Изменение показателей пролиферации и апоптоза в условиях лимфопении и восстановления Т-клеточного пула после аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Пронкина, Наталья Викторовна

• Пронкина, Наталья Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Пронкина, Наталья Викторовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:.

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Процессы апоптоза и пролиферации иммунокомпетентных клеток в норме.

1.1. Понятие Т-клеточного гомеостаза.

1.2. Пролиферация и апоптоз в формировании популяции Т-лимфоцитов.

1.3. Механизмы гомеостатического контроля иммунокомпетентных клеток в периферических отделах иммунной системы.

Глава 2. Процессы апоптоза и пролиферации иммунокомпетентных клеток при лимфопении.

2.1. Гомеостаз Т- и В-клеток в условиях лимфопении.

2.2. Индукция апоптоза Т-лимфоцитов.

Глава 3. Патологии с нарушением показателей апоптоза и пролиферации Т-клеточного звена иммунной системы.

3.1. Индукция апоптоза и клиническое значение нарушений Т-клеточного звена иммунной системы при проведении химиотерапии и ТСКК.

3.2. Нарушения клеточного и гуморального звеньев иммунной системы и индукция апоптоза при ВИЧ-инфекции.

ЧАСТЬ И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 1. Характеристика больных.

1.1. Характеристика больных гемобластозами.

1.2. Характеристика ВИЧ-инфицированных больных.

Глава 2. Методы лабораторных исследований.

2.1. Получение лейковзвеси из периферической крови.

2.2. Определение количества лимфоцитов.

2.3. Определение относительного количества CD4+CD45RO+-, CD4+CD45RA+-, CD8+CD45RO+- и CD8+CD45RA+-лимфоцитов.

2.4. Определение клеточного цикла в Т-лимфоцитах, моноцитах и CD34+-клетках.

2.5. Определение внутриклеточных цитокинов в субпопуляцих Т-лимфоцитов.

Глава 3. Методы статистических и информационных исследований.

ЧАСТЬ III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Глава 1. Результаты исследований группы доноров.

1.1. Количественная характеристика, показатели апоптоза и фаз клеточного цикла иммунокомпетентных клеток и соотношение Т1/Т2 иммунного ответа в группе доноров.

1.2. Корреляционные взаимосвязи в группе доноров.

Глава 2. Результаты исследований больных гемобластозами до и после АТПСКК.

2.1. Количественная характеристика Т-клеток в группе больных гемобластозами до и после АТПСКК.

2.2. Показатели апоптоза и фаз клеточного цикла Т-клеток в группе больных гемобластозами до и после АТПСКК.

2.3. Соотношение наивных Т-клеток и Т-клеток памяти в группе больных гемобластозами до и после АТПСКК.

2.4. Корреляционные взаимосвязи в группе больных гемобластозами до и после АТПСКК.

2.5. Относительное количество Т-клеток, продуцирующих цитокины первого и второго типа в периферической крови больных гемобластозами до и после АТПСКК.

2.6. Ассоциация показателей иммунного статуса с развитием раннего рецидива в течение года после АТПСКК у больных гемобластозами.

2.7. Ассоциация показателей иммунного статуса с развитием осложнений па этапе восстановления кроветворения после АТПСКК у больных гемобластозами.

2.8. Оценка показателей клеточного цикла CD34+-клеток продукта сепарации у больных гемобластозами.

Глава 3. Результаты исследований ВИЧ-инфицированных пациентов до начала курса антиретровирусной терапии.

3.1. Количественная характеристика иммунокомпетентных клеток в группе ВИЧинфицированных пациентов.

3.2. Показатели апоптоза и фаз клеточного цикла в субпопуляциях иммунокомпетентных клеток ВИЧ-инфицированных пациентов.

3.3. Корреляционные взаимосвязи в группе ВИЧ-инфицированных пациентов.

ОБСУЖДЕНИЕ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изменение показателей пролиферации и апоптоза в условиях лимфопении и восстановления Т-клеточного пула после аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток»

Постоянство численности клеток лимфоидных популяций обеспечивается балансом их образования (за счет пролиферации) и гибели (как правило, по механизму апоптоза) (Freitas A., et al. 2000). Баланс между двумя этими процессами определяет Т-клеточный гомеостаз в организме. Интенсивность пролиферации наивных Т-лимфоцитов (CD45RA+) у взрослых людей минимальная. С помощью определения маркера пролиферирующих клеток Ki-67 установлено, что in vivo пролиферирует около 1% наивных Т-клеток - в равной степени CD4+ и CD8+ (Hazenberg M.D., 2003; Sachsenberg N.,1998). Количество наивных Т-клеток определяется выработкой IL-7 и содержанием дендритных клеток, несущих молекулы МНС классов I и II, а соотношение последних определяет баланс наивных Т-клеток CD8+ и CD4+ (Fry T.J., et al. 2001; Vivien L„ et al. 2001; Mackall Cr.L., et al. 2001; Kirberg J., et al. 2001). Гомеостаз С08+-клеток памяти реализуется с участием цитокинов, среди которых основная роль принадлежит IL-15, а вспомогательная IL-7 (Melchionda F,, et al. 2005; Alpdogan О., et al. 2005). Гомеостаз клеток памяти (CD45RO+) минимально зависит от молекул МНС (Tanchot С., et al. 1997; Cho В.К., et al. 2000). Механизмы гомеостатического контроля С04+-клеток памяти мало изучены. В условиях Т-лимфопении механизмы пополнения наивных Т-клеток отличаются от таковых при нормальном содержании Т-клеток. Они проявляются в форме гомеостатической пролиферации, которая сопровождается сменой мембранного и функционального фенотипа на фенотип клеток памяти без промежуточного этапа активации и без дифференцировки в эффекторные клетки (Tough D.F., et al. 1994; Wu Z., et al.2003; Mahajan V.S., et al. 2005).

Численность ежедневных мигрантов из тимуса и Т-клеток, новообразованных в результате периферической экспансии, должна уравновешиваться числом Т-клеток, подвергающихся апоптозу (Tanchot С., et al. 1997; Romanyukha A.A., et al. 2003). Зрелые Т-лимфоциты, подвергшиеся селекции, в покоящемся состоянии лишены мембранного Fas-рецептора и экспрессируют протоокоген Вс1-2, что определяет их устойчивость к индукторам апоптоза (Karawajew L., et al. 2000). Положение меняется на обратное при активации лимфоцитов соответствующим антигеном или митогеном. Активированные лимфоциты могут подвергнуться апоптозу при различных воздействиях - повторной стимуляции через перекрестное сшивание рецепторов или недостатке факторов роста (IL-2) и т.д. (Dooms Н., et al. 2004; Karas М., et al. 1999). Апоптоз может развиться и в процессе активации - например, в случае предварительного связывания молекул CD4, при отсутствии костимуляции Т-клеток через CD28 (Prlic М., et al. 2001). После дифференцировки Т-лимфоцитов в эффекторные клетки и Т-клетки памяти в них также экспрессируется Вс1-2, и они временно приобретают устойчивость к индукторам апоптоза. В реализации и контроле апоптоза участвуют многочисленные внутриклеточные факторы и от его осуществления зависят многие важные процессы, реализуемые на уровне организма (Badley A.D., et al. 2000).

Изучению процессов, поддерживающих клеточный гомеостаз, посвящено много отечественных и зарубежных исследований, что в значительной степени определяется потребностью в точных знаниях о закономерностях восстановления популяций и субпопуляций лимфоцитов, что находит отражение в их функциональном состоянии, включая и соотношение Т1/Т2-ответов (Jameson S.C. 2002; Guimond М., et al. 2005; Yusuf I., et al. 2003). Это характерно при заболеваниях (СПИД), после действия повреждающих факторов (облучение, химиопрепараты), а также после пересадки костного мозга. При патологии изменяется процент клеток, подвергшихся апоптозу и процент клеток, вступивших в периферическую экспансию, а также изменяются взаимосвязи этих двух процессов. Большой интерес вызывают процессы восстановления Т-клеток после их деплеции. По данным литературы на апоптоз Т-клеток при ВИЧ-инфекции могут влиять моноциты (Oyaizu N., et al. 1993; Sperber K., et al. 2003), поэтому вызывает интерес параллельное исследование процессов гомеостаза моноцитов и Т-лимфоцитов. Кроме того, интенсивно изучаются механизмы восстановления субпопуляций Т-лимфоцитов CD4+- и CD8+-mieTOK, которые отличаются по скорости восстановления. Как известно, СБ4+-клетки восстанавливаются через год и более после трансплантации костного мозга, а С08+-клетки - уже через 6 месяцев (Guillaume Т., et al. 1998; Mackall Cr. L. et al. 1997). Восстановление клеточного пула после ТКМ происходит в основном за счет клеток памяти, а они, как известно, более подвержены апоптозу, чем наивные клетки (Porrata L.F., et al. 2001; Mackall Cr. L. et al. 2005). Являясь наиболее радикальным способом лечения гемобластозов, АТПСКК, тем не менее, не всегда приводит к излечению, и уже в течение первого года в 22 - 40% случаев возникает рецидив заболевания. Возникновение рецидива связано со многими причинами. Совокупность факторов, таких как, статус заболевания (полная, частичная ремиссия или резистентное течение) на момент трансплантации, его стадия, предлеченность, нозология заболевания и возраст больного имеет определенное прогностическое значение в исходе трансплантации (Cortelazzo S., et al. 1999). В доступной нам литературе, тем не менее, нет данных о зависимости процессов восстановления Т-клеточного пула с исходом трансплантации, однако в литературе есть данные о разной репопулирующей способности СБ34+-клеток в зависимости от стадии клеточного цикла (Uchida N., et al. 1997; Voermans С., et al. 2001).

Изучение взаимосвязей между пролиферацией и апоптозом CD4+- и С08+-клеток у больных гемобластозами до и после АТПСКК (в разных временных точках восстановления гемопоэза), а также у ВИЧ-инфицированных пациентов, актуально для понимания процессов восстановления Т-клеточного гомеостаза.

Цель исследования: Исследовать взаимосвязь апоптоза и пролиферации CD4+- и CD8+-iaieTOK периферической крови с процессами восстановления количественных и функциональных характеристик Т-лимфоцитов при лимфопении различного генеза и после аутологичной трансплантации периферических стволовых кроветворных клеток. Задачи исследования:

1. Исследовать показатели апоптоза и фаз клеточного цикла CD4+- и CD8+-клеток и моноцитов у больных гемобластозами до и после АТПСКК и у ВИЧ-инфицированных пациентов.

2. Оценить особенности показателей апоптоза и фаз клеточного цикла CD4+- и CD8+-KneTOK у пациентов с благоприятным и неблагоприятным течением заболевания после АТПСКК.

3. Исследовать показатели фаз клеточного цикла стволовых кроветворных клеток продукта сепарации у больных гемобластозами с благоприятным и неблагоприятным течением заболевания после АТПСКК.

4. Исследовать показатели наивных Т-клеток и Т-клеток памяти в периферической крови у больных гемобластозами до и после АТПСКК.

5. Определить относительное количество CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов периферической крови, продуцирующих IFN-y и IL-4 в ответ на неспецифическую поликлональную стимуляцию у больных гемобластозами до и после АТПСКК и относительно здоровых доноров.

Научная новизна: В работе впервые показано, что как в норме, так и у больных гемобластозами после химиотерапии и у ВИЧ-инфицированных пациентов количество иммунокомпетентных клеток (CD4+-, С08+-клеток и моноцитов) в S,G2/M фазах клеточного цикла прямо взаимосвязаны между собой. При этом положительная корреляционная взаимосвязь между показателями апоптоза и пролиферации С04+-ютеток характерна только для группы здоровых лиц. Показано, что пролиферативная активность CD4+-клеток прямо зависит от выраженности лимфопении как у ВИЧ-инфицированных больных, так и у больных гемобластозами до АТПСКК.

Впервые показано, что у больных с ранним рецидивом основного заболевания после АТПСКК, по сравнению с больными с благоприятным течением, при исследовании до курса мобилизации более выражена CD4+лимфопения, повышено количество CD44-клеток в S,G2/M-(j)a3ax клеточного цикла, повышено количество CD4+CD45RA+-MieTOK, а также количество С034+-клеток в 8,02/М-фазах клеточного цикла среди трансплантируемых клеток. Показано также, что для этих больных характерно прогрессирующее снижение наивных CD4+CD45RA+-i0ieT0K после АТПСКК.

Научно-практическая значимость работы: Полученные данные продемонстрировали однотипность изменения взаимосвязей апоптоза и пролиферации С04+-клеток в условиях лимфопении различного генеза. Важным итогом работы явилось также положение о разном соотношении механизмов восстановления Т-клеточного пула (гомеостатической пролиферации, лимфопоэза, тимопоэза) при благоприятном исходе АТПСКК и при развитии раннего рецидива заболевания, которому предшествует недостаточное (по сравнению с благоприятным течением) восстановление Т-клеток в количественном и функциональном плане.

Результаты исследования обосновывают важность проведения у больных гемобластозами на этапах подготовки к АТПСКК дополнительных лабораторных исследований, включая показатели апоптоза и клеточного цикла субпопуляций иммунокомпетентных клеток. Выявление различий механизмов восстановления Т-клеточного пула у больных гемобластозами с разным исходом трансплантации дает возможность прогноза эффективности АТПСКК и риска развития инфекционных осложнений в период восстановления кроветворения.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Повышение показателей апоптоза и S,G2/M фаз клеточного цикла Т-лимфоцитов периферической крови отражает активацию пролиферации клеток в процессе восстановления Т-клеточного пула как при лимфопении (при ВИЧ-инфекциии и после ПХТ при гемобластозах), так и после аутологичной трансплантации периферических стволовых кроветворных клеток.

2. Благоприятный исход АТПСКК при гемобластозах характеризуется восстановлением Т-клеточного пула с участием наивных клеток и характеризуется возрастанием количества Т1 -клеток (Th и Тс), тогда как развитие рецидива основного заболевания после АТПСКК происходит на фоне прогрессирующего снижения количества наивных СБ4+-клеток и срыва восстановления количества Т1-клеток (Th и Тс).

3. Различия механизмов восстановления Т-клеточного пула после АТПСКК ассоциированы с его состоянием до трансплантации и с пролиферативной активностью трансплантируемых С034+-клеток.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции посвященной 15-летнему юбилею Красноярского Краевого Центра по профилактике и борьбе со СПИД и другими инфекционными заболеваниями. «Дни иммунологии в Сибири» (Красноярск 2005), на 7-ой отчетной конференции ГУ НИИКИ СО РАМН «Иммунопатогенез и иммунотерапия основных заболеваний человека: от эксперимента к клинике» (Новосибирск 2006). Апробация диссертации состоялась 3 апреля 2007г. на семинаре клинического отдела ГУ НИИ Клинической Иммунологии СО РАМН. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК для опубликования результатов работ соискателей ученой степени кандидата биологических наук.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов и выводов. Материал изложен на 129 страницах машинописного текста, включающего 15 рисунков и 23 таблицы. Прилагаемая библиография содержит ссылки на 156 литературных источников, из них 139 зарубежных.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Пронкина, Наталья Викторовна

ВЫВОДЫ:

1. В периферической крови больных гемобластозами до АТПСКК и ВИЧ-инфицированных пациентов на фоне лимфопении СБ4+-клеток повышен процент СБ4+-клеток в апоптозе и в 8,С2/М-фазах клеточного цикла, который находится в обратной зависимости от общего количества CD4+-клеток. Это, наряду с нормальным (при гемобластозах) или повышенным количеством С08+-клеток (при ВИЧ-инфекции, что сопровождается повышением процента С08+-клеток в апоптозе и в S,G2/M фазах клеточного цикла), отражает сходство процессов восстановления СБ4+-клеток и различия - CD8'-клеток в условиях лимфопении различного генеза.

2. После АТПСКК у больных гемобластозами с благоприятным исходом трансплантации на фоне повышенного процента CD4+- и СБ8+-клеток в 8,02/М-фазах клеточного цикла и в апоптозе наблюдается постепенное увеличение абсолютного количества CD4+- и CD4+CD45RA+-i0ieT0K, а также повышение CD4+- и СБ8+-клеток, продуцирующих INFy, что является проявлением эффективного восстановления количества и функциональных параметров Т-клеток.

3. Признаками неэффективного восстановления количественных и функциональных характеристик Т-клеточного пула у больных с рецидивом после АТПСКК являются: прогрессирующее снижение количества CD4+CD45RA+-iaieTOK, а также значительное повышение (через 3 месяца после АТПСКК) с последующим резким снижением количества CD4+- и С08 -клеток, продуцирующих INFy.

4. Различия процессов восстановления количества и функциональных свойств Т-лимфоцитов у больных с разным течением после АТПСКК ассоциированы с исходным (до трансплантации) уровнем лимфопении и интенсивности пролиферации CD4+- и С034+-клеток: развитие рецидива чаще происходит у больных с выраженной лимфопенией, высоким процентом CD4+- и С034+-клеток в 8,02/М-фазах клеточного цикла.

5. Повышение показателей апоптоза и S,G2/M-<|>a3 клеточного цикла CD4+- и С08+-клеток периферической крови отражает активацию пролиферации этих субпопуляций в процессе восстановления Т-клеточного пула, индуцированного лимфопенией различного генеза, и в процессе восстановления кроветворения после АТПСКК. Исследование данных показателей может быть информативным в оценке состояния Т-клеточного гомеостаза и прогнозе исхода АТПСКК при гемобластозах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для оценки риска возникновения рецидива в ранние сроки после АТПСКК у больных гемобластозами рекомендуется определять пролиферативную активность Т-клеток и количество Т-клеток памяти в периферической крови до трансплантации, а также показатели апоптоза и пролиферации Т-клеток в первые месяцы после трансплантации.

2. Для оценки риска возникновения тяжелых инфекционных осложнений в период восстановления кроветворения после АТПСКК у больных гемобластозами рекомендуется определять абсолютное количество CD4+-клеток, показатели пролиферации и апоптоза С08+-клеток, а также показатели макрофагального звена иммунной системы до трансплантации.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Пронкина, Наталья Викторовна, 2007 год

1. Боровиков В.П., Боровиков И.П. STATISTICA Статистический анализ и обработка данных в среде Windows.- М.: Информ.-изд. дом "Филинъ", 1997.- 608 с.

2. Браверман Э.М., Мучник И.Б. Структурные методы обработки эмпирических данных.- М.: Наука, 1983.- 464 с.

3. Владимирская Е, Масчан А, Румянцев А. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста. Гематология и трансфузиология 1997; 42(5): 4-9

4. Гельфгат E.JL, Туганбаева Д.А., Коненков В.И. Математические методы выявления иммунной гетерогенности популяции и типов иммунного статуса индивидов // Тезисы докл. I съезда иммунологов России (23-25 июня 1992 г).- Новосибирск, 1992.- С. 103.

5. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов // Ленинград.- Медицина.- 1978.

6. Дубров A.M. Обработка статистических данных методом главных компонент.- М.: Статистика, 1978.- 135 с.

7. Кендалл М.Дж., Стьюарт А. Многомерный статистический анализ и временные ряды. М.: Наука, 1976.- 736 с.

8. Лакин Г.Ф. Биометрия. Москва, «Высшая школа» - 1990 г., - 352 с.

9. Ластед Л. Введение в проблему принятия решений в медицине: Пер. с англ.-М.,1971.

10. Ю.Мостеллер Ф., Тьюки Дж. Анализ данных и регрессия: (пер. с англ.).-М.: Финансы и статистика, 1982.- 497 с.

11. П.Плохинский Н. А. Биометрия. М.: 2-е изд. МГУ, 1970.—367 с.

12. Погорелов В, Козинец Г. Морфология апоптоза при нормальном и патологическом гемопоэзе. Гематология и трансфузиология 1995; 40(5): 17-25

13. Славин М.Б. Методы системного анализа в медицинских исследованиях. Москва: Медицина, 1989 г. 304 с. Стр. 82-83.

14. Сорокин О.Д. Прикладная статистика на компьютере. Краснообск, ГУП РПО СО РАСХН, 2004.- 162 с.

15. Чумаков П.М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью //Биохимия, 2000. Т.65.№1. С.34-47.

16. Ярилин А.А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1998. - №2. - С.38-48.

17. Ahmadzaden М., Farber D.L., et al Functional plasticity of an antigen -specific memory CD4 T cell population // PNAS. 2002. - Vol.99 .N18.-P. 11802-11807.

18. Ahr В., Robert-Hebmann V., Devaux Ch., Biard-Piechaczyk M. Apoptosis of uninfected cells induced by HIV envelope glicoproteins // Retrovirology. 2004. - Vol. 1. - P.l-12.

19. Alimonti J.B., Blake Ball Т., Fowke K.R. Mechanisms of CD4+ T lymphocyte cell death in human immunodeficiency virus infection and AIDS //Jounal of General Virology. 2003. - Vol. 84. - P.1649-1661.

20. Almeida A.R.M., Borghans J.A.M., Freitas A.A. T Cell Homeostasis: Thymus Regeneration and Peripheral T Cell Restoration in Mice with a Reduced Fraction of Competent Precursors // J.Exp.Med. 2001. - Vol. 194. -P.591-599.

21. Almeida A.R.M., Rocha В., Freitas A.A., Tanchot C. Homeostasis of T cell numbers: from thymus production to peripheral compartmentalization andthe indexation of regulatory T cells // Sem. of Immunology. 2005. -Vol. 17.-P. 239-249.

22. Alpdogan O., Eng J.M., Muriglan S.J., Willis L.M., Hubbard V.M., et al. Interleukin-15 enhances immune reconstitution after allogeneic bone marrow transplantation // Blood. 2005. - Vol. 105.N2. - Р.865-873.

23. Ashton-Rickardt P.G.,Bandeira A., Delaney J.R., Van Kaer L., et al. 1994 Evidence for a differential avidity model of T-cell selection in the thymus. Cell 74:577.

24. Azuma M., Phillips J.H., Lanier L.L. CD28- T lymphocytes. Antigenic and functional properties. 1993 J Immunol 150: 1147-1159.

25. Baccala R., Gonzalez-Quintial R., Dummer W., Theofilopoulos A.N. Tumor immunity via homeostatic T cell proliferation: mechanistic aspects and clinical perspectives // Springer Semin Immunology. 2005. - Vol.27. -P. 75-85.

26. Badley A.D., Pilon A.A.,. Landay A, Lynch D.H. Mechanisms of HIV-associated lymphocyte apoptosis // Blood. 2000. - Vol.96. - №9. -Р.2951-2964.

27. Bell E.B., Sparshott S.M. 1997 The peripheral T-cell pool: regulation by non-antigen induced proliferation? Semin. Immunol. 9: 339-346.

28. Berzins S.P., Godfrey D.I., Miller J.F.A.P., Boyd R.L. A central role for thymic emigrants in peripheral T cell homeostasis //Immunology. 1999. -Vol.96.-P. 9787-9791.

29. Bhattacharyya S., Singla R., Dey A.B., Prasad H.K. Dichotomy of cytokine profiles in patients and high-risk healthy subjects exposed to tuberculosis // Infect Immun. 1999. - Vol. 67. N 11. - P. 5597-5603.

30. Bomberger С., Singh-Jairam М., Rodey G. et al. Lymphoid reconstitution after autologous PBSC transplantation with F ACS-sorted CD34+ hematopoietic progenitors. Blood 1998; 91: 2588-2600

31. Brink M.R.M., Alpdogan O., Boyd R.L. Strategies to enhance T-cell reconstitution in immunocompromised patients // Immunology. 2004. -Vol.4.-P. 856-867.

32. Browne MJ, Hubbard SM, Longo DL et al. Excess prevalence of Pneumocystis carinii pneumonia in patients treated for lymphoma with combination chemotherapy. Ann Intern Med 1986; 104: 338-344

33. Castelli J.C., Deeks S.G., Shiboski S., Levy J.A. Relationship of CD8+ T cell noncytotoxic anti-HIV response to CD4+ T cell number in untreated asymptomatic HIV-infected individuals // Blood. 2002. - Vol. 99. -№11. - P.4225-4227.

34. Chamond R.R., Anon J.C., Aguilar C.M., Pasadas F.G. Apoptosis and disease // Alergol Inmunol Clin. 1999. - Vol. 14. - P.367-374.

35. Chernykh H.R., Norkin M.N., Leplina O.Y., Khonina N.A., Tihonova M.A., Ostanin A.A. Peripheral T cell apoptosis and its role in generalized bacterial infections: a minireview // Russ J Immunol. 2001. - Vol. 6. N 2. -P. 131-146.

36. Cheson BD. Infectious and immunosuppressive complications of purine analog therapy. J Clin Oncol 1995; 13: 2431-2448

37. Cho B.K., Rao V.P., Ge Q., Eisen H.N., Chen J. Homeostasis-stimulated proliferation drives naive T cells to differentiate directly into memory T cells // J.Exp.Med. 2000. - Vol. 192.N4. - P.549-556.

38. Chung В., Burnham L.B., Barsky L., Weinberg K. Radiosensitivity of thymic interleukin-7 production and thymopoiesis after bone marrow transplantation //Blood. 2001. - Vol.98.N5. - P. 1601-1606.

39. Co D.O., Hogan L.H, Kim S.I., Sandor M. Mycobacterial granulomas: keys to a long-lasting host-pathogen relationship// Clin. Immunol. 2004. - Vol. 113(2)-P.130-136.

40. Cohen Stuart J.W.T., Slieker W.A.T., Rijkers G.T., Noest A., et al. Early recovery of CD4+ T lymphocytes in children on highly active antiretroviral therapy //AIDS. 1998. - Vol. 12. - P.2155-2159.

41. Dooms H., Kahn E., Knoechel В., Abbas A.K. IL-2 induces a competitive survival advantage in T lymphocytes // The J.of Immunology. 2004. -Vol.172. - P.5973-5979.

42. Dummer W., Ernst В., LeRoy E., Lee D-S., Surh Ch.D. Autologous regulation of naive T cell homeostasis within the T cell compartment // The J.of Immunology. 2001. - Vol.166. - P. 2460-2468.

43. Evan G.I., Vousden K.H. Proliferation, cell cycle and apoptosis in cancer // Nature. 2001. - Vol.411. - P.342-348.

44. Fisher DE. Apoptosis in cancer therapy: crossing the threshold. Cell 1994; 78(4): 539-542

45. Freitas A.A., Agenes F., Coutinho G.C. Cellular competition modulates survival and selection of CD8+ T cells // Eur.J.Immunology. 1996. -Vol.26.-P.2640-2649.

46. Freitas A.A., Rocha B.B. 1993 Lymphocute lifespan: homeostasis, selection and competition. Immunol. Today, 14: 25-29.

47. French J.D., Roark Ch.L., Born W.K., O'Brien L.O. y5 T cell homeostasis is established in competition with сф T cell and NK cells //PNAS. 2005. - Vol. 102.N41. - P. 14741 -14746.

48. Fry T.J., Christensen B.L., Komschlies K.L., Gress R.E., Mackall Cr.L. Interleukin-7 restores immunity in athymic T-cell-depleted hosts // Blood. -2001.-Vol.97.N6.-P. 1525-1533.

49. Fry T.J., Connick E., Fallon J., Lederman M.M., Liewehr D.J., et al. A potential role for interleukin-7 in T-cell homeostasis // Blood. 2001. -Vol.97.N10.-P 2983-2990.

50. Fukuda H., Nakamura H., Tominaga N., et al. Marked increase of CD8+S6F1+ and CD8+57+ cells in patients with graft-versus-host desease after allogeneic bone marrow transplantation. 1994 Bone Marrow Transpl 13: 181-185.

51. Ge Q., Rao V.P., Cho B.K., Eisen H.N., Chen J. Dependence of lymphopenia-induced T cell proliferation on the abundance of peptide/МНС epitopes and strength of their interaction with T cell receptors // PNAS. 2001. - Vol.98.N4. - P. 1728-1733.

52. Geginat J., Lanzavecchia A., Sallusto F., et al Proliferation and differentiation potential of human CD8+ memory T- cell subsets in response to antigen or homeostatic cytokines // Blood. 2003.-Vol.101.Nll. - P.4260-4266.

53. Goldrath A.W., Bogatzki L.Y., Bevan M.J., et al Naive T cells transiently acguire a memory like phenotype during homeostasis-driven proliferation // J.Exp.Med.- 2000. - Vol.l92.N.4.- P 557 - 564.

54. Goldrath A.W., Luckey C.J., Park R., Benoist Ch., Mathis D. The molecular program induced in T cells undergoing homeostatic proliferation // PNAS. 2004. - Vol. 101.N48. - P. 16885-16890.

55. Gougeon M-L. Apoptosis as an HIV strategy to escape immune attack // Nature Rev. Immunology. 2003. - Vol. 3. - P.393-404.

56. Gougeon M-L., Lecoeur H., Dulioust A., Enouf M-G., et al. Programmed cell death in peripheral lymphocytes from HIV-infected persons // Journal of Immunology. 1996. - Vol. 156. - P.3509-3520.

57. Guillaume Th., Rubinstein D.B., Symann M. Immune Reconstitution and Immunotherapy After Autologous Hematopoietic Stem Cell Transplantation // Blood. 1998. - Vol.92.N5. - P. 1471-1490.

58. Guimond M., Fry T.J., Mackall C.L. Cytokine signals in T-cell homeostasis // J.Immunother. 2005.- Vol.28.N4. - P. 289-294.

59. Hakim F.T., Gress R.E. Immunosenescence: immune deficits in the elderly and therapeutic strategies to enhance immune competence // Expert Rev. Clin. Immunol. 2005. - Vol.1 .N3. - P.443-458.

60. Hakim F.T., Memon S.A., Cepeda R., Jones E.C., Chow C.K., et al. Age-dependent incidence, time course, and consequences of thymic renewal in adults // The J. of Clinical Investigation. 2005. - Vol.115.N4. - P.930-939.

61. Hakim FT, Cepeda R, Kaimei S et al. Constraints on CD4 recovery post chemotherapy in adults: thymic insufficiency and apoptotic decline of expanded peripheral CD4 cells. Blood 1997; 90: 3789-3798

62. Hasan M.S., Kallas E.G., Thomas E.K., Looney J., Campbell M., Evans T.G. Effects of interleukin-15 on in vitro human T cell proliferation andactivation // J of Interferon & Cytokine Research. 2000. - Vol.20. N 2. -P. 119-124.

63. Hawkins Ch. J., Vaux D.L. The role of the Bcl-2 family of apoptosis regulatory proteins in the immune system // Sem. of Immunology. 1997. -Vol.9.-P. 25-33.

64. Haynes B.F., Markert M.L., Sempowski Gr.D., Patel D.D., Hale L.P. The role of the thymus in immune reconstitution in aging, bone marrow transplantation, and HIV-1 infection // Annu. Rev. Immunology. 2000. -Vol.18.-P. 529-560.

65. Hazenberg M.D., Otto S.A., van Rossum A.M.C., Scherpbier H.J., et al Establishment of the CD4+ Tcell pool in healthy children and untreated children infected with HIV-l//Blood.-2004.-Vol.l04.- Р.3513-3519.

66. Hazra R., Mackall Cr.M. Thymic function in HIV Infection // Curr HIV/AIDS Rep. 2005. - Vol.2.Nl. - P.24-28.

67. Heitger A., Neu N., Kern H., Panzer-Grumayer E-R., et al. Essential role of the thymus to reconstitute nai've (CD45RA+) T-helper cells after human allogeneic bone marrow transplantation // Blood. 1997. - Vol 90. - №2. -P. 850-857.

68. Heslop H, Gottlieb D, Bianchi A et al. In vivo induction of gamma interferon and tumor necrosis factor by interleukin-2 infusion following intensive chemotherapy or autologous marrow transplantation. Blood, Sep 1989; 74: 1374- 1380

69. Holtzman M.J., Green J.M., Jayaraman S., Arch R.H. Regulation of T cell apoptosis // Apoptosis. 2000. - Vol. 5. - Р.459-471.

70. Karas M., Zaks T.Z., LeRoith D. T cell receptor-induced activation and apoptosis in cycling human T cells occur throughout the cell cycle // Molecular Biology of the Cell. 1999. - Vol.10. - P 4441-4450.

71. Keane J., Balcewicz-Sablinska M.K., Remold H.G., Chupp G.L., Meek B.B., Fenton M.J., Kornfeld H. Infection by Mycobacterium tuberculosis promotes human alveolar macrophage apoptosis // Infect Immun. 1997. -Vol. 65. N 1. - P. 298-304.

72. Khaled A.R., Durum S.K. The Role of Cytokines in Lymphocyte Homeostasis // Bio Techniques. 2002. - Vol.33. - P.40-45.

73. Kieper W.C., Burghardt J.Th., Surh Ch.D. A role for TCR affinity in regulating naive T cell homeostasis // The J.of Immunology. 2004. -Vol.174.-P. 40-44.

74. Kirberg J., Boehmer H., Brocker Т., Rodewald H-R., Takeda S. Class II essential for CD4 survival // Nature Immunology. 2001. - Vol.2.N2. -P.136-137.

75. Konno A., Okada K., Mizuno K., Nishida M., Nagaoki S., Toma Т., et al CD8aa memory effector T cells descend directly from clonally expanded

76. CD8a+(3high TCRa(3 T cells in vivo // Blood. 2002. - Vol.100.N12. -P.4090-4097.

77. Lanzavecchia A., Lezzi G., Viola A. From TCR engagement to T-cell activation: a kinetic view of T-cell behavior. 1999 Cell 96:1.

78. Lapidot Т., Kollet O. The essential roles of the chemokine SDF-1 and its receptor CXCR4 in human stem cell homing and repopulation of transplanted immune-deficient NOD/SCID and NOD/SCID/B2mnu" mice // Leukemia. 2002. -№ 16. -P. 1992-2003.

79. Lazarevic V., Yankura D.J., Divito Sh. J., Flynn JA.L. Induction of Mycobacterium tuberculosis-specific primary and secondary T-cell responses in interleukin-15-deficient mice // Infection and Immunity. -2005. Vol.73. -№5. - P.2910-2922.

80. Lehrnbecher T, Foster C, Vazquez N et al. Therapy-induced alterations in host defense in children receiving therapy for cancer. J Pediatr Hematol Oncol 1997;19:399-417

81. London Ch.A., Lodge M.P., Abbas A.K. Functional responses and costimulator dependence of memory CD4+ T cells // The J.of Immunology. 2000. - Vol.l64. - P. 265-272.

82. Lotem J, Sachs L. Regulation by bcl-2, c-myc, and p53 of susceptibility to induction of apoptosis by heat shock and cancer chemotherapy compounds in differentiation-competent and -defective myeloid leukemic cells. Cell Growth Differ. 1993; 4: 41 47

83. Mackall C., Stein D., Fleisher T, et al. Prolonged CD4 depletion after sequential autologousperipheral blood progenitor cell infusion in children and young adults. Blood 2000; 96: 754-762

84. Mackall C.L, Hakim FT, Gress RE. Restoration of T-cell homeostasis after T-cell depletion // Immunology. 1997. - Vol.9. - P. 339-346.

85. Mackall C.L, Hakim FT, Gress RE. T-cell regeneration: all repertoires are not created equal. Immunol Today 1997; 18: 245-251

86. Mackall C.L., Granger L., Sheard M.A., Cepeda R., Gress R.E. T cell regeneration after bone marrow transplantation: Differential CD45 isoform expression on thymic-derived versus thymic-independent progeny. 1993 Blood 82: 2585-2594.

87. Mackall CM, Fleischer T, Brown M, Magrath I, Shad A, Horowitz M, Wexler L, Adde M, McClure L, Gress RE: Lymphocyte depletion during treatment with intensive chemotherapy for cancer. Blood 1994; 84: 222128

88. Mackall Cr. T-cell immunodeficiency following cytotoxic antineoplastic therapy: a review. The Oncologist 1999; 4: 370-378

89. Mackall Cr.L., Fleisher T.A., Brown M.R., Andrich M.P., Chen C.C., et al. Age, thymopoiesis, and CD4+ T-lymphocyte regeneration after intensive chemotherapy // The New England J.of Medicine. 1995. -Vol.332.N3. - P. 143-149.

90. Mackall Cr.L., Fry T.J., Bare C., Morgan P., Galbraith A., Gress R.E. IL-7 increases both thymic-dependent and thymic-independent T-cell regeneration after bone marrow transplantation // Blood. 2001. -Vol.97.N5. - P. 1491-1497.

91. Mahajanl V.S., Leskovl I.B., Chenl J. Homeostasis of T Cell Diversity // Cellular & Molecular Immunology. 2005. - Vol.2.Nl. - P. 110.

92. Maino V.C., Picker L.J. Identification of functional subsets by flow cytometry: intracellular detection of cytokine expression // Cytometry. -1998.-Vol. 34. N5.-P. 207-215.

93. Marleau A.M., Sarvetnick N. T cell homeostasis in tolerance and immunity // J.of Leukocyte Biology. 2005. - Vol 78. - P. 575-584.

94. McFarland R.D., Douek D.C., Koup R.A., Picker L.J. Idntification of a human recent thymic emigrant phenotype // PNAS. 2000. - Vol.97.N8. -P. 4215-4220.

95. Melchionda F., Fry T.J., Milliron M.J., McKirdy M.A., Tagaya Y., Mackall Cr.L. Adjuvant IL-7 or IL-15 overcomes immunodominance and improves survival of the CD8+ mmory cell pool // The J. of Clinical Investigation. 2005. - Vol. 115.N5. - P. 1177-1187.

96. Min В., Foucras G., Meier-Schellersheim M., Paul W.E. Spontaneous proliferation, a response of nai've CD4 T cell determined by the diversity of the memory cell repertoire // PNAS. 2004. -Vol.101.Nll.-P. 3874-3879.

97. Min В., Yamane H., Hu-Li J., Paul W.E., et al Spontaneous and homeostatic proliferation of CD 4 T cells are regulated by different mechanisms // The Journal of Immunology. 2005. - Vol.174.- P. 60396044.

98. Miyawaki Т., Uehara Т., Nibu R.et al. Differential expression of apoptosis-related Fas antigen on lymphocyte subpopulations in human peripheral blood. J. Immunol. 1992; 149: 3753-3758

99. Moniuszko M., Fry Т., Tsai W-P. Morre M., Assouline В., et al. Recombinant interleukin-7 induces proliferation of nai've macaque CD4+ and CD8+ T cell in vivo // J.of Virology. 2004. - Vol.78.N18. - P. 97409749.

100. Murali-Krishna K., Altman J.D., Suresh M., Sourdive D.J.D., Zajac A.J., et al Counting antigen specific CD 8 T cells: a reevaluation of bystander activation during viral infection // Immunity. - 1998. - Vol.8. -P.177-187.

101. Nagata, S., and P. Golstein. The Fas death factor. Science 1995; 267: 1449-1456.

102. Napolitano L.A. Approaches to immune reconstitution in HIV infection // International AIDS Society-USA. 2003. - Vol. 11. - P. 160163.

103. Nicoletti I., Migliorati G., Pagliacci M.C., Grignani F., Riccardi С. A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry // Related Articles. 1991. -Vol.139.N2. -P.271-279.

104. Osborne B.A. Apoptosis and maintenance of homeostasis in the immune system. 1996 Curr. Opin. Immunol. 16-336.

105. Osborne B.A. Transcriptional control of T-cell development. 2000 Curr.Opin. Immunol.12:301.

106. Pedroza-Gonzalez A, Garcia-Romo G.S., Aguilar-Leon D. et al. In situ analysis of lung antigen-presenting cells during murine pulmonary infection with virulent Mycobacterium tuberculosisII Int. J. Exp. Pathol.-2004. Vol.85(3) - P.135-145.

107. Piedimonte G., Corsi D., Paiardini M., Cannavo G., Ientile R., Picerno I., et al. Unscheduled cyclin В expression and p34 cdc2 activation in T lymphocytes from HIV-infected patients // AIDS. 1999. - Vol.13. -Р.1159-1164.

108. Porrata L.F., Litzow M.R., Markovic S.N. Immune reconstitution after autologous hematopoietic stem cell transplantation // Mayo Clin Proc. -2001. Vol.76. - P. 407-412.

109. Prlic M., Blazar B.R., Khoruts A., Zell Т., Jameson S.C. Homeostatic expansion occurs independently of costimulatory signals // The J.of Immunology. 2001. - Vol.167. - P. 5664-5668.

110. Romanyukha A.A., Yashin A.I. Age related changes in population of peripheral T cells: towards a model of immunosenescence // Mechanisms of Ageing and Development. 2003. - Vol.124. - P. 433-443.

111. Sachsenberg N., Perelson A.S., Yerly S., et al. Turnover of CD4+ and CD8+ T lymphocytes in HIV-1 infection as measured by Ki-67 antigen // J.Exp.Med. 1998. - Vol.187.N8. - P. 1295-1303.

112. Saito Т., Dworacki G., Gooding W., Lotze T.M., Whiteside L.T., et al Spontaneous apoptosis of CD8+T lymphocytes in peripheral blood of patients with advanced melanoma // Clinical Cancer Research. 2000. -Vol.6.-P.1351-1364.

113. Sarin A, Wu ML, Henkart P. Different interleukin-l(3 converting enzyme (ICE) family protease requirements for the apoptotic death of T lymphocytes triggered by diverse stimuli. J Exp Med 1996; 184: 24452450

114. Seddon В., Mason D. The third function of the thymus // Rev. Immunology Today. 2000. - Vol.21.N2. - P. 95-99.

115. Shams H., Wizel В., Weis S.E., Samten В., Barnes P.F. Contribution of CD8(+) T cells to gamma interferon production in human tuberculosis // Infect Immun. 2001. - Vol. 69. N 5. - P. 3497-3501.

116. Sieling P.A., Sakimura L., Uyemura K., Yamamura M., Oliveros J., Nickoloff B.J., Rea Т.Н., Modlin R.L. IL-7 in the cell-mediated immune response to a human pathogen // Journal of Immunology. 1995. -Vol.154.-P.2775-2783.

117. Sperber K., Beuria P., Singha N., Gelman I., et al. Induction of apoptosis by HIV-1-infected monocytic cells// Journal of Immunology. -2003.-Vol. 170. P.1566-1578.

118. Spits H. Development of ар T cells in the human thymus // Immunology. 2002. Vol.2. - P. 760-772.

119. Stahnke K., Fulda S., Freisen C., et al. Activation of apoptosis pathways in peripheral blood lymphocytes by in vivo chemotherapy. Blood 2001;98:3066-3073

120. Stockinger В., Kassiotis G.,Christine Bourgeois Ch. Homeostasis and T cell regulation // Curr Opinion in Immunology. 2004. - Vol.16. - P. 775-779.

121. Surh Ch.D., Sprent J. Homeostatic T cell proliferation: how far can T cells be activated to self-ligands? // J.Exp.Med. 2000. - Vol.192.N4. -F9-F14.

122. Tanchot C., Lemonnier F.A., Perarnau В., Freitas A.A., Rocha B. Differential requirements for survival and proliferation of CD8 naive or memory T cells // Science. 1997. - Vol.276. - P. 2057-2062.

123. Tanchot C., Rosado M.M., Agenes F., Antonio A. Freitas A.A., Rocha B. Lymphocyte homeostasis // Immunilogy. 1997. - Vol.9. - P. - 331-337.

124. Tough D.F., Sprent J. Turnover of naive- and memory-phenotype T cells // J.Exp.Med. 1994. - Vol.179. - P. 1127-1135.

125. Uchida N., He D., Friera A.M., Reitsma M., Sasaki D., Chen В., Tsukamoto A. The unexpected G0/G1 cell cycle status of mobilized hematopoietic stem cells from peripheral blood // Blood. 1997. -Vol.89.N2. - P. 465-472.

126. Varadhachary A.S., Perdow S.N., Ни C., Ramanarayanan M., Salgame P. Differential ability of T cell subsets to undergo activation-induced cell death //Proc Natl Acad Sci USA.- 1997. Vol. 94. N 11. - P. 5778-5783.

127. Vella A.T., Dow S., Potter T.A., Kappler J., Marrack P. Cytokine-induced survival of activated T cells in vitrj and in vivo // Immunology. -1998.-Vol.95.-P. 3810-3815.

128. Vivien L., Benoist Ch., Mathis D. T lymphocytes need IL-7 but not IL-4 or IL-6 to survive in vivo // International Immunology. 2001. -Vol.13.N6.-P. 763-768.

129. Voermans C., Kooi M.L.K., Rodenhuis S., et al. In vitro migratory capacity of CD34+ cells is related to hematopoietic recovery after autologous stem cell transplantation //Blood. 2001. - Vol.97.N3. - P. 799-804.

130. Watanabe N., De Rosa S.C., Cmelak A., Hoppe R.,Herzenberg L.A., et al Long term depletion of naive T cells in patients treated for Hodgkin's disease // Blood. - 1997. - Vol.90.N9. - P.3662 - 3672.

131. Webb S., Morris C., Sprent J. 1990 Extrathymic tolerance of mature T cells: clonal elimination as a consequence of immunity. Cell. 63: 12491256.

132. Wu Z., Bensinger S.J., Zhang J., Chen Ch., Yuan X., Huang Z., Markmann J.F., et al. Homeostatic proliferation is a barrier to transplantation tolerance // Nature Medicine. 2003. - P. 1-6.

133. Yusuf I., Fruman D.A. Regulation of quiescence in lymphocytes // TRENDS of Immunology. 2003. - Vol.24.N7. - P.380-386.