoglycan biosynthesis at the level of transglycosylation//Eur. J. Biochem. 1997. - V. 246. - P. 193-199.

59. Bruno M.E., Montville T.J., Common mechanistic action of bacteriocins from lactic acid bacteria//Appl. Environ. Microbiol. 1993. - V. 59. - P. 3003-3010.

60. Bryan L. Antimicrobial drug resistance. Orlando.: Academic press, 1984.- 450 p.

61. Castro I., Bergeron M., Chamberland S. Characterization of multiresistant strains of Neisseria gonorrhoeae isolated in Nicaragua//Sex. Transm. Dis. 1993. - V. 20. -P. 314-320.

62. Chan W.C., Dold M., Horn N., Maclean K., Lian L-Y. Structure-activity relationships in the peptide antibiotic nisin: role of dehydroalanine 5//Appl. Environ. Microbiol. 1996. - V. 62. - P. 2966-969.

63. Chopra I. Research and development of antibacterial agents//Current Opinion in Microbiology. 1998. - V. 1. - P. 495-501.

64. Chopra I., Hodgson J., Metcalf В., Poste G. The search for antimicrobial agents effective against bacteria resistant to multiple antibiotics//Antimicrob. Agents Chemother. 1997. - V. 41. -N. 3. - P. 497-503.

65. Chun W., Hancock R.E. Action of lysozyme and nisin mixtures against lactic acid bacteria//Int. J. Food Microbiol. 2000. - V. 60. - N. 15. - P. 25-32.

66. Cirioni O., Giacometti A., Barchiesi F., Scalise G. In vitro activity of lytic peptides, inhibitors of ion transport systems and ionophorous antibiotics against Pneumocystic carinii/iL Antimicrob. Chemother. 1998. - V. 42. - P. 141-145.

67. Cocito С., Di Giambattista M., Nyssen E., Vannuffel P. Inhibition of protein synthesis by streptogramins and related antibiotics//J. Antimicrob. Chemother. 1997.-V. 39.-P. 7-13.

68. Coleman K., Athalye M., Clancey A., Davison M., Payne D.J., Perry C.R., Chopra J. Bacterial resistance mechanism as therapeutic targets//J. Antimicrob. Chemother. 1994. - V. 33. - P. 1091-1116.

69. Crossley K., Loesh D., Landesman В., Mead K., Chern M., Strate R. An outbreak of infections caused by strains of Staphylococus aureus resistant to methicillin and aminoglycosides//! Infect. Dis. 1979. - V. 139. - P. 273-279.

70. Csordas A., Michl H. Isolation and structure of a haemolytic polypeptide from the defensive secretion of European Bombinia species//Monatsh. Chem. 1970. -V. 101.-P. 182-189.

71. Davies J. Bacteria on the rampage//Nature. 1996. - V. 383. - P. 219-221.

72. Delves-Broughton J., Blackburn P., Evans R.J., Hugenholtz J. Applications of the bacteriocin nisin//Antonie van Leeuwenhoek Int. J. Gen. Microbiol. 1996. - V. 69. -P. 193-202.

73. Demel R.A., Peelen Т., Siezen R.J., de Kruijff В., Kuipers O.P. Nisin Z, mutant nisin Z and lacticin 481 interactions with anionic lipids correlate with antimicrobial activity: a monolayer study//Eur. J. Biochem. 1996. - V. 235. - P. 267-274.

74. De Vuyst L., Callenwaert P., Crabbe K. Primary metabolite kinetics of biosynthesis by Lactobacillus amylovorus and evidence for stimulation of bacteriocin production under unfavorable growth conditions//Microbiology. 1996. - V. 142. -N. 4.-P. 817-827.

75. Driessen A.J., van den Hooven H.W., Kuiper W., van de Kemp M., Sahl H-G., Konings R.N.H., Konings W.N. Mechanistic studies of lantibiotic-induced permeabilization of phospholipid vesicles//Biochemistry. 1995. - V. 34. - P. 1606-1614.

76. Ein M.E., Smith N.J., Aruffo J.F., Heererma M.S., Bradshaw M.W., Williams T.W. Susceptibility and synergy studies of methicillin resistant Staphylococcus epidermidis!1Antimicrob. Agents Chemother. 1979. - V. 16. - P. 655-659.

77. Eisenhauer P.B., Lehrer R.I. Mouse neutrophils lack defensins//Infect. Immun. -1992. V. 60. - P. 3446-3447.

78. Falla T.J., Karunaratne D.N., Hancock R.E. Mode of action of the antimicrobial peptide indolicidin//J. Biol. Chem. 1996. - V. 271. - P. 19298-19303.

79. Fernandez de Caleya R., Gonzalez-Pascual В., Garcia Olmedo F., Carbonero P. Susceptibility of phytopathogenic bacteria to wheat purothionins in vitro//Appl. Microbiol. 1972. - V. 23. - P. 998-1000.

80. Ford C.W., Hamel J.C., Stapert D., Moerman J.K., Hutchinson D.K., Barbachyn M.R., Zurenko G.E. Oxazolidinones: new antibacterial agents//Trends Microbiol.- 1997. V. 5.-P. 196-200.

81. Fox J. Antibiotic resistance on the rise globally//ASM News. 1997. - V. 63. -P. 655.

82. Fujii G., Selsted M.E., Eisenberg D. Defensin promote fusion and lysis of negatively charged membranes//Protein Sci. 1993. - V. 2. -P. 1301-1312.

83. Ganz Т., Lehrer R. Antimicrobial peptides of leukocytes//Curr. Opin. Hematol.- 1997.-V. 4.-P. 53-58.

84. Garcera M.J., Elferink M.G.L., Driessen A.J.M., Konings W.N. In vitro pore-forming activity of the lantibiotic nisin. Role of proton motive-force and lipid composition//Eur. J. Biochem. 1993. - V. 212. - P. 417-422.

85. Ghuysen I.-M. Use of bacteriolytic enzymes in determination of wall structure and their role in cell metabolism//Bacteriol. Rev. 1968. - V. 32. - P. 425.

86. Giacometti A., Cirioni O., Barchiesi F., Ancarani F., Scalise G. In vitro anti-cryptosporidial activity of cationic peptides alone and in combination with inhibitors of ion transport systems//J. Antimicrob. Chemother. 2000. - V. 45. - P. 651-654.

87. Giacometti A., Cirioni O., Greganti G., Quarta M., Scalise G. In vitro activities of membrane-active peptides against gram-positive and gram-negative aerobic bacteria//Antimicrob. Agents Chemother. 1998. - V. 42. - N. 12. - P. 3320-3324.

88. Gilmore M.S., Segarra R.A., Booth M.C. An hlyB-type function is required for expression of the Enterococcus faecalis hemolysin/bacteriocin//Infect. Immun.- 1990. -V. 58. P. 3914-3923.

89. Giraffa G. Enterococcal bacteriocins: their potential as antilisteria factors in dairy technology//Food Microbiol. 1995. - V. 12. - N. 4. - P. 291-299.

90. Gough M., Hancock R.E., Kelly N.M. Antiendotoxin activity of cationic peptide antimicrobial agents//Infect. Immun. 1996. - V. 64. - P. 4922-4927.

91. Gross E., Morell J.L. The structure of nisin//J. Am. Chem. Soc. V. 93. - P. 4634-4635.

92. Guder A., Wiedemann I., Sahl H.-G. Post-translationally modified bacteriocins- the lantibiotics//Biopolymers. 2000. - V. 55. - P. 62-73.

93. Habermann E. Bee and wasp venoms//Science. У. 177. - P. 314-322.

94. Hancock R.E. Host defense (cationic) peptides: what is their future clinical potential?//Drugs. 1999. - V. 57. - N. 4. - P. 469-473.

95. Hancock R.E. Peptide antibiotics//Lancet. V. 349. - P. 418-422.

96. Hancock R.E. Therapeutic potential of cationic peptides//Expert. Opin. Invest. Di. 1998. - V. 7. - P. 167-174.

97. Hancock R.E., Chappie D.S. Peptide antibiotics//Antimicrob. Agents Chemother. 1999. - V. 43. - P. 1317-1323.

98. Hancock R.E., Falla Т., Brown M. Cationic bactericidal peptides//Adv. Microb. Physiol. 1995. -V. 37. - P. 135-175.

99. Hancock R.E., Lehrer R. Cationic peptides: a new source of antibiotics//Trends in Biotechnology. 1998. - V. 16. - N. 2. - P. 82-88.

100. Hancock R.E., Scott M.G. The role of antimicrobial peptides in animal defenses//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - V. 97. - P. 8856-8861.

101. Henderson J.T., Chopko A.L., van Wassenaar P.D. Purification and primary structure of pediocin PA-1 produced by Pediococcus acidilactici PAC-1.0.//Arch. Biochem. Biophys. 1992. - V. 295. - P. 5-12.

102. Hill C.P., Yee J., Selsted M.E., Eisenberg D. Crystal structure of defensin HNP-3, an amphiphilic dimmer: mechanisms of membrane permeabilization//Science.- 1991.-V. 251.-P. 1481-1485.

103. Hirasawa Т., Masaaki W., Nagai K. A mutation in the Corinebacterium glutamicum Its A gene us causes susceptibility to lysozyme, temperature-sensitive growth, and 1-glutamate production//!. Bacteriol. 2000. - V. 182. - N. 10. - P. 2696-2701.

104. Hoffman J. A., Dimroth P. The electrochemical proton potential of Bacillus alcalophilus/JEm. J. Biochem. 1991. - V. 201. - P. 467-473.

105. Hoffman J.A., Hetru C. Insect defensins: inducible antibacterial peptides//Immunol. Today. 1992. - V. 13. - P. 411-415.

106. Holak T.A., Engstrom A., Kraulis P.J. The solution conformation of the antibacterial peptide cecropin A: a nuclear magnetic resonance and dynamical simulated annealing study//Biochemistry. 1988. - V. 27. - P. 7620-7629.

107. Hristova K., Selsted M.E., White S.H. Critical role of lipid composition in membrane permeabilization by rabbit neutrophil defensins//J. Biol. Chem. 1997.- V. 272. N. 39. - P. 24244-24233.

108. Huang H.W. Action of antimicrobial peptides: two-state model//Biochemistry.- 2000. V. 39. - P. 8347-8352.

109. Hultmark D., Steiner H., Rasmussen Т., Boman H. Insect immunity: purification and properties of three inducible bactericidal proteins from hemolymph of immunized pupae of Hyalophora cecropialJEm. J. Biochem. 1980. - V. 106. - P. 7-16.

110. Jack R.W., Bierbaum G., Sahl H-G. Lantibiotics and related peptides. Austin: Landes, 1998.-360 p.

111. Jack R.W., Jung G. Natural peptides with antimicrobial activity//Chimia.- 1998. -V. 52.-P. 48-55.

112. Jack R.W., Sahl H.-G. Unique peptide modifications involved in the biosynthesis of lantibiotics//Trends Biotechnol. 1995. - V. 13. - P. 269-278.

113. Jack R.W, Tagg J.R., Ray B. Bacteriocins of gram-positive bacteria//Microbiol. Rev. 1995. - V. 59. - P. 171-200.

114. Joerger M.C., Klaenhammer T.R. Characterization and purification of helveticin J and evidence for a chromosomally determined bacteriocin produced by Lactobacillus helveticus 481//J. Bacteriol. 1986. - V. 167. - P. 439-446.

115. Jones R.N., Johenson D.M., Erwin M.E. In vitro antimicrobial activities and spectra of U-100592 and U-100766, two novel fluorinated oxazolidinones//Antimicrob. Agents Chemother. 1996. - V. 40. - P. 720-726.

116. Joosten N., Nunes M. Prevention of histamine formation in cheese by bacteriocin-producing lactic acid bacteria//Appl. Environ. Microbiol. 1996. - V. 62.-N.4.-P. 1178-1181.

117. Jung G. Lantibiotics: a survey//In: Nisin and novel lantibiotics. Ed. G. Jung, H-G. Sahl. Leiden: Escom. 1991. - P. 1-34.

118. Jung G. Lantibiotics ribosomally synthesized biologically active polypeptides containing sulfide bridges and a,p-didehydroamino acids//Angew. Chem. Int. Ed. Engl. - 1991. - V. 30. - P. 1051-1068.

119. Kaatz G.W., Seo S.M. In vitro activities of oxazolidinone compounds U-100592 and U-100766 against Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis!!Antimicrob. Agents Chemother. 1996. - V. 40. - P. 789-801.

120. Kagan B.L., Selsted M.E., Ganz Т., Lehrer R.I. Antimicrobial defensin peptides form voltage-dependent ion-permeable channels in planar lipid bilayer membranes//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - V. 87. - P. 210-214.

121. Kaletta C., Entian K-D. Nisin, a peptide antibiotic: cloning and sequencing of the nis A gene and posttranslational processing of its peptide product//J. Bacteriol.- 1989.-V. 171.-N. 3.-P. 1597-1601.

122. Klaenhammer T.R. Genetics of bacteriocins produced by lactic acid bacteria//FEMS Microbiol. Rev. 1993. - V. 12. - P. 39-86.

123. Kleinkauf H., von Dohren H. Peptide antibiotics, (3-lactams and related compounds//Crit. Rev. Biotechnol. 1988. - V. 8. - P. 1-32.

124. Rnowles J.R. Penicillin resistance: the chemistry of beta-lactamase inhibition//Acc. Chem. Res. 1985. - V. 18. - P. 97-105.

125. Kogler H., Bauch M., Fehlhaber H-W., Griesinger C., Schubert W., Teetz V. NMR-spectroscopic investigations on mersacidin//In: Nisin and novel lantibiotics. Ed. G. Jung, H-G. Sahl. Leiden: Escom. 1991. - P. 159-170.

126. Koo S.P., Bayer A.S., Sahl H.G., Proctor R.A., Yeaman M.R. Staphylocidal action of thrombin-induced platelet microbicidal protein is not solely dependent on transmembrane potential//Infect. Immun. 1996. - V. 64. - P. 1070-1074.

127. Koo S.P., Yeaman M.R., Bayer A.S. Cell membrane is a principal target for the staphylocidal action of platelet microbicidal protein//Infect. Immun. 1997. - V. 65.- P. 4795-4800.

128. Kordel M., Schuller F., Sahl H-G. Interaction of the pore-forming peptide antibiotic Pep5, nisin and subtilin with nonenergized liposomes//FEBS Lett. 1989. -Y. 244.-P. 99-102.

129. Korobov V.P., Lemkina L.M. Production of an antistaphylococci protein by gram-positive cocci. Abstr. of Intern. Conf. Mikrobial diversity: current situation, conservation, strategy, and ecological aspects. Perm, 1996. - P. 182.

130. Kreil G. Antimicrobial peptides from amphibian skin: an overview//Ciba Found. Symp. 1994. - V. 186. - P. 77-90.

131. Laccy R.W., Chopra I. Genetic studies of a multi-resistant strain of Staphylococcus aureusf/J. Med. Microbiol. 1974. - V. 7. - P. 285-297.

132. Lebrun M., Audurier A., Cossart P. Plasmid-borne cadmium resistance genes in Listeria monocitogenes are similar to cadA and cadC of Staphylococcus aureus and are induced by cadmium//J. Bacteriol. 1994. - V. 176. - P. 3040-3048.

133. Leclerc R., Derlot E., Duval J., Courvalin P. Plasmid-mediated resistance to vancomycin and teicoplanin in Enterococcus/аесшгпШ. Engl. J. Med. 1988. - V. 319.-P. 157-161.

134. Leer R.J., van der Vossen J.M., van Giezen M., van Noort J.M., Pouwels P.H. Genetic analysis of acidocin B, a novel bacteriocin produced by Lactobacillus acidophilus//Microbiology. 1995. - V. 141. - P. 1629-1635.

135. Lehrer R.I., Barton A., Daher K.A., Harwig S.S., Ganz Т., Selsted M.E. Interaction of human defensins with Escherichia coli: mechanism of bactericidal activities//J. Clin. Invest. 1989. - V. 84. - N. 6. - P. 553-561.

136. Lehrer R.I., Ganz Т., Szklarek D., Selsted M.E. Modulation of the in vitro candidacidal activity of human neutrophil defensins by target cell metabolism and divalent cations//! Clin. Invest. 1988. - V. 81. - P. 1829-1835.

137. Levin B.R., Veronique P., Walker N. Compensatory mutations, antibiotic resistance and the population genetics of adaptive evolution in bacteria//Genetics. 2000. - V. 154. - P. 985-997.

138. Li Y-M., Milne J.C., Madison L.L., Kolter R., Walsh C.T. From peptide precursors to oxazole and thiazole-containing peptide antibiotics: microcin B17 synthase//Science. 1996. - V. 274. - P. 1188-1193.

139. Limbert M., Isert D., Klesel N., Markus A., Seibert G. Chemotherapeutic properties of mersacidin in vitro and in vivo//In: Nisin and novel lantibiotics. Ed. G. Jung, H-G. Sahl. Leiden: Escom. 1991. - P. 448-456.

140. Lin W., Hansen J.N. The antimicrobial effect of a structural variant of subtilin against outgrowing Bacillus cereus T spores and vegetative cells occurs by different mechanisms//Appl. Environ. Microbiol. 1993. - V. 59. - P. 648-651.

141. Lipsitch M. The rise and fall of antimicrobial resistance//Trends in Microbiol. -2001. V. 9.-P. 438-444.

142. Lohner K., Latal A., Lehrer R.I., Ganz T. Differential scanning microcalorimetry indicates that human defensin, HNP-2, interacts with biomembrane mimetic systems//Biochemistry. 1997. - V. 36. - P. 1525-1531.

143. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., Ranball J.J. Protein measurement with the Folin Phenol Reagrent//J. Biol. Chem. 1951. - V. 193. - P. 265 -275.

144. Maloy W.L., Kari U.P. Structure-activity studies on magainins and other host defense peptides//Biopolymers. 1995 - V. 37. - N. 2. - P. 105-122.

145. Marciset O., Jeronimus Stratingh M.C., Mollet В., Poolman B. Thermophilin 13, a nontypical antilisterial poration complex bacteriocin, that functions without receptor//J. Biol. Chem. 1997. - V. 272. - P. 14277-14284.

146. Markham P.N., Neyfakh A.A. Efflux-mediated drug resistance in gram-positive bacteria//Cur. Opin. Microbiol. 2001. - V. 4. - P. 509-514.

147. Martin I., Ruysschaert J.M., Sanders D., Giffard C. Interaction of the lantibiotic nisin with members revealed by fluorescence quenching of an introduced tryptophan//Eur. J. Biochem. 1996. -V. 239. - P. 156-164.

148. Mates S.M., Eisenberg E.S., Mandel L.J., Patel L., Kaback H.R., Miller M.H. Membrane potential and gentamicin uptake in Staphylococcus aureus/!?xoc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982. - V. 79. - P. 6693-6697.

149. Matsuzaki K. Magainins as paradigm for the mode of action of pore forming polypeptides//Biochim. Biophys. Acta. 1998. - V. 1376. - P. 391-400.

150. McAuliffe O., Ross R.P., Hill K. Lantibiotics: structure, biosynthesis and mode of action//FEMS Microbiol. Reviews. 2001. - V. 25. - P. 285-308.

151. Mccafferty D.G., Cudic P., Yu M.K., Behenna D.C., Kruger R. Synergy and duality in peptide antibiotic mechanisms//Curr. Opin. in Chem. Biol. 1999. - V. 3. - P. 672-680.

152. Minami Y., Yoshida K., Azuma R., Urakawa A., Kawauschi T. Structure of cypemycin, a new peptide antibiotic//Tetrahedron Lett. 1994. - V. 35. - P. 8001-8004.

153. Morikawa N., Hagiwara K., Nakajima T. Brevinin-1 and -2, unique antimicrobial peptides from the skin of the frog Rana brevipoda porsal!Biochem. Biophys. Res. Communs. 1992. - V. 189. - P. 184-190.

154. Mota-Meira M., Lapointe G., Lacroix C., Lavoie M.C. MICs of mutacin B-Ny 266, nisin A, vancomycin, and oxacillin against bacterial pathogens//Antimicrob. Agents Chemother. 2000. - V. 44. - P. 24-29.

155. Murray В., Mederski-Samaroj B. Transferable )3-lactamase: a new mechanism for in vitro penicillin resistance in Streptococcus faecalis/1 J. Clin. Investig. 1983. -V.72.-P. 1168-1171.

156. Navaratna M., Sahl H.G., Tagg J.R. Two-component anti-Staphylococcus aureus lantibiotic activity produced by Staphylococcus aureus!!Appl. Environ. Microbiol. 1998. - V. 64. - P. 4803.

157. Navarro J., Chabot J., Sherrill K., Aneja R., Zahler S.A., Packer E. Interaction of duramycin with artificial and natural membranes//Biochemistry. 1985. - V. 24.- P. 4645-4650.

158. Nemeth A., Gasparik-Reichardt J., Farkas J. Identification and characterization of bacteriocins produced by lactic acid bacteria//Fleischwirtschaft. 1996. - V. 70.- N.10. P. 1042-1044.

159. Neu H.C. The crisis in antibiotic resistance//Science. 1992. - V. 257. - P. 1064-1073.

160. Nikaido H. Multiple antibiotic resistance and efflux//Cur. Opin. Microbiol.- 1998.-V. 1.-P. 516-523.

161. Pardi A., Hare D., Selsted M.E. Solution structures of the rabbit neutrophil defensin NP-5//J. Mol. Biol. 1988. - V. 201. - N. 3. - P. 625-636.

162. Patrzykat A., Zhang L., Mendoza V., Iwama G.K., Hancock R.E.W. Synergy of histone-derived peptides of coho salmon with lysozyme and flounder pleurocidin//Antimicrob. Agents Chemother. 2001. - V. 45. - N. 5. - P. 1337-1342.

163. Paulsen I.Т., Brown M.H., Scurray R.A. Proton-dependent multidrug efflux systems//Microbiol. Rev. 1996. - V. 60. - P. 575-608.

164. Peschel A., Gotz F. Analysis of the Staphylococcus epidermidis genes epi-F,-E, and-G involved in epidermin immunity//J. Bacteriol. -1996.-V. 178.-P.531-536.

165. Piard J.-C., Kuipers O.P., Rollema H.S., Desmazeuad M.J., de Vos W.M. Structure, organization and expression of the let gene for lacticin 481, a novellantibiotic produced by Lactococcus lactislll. Biol. Chem. 1993. - V. 268. - P. 16361-16368.

166. Piers K.L., Hancock R.E. The interaction of a recombinant cecropin/mellitin hybrid peptide with the outer membrane of Pseudomonas aeruginosa!/Mol. Microbiol. 1994. -V. 12. - P. 951-958.

167. Qu X.D., Harwig S.S., Shafer W.M., Lehrer R.I. Protegrin structure and activity against Neisseria gonorrhoeae//Infect. Immun. 1997. - V. 65. - P. 636-639.

168. Rasmussen В., Glasman Y., Tally F. Inhibition of protein synthesis occurring on tetracycline-resistant, TetM-protected ribosomes by a novel class of tetracyclines, the glycylcyclines//Antimicrob. Agents Chemother. 1994. - V. 38. - P. 1658-1660.

169. Rawis R.Y. Identification and characterization of bacteriocins produced by lactic acid bacteria//Chem. Eng. New. 1997. -V. 75. -N. 22. - P. 35-39.

170. Raynor R.L., Zheng В., Kuo J.F. Mebrane interactions of amphiphilic polypeptides mastoparan, melittin, polymyxin B, and cardiotoxin//J. Biol. Chem. 1991. - V. 266. - N. 5. - P. 2753-2758.

171. Rice W.G., Ganz Т., Kinkade J.M. Defensin-rich dense granules of human neutrophils//Blood. 1987. - V. 70. - N. 3. - P. 757-765.

172. Ruhr E., Sahl H-G. Mode of action of the peptide antibiotic nisin and influence on the membrane potential of whole cells and on artifical membrane vesicles//Antimicrob. Agents Chemother. 1985. - V. 27. - P. 841-845.

173. Ryan M.P, Jack R.W., Josten M., Sahl H.-G., Jung G., Ross R.P., Hill C. Extensive-translational modification, including a serine to D-alanine conversion, in the two-component lantibiotic, lacticin 3147//J. Biol. Chem. 1999. - V. 274. - P. 37544-37550.

174. Ryan M.R., Rea M.C., Hill C. An application in cheddar cheese manufacture for a strain of Lactococcus lactis producing a novel broad-spectrum bacteriocin, lacticin 3147//Appl. Environ. Microbiol. 1996. - V. 62. - P. 612-619.

175. Sahl H-G. Pore formation in bacterial membranes by cationic lantibiotics//In: Nisin and novel lantibiotics. Ed. G. Jung, H-G. Sahl. Leiden: Escom. 1991. - P. 347-358.

176. Sahl H-G., Bierbaum G. Lantibiotics: biosynthesis and biological activities of uniquely modified peptides from grampositive bacteria//Ann. Rev. Microbiol.- 1998.-V. 52.-P. 41-79.

177. Sahl H-G., Brandis H. Efflux of low Mr substances from the cytoplasm of sensitive cells caused by the staphylococcin-like agent Pep 5//FEMS Microbiol. Lett.- 1983.-V. 16.-P. 75-79.

178. Sahl H-G., Brandis H. Mode of action of the staphylococcin-like peptide Pep 5 and culture conditions affecting its activity//J. Abtl. Orig. 1982. - V. 252. - P. 166-175.

179. Sahl H-G., Jack R.W., Bierbaum G. Biosynthesis and biological activities of lantibiotics with unique post-translational modifications//Eur. J. Biochem. 1995. -V. 230.-P. 827-853.

180. Sahl H-G., Kordel M., Benz R. Voltage-dependent depolarization of bacterial membranes and artiflcal lipid bilayers by the peptide antibiotic nisin//Arch. Microbiol. 1987. - V. 149. - P. 120-124.

181. Salyers A.A., Amabile-Cuevas G.F. Why antibiotic resistance genes so resistant to elimination?//Antimicrob. Agents Chemother. 1997. - V. 41. - P. 2321-2325.

182. Samita Y., Nouda H., Kanazava K., Furasawa M. Antimicrobial activity of SM-17466, a novel carbapenem antibiotic with potent activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus!IAxitimicrob. Agents Chemother. 1995. - V. 39. -P. 910-916.

183. Scott M.G., Gold M.R., Hancock R.E. Interaction of cationic peptide with lipoteichoic acid and gram-positive bacteria//Infect. Immun. 1999. - V. 67. - N. 12.-P. 6445-6453.

184. Scott M., Yan H., Hancock R.E. Biological properties of structurally related a-helical cationic antimicrobial peptides//Infect. Immun. 1999. - V. 67. - P. 2005-2009.

185. Selsted M.E., Harwig S.S., Ganz T. Primary structures of three human neutrophil defensins//J. Clin. Invest. 1985. - V. 76. - P. 1436-1439.

186. Selsted M.E., Szklarek D., Lehrer R.I. Purification and antibacterial activity of antimicrobial peptides of rabbit granulocytes//Infect. Immun. 1984. - V. 45. - P. 150-154.

187. Selsted M.E., Tang Y.Q., Morris W.L. Purification primary structures and antibacterial activity of f3-defensins, a new family of antimicrobial peptides from bovine neutrophils//!. Biol. Chem. 1993. - V. 268. - N. 9. - P. 6641-6648.

188. Severina E., Severin A., Tomasz A. Antibacterial efficacy of nisin against multidrug-resistant gram-positive pathogens//! Antimicrob. Chemother. 1998. - V. 41.-P. 341-347.

189. Shai Y., Molecular recognition between membrane-spanning polypeptides//Trends Biochem. Sci. Y. 20. - P. 460-464.

190. Shaw K.J., Rather P.N., Hare S.R., Miller G.H. Molecular genetics of aminoglycoside resistance genes and familial relationships of the aminoglycoside-modifying enzymes//Microbiol. Rev. 1993. - V. 57. - P. 138-163.

191. Sheth T.R., Henderson R.M., Hladky S.B., Cuthbert A.W. Ion channel formation by duramycin//Biochim. Biophys. Acta. 1992. - V. 1107. - P. 179-185.

192. Shiba Т., Wakamiya Т., Fukase К., Ulki Y., Teshima Т., Nishikava M. Structure of the lanthionin peptides nisin, ancovenin and lanthiopeptin//In: Nisin and novel lantibiotics. Ed. G. Jung, H-G. Sahl. Leiden: Escom. 1991. - P. 113-122.

193. Shimoda M., Ohki K., Shimamoto Y., Kohashi O. Morphology of defensin-treated Staohylococcus aureus!I Infect. Immun. 1995. -V. 63. - P. 2886-2891.

194. Sieradzki K., Tomasz A. Inhibition of cell wall turnover and autolysis by vancomycin in a highly vancomycin-resistant mutant of Staphylococcus aureus!/J. Bacteriol. 1997. -V. 179. - P. 2557-2566.

195. Silver L., Bostian K. Discovery and development of new antibiotics: the problem of antibiotic resistance//Antimicrob. Agents Chemother. 1993. - V. 37. -P. 377-383.

196. Simmaco M., Mignogna G., Barra D., Bossa F. Antimicrobial peptides from skin secretion of Rana esculenta. Molecular cloning of cDNA encoding esculentin and isolation of new active peptides//J. Biol. Chem. 1994. - V. 269. - P. 11956-11961.

197. Somma S., Meratti W., Parenti F. Gardimycin, a new antibiotic inhibiting peptidoglycan synthesis//Antimicrob. Agents Chemother. 1971. - V. 11. - P. 396-401.

198. Steinberg D.A, Hurst M.A., Fujii C.A, Kung A.H., Ho J.F, Cheng F.C., Loury D.J., Fiddles J.C. Protegrin-1: a broad-spectrum, rapidly microbicidal peptide with in vitro activity//Antimicrob. Agents Chemother. 1997. - V. 41. - P. 1738-1742.

199. Steiner H., Hultmark D., Engstrom A., Bennich H., Boman H. Sequence and specificity of two antibacterial proteins involved in insect immunity//Nature. 1981. - V. 292. - N. 16. - P. 246-248.

200. Tagg J.R., Dajani A.S., Wannamaker L.W. Bacteriocins of gram-positive bacteria//Microbiol. Rev. 1976. - V. 40. - P. 722-756.

201. Tahara Т., Oshimura M., Umezawa C., Kanatani K. Isolation, partial characterization, and mode of action of acidicin J1132, a two-component bacteriocinproduced by Lactobacillus acidophilus JCM1132//Appl. Environ. Microbiol. 1996.- V. 62. P. 892-897.

202. Tally F., Ellestag G., Testa R. Glycylcyclines: a new generation of tetracyclines//!. Antimicrob. Chemother. 1995. - V. 35. - P. 449-452.

203. Tang Y.Q., Selsted M.E. Characterization of the disulfide motif inBNBD-12, an antimicrobial (3-defensin peptide from bovine neutrophils//! Biol. Chem. 1993.- V. 268. N.9. - P. 6649-6653.

204. Tang Y.Q. Yuan J., Osapay G., Osapay K., Tran D., Miller С .J., Ouellette A.J., Selsted M.E. A cyclic antimicrobial peptide produced in primate leukocytes by the ligation of two truncated alpha-defensins//Science. 1999. - V. 286. - P. 498-502.

205. The Procaryotes. Second edition/ Ed. A.Balows, H.G.Triiper, M.Dworkin, W.Harder, K-H.Schleifer. New-York: Springer-Yerlag, 1992. - 1420 p.

206. Tytler E., Anantharamaiah D., Walker V., Mishra V., Palgunachari M., Sergest J. Molecular basis for prokaryotic specificity of magainin-induced lysis//Biochemistry. 1995. - Y. 34. - P. 4393-4401.

207. Ubelaker M.H., Rosenblum E.D. Transduction of plasmid determinants in Staphylococcus aureus and Eschericha colH/1. Bacteriol. 1978. - V. 133. - P. 699-707.

208. Vaara M. Agents that increase the permeability the outer membrane//Microbiol. Rev. 1992. - V. 56. - P. 395-411.

209. Vaara M., Porro M. Group of peptides that act synergistically with hydrophobic antibiotics against gram-negative enteric bacteria//Antimicrob. Agents Chemother.- 1996.-V. 40.-N. 8.-P. 1801-1805.

210. Vaara M., Vaara T. Ability of cecropin to penetrate the enterobacterial outer membrane//Antimicrob. Agents Chemother. 1994. - V. 38. - P. 2498-2501.

211. Viljanen P., Matsunaga H., Kimura Y., Vaara M. The outer membrane permeability-increasing action of deacylpolymyxins//J. Antibiot. 1991. - V. 44. -P. 517-523.

212. Walsh K. Molecular mechanisms that confer antibacterial drug resistance//Nature. 2000. - Y. 406. - P. 775-781.

213. Wenk M.R., Seeling J. Magainin 2 amide interaction with lipid membranes: calorimetric detection of peptide binding and pore formation//Biochemistry. 1998. -V. 37.-P. 3909-3916.

214. Westerhoff H.V., Juretic D., Hendler R.W., Zasloff M. Magainin and the disruption of membrane-linked free-energy transduction//Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1989. - V. 86. - P. 6597-6601.

215. Wimley W.C., Selsted M.E., White S.H. Interactions between human defensins and lipid bilayers: evidence for formation of multimeric pores//Protein Sci. 1994. -V. 3.-P. 1362-1373.

216. Wu M., Hancock R.E. Interaction of the cyclic antimicrobial cationic peptide bactenecin with the outer and cytoplasmic membrane//J. Biol. Chem. 1999. - V. 274. - P. 29-35.133

217. Yan H., Hancock R.E.W. Synergistic interactions between mammalian antimicrobial defense peptides//Antimicrob. Agents Chemother. 2001. - Y. 45. -N. 5.-P. 1558-1560.

218. Yang L., Thad A.H., Thomas M.W., Lai D., Huang H.W. Barrel-stave model or toroidal model? A case study on melittin pores//Biophys. J. 2001. - V. 81. - P. 1475-1485.

219. Yoshida H., Bogaki M., Nakamura S., Ubukata K., Konno M. Nukleotide sequence and characterization of the Staphylococcus aureus norA gene, which confers resistance to quinolones//J. Bacteriol. 1990. - V. 172. - P. 6942-6949.

220. Zasloff M. Magainins, a class of antimicrobial peptides from Xenopus skin: isolation, characterization of two active forms, and partial DNA sequence of precursor//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - V. 84. - P. 5449-5454.1. БЛАГОДАРНОСТИ

221. Отдельное спасибо Александру Юрьевичу Максимову за помощь, оказанную им при оформлении диссертационной работы.

222. Выражаю благодарность доктору биологических наук Олегу Николаевичу Октябрьскому за предоставление среды для определения антибиотикочувствительности бактерий.

223. Большое спасибо рецензентам кандидату биологических наук Татьяне Никодимовне Каменских и кандидату биологических наук Елене Генриховне Плотниковой за ценные советы и замечания, сделанные ими при прочтении данной работы.

224. Считаю своим долгом поблагодарить доктора биологических наук, профессора Ирину Борисовну Ившину за неоценимую помощь и поддержку на заключительном этапе выполнения работы.