Исследование влияний флавоноидов на структурно-функциональные характеристики сократительных белков тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Е Ен Гин, 0

• Е Ен Гин, 0
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Е Ен Гин, 0

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. ФИЗЖО-ХШШЕСКИЕ СВОЙСТВА ФЛАВОНОИДОВ И ИХ БИОЛОГИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ.

Глава 2. СТРУКТУРНО-ФУНКЩЮНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА СОКРАТИТЕЛЬНЫХ

БЕЛКОВ.

2.1. Миофибриллы мышечного волокна.

2.2. Актомиозин.

2.3. Миозин.

ЭКСПЕРЖуЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 3. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И МАТЕРИАЛЫ.

1. Спектральные методы исследования.

1.1. Флуоресцентный метод.

1.2. Спектрофотометрия.

2. Определение АТФазной активности сократительных белков.

3. Материалы.

Глава 4. ВЛИЯНИЕ ФЛАВОНОИДОВ НА СШИСШ>ИО-ФШ<ЩОНАЛЪШЕ

СВОЙСТВА СОКРАТИТЕЛЬНЫХ БЕЛКОВ.

1. Влияние флавоноидов на АТФазную активность актомиозин а и миозина

2. Влияние флавоноидов на суперпреципитацию актомио-зина и сокращение миофибрилл.

3. Спектроскопическое исследование взаимодействия флавоноидов с сократительными белками

Глава 5. СПЕКТРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА 3-ФШЖУМАРИНА В РАЗНЫХ

РАСТВОРИТЕЛЯХ И ПРИ СВЯ&ШАНИИ С БЕЛКАМИ . 79 I. Спектральные свойства 3-фурилкумарина в растворителях с разной полярностью.

2. Исследование взаимодействия 3-фурилкумарина с белками.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование влияний флавоноидов на структурно-функциональные характеристики сократительных белков»

Актуальность проблемы. Природные флавоноиды, которые впервые >ыли выделены в начале XIX столетия, обладают широким спектром био-югического действия. В 1936 году Сент-Дьерди обнаружил, что еум-1арная фракция флавоноидов, полученная из корня лимона, обладает Р-;итаминной активностью. За последующий период подробно изучено фи-иологическое действие флавоноидов. Они участвуют в процессе биоло-'ического окисления, регулируют процесс роста, развития и иммуните-а биологических объектов, защищают организм от неблагоприятных ус-:овий и являются энергетическим материалом растений.(Мартин, 1957; амородова-Бианки, 1965; Запрометов, 1970S McClure ,1975). Многие лавоноиды проявляют фармакологическое действие. Они понижают про-ицаемость капилляров и тонус гладкой мускулатуры, расширяют сосу-ы, благоприятно влияют на сократительную функцию миокарда, способы замедлять ритм сердечных сокращений и увеличивать их амплитуду, иеньшагот содержание липидов при атеросклерозе (Бейер, 1957; ЛисеI ицкая, 1976; Беликов, Точкова, 1973; Родионов, Морозова, 1973;Мс-,luve,I975). Углубленное изучение биологических и фармакологических войств флавоноидов создает определенные предпосылки для их клини-эского использования. Флавоноиды часто применяют в качестве капил-1роукрепляющих, сердечных, противоопухолевых, желчегонных средств, тя профилактики и лечения многих заболеваний ( Минаева, 1978; Му-звьева, 1981).

Однако механизм действия флавоноидных соединений на клеточные зюцессы еще изучен недостаточно. В последнее время изучено взаимо-зйствиедвух природных флавоноидов - кверцетина и рутина - с белко-дли молекулами и мембранными структурами. Показано, что флавоноиды Зразуют комплексы с белковыми молекулами (Родионов, Журавлева, 1967; щионов, Морозова, 1973), вызывая конформадионные изменения белка, юрцетин и рутин ингибируют АТФазные системы из разных животных объектов , клхМел- t 1974; FWfcreJI , (3orrupertsf 1977) и Тем самым ингибируют биоэнергетические процессы.

Флавоноидные соединения оказывают влияние на деятельность мышечных систем, но механизм этого действия не изучен, Молеку -лярные аспекты мышечного сокращения были заложены в 1939 г. Эн-гельгардтом и Любимовой, установившими, что миозин является АИ>-азой и, следовательно, может быть ключевым элементом мышцы, где химическая энергия АТФ преобразуется в механическую работу мышцы. В дальнейшем использование данных электронной микроскопии , рентгеноструктурного анализа, биохимических исследовании позволило установить структурную организацию сократительного аппарата и участие различных белков в регуляции, сокращении и расслаблении мышечных систем (Бендолл, 1970). Процесс активации и сокращения скелетных мышц включает: возникновение потенциала дей -ствия на сарколемме, распространение его по Т-каналам и индуци Ол. рование освооождения ионов Са из саркоплазматического ретику-лума, взаимодействие ионов с регуляторной тропин-тропомио-зиновой системой, запускающей скольжение толстых и тонких про -тофибрилл (HuucUy Н., Ha.rv.sou, 1954; Mccx-ley А. , W'icUrg.evke , 1954; Eba-ski, 1973). Действие Флавоноидов возможно на различных этапах сложного процесса - сокращения-расслабления мышц. В настоящее время установлено, что кверцетин ингибирует АТФазную систему саркоплазматического ретикулума скелетных мышц (StvosLcw, d <xl, Е980, 1981). Однако до сих пор не изучено действие флавоноидов ia АТФазу шозина и сократительный аппарат мышц.

В настоящее время проводятся интенсивные поиски соединений, способных выступать в качестве флуоресцентных зондов при исследовании структуры и конформационных перестроек белков и мембран ! tokber , Yovv^ , 1964; S-tryer, 1968; Владимиров, Добрецов 1980;

Rosowslcy d. al, 1982). Большой интерес представляют соединения -аналоги природных биологически активных веществ, обладающие1 собственной флуоресценцией, чувствительной к изменению условий внешней среды. К ним принадлежат кумарины, обладающие биологической активностью (Кузнецов, 1967) и являющиеся структурными изомерами изофлавоноидов. Они широко представлены среди веществ растительного происхождения и многие из них используются как лекарственные средства. Поэтому применение таких веществ в качестве флуоресцентных зондов позволит получать информацию как о структурных особенностях белков, так и о связывании белков с этими веществами, то есть позволит лучше понять механизм их физиологического действия. Однако, пока не было попыток использовать кумарины в качестве флуоресцентных зондов при исследовании структурных и конформационных перестроек белков.

Цель работы состояла в исследовании влияния флавоноидов на сократительные системы скелетных мышц и в поиске новых кумари -новых соединений, выступающих в качестве флуоресцентных зондов.

Главные задачи:

1. Исследовать влияние флавоноидов на АТФазную активность миозина, суперпреципитацию актомиозина и сокращение миофибрилл.

2. Провести исследование конформацинных перестроек сократительных белков под действием флавоноидов. Выяснить природу взаимодействия флавоноидов с сократительными белками.

3. Изучить спектральные характеристики изофлавоноидного соединения 3-(5-этоксикарбонил-2-фурил)-4-окси-6-этил-7-метоксикума-рина (3-фурилкумарина) в растворах с разной полярностью и при связывании с белками.

Научная новизна. Впервые подробно изучены изменения АТФазной активности и конформационные перестройки миозина, а также суперпреципитация актомиозина и сокращение миофибрилл под действием флавоноидов. Обнаружено, что при небольших концентрациях ( до 20 мкмолей) флавоноиды вызывают конформационные изменения миозина, сопровождающиеся активацией ферментативной активности.При больших концентрациях (более 20 мкмолей) флавоноидов наблюдается ингибирование АТФазной активности миозина, суперпреципитации актомиозина и сокращения миофибрилл. Ингибирующее действие флавоноидов наиболее сильно проявляется для миофибрилл. Сделано заключение, что конформационные изменения обусловлены связыванием флавоноидных соединений с регуляторной частью вблизи активного центра головки миозина.

Впервые экспериментально доказано, что 3-фурилкумарин является хорошим флуоресцентным зондом при изучении конформационных перестроек белковых молекул. Установлено, что :его спектры поглощения и флуоресценции существенно изменяются в растворах с разной полярностью и при связывании с белками (сывороточный альбумин, миозин, актомио зин).

Практическое значение работы. Полученные результаты имеют теоретическое значение для понимания молекулярных механизмов взаимодействия флавоноидных соединений с белковыми структурами, а также определенное практическое значение, поскольку флавоноиды используются в качестве лекарственных средств.

Изученный нами новый флуоресцентный зонд, 3-фурилкумарин.может использоваться при исследовании конформационных перестроек белковых молекул.

Результаты исследований использованы при чтении спецкурса "Биофизика мышечного сокращения и клеточной подвижности" на кафедре биофизики Киевского государственного университета им. Т.Г. Шевченко.

В диссертации использованы следующие сокращения: АНС - 1-анилинонаюталин~8-сульфонат АТФ - аденозинтрифосфат ДТНБ - дитиобис-2~нитробензойная кислота 1МБ - пара-хлормеркурий-бензоат ЛШ - легкий меромиозин Шл - тяжелый меромиозин C-I - субфрагмент-1 С-2 - субфрагмент-2 Трис - трисгидроксилметиламршометан М - молекулярная масса Фн - фосфор неорганический С - концентрация СПП - суперпреципитация Ц - оптическая плотность I - интенсивность флуоресценции t - время v- скорость АНазной реакции Х- длина волны

У> - квантовый выход флуоресценции

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Е Ен Гин, 0

ВЫВОДЫ

1. Флавоноиды, кверцетин и рутин, изменяют АТФазную активность миозина и актомиозина скелетных мышц. Установлено, что в небольших концентрациях (до 20 мкМ) флавоноиды оказывают активирующее влияние на АТФазу. В концентрациях больше 20 мкМ флавоноиды ингибируют АТФазу миозина и актомиозина,

2. Показано, что ингибиторное влияние флавоноидов осуществляется по неконкурентному типу. Кверцетин менее эффективно ингибирует АТФазу миозина чем актомиозина.Константа ингибирования кверцетином АТФазы актомиозина равна 96 мкМ, миозина-320 мкМ.

3. Установлено, что кверцетин и рутин эффективно ингибируют суперцреципитацию актомиозина и сокращение миофибрилл. Эффект ингибирования больше проявляется на миофибриллах чем на актомиозине.

4. С помощью дифференциальной спектрофотометрии и флуоресцентного анализа показано связывание флавоноидов на головках миозина. Установлены Конформационные изменения, которые вызываются связыванием флавоноидов с регуляторным участком головки миозина и которые определяют функциональные свойства сократительных систем.

5. Изучены спектральные свойства 3-фурилкумарина в растворителя^ с разной полярностью. Показано, что спектральные параметры 3-фурилкумарина достаточно чувствительны к изменив) микроокружения: максимум спектра флуоресценции смещается в коротковолновую область,а максимум спектра поглощения смещается в длинноволновую область с увеличением гидро-фобности растворителя.

6. Показано, что 3-фурилкумарин связывается с сывороточным альбумином человека ( САЧ ) и миозином. Константа связнее т вания 3-фурилкумарина с САЧ равна 2,24*10 М~ , с миозином -5 т

0,69*10 М~. При связывании значительно изменяются флуоресцентные параметры 3-фурилкумарина и происходит миграция энергии возбуждения от триптофановых остатков к связанному зонду. Эффективность передачи энергии в комплексе САЧ-З-фурилкумарин 24,4$, в комплексе миозин-3-фурилкумарин - 11,1%.

7. С помощью З-фурилкутларина,связанного с актомиозином, обнаружены рН-зависимые конформационные изменения в актомио-зине. Сделано заключение, что 3-фурилкумарин может использоваться как флуоресцентный зонд для изучения конформационных изменений белковых молекул.

Автор выражает искреннюю благодарность Зиме В.Л. за постоянное внимание при руководстве диссертационной работой.

Автор благодарит Данилову В.М., Мирошниченко Н.С., Фи-ленко A.M., Мирутенко В.И., Давцдовскую Т.Л., Решодько Л.В. за ценные замечания при обсуждении результатов работы, Мари-нича В., Минченко П., Ганчурина В., Кучер-Томченко Д. за помощь при выполнении работы, Савинайнен Л. за помощь в оформлении диссертации.

Автор исвренне признателен всем сотрудникам кафедры биофизики и отдела биофизики Института физиологии Киевского госуниверситета за постоянную поддержку цри выполнении диссертационной работы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В работе впервые изучено влияние флавоноидных соединений, кверцетина и рутина, на сократительные системы скелетных мышц. Установлено, что действие флавоноидов на АТФ-азу миозина имеет двухфазный характер. Флавоноиды в небольших концентрациях (до 20 мкМ) оказывают активирующее влияние на АТФазу. Большие концентрации (больше 20 мкМ) флавоноидов ингибируют АТФазу миозина и актомиозина. Анализ кинетических кривых АТФазной реакции указывает на неконкурентный тип взаимодействия кверцетина и рутина с актомиозином и миозином скелетных мышц. АТФазная реакция миозина ингибируется менее эффективно, чем АТФазная реакция актомиозина: константа ингибирования для миозина 320 мкМ, для актомиозина - 96 мкМ.

Флавоноиды ингибируют суперпреципитацию актомиозина и сокращение миофибрилл. Ингибирующий эффект флавоноидов усиливается с усложнением сократительных моделей - наибольшее ингибирующее влияние наблюдается для миофибрилл.

С помощью дифференциальной спектрофотометрии и флуорес центного анализа показано, что кверцетин и рутин связы -ваются в определенных центрах миозиновой молекулы. Наблюдаемое при этом изменение флуоресцентных параметров (двухволнового параметра В УФ-флуоресценции миозина и пара -метра А флуоресценции AHG) указывает на конформационные перестройки, которые затрагивают участок головки миозина, где связываются молекулы АНС. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что флавоноиды конкурируют с АНС за один и тот же центр связывания. Рутин по сравнению' с квер-цетином благодаря стерическим ограничениям менее эффективно связывается в этом центре. Анализ собственных результатов и данных литературы позволил сделать заключение, что значительное влияние флавоноидов на функциональные свойства сократительных систем обусловлено конформационными из -менениями, происходящими благодаря связыванию флавоноидов с регуляторным участком вблизи активного центра головки миозина;

Проведен поиск новых изофлавоноидных соединений, которые могли бы выступать в качестве флуоресцентных зондов. Впервые показано, что спектральные параметры нового соединения 3-(5-этоксикарбонил-2-фурил)-4-окси-6-этил-7-метокси-кумарина (3-фурилкумарина) достаточно чувствительны к изменению микроокружения, В более гидрофобном микроокружении максимум спектра поглощения 3-фурилкумарина смещается в длинноволновую область, а максимум спектра флуоресценции смещается в коротковолновую область; происходит згвеличение молярного коэффициента экстинции и интенсивности флуоресценции 3-фурилкумарина.

При связывании 3-фурилкумарина на миозине и САЧ значительно изменяются его флуоресцентные параметры: максимум спектра флуоресценции смещается в коротковолновую область и значительно увеличивается интенсивность флуоресценции в 2,4 раза при связывании с миозином и в 4,8 раза при связывании с САЧ. Это свидетельствует о связывании 3-фурилкумарина на гидрофобных участках белковых молекул.

На основании сравнительной оценки влияния 3-фурилкумарина и флавоноидов на АТФазную активность актомиозина сделано заключение, что 3-фурилкумарин связывается на тех же центрах, что и флавоноиды, но вследствие стерических ограничений (подобно рутину) 3-фурилкумарин оказывает незначительное ингибиторное влияние на АТФазную активность. Установлены рН-зависимые изменения двухволонвого параметра А флуоресценции 3-фурилкумарина, хорошо коррелирующие с изменением АТФазной активности актомиозина. На основании проведенных исследований сделано заключение о перспективности использования 3-фурилкумарина в качестве нового флуоресцентного зонда для изучения структурных особенностей белков.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Е Ен Гин, 0, 1984 год

1. Беликов В.В., Точкова Т.В. Реакция комплексообразования в анализе флавоноидов. В сб.: Фенольные соединения и их физиологические свойства, Материалы 2 Всесоюзного симпозиума по фено-льным соединениям, Алма-Ата, 1973, с. 168-172.

2. Бендол Дж. Мышцы, молекулы и движение. М., Мир, 1970, -256 с.

3. Богач П.Г., Дубонос В.Н., Зима В.Л., Данилова В.М. Конформационные изменения в молекулах миозина при различных рН раствора.- В сб.: Биофизика и биохимия мышечного сокращения, М., Наука, 1976, с.23-29.

4. Богач П.Г., Дубонос В.Н., Зима В.Л., Данилова В.М. ФлУоримет-рическое исследование структурных особенностей миозиновых молекул с помощью 1-анилин-8-нафталинульфоната. В сб.:Молекулярная генетика и биофизика, К., Вища школа, 1978, вып. 3, с. 3-II.

5. Богач П.Г., Зима В.Л., Данилова В.М., Дубонос В.Н. Температурная зависимость флуоресценции миозина скелетных и гладких мышц.- Докл. АН УССР, сер. Б, 1975, № I, с. 56-59.

6. Богач П.Г., Зима В.Л., Данилова В.М., Минченко Л.Г.Влияние мочевины на структурную стабильность миозина скелетных и гладких мышц.- В сб.: Молекулярная генетика и биофизика, К., Вища школа, 1977, вып. 2, с. 3-9.

7. Бочарникова Н.М., Летушкова Е.В., Малинина Т.В. Сократительная и АТФазная активность актомиозина в присутствии имидазольных соединений.- В сб.: Механизмы мышечного сокращения, М., Наука, 1972, с. 79-85.

8. Владимиров Ю.А., Бурштейн Э.А.Спектры люминесценции ароматических аминокислот и белков. Биофизика, I960, т. 5, с.385-392.

9. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.,:Наука, 1980, - 320 с.

10. Власова Т.И., Петушкова Е.В.-Щелочная активация миозиновой АТФазы. Некоторые термодинамические характеристики. Биохимия, 1976, т. 41, с. 718-720.

11. Волотовский И.Д., Конев С.В. О связи между конформацией и ультрафиолетовой флуоресценцией белков. Биофизика, 1976, т. 12, с. 200-205.

12. Диксон Л/1., Уэбб Э. Ферменты. М., Иностр. литер., I96I,c.I7-39.

13. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды: оптические свойства и взаимодействие с мембранами. В сб.: Итоги науки и техники ,сер. Биофизика, 1979, т. II, с. I0I-I88. .

14. Заалишвили М.М., Микадзе Г.В. Некоторые вопросы механохимии гладких мышц. Биохимия, 1964, т. 29, с. 801-811.

15. Запрометов М.Н. Образование и.функции фенольных соединений .в высших растениях. 1. общ. биол., 1970, т. 31, с. 201-220.

16. Зацепина.Г.Н., Шноль С.З. Исследование хода АТФазной реакции по появлению ионов водорода в среде. Биофизика, 1965, т. 10, с. 37- 42.

17. Зима В.Л., Данилова В.М., Минченко П.Г., Богач П.Г. Флуорес -центное изучение,взаимодействия миозина с АТФ. Влияние температуры^ рН среды. Докл. АН УССР, сер. Б, 1978, № 5, с.450453.- но

18. Зима В.Л., .Данилова В.М., Минченко П.Г., Мирошниченко Н.С. Конформационные изменения миозина, индуцируемые АТФ или аналогом АТФ в присутствие двухвалентных ионов. В сб.: Структурные основы биологической подвижности, М., Наука, I960, с. 75-80.

19. ЗимаВ.Л., Демченко А.П. Теыпературнозависимые функциональные переходы белков и состояние хромофорных групп.- В сб.: Молекулярная биология, К.,Наукова душка, 1976, вып. 14, с.42-53.

20. ЗимаВ.Л., Демченко А.П., Медведь Л.В. Дифференциальная спек-трофотометрия шозина. В сб.: Молекулярная генетика и биофизика, К., Вища школа, 1979, вып. 4, с. II-20.

21. Зима В.Л., Дубонос В.Н., Храпунов С.Н. Спектрофяуориметр для измерения люминесцентных характеристик биополимеров, В сб.: Молекулярная генетика и биофизика, К., Вища школа, 1977,вып. 2, с. II7-I2I,

22. Зима В.Л., Е Ен Гин, Мирошниченко Н.С., Данилова В.М.Спектроскопическое изучение взаимодействия флавоноидов с миозином скелетных мышц. В сб.: У Всесоюзная конференция по спектроскопии биополимеров. Тезисы докладов, Харьков, 1984, С.Э2-93.

23. Зима В.Л., Хиля В.П., Мирошниченко Н.С., Е Ен Гин Спектральные свойства 3-(5-этоксикарбонил-2-фурил)-4-окси-6-этил-7~ метокси-кумарина в разных растворителях при связывании с белками. Докл. АН УССР, сер. Б, 1984, № 9, с.64-67.

24. Калинин Ф.Л., Лобов B.II., Жидков В.А. Справочник по биохимии,-К., Наукова думка, 1971, с, 590-591,

25. Кофман Е,В. Суперпреципитация актомиозина. В сб.: Биофизические и биохимические методы исследования мышечных белков, Л., Наука, 1978, с. 40-54.- Ill ~

26. Кофман Е.Б., Нанкина B.H. Влияние миофибриллярных белков на суперцрециштадию актомиозина. В сб.: Механизмы мышечного сокращения, М., Наука, 1972, с. 74-78.

27. Кофман Е.Б., Нанкина В.Н. Некоторые особенности суперпреципитации актомиозина и ее возможный механизм, В сб.: Биофизика и биохимия мышечного сокращения, М., Наука, 1976, с. 82-86.

28. Э. Кочетов Т.А. УФ-спектрометрические методы анализа некоторых лекарственных средств природных Ы,- и тГ-пирона. Авторе -ферат диссертации на соискание ученой степени кандидата наук, К., 1974, с. 3-13.

29. Кузнецова Т.А. Природные кумарины и фурилкумарины. -Л., Наука, 1967., 248 с.

30. Ламри Р., Билтонен Р. Термодинамические и кинетические аспекты конформаций белков в связи с физиологическими функциями. -В кн.: Структура и стабильность белковых маьфомолекул, М.,Мир, 1973, с. 7-173.

31. Ленинжер А, Биохимия. М., Мир, 1974, - 956 с.

32. Лисевичкая Л.И. Биологические действия некоторых фенольных комплексов в эксперименте на животных. В сб.: Вопросы курортологии, фармации и фармакологии. Материалы объединенной научной конференции, Пятигорск, 1976, с. 99-100.

33. Литвиненко В.И., Попова Т.И., Аммосов О.С. Дифференциальная УФ-спектроскопия флавоноидов. Фармацев. ж., 1976, т.6, с. 20-27.

34. Любимова М.И., Энгельгардт В.А. Аденозинтрифосфотаза и миозин мышцы. Биохимия, 1939, т. 4, с. 716-736.

35. Мартин Г. Биохимия биофланоидов. В кн.: Биофланоиды и проницаемость капилляров, М., Иностр.литер., 1957, с. 29-35.

36. Минаева В.Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование. Наука, Сибирское отделение, 1978, с. 225.

37. Музафаров Е.Н., Иванов Б.Н., Рузиева Р.Х. Ингибирование квер-цетином электронного транспорта и фосфорилирования в хлоро- пластах. Молекулярная биология, 1978, т. 12,- с. 100-106.

38. Муравьева Д.А. Фармакология ( с основами биохимии лекарственных веществ). М., Медицина, 1981, с. 569-603.

39. Петушкова Е.В. О сульфгидрильных группах миозина и об активации миозиновой АТФазы. В сб.: Структура и функция ферментов, М., МГУ, 1976, вып. 2, с. 75-87.

40. Петушкова Е.В., Власова Т.И. Влияние ионной силы и модификации сульфгидрильных групп на кинетику АТФазной реакции миозина. -Биохимия, 1973, т. 38, с. II44-II52.

41. Родионов Й.Й., Журавлева Г.П. 0 свойствах флавоноид-белковых комплексов. Материалы докладов в секциях ( 1-й Всесоюзный съезд фармоцефтов), М., 1964, с. 87.

42. Родионов И.И., Морозова Э.Я. К образованию биоактивного комплекса альбумин кверцетин. - В сб. : Биологически активные вещества в жизни растений и животных, Шнек, 1973, с. 40-44.

43. Самородова-Бианки Г.В. Флавоноиды как природные антиоксиданты аскорбиновой кислоты плодов и ягод. Биохимия, 1965, т.30, с. 248-254.

44. Сент-Дьёрдьи А. Перспективы применения бирфлавоноидовА В сб.: Биофлавоноиды и проницаемость капилляров, М., Иностр. литер., 1957, с. 156-160.

45. Соколова В.Ю., Богач П.Г., Зима В.Л., Чан М.Д. 0 влиянии аце-тилхолина на АТФазную активность и суперпреципитацию актомиозина. В сб.: Биофизика и биохимия мышечного сокращения, М., Наука, 1976, с. 77-81.

46. ТУроверов К.К., Щелчков Б.В. Исследование тепловой денатурации белков с помощью двухволнового метода регистрации изменений спектра и ультрафиолетовой флуоресценции. Биофизика, 1970, т.15, с. 965-972.

47. Филенко A.M., Зима В.Л. Двухволновой метод регистрации малых спектральных сдвигов флуоресценции белков. В сб. : Молекулярная генетика и биофизика, К., Вища школа, вып. 6, с,126 -135.

48. Франк Г.М. Регуляция молекулярных механизмов сокращения мышц,-В сб.: 12 съезд Всесоюзного физиологического общества им. Павлова И.П. Рефераты докладов, М., Наука, 1975, т.1, c.w2I5-2I6.

49. Франк Г.М., Теплова В.В., Карнаухов В.Н. Люминесцентные исследования распределения полярных и гидрофобных групп в саркоме. ре. -В сб.: Биофизика животной клетки, М., 1971, №2, с, 615.

50. Франк Г.М., Теплова В.В., Карнаухов В.Н. Дин шик а полярных . групп контрактивных белков при сокращении мышц. Биофизика живой клетки, М., 1973, J& I,- с. 3-7.

51. Ambrose A.M., Eabhins D.T., DeEds P. Comparative toxicities of quercetin and quercetin. J.Am.Pharm.Assoc.,1952,v.41, p.119-122.

52. Amos L.A., Huxley H.E., Holmes K.C., Goody R.S.,Taylor K.A. Structural evidence that myosin heads may interact with two ; site on F-acfcin. Nature,1982,v.299,p.467-469.

53. Azuma N. Effects of dioxane for the adenosine triphosphatase activity of lyophilized heave meromyosin. J.Bioсhem.,1968, . .v.63,p.130r152.

54. Bagshaw C.R. The mechanism of adenosin triphosphate hydrolysis Ъу myosin. Biochem.Soc.Trans.,1977,v.5,p.272-274.

55. Bagshaw C.R., Trentham D.R. The characterization of myosin product complexes and product-release steps during the magnesium ion-dependent adenosin triphosphatase reactions. Bio-chem.J.,1974,v.141,p.331-349.

56. Barany K.,Barany M.jGaetijens E.,Balin G. Chicken gizzard myosin. Arch.Biochem.Biophys.,1966,v.113,p.205-211.

57. Barman Т.Е. ,Hillaire D.,Travers P. Evidence for the two step binding of ATP to myosin subfragment 1 by the rapid-flow-quench method. Biochem.J.,1983,v.209,p.617-626.

58. Barret T.W. Energy transfer and molecular swiching; 2.muscle contraction and enzymatic reactions.-J.Theor.Biol.,1983, v.99,P.293-308.

59. Barton G.,Schneider C.',Romeo D. Inhibition by quercetin of polymorphonuclear leucocyte functions. Biochim.Acta,1980,v.595,P.47-55.

60. Bendall T.R. A study of the kinetics of the fibrilla adenosin triphosphatase of rabbit skeletal muscle. Biochem.J., 1961,v.81,p.520-535.

61. Biosca J.M., Travero P. Transient kinetics of the bindingof ATP to actomyosin subfragment 1; Evidence that the dissociation of actomyosin subfragment 1 by ATP leads to a new conformation of subfragment 1. Biochemistry,1984,v.23, p.2428-2436.

62. Bogach P.G.,Zyma V.L. ,Danilova V.M. Biophysical and physico-chemical properties of actomyosin of smooth muscle.-In the "Physiology of smooth muscle",Raven Press,N.Y.,1976,p.239-248.

63. Brahms S.T.,Kay C.M. The role of solvent-induced conformational change on the enzymatic adenosin triphosphatase activity of cardiac myosin A.-J.Biol.Chem., (1976,v.237,p.334-9-3454.

64. Brand L., Gohlke J.R. Fluorescence probes for structure.-Ann.Rev.Biochem.,1972,v.41,p.843-868.

65. Burke M., Reisler E. Effect of nucleotide binding on the proximity of the essential sulfhydryl groups of myosin. Chemical probing of movement of residues during conformational transitions. Biochemistry,1977?v.16,p.5559-5563

66. Cantley L.C.T., Hammers C.G. Investigations of quercetin binding sites on chloroplast coupling factor 1. Biochemistry, 1976,v.15,P.1-8.

67. Carpenedo P., Bortignon C., Bruni A., Santi R. Effect of quercetin on membrane-linked activities. Biochem.Pharmacol. 1969,v.18,p.1495-1500.

68. Cheung H.C. Conformation of myosin. Effect of substrate and modifiers. Biochim.Biophys.Acta,1969,v.194,p.408-485.

69. Cheung H.C., Morales M.F. Studies of myosin conformation by fluorescent techniques. Biochemistry,1969,v.8,p.2177-2182.

70. Chiao Yu-Chin C., Harrington W.F. Gross-bridge movement in glycerinated rabbit psoas muscle fibres. Biochemistry,1979, v.18,p.959-963.

71. Cooper A. Conformational fluctuation and change in biological macromolecules. Sci.Prog.Oxf.,1980,v.66,p.493-497.

72. Debye P., Edwards Т.О. A note on the phosphorescence of proteins. Science,1952,v.116,p.143-148.

73. Deters D.W., Racker G., Nelson N.,Nelson H. Partial resolution of the enzymes catalyzing photophosphorylation.-J.Biol. Chem.,1975,v.250,p.1041-1047.

74. Ebashi S. Third component participating in the super-precipitation of natural actomyosin. Nature,1963,v.200,p.1010-1011

75. Ebashi S. Calcium binding activity of vesicular relaxing factor. J.Biochem.,1961,v.50,p.236-244.

76. Ebashi S. Ca ion and muscle contraction. Ions-Cyclic Nucle-otides-cholinergy; Advances in pharmacology and therapeutics, 1973,v.3,p.81-98.

77. Ebashi S.,Kodama A. A new protein factor promoting aggraga-tion of tropomyosin. J.Biochem.,1965,v.58,p.107-108.

78. Eisenberg E., Hill T.L.,Chen Y. Gross-bridge model of muscle contraction quantitative analysis. Biophys.J.,1980,v.29, p.95-227.

79. Elzinga M., Collin J.H. Amino acid sequence of a myosin fragment that contains SH-1 ,SH-2 and N -methylhistidine. Proc. Nat.Acad.Sci.USA,1977,v.74,p.4281-4284.

80. Fewtrell C.M.S., Gomperts B.D. Quercetin: a novel inhibitor2+of Ca influx and exocytosis in rat peritoneal mast cells.-Biochim.Biophys.Acta,1977469,p.52-60.

81. Gergelly J. Studies on myosin adenosintriphosphatase.- J. Biol.Chem.,1953,v.200,p.543-550.

82. Gottlieb O.K. Flavonoids. In the book: "The flavonoids". London,Academy Press,1975,p.297-375»

83. Green D.E., Zandle H.V. The determinants of the changes in fluorescence of 8-anilino-1-naphtalene sulfonic acid induced in particle systems. Biochem.Biophys.Res.commun.,1982,v.107,p.1300-1307.

84. Han M.H., Benson E.S. Conformational changes in troponin in2+duced by Ca' . Biochem.Biophys .Res.Commun. ,1970,v.38,p. 378-384.

85. Harrington W.P. A mechanochemical mechanism for muscle contra< tion. Proc.Nat.Acad.Sci.USA,197168,p.685-689.

86. Harvey S.C.,Cheung H.C. Fluorescence depolarization studies on the flexibility of the myosin rod. Biochemistry,1977,v.16,p.5181-5186.

87. Huxley H.E. Electron microscopy studies of the structure, of natural and synthetic protein filaments from striated muscle. J.Mol.Biol.,1963,v.7,p.281-308.

88. Huxley H.E., Hanson J. Changes in the cross-striations of muscle during contraction and stretch and their structural interpretation. Nature,1954,v.173,p.973-996.

89. Inoue A., Tonomura Y. Separation of subfragment-1 of H-mero-myosin into two equimolar fractions with and without formation of the reactive enzyme-phosphate-ADP complex. J.Biochem.,1976,v.79,p.419-434.

90. Johnson K.A., Taylor E.W. Intermediate states of subfragment 1 and actosubfragment 1 ATPase: reevaluation of the mechanism.-Biochemistry,1978,v.17,p.3432-3442.

91. Kalder G.f Weinbach S. Effect of urea and some organic solvents of myosin A. Proc.Soc.Exp.Biol.Med.,1965,v.119,p. 738-740.

92. Kameyama T. Actin-induced local conformational change in the myosin molecule: II. Conformational change around the Sr thiol group related to the essential intermediate of ATP hydrolysis. - J.Biochem.,1980,v.87,p.581-586.

93. Kazio S. An actin-binding site on the 20-kilodalton fragment of myosin subfragment 1. —Biochemistry, 1982,v.21,p.4800-4804.

94. Kielley W.W., Bradley Ь.В. The relationship between sulf-hydryl groups and the activation of myosin ATPase. J.Biol. Chem.,1956,v.218,p.653-659.

95. Kielley W.W., Harrington W.F. A model for the myosin molecule. Biochim.Biophys.Acta,1960,v.41,p.401-421.

96. Kimura Y., Okuda H., Tani Т., Arichi S. Studies on Scutellariae Radix, VI.Effects of flavone compound on lipid peroxidation in rat liver. Chem.Pharm.Bull.,1982,v.30,p. 1792-1795.

97. Klotz J.M. The effect solts and proteins on the spectra of some dyes and indicators. Chem.Rev.,1947,v.41,p.378-399.

98. Kominz D.R. Studies of adenosine triphosphatase activity and turbidity in myofibril and actomyosin suspensions. -Biochemistry,1970,v.9,P.1792-1801.

99. Krogmaiin D.W., Stiller M.L. A naturally occuring cofactor for photosynthetic phosphorylation. Biochem.Biophys.Res. Commun., 1962, v. 7 ,P .4-6-49.

100. Lang D.R., Raker E. Effects of quercetin and inhibitor on mitochondrial ATPase and energy-linked reaction in mitochondrial particles. Biochim.Biophys.Acta,1974,v.333,p.180-186.

101. Levy H.M., Fleisher M. Studies on the superprecipitation of actomyosin suspensions as measured by tbre changes in turbidity. Biochim.Biophys.Acta,1965,v.100,p.491-502.

102. Levy H.M., Ryan E.M. Evidence that that the contraction of actomyosin requires the reaction of adenosine triphosphate and magnesium at two different sites. Biochem.Z.,1966, v.345,p.132-147.

103. Lowey S., Slayter H.S., Weeds A.G., Baker H. Substructureof the myosin molecule. I. Subfragments of myosin by enzy-mic degradation. J.Mol.Biol.,1969,v.42,p.1-29.

104. Lymn R.W. The steady-state actomyosin ATPase; A. Further note. J.Theor.Biol.,1975,v.49,p.425-429.

105. Lymn R.W., Taylor E.W. Mechanism of adenosintriphosphate hydrolysis by actomyosin. Biochemistry,1971,v.10,p.4617-4624.

106. Macdonald I.A., Mader J.A., Bussard R.G. The role of rutin and quercitrin in stimulating flavonol glycosidase activityby cultured cell-free microbial preparations of human faces and saliva. Mutat.Res.,1983,v.122,p.95-102.

107. Markhan K.R., Mabry T.J. Ultraviolet-visible and proton magnetic resonance spectroscopy of flavonoids: In the book: "The flavonoids". London,Academy Press,1975,p.46-77»

108. Marsh B.B. The effects of ATP on the fibre volume of a muscle homogenate. Biochim.Biophys.Acta,1952,v.9,p.247-260.

109. McClure J.W. Physiology and functions of flavonoids. In the book: "The flavonoids". London,Academy Press,1975,p.972-1055.

110. Michalyi E., Szent-Gyorgyi A.G. Tripsin digestion of muscle proteins adenosintriphosphatase activity and actin-binding capacity of the digested myosin. J.Biol.Chem.,1953,v.201,p.211-219.

111. Mizuta M., Kanamori H. Time-course of mutagenicity due to flavonols in a pickled vegetable. Mutat.Res.,1983,v.122, p.287-291.

112. Morita P. Interaction of heavy meromyosin with substrate.

113. Difference in ultraviolet absorption spectrum between heavy meromyosin and its Michaelis-Menton Complex. J.Biol.Chei 1967,v.242,p.4501-4506.

114. Mori S., Noguchi I. Effect of flavonoid compounds on enzyme activity. I. Inhibitory action on bovine pancreatic ribo-nuclease. Arch.Biochem.Biophys.,1970,v.139,p.444-446.

115. Mucsi I., Beladi I.,Pusztai R., Bakay M.,Gabor M. Antiviral effects of flavonoids. In the book: "Flavonoids and bioflavonoids". Current research trends proceedings of the fifth hungrian bioflavonoid Symposium. Budapest,1972,p.401-409.

116. Parker C.A., Pess W.T. Correction of fluorescence spectra and measurement of fluorescence quantum efficiency. Analyst. ,1960,v.85,p.587-600.

117. Pesce A.T., Rosen C.G., Pasby T.L. Fluorescence spectroscopy can introductions for biology and medicine. New York, 1971,247р.

118. Pusztai R., Boladi I., Bakai M., Mucsi I.,Kykan E. Study on the effect of flavonoids and related substances. 1. The effects of quecetin on different viruses. Acta Micro.

119. Acad.Sci.,Hung,1966,v.13,p.113-115.

120. Ramires F., Shukla K.K., bevy H.M. A model for active site of skeletal muscle myosin. J. ther.Biol.,1978,v.76,p.351-357.

121. Rice R.V. Conformation of individual macromolecular particular from myosin solutions. Biochim.Biophys.Acta,1961,v.52, p.602-504.

122. Rodney G., Swanson A.L., Wheeler L.M., Smith G.N.,Worrel C.S. The effect of a series of flavonoids on hyalurenigaseand some other related enzymes. J.Biol.Chem.,1950,v.183,p.739-747.

123. Shimizu T.,Morita F.,Yagi K. Tyrosine and tryntophanyl contents in heavy meromyosin and subfragment-1. J.Biochem. ,1971v. 69, p.-447-452.

124. Shoshan Y., Campbell K.P. ,Maclennan P.H.,Prodis W.,Britt2+ 2+

125. B.A. Quercetin inhibits Ca uptake but not Ca releaseby sarcoplasmic reticulum in skinned muscle fibres. -Proc.Nat.Ac ad.Sc i.USA,1980,v.77,p.4435-4438.

126. Shoshan Y.,MacLennan D.H. Quercetin interaction with the1. P. p.

127. Ca + Mg ) ATPase of sarcoplasmatical reticulum. -J.Biol.Chem.,1981,v.256,p.887-892. 139* Shoshan Y.,Shahak T.,Shavit N. (Quercetin interactions with the chloroplast ATPase complex. - Biochim.Biophys. Acta,1980,v.591,P.421-423.

128. Shukla K.K.,Levy H.M. Oxygen exchange by single-headed myosin. Further support for the hypothesis that the active site myosin is near the (subfragment-1 )-(subfragment-2)hinge. J.Biol.Chem.,1978,v.253,p.8362-8365.

129. Stain L.A.,Chock P.B.,Eisenberg E. Mechanism of the actomyosin ATPase; Effect of actin on the ADP hydrolysis step-Proc.Nat.Acad.Sci.USA,1981,v.78,p.1134-1150.

130. Stracher A. Effect of pH and urea on optical rotation,viscosity and ATPase activity of myosin A. J.Biol.Chem., 1961,v.236,p.99-103.• 143. Stryer L. Fluorescence spectroscopy of proteins. Science.1968,v.162,p.526-533.

131. Swain Т. Nature and properties of flavonoids. In the book: "chemistry and biochemistry of plant pigment". London-New York,1965,P.211-230.

132. Szent-Gyorgyi A.G., Cohen C.,Philpott D.E. Light meromyosin fraction 1t A Helical molecule from myosin. J.Mol.Biol.,1960,v.2,p.133-142.

133. Szent-Gyorgyi A.G. Meromyosin the subunit of myosin. -Arch.Biochem.Biophys.,1953,v.42,p.305-320.

134. Taga M., Tonomura Y. Superprecipitation of myosin В induced by ATPase a nucleotid growth process. J.Biochem.,1967,v.61,p.123-135.

135. Takahashi K. Topography of the myosin molecule as visualized by an improved negative staining method. J.Biochem. 1978, v.83,p.905-908.

136. Taylor E.W. Actomyosin ATPase mechanisms in heart and skeletal muscle. J.Mol.Cell. Cardiol.,1977,v.9,p.57.

137. Teale F.W.T. The ultraviolet fluorescence of proteins in neutral solution. Biochem.J., 1960,v.76,p.381-388.

138. Tonomura Y., Oosawa F. Molecular mechanism of contraction. • Ann.Rev.Biophys.Bioengineer.,1972,v.1,p.159-190.

139. Tonomura Y., Tokura S., Sekiya K., Imamura K. Influence of solvent composition on the molecular shape and the enzymic activity of myosin A. Arch.Biochem.Biophys.,1961,v.95, p.229-236.

140. Trinick Т., Offer G. Cross-linking of actin filaments by-heavy meromyosin. J.Mol.Biol.,1979,v.133,p.549-556.

141. Volkenstein M.V. Muscular contraction.-Biochim.Biophys.Acta, 1969,v.180,p.562-572.

142. Wakabayoshi T. Muscle contraction; its regulatory mechanism. Japan scientific societies press. Springer-Verlag. New-York,1980,p.79.

143. Watros Т., Glezen S., Seifert C., Katz A.M. Quercetin stimulation of calcium release from rabbit skeletal muscle sar-coplasmatic reticulum. Life Science,1983,v.32,p.213-219.

144. Weber S., Yong L. Fragmentation of bovine serum albumin by pepsin. I. The origin of the acid expansion of the albumin molecule. J.Biol.chem.,1964,v.239,p.1415-1423.

145. Weeds A.G. Light chains of myosin. Nature,1969,v.223,p. 1362.

146. Weeds A.G. The actin-activated adenosine triphosphatase activity of myosin. Biochem.Soc.Trans.,1977, v.61,p.701-725.

147. Weinbach E.C., Garbus J. The interaction of uncoupling phenols with mitochondria and with mitochondrial proteins. J.Biol.Chem.,1965,v.240,p.1811-1819.

148. Werber M.M., Szent-Gyorgyi A.J., Fasman G.L. Fluorescence studies on heavy meromyosin substrate interactions. -Biochemistry,1972,v.11,p.2872-2883.

149. Wolcott R.G., Boyer P.D. The reversal of the myosin and actomyosin ATPase reaction and the free energy of ATP binding to myosin. Biochem.Biophys.Res.Commun.,1974, v.57,p.709-716.

150. Yoshimura H., Koshin M. Binding of myosin subfragment 1 to j? -actin in the absence of nucleotide; evidence fordependence of F-actin concentration. J.Biochem.,1982, v.90,p.497-508.

151. Inoue A., Mechanism of actomyosin ATPase reaction. Biophysics, 1982, v. 22,p. 133-140.

152. Ebashi S. Contractile protein. Protein Nucleic Acid Enzyme ,1982,v.27,p.938-984.

153. Kawai K. Phosphorescence of proteins. Protein,Nucleic Acid,Enzyme,1974,v.19,p.164-171.

154. Yanagida D. Movement of actin and myosin among contraction of muscle. Protein,Nucleic Acid,Enzyme,1982p.33»165 тмуу АТР«*е ъцрс '9S2. V/. p. 133-140.166 Я J.z yy^f L li ftp. ШI18 -Ww&tfc. Jtp-Цууъv. >9, p. \&4-i7L