Исследование роли GSTP1,MDR1 и MRP1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании устойчивости к химиотерапии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Горева, Ольга Борисовна

• Горева, Ольга Борисовна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Горева, Ольга Борисовна

Оглавление.

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Множественная лекарственная устойчивость.

1.1.1. Возникновение лекарственной устойчивости.

1.1.2. Механизмы лекарственной устойчивости.

1.2. Транспортные белки семейства ABC.

1.2.1. Р-гликопротеип.

1.2.2. MRP1 - белок ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью.

1.3. Ферменты биотрансформации ксенобиотиков.

1.3.1. Семейство глутатион -S- трансфераз.

1.4. Хронические лимфопролиферативные заболевания.

1.4.1. Хронический лимфолейкоз.

1.4.2. Неходэюкинские лимфомы.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Реактивы.

2.2. Материал исследования.

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Анализ полиморфизма длин рестрикционных фрагментов.

2.3.1.1. Выделение геномной ДНК.

2.3.1.2. Определение концентрации ДНК в образце.

2.3.1.3. Полимеразная цепная реакция.

2.3.1.4. Анализ продуктов ПЦР.

2.3.1.5. Ферментативный гидролиз.

2.3.1.6. Анализ продуктов рестрикции.

2.3.2. Определение функциональной активности Р-гликопротеина и MRP.

2.3.3. Статистическая обработка.

Глава 3. Результаты.

3.1. Роль полиморфизмов гена GSTP1 в 5 (A313G) и 6 (С341Т) экзонах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

3.2. Роль полиморфизмов гена GSTP1 в 5 (A313G) и 6 (С341Т) экзонах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

3.3. Роль полиморфизмов гена MDR1 в 6 интроне (Ех06+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T) и 26 (С3435Т) экзонах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

3.4. Роль полиморфизмов гена MDR1 в 6 интроне (Ех06+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T) и 26 (С3435Т) экзонах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

3.5. Роль полиморфизмов reimMRPl в 13 экзоне (Т1684С), 9 (A1218+8G) и 18 (С2461-30G) интронах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

3.6. Роль полиморфизмов гена MRP1 в 13 экзоне (Т1684С), 9 (A1218+8G) и 18 (С2461-30G) интронах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями.

3.7. Функциональная активность Р-гликопротеина в лимфоцитах контрольной группы и у больных неходжкинскими лимфомами и анализ ассоциации с полиморфизмом гена MDR1.

3.8. Анализ ассоциации полиморфизмов гена MRP1 с функциональной активностью MRP в лимфоцитах контрольной группы и у больных ХЛПЗ.

Глава 4. Обсуждение результатов.

4.1. Роль полиморфизмов гена GSTP1 в 5 (A313G) и 6 (С341Т) экзонах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

4.2. Роль полиморфизмов гена GSTP1 в 5 (A313G) и 6 (С341Т) экзонах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

4.3. Роль полиморфизмов гена MDR1 в 6 интроне (Ех06+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T) и 26 (С3435Т) экзонах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

4.4. Роль полиморфизмов гена MDR1 в 6 интроне (Ех06+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T) и 26 (С3435Т) экзонах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

4.5. Роль полиморфизмов reHaMRPl в 13 экзоне (Т1684С), 9 (A1218+8G) и 18 (С2461-30G) интронах в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

4.6. Роль полиморфизмов гена MRP1 в 13 экзоне (Т1684С), 9 (A1218+8G) и 18 (С2461-30G) интронах в формировании устойчивости к химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями.

4.7. Функциональная активность Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови контрольной группы и у больных лимфопролиферативными заболеваниями.

4.8. Анализ ассоциации полиморфизмов генов MDR1 и MRP1 с функциональной активностью белков Р-гликопротеина и MRP1 в лимфоцитах контрольной группы и у больных ХЛПЗ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование роли GSTP1,MDR1 и MRP1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании устойчивости к химиотерапии»

Актуальность проблемы. В последние десятилетия проблема онкологических заболеваний становится все более актуальной. В структуре смертности населения Земного шара смертность от злокачественных новообразований занимает 2-4-ое место, в высокоразвитых странах этот показатель выходит на 1-2-ое место (Якубовская Р.И., 2000), а по данным Госкомстата за 2005 год в России - 2-ое место, уступая только заболеваниям системы кровообращения http://www.gks.ru/freedoc/2006/b0613/04-27.html, 2006). Число людей с впервые выявленными злокачественными новообразованиями неуклонно растет (Чиссов В.И. и соавт., 1995; Заридзе Д.Г. и соавт, 1998). Новосибирская область и г. Новосибирск входят в число административных территорий, неблагоприятных по заболеваемости злокачественными новообразованиями, в том числе опухолями клеток крови (http://www.sibstat.gcom.ru/Sitr/press21.html, 2006). По данным Новосибирского облкомстата за 20 лет число онкологических больных в Новосибирской области возросло вдвое, и в 2005 году заболеваемость злокачественными новообразованиями составила 378 случаев на 100 тысяч населения, тогда как средний показатель по России — 328 человек на 100 тысяч (http://www.sibstat.gcom.ru/Sitr/press21.html, 2006). Опережая по темпам общую онкологическую заболеваемость, заболеваемость опухолями клеток крови с 1987 года по 2005 год увеличивалась примерно в 4,5 раза (с 3,2 до 14,2 на 100 тысяч населения), преимущественно за счет лейкозов и лимфом. Одна из особенностей этих опухолей — высокий удельный вес лиц молодого, трудоспособного возраста (57.5% больных имеют возраст до 40 лет) с преобладанием у них высокоагрессивных HXJI (Ковынев И.Б. и соавт., 2006).

Такой рост связывают с возрастающим загрязнением окружающей среды чужеродными для организма веществами (ксенобиотиками), и, соответственно, увеличением их поступления в организм человека (Карпенко Л.Г., 1999; Гуляева Л.Ф. и соавт., 2000). Исследование причин повышения заболеваемости опухолями клеток крови показали, что оно обусловлено неблагоприятной экологической ситуацией в г. Новосибирске и Сибирском федеральном округе в целом и совпадает с пиками промышленных выбросов с отсрочкой эффекта на 7-10 лет (Ковынев И.Б. и соавт., 2006).

Разная предрасположенность к заболеванию может быть обусловлена генетическими факторами, в том числе межиндивидуальными различиями в биоактивации проканцерогенов и выведении канцерогенных веществ из организма. Установление взаимосвязи между определенным генотипом и формой заболевания поможет приблизить к пониманию механизмов развития различных форм рака, а с учетом предрасполагающих факторов (курение, загрязнители окружающей среды) позволит выявить группы риска, обладающие повышенной чувствительностью к данным заболеваниям.

Рост случаев онкологических заболеваний, выводит на передний план проблему их лечения. Основным методом лечения онкогематологических заболеваний является интенсивная полихимиотерапия. Однако несмотря на высокий процент ремиссий (до 80%) после начальной терапии, рецидив бывает очень часто, и только 20% пациентов, достигают долгосрочного выживания (Поддубная И.В., 2001; Thomas X. et al., 2003). Кроме того, интенсивная химиотерапия является причиной тяжёлых побочных эффектов, особенно у пожилых пациентов (Robak Т., 2004). Поэтому, недолгосрочная эффективность химиотерапии и токсичность лечения - главные проблемы, которые необходимо решить. Одним из препятствий для успешной химиотерапии опухолей является множественная лекарственная устойчивость (МЛУ) - невосприимчивость популяции клеток опухоли одновременно к целому ряду химиотерапевтических препаратов разного химического строения и с разным механизмом действия на клетку. Феномен МЛУ может быть обусловлен различными механизмами: снижением накопления лекарственного препарата в клетке, связанным с функционированием Р-гликопротеина, белка множественной лекарственной устойчивости MRP; изменением мишеней препаратов, определяемым топоизомеразой II; обезвреживанием препаратов в клетке, обусловленным функционированием систем ферментов метаболизма ксенобиотиков, в частности фермента глутатион-S-трансферазы (GST); отменой апоптоза или блокированием клеточного цикла, возникающими в результате мутаций гена р-53 и активации контролирующих апоптоз генов (Ставровская A.A., 2000).

Функционирование ферментов первой и второй фаз биотрансформации ксенобиотиков и выведение чужеродных соединений из клеток с помощью АТФ-зависимых транспортных белков - основные механизмы метаболизме и распределении ксенобиотиков (Sipes I.G., Gandolfi A J., 1986). Фермент второй фазы биотрансформации ксенобиотиков глутатион S-трансфераза класса Р участвует в процессах детоксикации широкого спектра электрофильиых соединений, включающих мутагены и канцерогены окружающей среды (например, дихлорметан (побочный продукт синтеза пластиков), дибромэтан (образуется при сгорании бензина), галометан и метилбромид (пестициды)) (Tsuchida S. et al., 1992; Clandinin M.T. et al., 1994; Pemble S. et al, 1994; Salinas A.E. et al, 1999; Hayes J.D. 2000). Многие цитостатики, такие как алкилирующие агенты, антрациклины, препараты платины, стероидные гормоны также являются субстратами глутатион S-трансфераз (Clandinin M. et al, 1994; Pemble S. et al, 1994; Ставровская A.A, 2000; Hayes J.D. et al, 2000). Ген GSTP1 является полиморфным: в кодирующем регионе обнаружено две мутации. Известно, что полиморфные варианты глутатион-Б-трансферазы Р1 в 5 экзоне проявляют разную каталитическую активность в отношении полициклических ароматических углеводородов (Zimniak P. et. al, 1994; Coles В. et al, 2000; Allan et al, 2001). Полиморфизм в 5 экзоне гена GSTP1 приводит к замене аминокислоты в активном участке Н-сайта, который отвечает за субстратную специфичность фермента (Katoh T. et al, 1999). В связи с этим, межиндивидуальные различия в ферментативной активности GST, опосредуемые полиморфными вариантами генами, могут лежать в основе различной предрасположенности к онкологическим заболеваниям, связанным с влиянием окружающей среды (Harries L.W. et al, 1997; Harris M.J, et al, 1998). Нет данных, связан ли полиморфизм гена GSTP1 с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и устойчивостью к химиопрепаратам.

АТФ-зависимые транспортные белки Р-гликопротеин и MRP1 (белок ассоциированный с множественной лекарственной устойчивостью) -продукты генов MDR1 и MRP1 осуществляют транспорт веществ из клетки. Их физиологическая роль заключается в защите клеток от токсических соединений. Гены MDR1 и MRP1 являются высокополиморфными, но несмотря на то, что Р-гликопротеин и MRP широко изучаются, пока непонятна функциональная и клиническая значимость открываемых вариантов полиморфизмов этих генов для биодоступности и распределения лекарств в организме человека и, как следствие, формирования лекарственной устойчивости опухолей. Функциональная активность MRP изучена мало и нет сведений о его активности у больных онкологическими заболеваниями.

Целью настоящей работы было исследование полиморфных вариантов генов GSTP1, MDR1, MRP1 и анализа взаимосвязи полиморфизмов этих генов с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и устойчивостью к химиотерапии у больных с такими заболеваниями, а также исследование связи полиморфизмов генов MDR1 и MRP1 с функциональной активностью кодируемых ими белков Р-гликопротеина и MRP.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать распределение полиморфных вариантов гена GSTP1 в 5 (A313G) и 6 (С341Т) экзонах у здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

2. Исследовать распределение полиморфных вариантов гена MDR1 в 6 интроне (Ех6+139С/Т), 12 (С1236Т), 21 (G2677T), 26 (С3435Т) экзонах у здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

3. Исследовать распределение полимофрных вариантов гена MRP1 в 13 экзоне (Т1684С), 9 (A1218+8G), 18 (C2461-30G) интронах у здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

4. Проанализировать взаимосвязь полиморфизмов исследуемых генов с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям у европеоидов западной Сибири в исследованиях «случай-контроль».

5. Провести анализ взаимосвязи полиморфизмов исследуемых генов с риском развития лекарственной устойчивости у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

6. Определить функциональную активность Р-гликопротеина и MRP в лимфоцитах здоровых европеоидов Западной Сибири и больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями и оценить связь с результатами химиотерапии.

7. Исследовать роль полиморфизмов генов MDR1 и MRP1 в функциональной активности Р-гликопротеина и MRP соответственно.

Научная новизна

Впервые охарактеризована частота встречаемости полиморфизмов A313G и С341Т гена GSTP1, С6+139Т, С1236Т, G2677T, С3435Т гена MDR1, Т1684С, A1218+8G и C2461-30G гена MRP1 в популяции европеоидов Западной Сибири. Показано, что распределение частот генотипов и аллелей полиморфных вариантов генов GSTP1, MDR1 и MRP1 у европеоидов Западной Сибири соответствуют частотам в других европеоидных популяциях.

Впервые показано, что полиморфные варианты 341СС гена GSTP1 и 3435ТТ гена MDR1 ассоциированы с устойчивостью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям, а 341СТ и 3435СС генотипы - с предрасположенностью.

Впервые показано, что полиморфные варианты 313AG гена GSTP1 и 2677ТТ, 3435ТТ гена MDR1 ассоциированы с устойчивостью, а генотипы 313АА, 3435СТ -с чувствительностью к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями. Комбинация генотипов 2677ТТ/3435ТТ в 21 и 26 экзонах гена MDR1 у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями увеличивает в 17 раз риск возникновения лекарственной устойчивости к проводимой химиотерапии в сравнении с больными, имеющими другие генотипы.

При исследовании полиморфизмов Т1684С, A1218+8G и C2461-30G гена MRP1 не выявлено достоверно значимых ассоциаций полиморфных вариантов гена с риском возникновения лимфопролиферативных заболеваний и развитием устойчивости к химиотерапии у больных с этими заболеваниями.

Впервые показано, что функциональная активность Р-гликопротеина у больных неходжкинскими лимфомами ассоциирована со степенью злокачественности опухоли: достоверно более высокий уровень активности показан для больных с высокой степенью злокачественности. Показано также, что уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови не зависит от применяемых химиопрепаратов и не является показателем для прогноза устойчивости к химиотерапии у больных неходжкинскими лимфомами.

Показано, что уровни функциональной активности Р-гликопротеина и МЛР1 не связаны с полиморфизмами С6+139Т, С1236Т, 02677Т, С3435Т гена МОШ и Т1684С, А1218+80, С2461-3(Ю гена MR.P1 соответственно ни у здоровых европеоидов Западной Сибири, ни у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями.

Научная и практическая значимость работы

Настоящая работа вносит вклад в развитие фундаментальных знаний о роли полиморфизмов генов МЭШ, М11Р1, С8ТР1 и функциональной активности транспортных белков Р-гликопротеина и М11Р1 в предрасположенности к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям и в формировании лекарственной устойчивости у больных с такими заболеваниями.

Полученные данные могут быть использованы для оценки как индивидуального, так и популяционного риска развития онкогематологических заболеваний, а так же разработки дифференцированных программ их первичной профилактики.

Выявление полиморфных вариантов генов, ассоциированных с устойчивостью к химиотерапии, позволит выработать рекомендации но оптимизации химиотерапии.

Основные положения, выносимые на защиту:

С предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям связаны полиморфизмы С341Т в 6 экзоне гена С8ТР1 и С3435Т в 26 <- экзоне гена МОЯ 1.

С формированием устойчивости к химиотерапии у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями связаны полиморфизмы А3130 в 5 экзоне гена ввТРЬ 02677Т в 21 экзоне и С3435Т 26 экзонах гена МОШ.

Уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови у больных неходжкинскими лимфомами связан со степенью злокачественности опухоли. и

Эффективность химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями не зависит от уровня функциональной активности Р-гликопротеина

Уровни функциональной активности Р-гликопротеина и MRP1 у здоровых европеоидов Западной Сибири и у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями не связаны с полиморфными вариантами генов MDR1 (С6+139Т, С1236Т, G2677T и С3435Т) и MRP1 (Т1684С, A1218+8G и C2461-30G) соответственно.

Апробация работы

Результаты работы были представлены на следующих конференциях: 17th Meeting of Europe Association for Cancer Research, Granada, Spain, 2002; 1 Международный симпозиум «Стресс и экстремальные состояния», Феодосия, Украина, 2002; 18th International Cancer Congress, Oslo, Norway, 2002; European Scientific Conference: Understanding the Genome: Scientific Progress and Microarray Technology, Genova, Italy, 2002; 37thAnnual Scientific Meeting: European society for clinical investigation. The pathophysiology of diseases: from bench to bedside, Verona, Italy, 2003; 8th Congress of the European Hematology Association, Lyon, France, 2003; Российско-Норвежская конференция по вопросам гематологии, Санкт-Петербург, 2003; III Конференция молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины», Москва, 2004; 8-ая Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология -наука XXI века», Пущино, 2004; 9th Congress of the European Hematology Association, Geneva, Switzerland, 2004; 15th European Students' Conference for future doctors and young scientists, Berlin, Germany, 2004; XII Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов», Москва, 2005; Региональная конференция молодых ученых-окологов «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии», Томск, 2006; 13th International Student Congress of Medical Sciences, Groningen, the Netherlands, 2006; Совместная российско-американская конференция по проблемам гематологии и трансплантации костного мозга, 2006.

Автор выражает глубокую благодарность научному консультанту, директору НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН, академику РАМН Ляховичу Вячеславу Валентиновичу и руководителю Гришановой Алевтине Юрьевне за руководство работой на всех ее этапах

Автор благодарит Мельникову Евгению Владимировну и Воронцову Елену Владимировну за помощь в проведении экспериментальной части работы, а также зав. гематологического отделения с блоком асептических палат для трансплантации костного мозга Новосибирской областной клинической больницы Мухина Олега Викторовича и д.м.н., проф. НМГУ Домникову Наталью Петровну за предоставление клинического материала, а также весь коллектив НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Горева, Ольга Борисовна

126 Выводы:

1. У европеоидов Западной Сибири полиморфизмы гена GSTP1 в 6 экзоне (C341T) и гена MDR1 в 26 экзоне (C3435T) связаны с хроническими лимфопролиферативными заболеваниями:

- с предрасположенностью к развитию заболеваний ассоциированы генотипы 341CT (0111=2.78, р=0.01) и 3435CC (ОШ=2.26, р=0.04);

- с устойчивостью к заболеванию ассоциированы генотипы 341CC (0111=0.41, р=0.02) и 343 5ТТ (0111=0.54, р=0.04).

2. Для формирования лекарственной устойчивости у больных хроническими лимфопролиферативными заболеваниями значимыми являются полиморфизмы в 5 (A313G) экзоне гена GSTP1, 21 (G2677T) и 26 (C3435T) экзонах гена MDR1:

- с устойчивостью к химиотерапии ассоциированы генотипы 313AG (0111=2.39, р=0.04), 2677ТТ (0111=6.8, р=0.008) и 3435ТТ (0Ш= 10.08, р=0.002), и комбинация генотипов 2677ТТ/3435ТТ (0111=17.73, р=0.00045);

- с чувствительностью к химиотерапии ассоциированы генотипы 313АА (0111=0.43, р=0.04) и 3435CT (ОШ=ОЛ2, р=0.04).

3. Уровни функциональной активности Р-гликопротеина и MRP в лимфоцитах периферической крови у больных неходжкинскими лимфомами выше, чем в контрольной группе, и активность Р-гликопротеина связана со степенью злокачественности опухоли: достоверно более высокий уровень активности имеют больные с высокой степенью злокачественности.

4. Уровень функциональной активности Р-гликопротеина в лимфоцитах периферической крови не является показателем для прогноза устойчивости к химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями: результат химиотерапии не зависит от активности Р-гликопротеина.

5. Ассоциации уровней функциональной активности Р-гликопротеина и MRP1 с полиморфизмами С6+139Т C1236T, G2677T, С3435Т гена MDR1 и Т1684С, A1218+8G, C2461-30G гена MRP1 соответственно не выявлены ни в контрольной группе и ни у больных неходжкинскими лимфомами.

Заключение

В настоящей работе был изучен вклад полиморфизма генов СБТР!, МЭМ и МЯР1 в возникновение хронических лимфопролиферативных заболеваний и формирование устойчивости к химиотерапии у больных с этими патологиями, а также исследовано влияние полиморфизмов на функциональную активность Р-гликопротеина и МИР.

Проведено исследование распределения полиморфных вариантов генов МОЯ1, MR.P1, С5ТР1 у здоровых людей и больных гематологическими онкопатологиями (хроническими лимфопролиферативными заболеваниями, включающими хронический лимфолейкоз и неходжкинские лимфомы). Исследованы наиболее часто встречающиеся однонуклеотидные замены в генах СБТРЦАЗЖ, С341Т), МОЮ (С6+139Т, С1236Т, С2677Т, С3435Т), MRP1 (Т1684С, А1218+80, С2461-3(Ю). Показано, что частоты генотипов и аллелей изученных генов в здоровой популяции европеоидов Западной Сибири значимо не отличаются от частот в других европеоидных популяциях. Исследование распределения однонуклеотидных замен выявило достоверные отличия частот генотипов. во всех группах больных от частот в контрольной группе для полиморфизма С341Т в 6 экзоне гена СБТР1, а в гене MDR1 для полиморфизма С3435Т в 26 экзоне показаны различия в частотах аллелей всех групп больных по сравнению с группой контроля. Частоты встречаемости генотипов и аллелей гена MRP1 в группах больных не отличались от частот в контрольной группе.

Проанализированы ассоциации исследованных генотипов с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям. Показано, что полиморфизмы гена СБТР1 (С341Т) в 6 экзоне и гена MDR1 (С3435Т) в 26 экзоне ассоциированы с риском развития этих заболеваний. При этом протективными генотипами для хронических лимфопролиферативных заболеваний и неходжкинских лимфом являются С341С и Т3435Т генотипы, а для хронических лимфолейкозов - только Т3435Т. Генотипы С341Т и С3435С являются факторами чувствительности к хронических лимфопролиферативным заболеваниям, в частности неходжкинским лимфомам; для развития хронического лимфолейкоза критичным является наличие только С341Т генотипа. Анализ распределения полиморфных вариантов гена МЯР1 не выявил статистически достоверных ассоциаций с предрасположенностью к хроническим лимфопролиферативным заболеваниям.

Выполнен анализ ассоциаций между исследованными полиморфными вариантами генов и формированием лекарственной устойчивости у больных лимфопролиферативными заболеваниями. Показана значимость полиморфизмов гена GSTP1 (A313G) в 5 экзоне и гена MDR1 (G2677T) в 21 экзоне и (С3435Т) в 26 экзоне для формирования устойчивости к химиотерапии. При этом риск устойчивости выше для больных с генотипами A313G, Т2677Т, Т3435Т, и ниже при наличии А313А и С3435Т генотипов. Кроме того, 17-ти кратное повышение риска устойчивости к химиотерапии имеют больные хроническими лимфопролиферативными заболеваниями с комбинацией генотипов Т2677Т Т3435Т по сравнению с больными, имеющими иные комбинации полиморфных вариантов гена MDR1 в 21 и 26 экзонах. Также было выявлено, что все изученные полиморфизмы гена MRP1 (Т1684С, A1218+8G, C2461-30G) не вносили вклад в формирование лекарственной устойчивости.

В лимфоцитах здоровых людей и больных онкогематологическими заболеваниями исследован уровень функциональной активности Р-гликопротеина и MRP. Сравнение уровня функциональной активности Р-гликопротеина и MRP в контрольной группе и у больных неходжкинскими лимфомами показало достоверно более высокий уровень активностей этих белков у больных. Проведеный анализ связи уровня активности Р-гликопротеина и MRP с исследованными полиморфизмами генов MDR1 (С6+139Т, С1236Т, G2677T, С3435Т) и MRP1 (Т1684С, A1218+8G, C2461-30G), соответственно, не выявил достоверных ассоциаций ни в контрольной группе, ни у больных лимфопролиферативными заболеваниями.

Проведенный анализ зависимости уровня активности Р-гликопротеина от применяемых химиопрепаратов не выявил достоверных различий между группами, получающими химиотерапию разной степени агрессивности. Показано, что функциональная активность Р-гликопротеина ассоциирована со степенью злокачественности опухоли: достоверное более высокий уровень активности показан для больных НХЛ с высокой степенью злокачественности.

Было обнаружено, что у больных чувствительных к химиотерапии наблюдается более низкий уровень функциональной активности по сравнению с уровнем активности у больных устойчивых к химиотерапии. Однако эти различия был недостоверными, поэтому уровень функциональной активности Р-гликопротеина в периферической крови не является показателем для прогноза устойчивости к химиотерапии у больных лимфопролиферативными заболеваниями.

Таким образом, результаты исследований показали, что генетический полиморфизм может быть важным фактором, определяющим чувствительность к лекарственной терапии. Выделение групп риска по устойчивости к химиотерапии в соответствии с полученными данными поможет разработать альтернативные схемы фармакологической терапии с учетом известной устойчивости к используемым лекарственным средствам. Однако было бы неверно пытаться объяснить все взаимосвязи только участием фермента в8ТР1 и АТФ-зависимых транспортных белков в метаболизме ксенобиотиков. Возможен вклад других генетических маркеров в развитие лимфопролиферативных заболеваний и формирование лекарственной устойчивости. Поэтому необходим поиск факторов риска среди других полиморфизмов изучаемых генов, а также других генов (в первую очередь СУРЗА4), участвующих в процессах биотрансформации ксенобиотиков, с целью расширения перечня потенциальных генов-кандидатов и выявления сочетания генотипов, которые будут основой для формирования групп риска.

Помимо этого, различные однонуклеотидные замены в гене могут приводить к изменению уровня экспрессии генов, структуры и функции белков. Поэтому важно продолжить изучение совместного влияния полиморфизмов генов 08ТР1, МОШ и МЮЧ, уровня экспрессии белков и их функциональной активности как на предрасположенность к заболеваниям, так и на формирование лекарственной I устойчивости. В нашем исследовании не было выявлено достоверной ассоциации уровня активности Р-гликопротеина с ответом на лечениеу больных неходжкинскими лимфомами, однако в формировании лекарственной устойчивости принимают участие и другие транспортные белки. Совместное функционирование нескольких белков может приводить к увеличению выведения химиопрепаратов из клетки и, как следствие, к возникновению устойчивости к лечению. Сочетание различных механизмов лекарственной устойчивости в одних и тех же клетках, влияние индивидуального генотипа больного и разнообразие методов исследования определяют необходимость дальнейших исследований роли различных механизмов в возникновении множественной лекарственной устойчивости опухолей различной этиологии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Горева, Ольга Борисовна, 2007 год

1. Анализ генома. Методы. / Под ред. Дейвиса. М: Мир, 1990. - 247 с.

2. Владимирская Е.Б., Кисляк Н.С., Румянцев А.Г. Причины и пути преодоления лекарственной резистентности при лейкозах и лимфомах у детей. // Гематол. и трансфузиол. 1998. - Т.43. - №6. - С3-1.

3. Волкова М.А. Полвека в терапии хронического лимфолейкоза. // Гематол. и Трансфузиол. 1998. - Т.43. - №5. - С. 6-11.

4. Волкова М.А. Хронический лимфолейкоз // В кн.: Клиническая онкогематология. Под ред. Волковой М.А. — М.: Медицина, 2001. — С. 376392.

5. Горбунова В.Н. Молекулярные основы медицинской генетики. СПб: Интермедика, 1999. - 212 с.

6. Горбунова В.Н., Баранов B.C. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. СПб: Специальная литература, 1997.-287 с.

7. Гуляева Л.Ф., Вавилин В.А., Ляхович В.В. Фермнты биотрансформации ксенобиотиков в химическом канцерогенезе. Аналит. обзор. Новосибирск, 2000. - 85 с.

8. Заридзе Д.Г., Мень Т.Х. Эпидемиология и первичная профилактика злокачественных опухолей. // Вестник онкологического научного центра им. H.H. Блохина РАМН. 1998. - №1. - С. 84-96.

9. Ю.Карпенко Л.Г. Особенности формирования онкологической патологии у населения Республики Татарстан под влиянием некоторых факторов внешней среды. // Автореф. дис. канд. мед. наук. Уфа, 1999.

10. Ковригина A.M., Богатырев В.Н. R.E.A.L.-классификация: возможности цитоморфологической диагностики неходжкинских лимфом (анализ литературных и клинических данных). Т-клеточные опухоли. // Новости клинической цитологии России. 1997.-Т.1.-№4.-С. 166-175.

11. Ковынев И.Б., Поспелова Т.Н., Агеева Т.А. и др. Частоты и структура неходжкинских злокачественных лимфом в Новосибирске, НСО и городах Сибирского федерального округа. // Бюллетень СО РАМН. 2006. - №4 -С.175-181.

12. Ли Ч. Введение в популяционную генетику. М: Мир, 1978. - 555 с.

13. Переводчикова Н.И. Место химиотерапии в системе лечения онкологических больных и выбор терапевтической тактики. // Современная онкология. 2001. -Том 3-С. 18-22.

14. Поддубная И.В. Неходжкинские лимфомы. // В кн.: Клиническая онкогематология. Под ред. Волковой М.А. — М.: Медицина, 2001. — С. 336375.

15. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTCA. М.: Медиа Сфера, 1998. - 312 с.

16. Ставровская А.А. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток. // Биохимия. 2000. - Т.65, вып. 1. - С. 112126.

17. Ставровская А.А. Резистентность больных гемобластозами к лекарственной терапии. // В кн.: Клиническая онкогематология. Под ред. М.А. Волковой. М.: Медицина, 2001.

18. Флетчер Р., Флетчер С., Вагнер Э. Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицины. // Пер. с англ. М.: Медиа Сфера, 1998. - 352 с.

19. Чехун В.Ф., Шишова Ю.В. Современные взгляды на механизмы формирования лекарсивенной устойчивости опухолей. // Онкология. 2000. - Т.2. - №1-2. - с. 11-15.

20. Чиссов В.И., Киселева Е.С., Антошечкина Е.Т., Асс Н.Я. и др. Комбинированное и комплексное лечение больных со злокачественными опухолями.: Руководство для врачей. / (под ред. Чиссова В.И.). М: Медицина, 1989.-560 с.

21. Чиссов В.И., Сидоренко Ю.С., Старинский В.В. и др. Проблемы организации онкологической помощи на современном этапе. // Вопросы онкологии. 1995. -Т. 41.-№2.-С. 11-18.

22. Шишова 10. В. Современные взгляды на механизмы формирования лекарственной устойчивости опухолей // Онкология 2000. - Т. 2. - № 1-2. - с. 11-15.

23. Штиль А. А. Эпигенетическая регуляция множественной лекарственной устойчивости в опухолевых клетках: передача сигналов, транскрипционная активация и возможности профилактики. // Успехи совр. биологии. 2001. - Т. 121.-№ 6.-С. 563-575.

24. Якубовская Р.И. Современные представления о молекулярных механизмах канцерогенеза и опухолевой прогрессии, как основа для разработки новых методов терапии злокачественных заболеваний. // Российский онкологический журнал. 2000. - №6. - С. 42-50.

25. Allan J.M., Wild С.Р., Rollinson S. Polymorphism in glutathione S-transferase PI is associated with susceptibility to chemotherapy-induced leukemia. // Proc. Natl. Acad. Sci. -2001. V. 98.-P. 11592-11597.

26. Ambudkar S.V., Dey S., Hrycyna C.A. et al. Biochemical, cellular, and pharmacological aspects of the multidrug transporter. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1999. - V. 39. - P. 361-398.

27. Ambudkar S.V., Kimchi-Sarfaty C., Sauna Z.E. et al. P-glycoprotein: from genomics to mechanism. // Oncogene. 2003. - V. 22. - P. 7468-7485.

28. Ameyaw M.M., Regateiro F., Li T. et al. MDR1 pharmacogenetics: frequency of the C3435T mutation in exon 26 is significantly influenced by ethnicity. // Pharmacogenetics. -2001. V. 3. - P. 217-221.

29. Armstrong R.N. Mechanistic imperatives for the evolution of glutathione transferases. // Current Opinion in Chemical Biology. 1998. - V. 2. - P. 618-623.

30. Armstrong R.N. Structure, catalytic mechanism, and evolution of the glutathione transferases // Chem. Res. Toxicol. 1997. - V. 10. - P. 2-18.

31. Beale P.J., Rogers P., Boxall F. et al. BCL-2 family protein expression and platinum drug resistance in ovarian carcinoma. // Br. J. Cancer. 2000. - V. 82. - P. 436-440.

32. Beckett G.J., Hayes J.D. Glutathione S-transferases: biomedical applications. // Adv. Clin. Chem. 1993. - V. 30. - P. 281-380.

33. Berhane K., Hao X.Y., Christensson B. et al. The expression of glutathione transferase isoenzymes in human malignant lymphoma biopsies. // Acta Oncol. -1995.-V. 34.-P. 35-41.

34. Bernal M. L.,. Sinues B, Fanlo A. et al. Frequency distribution of C3435T mutation in exon 26 of the MDR1 gene in a Spanish population // Ther. Drug monitoring. 2003. -V. 25.-P. 107-111.

35. Black S., Beggs J.D., Hayes J.D. et al. Expression of human glutathione S-transferases in Saccharomyces cerevisiae confers resistance to the anticancer drugs adriamycin and chlorambucil. // Biochem. J. 1990. - V. 268. - P. 309-315.

36. Bodo A., Bakos E., Szeri F. et al. The role of multidrug transporters in drug availability, metabolism and toxicity. // Tox. Lett. 2003. - V. 140-141. - P. 133143.

37. Borst P , Evers R., Kool M. et al. A family of drug transporters: the multidrug resistance-associated proteins. // J. Natl. Cancer. Inst. 2000. - V. 92. - P. 1295— 1302.

38. Borst P., Elfererink R.O. Mammalian ABC transporters in health and disease. // Annu. Rev. Biochem. 2002. - V. 71. - P. 537-592.

39. Bradley G., Juranka P.F., Ling V. Mehanism of multidrug resistance. // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - V. 948. - P. 87-128.

40. Casale F., D'Angelo V., Addeo R. et al. P-glycoprotein 170 expression and function as an adverse independent prognostic factor in childhoot acute lymphoblastic leukemia//Oncology Reports.-2004.-V. 12.-P. 1201-1207.

41. Chan H. S., Haddad G., Zheng L. et al. Sensitive immunofluorescence detection of the expression of P-glycoprotein in malignant cells. // Cytometry. 1997. - V. 29. -P. 65-75.

42. Chen C.J., Clark D., Ueda K. et al. Genomic organization of the human multidrug resistance (MDR1) gene and origin of P-glycoproteins. // J. Biol. Chem. 1990. - V. 265. P. 506-514.

43. Chen Y., Simon S.M. In situ biochemical demonstration that P-glycoprotein is a drug efflux pump with broad specificity. // J. Cell Biology. 2000. - V. 148. - P. 863-870.

44. Clandinin MT, Jumpsen J., Miyoung S. Relationship between fatty acid accretion, membrane composition, and biologic functions // J Pediatr-1994 V.125 - P .25-32.

45. Cole S.P.C., Deeley R.G. Multidrug resistance mediated by the ATP-bindning cassette transporter protein MRP. // Bioessays. 1998. - V. 20. - P. 931-940.

46. Coles B., Wilson I., Wardman P. et al. The spontaneous and enzymic reaction of N-acetyl-p-benzoquinonimine with gluthation: A stopped-flow cinetic study // Arch. Biochem. Biophys. 1988. - V. 264. - P. 253-260.

47. Coon J. S., Wang Y. Z., Bines S. D. et al. Multidrug resistance activity in human lymphocytes. // Hum. Immunol. 1991. - V. 32 (2). - P. 134-140.

48. Curran J.E., Weinstein S.R., Griffiths L.R. Polymorphisms of glutathione S-transferase genes (GSTM1, GSTP1 and GSTT1) and breast cancer susceptibility. // Cancer Lett.-2000.-V. 153.-P. 113-120.

49. Daly, A. K. Pharmacogenetics of the major polymorphic metabolizing enzymes. // Black. Pub. Fund, and CI. Pharm. -2003. -V. 17. P. 27-41.

50. Dandara C., Sayi J., Masimirembwa C.M. et al. Genetic polymorphism of cytochrome P450 1A1 (CyplAl) and glutathione transferases (Ml, T1 and PI) among Africans. //Clin. Chem. Lab. Med. 2002. - V. 40. - P.952-957.

51. Danielson U.H., Esterbauer H., Mannervik B. Structure-activity relationships of 4-hydroxyalkenals in the conjugation by mammalian gluthation S-transferase. // Biochem. J. 1987. - V. 247. - P. 707-713.

52. D'Arpa P., Liu L. F. Topoisomerase-targeting antitumor drugs. // Biochim. Biophys. Acta.- 1989.-V. 989.-P. 163-177.

53. Dean M., Hamon Y., Chimini G. The human ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily. // Jour, of Lipid Res. 2001. - V. 42. - P. 1007-1017.

54. Dean M., Rzhetsky A., Alliknets R. The human ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily. // Genome Res. 2001. - V. 11. - P. 1156-1166.

55. Dhooge С., Moerloose В., Laureys В. et al. P-glycoprotein is an independent prognostic factor predicting relapse in childhood acute lymphoblastic leukaemia: results of a 6-year prospective study. // British Jour, of Haem. 1999. - V. 105. - P. 676-683.

56. Di Paola R.S., Aisner J. Overcoming bcl-2 and p53-mediated resistance in prostate cancer. // Semin. Oncol. 1999. - V. 26. - P. 112-116.

57. Di Simone D., Testi R., Caracciolo F. et al. Glutathione-S-transferase activity and multidrug resistance phenotype in chronic lymphocytic leukemia: do they have any clinical relevance? // Haematologica. 1995. - V. 80. - №2 . - P. 103-107.

58. Dogan A.L., Legrand 0., Faussai A.M. et al. Evaluation and comparison of MRP1 activity with three fluorescent dyes and three modulators in leukemic cell lines. // Leuk Res. 2004. - V. 28. - P. 619-622.

59. Donelly J.G. Pharmacogenetics in cancer chemotherapy: balancing toxicity and response. // Ther. Drug. Monit. 2004. - V. 26 - P. 231-235.

60. Drescher S., Schaeffeler E., Hitzl M. et al. MDR1 gene polymorphisms and disposition of the P-glycoprotein substrate fexofenadine. // Br. J. Clin. Pharmacol. -2002.-V. 53.-P. 526-534.

61. Elce J.S. Metabolism of gluthathion conjugate of 2-hydroxioestradiol-17beta in adult male rat.//Biochem. J.-1972.-V. 126.-P. 1067-1071.

62. Fairchild C.R., Moscow J.A., O'Brien E.E. et al. Multidrug resistance in cells transfected with human genes encoding a variant P-glycoprotein and glutathione S-transferase-pi. // Mol. Pharmac. 1990. - V. 37. - P. 801-809.

63. Goto S., Iida T., Cho S. et al. Overexpression of glutathione S-transferase pi enhances the adduct formation of cisplatin with glutathione in human cancer cells. // Free. Radie. Res. 1999. - V. 31. - P. 549-558.

64. Gottesman M.M., Fojo T., Bates S.E. Multidrug Resistance in cancer: role of ATP-dependent transporters. // Nat. Rev. Cancer. 2002. - V. 2. - P. 48-58.

65. Gottesman M.M., Pastan I., Ambudkar V. P-glycoprotein and multidrug resistance. // Curr. Opin. Genet. Dev. 1996. - V. 6. - P. 610-617.

66. Greenbaum M, Letourneau S, Assar H. et al. Retrovirus mediated gene transfer of rat glutathione-5-transferase Yc confers alklyating drug resistance in NIH3T3 mouse fibroblasts. // Cancer Res. 1994. - V. 54. - P. 4442-4447.

67. Grogan T, Spier C.M, Salmon S.E. et al. P-glycoprotein expression in human plasma cell myeloma: correlation with prior chematotherapy. // Blood. 1993. - V. 81. - P. 49(M95.

68. Grulois I. Fardel 0, Drenou B. et al. Multidrug resistance in B-cell chronic lymphocytic leukemia. // Act. Haematol. 1995. - V. 94. - P. 78-83.

69. Harbottle A, Daly A.K, Atherton K. et al. Role of glutathione S-transferase PI, P-glycoprotein and multidrug resistance-associated protein 1 in acquired doxorubicin resistance. // Int. J. Cancer. 2001. - V. 92. - P. 777-783.

70. Harris M.J, Coggan M, Langton L. et al. Polymorphism of the Pi class glutathione S-transferase in normal populations and cancer patients. // Pharmacogenetics. 1998. -V. 8.-P. 27-31.

71. Harrison D.J, Cantly A.M., Rae F. et al. Frequency of glutatione S-transferase Ml deletion in smokers with emphysema and lung cancer. // Hum. Exp. Toxicol. 1997. -V. 17.-P. 356-360.

72. Hayes J.D, Pulford D.J. The glutathione S-transferase supergene family: regulation of GST and the contribution of the isoenzymes to cancer chemoprotection and drug-resistance. // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1995. - V. 30. - P. 445-600.

73. Hayes J.D, Strange R. Glutathione S-transferase polymorphisms and their biological consequences. // Pharmacology. 2000. - V. 61. -P. 154-166.

74. Helzlsouer K.J, Selmin O, Huang H.Y. et al. Association between glutatione S-transferase Ml, PI, and T1 genetic polymorphisms and development of breast cancer. // J. Natl. Cancer. Inst. 1998. - V. 90. - P. 512-518.

75. Hill K.E., Hunt R.W., Jones R. et al. Metabolism of nitroglycerin by smooth muscle cells. Involvement of gluthation and gluthation S-transferases. // Biochem. Pharmacol. 1992. -V. 43.-P. 561-566.

76. Hipfner D.R., Deeley R.G., Cole S.P. Structural, mechanistic and clinical aspects of MRP1. //Biochim. Biophys. Acta. 1999. -V. 1461. P. 359-376.

77. Hitzl M., Drescher S., Kuip H.et al. The C3435T mutation in the human MDR1 gene is associated with altered efflux of the P-glycoprotein substrate rhodamine 123 from CD56+ natural killer cells. // Pharmacogenetics. 2001. - V. 11 - P. 293-298.

78. Houlston R.S., Tomlinson I.P. Polymorphisms and colorectal tumor risk. // Gastroenterology.-2001.-V. 121.-P. 282-301.

79. Hu X., Xia H., Srivastava S.K. et al. Activity of four allelic forms of glutathione S-transferase hGSTPl-1 for diol epoxides of polycyclic aromatic hydrocarbons. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. - V. 238. - P. 397^102.

80. International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia: Recommendation for diagnosis, staging, and response criteria. // Ann. Intern. Med. 1989. - V. 110. - P. 236-243.

81. Ishii T., Matsuse T., Teramoto S. et al. Glutatione S-transferase PI (GSTP1) polymorphism in patients with chronic obstructive pulmonary disease. // Thorax. -1999.-V. 54.-P. 693-696.

82. Ito S., I. Ieiri, M. Tanabe Polymorphisme of ABC transporter genes MDR1, MRP1, MRP2/cMOAT, in healthy Japanese subjects // Pharmacogenetics. 2001. - V. 2. -P. 175-84.

83. Iyer L., Ratain M.J. Pharmacogenetics and cancer chemotherapy. // Eur. J. Cancer. -1998.-V. 34.-P. 1493-1499.

84. Jamroziak K, Robak T. Pharmacogenomics of MDR1/ABCB1 gene: the influence on risk and clinical outcome of haematological malignancies. // Hematology. 2004. -V. 9.-P. 91-105.

85. Jamroziak K., Balcerczak E., Cebula B. et al. Multi-drug transporter MDR1 gene polymorphism and prognosis in adult acute lymphoblastic leukemia.// Pharmacol. Rep. 2005. - V.57. - P. 882-888.

86. Jamroziak K., Balcerczak E., Mlynarski W. et al. Distribution of allelic variants of functional C3435T polymorphism of drug transporter MDR1 gene in a sample of Polish population. // Pol. J. Pharmacol. 2002. -V. 54. - P. 495-500.

87. Jamroziak K., Balcerczak E., Smolewski P. et al. MDR1 (ABCB1) gene polymorphism C3435T is associated with P-glycoprotein activity in B-cell chronic lymphocytic leukemia. // Pharmacol. Rep. 2006. V. 58. -P. 720-728.

88. Jamroziak K., Mlynarski W., Balcerczak E. et al. Functional C3435T polymorphism of MDR1 gene: an impact on genetic susceptibility and clinical outcome of childhood acute lymphoblastic leukemia. // Eur. J. Haematol. 2004. -V. 72.-P. 314-321.

89. Kafka A., Sauer G., Jaeger C., Grundmann R. et al. Polymorphism C3435T of the MDR-1 gene predicts response to preoperative chemotherapy in locally advanced breast cancer. // Int. J. Oncol. 2003. - V. 22. - P. 1117-1121.

90. Katoh T., Kaneko S., Takasawa S. et al. Human glutathione S-transferase PI polymorphism and susceptibility to smoking related epithelial cancer; oral, lung, gastric, colorectal and urothelial cancer. // Pharmacogenetics. 1999. - Vol. 9. - P. 165-169.

91. Kerb R., Hoffmeyer S., Brinkmann U. ABC drug transporters: hereditary polymorphisms and pharmacological impact in MDR1, MRP1 and MRP2. // Pharmacogenomics. 2001. - V.2. - P. 51-64.

92. Ketley J.N., Habig W.N., Jacoby W.B. Binding of nonsubstrate ligands to the gluthation S-transferases. // J. Biol. Chem. 1975. - V. 259. - P. 8670-8673.

93. Ketterer B. Glutathione S-transferases and prevention of cellular free radical damage. // Free. Radic. Res. 1998. - V. 28. - P. 647-658.

94. Kim RB. MDR1 single nucleotide polymorphisms: multiplicity of haplotypcs and functional consequences. // Pharmacogenetics. 2002. -V. 12. - P. 425-427.

95. Kioka N., Tsubota J., Kakehi Y. et al. P-glycoprotein gene (MDR1) cDNA from human adrenal: normal P-glycoprotein carries Glyl85 with an altered pattern of multidrug resistance. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989. - V. 162. - P. 224-231.

96. Klimecki W.T., Futscher B.W., Grogan T. M. et al. P-glycoprotein expression and function in circulating blood cells from normal volunteers. // Blood. 1994. - V. 83. -P. 2451-2458.

97. Klone A., Weidner U., Hussnatter P. et al. Decreased expression glutathione S-transferase alpha and pi genes in human renal cell carcinoma. // Carcinogenesis. -1990.-V. 11.-P. 2179-2183.

98. Kunkel L.M., Smith K.D., Boyer S.H. et al. Analisis of human Y-chromosome -specific reiterated DNA in chromosome variants // Proc. Nat. Acad. Sci. 1977. - V. 74.-P. 1245-1249.

99. Le Hir H., Nott A., Moore M. J. How introns influence and enhance eukaryotic gene expression. // Trends Biochem. Sci.- 2003.- V. 28 P. 215-220.

100. Legrand O., Simonin G. Pgp and MRP activities using Calcein-AM arc prognostic factors in adult acute myeloid leukemia patients. // Blood. 1998. - V. 91. - P. 44804488.

101. Leonard G.D., Fojo T. The role of ABC transporters in clinical practice. // The Oncologist. 2003. - V. 8. - P. 411-424.

102. Lieberman D.A., Hoffman B., Steinmann R.A. Molecular controls of growth arrest and apoptosis: p53-dependent and independent pathways. // Oncogene. 1995. - V. 11.-P. 199-210.

103. Lockhart A.C., Tirana R.G., Kim R.B. Pharmacogenetics of ATP-binding cassette transporters in cancer and chemotherapy. 2003. - V. 2. - P. 685-698.

104. Loe U.W., Deeley R.O., Cole S.P.C. Biology of the multidrug resistance-associated protein, MRP. // Eur. J. Cancer. 1996. - V. 32A. - P. 942-957.

105. Mannervik B. The isoenzymes of glutathione transferase. // Adv. Enzymol. Relat. Areas. Mol. Biol. 1985. - V. 57. - P. 357-417.

106. Mannervik B. The isoenzymes of glutathione transferase. // Adv. Enzymol. Relat. Areas. Mol. Biol. 1985. - V. 57. - P. 357-417.

107. Mannervik B., Awasti Y.C., Board P.G. et al. Nomenclature for human glutathione transferases. // Biochem. J. 1992. - V. 282. - P. 305-306.

108. Marie J. P-glycoprotein in adult haemotological malignancies. // Hematol. Oncol. Clin. N. Am. 1995. - V. 9. - P. 239-250.

109. Marie J.P., Simonin G., Legrand O. et al. Glutathione-S-transferases pi, alpha, mu and mdrl mRNA expression in normal lymphocytes and chronic lymphocytic leukemia. // Leukemia. 1995. - V. 9. - P. 1742-1747.

110. Marie J.P., Zhou D.C., Gurbxani S. et al. MDR/P-glycoprotein in haematological neoplasms. //Eur. J. Cancer.- 1996.- V. 32A-P. 1034-1038.

111. Marzolini C., Paus E., Buclin T. et al. Polymorphisms in human MDR1 (P-glycoprotein): Recent advances and clinical relevance. // Clin. Pharmacol. Ther. -2004.-V. 75.-P. 13-33.

112. Mickley L.A., Lee J.S., Weng Z. et al. Genetic polymorphism in MDR-1: a tool for examining allelic expression in normal cells, unselected and drug-selected cell lines, and human tumors. // Blood. 1998. - V. 91. - P. 1749-1756.

113. Miller M.S., McCarver D.G., Bell D.A. et al. Genetic polymorphisms in human drug metabolic enzymes. // Fundam. Appl. Toxicol. 1997. - V. 40. - P. 1-14.

114. Montserrat E., Roynan C. Current approaches to the treatment and management of chronic lymphocytic leukaemia. // Drugs. 1994. — V. 47. - P. 1-9. /

115. Morgenstern R., DePierre J.W. Microsomal glutathione S-transferase. // Rev. Biochem. Toxicol. 1985.-V. 7.-P. 67-103.

116. Morgenstern R., Wallin H., DePierre J.W. Mechanisms of activation of microsomalgluthation transferase. // In "Gluthation S-transferases and carcinogenesis" (Mantle T.J., Pickett C.B., Hayes J.D. eds) Taylor&Francis, London, 1987.

117. Morgenstern R., Wallin H., DePierre J.W. Mechanisms of activation of microsomalgluthation transferase. // Glu- S-tr. and carcinogenesis. 1987. - V. 1-P. 23-35.

118. Moscow J.A., Fairchild C.R., Madden M.J. et al. Expression of anionic glutatione S-transferase and P-glycoprotein genes in human tissue and tumors. // Cancer Res. -1989.-V. 49.-P. 1422-1428.

119. Moscow J.A., Fairchild C.R., Madden M.J. et al. Expression of anionic glutatione S-transferase and P-glycoprotein genes in human tissue and tumors. // Cancer Res. -1989.-V. 49.-P. 1422-1428.

120. Moscow J.A., Townsend A.J., Cowan K.H. Elevation of pi class glutathione S-transferase activity in human breast cancer cells by transfection of the GSTP1 gene and its effect on sensitivity to toxins. // Mol. Pharmac. 1989. - Vol 36. - P. 22-28.

121. Moskaluk C.A., Duray P.H., Cowan K.H. et al. Immunohistochemical expresión of Pi-class glutathione S-transferase is down-regulated in adenocarcinoma of the prostate. // Cancer. 1997. - V. 79. - P. 1595-1599.

122. Mulder T.P.J., Peters W.H.M., Wobbes T. et al. Measurement of glutatione S-transferase P1-1 in plasma. // Cancer. 1997. - V. 80. - P. 873-880.

123. Nakagawa K., Saijo N., Tsuchida S. et al. Glutathione S-transferase pi as a determinant of drug resistance in transfectant cell lines. // J. Biol. Chem. 1990. - V. 265.-P. 4296-4301.

124. Nebert D.W. Genetic differences in susceptibility to chemically induced myelotoxicity and leukemia. // Envir. Health persp. 1981. - V. 39. - P. 11-22.

125. Norgaard J.M., Bukh A., Langkjer S.T. et al. MDR1 gene expression and drug resistance of AML cells. // British Jour, of Haem. 1998. - V. 100. - P. 534-540.

126. Nuessler V., Stotzer O., Gullis E. et al. Bcl-2, bax and bcl-xL expression in human sensitive and resistant leukemia cell lines. // Leukemia. 1999. - V. 13. - P. 1864-1872.

127. Ollikainen T., Hirvonen A., Norppa H. Influence of GSTT1 genotype on sister chromatid exchange induction by styrene-7,8-oxide in cultured human lymphocytes. // Environ. Mol. Mutagen. 1998. - V. 31. - P. 311-315.

128. Oselin K., Mrozikiewicz P.M., Gaikovitch E. et al. Frequency of MRP1 genetic polymorphisms and their functional significance in Caucasians: detection of a novel mutation G816A in human MRP1 gene. // Eur. J. Clin. Pharmacol. 2003. - V. 59. -P.347-350.

129. Pal A., Desalt D.H., Amin S. et al. Location of the epoxide function determines specificity of the allelic variants of human glutathione transferase Pi toward benzoc.chrysene diol epoxide isomers. // FEBS Letters. 2000. - V. 486. - P. 163166.

130. Park J.Y., Schantz S.P., Stern J.C. et al. Association between glutathione S-transferase pi genetic polymorphisms and oral cancer risk. // Pharmacogenetics. -1999.-V. 9.-P. 497-504.

131. Parkinson A. Biotransformation of xenobiotics // In: Casarett and Doull's Toxicology. //Eds. Klaassen C.D., 1996.-P. 114-184.

132. Parraga A., Garcia-Saez I., Walsh S.B. et al. The three-dimension structure of a class-Pi glutathione S-transferase complexed with glutathione: the active site provides insights into the reaction mechanism // Biochem. J. 1998. - V. 333. - P. 811-816.

133. Pastan I, Gottesman M Multiple-drug resistance in human cancer. // N. Engl. J. Med. 1987. - V. 316. -P. 388-1393.

134. Pauli-Magnus C., Kroetz D.L. Functional implications of genetic polymorphisms in the multidrug resistance gene MDR1 (ABCB1). // Pharm. Res. 2004. - V. 21. -P. 904-913.

135. Pearse N. What does the odds ratio estimate in case-control study? // Int. J. Epidemiol. 1993. - V. 22. - P. 1189-1192.

136. Pearson W.R., Vorachek W.R., Xu S.J. et al. Identification of class-mu glutathione transferase genes GSTM1-GSTM5 on human chromosome lpl3. // Am. J. Hum. Genet. 1993. - V. 53. - P. 220-233.

137. Pemble S., Schroeder K.R., Spencer S.R. et al. Human glutathione S-transferase Theta (GSTT1): cDNA cloning and the characterization of a genetic polymorphism. // Biochem. J. 1994. - V. 300. - P. 271-276.

138. Peters W.H., Wormskamp N.G., Thies E. Expression of glutathione S-transferases in normal gastric mucosa and in gastric tumors. // Carcinogenesis. 1990. - V. 11.-P.1593-1596.

139. Potochik U., Ravnik-Glavac M., Glavak D. Functional MDR1 polymorphisms (G2766T and C3435T) and TCF-4 mutations in colorectal tumors with high microsatellite instability. // Cell Mol. biol. Lett. 2002. - V. 7. - P. 92-95.

140. Rai K.R., Sawitsky A., Cronkite E.P. et al. Clinical staging of chronic lymphocytic leukemia. // Blood. -1975. V. 46. - P. 219-34.

141. Randolph G. J., Beaulieu S., Pope M. et al. A physiologic function for p-glycoprotein (MDR-1) during the migration of dendritic cells from skin via afferent lymphatic vessels. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1998. - V. 95. - P. 6924-6929.

142. Ribrag V., Massade L., Faussat A.M. et al. Drug resistance mechanisms in chronic lymphocytic leukemia. // Leukemia. 1996. - V. 10. - P. 1944-1949.

143. Robak T. Acute lymphoblastic leukemia in elderly patients. // Drugs Aging. -2004.-V. 21.- P. 779-791.

144. Roddilla V., Benszie A.A., Veitch J.M. et al. Glutathione S-transferases in human renal cortex and neoplastic tissue: enzymatic activity, isoenzyme profile and immunohistochemical localization. // Xenobiotica. 1998. - V. 28. - P. 443^156.

145. Rodriguez C., Commes T., Robert J. et al. Expression of P-glycoprotein and anionic glutathione S-transferase genes in non-Hodgkin's lymphoma. // Leuk. Res. -1993.-V. 17.-P. 149-156.

146. Rollinson S. Roddam P., Kane E. Polymorphic variation within the glutathione S-transferase genes and risk of adult acute leukaemia // Carcinogenesis. 2000. - V. 21. -P. 43-47.

147. Roninson , I. B. and other. Molecular and cellular biology of multidrug resistance in tumor cells- Plenum Press, N. Y. London, 1990. - P. 556-600.

148. Ross V.L., Board P.G., Webb G.C. Chromosomal mapping of the human Mu class glutathione S-transferases to lpl3 // Genomics. 1993. - V. 18. - P. 87-91.

149. Saito S., Iida A., Secine A. et al. Three hundred twenty-six genetic variations in genes encoding nine members of ATP-binding cassette, subfamily B (ABCB/MDR/TAP), in the Japanese population. // J. Hum. Genet. 2002. - V. 47. -P. 38-50.

150. Sakaeda T., Nakamura T., Okomura K. MDR1 genotype-related pharmacokinetics and pharmacodynamics / // Biol. Pharm. Bull. 2002. - V. 25. - P. 1391-1400.

151. Salinas A.E., Wong M.G. Glutathione S-transferases-a review. // Curr. Med. Chem. 1999. - V. 6. -P. 279-309.

152. Sarmanova J., Benesova K., Gut I. et al. Genetic polymorphisms of biotransformation enzymes in patients with Hodgkin's and non-Hodgkin's lymphomas. // Hum. Mol. Genet. 2001. -V. 10. -P.1265-1273.

153. Sarmanova J., Tynkova L., Susova S. et al. Genetic polymorphisms of biotransformation enzymes: allele frequencies in the population of the Czech Republic. // Pharmacogenetics. 2000. - V. 10. - P. 781-788.

154. Satoh T., Nishida M., Tsunoda H., Kubo T. Expression of glutatione S-transferase pi (GST-pi) in human malignant ovarian tumors. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 2001. - V. 96. - P. 202-208.

155. Schisselbauer J.C., Silber R., Papadopoulos E. et al. Characterization of glutathione S-transferase expression in lymphocytes from chronic lymphocytic leukemia patients. // Cancer Res. 1990. - V. 50. - P. 3562-3568.

156. Schwab M., Eichelbaum M., Fromm M. F. Genetic polymorphisms of the human MDR1 drug transporter. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol.- 2003.-V. 43. P. 285307.

157. Seidegard J., Vorachek W.R., Pero R.W. et al. Hereditary differences in the expression of the human glutathione transferase active on trans-stilbene oxide are due to a gene deletion. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1988. - Vol .85. - P. 7293-7297.

158. Sheehan D., Meade G., Foley V.M. et al. Structure, function and evolution of glutatione transferases: implications for classification of non-mammalian members of an ancient enzyme superfamily. // Biochem. J. 2001. - V. 360. - P. 1-16.

159. Siegmund W., Ludwig K., Giessmann T. et al. The effects of the human MDR1 genotype on the expression of duodenal P-glycoprotein and disposition of the probe drug talinolol. // Clin. Pharmacol. Ther. 2002. - V. 72. P.572-583.

160. Sikic B. Pharmacologic approaches to reversing multidrug resistance. // Seminars in Hematology. 1997. - V. 34. - P. 40^7.

161. Sipes I.G., Gandolfi A.J. Biotransformation of toxicants // Casarett and Doull's toxicology / Eds C.D. Klaassen, M.O.Admur, J. Doul. N. Y.: Macmillan.Publishing Company, 1986.-P. 99-173.

162. Soucek P., Sarmanova J., Kristensen V.N. et al. Genetic polymorphisms of biotransformation enzymes in patients with Hodgkin's and non-Hodgkin's lymphomas. // Int. Arch. Occup. Environ. Health. 2002. - V.75.Suppl. P. S86-S92.

163. Sparreboom A., Danesi R., Ando Y. et al. Pharmacogenomics of ABC transporters and its role in cancer chemotherapy. // Drug Resist.Updat. 2003. - V. 266. - P. 114.

164. Stam R.W., van den Heuvel-Eibrink M.M., den Boer M.L. et al. Multidrug resistance genes in infant acute lymphoblastic leukemia: Ara-C is not a substrate for the breast cancer resistance protein. / // Leukemia. 2004. - V. 18. - P. 78-83.

165. Strange R., Jones P.W., Fryer A.A. Glutathione S-transferase: genetics and role in toxicology .// Toxicol, lett. 2000. - V. 112-113. - P. 357-363.

166. Sweeney C., McClure G.Y., Fares M.Y. et al. Ambrosone C.B. Association between survival after treatment for breast cancer and glutathione S-transferase PI Ilel05Val polymorphism. // Cancer Res. 2000. - V. 60. - P. 5621-5624.

167. Tan K.L., Board P.G. Purification and characterization of a recombinant human Theta-class glutathione transferase (GSTT2-2). // Biochem. J. 1996. - V. 315. - P. 727-732.

168. Tew K.D. Glutathione-associated enzymes in anticancer drug resistance. // Cancer. Res. 1994. - V. 54. - P. 4313-4320.

169. Thomas IT, Coley H.M. Overcoming multidrug resistance in cancer: an update on the clinical strategy of inhibiting P-glycoprotein. // Cancer Control. 2003. - V. 10. -P.159-165.

170. Thomas X, Quoc-Hung L. Prognostic factors in adult acute lymphoblastic leukemia. // Hematology. 2003 - V. 8. - P. 233-242.

171. Thottassery J.V., Zambetti J. P., Arimori K. p53-dependent regulation of MDR1 gene expression causes selective resistance to chemotherapeutic agents. // Pharmacology. 1997.-V. 94.-P. 11037-11042.

172. Toffoli G., Viel A., Tumiotto L. et al. Expression of glutathione S-transferase-pi in human tumours. // Eur. J. of Cancer. 1992. -V. 28A. - P1441-1446.

173. To-Figueras J., Gene M., Gomez-Catalan J. et al. Genetic polymorphism of glutathione S-transferase PI gene and lung cancer risk. // Cancer Causes Control. -1999. -V. 10.-P. 65-70.

174. Tsuchida S, Sato K. Glutathione transferases and cancer. // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1992. - V. 27. - P. 337-384.

175. Ueda K, Taguchi H, Morishima M. How does P-glycoprotein recognize its substrates? // Cancer Biology. 1997. - V. 8. - P. 151-159.

176. Watson M.A, Stewart R.K, Massey T.E. et al. Human glutathione S-transferase PI polymorphisms: relationship to lung tissue enzyme activity and population frequency distribution. // Carcinogenesis. 1998. - V. 19. - P. 275-280. <

177. Webb G, Vaska V, Coggan M. et al. Chromosomal localization of the gene for the human theta class glutathione transferase (GSTT1) // Genomics. 1996. - V. 33. -P. 121-123.

178. Webb M. Brun M, McNiven M, Le Couteur D. et al. MDR1 and MRP expression in chronic B-cell lymphoproliferative disorders. // Br. Jour, of Haem. 1998. - V. 102.-P. 710-717.

179. Welfare M, Adeokun A.M., Bassendine M.F. et al. Polymorphism in GSTP1, GSTM1, and GSTT1 and susceptibility to colorectal cancer. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 1999. - V. 8. - P. 289-292.

180. Xu S, Wang Y, Roe B. et al. Characterization of the human class Mu glutathione S-transferase gene cluster and the GSTM1 deletion. // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273.-P. 3517-3527.

181. Yuille M., Condie A., Hudson C. et al. Relationship between glutathione S-transferase Ml, Tl, and PI polymorphisms and chronic lymphocytic leukemia. // Blood. 2002. - V. 99. - P. 4216-4218.

182. Zhan Z., Sandor V. A., Gamelin E. et al. Expression of the multidrug resistance-associated protein gene in refractory lymphoma: quantitution by a validated polymerase chain reaction assay. // Blood. -1997. Vol 89. - P. 3795-3800.

183. Zimniak P., Nanduri B., Pikula S. et al. Naturally occuring human glutathione S-transferase GSTP1-1 isoforms with isoleucine and valine in position 104 differ in enzymic properties // Eur. J. Biochem. 1994. - V. 224. - P. 893-899.