Исследование структурно-функциональных свойств молекул гемоглобина человека, модифицированных некоторыми производными декстрана и полиэтиленгликолем тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Савостин, Владислав Сергеевич

• Савостин, Владислав Сергеевич
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Савостин, Владислав Сергеевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Структура и! некоторые физико-химические свойства молекул ге- 11 моглобина человека

1.2. Проблема создания искусственных кровезаменителей на основе 20 растворов гемоглобина человека

1.3. Структура, физико-химические свойства низкомолекулярного 26 декстрана и применение препаратов на его основе в биологии и медицине

1.4. Структура, физико-химические свойства полиэтиленгликоля и его использование в биологии и медицине

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования

2.1. Объект исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Получение растворов гемоглобина человека

2.2.2. Модификация гемоглобина нативным декстраном

2.2.3. Получение диальдегиддекстрана из реополиглюкина

2.2.4. Синтез конъюгата диальдегиддекстран-гемоглобин

2.2.5. Модификация гемоглобина полиэтиленгликолем

2.2.6. Гель-хроматография растворов гемоглобина человека

2.2.7. Определение количества полисахарида в конъюгате гемоглобин- 37 диальдегиддекстран

2.2.8. Определение количества белка в конъюгате гемоглобин- 38 диальдегиддекстран

2.2.9. Регистрация электронных спектров поглощения растворов на- 38 тивного и модифицированного гемоглобина человека

2.2.10. Определение содержания основных лигандных форм гемогло- 38 бина в растворе

2.2.11. Определение количественного содержания сульфгидрильных 39 групп в растворе нативного и модифицированного гемоглобина методом спектрофотометрического титрования

2.2.12. Диск-электрофорез гемоглобина в полиакриламидном геле

2.2.13. Определение количества ионогенных групп методом кислотно- 41 основного титрования

2.2.14. Модификация гемоглобина гуанидин-гидрохлоридом

2.2.15. Термостатирование растворов гемоглобина

2.2.16. Определение интенсивности светорассеяния растворов гемо- 43 глобина

2.2.17. Создание компьютерных моделей комплексов гемоглобин- 43 диальдегиддекстран и расчет некоторых параметров структуры моле- -кул нативного и модифицированного гемопротеида

2.2.18. Статистическая обработка экспериментальных данных 45'

ГЛАВА 3. Физико-химические свойства и структурные характеристи- 46 ки молекул гемоглобина человека, модифицированного реополиглю-кином и диальдегидцекстраном

3.1. Гель-хроматографические свойства молекул гемоглобина, моди- 46 фицированного реополиглюкином и диальдегидцекстраном

3.2. Влияние реополиглюкина и> диальдегидцекстрана на содержание 53 сульфгидрильных групп в растворе гемоглобина человека

3.3. Влияние различных препаратов декстрана на электрофоретиче- 54 ские свойства,гемоглобина человека

3.4. Кислотно-основные свойства молекул гемоглобина человека, мо- 61 дифицированного реополиглюкином и диальдегидцекстраном

3.5. Спектральные характеристики растворов нативного и модифици- 66 рованного гемопротеида

ГЛАВА 4. Влияние реополиглюкина и диальдегидцекстрана на устойчивость молекул гемоглобина человека к действию денатурирующих факторов

4.1. Влияние реополиглюкина и диальдегиддекстрана на термоста- 73 бильность молекул гемоглобина человека

4.2. Электронные спектры поглощения растворов нативного и моди- 80 фицированного соединениями декстрана гемоглобина человека в присутствии гуанидин-гидрохлорида

4.3. Исследование влияния гуанидин-гидрохлорида и температуры на 90 интенсивность светорассеяния растворов нативного и конъюгирован-ного с диальдегиддекстраном гемоглобина человека

ГЛАВА 5. Создание и анализ компьютерных моделей комплексов ге- 98 моглобин-диальдегиддекстран

5.1. Построение пространственных моделей молекул диальдегиддек- 98 страна и гемоглобина

5.2. Создание компьютерных моделей комплексов гемоглобин- 102 диальдеги ддекстран

5.3. Изучение влияния диальдегиддекстрана на структуру и свойства 107 молекул гемоглобина человека с использованием компьютерных моделей их комплексов

ГЛАВА 6. Исследование влияния полиэтиленгликоля на физикохимические свойства и стабильность молекул гемоглобина человека

6.1. Влияние полиэтиленгликоля на структурные характеристики и 119 физико-химические свойства молекул гемоглобина

6.2. Влияние полиэтиленгликоля на стабильность молекул гемоглоби- 126 на человека

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование структурно-функциональных свойств молекул гемоглобина человека, модифицированных некоторыми производными декстрана и полиэтиленгликолем»

Кровь является уникальной биологической средой, способной обеспечивать и поддерживать гомеостаз организма человека.

В настоящее время в связи с увеличением частоты возникновения чрезвычайных ситуаций: природных катаклизмов (землетрясения, цунами), террористических актов, автомобильных катастроф, а также ростом числа операций по пересадке органов и тканей, постоянно возрастает потребность в трансфузии цельной крови- и её отдельных компонентов (Б.А. Барышев, 2005). Недостаток донорской крови и наличие ряда ограничений по её использованию: опасность передачи при переливании бактериальных и вирусных инфекций (S.M. Fakhry, G.F. Sheldon, 1995; G.B. Schreiber et al., 1996), возможность-несовместимости донорской крови и крови реципиента по антигенному составу, короткие сроки хранения, требуют создания искусственных кровезаменителей (M.G. Scott et al., 1997; R.M. Winslow, 2002).

Важнейшим компонентом крови является гемоглобин, который обеспечивает полноценное снабжение организма человека кислородом, что приобретает особую значимость при развитии различных патологических состояний.

В связи с этим весьма актуальным является разработка кислородпере-носящих растворов на основе гемоглобина, химически модифицированного некоторыми органическими молекулами, защищающими его от разного рода внешних воздействий (Н.П. Кузнецова и соавт., 2002; С. Jin et al., 2004; P.W. Buehler et al., 2006). Несмотря на определенные успехи в этой области, необходимо продолжать поиск химических соединений и способов-модификации молекул гемоглобина с целью эффективной регуляции свойств гемопротеида и снижения степени отрицательных эффектов введения растворов гембелка в организм человека (Б.А. Барышев, 2005).

В качестве таких веществ нами были выбраны представители высокомолекулярных полианионов, производные декстрана - реополиглюкин (РП) и диальдегиддекстран (ДАД), а также полиэтиленгликоль (ПЭГ), нашедшие применение в молекулярной биологии и медицине (И.П. Гладышева и соавт., 2001; A.B. Максименко и соавт., 2001; И.Н. Топчиева и соавт., 1998; A.S. Morar et al., 2006).

Таким рбразом, проведение экспериментов по поиску соединений, эффективно модулирующих функциональную активность гемоглобина, и изучение влияния данных веществ на структурно-функциональные свойства молекул гембелка имеют важное теоретическое и практическое значение.

Цель и задачи диссертационной работы. Целью настоящей работы явилось исследование структурно-функциональных свойств гемоглобина человека, модифицированного препаратами на основе нативного декстрана (рео-полиглюкин), его окисленного производного (диальдегиддекстран) и поли-этиленгликолем.

В связи» с этим перед нами стояли следующие задачи:

1. Исследовать физико-химические характеристики молекул гемоглобина человека, модифицированных полиэтиленгликолем и препаратами на основе декстрана.

2. Изучить механизмы взаимодействия молекул гемоглобина человека с реополиглюкином, диальдегиддекстраном и полиэтиленгликолем.

3. Исследовать термостабильность и химическую устойчивость молекул модифицированного гемоглобина человека.

4. Построить и проанализировать компьютерные модели диальде-гиддекстрана и его комплексов с гемоглобином человека.

Научная новизна. Работа является комплексным исследованием, посвященным анализу влияния реополиглюкина, диальдегиддекстрана. и поли-этиленгликоля на структурно-функциональные свойства интактных, термостатированных и модифицированных гуанидин-гидрохлоридом молекул гемоглобина человека.

Выявлены оптимальные условия для связывания гемоглобина с ДАД, позволяющие получать модифицированные образцы гемоглобина с определенными размерами, молекулярными массами и физико-химическими свойствами. Изучены механизмы взаимодействия молекул гемоглобина человека с реополиглюкином и ДАД.

Установлена возможность формирования комплекса гемоглобина человека с полиэтиленгликолем при создании повышенного давления в реакционной среде.

Обнаружено, что производные декстрана повышают устойчивость белковых молекул к денатурирующим факторам, что позволяет относить данные соединения к весьма перспективным агентам для модификации гемопротеида с целью создания искусственных кровезаменителей.

Созданы пространственные модели молекулы ДАД, комплексов гемо-глобин-ДАД I и II типов. Установлены номера аминокислотных остатков глобина, с наибольшей вероятностью участвующих в формировании связей с полисахаридом. Методом молекулярной динамики показано сохранение конформационной лабильности гемовой группы и отдельных субъединиц относительно друг друга, что свидетельствует о способности конъюгатов гемоглобин-ДАД к обратимой оксигенации.

Разработана схема процессов, протекающих в растворах интактных, термостатированных и модифицированных гуанидин-гидрохлоридом молекул гемоглобина человека при воздействии реополиглюкина, диальдегиддек-страна и полиэтиленгликоля, позволяющая проследить взаимосвязь между изменениями в структуре гемопротеида и проявлением его физико-химических свойств.

Практическая значимость. Научные положения диссертационной работы расширяют и углубляют современные представления» об особенностях структурно-функционального состояния гемоглобина человека1 в условиях различного микроокружения.

Результаты изучения физико-химических свойств препаратов гемоглобина в присутствии реополиглюкина, в комплексах с ПЭГ и химически модифицированного гембелка (различные комплексы гемоглобин-ДАД) необходимо принимать во внимание при рассмотрении вопросов, связанных с созданием искусственных кровезаменителей.

Экспериментальные данные по исследованию механизмов взаимодействия молекул гемоглобина человека с реополиглюкином, ДАД и ПЭГ могут быть использованы специалистами, работающими в области молекулярной биологии и биофизики, а также лицами, занимающимися синтезом новых лекарственных средств и биологически активных молекул, что позволит более успешно решать проблемы стабилизации биологических свойств и функций изучаемых соединений.

Материалы работы используются в учебном процессе кафедры, биофизики и биотехнологии Воронежского государственного университета при проведении практикумов, выполнении дипломных и магистерских работ студентами.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на 8 Международной конференции по химии и физикохимии оли-гомеров «Олигомеры - 2002» (Черноголовка, 2002); VII Пущинской-школе-конференции молодых ученых «Биология — наука XXI века» (Пущино, 2003); III- Съезде биофизиков России (Воронеж, 2004); XIX Съезде физиологов России (Екатеринбург, 2004); Всероссийском симпозиуме «Хроматография и хроматографические приборы» (Москва, 2004); VIII Международной научно-экологической конференции «Актуальные проблемы сохранения устойчивости живых систем» (Белгород, 2004); научно-практической конференции «Скорая медицинская помощь: реальность и перспективы» (Воронеж, 2006); Научных сессиях сотрудников Воронежского госуниверситета (Воронеж, 2005, 2006).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 статей и 6 тезисов.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Диальдегиддекстран является эффективным модулятором структурно-функциональных свойств молекул гемоглобина человека и способен значительно повышать устойчивость гемопротеида к действию физических и химических денатурирующих факторов.

2. Полиэтиленгликоль при высоком давлении в растворе образует комплексы с гемоглобином человека, увеличивает компактность белковой глобулы и понижает термочувствительность молекул гемопротеида.

3. Компьютерные модели трехмерной пространственной структуры декстрана, диальдегиддекстрана, комплексов гемоглобин-диальдегиддекстран I и II типов.

4. Схема процессов, протекающих в растворах интактных, термостатированных и модифицированных гуанидин-гидрохлоридом молекул гемоглобина человека в присутствии реополиглюкина, диальдегиддекстрана и полиэтиленгликоля.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа включает 151 страницу машинописного текста, 9 таблиц, 45 рисунков. Состоит из «Введения», 6 глав, «Заключения» и «Выводов». В списке цитируемой литературы 155 работ, из них 78 отечественных и 77 зарубежных.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Савостин, Владислав Сергеевич

ВЫВОДЫ

1. Показано, что инкубирование гемоглобина с реополиглюкином в молярном соотношении 1:4 индуцирует конформационные перестройки белковых молекул, но не приводит к образованию прочных ковалентных связей между гемопротеидом и полисахаридом.

2. Установлено, что оптимальными условиями для связывания гемоглобина с, ДАД являются: величина рН среды, равная 7,4; температура инкубации - 37 °С; время инкубации - 3 ч;. степень окисления полисахарида — 10 %. Структура образующихся комплексов; гемоглобин-ДАД зависит от исходного соотношения белок : полисахарид в реакционной среде.

3: При формировании комплекса гемоглобин-ДАД I типа с молекулярной массой 103,4 кДа полисахарид образует многоточечные ковалентные связи со всеми 4 субъединицами: молекулы гемопротеида, в: которых участвуют 8 аминокислотных остатков (6 лизина и 2 гистидина).

4. Образование высокомолекулярных комплексов гемоглобин-ДАД' IIтипа (225;4 кДа) происходит с участием 5 аминокислотных остатков (4 лизина и 1 гистидина), что приводит к жесткому пространственному фиксированию 2 субъединиц в тетрамерной молекуле гемоглобина относительно друг друга, в то время как две другие субъединицы оказываются не связанными с декст-раном.

5. Инкубирование гемоглобина человека с реополиглюкином не вызывает изменения процентного соотношения лигандных форм гембелка. Формирование комлексов^гемоглобин-ДАДЕ и II типов приводит к снижению сродства ; гемопротеида: к кислороду и увеличению содержания дезоксиформы гембелка в растворе на12,7 и 6,8 % соответственно.

6. Обнаружено^ что все препараты декстрана (реополиглюкин и ДАД) увеличивают термостабильность молекул гемоглобина человека. Наибольший защитный эффект на белковую глобулу при высоких температурах оказывает ДАД, особенно в комплексе I типа, повышая температуру необратимого денатурационного перехода гемопротеида от 60 до 80 °С.

7. Выявлено, что стабилизирующее действие реополиглюкина и ДАД в комплексе II типа наблюдается при сравнительно малых концентрациях гуа-нидин-гидрохлорида (0,1 моль/л), а ДАД в комплексе I типа повышает устойчивость гембелка к более высоким концентрациям денатурирующего агента (1 моль/л).

8. Созданы пространственные модели молекулы ДАД, комплексов гемо-глобин-ДАД I и II типов. Установлены номера аминокислотных остатков глобина, с наибольшей вероятностью участвующих в формировании связей с полисахаридом.

9. С помощью компьютерного моделирования комплексов гемоглобин-ДАДI и II типов показано, что при модификации гембелка диальдегидцекст-раном сохраняется конформационная лабильность гемовой группы и отдельных субъединиц относительно друг друга. Это свидетельствует о способности комплексов гемоглобин-ДАД к обратимой оксигенации, а, следовательно, к эффективной транспортировке кислорода.

10. Показано, что при повышенном давлении в реакционной среде ПЭГ способен образовывать комплексы с гемоглобином человека, что приводит к конформационным изменениям белковой глобулы гемопротеида, затрагивающим гемовый компонент, но валентное состояние атома железа в геме и степень насыщения гемоглобина кислородом при этом не изменяются. з

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С помощью методов гель-хроматографии, диск-электрофореза, протео-литического титрования, абсорбционной спектрофотометрии, определения количества 8Н-групп, соотношения основных лигандных форм гембелка и интенсивности светорассеяния в растворах гемоглобина, а также компьютерного моделирования исследовано влияние препаратов на основе нативного декстрана (реополиглюкин), его окисленного производного (диальдегиддек-стран) и полиэтиленгликоля на структурно-функциональные свойства гемоглобина человека.

В ходе выполнения работы были подобраны условия для наилучшего взаимодействия гемоглобина и изучаемых модификаторов.

Показано, что инкубирование гемоглобина с реополиглюкином в молярном соотношении 1:4 индуцирует конформационные перестройки белковых молекул, но не приводит к образованию прочных ковалентных связей между гемопротеидом и полисахаридом. Следовательно, связывание физиологически активных веществ с декстранами требует предварительного перевода полисахарида в химически активную форму, например, путем получения диальдегиддекстрана.

В связи с этим нами были установлены оптимальные условия химического синтеза комплексов гемоглобин-ДАД, которые позволили получить конъюгаты с различным соотношением исходных компонентов и различной молекулярной массой. Комплекс с молекулярной массой 103,4 кДа мы обозначили как комплекс I типа, а более высокомолекулярный (225,4 кДа) - как конъюгат II типа.

Помимо представителей полигидроксисоединений, мы использовали для модификации молекулы гемоглобина полимер окиси этилена - полиэти-ленгликоль.

Сравнительный анализ физико-химических свойств молекул гемоглобина в присутствии реополиглюкина, ПЭГ и в составе комплексов гембелок-ДАДI и II типа позволил установить следующее.

Реополиглюкин при внесении в раствор гемопротеида изменяет физические свойства воды как растворителя и приводит к увеличению объема гидратной оболочки белка, что опосредовано влияет на структурное состояние его глобулы.

Механизм действия ПЭГ на молекулу гемоглобина, в какой-то степени, подобен таковому реополиглюкина и реализуется путем модификации водного микроокружения гембелка. При давлении порядка 16 МПа ПЭГ замещает часть молекул воды, связанной с поверхностными группами гемопротеида, и за счет нековалентных взаимодействий образует комплекс с гемоглобином. Аргументом в пользу образования аддуктов гемоглобина с ПЭГ служит выявленное нами увеличение кажущейся молекулярной массы гембелка (метод гель-хроматографии). При этом возможность разворачивания белковой глобулы под действием ПЭГ не подтверждается результатами спектрофотомет-рии, протеолитического титрования, регистрации интенсивности светорассеяния, которые свидетельствуют о компактизации гемопротеида.

ДАД, в отличие от реополиглюкина и ПЭГ, наряду с повышением степени гидратации гемоглобина, проявляет и прямое действие на стабильность его молекул. Происходит это за счет появления дополнительных ковалент-ных связей между альдегидными группами полисахарида и аминокислотными остатками лизина и гистидина глобина, что приводит к усилению гидрофобных взаимодействий внутри белковой глобулы.

Изменения структуры молекул гемоглобина под воздействием реополиглюкина, ПЭГ и ДАД нашли отражение на устойчивости гемопротеида к действию денатурирующих агентов. Было установлено, что все изучаемые модификаторы в разной степени повышают термостабильность молекул гемоглобина. Обнаружено защитное действие реополиглюкина, ПЭГ и ДАД на молекулу гембелка по отношению к воздействию низких концентраций (0,1 моль/л) гуанидин-гидрохлорида (И Х). Однако денатурант в более высокой концентрации (1 моль/л) разрушает дополнительный гидратационный слой вокруг белка, появившийся под влиянием реополиглюкина и ПЭГ, и приводит к разворачиванию и агрегации его полипептидных цепей. Что касается комплексов гемоглобин-ДАД I типа, то образование дополнительных кова-лентных связей белка с полисахаридом препятствует денатурационным изменениям в присутствии ГГХ даже в его концентрации 1 моль/л.

На основании литературных и собственных экспериментальных данных нами была предложена схема процессов, протекающих в растворах ин-тактных и модифицированных реополиглюкином, ДАД и ПЭГ молекул гемоглобина человека при воздействии температуры и ГГХ (рис. 45).

Особый интерес представляет анализ содержания отдельных лиганд-ных форм в растворах модифицированного гемоглобина, динамика изменения которых непосредственно отражает его функциональные характеристики.

Расчеты показали, что реополиглюкин и ПЭГ не оказывают влияния на соотношение лигандных форм в растворах гемопротеида, и, по-видимому, не способны изменять и эффективно регулировать функциональные свойства гемоглобина. В растворах конъюгатов гембелка с ДАД I и II типа установлено уменьшение доли НЬОг и увеличение количества дезоксиформы гемопротеида, что обусловлено снижением его сродства к кислороду в исследуемых комплексах. Учитывая, что процесс выделения гембелка из эритроцитов сопровождается снижением величины Р50, по-видимому, ДАД может быть использован для коррекции кислородсвязывающей способности гемоглобина.

Используя методы компьютерного моделирования, нами была создана пространственная модель молекулы ДАД, состоящей из 200 мономерных остатков, и определены места нахождения в ней альдегидных групп. Анализ энергетического и стерического критериев боковых радикалов аминокислотных остатков гемопротеида, позволил выявить положение аминокислотных

Рис. 45. Схема процессов, протекающих в растворах интактных и модифицированных реополиглюкином, диальдегиддекстраном и полиэтиленгликолем молекул гемоглобина человека при воздействии температуры и гуанидин-гидрохлорида

Примечание: в схеме указаны данные по действию гуанидин-гидрохлорида (ГГХ) при температуре 25 °С остатков лизина и гистидина, с наибольшей вероятностью участвующих в образовании связей с ДАД. Ими оказались 60а, 92а, 59ß аминокислотные остатки лизина и 45а, 77ß — гистидина. На основании совокупности экспериментальных данных и эмпирических расчетов построены компьютерные трехмерные модели комплексов гемоглобин-ДАД I и II типа.

С помощью программного пакета HyperChem 7.0 Professional методом молекулярной динамики установлено, что при модификации гембелка диаль-дегиддекстраном сохраняется конформационная лабильность гемовой группы и отдельных субъединиц относительно друг друга. Это свидетельствует о способности комплексов гемоглобин-ДАД к обратимой оксигенации, а, следовательно, к эффективной транспортировке кислорода.

Таким образом, производные декстрана и ПЭГ повышают устойчивость белковых молекул к денатурирующим факторам, а ДАД, кроме того, является эффективным регулятором функциональных свойств гемоглобина человека, что позволяет отнести данные соединения к весьма перспективным агентам для модификации гемопротеида с целью создания искусственных кровезаменителей. Наряду с этим, ДАД и ПЭГ могут быть использованы в экспериментах по синтезу биоактивных веществ и лекарственных средств для сохранения их биологически важных свойств и способности выполнять физиологическую роль в организме при изменении условий среды.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Савостин, Владислав Сергеевич, 2008 год

1. Абдель Басит М. Сайд Исследование структурных изменений оксиге-моглобина, индуцированных УФ-облучением и гуанидин-хлоридом : Дисс. . канд. биол. наук / М. Сайд Абдель Басит. Воронеж, 1979. — 279 с.

2. Артюхов В.Г. Гемопротеиды: закономерности фотохимических превращений в условиях различного микроокружения / В.Г. Артюхов. — Воронеж : Изд-во Воронеж, ун-та, 1995. 280 с.

3. Артюхов В.Г. Кислородсвязывающие свойства гемоглобина, модифицированного воздействием температуры и додецилсульфата натрия / В.Г. Артюхов, Г.А. Вашанов // Физиол. журн. СССР им. Сеченова. 1990. - Т. 76, № 1.-С. 1361-1367.

4. Артюхов В.Г. Оптические методы анализа интактных и модифицированных биологических систем / В.Г. Артюхов, О.В. Путинцева. Воронеж : Изд-во Воронеж, ун-та, 1996. - 240 с.

5. Барышев Б.А. Кровезаменители. Компоненты крови. / Б.А. Барышев. -СПб. : Человек, 2005. 160 с.

6. Блюменфельд Л.А. Гемоглобин и обратимое присоединение кислорода / Л.А. Блюменфельд. М. : Сов. Наука, 1957. - 139 с.

7. Боландин В.А. Справочник по аналитическому контролю в производстве искусственных и синтетических волокон / В.А. Боландин. М. : Гиз-легпром, 1957. - С. 42.

8. Вашанов Г.А. Роль субъединичных контактов в проявлении гемоглобином структурно-функциональных свойств в условиях различного микроокружения : Дисс. . д-ра биол. наук / Г.А. Вашанов. Воронеж, 2004. — 347 с.

9. Вашанов Г.А. Физико-химические и функциональные свойства гибридных макромолекул гемоглобина человека / Г.А. Вашанов, В.Г. Артюхов

10. Вестн. Воронеж, гос. ун-та. Сер. Химия. Биология. 2000. - № 2. - С. 9499.

11. Верболович П.А. Железо в животном организме / П.А. Верболович, A.B. Утешев. Алма - Ата : Наука, 1967. - 266 с.V

12. Влияние осмолитов на денатурацию синтазы жирных кислот из печени цыпленка / И.-Д. Парк и др. // Биохимия. 2002. - Т.67. вып. 8. - С. 11011108.

13. Воробьёв С.И. Инфузионные растворы с кислородтранспортными свойствами / С.И. Воробьёв // Российский журнал анастезиологии и интенсивной терапии. 1996. - вып. 2. - С. 25-31.

14. Воробьёв, Ю.Н. Методы компьютерного моделирования и конформа-ционная подвижность ДНК-дуплексов / Ю.Н. Воробьёв // Молекулярная биология. 2003. - Т. 37,№ 2. - С. 240-254.

15. Вязова Е.П. Модифицированный гемоглобин как основа искусственного переносчика кислорода / Е.П. Вязова, М.А. Ажигирова // Химико-фармацевтический журнал. 1989. - № 6. - С. 645-649.

16. Грибов JI.A. Квантовая химия / Л.А. Грибов, С.П. Муштакова — М. : Гардарики, 1999. с. 390.

17. Двойлацкая-Барышева K.M. Биологический синтез нативного декстра-на-основы отечественного плазмозаменителя полиглюкина / K.M. Двойлацкая-Барышева, Т.С. Сельцовская // Пробл. гематол. и перелив, крови. -1956.-№ l.-C: 47-48.

18. Демченко А.П. Ультрафиолетовая спектрофотометрия и структура белков / А.П. Демченко. Киев : Наукова думка, 1981. - 208 с.

19. Детерман Г. Гель-хроматография / Г. Детерман. М: : Наука, 1970. -252 с.

20. Дифосфанатные декстрановые производные, взаимодействие с гемоглобином/ Г.Н. Кольцова и др. // Гематология и трансфузиология. 1985. -Т. 30,№9:-С. 53-56.

21. Ефремова Н.В. Термическая стабильность конъюгатов а-химотрипсина с водорастворимыми полиалкиленоксидами / Н.В. Ефремова, В.В. Можаев, И.Н. Топчиева // Биохимия. 1992. - Т. 57, вып. 3. - С. 342-347.

22. Иваницкий Г.Р. Переливание крови: против, за и альтернатива / Г.Р. Иваницкий // Наука и жизнь. 1999. - Т. 2. - С. 14-19.

23. Иванов К.П. Современное развитие проблемы искусственной крови / К.П. Иванов // Гематология'и трансфузиология. 1992. - № 2. - С. 26-29.

24. Иванов К.П. Современные проблемы дыхательной функции крови и газообмена в легких / К.П. Иванов // Физиол. журн. СССР им. Сеченова. -1992-Т. 78, №. 11.- С. 11-26.

25. Иммобилизация а-химотрипсина на растворимых декстранах / В.П. Торчилин и др. // Биоорганическая химия. 1976. - Т. 2, № 9. - С. 1252-1257.

26. Иржак Л.И. Гемоглобины и их свойства / Л.И. Иржак. М. : Наука, 1975.-240 с.

27. Искусственная кровь: от Флюозола-ДА до искусственных эритроцитов / К. Хонда и др. // Биосовместимость. 1993. - Т.1, № 2. - С. 81-94;

28. Использование метода термоденатурации для изучения аддуктов а-химотрипсина с полиалкиленоксидами / Н.В. Ефремова и др. // Биохимия. -Т. 63, вып. 4.-С. 524-531.

29. Использование системы гидратированных обращенных мицелл для оценки- размеров полимер-белковых аддуктов / Е.М. Сорокина и др. // Биохимия. 1999. - Т. 64, вып. 6. - С. 799-804.

30. Кантор Ч. Биофизическая химия / Ч. Кантор, П. Шиммел : В 3 т.; Под ред. А.А. Богданова, Ю.С. Лазуркина, М.Д. Франк-Каменецкого. М. : Мир. - Т. 1 : Конформация биологических макромолекул. - 1984. - 336 с.

31. Кинетика* денатурации гликогенфосфорилазы Ь из скелетных мышц кролика гуанидингидрохлоридом / Т.Б. Еронина др. // Биохимия. 2001. - Т. 66, вып. 4. - с. 555-562.

32. Козинер В.Б. Механизм действия полиглюкина / В.Б. Козинер, H.A. Федоров. М. : Медицина, 1974. - 157 с.

33. Козинец Г.И. Практическая трансфузиология / Г.И. Козинец. — М. : Практическая медицина, 2005. 544с.

34. Козлова И.Е. УФ-чувствительность молекул гемоглобина с различным субъединичным, составом : Дисс. . канд. биол. наук / И.Е. Козлова. Воронеж, 2000. —152 с.

35. Комплексы полиэтиленгликоля с белками / И.Н. Топчиева и др. // Биохимия.- 1998.-Т. 63, вып. 11.-С. 1543-1540.

36. Конъюгаты соевого ингибитора типа Баумана-Бирк с клиническим дек-страном. Синтез и антипротеолитическая активность / И.П. Гладышева и др. // Биохимия. 2001. - Т. 66, № 4. - С. 474-480.

37. Коржуев П.А. Гемоглобин. Сравнительная физиология и биохимия / П.А. Коржуев. М.: Мир, 1964. - 287 с.

38. Кузнецова Н.П. Повышение кислородтранспортной эффективности гемоглобина при его химической модификации / Н.П. Кузнецова, JI.P. Гудкин, Р.Н. Мишаева // Биохимия. 1996. - Т. 61, № 4. - С. 680-689.

39. Кутышенко В.П. Разворачивание расплавленной глобулы карбоангид-разы гуанидингидрохлоридом / В.П. Кутышенко, Д.А. Прохоров // Молекулярная биология. 2003. -Т. 37, № 6. - С. 1055-1060.

40. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М. : Высшая школа, 1990. -351 с.

41. Ленинджер А. Биохимия / А. Ленинджер. М.: Мир, 1976. - 953 с.

42. Линдебаум Г.М. Химическая модификация водорастворимых декстра-нов / Г.М. Линдебаум, O.A. Миргородская, Б.В. Москвичев // Хим. фарм. журн. 1977. - № 6. - С. 80-83.

43. Лушников Л.А. Денситометрия / Л.А. Лушников, И.К. Стромгин // Лаб. дело. 1980. - № 6. - С. 336-338.

44. Максименко A.B. Модифицированная декстраном гиалуронидаза резистентна к ингибированию гепарином / A.B. Максименко, Ю.В. Щечилина, Е.Г. Тищенко //Биохимия. 2001. - Т. 66, № 4. - С. 563-572.

45. Маслаков Д.А. Биологическая активность некоторых полисахаридов и их клиническое применение / Д.А. Маслаков. Минск : Беларусь, 1977. -128 с.

46. Маслаков Д.А. Влияние полиглюкина на антимикробную активность сыворотки крови собак / Д.А. Маслаков, И.А. Эйсмонт. Матер. 2 респ. съезда гематол. и трансфузиолог. Белоруссии. - Минск, 1973. - С. 251-253.

47. Машковский М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. — М: : Медицина. Т. 2. - 1984. - С. 59-60, 64-65.

48. Методы химии углеводов / Под ред. Н.К. Кочеткова. М. : Мир, 1967. -512 с.

49. Минкин В.И. Теория строения молекул // В.И. Минкин, Б.Я. Симкин, P.M. Миняев. Ростов-на-Дону : «Феникс», 1997. — 560 с.

50. Олигомерные белки: структурно-функциональные модификации и роль субъединичных контактов / В.Г. Артюхов и др. Воронеж : Изд-во ВГУ, 1997.-264 с.

51. Показания к переливанию крови при острой кровопотери / С.И. Емельянов и др. // Российский журнал анастезиологии и интенсивной терапии. -1999.-вып. 4.-С. 12-15.

52. Рашиди Ш. Денатурация гликозилированного и дегликозилированного бромелайна в присутствии гуанидин-гидрохлорида / Ш. Рашиди, С.К. Хак, Р.Х. Хан // Биохимия. 2003. -Т. 68, вып. 10. - С. 1365-1369.

53. Резван С.Г. Анализ молекулярных механизмов взаимодействия синтетических гомологов ретинола с компонентами эритроцитарной мембраны и свободным гемоглобином : Дисс. . канд. биол. наук / С.Г. Резван. Воронеж, 1996. — 241с.

54. Рифкинд Д.М. Гемоглобин и миоглобин / Д.М. Рифкинд // Неорганическая биохимия. -М.: Мир, 1978. -Т. 2. С. 256-338.

55. Розенберг Г.Я. Проблемы создания искусственной крови / Г.Я. Розен-берг, К.Н. Макаров // Журнал ВХО им. Д.И. Менделеева 1985. - Т. 30, № 4.-С. 387-394.

56. Романова Т.А. Изменение электронной структуры гема при образовании комплекса с оксидом азота и динамика атомного остова при физиологической температуре / Т.А. Романова, П.О. Краснов, П.В. Аврамов // Доклады РАН 2001а. - Т. 380, № 2. - С. 319-322.

57. Романова Т.А. Электронная структура комплекса гема гемоглобина с оксидом азота и динамика атомного остова при физиологической температуре / Т.А. Романова, П.О. Краснов, П.В. Аврамов // Вопросы медицинской химии. -20016. Т. 47, вып. 3. - С. 308-315.

58. Софронов Г.А. Стратегия поиска искусственных заменителей крови / Г.А. Софронов, Е.А. Селиванов, М.Д. Ханевич // Рос. мед. вестн. 1998. -Т. 4, вып. 2. - С. 51-54.

59. Софронов Г.А. Новые кровезаменители полифункционального действия / Г.А. Софронов, Е.А. Селиванов // Вестник РАМН. 2003. - № 10. - С. 48-51.

60. Соколов А.В. Замещение острой смертельной кровопотери раствором фракции модифицированного полигемоглобина : Дисс. . канд. мед. наук / А.В. Соколов. М., 1992. - 112 с.

61. Соловьев М. Е. Компьютерная химия / М.Е. Соловьев, М.М. Соловьев. -М. : СОЛОН-Пресс, 2005. 536 с.

62. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России М. : Астра-ФармСервис, 2005. - 1536 с.

63. Стародуб Н.Ф. Гетерогенная система гемоглобина / Н.Ф. Стародуб, В.И. Назаренко. Киев : Наукова думка, 1987. - 199 с.

64. Стародуб Н.Ф. Радиационное поражение гемоглобина / Н.Ф. Стародуб, Г.М. Рекун, И.М. Шурьян. Киев : Наукова думка, 1976. — 130 с.

65. Степанов В.М. Молекулярная биология. Структура и функция белков / В.М. Степанов. -М. : Высш. школа, 1996. 336 с.

66. Страйер Л. Биохимия / Л. Страйер. М. : Мир, 1984. - 532 с.

67. Структура и связь / М. Вейсблут и др. М. : Наука, 1969. - С. 11 -74.

68. Структура и электронные свойства комплексов гема с различными ли-гандами / Т.А. Романова и др. // Биофизика. 2003. - Т. 48, № 4 - С. 618627.

69. Стусь Л.К. Осцилляция некоторых лигандированных форм гемоглобина при хранении крови / Л.К. Стусь, Е.Д. Розанова // Биофизика. 1992. - Т. 37, вып. 2. - С. 387-388.

70. Теория и практика компьютерного моделирования нанообъектов / Т.А. Романова и др. Красноярск : ИПЦ КГТУ, 2002. - 223 с.

71. Троицкий Г.В. Постсинтетическая модификация белков / Г.В. Троицкий // Укр. биохим. журн. 1985. - Т. 57, № 3. - С. 81-98.

72. Тяги Р. Использование химической модификации и химического сшивания для стабилизации белков (ферментов) / Р. Тяги, М.Н. Гупта // Биохимия. 1998. - Т. 63, № 3. - С. 395-407.

73. Физиология человека / Под ред. Г.И. Косицкого. — М. : Медицина, 1985. —559 с.

74. Хан Р.Х. Влияние Сахаров на стабильность и вторичную структуру альбумина сыворотки кролика / Р.Х. Хан, М.С. Шабнум // Биохимия. -2001. — Т.66, № 9. С. 1280-1285.

75. Чанг Р. Физическая химия с приложениями к биологическим системам / Р. Чанг. М.: Мир, 1980. - 664 с.

76. Энергия разрыва химических связей. Потенциалы ионизации и сродство к электрону / Л.В. Гурвич и др. М. : Наука, 1974. - 351 с.

77. Якубке Х.-Д. Аминокислоты. Пептиды. Белки / Х.-Д. Якубке, X. Эш-кайт. М. : Мир, 1985. - 456 с.

78. A clinical safety trial of stroma-free hemoglobin / J.P. Savitsky et al. // Clin. Pharmaco. Ther. 1978. -V. 23. -P. 73-80.

79. A human recombinant haemoglobin designed for use as a blood substitute / D. Looker et al. // Nature. 1992. - V. 356. - P. 258-260.

80. Allen M.P. Computer simulation of liquids / M.P. Allen, D J. Tidesley Oxford : Oxford University Press, 1989. - 254 p.

81. Alta D.H. Mechanism of precipitation of proteins by polyethylene glycols. Analysis in terms of excluded volume / D.H. Alta, K.C. Ingham // J. Biol. Chem. 1981. - V. 256. - P. 12108-12117.

82. An All Atom Force Field for Simulations of Proteins and Nucleic Acids / S.J. Weiner et al. // J. Comput. Chem. 1986. - V. 7. - P. 230-252.

83. Arakawa T. Mechanism of poly(ethylene glycol) interaction with proteins / T. Arakawa S. N Timasheff// Biochemistry. 1985. - V. 24. - P. 6756-6762.

84. Blood substitutes: evolution and future applications / M.G. Scott et al. // Clinical Chemistry. 1997. -V. 43, № 9. -P. 1724-1731.

85. Bloom W. Coating of Vascular Surfaces and Cells. A new Concept in Prevention of Intravascular Thrombosis / W. Bloom, D. Harmer // Proc. Soc. Exp. Biol. 1964.-V. 115, №2.-P. 384-386.

86. Bodor N. A new method for the estimation of partition coefficient / N. Bodor, Z Gabanyi, C. Wong // J. Am. Chem. Soc. -1989. V. 111. - P. 37833786.

87. Bolton W. Three dimensional fourier synthesis of horse deoxyhaemoglobin at 2.8 Angstrom units resolution / W. Bolton, M.F. Perutz // Nature. 1970. - V. 228, №5271.-P. 551-552.

88. Bruce A. Clinical considerations in pegylated protein therapy / A. Bruce // From Reserch to Practice. 2001. - V. 3. - P. 3-9.

89. Caliceti P. Pharmacokinetic and biodistribution properties of poly(ethylene glycol)-protein conjugates / P. Caliceti, F.M. Veronese // Adv. Drug Deliv. Rev. -2003.-V. 55.-P. 1261-1277.

90. Characterization of a pyridoxalated hemoglobin-polyoxyethylene conjugate as a physiologic oxygen carrier / A. Yabuki et al. // Transfusion. 1990. - V. 30, № 6.-P. 516-522.

91. Chemical Characterization of Diaspirin Cross-Linked Hemoglobin Polymerized with Polyethylene glycol / Buehler P.W. et al. // Anal. Chem. 2006. - V. 78, № 13.-P. 4634 - 4641.

92. Chemically modified porcine hemoglobins and their biological properties / C. Jin et al. // Protein Pept. Lett. 2004. - V. 11. - P. 353 - 360.

93. Cristal structure of T state haemoglobin with oxygen bound at all four haems /M. Paoli at al. // J.Mol. Biol. 1996. -V. 256. - P. 775-781.

94. Cross-linking with O-raffinose lowers oxygen affinity and stabilizes haemoglobin in a non-cooperative T-state conformation / Y. Jia et al. // J. Biochem — 2004a. V. 384. - P. 367 - 375.

95. Delgado C. The uses and properties of PEG-linked proteins // C. Delgado, G.E. Francis, D. Fisher // Crit. Rev. Ther. Drug. Carrier. Syst. 1992. - V. 9. -P. 249-304.

96. Drabkin D.L. The chromatographic and optical properties of hemoglobin of man in comparison with those of other species / D.L. Drabkin // J. Biol. Chem. -1946.-V. 164.-P. 703-723.

97. Drysdale J.W. The separation of human and animal hemoglobin's by isoelectric separation focusing in polyacrylamide gel / W.J. Drysdale, P. Righetti, H.F. Bunn // Biochim. biophys. acta. 1971. - V. 229, № 1. - P. 4250.

98. Effect of covalent attachment of polyethylene glycol on immunogenicity and circulating life of bovine liver catalase / A. Abuchowski et al. // J. Biol. Chem. 1977. -V. 252. - P. 3582-3586.

99. Fakhry S.M. Blood administration; risks and substitutes / S.M. Fakhry, G.F. Sheldon // Adv. Surgery. 1995. - V. 28. - P. 71-92.

100. Fee C.J. PEG-proteins: Reaction engineering and separation issues / C.J. Fee, J.M. Van Alstine // Chemical Engineering Science. 2006. - V. 61. - P. 924-939.

101. Fee C.J. Size-exclusion reaction chromatography (SERC): A new technique for protein PEGylation / C.J. Fee // Biotechnol. and Bioengin. 2003. - V. 82. -P. 200-206.

102. Functional change of polyethlene glycol modified serine protease from Aspergillus sojae and interaction with alpha2-macroglobulin / K. Takoi et al. // Agric. Biol. Chem. - 1989. -V. 63, № 8. - P. 2063-2071.

103. Greenburg A.G. Hemoglobin-based oxygen carriers / A.G. Greenburg, H.W. Kim // Crit. Care. 2004. - V. 8. - P. 61 - 64.

104. Gulati A. Effect of stroma-free hemoglobin and diaspirin cross-linked hemoglobin on the regional circulation and systemic hemodynamics /A. Gulati, A.C. Sharma, K.E. Burhop // Life Sci. 1994. - V. 55. - P. 827-837.

105. Hansch C. ae-oe Analysis. A method for the correlation of biological activity and chemical structure / C. Hansch, T. Fujita // J. Ann. Chem. Soc. - 1964. -V. 86.-P 1616-1626.

106. Identification of the sites of deoxyhaemoglobin PEGylation / R. Iafelice et al. // J. Biochem. 2007. - V. 403. - P. 189-196.

107. Influence of intramolecular cross-links on the molecular, structural and functional properties of PEGylated haemoglobin / T. Hu et al. // J. Biochem. -2007.-V. 402.-P. 143-151.

108. Ingham K.C. Polyethylene glycol in aqueous solution: solvent perturbation and gel filtration studies / K.C. Ingham // Arch. Biochem. Biophys. 1977. - V. 184.-P. 59-68.

109. Jorgensen W.L. Aromatic-Aromatic Interactions: Free Energy Profiles for the Benzene Dimer in Water, Chloroform and Liquid Benzene / W.L. Jorgensen, D.L. Severance // J. Am. Chem. Soc. 1990. - V. 112. - P. 4768-4774.

110. Jorgensen W.L. The OPLS optimized potentials for liquid simulations. potential functions for proteins, energy minimizations for crystals of cyclic peptides and crambin / W.L. Jorgensen, J. Tirado-Rives // J. Am. Chem. Soc. -1988.-V. 110.-P. 1657-1666.

111. Kendrew J.C. Myoglobin and the structure of proteins / J.C. Kendrew // Science. 1963 - V. 139. - P. 1259-1266.

112. Knoll D.A. Effect of poly(ethylene glycol) on protein denaturation and model compound pKa // D.A. Knoll, J. Hermans // Biopolymers. 1982. — V. 20.-P. 1747-1750.

113. Kodera Y. Pegylation of proteins and bioactive substances for medical and technical applications / Y. Kodera // Progress in Polymer Science. 1998. - V. 23-P. 1233-1271.

114. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. 1970. - V. 227, № 5259. -P.'680-685.

115. Lee L.L.-Y. Thermal stability of proteins in the presence of poly(ethylene glycols) / L.L.-Y. Lee, J.C. Lee // Biochemistry. 1987. - V. 26. - P. 7813 -7819.

116. Lii J.-H. The MM3 Force Field for Amides, Polypeptides and Proteins / J.-H. Lii, N. L. Allinger // J. Comput. Chem. 1991. - V. 12. - P. 186-199.

117. McDade W.A. On the formation and crystallization of sickle hemoglobin macrofibers / W.A. McDade, R. Josephs //J Struct. Biol. 1993. - V. 110, № 1. -P.-90-97.

118. Modification of human hemoglobin by covalent association with soluble dextran / E. Dellacherie et al. // Bioch. et Bioph. Acta. 1983. - V. 749. - P. 106-114.

119. Moffat J.K. Structure and functional properties of chemically modified horse hemoglobin. II. X-ray studies / J.K. Moffat // J. Mol. Biol. 1971. - V. 58, № 1. -P. 79-88.

120. Molecular aspects of the high oxygen affinity of non-hypertensive hexa pe-gylated hemoglobin, (SP-PEG5K)(6)-Hb. / D. Li [et al.] // Artif. Cells Blood Substit. Immobil. Biotechnol. 2007. - V. 35. - P. 19-29.

121. Morar A.S. PEGylation of Proteins: A Structural Approach / A.S. Morar, J.L. Schrimsher, M.D. Chavez // Biopharm. International. 2006. - V. 19. - P. 34-41.

122. Morpurgo M. Conjugates of peptides and proteins to polyethylene glycols / M. Morpurgo, F.M. Veronese // Methods Mol. Biol. 2004. - V. 283. - P. 4570.

123. Muirhead H. Three-dimensional Fourier synthesis of human deoxyhaemo-globin at 3.5 Angstrom units / H. Muirhead, J. Greer // Nature. 1970. - V. 228, №5271.-P. 516-519.

124. Multicomponent analysis of hemoglobin derivatives with reversed-optics spectrophotometer / A. Zwart et al. // Clin. Chem. 1984. - V. 30, № 3. - P. 373-379.

125. Murugan R. Competitive model on denaturant-mediated protein unfolding / R. Murugan // J. Biophys. 2003. - V. 84. - P. 770-774.

126. Optically active absorption bands of haemoglobin and its subunits / S. Bey-chok et al. // J. Biol. Chem. 1967. - V. 242, № 10. - P. 2460-2462.

127. Otamiri M. A differential scanning calorimetric study of chymotrypsin in the presence of added poly / M. Otamiri, P. Adlercreutz, B. Mattiasson // Biotechnol. Bioengin. 1994. - V. 44, № 1. - P. 73-78.

128. Oxygen binding and oxidation reactions of human hemoglobin conjugated to carboxylate dextran / Y. Jia et al. // Bioch. Bioph. Acta. 2004b. - V. 1672. -P. 164-173.

129. Pace C.N. Determinazion and analysis of urea and guanidine hydrochloride denaturation curves / C.N. Pace // Meth. Enzimol. 1986. - V. 131. - P. 266280.

130. Perutz M.F. Regulation of oxygen affinity of haemoglobin: influence of structure of the globin on the haem-iron / M.F. Perutz // Ann. Rev. Biochem: — 1979.-V. 48.-P. 327-386.

131. Perutz M.F. Structure and mechanism of haemoglobin / M.F. Perutz // Brit. Med. Bull. 1976. - V. 32, № 3. - P. 195-208.

132. Perutz M.F. X-ray analysis structure and function of enzymes / M.F. Perutz // Europ. J. Biochem. 1969. - V. 8, № 8. - P. 455-466.

133. Polyethylene Glycol Conjugation at Cys232 Prolongs the Half-Life of al Proteinase Inhibitor / A.M. Cantin et al. // American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 2002. - V. 27. - P. 659-665.

134. Preparation, Physico-Chemical and Pharmacokinetic Characterization of Monomethoxypoly(ethyleneglycol)-Derivatized Superoxide Dismutase / F. M. Veronese et al. // J. Controlled Release. 1989. - V. 10. - P. 145-154.

135. Production of PEG-modified bovine hemoglobin: economics and feasibility / R. Bradley et al. // Artif. Cells Blood Substit. Immobil. Biotechnol. 1994. -V. 22.-P. 657-667. .

136. Ripoll D. On the multiple-minima problem in the conformational analysis of polypeptides. An electrostatically driven Monte carlo method / D. Ripoll, H.A. Scheraga // Biopolymers. 1988. - V. 27. - P. 1283-1303.

137. Roberts M.J. Chemistry for peptide and protein PEGylation / M.J. Roberts, M.D. Bentley, J.M. Harris // Adv. Drug. Deliv. Rev. 2002. - V. 54. - P. 459476.

138. Rossi-Fanelli M.R. Properties of human haemoglobinimmobilized on sepharose 4B / M.R. Rossi-Fanelli, Gino Amiconi // Eur. J. Biochem. 1978. -V. 92, №1,-p. 253-256.

139. Sacco D. Interaction of a macromolecular polyanion, dextran sulfate, with human hemoglobin / D. Sacco, E. Dellacherie // Febs Letters. 1986. -V. 199. -P. 254-258.

140. Shibayama N. Fixation of the quaternary structures of human adult haemoglobin by encapsulation in transparent porous silica gels / N. Shibayama; S. Saigo // J. Mol. Biol. 1995. - V. 251. - P. 203-209.

141. Site-specific cross-linking of human and bovine hemoglobins differentially alters oxygen binding and redox side reactions producing rhombic heme and heme degradation«/ E. Nagababu et al. // Biochemistry 2002. - V. 41. - P. 7407-7415.

142. Stan Tsai C. An Introduction to Computational Biochemistry / C. Stan Tsai. New York : Wiley-Liss, 2002. - 368 p.

143. Stewart J.J.P. A practical: method for modeling solids using semiempirical methods / J:J.P. Steward // Journal of Molecular Structure. 2000. - V. 556. -P. 59-67.

144. The effect of organic phosphates from the human erythrocyte on the allosteric properties of hemoglobin / R. Benesch, R.E. Benesch // Biochem. Bioph; Res. Comm. 1967. -V. 26. -P! 162-167.

145. The Recombination of a and p Chains of Human Hemoglobin. Effect of Sulfhydryl Group modification//E.J. Neer, G. Guidotti // J; Biol. Chem. 1970. -V. 245, №3.-P. 570-573:

146. The risk of transfusion-transmitted vira! infections / G.B. Schreiber et al. // N. Engl. J. Med. 1996. -V. 334. -P. 1685-1690.

147. Three-dimensional Fourier synthesis of horse oxyhaemoglobin at 2,8: A resolution: The atomic model / M.F. Perutz et al. // Nature. 1968. - V. 219, №5150.-P. 131-139.

148. Tsuchida E. Synthesis and characterization of artificial red cell (ARC) / E. Tsuchida // Biomater. Artif. Cells Immobilization Biotechnol. 1992. - V. 20. -P. 337-344.

149. Viswanadhan V.N. Mapping the binding site of the nucleoside transporter • protein: a 3D-QSAR study / V.N. Viswanadhan, A.K. Ghose, J.N. Weinstein //

150. Biochim. Biophys. Acta. 1990. - V. 1039. - P. 356-366.

151. Wang J.H. Synthetic biochemical models / J.H. Wang // Account Chem. Res. 1970. - V. 3. - P. 90-95.

152. Weber K. The reliability of molecular weigt determinations by dodecyl sulfate polyacril amide gel electrophoresis / K. Weber, M. Osborn // J. Biol. Chem. - 1969. -V. 244, № 16. - P. 4406-4412.

153. Winslow R.M. Blood substitutes / R.M. Winslow // Curr. Opin. Hematol. -2002. -№ 9.-P. 146-151.