Исследование структурно-функциональной роли С-конца молекулы гамма-интерферона тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Цивковский, Руслан Юрьевич

• Цивковский, Руслан Юрьевич
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Цивковский, Руслан Юрьевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр

Введение

Глава 1. Обзор литературы. Механизмы реализации биологических 10 свойств гамма-интерферона и роль в этом С-конца молекулы.

1.1. Введение

1.2. Связывание уИФН с клеточным рецептором и передача сигна- 12 ла в клетку.

1.3. Иммуномодулирующие свойства уИФН

1.4. Антивирусная активность уИФН

1.5. Антипролиферативное действие уИФН

1.6. Роль уИФН в усилении фагоцитоза

1.7. Адъювантные свойства уИФН

1.8. Роль С-конца в реализации различных функций уИФН

1.9. Формулировка задач по уточнению структурно- 44 функциональной организации С-конца уИФН.

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Модификация олигонуклеотида 4-аминооксибутиламином

2.2. Методика определения субстратных свойств модифицирован- 47 ных дезоксицитидин-5'-трифосфатов,

2.3. Получение С-концевого фрагмента гена а-фетопротеина

2.4. Выделение гибридного белка ИФН-АФП

2.5. Определение димерной структуры белков методом ковалент- 49 ной сшивки.

2.6. Определение констант связывания гамма-интерферона и его 50 аналогов со специфическим клеточным рецептором.

2.7. Определение фагоцитоз-стимулирующей и антипролифера- 51 тивной активности белков.

2.8. Иммунизация кроликов и определение титров сывороток ка- 52 фетопротеину.

Глава 3. Результаты и обсуждение

3.1. Изучение структурно-функциональной организации С-конца 54 у-интерферона.

3.1.1. Получение продуцента гибридного белка ИФН-АФП в E.coli

3.1.2. Очистка гибридного белка ИФН-АФП

3.1.3. Исследование физико-химических свойств С-концевых анало- 66 гов уИФН.

3.1.4. Исследование биологических свойств аналогов уИФН

3.1.5. Изучение иммуностимулирующих свойств уИФН в составе 82 гибридного белка ИФН-АФП.

3.2. Разработка методов статистического мутагенеза с использова- 91 нием 4-аминооксибутиламина и его производных.

3.2.1. Разработка способа введения мутаций в ограниченный район 93 ДНК с использованием олигонуклеотида, модифицированного АОБА.

3.2.2. Получение мутаций в протяженном районе целевого гена пу- 101 тем создания одноцепочечного района необходимой длины и

его дальнейшей модификации АОБА.

3.2.3. Получение АОБА-производного dCTP (dC** TP) и изучение 105 его субстратных свойств в полимеразной системе in vitro.

3.2.4. Исследование мутагенных свойств dC**TP

Заключение

Выводы

Литература

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор глубоко признателен за помощь в освоении ряда методик, проведении части экспериментов и постоянные рекомендации и консультации по различным теоретическим и практическим вопросам научным сотрудникам: к.х.н. Сиволобовой Г.Ф., к.б.н. Кочневой Г.В., Гражданцевой АА., к.х.н. Серпинскому О.И., к.б.н. Смирновой О.Ю., к.х.н. Решетникову С.С., Батуриной И.И. (ГНЦ ВБ «Вектор»), к.ф-.м-.н. Христофорову B.C. и к.б.н. Косареву И.С. (Институт инженерной иммунологии РАН), д.м.н. Черных Е.Р и к.м.н. Останину A.A. (Институт клинической иммунологии СО РАМН).

Автор также считает своим долгом поблагодарить своих научных руководителей Татькова С.И. и Ильичева A.A. за постоянную помощь и поддержку в течение всей работы и твердую уверенность в ее успешное завершение.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

уИФН - гамма-интерферон человека АФП - альфа-фетопротеин человека дцРНК - двухцепочечная РНК

ИФН-АФП - гибридный белок гамма-интерферон- альфа-фетопротеин

АКО - аминокислотный остаток

ABA - антивирусная активность

АОБА - 4-аминооксибутиламин HaNO(CH2)4NH2

ПАФ - полный адъювант Фрейнда

Расшифровка остальных сокращений приводится по ходу текста.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование структурно-функциональной роли С-конца молекулы гамма-интерферона»

Введение.

Актуальность проблемы.

Изучение природы и механизма действия интерферонов, и у-интерферона в частности, было одним из наиболее захватывающих разделов молекулярной биологии клетки и вирусологии на протяжении последних трех десятилетий, у-Интерферон (уИФН) был открыт в 1965 году как антивирусный фактор, синтезируемый человеческими лимфоцитами в ответ на их обработку фитогемагглю-тинином [1]. Уже тогда, предвидя исключительную важность этого белка в функционировании всего организма, автор этого открытия Фредерик Е. Уилок писал: «Этот ФГА-индуцированный вирусный ингибитор может продуцироваться белыми кровяными клетками в ответ на стимуляцию клеточного синтеза РНК и, возможно, представляет механизм обратной связи для контроля синтеза РНК.»

В результате последующих исследований рекомбинантного уИФН, полученного вскоре после того, как проклонировали в 1982 году его ген [2,3], было установлено, что антивирусная активность гамма-интерферона - лишь одна из его многочисленных биологических функций, в то время как главными являются регуляция клеточных активностей, связанных с ростом, дифференцировкой и управлением иммунным ответом. Среди них можно особо отметить: иммуноре-гуляторную функцию, антипролиферативную активность, способность усиливать фагоцитоз, а также и другие функции. Особые перспективы исследователи связывали с изучением антипролиферативной активности в свете разработки новых высокоэффективных противораковых агентов. Однако в ходе исследований был также выявлен целый ряд побочных негативных эффектов у-интерферона. Например, было показано, что его биологические активности in vivo значительно отличаются от активности in vitro, а также установлено, что в организме человека и животных белок нестабилен, а его расщепление трипсиноподобными протеазами начинается с С-конца молекулы. Таким образом стало очевидно, что для создания лекарственного препарата на основе иммунного интерферона и эффективных схем лечения необходимо глубже исследовать механизм реализа-

ции регуляторных функций у-интерферона и расшифровать его структурно-функциональную организацию. Такого рода информация крайне необходима для создания аналогов иммунного интерферона со сниженными побочными эффектами и для разработки концепции его применения в медицинской практике. Одним из эффективных подходов к решению данной проблемы является использование методов статистического и олигонуклеотиднаправленного мутагенеза для получения мутантных иммунных интерферонов и всестороннего изучения их свойств. Следует, однако, отметить, что методы статистического мутагенеза используются в настоящее время значительно реже, прежде всего из-за их трудоемкости.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы является всестороннее исследование свойств полученных С-концевых аналогов у-интерферона, установление роли С-конца молекулы в проявлении различных свойств белка, а также разработка новых эффективных методов локализованного статистического мутагенеза, основанных на применении нового мутагена - 4-аминооксибутиламина (АОБА) и модифицированного им цитидина для создания обширного банка мутантных генов уИФН. Для достижения этой цели решались следующие задачи:

1) получение ряда С-концевых аналогов уИФН, содержащих как точечные мутации, так и протяженную полипептидную встройку;

2) изучение физико-химических и биологических свойств С-концевых аналогов уИФН;

3) определение роли как С-конца в целом, так и отдельных его участков в осуществлении функциональной активности уИФН.

4) выяснение механизма мутагенного действия 4-аминооксибутиламина и модифицированного им дезоксицитидин-5'-трифосфата;

5) разработка ряда методов локализованного мутагенеза, позволяющих вводить мутации в районы ДНК различной протяженности.

Научная новизна работы.

В данной работе исследовано влияние точечных замен, делеции 10 аминокислотных остатков (ако) и протяженной вставки в С-концевой области молекулы гамма-интерферона на димеризацию молекул, спектры кругового дихро-

изма и константы связывания со специфическим клеточным рецептором. Впервые показано, что точечные замены (В38, Б92, <3133) или удаление 10 ако (ДЮ) С-конца молекулы не препятствуют образованию димеров. Даже вставка протяженного полипептида (мутант ИФН-АФП, 53 кДа) в данную область молекулы не смогла полностью подавить димеризацию полученного гибридного белка ИФН-АФП. Не удалось также выявить сколь-нибудь значительного влияния данных мутаций и на КД-спектры очищенных гомогенных мутантных белков в сравнении со спектром рекомбинантного гамма-интерферона, что свидетельствует об отсутствии значительного изменения соотношения альфа-спиральных, бэта-складчатых и неструктурированных участков. Определение констант связывания по методу Скэтчарда выявило значительное влияние на их величину точечных замен, делеций или вставок в С-концевой области молекулы иммунного интерферона. Данные результаты подтверждают участие С-конца молекулы рекомбинантного у-интерферона в связывании со специфическим клеточным рецептором.

Изучено влияние мутаций на антивирусную, антипролиферативную и фа-гоцитоз-стимулирующие активности мутантных аналогов. Наиболее чувствительной оказалась антивирусная активность молекулы, измеренная по подавлению цитопатического действия вируса энцефаломиокардита мышей на культуру клеток диплоидных фибробластов человека Ь-68. Любая из исследованных мутаций приводила к падению удельной антивирусной активности мутантной молекулы. Вместе с тем, на антивирусную активность мутантов, измеренную в системе вирус везикулярного стоматита/клетки Ь-68, практически не повлияли мутации В38, С>133, А10. Причины данного явления остаются не установленными. Как было показано, делеция аминокислотных остатков (А 10) или вставка протяженного полипептидного фрагмента в С-концевой области молекулы у-интерферона не изменило как ее антипролиферативную, так и фагоцитоз-стимулируюшую активности. Таким образом, впервые охарактеризованы мутанты гамма-интерферона, у которых значительно понизилась антивирусная активность, константа связывания с клеточным специфическим рецептором, но одновременно не изменились их иммуномодулирующие активности. Такие аналоги

представляют значительный интерес при изучении механизмов реализации ре-гуляторных функций у-интерферона.

Исследовано развитие иммунного ответа у кроликов на введение гибридного белка ИФН-АФП. Оценка клеточного иммунитета с помощью реакции гиперчувствительности замедленного типа и реакции бласттрансформации лимфоцитов не выявила формирование клеточного ответа на АФП-компоненту гибридного белка. Изучение титра антител против АФП в сыворотке иммунизированных животных подтвердило, что их уровень значительно выше при использовании гибридного белка ИФН-АФП, чем в любых других вариантах иммунизации. Полученные данные позволяют высказать предположение о перспективности использования гибридных белков на основе у-интерферона для получения антисывороток против низкоиммуногенных антигенов.

Впервые экспериментально доказана возможность использования для мутагенеза олигонуклеотидов, модифицированных 4-аминооксибутиламином. Модификация олигонуклеотида происходит по цитидинам, а в районе, комплементарном модифицированному олигонуклеотиду, индуцируются исключительно G А транзиции. Показана возможность введения мутаций с помощью данного мутагена в более протяженные участки генома. Для этих целей получают гетеродуплекс ДНК, содержащий одноцепочечный участок, подлежащий мутагенезу, и обрабатывают его 4-аминооксибутиламином, после чего данным гете-родуплексом можно трансформировать компетентные клетки. Новизна данного метода заключается в том, что не требуется, в отличие от традиционного способа, достраивать комплементарную цепь ДНК in vitro. Таким методом получены мутантные гены у-интерферона, наличие мутаций в одном из них доказано сек-венированием и показано, что в гене индуцируются С —> Т транзиции. Синтезирован новое соединение М4-(4-аминобутокси)дезоксицитидин-5'-трифосфат, способное индуцировать мутации. Показано, что данный модифицированный трифосфат включается как вместо dCTP, так и dTTP при ферментативном синтезе комплементарной цепи ДНК in vitro и индуцирует в первом случае G -» А, а во втором А —» G транзиции. Применение данного мутагена позволяет вводит мутации в район гена, прилегающий к 3'-концу используемого праймера.

Практическая ценность работы.

Охарактеризованные мутантные белки могут быть использованы для изучения механизма действия у-интерферона, а разработанный новый комплекс методов направленного мутагенеза может быть применен как для получения других аналогов уИФН и созданию на их основе новых перспективных лекарственных препаратов, так и для решения задач по структурно-функциональному исследованию генов, геномов и других белков.

Положения, выносимые на защиту.

1) Получение гибридного белка, состоящего из у-интерферона человека к С-концу которого присоединен фрагмент а-фетопротеина человека (ИФН-АФП). Этот белок позволяет получить дополнительные данные о роли С-конца в функционировании всей молекулы уИФН.

2) Точечные замены (В38, Б92, (2133), удаление 10 остатков (Л10) и вставка белкового фрагмента в С-концевой области не препятствуют образованию димеров. Спектры кругового дихроизма мутантных белков (за исключением гибридного белка ИФН-АФП) не отличаются от спектра исходного рекомби-нантного у-интерферона, что свидетельствует о неучастии С-конца в формировании вторичной и третичной структуры белка. Влияние точечных замен, делеции или вставки в С-концевой области молекулы у-интерферона на константу связывания со специфическим клеточным рецептором.

3) Влияние мутаций на антивирусную, антипролиферативную и фагоцитоз-стимулирующие активности мутантных у-интерферонов. Любая из исследованных мутаций (за исключением В38) приводит к падению удельной антивирусной активности. Установление факта, что делеция или вставка в С-концевой области молекулы у-интерферона не оказывают влияние на антипролиферативную и фагоцитоз-стимулирующую активности.

4) Усиление гуморального иммунного ответа на АФП при иммунизации гибридным белком ИФН-АФП по сравнению с другими белками.

5) Использование 4-аминооксибутиламина и его производных в качестве мутагена для разработки методов локализованного мутагенеза.

6) Разработка трех методов локализованного мутагенеза, позволяющих вводить мутации в районы ДНК различной протяженности.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Цивковский, Руслан Юрьевич

Выводы

1. Впервые показано, что точечные замены (В38, Б92, СНЗЗ) или удаление 10 остатков (А 10) С-концевой области молекулы у-интерферона не препятствуют образованию димеров. Спектры кругового дихроизма мутантных белков (за исключением гибридного белка ИФН-АФП) не отличаются от спектра исходного рекомбинантного у-интерферона. Выявлено значительное влияние точечных замен, делеции или вставки в С-концевой области молекулы у-интерферона на константу связывания со специфическим клеточным рецептором.

2. Изучено влияние мутаций в С-конце у-интерферона на его антивирусную, антипролиферативную и фагоцитоз-стимулирующие активности. Обнаружено, что все мутации (за исключением В38) приводили к падению удельной антивирусной активности. Установлено, что делеция или вставка в С-концевой области молекулы у-интерферона не повлияли на антипролиферативную и фагоцитоз-стимулируюшую активности. Впервые охарактеризованы аналоги у-интерферона, у которых значительно понизилась антивирусная активность, константа связывания со специфическим клеточным рецептором, но сохранились иммуномодулирующие активности.

3. Установлено, что в сыворотке животных, иммунизированнных гибридным белком ИФН-АФП, титры антител против АФП значительно выше, чем при любом другом варианте иммунизации. Полученные данные позволяют высказать предположение о перспективности использования гибридных белков на основе у-интерферона для получения антисывороток против слабых им-муногенов.

4. Впервые экспериментально доказана возможность использования для мутагенеза олигонуклеотидов, модифицированных 4-аминооксибутиламином. Показано, что модификация олигонуклеотидов происходит по цитозиновым основаниям, а в районе, комплементарном олигонуклеотиду, индуцируются исключительно в —»А транзиции.

5. Разработан метод мутагенеза, основанный на модификации 4-аминооксибутиламином гетеродуплекса ДНК с одноцепочечным участком.

Новизна метода заключается в том, что не требуется, в отличие от традиционного способа, достраивать комплементарную цепь ДНК in vitro. Данным методом получены новые мутантные гены у-интерферона.

6. Синтезировано новое соединение м4-(4-аминобутокси)-дезоксицитидин-5' -трифосфат, которое способно включается как вместо dCTP, так и dTTP при ферментативном синтезе комплементарной цепи ДНК in vitro и индуцировать в первом случае G—>А, а во втором A—>G транзиции.

Заключение. уИФН человека - белок, обладающий широким спектром биологических функций и представляет практический интерес в качестве перспективного медицинского препарата. Несмотря на многолетнюю историю изучения уИФН, он и по сей день остается объектом пристального внимания ученых благодаря своей необычайно широкой и, возможно, до конца еще не открытой функциональной активности. Совсем недавно, например, появились данные об использовании уИФН для лечения туберкулеза, одного из тяжелейших инфекционных заболеваний человека, непрерывный рост которого наблюдается сейчас в России. В то же время, его структурно-функциональная организация недостаточно хорошо изучена. Особенно это касается его С-концевой части, где экспериментальные данные достаточно противоречивы. Для выяснения функциональной роли С-конца и его отдельных остатков были исследованы физико-химические и биологические свойства ряда С-концевых мутантов уИФН

С помощью олигонуклеотид-направленного мутагенеза были введены точечные мутации в этом районе в позициях - 129-11К-130 (В38), 139-1111-140 (Т)92) и С>133 (С)133). Изучение физико-химических свойств этих мутантов показало, что они не оказывают влияния на димерную и вторичную структуру уИФН. В то же время эти участки оказались важными для проявления антивирусной активности уИФН, так как описанные аминокислотные замены приводят к существенному ее понижению.

Для исследования общей структурно-функциональной роли С-конца были протестированы еще два аналога уИФН - вариант с делецией 10 С-концевых аминокислот (А 10) и гибридный белок ИФН-АФП, в котором к С-концу уИФН был присоединен фрагмент а-фетопротеина человека. Оба этих белка сохранили вторичную и димерную структуру, характерную для исходного уИФН. Однако, их способность связываться с клеточным рецептором понизилась в 10 и 100 раз соответственно, а антивирусная активность - в 100 и 1000 раз. В то же время эти аналоги обладали антипролиферативными и фагоцитоз-стимулирующими свойствами аналогично рекомбинантному уИФН. Это говорит об отсутствии корреляции между антивирусной, антипролиферативной и фагоцитоз-стимулирующей активностью уИФН, поскольку ни удаление С-конца уИФН, ни присоединение к нему фрагмента АФП не влияют на способность белка активировать макрофаги и на его антипролиферативные свойства, в тоже время, существенно снижается его антивирусная активность.

Из литературы известно, что уИФН обладает иммуностимулирующими свойствами в отношении различных антигенов. Так как а-фетопротеин является слабым иммуногеном и антитела к нему обычными методами получить чрезвычайно трудно, представляло интерес изучить способность уИФН в составе гибридного белка ИФН-АФП усиливать иммунный ответ к АФП. В результате эксперимента было показано, что гибридный белок ИФН-АФП при иммунизации индуцирует более высокий титр антител к АФП, чем сам АФП, простая смесь уИФН и АФП, а также гибридный белок Р-галактозидаза-АФП, который использовали в качестве контроля. Возможно, это обусловлено физической близостью АФП и уИФН в составе гибридной молекулы, в результате чего иммуностимулирующие свойства уИФН проявились наиболее ярко. Аналогичные конструкции могут быть полезными для усиления гуморального иммунного ответа на другие слабые иммуногены.

В первой части работы были исследованы различные свойства С-концевых аналогов уИФН, полученных в основном методом олигонуклеотид-направленного мутагенеза. Однако, в основном, этот метод позволяет вводить только точечные замены. В то же время, получение обширного банка генов уИФН позволило бы расширить количество исследуемых аминокислот как на С-конце, так и в других частях молекулы. Эту задачу можно решить применением методов статистического локализованного мутагенеза,.

Разработке новых методов локализованного мутагенеза, основанных на использовании 4-аминооксибутиламина, модифицированного им олигонуклео-тида и К4-(4-аминобутокси)дезоксицитидин-5'-трифосфата и посвящен второй раздел диссертации.

Было показано, что 4-аминооксибутиламин взаимодействует с остатками дезоксицитидина с образованием двух таутомерных форм: имино- и амино-, в результате чего индуцируются транзиции С-»Т, либо 0-»А в комплементарной цепи ДНК при проведении сегмент-локализованного мутагенеза.

На основании этих данных были разработаны три метода сегмент-локализованного мутагенеза, позволяющие вводить мутации в районы ДНК различной протяженности:

1. введение мутаций с помощью модифицированного олигонуклеотида, используемого в качестве праймера для достройки комплементарной цепи ДНК;

2. введение мутаций путем модификации одноцепочечного участка в ДНК-дуплексе с последующей трансформацией им компетентных клеток;

3. введение мутаций в ходе ферментативной достройки ДНК in vitro при использовании модифицированного цитидин-5'-трифосфата.

Предлагаемые методы введения мутаций просты в исполнении и не требуют сложной методической базы. Они позволяют вести отбор мутантных вариантов секвенированием небольшого числа случайно отобранных клонов и пригодны для введения фенотипически нетестируемых мутаций. Несомненно, эти методы могут использоваться для решения различных задач в молекулярной биологии и генной инженерии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Цивковский, Руслан Юрьевич, 1999 год

Литература:

1) Wheelock E.F. Interferon-like virus-inhibitor induced in human leukocytes by phytohemagglutinin. //Science. (1965). V.149., 310-311.

2) Devos R., Cheroute H., Taya Y., Degrave W. et al. Molecular cloning of human immune interferon cDNA and its expression in eukariotic cells. // Nucleic Acids Res. (1982). V. 10., 2487-2501.

3) Gray P.W., Leung D.W., Pennica D., Yelverton E. et al. Expression of human immune interferon cDNA in E.coli and monkey cells. // Nature. (1982). V. 295., 859-863.

4) Yphantis D.A. and Arakawa T. Sedimentation equilibrium measurements of recombinant DNA derived human interferon y. // Biochemistry. (1987). V. 26., 5422-5427.

5) Ealick S.E., Cook W.J., Vijay-Kumar S., Carson M et al. Three-dimensional structure of recombinant human interferon-y. // Science. (1991). V. 252., 698-702.

6) Rinderknecht E., O'Connor B.H. and Rodriguez H. Natural human interferon-gamma. Complete amino acid sequence and determination of sites of glycosilation. // J. Biol. Chem. (1984). V. 259., 6790-6797.

7) Curling E.M.A., Hayter P.M., Baines A.J., Bull A.T. et al. Recombinant human interferon-gamma. Differences in glycosilation and proteolytic processing lead to heterogeneity in batch culture. // Biochem. J. (1990). V. 272., 333-337.

8) Arakawa T. and Hsu Y.-R. Acid unfolding and self-association of recombinant E.coli derived human interferony. // Biochemistry. (1987). V. 26., 5428-5432.

9) Hogrefe H.Y., McPhie P., Bekisz J.B. et al. Amino terminus is essential to the structural integrity of recombinant human interferon-gamma. // J. Biol. Chem. (1989). V. 264., 12179-12186.

10) Farrar M.A. and Schreiber R.D. The molecular cell biology of interferon-y and its receptor. // Annu. Rev. Immunol. (1993). V. 11., 571-611.

11)Aguet M., Dembic Z. and Merlin G. Molecular cloning and expression of the human interferon-gamma receptor. // Cell. (1988). V. 55., 273-280.

12) Jung V., Jones C., Kumar C.S., Stefanos S. et al. Expression and reconstitution of a biologically active human interferon-y receptor in hamster cells. // J. Biol. Chem. (1990). V. 265., 1827-1830.

13) Soh J., Donnelly R.J., Kotenko S., Mariano T.M. et al. Identification and sequence of an accessory factor required for activation of the human interferon-y receptor. // Cell. (1994). V. 76., 793-802.

14) Bach E.A., Aguet M. and Schreiber R.D. The IFNy receptor: a paradigm for cytokine receptor signalling. // Annu. Rev. Immunol. (1997). V. 15., 563-591.

15) Pfizenmaier K., Wiegmann K., Scheurich P., Kronke M. et al. High affinity human IFN-gamma-binding capacity is encoded by a single receptor gene located in proximity to c-ras on human chromosome region 6ql6 to 6q22. // J. Immunol. (1988). V. 141., 856-860.

16) Ebensperger C., Rhee S., Muthukumaran G., Lembo D. et al. Genomic organisation and promoter analysis of the gene ifhgr2 encoding the second chain of the mouse interferon-gamma receptor. It Scand. J. Immunol. (1996). V. 44., 599606.

17) Rhee S., Ebensperger C., Dembic Z. and Pestka S. The structure of the gene for the second chain of the human interferon-gamma receptor. // J. Biol. Chem. (1996) V. 271., 28947-28952.

18) Bach E.A., Tanner J.W., Marsters S.A., Ashkenazi A. et al. Ligand-induced assembly and activation of the gamma interferon receptor in intact cells. // Mol. Cell. Biol. (1996). V. 16., 3214-3221.

19) Sakatsume M., Igarashi K., WinestockK.D., Garotta G. et al. The JAK kinases differentially associate with the a and P (accessory factor) chains of the interferon y receptor to form a functional receptor unit capable of activating STAT transcription factors. //J. Biol. Chem. (1995). V. 270., 17528-17534.

20) Kaplan D.H., Greenlund A.C., Tanner J.W., Shaw A.S. et al. Identification of an interferon-y receptor a chain sequence required for JAK-1 binding. // J. Biol. Chem. (1996). V. 271., 9-12.

21) Kotenko S., Izotova L., Pollack B., Mariano T. et al. Interaction between the components of the interferon y receptor complex. // J. Biol. Chem. (1995). V. 270., 20915-20921.

22) Greenlund A.C., Schreiber R.D., Goeddel D.V. and Pennica D. Interferon-y induces receptor dimerization in solution and on cells. // J. Biol. Chem. (1993). V. 268., 18103-18110.

23) Fountoulakis M., Lahm H.W., Maris A., Freidlein A. et al. A 25-kDa stretch of the extracellular domain of the human interferon y receptor is required for full ligand binding capacity. // J. Biol. Chem. (1991). V. 266., 970-977.

24) Axelrod A., Gibbs V.C. and Goeddel D.V. The interferon-gamma receptor extracellular domain. Non-identical requirements for ligand binding and signalling. //J. Biol. Chem. (1994). V. 269., 15533-15539.

25) Walter M.R., Windsor W.T., Nagabhushan T.L., Lundel D.J. et.al. Crystal structure of a complex between interferon-y and its soluble high affinity receptor. // Nature. (1995). V. 376., 230-235.

26) Marsters S., Pennica D., Bach E., Schreiber R.D. et al. Interferon y signals via a high-affinity multisubunit receptor complex that contains two types of polypeptide chain. // Proc. Natl. Acad. Sci. (1995). V. 92., 5401-5405.

27) Greenlund A.C., Farrar M.A., Viviano B.L. and Schreiber R.D. Ligand-induced IFN-y receptor phosphorylation couples the receptor to its signal transduction system (p91). //EMBO J. (1994). V. 13., 1591-1600.

28) Igarashi K., Garotta G., Ozmen L., Ziemiecki A. et al. Interferon-y induces tyrosine phospho-rylation of interferon y receptor and regulated association of protein tyrosine kinases, Jakl and Jak2 with its receptor. // J. Biol. Chem. (1994). V. 269., 14333-14336.

29) Greenlund A.C., Morales M.O., Viviano B.L., Yan H. et al. STAT recruitment by tyrosine-phosphorylated cytokine receptors: an ordered reversible affinity-driven process. // Immunity. (1995). V. 2., 677-687.

30) Heim M.H., Kerr I.M., Stark G.R. and Darnell J.E. Contribution of STAT SH2 groups to specific interferon signaling by the Jak-STAT pathway. // Science. (1995). V. 267., 1347-1349.

31) Shuai K., Schindler C., Prezioso V.R. and Darnell J.E. Activation of transcription by IFN-y: tyrosine phosphorylation of a 91-kD DNA binding protein. // Science. (1992). V. 258., 1808-1812.

32) Shuai K., Stark G.R., Kerr I.M. and Darnell J.M. A single phosphotyrosine residue of stat 91 required for gene activation by interferon-y. // Science. (1993). V. 261., 1744-1746.

33) Shuai K., Horvath C.M., Huang L.H.T., Qureshi S.A. et al. Interferon activation of the transcription factor stat91 involves dimerization through SH2-phosphotyrosyl peptide interactions. // Cell. (1994). V. 76., 821-828.

34) Wen Z., Zhong Z. and Darnell J.E. Maximal activation of transcription by Statl and Stat3 requires both tyrosine and serine phosphoiylation. // Cell. (1995). V. 82., 241-50.

35) Celada A. and Schreiber R.D. Internalization and degradation of receptor-bound interferon-y by murine macrophages. Demonstration of receptor recycling. // J. Immunol. (1987). V. 139., 147-53.

36) Anderson P., Yip Y.K. and Vilcek J. Human interferon-gamma is internalized and degraded by cultured fibroblasts. // J. Biol. Chem. (1983). V. 258., 6497-6502.

37) Finbloom D.S. Internalization and degradation of human recombinant interferon-gamma in the human histocytic lymphoma cell line, U937, relationship to Fc receptor enhancement and antiproliferation. // Clin. Immunol. Immunopathol.

(1988). V. 47., 93-105.

38) Bader T. and Wietzerbin J. Nuclear accumulation of interferon-y. // Proc. Natl. Acad. Sci. (1994). V. 91., 11831-11835.

39) Mosmann T.R. and Coffinan R.L. TH1 and TH2 cells: different patterns of lym-phokine secretion lead to different functional properties. // Annu. Rev. Immunol.

(1989). V. 7., 145-173.

40) Seder R.A. and Paul W.E. Acquisition of lymphokine-producing phenotype by CD4+ T cells. // Annu. Rev. Immunol. (1994). V. 12., 635-673.

41) Reiner S.L. and Locksley R.M. The regulation of immunity to Leishmania major. //Annu. Rev. Immunol. 1995. V. 13., 151-177.

42) Hsieh C.S., Macatonia S., Tripp C.S., Wolf S.F. et al. Development of TH1 CD4+ T cells through IL-12 produced by Listeria-induced macrophages. // Science. (1993). V. 260., 547-549.

43) Bradley L.M., Dalton D.K. and Croft M. A direct role for IFN-y in regulation of Thl cell development. //J. Immunol. (1996). V. 157., 1350-1358.

44) Graham M., Dalton D.K., Giltinan D., Braciale V.L. et al. Response to influenza infection in mice with a targeted disruption in the interferon-y gene. // J. Exp. Med. (1993). V. 178., 1725-1732.

45) Schijns V.E., Haagmans B.L., Rijke E.O., Huang S. et al. IFN-y receptor-deficient mice generate antiviral Thl-characteristic cytokine profiles but altered antibody responses. //J. Immunol. (1994). V. 153., 2029-2037.

46) Trinchieri G. Interleukin-12: a proinflammatory cytokine with immunoregulatory functions that bridge innate resistance and antigen-specific adaptive immunity. // Annu. Rev. Immunol. (1995). V. 13., V. 251-276.

47) Yoshida A., Koide Y., Uchijima M. and Yoshida T.O. IFN-y induces IL-12 mRNA expression by a murine macrophage cell line, J774. // Biochem. Biophys. Res. Commun. (1994). V. 198., 857-861.

48) Wenner C.A., Guler M.L., Macatonia S.E., O'Garra A. et al. Roles of IFN-y and IFN-a in IL-12-induced T helper cell-1 development. // J. Immunol. (1996). V. 156., 1442-1447.

49) Szabo S.J., Dighe A.S., Gubler U. and Murphy K.M. Regulation of the interleukin (IL)-12R beta 2 subunit expression in developing T helper 1 (Thl) and Th2 cells. // J. Exp. Med. (1997). V. 185., 817-824.

50) Szabo S J., Jacobson N.G., Dighe A.S., Gubler U. et al. Developmental commitment to the Th2 lineage by extinction of 11.-12 signaling. // Immunity. (1995). V. 2., 665-675.

51)Gajewski T.F. and Fitch F.W. Anti-proliferative effect of IFN-y in immune regulation. I. IFN-y inhibits the proliferation of Th2 but not Thl murine helper T lymphocyte clones. //J. Immunol. (1988). V. 140., 4245-4252.

52) Maggi E., Parronchi P., Manetti R., Simonelli C. et al. Reciprocal regulatory effects of IFN-y and IL-4 on the in vitro development of human Thl and Th2 clones. //J. Immunol. (1992). V. 148., 2142-2147.

53) Severinson E., Fernandez C. and Stavnezer J. Induction of germ-line immunoglobulin heavy chain transcripts by mitogens and interleukins prior to switch recombination. //Eur. J. Immunol. (1990). V. 20., 1079-1084,

54) Collins J.T. and Dunnick W.A. Germline transcripts of the murine immunoglobulin g2a gene: structure and induction by IFN-y. // Int. Immunol. (1993). V. 5., 885891.

55) Snapper C.M., Mclntyre T.M., Mandler R., Pecanha L.M.T. et al. Induction of IgG3 secretion by interferon-y: a model for T cell-independent class switching in response to T cell-independent Type 2 antigens. // J. Exp. Med. (1992). V. 175., 1367-1371.

56) Huang S., Hendriks W., Althage A., Hemmi S. et al. Immune response in mice that lack the interferon-y receptor. // Science. (1993).V. 259., 1742-1745.

57) Snapper C.M. and Paul W.E. Interferon-y and B cell stimulatory factor-1 reciprocally regulate Ig isotype production. // Science. (1987). V. 236., 944-947.

58) Berton M.T. and Linehan L.A, IL-4 activates a latent DNA-binding factor that binds a shared IFN-y and IL-4 response element present in the germ-line y-1 Ig promoter. //J. Immunol. (1995). V. 154., 4513-4525.

59) Shimoda K., van Deursen J., Sangster MY., Sarawar SR. et al. Lack of IL-4-induced Th2 response and IgE class switching in mice with disrupted Stat6 gene. // Nature. (1996). V. 380., 630-633.

60) York I.A. and Rock K.L. Antigen processing and presentation by the class I major histocompatibility complex. // Annu. Rev. Immunol. (1996). V. 14., 369-396.

61) Groettrup M., Kraft R., Kostka S., Standera S. et al. A third interferon-y-induced subunit exchange in the 20S proteasome. // Eur. J. Immunol. (1996). V. 26., 863869.

62) Beck S., Kelly A., Radley E., Khurshid F. et al. DNA sequence analysis of 66 kb of the human MHC class II region encoding a cluster of genes for antigen processing. // J. Mol. Biol. (1992). V. 228., 433-441.

63) Dick T.P., Ruppert T., Groettrup M., Kloetzel P.M. et al. Coordinated dual cleavages induced by the proteasome regulator PA28 lead to dominant MHC ligands. // Cell (1996). V. 86., 253-262.

64) Beninga J., Rock K.L. and Goldberg A.L. Interferon-gamma can stimulate post-proteasomal trimming of the N terminus of an antigenic peptide by inducing leucine aminopeptidase. //J. Biol. Chem. (1998). V. 273., 18734-18742.

65) Epperson D.E., Arnold D., Spies Т., Cresswell P. et al. Cytokines increase transporter in antigen processing-1 expression more rapidly than HLA class I expression in endothelial cells. // J. Immunol. (1992). V. 149., 3297-3301.

66) Chang C.H., Hammer J., Loh J.E., Fodor W.I. et al. The activation of major histocompatibility complex class I genes by interferon regulatory factor-1 (IRF-1). //Immunogenetics. (1992). V. 35., 378-84.

67) Blanar M.A., Baldwin A.S. Jr., Flavell R.A. and Sharp P.A. A y-interferon-induced factor that binds the interferon response sequence of the MHC class I gene, H-2Kb. // EMBO J. (1989). V. 8., 1139-1144.

68) Drew P.D., Lonergan M., Goldstein M.E., Lampson L.A. et al. Regulation of MHC class I and (^-microglobulin gene expression in human neuronal cells. Factor binding to conserved cis-acting regulatory sequences correlates with expression of the genes. //J. Immunol. (1993). V. 150., 3300-3310.

69) Mach В., Steimle V., Martinez-Soria E. and Reith W. Regulation of MHC class II genes: lessons from a disease. // Annu. Rev. Immunol. (1996). V. 14., 301-331.

70) Kern I., Steimle V., Siegrist C.A. and Mach B. The two novel MHC class II trans-activators RFX5 and CIITA both control expression of HLA-DM genes. // Int. Immunol. (1995). V. 7., 1295-1299.

71) Glimcher L.H. and Kara C.J. Sequences and factors: a guide to MHCclass-II transcription. //Annu. Rev. Immunol. (1992). V. 10., 13-49.

72) Йоклик B.K. Интерфероны. "Вирусология." M. "Мир", 1989., 35-88.

73) van den Broek M.F., Muller U., Huang S., Aguet M. Antiviral defense in mice lacking both alpha/beta and gamma interferon receptors. // J. Virol. (1995). V. 69., 4792-4796.

74) Utermohlen O., Dangel A., Tarnok A. and Lehmann-Grube F. Modulation by gamma interferon of antiviral cell-mediated immune responses in vivo. // J. Virol. (1996). V. 70., 1521-1526.

75) Hovanessian A.G. Interferon-induced dsRNA-activated protein kinase (PKR): antiproliferative, antiviral and antitumoral functions. // Semin. Virol. (1993). V. 4., 237-245.

76)Tanaka H. and Samuel C.E. Mechanism of interferon action: structure of the mouse PKRgene encoding the interferon-inducible RNA-dependent protein kinase. //Proc. Natl. Acad. Sci. (1994). V. 91., 7995-7999.

77) Beretta L., Gabbay M., Berger R., Hanash S.M. et al. Expression of the protein kinase PKR is modulated by IRF-1 and is reduced in 5q-associated leukemias. // Oncogene. V. 12., 1593-1596.

78) Meurs E.F., Watanabe Y., Kadereit S., Barber G.N. et al. Constitutive expression of human double-stranded RNA-activated p68 kinase in murine cells mediates phosphorylation of eukaryotic initiation factor 2 and partial resistance to encephalomyocarditis virus growth. //J. Virol. (1992). V. 66., 5804-5814.

79) Lee S.B. and Esteban M. The interferon-induced double-stranded RNA-activated human p68 protein kinase inhibits the replication of vaccinia virus. // Virology. (1993). V. 193., 1037-1041.

80) Yang Y.L., Reis L.F., Pavlovic J., Aguzzi A. et al. Deficient signaling in mice devoid of double-stranded RNA-dependent protein kinase. // EMBO J. (1995). V. 14., 6095-6106.

81) Hovanessian A.G. Interferon-induced and double-stranded RNA-activated enzymes: a specific protein kinase and 2',5'-oligoadenylate synthetases. // J. Interferon Res. (1991). V. 11., 199-205.

82) Silverman R.H. and Cirino N.M. 1997. In mRNA Metabolism and Post-Transcriptional Gene Regulation, ed. DR Morris, JB Harford, pp. 295-309. New York: Wiley & Sons.

83) Williams B.R.G. and Kerr I.M. Inhibition of protein synthesis by 2'-5' linked adenine oligonucleotides in intact cells. //Nature. (1978). V. 276., 88-90.

84) Chebath J., Benech P., Hovanessian A., Galabru J. et al. Four different forms of interferon-induced 2',5'-oligo(A) synthetase identified by immunoblotting in human cells. //J. Biol. Chem. (1987). V. 262., 3852-3857.

85) Witt P.L., Marie I., Robert N., Irizarry A. et al. Isoforms p69 and plOO of 2',5'-oligoadenylate synthetase induced differentially by interferons in vivo and in vitro. // J. Interferon Res. (1993). V. 13., 17-23.

86) Schmidt A., Chernajovsky L., Shulman L., Federman P. et al. An interferon-induced phosphodiesterase degrading (2'-5') oligoisoadenylate and the C-C-A terminus oftRNA. //Proc. Natl. Acad. Sci. (1979). V. 76., 4788-4792.

87) Kimura T., Nakayama K., Penninger J., Kitagawa M. et al. Involvement of the IRF-1 transcription factor in antiviral responses to interferons. // Science. (1994). V. 264., 1921-1924.

88) Cohen B., Peretz D., Vaiman D., Benech P. et al. Enhancer-like interferon responsive sequences of the human and murine (2'-5') oligoadenylate synthetase gene promoters. // EMBO J. (1988). V. 7., 1411-1419.

89) Truve E., Aaspollu A., Honkanen J., Puska R. Et al. Transgenic potato plants expressing mammalian 2'-5' oligoadenylate synthetase are protected from potato virus X infection under field conditions. // BioTechnology. (1993). V. 11., 10481052.

90) Mitra A., Higgins D.W., Langenberg W.G., Nie H.Q. et al. A mammalian 2-5A system functions as an antiviral pathway in transgenic plants. // Proc. Natl. Acad. Sci. (1996). V. 93., 6780-6785.

91) Bass B.L., Weintraub H., Cattaneo R. and Billeter M.A. Biased hypermutation of viral RNA genomes could be due to unwinding/ modification of double-stranded RNA [letter], //Cell. (1989). V. 56., 331.

92) Cattaneo R. and Billeter M.A. Mutations and A/I hypermutations in measles virus persistent infections. // Curr. Top. Microbiol. Immunol. (1992). V. 176., 63-74.

93) Patterson J.B., Thomis D.C., Hans S.L. and Samuel C.E. Mechanism of interferon action: double-stranded RNA-specific adenosine deaminase from human cells is inducible by a- and y-interferons. // Virology. (1995). V. 210., 508-511.

94) Karupiah G., Xie Q.W., Buller R.M.L., Nathan C. et al. Inhibition of viral replication by interferon-y-induced nitric oxide synthase. // Science. (1993). V. 261., 1445-1448.

95) Horvath C.M. and Darnell J.E. The antiviral state induced by alpha interferon and gamma interferon requires transcriptionally active Statl protein. // J. Virol. (1996). V. 70., 647-650.

96) Ohta T., Ando O. and Kurimoto M. Establishment of new interferon-gamma-resistant mutant cells with dominant phenotypes. // J. Interferon Cytokine Res. (1995). V. 15., 153-160.

97) Buard A., Vivo C., Monnet I., Boutin C. et al. Human malignant mesothelioma cell growth: activation of janus kinase 2 and signal transducer and activator of transcription lalpha for inhibition by interferon-gamma. // Cancer Res. (1998). V. 58., 840-847.

98) Bromberg J.F., Horvath C.M., Wen Z., Schreiber R.D. et al. Transcriptionally active Statl is required for the antiproliferative effects of both interferon alpha and interferon gamma. // Proc. Natl. Acad. Sci. (1996). V. 93., 7673-7678.

99) Shuai K., Liao J. and Song M.M. Enhancement of antiproliferative activity of gamma interferon by the specific inhibition of tyrosine dephosphorylation of Statl. // Mol. Cell Biol. (1996). V. 16., 4932-4941.

100) Xu J., Kim S., Chen M., Rockow S. et al Blockage of the early events of mitogenic signaling by interferon-gamma in macrophages in response to colony-stimulating factor-1. // Blood. (1995). V. 86., 2774-2788.

101) Kumar R. and Mendelsohn J. Reduced expression of c-erbB2 gene product in human mammary carcinoma SK-BR-3 cells treated with interferon-gamma and tumor necrosis factor-alpha. //Anticancer Res. (1994). V. 14., 1001-1008.

102)Hobeika A.C., Etienne W., Cruz P.E., Subramaniam P.S. et al. IFNgamma induction of p21WAFl in prostate cancer cells: role in cell cycle, alteration of phenotype and invasive potential. // Int. J. Cancer. (1998). V. 77., 138-145.

103) Palumbo A., Bruno B., Boccadoro M. and Pileri A. Interferon-gamma in multiple myeloma. // Leuk. Lymphoma. (1995). V. 18., 215-219.

104) Arany I., Rady P. and Tyring S.K. Interferon treatment enhances the expression of underphosphorylated (biologically-active) retinoblastoma protein in human papilloma virus-infected cells through the inhibitory TGF beta 1/IFN beta cytokine pathway. // Antiviral Res. (1994). V. 23., 131-141.

105) Gohji K., Fidler I.J., Tsan R., Radinsky R. et al. Human recombinant interferonsbeta and -gamma decrease gelatinase production and invasion by human KG-2 renal-carcinoma cells. // Int. J. Cancer. (1994). V. 58., 380-384.

106) Wu A.J., Kurrasch R.H., Katz J., Fox P.C. et al. Effect of tumor necrosis factor-alpha and interferon-gamma on the growth of a human salivary gland cell line. // J. Cell Physiol. (1994). V. 161., 217-226.

107) Sharma B. and Iozzo R.V. Transcriptional silencing of perlecan gene expression by interferon-gamma. //J. Biol. Chem. (1998). V. 273., 4642-4646.

108) Chon S.Y., Hassanain H.H., Pine R. and Gupta S.L. Involvement of two regulatory elements in interferon-gamma-regulated expression of human indoleamine 2,3-dioxygenase gene. // J. Interferon Cytokine Res. (1995). V. 15., 517-526.

109) Hassanain H.H., Chon S.Y. and Gupta S.L. Differential regulation of human indoleamine 2,3-dioxygenase gene expression by interferons-gamma and -alpha. Analysis of the regulatory region of the gene and identification of an interferon-gamma-inducible DNA-binding factor. // J. Biol. Chem. (1993). V. 268., 50775084.

110) Phan-Bich L., Buard A., Petit JF., Zeng L. et al. Differential responsiveness of human and rat mesothelioma cell lines to recombinant interferon-gamma. // Am. J. Respir. Ceil. Mol. Biol. (1997). V. 16., 178-186.

111) Gupta S.L., Carlin J.M., Pyati P., Dai W. et al. Antiparasitic and antiproliferative effects of indoleamine 2,3-dioxygenase enzyme expression in human fibroblasts. // Infect. Immun. (1994). V. 62., 2277-2284.

112) Angulo I., Rodriguez R., Garcia B., Medina M. et al. Involvement of nitric oxide in bone marrow-derived natural suppressor activity. Its dependence on IFN-gamma. //J. Immunol. (1995). V. 155., 15-26.

113) Nathan C.F., Murray H.W., Wiebe M.E. and Rubin B.Y. Identification of interferon-y as the lymphokine that activates human macrophage oxidative metabolism and antimicrobial activity. // J. Exp. Med. (1983). V. 158., 670-689.

114) Dalton D.K., Pitts-Meek S., Keshav S., Figari I.S. et al. Multiple defects of immune cell function in mice with disrupted interferon-y genes. // Science. (1993). V. 259., 1739-1742.

115) Kovarik P., Stoiber D., Novy M. and Decker T. Statl combines signals derived from IFN-gamma and LPS receptors during macrophage activation. // EMBO J. (1998). V. 17., 3660-3668.

116) Baggiolini M., Boulay F., Badwey J.A. and Curnutte J.T. Activation of neutrophil leukocytes: chemoattractant receptors and respiratoiy burst. // FASEB J. (1993). V. 7., 1004-1010.

117) Cassatella M.A., Bazzoni F., Flynn R.M., Dusi S. et al. Molecular basis of interferon-y and lipopolysaccharide enhancement of phagocyte respiratory burst capability. Studies on the gene expression of several NADPH oxidase components. //J. Biol. Chem. (1990). V. 265., 20241-20246.

118) Gupta J. W., Kubin M., Hartman L., Cassatella M. et al. Induction of expression of genes encoding components of the respiratory burst oxidase during

differentiation of human myeloid cell lines induced by tumor necrosis factor and y-interferon. // Cancer Res. (1992). V. 52., 2530-2537.

119)Eklund E.A. and Skalnik D.G. Characterization of a gp91-phox promoter element that is required for interferon-y-induced transcription. // J. Biol. Chem. (1995). V. 270., 8267-8273.

120) MacMicking J., Xie Q-W. and Nathan C. Nitric oxide and macrophage function. //Annu. Rev. Immunol. (1997). V. 15., 323-350.

121) Jun C.D., Han M.K., Kim U.H. and Chung H.T. Nitric oxide induces ADP-ribosylation of actin in murine macrophages: association with the inhibition of pseudopodia formation, phagocytic activity, and adherence on a laminin substratum. // Cell Immunol. (1996). V. 174., 25-34.

122) Wei X.Q., Charles I.G., Smith A., Ure J. et al. Altered immune responses in mice lacking inducible nitric oxide synthase. // Nature. (1995). V. 375., 408-411.

123) Baek K.J., Thiel B.A., Lucas S. and Stuehr D.J. Macrophage nitric oxide synthase subunits: purification, characterization and role of prosthetic groups and substrate in regulating their association into a dimeric enzyme. // J. Biol. Chem. (1993). V. 268., 21120-21129.

124) Di Silvio M., Geller D.A., Gross S.S., Nussler A. et al. Inducible nitric oxide synthase activity in hepatocytes is dependent on the coinduction of tetrahydro-biopterin synthesis. //Adv. Exp. Med. Biol. (1993). V. 338., 305-308.

125) Morris S.M. and Billiar T.R. New insights into the regulation of inducible nitric oxide synthase. //Am. J. Physiol. (1994). V. 266., E829-E839.

126) Xie Q.W., Whisnant R. and Nathan C. Promoter of the mouse gene encoding calcium-independent nitric oxide synthase confers inducibility by interferon-y and bacterial lipopolysaccharide. // J. Exp. Med. (1993). V. 177., 1779-1784.

127) Schiff D.E., Rae J., Martin T.R., Davis B.H. et al. Increased phagocyte Fc gammaRI expression and improved Fc gamma-receptor-mediated phagocytosis after in vivo recombinant human interferon-gamma treatment of normal human subjects. //Blood. (1997). V. 90., 3187-3194.

128) Van Weyenbergh J., Lipinski P., Abadie A., Chabas D. et al. Antagonistic action of IFN-beta and IFN-gamma on high affinity Fc gamma receptor expression in healthy controls and multiple sclerosis patients. // J. Immunol. (1998). V. 161., 1568-1574.

129) Pan L.F., Kreisle R.A. and Shi Y.D. Detection of Fcgamma receptors on human endothelial cells stimulated with cytokines tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and interferon-gamma (IFN-gamma). // Clin. Exp. Immunol. (1998). V. 112., 533-538.

130) Comber P.G., Lentz V. and Schreiber A.D. Modulation of the transcriptional rate of Fc gamma receptor mRNA in human mononuclear phagocytes. // Cell Immunol. (1992). V. 145., 324-338.

131) Heath A.W. Cytokines as immunological adjuvants. // Pharm. Biotechnol. (1995). V. 6., 645-658.

132) Nakamura M., Manser T., Pearson G.D.W., Daley M.J. and Gefter M.L. Effect of IFN on the immune response in vivo and on gene expression in vitro. // Nature. (1984). V. 307., 381.

133)Playfair J.H.L. and De Souza J.B. Recombinant gamma interferon is a potent adjuvant for a malaria vaccine in mice. // Clin. Exp. Immunol. (1987). V. 67., 5-10.

134) Heath A.W. and Playfair J.H.L. Conjugation of interferon-gamma to antigen enhances its adjuvanticity. // Immunology. (1990). V. 71., 454-456.

135) Pighetti G.M. and Sordillo L.M. Specific immune responses of dairy cattle after primary inoculation with recombinant bovine interferon-gamma as an adjuvant when vaccinating against mastitis. // Am. J. Vet. Res. (1996). V. 57., 819-824.

136) Murray P.J., Aldovini A. and Young R.A. Manipulation and potentiation of antimycobacterial immunity using recombinant bacille Calmette-Guerin strain that secrete cytokines. // Proc. Natl. Acad. Sci. (1996). V. 93., 934-939.

137) Maecker H.T., Umetsu D.T., DeKruyff R.H. and Levy S. DNA vaccination with cytokine fusion constructs biases the immune response to ovalbumin. // Vaccine. (1997). V. 15., 1687-1696.

138) Samudzi C.T., Burton L.E. and Rubin J.R. Crystal structure of recombinant rabbit interferon-gamma at 2.7-A resolution. // J. Biol. Chem. (1991). V. 266., 21791-21797.

139) Arakawa T., Hsu Y.R., Parker C.G. and Lai P.H. Role of polycationic C-terminal portion in the structure and activity of recombinant human interferon-gamma. // J. Biol. Chem. (1986). V. 261., 8534-8539.

140) Slodowsky O., Bohm J., Schone B. and Otto B. Carboxy terminal truncated rhuIFN-y with a substitution of Glnl33 or Serl32 to leucine leads to higher

biological activity than in the wild type. // Eur. J. Biochem. (1991). V. 202., 11331140.

141) Lundell D., Lunn C., Dalgarno D., Fossetta J. et al. The carboxyl-terminal region of human interferon gamma is important for biological activity: mutagenic and NMR analysis. // Protein Eng (1991). V. 4., 335-341.

142) Wetzel R., Perry L., Veilleux C., Chang G. Mutational analysis of the C-terminus of human interferon-y. // Protein Engineering. (1990). V. 3., 611-623.

143) Slodowsky O., Bohm J., Schone В., Otto B. Carboxy terminal truncated rhuIFN-y with a substitution of Glnl33 or Serl32 to leucine leads to higher biological activity than in the wild type. // Eur. J. Biochem. (1991). V. 202., 1133-1140.

144) Magazine H.I.,Carter J.M., Russel J.K. et. al. Use of synthetic peptides to identify an N-terminal epitope on mouse gamma-interferon that may be involved in function. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (1988). V.85., 1237-1241.

145) Seelig G.F., Wijdenes J., Nagabhushan T.L. and Trotta P.P. Evidence for a polypeptide segment at the carboxyl terminus of recombinant human gamma-interferon involved in expression of biological activity. // Biochemistry. (1988). V. 27., 1981-1987.

146) Фрейдлин И.С., Косицкая JI.C., Де Лей М., Михиелс Л. и др. Уточнение локализации рецепторсвязывающих сайтов молекулы человеческого у-интерферона с использованием синтетических пептидов, соответствующих его фрагментам. // Иммунология. (1998). № 3., 24-27.

147) Griggs N.D., Jarpe М.А., Расе J.L., Russell S.W. et al. The N-terminus and C-terminus of IFN-y are binding domains for cloned soluble IFN-y receptor. // J. Immunol. (1992). V. 149., 517-520.

148) Szente B.E. and Johnson H.M. Binding of IFN gamma and its C-terminal peptide to a cytoplasmic domain of its receptor that is essential for function. // Biochem. Biophys. Res. Commun. (1994). V. 201., 215-221.

149) Green M.M., Larkin J., Subramaniam P.S., Szente B.E. et al. Human IFN gamma receptor cytoplasmic domain: expression and interaction with HuIFN gamma. // Biochem. Biophys. Res. Commun. (1998). V. 243., 170-176.

150) Russell J.K., Hayes P.M., Carter B.A., Torres B.M. et al. Epitope and functional specificity of monoclonal antibodies to mouse interferon-y: the synthetic peptide approach. // J. Immunol. (1986). V. 136., 3324.

151) Schreiber R.D., Hicks L.J., Celada A., Buchmeier N.A. et al. Monoclonal antibodies to murine gamma-interferon which differentially modulate macrophage activation and antiviral activity. // J. Immunol. (1985). V. 134., 1609.

152) Favre C., Wijdenes J., Cabrillat H., Djossou O. et al. Epitope mapping of recombinant human gamma-interferon using monoclonal antibodies. // Molec. Immunol. (1989). V. 26., 17-25.

153) Ichimori Y., Kurokawa T., Honda S, Suzuki N. et. al. Monoclonal antobodies to human interferon-gamma. I. Antibodies to a synthetic carboxy-terminal peptide. // J. Immunol. Meth. (1985). V. 80, 55-66.

154) Leinikki P.O., Calderon J, Luquette M. and Schreiber R.D. Reduced receptor binding by a human interferon-y fragment lacking 11 carboxy-terminal amino acids. //J. Immunol. (1987). V. 139., 3360-3366.

155)Haelewyn J, Michiels L, Verhaert P, Hoylaerts M.F. et al. Interaction of truncated human interferon gamma variants with the interferon gamma receptor: crucial importance of Arg-129. //Biochem. J. (1997). V. 324, 591-595.

156) Rose K, Simona M.G, Offord R.E, Prior C.P. et al. A new mass spectrophotometric C-terminal sequensing finds a similarity between y-interferon and a2-interferon and identifies a proteolitically clipped y-interferon that retains full antiviral activity. // Biochem. J. (1983). V. 215, 273-277.

157)Lundell D.L. and Narula S.K. Structural elements required for receptor recognition of human interferon-gamma. //Pharmacol. Ther. (1994). V. 64, 1-21.

158) Szente B.E, Weiner I.J, Jablonsky M.J, Krishna N.R. et al. Structural requirements for agonist activity of a murine interferon-gamma peptide. // J. Interferon Cytokine Res. (1996). V. 16, 813-817.

159) Sadir R, Forest E. and Lortat-Jacob H. The heparan sulfate binding sequence of interferon-gamma increased the on rate of the interferon-gamma-interferon-gamma receptor complex formation. // J. Biol. Chem. (1998). V. 273, 10919-10925.

160) Kontsek P, Borecky L, Kontsekova E, Sujanova Z. and Novak M. Monoclonal antibodies neutralizing the antiviral and the antiproliferative activities of human interferon gamma. // Acta Virol. (1988). V. 32, 334-338.

161) Ichimori Y., Suzuki N., Kitada C. and Tsukamoto K. Monoclonal antibodies to human interferon-gamma. II: Antibodies with neutralizing activity. // Hybridoma.

(1987). V. 6., 173-181.

162) Lord S.C., McMullen G., Mazzuki S. and Cheetham B.F. Functional domains of human interferon gamma probed with antipeptide antibodies. // Molec. Immunol. (1989). V. 26., 637-640.

163) Rinderknecht E. and Burton L.E. // In The Biology of the Interferon System (Kircner H. and Schellekens J., eds.). Elsevier, Biomedical Press, Amsterdam. (1985). 415-423.

164) Kung H.-Fu., Fan Yu.C.E., Moschera Y. et al // Meth. Enzymol. (1986). V. 119., 204-210.

165) Dobeli H., Gentz R., Jucker W., Garotta G. et al. Role of the carboxy-terminal sequence on the biological activity of human immune interferon (IFN gamma). // J. Biotechnol. (1988). V. 7., 199-216.

166) Luk S.K., Jay E. and Jay F.T. Structure-function analysis of the human interferon gamma. The COOH terminus is not essential for functional activity. // J. Biol. Chem. (1990). V. 265., 13314-13319.

167) Sakaguchi M., Honda S., Ozawa M. and Nishimura O. Human interferon-gamma lacking 23 COOH-terminal amino acids is biologically active. // FEBS Letters.

(1988). V. 1-2., 201-204.

168) De la Maza L.M., Prterson E.M., Burton L.E., Gray P.W. et al. The antichlamydial, antiviral, and antiproliferative activities of human interferon-gamma are dependent on the integrity of the C-terminus of the interferon molecule. //Infect. Immun. (1987). V. 55., 2727-2733.

169) Lortat-Jacob H., Kleinman H.K. and Grimaud J.A. High-affinity binding of interferon-gamma to a basement membrane complex (Matigel). // J. Clin. Invest. (1991). V. 87.,

170) Lortat-Jacob H. and Grimaud J.A. Interferon-gamma binds to heparan sulfate by a cluster of amino acids located in the C-terminal part of the molecule. // FEBS Lett. (1991). V.

171) Lortat-Jacob H. and Grimaud J.A. Interferon-gamma C-terminal function: new working hypothesis. // Cell Mol. Biol. (1991). V. 37., 253-260.

172) Carter J.M., Torres B.A., Russell J.K., Johnson H.M. and Dunn B.M. Functional domains of gamma interferon assessed by synthetic peptides. // Fed. Proc. (1986). V. 45., 1546.

173) Cantell K., Schellekens H., Hitroven S., Van der Meide. and De Reus A. Pharmacokinetic studies with human and rat interferons in different species. // J. Interferon Res. (1986). V. 6., 671-675.

174) Smith M.R., Muegge K., Keller J.R., Kung H.F. et al. Direct evidence for an intracellular role for IFN-gamma. Microinjection of human IFN-gamma induces la expression on murine macrophages. // J. Immunol. (1990). V. 144., 1777-1782.

175) Sanceau J., Sondermeyer P., Beranger F., Falcoff R. et al. Intracellular human gamma-interferon triggers an antiviral state in transformed murine L cells. // Proc. Natl. Acad. Sci. (1987). V. 84., 2906-2910.

176) Kushnaryov V.M., MacDonald H.S., Sedmak J.J. and Grossberg S.E. The cellular internalization of recombinant gamma interferon differs from that of natural interferon gamma. // Biochem. Biophys. Res. Commun. (1988). V. 157., 109-114.

177) Zu X. And Jay F.T. // J. Biol. Chem. (1991). V. 266., 6023-6026.

178) Dingwall C. and Laskey R.A. Nuclear targeting sequences—a consensus? // Trends Biochem. Sci. (1991). V. 16., 478-481.

179) Johnson H.M., Torres B.A., Green M.M., Szente B.E. et al. Cytokine-receptor complexes as chaperones for nuclear translocation of signal transducers. // Biochem. Biophys. Res. Commun. (1998).V. 244., 607-614.

180) Szente B.E., Soos J.M. and Johnson H.W. The C-terminus of IFN gamma is sufficient for intracellular function. // Biochem. Biophys. Res. Commun. (1994). V. 203., 1645-1654.

181)Bohni R., Hemmi S. and Aguet M. Signaling steps involving the cytoplasmic domain of the interferon-gamma receptor alpha-subunit are not species-specific. // J. Biol. Chem. (1994). V. 269., 14541-14545.

182) Lewis J.A., Huq A., Liu W. and Jacob A. Induction of gene expression by intracellular interferon-gamma: abrogation of the species specificity barrier. // Virology. (1995). V. 212., 438-450.

183)Адаричев В., Дымшиц Г. и др. Получение ДНК, несущей алифатические аминогруппы и использование ее флуоресцентного производного в качестве

зонда при молекулярной гибридизации. // Биоорганическая химия. (1987). Т. 13., 1066-1069.

184)Gillam С. and Tener G. N4-(6-aminohexyl)cytidine and -deoxycytidine nucleotides can be used to label DNA. // Analytical biochemistry. (1986). V. 157., 199-207.

185)Ошевский С., Кумарев В., Грачев С. Включение в ДНК биотинилирован-ных аналогов dUTP и dCTP ДНК-полимеразами. // Биоорганическая химия. (1989). Т. 15., 1091-1099.

186) Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. 1989. Molecular cloning. A laboratory manual. 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, N.Y.

187) Laemmli U.K. //Nature. 1970. V.227. P.680-685.

188) Gershoni J.M., Palade G.E. Protein blotting: principles and applications. // Anal. Biochem. 1983. V.131. P. 1-15.

189) Sverdlov E., Tsarev S., Krykbaev R., Chernov I. and Rostapshov V. Trp operon induction during the expression in E. coli of two IFN-y sequences. // FEBS Letters. (1987). V. 212., 233-236.

190) Yousefi S., Escobar M.R., Gouldin C.W. // Am. J. Clinical Pathol. 1985. V. 83. P. 735-740.

191)Morinaga T., Sakai M., Wegmann T.G. and Tamaoki T. Primary structures of human alpha-fetoprotein and its mRNA. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1983). V. 80., 4604-4608.

192) Хоробрых В. В., Пронин А. В., Киркин А. Ф. и др. // Иммунология . (1983). N3., 76-79.

193)Deutsch H.F. Chemistry and biology of a-fetoprotein. // Adv. Cancer Res. (1991). V. 56., 253-312.

194) Yang F., Luna V.J., McAnelly R.D., Naberhaus K.H., Cupples R.L. and Bowman B.H. Evolutionary and structural relationships among the group-specific component, albumin and alfa-fetoprotein. // Nucleic Acids Res. (1985). V. 13., 8007-8017.

195) Mizejewski G.J. a-Fetoprotein as a biologic response modifier: relevance to domain and subdomain structure. // Proceedings of Society for Exprimental Biology and Medicine. (1997). V.215., 333-362.

196) Nishi S., Matsue H., Yoshida H., Yamaoto R. and Sakai M. Localization of the estrogen-binding site of a-fetoprotein in the chimeric human-rat proteins. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. (1991). V. 88., 3102-3105.

197) Aussei С. and Masseyeff R. Human a-fetoprotein fatty acid interactions. // Biochem. Biophys. Res. Commun. (1983). V. 115., 38-45.

198) Beide C.B., Nagai M. and Deutsch H.F. Human a-fetoprotein: fluorescense studies on binding and proximity relationships for fatty acids and bilirubin. // J. Biol. Chem. (1979). V. 254., 12609-12614.

199) Mizejewski G.J. An apparent dimerization motif in the third domain of alpha-fetoprotein: molecular mimicry of the steroid/thyroid nuclear receptor superfamily. // BioEssay. (1993). V. 15., 427-432.

200) Gibbs P.E., Zielinski R., Boyd C. and Dugaiczyk A. Structure, polymorphism, and novel repeated DNA elements revealed by a complete sequence of the human alpha-fetoprotein gene. // Biochemistry. (1987). V. 26., 1332-1343.

201) С. И. Татысов, О. Ю. Смирнова, Р. Ю. Цивковский, A.A. Ильичев. Гамма-интерфероны человека с измененным С-концом и их свойства. // Молекулярная биология. (1995). Т. 29., 1095-1101.

202) Boismenu R., Dubow M.S. and Murgita R.A. Expression of domains of mouse alpha-fetoprotein in Escherichia coli. // Life Sciences. (1988). V. 43., 673-681.

203) Nishi S., Koyama Y., Sakamoto Т., Soda M. and Kairiyama C.B. Expression of rat a-fetoprotein cDNA in Escherichia coli and in yeast. // J. Biochem. (1988). V. 104., 968-972.

204) Boismenu R., Semeniuk D.J. and Murgita R.A. Purification and characterization of human and mouse recombinant alpha-fetoproteins expressed in Escherichia coli. // Protein Expression Purification. (1997). 10-26.

205) Марстон Ф.А. Выделение эукариотических полипептидов, продуцируемых в клетках E.coli. // Новое в клонировании ДНК. Методы. Москва. «Мир» 1989. Стр. 95-137.

206)Arakawa Т., Alton N.K. and Hsu Y.-R. Preparation and characterization of recombinant DNA-derived human interferon-y. // J. Biol. Chem. (1985). V. 260., 14435-14439.

207) Bennett J.A., Semeniuk D.J., Jacobson H.I. and Murgita R.A. Similarity between natural and recombinant human alpha-fetoprotein as inhibitors of estrogen-dependent breast cancer growth. // Breast Cancer Research and Treatment. (1997). V. 45., 169-179.

208) Semeniuk D.J., Boismenu R., Tam J., Weissenhofer W. and Murgita R.A. Evidence that immunosuppression is an intrinsic property of the alpha-fetoprotein molecule. // Adv. Exp. Med. Biol. (1995). V. 383., 255-269.

209) Lortat-Jacob H., Tumbull J.E. and Grimaud J.-A. Molecular organization of the interferon-y-binding domain in heparan sulfate. // Biochem. J. (1995). V. 310., 497505.

210) Abdella P.M., Smith P.K. and Royer G.P. A new cleavable reagent for cross-linking and reversible immobilization of proteins. // Biochem. Biophys. Res. Communs. (1979). V. 87., 734-742.

211) Йоклик B.K. Интерфероны. "Вирусология." M. "Мир", 1989., 35-88.

212) Arakawa Т., Horon Т.Р., McGinley M. and Rohde M.F. Effect of amino-terminal processing by staphylococcus aureus V-8 protease on activity and structure of recombinant human interferon gamma. // J. Interferon Res. (1990). V. 10., 321-329.

213) Cook J.R., Jung V., Schwartz В., Wang P. and Petska S. Structural analysis of the human interferon-y: a small segment of the intracellular domain is specifically required for class I major histocompatibility complex antigen induction and antiviral activity // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1992). V. 89., 11317-11321.

214) Samuel C.E. Antiviral actions of interferon: interferon-regulated cellular proteins and their surprisingly selective antiviral activities. // Virology. (1991). V. 183., 111.

215) Hibino Y., Kumar C.S., Mariano T.M., Lai D. and Petska S. Chimeric interferon-y receptors demonstrate that an accessory factor required for activity interacts with the extracellular domain. // J. Biol. Chem. (1992). V. 267., 3741-3749.

216) Giavedoni L.D., Jones L., Gardner M.B., Gibson H.L. et al. Vaccinia virus recombinants expressing chimeric proteins of human immunodeficiency virus and yinterferon are attenuated for nude mice. // Proc. Natl. Acad. Sci. (1992). V. 89., 3409-3413.

217)Pestka S. and Meager A. Interferon standardization and designations. // J. Interferon Cytokine Res. (1997). V. 17(Suppl 1), 9-14.

218) Caruso A, Tiberio L, De Rango C. and Bonfanti С et al. A monoclonal antibody to the NH2-terminal segment of human IFN-y selectively interferes with the antiproliferative activity of the lymphokine. // J. Immunol. (1993). V. 150, 10291035.

219) Folghera S, Caruso A, Fiorentini S, Rusnati M. et al. A monoclonal antibody to the Ntb-terminal region of human interferon-y inhibits its antiproliferative activity without affecting its internalization. // J. Interf. Cytok. Res. (1995). V. 15, 197204.

220) Gray P.W. and Goeddel D.V. Cloning and expression of murine immune interferon cDNA. // Proc. Natl. Acad. Sci. (1983). V. 80, 5842-5846.

221) Adolf G.R. Structure and effects of interferon-gamma. // Oncology (1985). V. 42(Suppl. 1), 33-40.

222) Budowsky E. I. The mechanism of mutagenic action of hydroxylamine. // Progr. Nucl. Acids Res. Mol. Biol. (1976). V. 16, 125-188.

223) Будовский Э. И, Свердлов E. Д, Шибаева Р. П, Монастырская Г. С, Кочетков Н. К. // Мол. биол. (1968). Т. 2, 329-338.

224) Будовский Э. И, Шибаева Р. П, Свердлов Е. Д, Монастырская Г. С. // Мол. биол. (1968). Т. 2, 321-328.

225) Flavel R, Sabo D, Baudle E, Weissman C. Site-directed mutagenesis: generation of an extracistronic mutation in bacteriophage Qp RNA. // J. Mol. Biol. (1974). V. 89, 255-272.

226) Muller W, Weber H, Meyer F , Weissman C. Site-directed mutagenesis in DNA: generation of point mutation in cloned (3-globin complementary DNA at the position corresponding to amino acids 121 to 123. // J. Mol. Biol. (1978). V. 124, 343-358.

227) Бреслер С. E, Мачковский В. В, Перумов Д. А, Будовский Э. И. // Генетика. (1983). Т. 19, 1397-1403.

228) Петренко В. А, Спирин Г. В. Продукты взаимодействия цитидиловой кислоты с O-5-аминооксибутилгидроксиламином. //Мол. биол. (1982). Т. 16, 644-647.

229) Петренко В. А., Гусев В. А., Семенова JI. Н. Инактивация и мутагенез фага X под действием О-метилгидроксиламина и O-5-аминобутилгидроксиламина. //Мол. биол. (1982). Т. 16., 637-643.

230) Гусев В. А., Каргинов В. А., Кравченко В. В., Петренко В. А., Петров Н. А., Семенова JI. Н. Модификация операторно-промоторного участка ДНК фага X в составе специфического комплекса с РНК-полимеразой Escherichia coli. // Докл. АН СССР. (1981). Т. 260., 753-756.

231) Zoller M.J. and Smith M. Oligonucleotide-directed mutagenesis of DNA fragment cloned into M13 vectors. // Methods in Enzymology. (1983). V. 100., 468-500.

232) Петренко В. А., Татьков С. И., Семенова JI. Н., Сиволобова Г. Ф., Болдырев А. Н., Колокольцов А. А., Ерошкин А. М., Куличков В. А. // Биоорганическая химия. (1987). Т. 13., 259-262.

233) Петренко В. А., Татьков С. И., Ерошкин А. М., Болдырев А. Н., Поздняков П. И., Сиволобова Г. Ф. // Биоорганическая химия. (1988). Т. 14., 810-814.

234) Петренко В. А., Татьков С. И., Смирнова О. Ю., Ильичев А. А. // Новые направления биотехнологии. / Под ред. Баева А. А. Пущино: Центр биологических исследований АН СССР, 1988. С. 103.

235) Matteucci М. D., Heyneker Н. L. Targeted random mutagenesis: the use of ambiguously synthesized oligonucleotides to mutagenize sequences immediately 5' of an ATG initiation codon. //Nucleic Acids Res. (1983). V. 11., 3113-3121.

236) Wells J. A., Vasser M., Power D. B. Cassette mutagenesis: an efficient method for generation of multiple mutations at defined sites. // Gene. (1985). V. 34., 315323.

237) Hutchison C. A., Nordeen S. K., Vogt K., Edgell M. N. A complete library of point substitution mutations in the glucocorticoid responce element of mouse mammary tumor virus. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (1986). V. 83., 710-714.

238) Reyes A. A., Akeson R. Generation of multiple independent substitution mutants by Ml3 in vitro mutagenesis using a single mutagenic oligonucleotide. // DNA. (1988). V. 7., 579-584.

239) Ner S. S., Goodin D. В., Smith M. A simple and efficient procedure for generating random point mutations and for codon replacements using mixed оligodeoxynucleotides. //DNA. (1988). V. 7., 127-134.

240) Camble R., Petter N. N., Trueman P. Functionally important conserved amino-acids in interferon-alpha 2 identified with analogues produced from synthetic genes. //Biochem. Biophys. Res. Commun. (1986). V. 134., 1404-1411.

241) Alton K., Stabinsky Y, Richard R.et.al. // In: TheBiology of The Interferon Sistem. (Eds. by Maeyer E. And Schellekens H.). Elsevier, Amsterdam. 1983., 119128.

242) С. И. Татьков, О. Ю. Смирнова, Н. О. Цивковская, Г. П. Кищенко, А. А. Ильичев, В. А. Петренко, Л. С. Сандахчиев. Мутантный у-интерферон человека с повышенной антивирусной активностью. // Докл. АН. (1996). Т. 346., 413-414.

243) Петренко В. А., Сиволобова Г. Ф., Семенова Л. Н., Болдырев А. Н., Карги-нов В. А., Туторов В. В. Получение мутантных генов лейкоцитарного а.2-интерферона человека методом локализованного мутагенеза. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. (1985). Т. 8., 38-44.

244) Budowsky Е., Sverdlov Е., Spasokukotskaya Т. Functional activity and specifity of cytidine triphosphate modified with hydroxylamine and O-methyl-hydroxylamine. //Biochem. Biophys. Acta. (1972). V. 287., 195-210.

245) Singer В., Fraenkel-Conrat H., Abbott L. N4-Methoxydeoxycytidine triphosphate is in the imino tautomeric form and substitutes for deoxythymidine triphosphate in primed poly d[A-T] synthesis with E. coli DNA polymerase I. // Nucleic Acids Research. (1984). V. 12., 4609-4619.

246) Brown D., Hewlins M., Schell P. The tautomeric state of N(4)-hydroxy N(4)-aminocytosine derivatives. // Journal of the Chemical Society (C). (1968). 19251929.

247) Петренко В. А., Кузьмичева Г. А., Татьков С. И., Красноборов И. И. и др. Исследование механизмов мутагенеза, направленного фосфотриэфирными аналогами олигонуклеотидов. // Молекулярная биология. (1990). Т. 24., 460466.