Изучение аффинных свойств поверхностного рецепторного белка стрептококка группы G методом высокоэффективной монолитной хроматографии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат химических наук Ложкина, Ольга Владимировна

• Ложкина, Ольга Владимировна
• кандидат химических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат химических наук Ложкина, Ольга Владимировна

Список используемых в тексте сокращений.

Введение.

1. Обзор литературы.

1Л In vitro построение биологических процессов с участием иммобилизованных систем и их использование в биоанализе и биопревращениях.

1.1.1 Понятие биологического моделирования.

1.1.2 Статические и динамические методы биоанализа и биоконверсии, основанные на принципе аффинности.

1.1.2.1 Биологические тест-системы.

1.1.2.2 Аффинная хроматография.

1.1.2.3 Проточные биореакторы на основе иммобилизованных ферментов и клеток.

1.2 Монолитные макропористые среды для реализации динамических процессов межфазового переноса в системах, основанных на аффинных взаимодействиях.

1.2.1 Общие представления о ГМА-ЭДМА макропористых монолитах и о высокоэффективной монолитной хроматографии.

1.2.2 Гидродинамические особенности монолитных ГМА-ЭДМА сорбентов.

1.2.3 Высокоэффективная монолитная дисковая аффинная хроматография (ВЭМДАХ).

1.2.4 Применение аффинной хроматографии для количественной оценки специфического комплексообразования.

1.2.5 Проточные реакторы непрерывного действия на основе иммобилизованных ферментов.

1.3 Взаимодействие стрептококков группы G с белками плазмы крови.

1.3.1 Основные сведения о стрептококках.

1.3.2 Иммуноглобулин G: структура и функции.

1.3.3 Альбумин: структура и функции.

1.3.4 Стрептококковый белок G.

2. Результаты и обсуждение.

2.1 Исследование аффинных свойств рекомбинантного белка G методом ВЭМДХ.

2.1.1 Иммобилизация белков-лигандов на CIM® дисках.

2.1.2 Сравнение количественных параметров взаимодействия моно- и бифункциональных форм рекомбинантного белка G с IgG и С А.

2.1.3 Изучение структуры бифункционального белка G.

2.2 Конструирование эффективных проточных систем на основе иммобилизованных биологических надмолекулярных структур.

2.2.1 Вопрос соответствия морфологии ГМА-ЭДМА монолитов размеру микроорганизмов.

2.2.2 Моно дисперсные полимерные микросферы как структурные имитаторы клеток.

2.2.2.1 Выбор морфологии ГМА-ЭДМА носителей с точки зрения их проницаемости для суспензий монодисперсных полимерных латексов.

2.2.2.2 Создание искусственных клеток - имитаторов стрептококка на основе функционализированных ПММА латексных частиц.

2.2.2.3 Оценка эффективности модельной функциональной системы.

2.2.3 Создание и исследование проточных систем на основе иммобилизованных на ГМА-ЭДМА монолитах стрептококков группы G.

2.2.3.1 Оптимизация условий ковалентной иммобилизации клеточных структур.

2.2.3.2 Оценка рецепторной активности иммобилизованных клеток стрептококка.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение аффинных свойств поверхностного рецепторного белка стрептококка группы G методом высокоэффективной монолитной хроматографии»

Построение и исследование биологических моделей, функционирующих с учяптыем иммобилизованных молекулярных структур (белки или полинуклеотиды) и надмолекулярных систем (клеточные фрагменты или клетки), является актуальным направлением в современных биотехнологии и медицине как для изучения свойств биологических объектов, так и для создания эффективных биореакторов и диагностических тест-систем.

Целесообразность конструирования подобного рода моделей существенно возрастает при исследовании свойств патогенных микроорганизмов, в частности, стрептококков. Известно, что в последние годы участились случаи заболеваний, вызванные условно-патогенными стрептококками групп С и G. Большинство штаммов данных микроорганизмов экспрессируют на своей поверхности рецепторный белок G, способный связывать два основных белка крови млекопитающих, а именно, иммуноглобулин G и сывороточный альбумин, причем сайты связывания расположены на разных концевых участках молекулы. В связи с тем, что поверхностные рецепторные белки стрептококков способны подавлять фагоцитоз, индуцировать синтез антиммуноглобулинов, а также преодолевать иммунные механизмы защиты, маскируя микроорганизм под белки хозяина, многие исследователи рассматривают их в качестве факторов патогенности. Таким образом, становится очевидным, что in vitro наблюдение за поведением рецепторных белков в модельных системах, имитирующих их естественное микроокружение, является действительно актуальной задачей при исследовании болезнетворных свойств и функций микроорганизмов.

Большие возможности для решения таких задач представляет высокоэффективная монолитная хроматография (ВЭМХ), основанная на использовании в качестве стационарных фаз макропористых полимерных сорбентов монолитного типа. Морфологические, стерические и гидродинамические свойства данных носителей позволяют проводить процессы биосепарации и биоконверсии с использованием высоких скоростей потока подвижкой фазы, благодаря практически полному отсутствию диффузионных ограничений нормальному межфазовому переносу вещества. Кроме того, преимуществами глицидилметакрилат -этиленгликольдиметакрилатных (ГМА-ЭДМА) стационарных фаз является возможность направленного формирования поровой структуры в широком диапазоне размеров пор (от 0.1 до 10 мкм), а также наличие эпоксидных групп, позволяющих проводить одностадийную функционализацию сорбента биологически активными веществами.

Вышеотмеченные особенности монолитных носителей обуславливают их предпочтительность для создания проточных функциональных систем на основе иммобилизованных компонентов клеток или клеток стрептококка, полезных с точки зрения выяснения особенностей взаимодействия микроорганизмов с белками крови млекопитающих. Кроме того, не менее актуально решение практической задачи - скоростного аффинного выделения как чистых препаратов белков плазмы, так и рекомбинантных форм белка G из нативных биологических жидкостей (крови и клеточных лизатов) с помощью обсуждаемого метода.

При всех преимуществах ВЭМХ, этот метод не может быть использован для проведения скриннинговых анализов с одновременным определением большого числа интересующих объектов. Проблема может быть решена конструированием непроточных композиционных слоев на основе инертн'ого материала и химически связанного с ним полимерного монолита, сохраняющего физическую и химическую организацию (структуру разделительного слоя) сорбентов, используемых в ВЭМХ. Данная задача представляется актуальной, поскольку в перспективе, подобные композиты могут найти применение при создании экспрессных тест-диагностикумов, основанных на аффинных взаимодействиях.

Цель работы. Целью настоящей работы явилось изучение взаимодействия белка G с белками плазмы в модельных проточных системах методом аффиннои высокоэффектиьний монолитной хроматографии, а такж* обоснование практических рекомендаций к использованию данного метода для целей биотехнологии и лабораторной практики. В связи с этим, были поставлены и решались следующие задачи:

1. Определение методом аффинной ВЭМХ количественных параметров биокомплементарного взаимодействия белка G с иммуноглобулином G и сывороточным альбумином.

2. Конструирование и исследование характеристик проточной системы с участием искусственных клеток-имитаторов стрептококка, иммобилизованных на ГМА-ЭДМА сорбентах.

3. Создание и оценка эффективности проточной функциональной системы на основе иммобилизованных на ГМА-ЭДМА носителях клеток стрептококка группы G.

4. Полупрепаративное выделение иммуноглобулина G, сывороточного альбумина и рекомбинантных форм белка G из нативных биологических жидкостей, используя ВЭМХ.

5. Разработка непроточных композиционных слоев сочетанием методов силановой химии и технологии получения монолитных метакрилатных сорбентов.

Научная новизна работы.

1. Методом высокоэффективной монолитной дисковой хроматографии определены количественные параметры аффинного взаимодействия белка G с иммуноглобулином G и сывороточным альбумином.

2. Впервые обоснована эффективность привлечения модельных клеток-имитаторов для оптимизации условий иммобилизации надмолекулярных структур на макропористых ГМА-ЭДМА монолитных сорбентах.

3. Впервые разработаны подходы для создания проточных функциональных систем с участием микроорганизмов (стрептококков группы GY иммобилизованных на метакрилатных макропористых носителях.

4. Впервые предложены непроточные комбинированные пластины на основе инертного материала (стекла) и ковалентно связанного с ним слоя ГМА-ЭДМА монолита, предназначенные для использования в диагностике.

Практическая значимость.

Разработаны и оптимизированы лабораторные схемы скоростного выделения рекомбинантных форм белка G, иммуноглобулина G и сывороточного альбумина высокой степени чистоты из нативных биологических жидкостей методом высокоэффективной монолитной дисковой аффинной хроматографии. Предложена методика полупрепаративного выделения IgG с привлечением ГМА-ЭДМА монолитных радиальных колонок. Осуществлено фракционирование плазмы крови человека с одновременным извлечением IgG и СА, используя метод ВЭМДХ.

1. Обзор литературы

1.1 In vitro построение биологических процессов с участием иммобипияппянных биппартнеров и их использование в биоанализе и биопревращениях

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Ложкина, Ольга Владимировна

Выводы

1. С использованием метода высокоэффективной монолитной дисковой хроматографии определены аффинные характеристики двух функциональных центров связывания белка G с иммуноглобулином G и сывороточным альбумином. Впервые установлено, что IgG-связывающая активность белка G в десять раз превышает его СА-связывающую способность, при этом оба типа взаимодействия характеризуются высокой специфичностью.

2. Путем функционализации ПММА и ПММАД монодисперсных микросфер белком G построены модельные системы, имитирующие поверхность стрептококка. Исследование моделей методом ВЭМДХ показало, что белок G, локализованный в данных объектах, полностью сохраняет высокое сродство к IgG.

3. Впервые разработана модельная проточная функциональная система на основе иммобилизованных на ГМА-ЭДМА сорбентах дезактивированных и интактных клеток стрептококка. Установлено, что в данном случае поверхностный рецепторный белок стрептококка сохраняет свои функциональные свойства.

4. Разработаны методы скоростного выделения из биологических жидкостей рекомбинантных форм белка G, а также IgG и СА высокой степени чистоты с использованием монолитных ГМА-ЭДМА дисков и колонок. Впервые предложена схема ВЭМДХ фракционирования плазмы крови человека с одновременным извлечением IgG и СА.

5. Впервые изготовлены образцы непроточных комбинированных слоев на основе стекла и ГМА-ЭДМА монолита и показан модельный пример их использования в аналитических целях; доказано, что подобные системы могут быть регенерированы и многократно использованы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Ложкина, Ольга Владимировна, 2003 год

1. Кнунянц И. Л. Химический энциклопедический словарь. М.: Советская Энциклопедия. - 1983. - с.345-346.

2. Березин И. В., Кузнецов В. И., Варфоломеев С. Д. Биокатализ: история моделирования опыта живой природы. М.: Наука, 1984. -344 с.

3. Domi A., Moss В. Cloning the vaccinia virus genome as a bacterial artificial chromosome in E. coli and recovery of infectious virus in mammalian cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. - v.99. - p. 1241512420.

4. Engineering artificial redox chains by molecular "Lego"/ Sadeghi S. J., Meharehna Y. Т., Fantuzzi A., Valetti F., Gilardi G. // Faraday Discuss. -2002.- v.116 p.135-153.

5. Minuth W. W., Sittinger M., Kloth S. Tissue engineering: generation of differentiated artificial tissues for biomedical applications // Cell Tissue Res. 1998.-v.291.- p.l-ll.

6. Hybrid artificial liver using hepatocyte organoide culture / Funatsu K., Ijima H., Nakazawa K., Yamashita Y., Shimada H., Sugimachi K. // Artif. Organs. 2001. - v.25. - p. 194-200.

7. McCarthy M. Artificial thymus can produce T-cells // Lancet. 2000. -v.356. - p.48.

8. The longevity of a bilayered skin substitute after application to venous ulcers / Phillips T. J., Manzoor J., Rojas A., Isaacs C., Carson P., Sabolinski M., Young I., Falanga Y. // Arch. Dermathol. -2002.- v. 138. -p.1079-1081.

9. Овчинников Ю. А. Химия жизни: Избранные труды. М.: Наука, 1990. -496с.

10. Racker Е. Resolution and reconstitution of the inner mitohondrial membrane//Fed. Proc. 1967. - v.26. - p.1335-1340.

11. Raedler J., Sackmann E. Functionalization of solids by ultrathin soft polymer films and polimer/lipid film composites: modelling of cell surfaces and cell recognition processes // Cur. Opin. Solid State Mater. -1998. v.2. -p.330-336.

12. Elender G. Functionalization of Si/Si02 and glass surfaces with ultrathin dextran films and deposition of lipid bilayers // Biosens. Bioelectron. -1996. v.ll.-p.565-577.

13. Lang H. A new class of thiolipids for the attachement of lipid bilayers on gold surfaces // Langmuir. 1994. - v.l 1. - p. 197-210.

14. Malik V., Pundir C. S. Determination of total cholesterol in serum by cholesterol estrase and cholesterol oxidase immobilized and co-immobilized on to acrylamine glass II Biotechnol. Appl. Biochem. 2002. - v.35. -p.191-197.

15. Hansen E. H., Gundstrup M., Mikkelsen H. S. Determination of minute amounts of ATP by flow injection analysis using enzyme amplification reactions and fluorescence detection // J. Biotechnol. 1993. - v.31. -p.369-380.

16. Ilan E., Chang Т. M. Lipid polyamide-polyethileneimine microcapsules for immobilization of three cofactors and multienzyme systems // Appl. Biochem. Biotechnol. 1986. - v.13. - p.221-230.

17. Chang Т. M. Recycling of NAD(P) by multienzyme systems immobilized by microcapsulation in artificial cells // Meth. Enzymol. -1987.-v. 136.-p.67-82.

18. Secre P. A., Mattiasson В., Mosbach K. Immobilized three-enzyme-system: model of microenvironmental compartmentation in mitochondria // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1973. - v.70. - p.2534 - 2542.

19. Chang Т. M. Pharmaceutical and therapetic applications of artificial cells including microcapsulation // Eur. J. Pharm Biopharm. 1998. - v.45. -p.3-8.

20. Kloboucek A. Adhesion-induced receptor segregation and adhesion plaque formation: a model membrane study // Biophys. J. 1999. - v.77. -p.231 i - 23iS.

21. Sackmann E., Tanaka M. Supported membranes on soft polymer cushion: fabrication, characterization and application // Tibtech. 2000. - v. 18. -p.58-64.

22. ТурковаЯ. Аффинная хроматография. M.: Мир, 1980. - 471с.

23. Нго Т. Т., Ленхофф Г. Имммуноферментный анализ. М.: Мир, 1988.-444с.

24. Фримель Г. Иммунологические методы. М.: Медицина, 1987. -472с.

25. Назаров Н. М. Иммобилизованные биокатализаторы в биотехнологических процессах // Авиакосм. Эколог. Мед. 2001. -т.35. - с.3-10.

26. Immobilization of cells for application in the food industry / Groboillot A., Boadi D. K., Poncelet D., Neufeld К. I. // Crit. Rev. Biotechnol. -1994. v.14. -p.75-107.

27. Корпан П., Эльская А. В. Микробные сенсоры: достижения, проблемы перспективы // Биохимия. 1995. - т.60. - с. 1988-1998.

28. Display of proteins on bacteria / Samuelson P., Gunneriusson E., Nygren P. A., Stahl S. // J. Biotechnol. 2002. - v.96. - p. 129-154.

29. Tribbick G. Multipin peptide libraries for antibody and receptor epitope screening and characterization // J. Immunol. Meth. 2002. - v.267. -p.27-35.

30. Лефковитс И., Пернис Б. Иммунологические методы исследований. -М.: Мир, 1988.-485с.

31. Handman Е., Jarvis Н. М. Nitrocellulose-based assays for the detection of glycolipids and other antigens: mechanism of binding to nitrocellulose //J.Immunol. Meth. 1985. - v.83. - p.l 13-123.

32. Vo-Dinh Т., Cullum В. Biosensors and biochips: advances in biological and medical diagnostics // Fresenius J. Anal. Chem. 2000. - v.366. -p.540-551.

33. Albala J. S. Array-based proteomics: the latest chip challenge // Expert Rev. Mol. Diagn. 2001. - v. 1. - p. 145-152.

34. Mirzabekov A. D. DNA sequencing by hybridization a megasequencing method and a diagnostic tool // Trends Biotechnol. - 1994. - v.12. - p.27-32.

35. Биологические микрочипы, содержащие иммобилизованные в гидрогеле нуклеиновые кислоты, белки и другие соединения: свойства и приложения в геномике / Барский В. Е., Колчинский А. М., Лысов Ю. П., Мирзабеков А. Д. // Мол. Биол. 2002. - т.36. - с.25-28.

36. Дин П., Джонсон У., Мидл Ф. Аффинная хроматография: методы. -М.: Мир, 1988.-278с.

37. Arshady R. Microspheres for biomedical applications: preparation of reactive and labelled microspheres // Biomaterials. 1993. - v.14. - p.5-15.

38. Sundberg L., Porath J. Preparation of adsorbents for biospecific affinity chromatography. Attachment of group-containing ligands to insoluble polymers by means of bifuctional oxiranes // J. Chromatogr. 1974. -v.90. - p.87-98.

39. Hermanson G. Т., Mallia A. K., Smith P. K. Immobilized Affinity Ligand Techniques. Academic Press, 1992. 512p.

40. Taylor R. F. Protein immobilization: fundamentals and application. New York, Marcel Dekker, 1991. 31 lp.

41. Coffman L. J., Roper D. K., Lightfoot E. N. High-resolution chromatography of proteins in short columns and adsorptive membranes // Bioseparctiiuns. 1991 v.4. - p 1ЯЗ-200.

42. Frey D. D., Kang X. Chromatofocusing using micropellicular column packing with computer-aided design of the elution buffer composition // Anal. Chem. 2002. - v.74. - p.1038-1045.

43. Afeyan N. В., Fulton S. P., Regnier F. E. Perfusion chromatography packing materials for proteins and peptides // J. Chromatogr. 1991. -v.544. - p.267-279.

44. Adsorption characteristics of an immobilized metal affinity membrane / Iwata H., Saito K., Furusaki S., Sugo Т., Okamoto J. // Biotechnol. Prog. -1991.- v.7. p.412-418.

45. Klein E. J. Affinity membranes: a 10-year review // J. Membr. Sci. -2000. v.179.-p.1-27.

46. Porous polymer monoliths: an alternative to classical beads / Xie S., Allington R. W., Frechet J. M., Svec F. // Adv. Biochem. Eng Biotecnol. -2002. v.76.- p.87-125.

47. Березин И. В. Клячко Н. В., Левашов А .В. Иммобилизованные ферменты. М.:Высш. шк., 1987. - 158с.

48. Tanaka A., Tosa J., Kobayashi Т. Industrial application of immobilized biocatalysts. Hardocover, Marcel Dekker, 1992. - 316p.

49. Podgornik A., Tennikova Т. B. Chromatographic reactors based on biomolecular activivty, in: Advances in Biochemical

50. Engineering/Biotechnology (Th. Scheper, R. Freitag, Eds.) // Berlin -Heidelberg, Springer-Verlag. 2002. - v.76. - p.165-210.

51. Van Г. Riei K., Txampcr J. Basic biore.aot.or design. Hardocover, Marcel Dekker, 1991.- 174p.

52. Monitoring of alpha-ketoglutarate in a fermentation process using expended bed enzyme reactor / Collins A., Nandakumar M. P., Csoregi E., MatiassonB. // Biosens. Bioelectron. 2001. - v. 16. - p.765-771.

53. Mitchel D. A., Berovic M., Kreiger N. Biochemical engineering aspects of solid state bioprocessing // Biochem. Eng. Biotechnol. 2000. - v.68 -p.61-138.

54. Вурворд Дж. Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы. М.: Мир, 1988.- 215р.

55. Рыбильский Н. Г., Чаплина И. Г. Иммобилизованные клетки. М: ВНИИПИ, 1990. -220с.

56. Синицын А. П., Райнина Е. И., Лозинский В. И., Спасов С. Д. Иммобилизованные клетки микроорганизмов. М.: МГУ, 1994. -288с.

57. Turkova J., Jirku V, Cell immobilization by covalent linkage // Meth. Enzymol. 1987. - v. 135. - p.341-348.

58. Suiter G. J., Kell D. B. New materials and technology for cell immobilization // Curr. Opin. Biotechnol. 1992. - v.3 - p. 115-118.

59. Грачева И. M., Кантере В. М., Иванова Л. А. Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и биоэнергия. М.: Колос, 1992. -382с.

60. Быков В. А., Манаков М. Н., Панфилов В. И. Биотехнология. Производство белковых веществ. М. - 1987. - с.142.

61. Tamada М., Kasai N., Kumakura М. Recognition of microbial cells by the surface of polymers with oxyethilene units // Int. J. Biol. Macromol. -1993. v.15. - p.189-192.

62. Influence of culture conditions on mycelial structure and polygalacturonase synthesis of Aspergillus Niger // Leuchtenberger A., vvmusack C., Kcrmersdorfer W , Rmtloff H. // J. Basic Macrobiol. 1987 - v.27. - p.309-315.

63. Das A., Kundu P. A note on crossing experiments with Aspergillus Niger for the production of calcium gluconate // J. Appl. Bacteriol. 1985. -v.59.- 1-5.

64. Lalov I. G., Krysteva M. A., Pheluzat I. L. Improvement of biogas production from vinasse via covalently immobilized methanogens // Bioresour. Technol. 2001.- v.79. - p.83-85.

65. Tennikova Т., Freitag R. in: Aboul-Enein H.Y. (Ed.), Analytical and Preparative Separation Methods of Biomacromolecules. New York -Basel, Marcel Dekker. - 1999,- p.255.

66. Tennikova Т. В., Freitag R. An intorduction to monolithic disks as stationary phases for high-performance biochromatography // J. High Resol. Chromatogr. 2000. - v.23. - p.27-38.

67. Dubinina N. I., Kurenbin О. I., Tennikova Т. B. Peculiarities of gradient ion-exchange high-performance liquid chromatography of proteins // J. Chromatogr. 1996. - v.753. - p.217-225.

68. Purification of factor VIII and von Willebrand factor from human plasma by anion-exchange chromatography / Josic Dj., Shwinn H., Stadler M., Strancar A. // J. Chromatogr. B. 1994. - v.662. - p. 181-190.

69. Convective interaction media: polymer-based supports for fast separation of biomolecules / Strancar A., Barut M., Podgornik A., Koselj P., Josic Dj., Buchacher A. // LC-GC Int. 1998. - v.l 1. - p.660-665.

70. Giovannini R., Freitag R., Tennikova Т. B. High-performance membrane chromatography of supercoiled plasmid DNA // Anal. Chem. -1998.-v.70. p.3348-3350.

71. Application of Convective Interaction Media (CIM) disk monolithic columns for fast separation and monitoring of organic acids / Vodopivec M., Podgornik A., Berovic M., Strancar A. // J. Chromatogr. Sci. 2000. -v.38. - p.489-495.

72. Tennikova Т. В., Svec F. High-performance membrane chromatography: highly efficient separation method for proteins in ion-exchange, hydrophobic interaction and reversed-phase modes // J. Chromatogr. -1993. v.646. - p.279-288.

73. Tennikova Т. В., Belenki B. G., Svec F. High-performance membrane chromatography, A novel method of protein separation // J. Liq. Chromatogr. 1990. - v. 13. - p.63-71.

74. Carrier membrane as a stationary phase for affinity chromatography and kinetic studies of membrane-bound enzymes / Abou-Rebyeh H., Korber F., Schubert-Rehberg K., Reush J., Josic Dj. // J. Chromatogr. 1991. -v.566. - p.341-350.

75. Chen H., Horvath Cs. High-speed high performance liquid chromatography of peptides and proteins // J. Chromatogr. 1995. -v.705. - p.3-20.

76. Construction of large-volume monolithic columns / Podgornik A., Barut M., Strancar A., Josic Dj., Koloini T. // Anal. Chem. 2000. - v.72.''АЛ Г/"АЛp.DOyj-ju^^.

77. Svec F., Tennikova Т. B. Polymeric separation media for chromatography of biopolymers in a novel shape: macroporous membranes// J. Bioact. Compat. Polym. 1991. - v.6. - p.95-107.

78. Effect of porous structure of macroporous polymer supports on resolution in high-performance membrane chromatography of proteins / Tennikov M. В., Gazdina N. V., Tennikova Т. В., Svec F. // J. Chromatogr. 1998. - v.798. - p.55-64.

79. Ostryanina N. D., Lojkina О. V., Tennikova Т. B. Effect of experimental conditions on strong biocomplimentary pairing in high-performance monolithic disk affinity chromatography // J. Chromatogr. B. 2002. -v.770. - p.35-43.

80. Nachman M., Azad A. R., Bailon P. Kinetic aspects of membrane-based immuno-affmity chromatography // J. Chromatogr. 1992. - v.597. -p.167-172.

81. High-performance membrane chromatography of serum and plasma membrane proteins / Josic Dj., Reusch J., Loster K., Baum O., Reutter W. //J. Chormatogr. 1992. - v.590. - p.59-76.

82. Josic Dj., Bal F., Schwinn H. Isolation of plasma proteins from the clotting cascade by heparin affinity chromatography // J. Chromatogr.1УУЛ. V.OJ2. p.Ml1.

83. Fast isolation of protein receptors from streptococci G by means of macroporous affinity discs / Kasper C., Meringova L., Freitag R., TennikovaT. //J. Chromatogr. 1998.- v.798. - p.65.

84. Ostryanina N. D., Vlasov G. P., Tennikova Т. B. Multifunctional fractionation of polyclonal antibodies by immunoaffmity high-performance monolithic disk chromatography // J. Chromatogr. 2002. -v.949. - p.163-171.

85. Выделение и исследование рекомбинантного IgG-связывающего рецептора стрептококка группы G с использованием макропористых дисков / Мерингова Л. Ф., Леонтьева Г. Ф., Гупалова Т. В., Тенникова Т. Б., Тотолян А. А. // Биотехнология. 2000. - v.4. - р.45-53.

86. Quantitative fast fractionation of a pool of polyclonal antibodies by immunoaffmity membrane chromatography / Platonova G. A, Pankova G. A., Il'ina I. Ye., Vlasov G. P., Tennikova Т. B. // J. Chromatogr. 1999. -v.852.-p.l29.

87. Berruex L., Freitag R., Tennikova Т. B. Comparison of antibody binding to immobilized group specific affinity ligands in high performance monolith affinity chromatography // J. Pharm. Biomed. Anal. 2000. - v. 24. - p.95-104.

88. Use of compact, porous units with immobilized ligands with high molecular masses in affinity chromatography and enzymatic conversion of substrates with high and low molecular masses / Josic Dj., Schwinn H.,

89. Strancar A., Podgornik A., Barut M, Lim YP, Vodopivec M. // J. Chromatogr. 1998. - v.803. - p.61-71.

90. Josic Dj., Buchacher A., Jungbauer A. Monoliths as stationary phases for separation of proteins and polynucleotides and enzymatic conversion // J. Chromatogr. B. 2001. - v.752. - p.191-205.

91. Josic Dj., Buchacher A. Application of monoliths as supports for affinity chromatography and fast enzymatic conversion // J. Biochem. Biophys. Methods. 2001. - v.49. - p.153-174.

92. Lancefield R. C. A serological differentiation of human and other groups of hemolytic streptococci // J. Exp. Med. 1993. - v.57. - p.571-595.

93. The serotypes of Streptococcus pyogenes present in Britain during 1890 1990 and their association with disease / Colman G., Tanna A., Efstration A., Gaworzewska E. T. // J. Med. Microbiol. - 1993. - v.39. -p.165-178.

94. Streptococcal infections / Dunna R. L., Wienberg A. N., Medrek T. F., Kunz L. J. //Medicine. 1969. - v.48. - p.87-127.

95. Extra-respiratory streptococcal infections importance of various serological groups / Flingold D. S., Wienberg A. N., Medrek T. F., Kunz L. J. N. // Engl. J. Med. 1966. - v.275. - p.356-361.

96. Nicholas W. C., Steele C. Occurrence of groupable beta-hemolytic streptococci study among school children in Bismarck N. D. // J. Am. Med. Assoc. 1962. - v. 182. - p.l97-205.

97. Parker M. Т., Ball L. С. Streptococci and aerococci associated with systematic infections in man. J. Med. Microbiol. 1976. - v.9. - p.2751. Л A1. JVy.

98. Group В, С and G streptococcal infections in a cancer hospital / Armstrong G., Blevins A., Louria D. В., Henkel J. S., Moddy M. D., Sukany M. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1970. - y.174. p.511-522.

99. Group С streptococcal bacterimia / Berenguer J., Sampedor J., Cercenado E., Baraia J., Rodiriger-Creixems M., Bouza E. // Diag. Microbiol. Infect Dis. 1992,- v.l5. - p. 151-155.

100. Efstration A. Outbreaks of human infections caused by pyogenic streptococci of Lancefield group С and G // J. Med. Microbiol. 1989. -v.29. - p.207-219.

101. Graunt P. N., Seal D. V. Group G streptococcal infections // J. Infect. 1987.-v.15.-p.5-20.

102. Epidemic of pharingits due to streptococci of Lancifield group G // Lancet. 1969. - p.371-374.

103. Nohlgard C., Bjorklund A., Hammar H. Group G streptococcal infections on dermatological ward // Acta Derm. Vinereol. Stockholm. -1992. v.72. -p.172-176.

104. Winkelhake J. Immunoglobulin structure and effector functions // Immunochem. 1978. - v.15. - p.695-714.

105. Edelman G. Antibody structure and molecular immunity // Science. 1973. - p.830-840.

106. Poljak R. Three-dimensional structure, function and genetic control of immunoglobulins//Nature. 1975. -v.256. -p.373-376.

107. Falkenberg C., Bjork L., Akerstrom B. Localization of the binding site for streptococcal protein G on human serum albumin. Identification of a 5,5 kilodalton protein G binding albumin fragment // Biochemistry. -1992. - v.31. - p.1451-1457.

108. Reed R. G. Location of long chain fatty acide binding sites of bovine serum albumin by affinity labeling // J. Biol. Chem. 1986. -v.26i. - p.l5619-1562/!.

109. Bjork L., Kronvall G. Purification and some properties of streptococcal protein G, a novel IgG binding reagent. J. Immunol. 1984. - v.133.-p.969-974.

110. Structure of the IgG binding regions of streptococcal protein G / Guss В., Eliasson M., Olsson A., Uhlen M., Frej A. K., Jornvall H., Flock J., Lindberg M. // EMBO J. 1986. - v.5. - p.l567-1575.

111. Structure and evolution on the repetitive gene encoding streptococcal protein G / Olsson A., Eliasson M., Guss В., Nilsson В., Heliman U., Uhlen M. // J. Eur. Chem. 1987. - v.168. - p.319-324.

112. Streptococcal G protein has affinity for both Fab and Fc fragments of human IgG / Erntell M., Myhre E., Sjobring U., Bjork L. // Mol. Immunol. 1988. - v.25. - p.121-126.

113. Eliasson M. Streptococcal protein G. Structure and function // Thesis of Royal Institute of Technology. Stockholm, 1990. - 80p.

114. Sjobring U., Bjork L., Kastern W. Streptococcal protein G: structure and protein binding properties // J. Biol. Chem. 1991. - v.266, -p.399-405.

115. Sjobring U., Bjork L., Kastern W. Protein G genes: structure and distribution of IgG-binding and albumin-binding domains // Mol. Microbiol. 1989. - v.3. - p.319-327.

116. Isolation and characterization of a 14-kDa albumin-binding fragment of streptococcal protein G / Sjobring U., Falkenberg S., Nielsen E., Akerstrom В., BjorckL. // J. Immunol. 1988. - v. 140. - p. 1590-1599.

117. Akerstrom В., Nielsen E., Bjork L. Definition of the IgG- and the albumin-binding regions of streptococcal protein G // J. Biol. Chem. -1987. v.262. - p.13388-13391.

118. Two chrystal structures of the B1 immunoglobulin-binding domain of streptococcal protein G and comparision with NMR/ Gallagher Т., Alexander P., Bryan P., Gilliland G. // Biochemistry. 1994. - v.33. -p.4721-4729.

119. Thermodinamic analysis of the folding of the streptococcal protein G IgG-binding domains B1 and B2 / Alexander P., Fahnestock S., Lee Т., Orban J., Bryan P.//Biochemistry. 1992. - v.31. - p.35597-35603.

120. Alexander P., Orban J., Bryan P. Kinetic analysis of folding and unfolding the amino acid IgG-binding domain of streptococcal protein G //Biochemistry. 1992. - v.31. - p.7243-7248.

121. Gronenborn A. M,, Clore G. M. Identification of the contact surface of a streptococcal protein G domain complexed with a human Fc fragment. J. Mol. Biol. 1993. - v.233. - p.331-335.

122. Cai S., Wang Y., Yao Z. Structure analysis of streptococcal protein G Fc binding domain // Sci. China B. 1993. - v.36. - p.75-80.

123. Tashiro M., Montelione G. Structures of bacterial immunoglobulin-binding domains and their complexes with immunoglobulins // Curr. Opin. Struct. Biol. 1995. - v.5. - p.471-481.

124. Sheinerman F. В., Brooks C. L. Calculations on folding of segment B1 of streptococcal protein G // J. Mol. Biol. 1998. - v.278. - p.439-456.

125. O'Neil К. Т., Bach A. C., De Grado W. F. Structural consequences of an amino acid deletion in the В1 domain of protein G // Proteins. -2000. v.15. -p.323-333.

126. McCallister E. L., Aim E., Baker D. Critical role of beta-hairpin formation in protein G folding // Nat. Struct. Biol. 2000. - v.7. - p. 669673.

127. The serum albumin binding domain of streptococcal protein G is a three-helical bundle: a heteronuclear NMR study / Kraulis P., Johasson P., Nygren P., Uhlen M., Jendeberg L., Nilsson В., Kordel J. // FEBS Lett. -1996. v.378. - p.190-194.

128. Mutational analysis of the interaction between albumin- binding domain from streptococcal protein G and human serum albumin / Linhult M., Binz H., Uhlen M., Hober S. // Prot. Sci. 2002. - v.l 1. - p.206-213.

129. Гупалова Т. В., Орлова С. Н., Тотолян А. А. Получение и свойства рекомбинантного белка G // Вест. Росс. Акад. Наук. 1996. -т.З. - с.44-49.

130. Гупалова Т. В., Орлова С. Н., Тотолян А. А. Рекомбинантный HSA рецептор стрептококка // Патент № 2065746, 1996, Россия.

131. Гупалова Т. Б., Тотолян А. А. Рекомбинантный IgG связывающий белок стрептококка // Патент № 2056859, 1996, Россия.

132. Безэмульгаторная полимеризация метилметакрилата с карбоксилсодержащим инициатором / Меньшикова А. Ю., Евсеева Т. Г., Перетолчин М. В., Чекина Н. А., Иванчев С. С. // Высокомолек. Соед. 2001. - т.43. - с.607-617.

133. Синтез микросфер полиметилметакрилата в присутствии декстрана и его производных / Меньшикова А. Ю., Евсеева Т. Г., Чекина Н. А., Иванчев С. С. // Ж. Прикл. Хим. 2001. - т.74. - с.478-482.

134. Rembaum A., Tokes Z. Microspheres: medical and biological applications. CRC Press, Boca Raton, FL, 1988. - 362p.

135. A simple rapid fluorometric assay for antigens / Katsh S., Leaver F. W, Reynolds J. S, Katsh G. F. // J. Immunol. Meth. 1974. - v.5. -p.179-187.

136. Chen R. F. Fluorescence properties of fluorescamine-protein conjugates. Anal. Lett. 1974. -v.7. - p.65-77.

137. Protein measurement with the folin phenol reagent / Lowry О. H., PosebroughN. I., Farr A. L., Randall P.I. // J. Biol. Chem. -1951. v. 193. - p.265-275.

138. Егоров H. С. Практикум по микробиологии. M.: МГУ, 1976. -307c.

139. Гупалова Т. В. Рецепторные белки стрептококков: клонирование генов, характеристика и практическое использование белков, экспрессируемых а Е. Ccli !! Дпкт. диссер., ГУНИИЭМ РАМН, СПб, 1998. -376с.

140. Laemmli U. К. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage // Nature 1970. - v.227. - p.680-685.

141. Svec F., Frechet J. M. J. "Molded" rods of macroporous polymer for preparative separations of biological products // Biotech. & Bioeng. -1995.- v.48.-p.476-480.

142. Design of photoinduced relief optical devices with hybrid sol-gel materials / Soppera O., Croybxe-Barghorn C., Carre C., Blanc D. // Appl. Surf. Sci. 2002. - v.186. - p.91-94.