Исследование свойств бислойных липидных мембран, содержащих лизолипиды и холестерин тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат физико-математических наук Карпунин, Дмитрий Владимирович

• Карпунин, Дмитрий Владимирович
• кандидат физико-математических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Карпунин, Дмитрий Владимирович

Введение. 4.

Часть 1. Обзор литературы 8.

Глава 1. Общие сведения о биологических мембранах и липидах. 8.

Глава 2. Проводящие структуры в липидных мембранах. Липидные поры. 12.

Глава 3. Лизолипиды и холестерин. 28.

Глава 4. Взаимодействие X и Л с макрофагами как пример биологической активности смеси. 30.

Постановка задачи. 32.

Часть 2. Материалы и методы. 33.

Часть 3. Результаты. 51.

Глава 5. Смесь лизолипидов и холестерина, сбалансированная по СК (Л-Х смесь), формирует стабильную БЛМ. 51.

Глава 6. Измерение механических параметров мембран из лизолипидов и холестерина. 54.

Глава 7. Стабильные БЛМ, содержащие Л-Х смесь, способны к спонтанному формированию пор. 55.

Глава 8. Систематическое исследование проницаемости мембран, сформированных из смеси Л-Х плюс базовый липид. Типы активности. 56.

Глава 9. Проверка результатов по порообразованию, полученных на плоской БЛМ, на липосомах. 63.

Глава 10. Поры в липосомах обратимы (могут закрываться), как и в БЛМ. 71.

Глава 11. Теоретические оценки энергии липидной поры в мембране с небислойными компонентами. 74.

Глава 12. Возникновение неоднородностей латерального распределения липидов в мембранах с JI-X смесью. 79.

Глава 13. Поглощение липосом макрофагами линии IC-21. 82.

Обсуждение. 85.

Выводы. 92.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование свойств бислойных липидных мембран, содержащих лизолипиды и холестерин»

Лизолипиды и холестерин являются важными и широко распространенными компонентами биологических мембран, они активно участвуют во многих биологических процессах, ключевым этапом которых является изменение проницаемости мембран. Так, холестерин необходим для взаимодействия мембраны с некоторыми токсинами (Rossjohn , 1997; Billington, 2000), лизолипиды участвуют в формировании пор апоптозными белками Bel - семейства (Basanez, 1999;

Goonesinghe, 2005). Поэтому исследование механических свойств и механизмов f регуляции проницаемости (формирования пор, свойств пор) в мембранах, содержащих лизолипиды и холестерин, является одной из приоритетных задач биофизики мембран. Активность лизолипидов и холестерина связана в первую очередь с их небислойностью. Небислойные липиды - это липиды, имеющие существенно разные площади поперечного сечения на уровне гидрофильных голов и на уровне гидрофобных хвостов - ненулевую спонтанную кривизну (СК). Такие липиды in vitro могут формировать мембранные структуры большой кривизны (например, сферические мицеллы, образуемые лизолипидами, обладающими существенной положительной СК), однако в клетках они упакованы в плоский бислой. Известно, что стабильность такой упаковки обусловлена аддитивностью СК, бислой может быть создан целиком из небислойных компонентов, подобранных так, что средняя СК каждого монослоя близка к нулю. Как холестерин (отрицательная СК) так и лизолипиды (положительная СК) стремятся в области липидного бислоя, обладающие большой геометрической кривизной, а также в области дефектов упаковки липидов. Именно поэтому оба компонента активно участвуют в регуляции внедрения в мембрану белков и формировании белок-липидных пор и комплексов. Одним из важнейших аспектов поведения мембран с холестерином и лизолипидами, остающимся мало изученным, является взаимодействие холестерина и лизолипидов, которые, по сути, являются антагонистами (имеют противоположную по знаку СК). В модельных системах было показано, что они могут взаимно компенсировать свое действие на липидный бислой, а также склонны к образованию бимолекулярного комплекса, формируя водородную связь (Brockerhoff, 1974) (Рис. 1). Как такое сродство влияет на интегральные свойства мембраны (в т.ч. латеральную однородность), и порообразование остается невыясненным.

Рис. 1. Липиды с разной СК. «Циллиндры» - нулевая СК (диолеоилфосфатидилхолин), «обратные конусы» - положительная СК (лизолипиды), «конусы» отрицательная СК (холестерин). Холестерин и лизолипиды могут формировать между собой водородные связи. В соотношении 1:1 формируют стабильные липосомы.

Это особенно актуально для оценки поведения лизолипидов в биологических мембранах, где лизолипиды зачастую функционируют в присутствии большого количества холестерина. В последнее время наметилась тенденция к переоценке роли липидного бислоя в биологических процессах в рамках концепции активных мембран (Manneville; Ramaswamy, 2000). Ученые склоняются к тому, что липидная мембрана может быть не просто пассивным механическим барьером, а сложноорганизаванной многокомпонентной структурой, способной принимать t непосредственное участие в регуляции различных процессов. Активные мембраны (в отличие от активного ионного транспорта) определяются как мембраны, не находящиеся в положении термодинамического равновесия, например, содержащие источник внешнего неравновесного шума (Ramaswamy, 2000). Активная мембрана кроме минимума энергии соответствующего состоянию «однородный плоский равновесный бислой» имеет и другие, которые соответствуют состояниям «мембрана с порой», «мембрана с кластерами», и др. Возможность переходов из плоского однородного состояния в одно из других и обратно, с сохранением структурной целостности и служит критерием активности мембраны. Другим существенным свойством активных (как, впрочем, и неактивных) мембран является их стабильность во времени. Под стабильностью понимается сохранение некоторых свойств, таких как - структурная устойчивость, целостность липидного бислоя. В биологических системах мембраны далеки от равновесия т.к. содержат большое количество активных элементов и обмениваются содержимым. Присутствие небислойных липидов является практически необходимым условием активности: любая модификация плоского равновесного бислоя (добавка белка, формирование поры), значительно облегчена при соответствующей подстройке локальной кривизны мембраны. Моделирование активных, неравновесных мембран в искусственных системах началось сравнительно недавно, при этом в качестве неравновесного элемента используется белковая добавка. Таким образом, липидному бислою (как обычно, и при описании клеточных процессов) отводится пассивная роль (матрицы). Однако и чисто липидные мембраны «активны», например, вблизи точки фазового nepexofla(Antonov, 1980). Активность мембран может быть (по крайней мере, феноменологически) связана с обратимой порацией мембран. Ранее, для осуществления обратимой порации использовалось сильное-кратковременное внешнее воздействие (такое, как импульс электрического потенциала, повышение концентрации Са2+, и т.д.) поскольку даже у метастабильных мембран под натяжением, БЛМ, энергетический минимум достаточно глубок. Использовались также и небислойные компоненты, однако, их использование часто приводило к потере стабильности. Так, при добавлении в фосфолипидную мембрану более 5% лизолипидов они(мембраны) теряют стабильность(С11егпотогсШс, 1985). Обратимое порообразование в модельных системах наблюдалось редко и контролируется плохо. Тем не менее,использование небислойных липидов остается наиболее перспективным подходом т.к. именно они являются строительным материалом для стабильной поры. Мембраны, содержащие холестерин и лизолипиды в больших количествах, представляют собой идеальную модель для реализации различных типов активности. Противоположная спонтанная кривизна и существование молекулярного взаимодействия может содействовать стабилизации мембраны, а высокая степень небислойности поможет реализации активных свойств.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Карпунин, Дмитрий Владимирович

выводы

- Для формирования стабильного бислоя количество лизофосфатидилхолина (JI) не должно превышать количество холестерина (X) более чем на 10%; стабильность и большая изгибная жесткость такого бислоя обусловлены кластеризацией J1 и X.

Для активизации мембраны, содержащей JI-X смесь, а именно инициации латерального перераспределения компонентов и формирования пор при сохранении общей структурной стабильности мембраны, достаточно малых вариаций соотношения JI и X; порообразованием можно управлять используя модификаторы липидного состава мембраны (циклодекстрин, альбумин).

- Наличие 60 и более мольных процентов JI-X смеси в липидной мембране обеспечивает формирование стабильной липидной поры с заданной структурой; структура определяется упаковкой X и JI в кромку поры. Липосомы, сформированные из Л-Х смеси, обладают особыми свойствами (такими как возможность замены содержимого при физиологических температурах, селективное поглощение липидного материала липосом фагоцитами), которые могут быть использованы при разработке новых систем доставки лекарств.

В заключение считаю своим долгом выразить глубокую благодарность своему научному руководителю Вадиму Александровичу Фролову. Так же хочу поблагодарить Сергея Александровича Акимова за помощь в выполнении теоретической части работы, Павла Викторовича Башкирова за помощь в определении изгибного модуля мембран, Владимира Анатольевича Лизунова за создание программного обеспечения, использованного в работе. Хочу выразить благодарность Петру Ивановичу Кузьмину, Юрию Александровичу Чизмаджеву, Константину Владимировичу Павлову за активную помощь; плодотворные обсуждения с ними помогли в разрешении возникавших в ходе работы проблем. Так же хочу выразить благодарность Джошу Циммербергу (Joshua Zimmerberg), в лаборатории которого была выполнена часть работы во время визита в США.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Карпунин, Дмитрий Владимирович, 2005 год

1. Абидор И.Г., Аракелян В.Б., Пастушенко В.Ф., Тарасевич М.Р., Черномордик Л.В., Чизмаджев Ю.А. Электрический пробой бислойных липидных мембран. ДАН СССР, 1978, Т. 240, №3, С. 733-736.

2. Абидор И.Г., Черномордик Л.В., Сухарев С.И., Чизмаджев Ю.А. Обратимый электрический пробой бислойных липидных мембран, модифицированных ураниловыми ионами. Электрохимия, 1981, Т. 17, В. 12, С. 1852-1857.

3. Дерягин Б.В., Гутоп Ю.В. Теория разрушения (прорыва) свободных пленок. Коллоидный журнал, 1962, Т 24, С. 431-437.

4. Дунина-Барковская А. Я., Карпунин Д. В., Лизунов В. А., Фролов В. А. Макрофаги линии IC-21 как модель для изучения электрофизиологии эндоцитоза. Биологические мембраны, 2002, том 20. № 4, 322-332.

5. Карпунин Д.В., Акимов С.А., Фролов В.А. Формирование пор в плоских липидных мембранах, содержащих лизолипиды и холестерин. Биологические мембраны, 2005, том 22, № 5, 429-432.6. Ландау и Лифшиц, 1987

6. Петров В.В., Мольнар А.А., Иванов А.С., Предводителев Д.А., Антонов В.Ф. 1978. Появление одиночных каналов ионной проводимости внемодифицированных бислойных мембранах при температуре фазового перехода. ДАН СССР, Т. 239, № 5, С. 1245-1247.

7. Сухарев С.И., Черномордик Л.В., Абидор И.Г. Обратимый электрический пробой холестеринсодержащих бислойных липидных мембран, модифицированных голотурином А. Биофизика, 1983, Т. 28, В. 3, С. 423-426

8. Ходоров Б.И., Пеганов Э.М. О механизме изменений ионной проницаемости мембраны перехвата Ранвье при генерации гиперполяризационных ответов. ДАН СССР 1969, Т. 185. С. 1189-1192.

9. Черномордик JI.B., Абидор И.Г., Аракелян В.Б., Баскаков В.А., Тарасевич М.Р. Влияние «стрессовых» воздействий на электрические свойства БЛМ. Биофизика, 1978, Т 23Ю В. 5, С. 806-812.

10. П.Чизмаджев Ю.А., Черномордик Л.В., Пастушенко В.Ф., Абидор И.Г. Электрический пробой бислойных липидных мембран. Биофизика мембран, 1982, Т. 2. Ионные каналы и их модели, Итоги науки и техники, ВИНИТИ, АН СССР, Москва.

11. Abidor I.G., Chernomordik L.V., Sukharev S.I., Chizmadzhev Yu.A. 1982. The Reversible Electrical Breakdown of Bilayer Lipid Membranes Modified by Uranyl Ions. Bioelectrochem. Bioenerg., V. 9, P. 141-148.

12. Agre Peter, King Landon S., Yasui Masato, Guggino Wm В., Ottersen Ole Petter, Fujiyoshi Yoshinori, Engel Andreas and Nielsen Soren Aquaporin water channels from atomic structure to clinical medicine Journal of Physiology (2002), 542.1, pp. 3-16

13. Akashi K., Miyata H., Itoh H., Kinosita, K. Jr. Preparation of Giant Kiposomes in Physiological Conditions and Their Characterization under Optical Microscope. Biophysical Journal Vol. 71 (1996) 3242-3250.

14. Anderluh Gregor and Macek Peter Dissecting the Actinoporin Pore-Forming Mechanism Structure, Vol. 11, November, 2003

15. Anderson Thomas G., Tan Anmin, Ganz Peter, and Seelig Joachim Calorimetric Measurement of Phospholipid Interaction with Methyl-P-Cyclodextrin Biochemistry 2004,43,2251-2261

16. Antonov V.F., Petrov V.V., Molnar A.A., Predvoditelev D.A., Ivanov A.S. 1980. Nature, Vol. 283, P. 585.

17. Bagatolli L.A., Parasassi Т., Gratton E. Giant phospholipid vesicles: comparison among the whole lipid sample characteristics using different preparation methods. A two photon microscopy study. Chemistry and Physics of Lipids 105 (2000) 135-147.

18. Bailey Austin L. and Cullis Pieter R. Membrane Fusion with Cationic Liposomes: Effects of Target Membrane Lipid Composition Biochemistry 1997, 36, 16281634

19. Benz R., Beckers F., Zimmermann U. Reversible electrical breakdown of Lipid Bilayer Membranes: a charge-pulse relaxation study. J. Membr. Biol., 1979, V. 48, P. 181-204.

20. Benz R., Conti F. Reversible electrical breakdown of squid giant axon membrane Bioch. et Biophys. Acta, 645 (1981) 115-123.

21. Benz R., Zimmermann U. The resealing process of lipid bilayers after reversible electrical breakdown. BBA, 1981, V. 640, P. 169-178.

22. Billington Stephen J., Jost B. Helen, Songer J. Glenn Thiol-activated cytolysins: structure, function and role in pathogenesis FEMS Microbiology Letters 182 (2000)197-205

23. Bonnafous Pierre and Stegmann Toon Membrane Perturbation and Fusion Pore Formation in Influenza Hemagglutinin-mediated Membrane Fusion THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol. 275, No. 9, Issue of March 3, pp. 6160-6166,2000

24. Brockerhoff H. Model of interaction of polar lipids, cholesterol, and proteins in biological membranes. Lipids. 1974 Sep;9(9):645-50.

25. Chang D.C. Structure and Dynamics of Membrane Pores. 1992. In "Guide to Electroporation and Electrofusion", Chang D.C., Chassy B.M., Saunders J.A., Sowers A.E. (eds.), Academic Press, New York, P. 9-27.

26. Chernomordik L.V., Kozlov M.M., Melikyan G.B., Abidor I.G., Markin V.S., Chizmadzhev Yu.A. The shape of lipid molecules and monolayer membrane fusion. BBA, 1985, V. 812, P. 643-655.

27. Chernomordik L.V., Melikyan G.B., Dubrovina N.I., Abidor I.G., Chizmadzhev Yu.A. 1984. Solvent-Free Bilayers from Squalene Solutions of Phospholipids. Bioelectrochem. Bioenerg., V. 12, P. 155-166.

28. Chernomordik L.V., Sukharev S.I., Popov S.V., Pastushenko V.F., Sokirko A.V., Abidor I.G., Chizmadzhev Y.A. The Electrical Breakdown of Cell and Lipid Membranes: the Similarity of Phenomenologies. BBA, 1987, V. 902, P. 360-373.

29. Chonn Arcadio, Cullis Pieter R. Recent advances in liposome technologies and their applications for systemic gene delivery Advanced Drug Delivery Reviews 30(1998) 73-83

30. Choy Patric C., et all Biochem. Cell Biol. 82,212-224,2004

31. Christian Airnee E., Haynes M. Page, Phillips Michael C., and Rothblat George H. Use of cyclodextrins for manipulating cellular cholesterol content. Journal of Lipid Research Volume 38, 1997 2264-2272

32. Colley C. S., Kazarian S. G., Weinberg P. D., Lever M. J. Spectroscopic Imaging of Arteries and Atherosclerotic Plaques Biopolymers, Vol. 74, 328-335 (2004)

33. Dressier V., Schwister K., Haest C.W.M., Deuticke B. Dielectric breakdown of the erythrocyte membrane enhances transbilayer mobility of phospholipids. BBA, 1983, V. 732, P. 304-307.

34. Fattal Elias, Couvreur Patrick, Dubernet Catherine "Smart" delivery of antisense oligonucleotides by anionic pH-sensitive liposomes Advanced Drug Delivery Reviews 56 (2004) 931- 946

35. Frank, F. C. 1958. On the theory of liquid crystals. Discuss. Faraday Soc. 25:1928.

36. Frolov Vadim A., Lizunov Vladimir A., Dunina-Barkovskaya Antonina Ya., Samsonov Andrey V., and Zimmerberg Joshua Shape bistability of a membrane neck: A toggle switch to control vesicle content release PNAS July 22, 2003, vol. 100, no. 15, 8698-8703.

37. Glaser Ralf W., Leikin Sergei L., Chemomordik Leonid V., Pastushenko Vasili F. and Sokirko Artjom I. Reversible electrical breakdown of lipid bilayes: formation and evolution of pores. Biochimica et biophysica Acta 940 (1988) 275-287.

38. Glass Christopher K., Witztum Joseph L., Atherosclerosis: The Road Ahead, Cell, Vol. 104, 5003-516, February 23, 2001.

39. Goonesinghe Alexander, Mundy Elizabeth S., Smith Melanie, Khosravi-Far Roya, Martinou Jean-Claude and Esposti Mauro D. Pro-apoptotic Bid induces membrane perturbation by inserting selected lysolipids into the bilayer Biochem. J. (2005) 387, 109-118

40. Hafez Ismail M., Ansell Steven and Cullis Pieter R. Tunable pH-Sensitive Liposomes Composed of Mixtures of Cationic and Anionic Lipids Biophysical Journal Volume 79 September 2000 1438-1446

41. Helfrich, W. 1973. Elastic properties of lipid bilayers: theory and possible experiments. Z. Naturforsch. 28c:693-703.

42. Hill A. V., Solandt D.Y. The measurement of "accomodation" in nerve. Proc. Roy. Society, London, ser. B, 1936, V. 119, P. 355-379.

43. Ickenstein Ludger M., Arfvidsson Maria C., Needham David, Mayer Lawrence D., Edwards Katarina Disc formation in cholesterol-free liposomes during phase transition Biochimica et Biophysica Acta 1614 (2003) 135- 138

44. Jensen Morten A., Mouritsen Ole G. Lipids do influence protein function—the hydrophobic matching hypothesis revisited Biochimica et Biophysica Acta 1666 (2004) 205- 226

45. Kim Т. H., Park T. G. Critical effect of freezing/freeze-drying on sustained release of FITC-dextran encapsulated within PLGA microspheres International Journal of Pharmaceutics 271 (2004) 207-214.

46. Kinozita K., Tsong T.Y. Formation and resealing of pores of controlled sizes in human erythrocyte membrane. Nature, 1977, V. 268, P. 438-441.

47. Kinozita K., Tsong T.Y. Haemolysis of human erythrocytes by a transient electric field. Proc. Natn. Acad. Sci. USA, 1977, V. 74, P. 1923-1927.

48. Kinozita K., Tsong T.Y. Voltage-induced pore formation and haemolysis of human erythrocytes. BBA, 1977, V. 471, P. 227-242.

49. Korlach J., et all Characterization of lipid bilayer phases by confocal microscopy and fluorescence correlation spectroscopy. Proc. Natl. Acad. Sci. Vol. 96: 84618466 (1999).

50. Kozlov M., Leikin S., and Rand R. 1994. Bending, hydration and interstitial energies quantitatively account for the hexagonal-lamellarhexagonal reentrant phase-transition in dioleoylphosphatidylethanolamine. Biophys. J. 67:1603-1611.

51. Kritharides L, Christian A, Stoudt G, Morel D, Rothblat G. Cholesterol metabolism and efflux in human THP-1 macrophages. Arterioscler Thromb Vase Biol 18:1589-1599, 1998.

52. Kroth HS. Macrophage foam cells and atherosclerosis. Front. Biosci. 2001; 6: D429-55.

53. Kuzmin Peter I., Akimov Sergey A., Chizinadzhev Yuri A., Zimmerberg Joshua, and Cohen Fredric S. Line Tension and Interaction Energies of Membrane Rafts Calculated from Lipid Splay and Tilt Biophysical Journal Volume 88 February 2005 1120-1133

54. Lang Shenhui and Palmer Michael Characterization of Streptococcus agalactiae CAMP Factor as a Pore-forming Toxin THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol. 278, No. 40, Issue of October 3, pp. 38167-38173, 2003

55. Leikin S., Kozlov M. M., Fuller N. L., and Rand R. P. 1996. Measured effects of diacylglycerol on structural and elastic properties of phospholipid membranes. Biophys. J. 71:2623-2632.

56. Libby, P., Ridker, P.M. & Maseri, A. Inflammation and atherosclerosis. Circulation 105,1135-1143 (2002).

57. Linton MacRae F and Fazio Sergio, Macrophages, inflammation, and atherosclerosis, International Jiurnal of Obesity (2003) 27, S35-S40.

58. Manneville J.-B., Bassereau P., Ramaswamy S., and Prost J. Active membrane fluctuations studied by micropipet aspiration PHYSICAL REVIEW E, VOLUME 64, 021908

59. Maurer Norbert, Fenske David F. and Cullis Pieter R. Developments in liposomal drug delivery systems, Expert Opin. Biol. Ther. (2001) 1(6): 923-947

60. Melikov Kamran C., Frolov Vadim A., Shcherbakov Arseniy, Samsonov Andrey

61. V., Chizmadzhev Yury A., and Chernomordik Leonid V. Voltage-Induced Nonconductive Pre-Pores and Metastable Single Pores in Unmodified Planar Lipid Bilayer Biophysical Journal Volume 80 April 2001 1829-1836.

62. Melikov К. Ch., Samsonov A. V., Pirutin S. K., Frolov V. A. Study of Conductance Changes of Bilayer Lipid Membrane Indused by Electric Field. Membr. Cell Biol., 1999, Vol. 13(1), 121-130.

63. Mouritsen O.G., Zucherman M.J., Model of interfacial melting, Phys. Rev. Lett. 58 (1987) 389-392.

64. Mueller P., Rudin D., Tien H., Wescott W. Reconstitution of Cell Membrane Structure in vitro and its Transformation into an Excitable System. Nature 4832 (1962) 979-980

65. Needham D., Nunn R. Elastic deformation and failure of lipid bilayer membranes containing cholesterol. Biophys. J. 58: 997-1009, 1990

66. Needham David, Anyarambhatla Gopal, Kong Garheng, and Dewhirst Mark W. A New Temperature-sensitive Liposome for Use with Mild Hyperthermia: Characterization and Testing in a Human Tumor Xenograft Model 1 CANCER RESEARCH 60,1197-1201, March 1, 2000

67. Neufeld Edward В., Cooney Adele M., Pitha Josef, Dawidowicz Eliezar A., Dwyer Nancy K., Pentchev Peter G., and Blanchette-Mackie E. Joan Intracellular

68. Trafficking of Cholesterol Monitored with a Cyclodextrin THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol. 271, No. 35, Issue of August 30, pp. 2160421613,1996

69. NISHIJO Juziro, MORIYAMA Shiho and SHIOTA Sachiko Interactions of Cholesterol with Cyclodextrins in Aqueous Solution Chem. Pharm. Bull. 51(11) 1253—1257 (2003)

70. Pfluger U.D. Physiology des Electronus. Berlin, Hirsvald, 1859

71. Qiao H., Armstrong R. Т., Melikyan G. В., Cohen F. S., White J. M. (1999) Mol. Biol, of the Cell 10,2759-2769.

72. Radhakrishnan A., McConnel H. Condensed Complexess of Cholesterol and Phospholipids. Biophys. J. 77: 1507-1517,1999

73. Ramaswamy Sriram, Toner John, and Prost Jacques Nonequilibrium Fluctuations, Traveling Waves, and Instabilities in Active Membranes PHYSICAL REVIEW LETTERS 10 APRIL 2000 VOLUME 84, NUMBER 15

74. Ramsammy Leslie S. and Brockerhoff Hans Lysophosphatidylcholine-Cholesterol Complex The Journal of Biological Chemistry Vol. 257, No. 7, Issue of April 10, pp. 3570-3574. 1982

75. Ramsammy Leslie S., et all Chemistry and Physics of Lipids, 32 (1983), 83-89

76. Ross R. Atherosclerosis -115-126.an inflammatory disease. N Engl J Med 1999; 340:

77. Ross R. The pathogenesis of atherosclerosis: a perspective for the 1990s. Nature 362:801-809, 1993.

78. Rossjohn J, Feil SC, McKinstry WJ, Tweten RK, Parker MW Structure of a cholesterol-binding, thiol-activated cytolysin and a model of its membrane form. Cell 1997 May 30;89(5):685-92

79. Schneider Hans-Jorg, Hacket Frank, and Rudiger Volker NMR Studies of Cyclodextrins and Cyclodextrin Complexes Chem. Rev. 1998, 98, 1755-1785

80. Sale A.J.H., Hamilton W.A. Effects of high electric fields on microorganisms. I. Killing of bacteria and yeast. BBA, 1967, V. 148, P. 781-788.

81. Semple Sean C., Chonn Arcadio, and Cullis Pieter R. Influence of Cholesterol on the Association of Plasma Proteins with Liposomes Biochemistry 1996, 35, 25212525

82. Semple Sean С., Chonn Arcadio, Cullis Pieter R. Interactions of liposomes and lipid-based carrier systems with blood proteins: Relation to clearance behaviour in vivo Advanced Drug Delivery Reviews 32 (1998) 3-17

83. Siskind L.J. and Colombini M. The lipids C2- and Ci6- ceramide form large stable channels. The J. of Biological Chem., 2000, Vol. 275, No. 49, P. 38640-38644.

84. Steinberg D. Low density lipoprotein oxidation and its pathobiological . significance. J Biol Chem 1997;272:20963-6.

85. Stampfli R., Willi M. Membrane potential of a Ranvier node measured after electrical destruction of its membrane. Experientia, 1957, V. 13, P. 297.

86. Szejtli Jozsef Introduction and General Overview of Cyclodextrin Chemistry Chem. Rev. 1998, 98,1743-1753

87. Tabas Ira, Consequences of cellular cholesterol accumulation: basic concepts and physiological implications, J. Clin. Invest. 110, 905-911 (2002).

88. Takahashi Kiyoshi, et all Med. Electron. Microsc. (2002) 35, 179-203

89. Tall Alan R., Costet Philippe, and Wang Nan Regulation and mechanisms of macrophage cholesterol efflux J. Clin. Invest. 110:899-904 (2002).

90. Teissie J., Tsong T. Electric Field Induced Transient Pores in Phospholipid Bilayer Vesicles. Biochemistry (1981) 20: 1548-1554

91. Tien H.T. Bilayer Lipid Membrane (BLM). Teory and Practice. New York, 1974.

92. Tien H. Black Lipid Membranes at Bifaces Formation characteristics, optical and some thermidinamical properties 125s-143s

93. Tsamaloukas Alekos, Szadkowska Halina, Slotte Peter J., and Heerklotz Heiko Interactions of Cholesterol with Lipid Membranes and Cyclodextrin Characterized by Calorimetry Biophysical Journal Volume 89 August 2005 1109— 1119

94. Williams E.J., Bradley J. Steady-state membrane hyperpolarization by large applied currents in Nitella translucens. Biophys. J., 1968, V. 1, P. 145-147.

95. Xu X., London E. The Effect of Sterol structure on Membrane Lipid Domains Reveals How Cholesterol Can Induce Lipid Domain Formation. Biochemistry 2000 Vol. 39(5): 843-849