Исследование путей реализации апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Трубицына, Мария Сергеевна

  • Трубицына, Мария Сергеевна
  • кандидат биологических науккандидат биологических наук
  • 2009, Воронеж
  • Специальность ВАК РФ03.00.02
  • Количество страниц 174
Трубицына, Мария Сергеевна. Исследование путей реализации апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода: дис. кандидат биологических наук: 03.00.02 - Биофизика. Воронеж. 2009. 174 с.

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Трубицына, Мария Сергеевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Структурно-функциональные свойства лимфоцитов.

1.1.1. Общая характеристика лимфоцитов.

1.1.2. Т-лимфоциты.151.1.3. В-лимфоциты.

1.1.4. Натуральные киллеры.

1.2. Механизмы реализации апоптоза.

1.2.1. Определение, морфологические признаки, физиологическое значение апоптоза.

1.2.2. Пути реализации апоптоза.

1.2.3. Регуляторы апоптоза.

1.3. Структурно-функциональные фотомодификации лимфоцитарных клеток .361.4. Активные формы кислорода: механизмы образования, свойства, утилизация, биологическая роль.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 2. Объект и методы исследования.

2.1. Объект исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Выделение лимфоцитов из крови доноров.

2.2.2. Определение жизнеспособности клеток.

2.2.3. Определение уровня экспрессии Fas-рецепторов лимфоцитов методом иммуноферментного анализа.

2.2.4. Определение уровня цитохрома с в лизатах лимфоцитов при помощи метода иммуноферментного анализа.

2.2.5. Определение уровня р53 в лизатах лимфоцитов при помощи метода иммуноферментного анализа.

2.2.6. Определение активности каспазы-3 лимфоцитов при помощи флуоресцентного метода.

2.2.7. Выделение ДНК из лимфоцитов и исследование ее структурных свойств методом электрофореза в агарозном, геле.

2.2.8. Исследование структурного состояния ДНК методом ДНК-комет.

2.2.9. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов.

2.2.101 Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран лимфоцитов при помощи метода флуоресцентных зондов.

2.2.11. УФ-облучение исследуемых образцов.

2.2.12. Системы генерации активных форм кислорода.

2.2.13. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА1 3. Исследование рецепторного- каспазозависимого пути апоптоза лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света и активных форм,кислорода.

3.1. Исследование жизнеспособности лимфоцитов человека после воздействия УФ-излучения и активных форм кислорода.

3.2. Изменения уровня экспрессии рецепторов смерти CD95 лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и активных форм кислорода.

3.2.1. Изменения уровня экспрессии рецепторов смерти CD95 лимфоцитов человека после воздействия УФ-света.

3.2.2. Изменения уровня экспрессии рецепторов смерти CD95 лимфоцитов человека после воздействия активных форм кислорода.

3.3. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и генерации активных форм кислорода. 92.

3.3.1. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов человека после воздействия УФ-света.

3.3.2. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции^ лимфоцитов человека после генерации активных форм кислорода*.

3.4. Изменения функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека после воздействия УФ-излучения и активных форм кислорода.

3.4.1. Изменения функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека после воздействия УФ-излучения.

3.4.2. Изменения функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека после воздействия активных форм кислорода.

ГЛАВА 4. Исследование р53-зависимого > пути- апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных кислородных метаболитов.

4.1. Структурные модификации ДНК лимфоцитов человека в динамике развития- апоптоза, индуцированного воздействием УФ-излучения и' активных форм кислорода.

4.1.1. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов, модифицированных воздействием УФ-света, методом электрофореза в агарозном геле.

4.1.2. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов, модифицированных воздействием- активных форм кислорода, методом электрофореза в агарозном геле.

4.1.3. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов. человека при помощи метода ДНК-комет.

4.1.3.1. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света, при помощи метода ДНК-комет.ИЗ

4.1.3.2. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов человека, модифицированных воздействием пероксида водорода, при помощи метода ДНК-комет.

4.2. Изменения уровня р53 в цитозоле лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света и активных форм кислорода.

ГЛАВА 5. Исследование митохондриального пути апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода.

5.1. Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и активных форм кислорода.

5.1.1. Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран УФ-облученных лимфоцитов человека.

5.1.2. Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран после модификации лимфоцитов активными формами кислорода.

5.2. Изменения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света и активных форм кислорода.

5.2.1'. Изменения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света.

5.2.2. Изменения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов человека. модифицированных воздействием пероксида водорода.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Биофизика», 03.00.02 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование путей реализации апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода»

Актуальность проблемы. Гибель клеток в результате апоптоза — основное свойство практически всех клеток (M.D. Jacobson et al., 1997). Это обязательный процесс нормального развития органов, тканевого гомеостаза, развития нервной системы и регуляции иммунной системы. Недостаточная илк избыточная гибель клеток ведет к различным заболеваниям человека, включая злокачественные образования, дегенеративные заболевания, иммуноде-фицитные состояния (С.В. Thompson, 1995). Высокая степень координации и стереотипность процессов индуцированной гибели клеток свидетельствуют о том, что клетки активируют типовую программу гибели, к которой сводятся разнообразные пути сигнальной трансдукции (A.M. Chinnaiyan, V.M. Dixit, 1996; E. White, 1996; J. Yang, 1997).

К настоящему времени накоплены обширные сведения о типах программированной клеточной гибели, ее морфологических проявлениях, путях реализации, основных «участниках» и регуляторах апоптоза (Е.Б. Владимирская, 2002).

Вместе с тем отсутствуют детальные представления о взаимосвязи отдельных этапов программированной клеточной смерти, составляющих ее основные независимые фазы: инициацию, эффекторную фазу и деградацию, и оценке их временных характеристик. Не менее значимыми представляются вопросы, касающиеся изучения способов инициации различных путей апоптоза (рецепторопосредованного, митохондриального, каспазонезависимого и др.), выяснения точек («сайтов») их интеграции и возможности целенаправ: ленного регулирования процессов клеточной гибели при помощи физико-химических агентов.

Поскольку апоптоз — физиологическое явление, то в организме должны быть факторы, приводящие к ПКГ. В настоящее время известно, что таковыми могут быть как внутриклеточные сигналы, так и внешние, опосредующие свое действие через рецепторные системы, которые сами по себе не являются токсическими или деструктивными. Это могут быть неспецифические факторы, такие как температура, токсические агенты, оксиданты, свободные радикалы, гамма- и УФ-излучение, бактериальные токсины и др. Во всех этих случаях происходит индукция апоптоза, но при увеличении дозы соответствующего агента развивается некроз клетки (Т.А. Ушакова и др., 2004).

УФ-свет известен как потенциальный индуктор апоптоза в различных типах клеток (И.Ф. Донская и др., 1997). Показано, что УФ-свет может индуцировать апоптоз в клетках некоторых лимфоидных линий. Известно, что апоптоз иммунокомпетентных клеток в условиях УФ-В-излучения запускается С095(РаБ/Аро-1)-рецепторно/лигандной системой (R. Caricchio et al., 1998). Однако молекулярные механизмы этого процесса и последовательность начальных этапов развития клеточной гибели в условиях облучения изучены далеко не полностью. Остаются открытыми вопросы, касающиеся выявления способов запуска различных путей реализации апоптоза в условиях воздействия УФ-света.

Особое внимание в последние годы уделяется изучению роли активированных кислородных метаболитов в развитии апоптоза. Известно, что программированная гибель клеток, как правило, сопровождается образованием значительного количества активных форм кислорода. В то же время АФК способны инициировать апоптоз в различных типах клеток (О.Ю. Плетюш-кина и др., 2006). Показано (В.В. Новицкий и др., 2008), что интенсификация внутриклеточной продукции АФК связана с вовлечением митохондриального и TNFR(tumor necrosis factor гесер!ог)-опосредованного путей. Однако, несмотря на очевидную взаимосвязь окислительного стресса с апоптозом, роль АКМ в саморазрушении клеток неясны (Н.К. Зенков и др., 1999).

В связи с вышеизложенным нами были исследованы механизмы и последовательность этапов программированной клеточной гибели лимфоцитов крови доноров в условиях воздействия УФ-света и активных форм кислорода.

Цель и задачи диссертационной работы. Целью работы явилось выявление путей реализации апоптоза лимфоцитов периферической крови доноров, индуцированного воздействием УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м" и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода). Задачи работы предусматривали:

1. Исследование изменений уровня экспрессии мембранных рецепторов смерти CD95 (Fas) лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и АФК.

2. Исследование изменений функциональной активности эффекторной* каспазы-3 лимфоцитов доноров после УФ-облучения клеток и генера1 ции АФК.

3. Изучение структурных модификаций ДНК лимфоцитов человека в динамике развития апоптоза, индуцированного воздействием УФ-излучения и АФК.

4. Исследование изменений уровня белка р53 в лимфоцитах доноров после У Ф-облучения* клеток и генерации АФК.

5. Исследование изменений уровня цитохрома с в цитозоле и структурного состояния митохондриальных мембран лимфоцитарных клеток после воздействия УФ-света и АФК.

Научная новизна. Впервые изучены изменения структурного состояния ДНК, уровня экспрессии мембранного Fas-рецептора, функциональной активности каспазы-3, концентрации белков р53 и цитохрома с лимфоцитарных клеток человека в динамике развития апоптоза, индуцированного воздействием УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м2 и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода). Установлено, что УФ-свет и АФК индуцируют фрагментацию ДНК лимфоцитов после 20 ч инкубации модифицированных клеток. Показано, что в течение 1 -5 ч после воздействия

УФ-света и АФК на лимфоциты наблюдается повышение уровня экспрессии мембранных Fas-рецепторов смерти по сравнению с интактными клетками. Обнаружено увеличение функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов через 4 ч после генерации синглетного кислорода, гидроксильного радикала и добавления пероксида водорода, а также через 8и24и6и8ч после УФ-облучения клеток соответственно в дозах 151 и 1510 Дж/м . С использованием метода ДНК-комет выявлено, что повреждения ДНК (двунитевые разрывы) появляются сразу после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 1510 и 3020

- О {л

Дж/м" и добавления пероксида водорода в концентрации 10" моль/л (кометы типа С1) и достигают максимума через 6 ч после модификации клеток (кометы типов С2 и СЗ). Установлено, что через 6 ч после воздействия пероксида водорода и УФ-света в дозах 1510 и 3020 Дж/м" на лимфоциты происходит повышение уровня р53 в исследуемых клетках. Сделано заключение о ведущей роли рецепторопосредованного (Fas-зависимого)* каспазного и р53-зависимого путей в реализации апоптоза лимфоцитов, индуцированного воздействием УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м и пероксида водорода (10" моль/л). Предложена схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптотической гибели лимфоцитов после их УФ-облучения.

Практическая значимость. Теоретические положения диссертационной работы углубляют современные представления о путях и механизмах реализации апоптоза иммунокомпетентных клеток человека, индуцированного воздействием физико-химических факторов. Они могут быть использованы для разработки способов целенаправленного управления программами жизнедеятельности клеток организма при патологических состояниях, связанных с усилением или ослаблением процессов клеточной гибели. Результаты работы используются в учебном процессе Воронежского государственного университета при проведении занятий по дисциплинам «Биофизика», «Биофизика мембран», «Физико-химические основы межклеточных взаимодействий», «Медицинская биохимия и биофизика», а также в ходе выполнения магистерских и дипломных работ студентами кафедры биофизики и биотехнологии.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на IV съезде фотобиологов России (Саратов, 2005); 3-й Международной конференции ИНТЕРНАС-2007 "Актуальные проблемы современного естествознания" (Калуга, 2007); 15-ой Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов-2008" (Москва, 2008); Международной научной конференции "Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем" (Беларусь, Минск,

2008); 5-ом съезде Российского фотобиологического общества "Преобразование энергии света при фотосинтезе" (Пущино, 2008); 6-ом Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008);. на Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов-2009" (Москва, 2009); Научной сессии сотрудников Воронежского госуниверситета (Воронеж,

2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 статей и 8 тезисов, в том числе 2 статьи в журнале системы РАН.

На защиту выносятся следующие положения:

1. В реализации апоптоза лимфоцитов периферической крови доноров, индуцированного воздействием УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 1510 Дж/м" и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетногб кислорода) ведущая роль принадлежит рецепторопосредованному кас-пазному и р53-зависимому путям. л

2. В условиях УФ-облучения лимфоцитов в дозе 3020 Дж/м осуществляются рецепторопосредованный без участия каспазы-3, р53зависимый и каспазонезависимый пути инициации программированной клеточной гибели.

3. Гибель лимфоцитов в условиях воздействия УФ-света и Н2С>2 происходит через промежуточное состояние С1 с образованием высокомолекулярных фрагментов ДНК (> 300 т.п.н.) и состояние С2, характеризующееся наличием фрагментов ДНК (< 50 т. п.н.) до состояния СЗ, характеризующегося межнуклеосомной фрагментацией ДНК (Nxl80 п. н.).

4. Схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптоти-ческой гибели лимфоцитов после их УФ-облучения.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа включает 172 страницы машинописного текста, 4 таблицы, 50 рисунков. Состоит из "Введения", 5 глав, "Заключения", "Выводов" и "Приложения". Список литературы содержит 240 источников, из них 88 - отечественных и 152 — зарубежных.

Похожие диссертационные работы по специальности «Биофизика», 03.00.02 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Трубицына, Мария Сергеевна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что в течение 1-5 ч после воздействия УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м2 и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода) наблюдается повышение уровня экспрессии мембранных рецепторов смерти - Fas (CD95) — по сравнению с таковым для интактных клеток.

2. Показано, что увеличение уровня экспрессии CD95 лимфоцитов, модифицированных воздействием УФ-излучения в использованных дозах и пероксида водорода в концентрации 10"6 моль/л, обусловлено демаскированием ранее скрытых (предсуществующих) и синтезом новых молекул Fas-рецепторов. Экзогенная генерация в исследуемых образцах синглетного кислорода, супероксидного анион-радикала и гидроксильного радикала индуцировала демаскирование ранее недоступных молекул CD95 лимфоцитарных мембран.

3. Обнаружено повышение функциональной активности эффекторной каспазы-3 по отношению к контролю через 8 и 24 ч; 6 и 8 ч; 4 ч соответственно после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 151; 1510 Дж/м"; воздействия АФК (синглетного кислорода, пероксида водорода, гидроксильного радикала).

4. Выявлена фрагментация ДНК лимфоцитов через 20 ч после воздействия УФ-света в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м" и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода).

5. Установлено, что повреждения ДНК (двунитевые разрывы) появляются сразу после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 1510 и 3020 Дж/м и добавления пероксида водорода в концентрации 10"6 моль/л (кометы типа С1) и достигают максимума через 6 ч после модификации клеток (кометы типов С2 и СЗ).

6. Обнаружено, что гибель лимфоцитов по типу апоптоза в условиях воздействия УФ-света и пероксида водорода происходит через промежуточные состояния С1 и С2 с образованием соответственно высокомолекулярных фрагментов ДНК размером > 300 т.п.н. и фрагментов размером < 50 т.п.н. до состояния СЗ, характеризующегося межнуклеосомной фрагментацией ДНК (Nxl80 п.н.).

7. Показано, что через 6 ч после облучения клеток в дозах 1510 и 3020 Дж/м и воздействия пероксида водорода наблюдается повышение уровня белка р53 по сравнению с таковым для интактных лимфоцитов.

8. Увеличение внутриклеточной концентрации цитохрома с по отношению к контролю зарегистрировано через 1,5 ч после УФ-облучения лимфоцитов в дозе 151 Дж/м .

9. Нарушения структурного состояния митохондриальных мембран обнаружены после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м", синглетного кислорода и пероксида водорода.

10. Выявлена ведущая роль рецепторопосредованного каспазного и р53: зависимого путей в реализации апоптоза лимфоцитов в условиях воздействия УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м и активных форм кислорода, в частности, пероксида водорода.

11 .Постулируется возможность инициации рецепторопосредованного без участия каспазы-3, р53-зависимого и каспазонезависимого путей

2 i апоптоза в условиях УФ-облучения лимфоцитов в дозе 3020 Дж/м .

12. Предложена схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптотической гибели лимфоцитов после их УФ-облучения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При помощи методов иммуноферментного анализа, люминесценции, электрофореза в агарозном геле, ДНК-комет исследованы пути- реализации апоптоза лимфоцитов периферической крови доноров, индуцированного воздействием УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м2 и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала; пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода)

Обнаружено повышение по отношению к контролю уровня экспрессии мембранных рецепторов* апоптотических сигналов CD95 лимфоцитов, суспендированных в питательной среде RPMI-16401 и растворе Хенкса, в течение 1-5 ч после УФ-облучения клеток в использованных дозах. Установлено, что' увеличение экспрессии Fas-рецепторов^ лимфоцитов, модифицированных воздействием УФ-света, в растворе Хенкса связано не только с демаскированием ранее недоступных (скрытых) молекул CD95, но и с синтезом их новых молекул через 4 и 5 после облучения иммуноцитов. Показано, что динамика исследуемого5 параметра суспензии лимфоцитов в условиях воздействия УФ-света. обусловлена изменением уровня5 Fas-рецепторов Т-клеток.

Обнаружено повышение уровня функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека по отношению > к, таковому для интактных образцов через 8и24чи6и8ч соответственно после облучения клеток в дозах 151 и

О О

1510 Дж/м". УФ-модификация лимфоцитов в дозе 3020 Дж/м" индуцирует инактивацию каспазы-3.

Установлено, что после 20 ч инкубации лимфоцитов, УФ-облученных в л дозах 151, 1510,' 3020 Дж/м(, происходит фрагментация ДНК, на что указывает совокупность полос («апоптозная лестница») на электрофореграмме, соответствующая фрагментам ДНК меньшего* размера по сравнению с контролем.

Повреждения ДНК (двунитевые разрывы) обнаруживаются сразу после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 1510 и 3020 Дж/м2 (ДНК-кометы типа С1) и достигают максимума через 6 ч после модификации клеток (кометы типов С2 и СЗ). Вероятно, двунитевые разрывы ДНК являются сигналом к запуску апоптоза, осуществляющегося с участием транкрипционного фактора р53, проапоптозного белка Вах и других митохондриальных факторов апоптоза. Изменения структурного состояния митохондриальных мембран были обнаружены нами после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м".

Через 20 ч после облучения лимфоцитов в дозе 151 Дж/м обнаружены фрагменты ДНК с размерами 6000 п.н. и менее 1500 п.н. Использование метода ДНК-комет в этих условиях позволило выявить кометы класса С2, характерные для предапоптотических клеток (фрагменты ДНК < 50 т.п.н.).

Через 20 ч после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозе 1510 Дж/м зарегистрировано образование фрагментов ДНК менее 1500 п.н. и ДНК-комет СЗ-класса, что указывает на межнуклеосомную фрагментацию ДНК, характерную для погибающих клеток.

Через 20 ч после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозе 3020 Дж/м" обнаружены фрагменты ДНК размером примерно 5000 п.н. и менее 1500 п.н., кометы СЗ- и С4-классов. В этих же условиях наблюдалась инактивация каспазы-3. По-видимому, эти результаты указывают на возможность реализации р53-зависимого пути апоптоза, сопровождающегося выходом из митохондрий AIF - фактора, индуцирующего апоптоз, и индукцией каспазонезависимого пути программированной клеточной смерти. В то же время ингибирование каспаз и снижение уровня АТФ в клетке могут приводить к блокированию фазы деградации апоптоза, переходу апоптоза во вторичный некроз.

Предположение о возможности участия р53 в осуществлении апоптоза лимфоцитов было подтверждено нами после обнаружения (по сравнению с интактными иммуноцитами) более высокого уровня этого белка через 6 ч " после облучения клеток в дозах 1510 и 3020 Дж/м2.

На основании результатов определения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов через 1,5 и 4 ч после УФ-облучения клеток предполагается* возможность участия цитохрома с в осуществлении программированной клеточной смерти лимфоцитов человека, индуцированной воздействием УФ-света в минимальной из использованных доз (151 Дж/м ).

Полученные нами результаты позволили сделать заключение о ведущей роли рецепторопосредованного (Fas-зависимого) каспазного пути в реализации апоптоза лимфоцитов после воздействия УФ-света в дозах 151 й 1510 Дж/м~ (рис. 50). УФ-облучение индуцирует активациюг мембранных рецепторов смерти CD95, что приводит к запуску каспазного каскада- и активации эффекторной каспазы-3, следствием чего является фрагментация ДНК. Через 6 ч после облучения клеток, когда выявляется, максимальный уровень повреждений ДНК и рост количества р53 в лимфоцитах по сравнению с контрольными образцами, дополнительно запускается р53-зависимый путь программированной клеточной! смерти, также завершающийся фрагментацией ДНК. В случае УФ-облучения исследуемых клеток в дозе 3020 Дж/м" можно предположить участие рецепторопосредованного без участия каспазы-3 (с участием каспазы-12), р53-зависимого и каспазонезависимого путей реализации1 апоптоза лимфоцитов.

Нельзя исключить и роль ионов кальция в инициации апоптоза (рис. 50), так как обнаружено (М.А. Наквасина и др., 2008)» повышение внутриклеточной концентрации этого иона1 после УФ-облучения лимфоцитов.

При исследовании структурно-функциональных модификаций лимфоцитов человека в динамике развития» апоптоза, индуцированного воздействием АФК, выявлено повышение по сравнению с контролем уровня экспрессии Fas-рецепторов иммуноцитов, суспендированных в среде RPMI-1640, растворе Хенкса, а также их Т-клеточной суспензии.

Через 4 ч после генерации синглетного кислорода, гидроксильного радикала и добавления пероксида водорода к лимфоцитам наблюдалось повышение функциональной активности каспазы-3 по отношению к таковому для контрольных образцов.

После 20 часов инкубации лимфоцитов, модифицированных воздействием пероксида водорода (10*6 моль/л) происходит образование фрагментов ДНК, размеры которых составляют 1500-4000 п. н. После обработки лимфоцитов раствором пероксида водорода наблюдали образование комет класса С1, через 6 и 20 ч инкубации модифицированных клеток соответственно - комет С2/СЗ и СЗ/С4 классов. Наибольший объем, повреждений ДНК приходился на время 6 ч после обработки лимфоцитов Н2О2. Через 6 ч регистрировали также повышение уровня р53 в лимфоцитах, модифицированных воздействием пероксида водорода.

Следовательно, полученные результаты свидетельствуют в пользу представления о реализации рецепторопосредованного. каспазного и р53-зависимого путей апоптоза лимфоцитов в условиях воздействия АФК и, в частности, пероксида водорода. По-видимому, структурно-функциональные модификации;лимфоцитов под влиянием АФК вносят определенный вклад в. реализацию последовательности внутриклеточных событий, приводящих к программированной клеточной смерти иммуноцитов в условиях воздействия УФ-света.

Освобождение (мобилизация) Fas-L

Активация фосфоинозитидного пути передачи информации

Повышение уровня Са2+ в цитозоле

Активация каспазы-12

УФ-свет

Плазматическая мембрана лимфоцита

Активация Fas (демаскирование, синтез de novo)

Запуск рецепторного пути апоптоза

Активация каспаз (в т.ч. каспазы-3)

Образование радикальных соединений (в т. ч. АФК)

ДНК 1

Образование разрывов ДНК

Сенсорные белки

Активация киназы ATM

Трансактивация Fas

Активация Вах

Каспазонезависимый путь апоптоза

Экспрессия генов PIG Репрессия гена Bcl-2

Оксидативный стресс

Изменения структурного состояния митохондриальных мембран

Выход AIF

Выход цитохрома с

Повышение уровня цитохрома с

Цитохром-с Снижение независимый <— уровня путь апоптоза цитохрома с

Рис. 50. Схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптотической гибели лимфоцитов после их УФ-облучения: > - через промежуточные стадии; L -1 - вклад автора (результаты собственных исследований)

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Трубицына, Мария Сергеевна, 2009 год

1. Апоптоз клеток Hela и антиапоптозное действие онкобелка Bcl-2 не зависят от дыхания и мембранного потенциала митохондрий / J1. А. Щепина и др. // Биохимия. 2002. - Т. 67, вып. 2. - С. 265-270:

2. Артюхов В.Г. Оптические методы анализа интактных й модифицированных биологических систем / В. Г. Артюхов, О. В. Путинцева. — Воронеж : Изд-во Воронеж, ун-та, 1996. 240 с.

3. АртюховВ.Г. Структурно-функциональное состояние биомембран и межклеточные взаимодействия / В.Г. Артюхов, М.А. Наквасина. Воронеж. -2008. - 156 с.

4. Барышников А.Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин. М. : Эдитореал УРСС, 2002. - 320 с.

5. Борисов Л. Б; Медицинская- микробиология, вирусология, иммунология / Л.Б. Борисов. М. : Медицинское информационное агентство, 2001. — 736 с.

6. Бра М. Митохондрии в программированной гибели клетки: различные механизмы гибели / М. Бра, Б. Квинан, С.А. Сузин // Биохимия. 2005. — Т. 70, вып. 2.-С. 284-293.

7. Брондз Б.Д. Молекулярные и клеточные аспекты иммунологического рас-познвания / Б.Д. Брондз, О.В. Рохлин. — М. : Наука, 1978. — 336 с.

8. Влияние ультрафиолетового света и дексаметазона на функциональные свойства лимфоцитов и нейтрофилов В.Г. Артюхов и др. // Радиационная биология. Радиоэкология. 2005. - Т. 45, № 2. - С. 196-200.

9. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз / Н.К. Зенков и и др. // Успехи современной биологии. 1999. - Т. 119, № 5. - С. 440-450.

10. Волгарева Е.В. Влияние УФ-облучения в терапевтической дозе и УФ-облученной крови на пролиферативную и рецепторную- активность ауто-логичных лимфоцитов / Е.В. Волгарева // Цитология. 1991. - № 9. - С~ 59.;

11. Волгарева Е.В. Влияние УФ-облучения и УФ-облученной аутологичной крови на функциональное состояние лимфоцитов периферической крови человека / Е.В. Волгарева, А.П. Волгарев, К.А. Самойлова // Цитология. — 1990. -№ 12.-С. 1217-1223.

12. Вольский Н.Н. Влияние супероксидного радикала на пролиферацию лимфоцитов, стимулированную митогеном / Н.Н. Вольский, Н.В. Кашлакова, В.А. Козлов // Цитология. — 1988. — Т. 30, № 7. — С. 898—902.

13. Галактионов В.Г. Иммунология / В.Г. Галактионов. М. : Изд-во МГУ, 1998.-480 с.

14. Гамалей И.А. Перекись водорода как сигнальная молекула / И.А. Гамалей, И.В. Клюбин // Цитология. 1996. - Т. 38, № 12. - С. 1233-1247.

15. Двурекова Е.А. Структурно-функциональное состояние иммуноцитов при их взаимодействии с гуморальными факторами иммунной-системы в условиях УФ-облучения: дис. . канд. биол. наук / Е.А. Двурекова. — Воронеж, 2005.-208 с.

16. Дмитриев Е.В. Модуляция структурно-функциональных изменений- мемт бран Т- и В-лимфоцитов крови человека некоторыми химическими и физическими агентами: дис. . канд. биол. наук / Е.В. Дмитриев. — Воронеж, 2003. — 161 с.

17. Иммунология / Е.С. Воронин и др.; Под ред. Е.С. Воронина. — М. : Колос-Пресс, 2002 .- 405 с.

18. Кассирский И. А. Клиническая гематология / И.А. Кассирский, Г.А. Алексеев. М. : Медгиз, 1955. - С. 61-88.

19. Кетлинский С.А. Роль Т-хелперов типов 1 и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета / С.А. Кетлинский // Иммунология. — 2002. — N22. С. 77-79.

20. Клинико-иммунологические параллели при лечении больных аутотранс-фузией УФ-облученной крови / А.Ф. Гаврилова и др. // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на- организм человека и животных. Л., 1986. — С. 74-79.

21. Колтаков И.А. Исследование структурно-функционального состояния Т-лимфоцитов крови человека при модификации а-интерфероном. и в условиях УФ-облучения: Автореф. дис. . канд. биол. наук / И.А.Колтаков. — Воронеж, 2007. 24 с.

22. Косолапов В.А. Хемилюминесцентные методы в оценке свободноради-кальных реакций / В.А. Косолапов, О.В. Островский, А. А. Спасов // Клин, и лаб: диагност. 1999. - № 9. - С. 41.

23. Красновский^А.А. Синглетный молекулярный кислород: механизмы образования и пути дезактивации в фотосинтетических системах / А.А. Крас-новский // Биофизика. — 1994: — Т. 39, вып. 2. — С. 236—250.

24. Крыленков В.А. Электронно-микроскопическое исследование поверхности необлученных и УФ-облученных лимфоцитов крови человека / В. А. Крыленков, М. С. Брудная, Я. Ю. Комиссарчик // Цитология. — 1983. Т. 25, №4.-С. 476-481.

25. Куклина Е. М. сАМФ-зависимая сигнальная трансдукциЯ|В контроле активации Т-лимфоцитов / Е. М. Куклина, С. В. Ширшев // Биохимия, 2000. — Т. 65, вып. 6.-С. 741-752.

26. Кульберг А .Я. Молекулярная иммунология / А.Я. Кульберг. — М. : Высш. шк., 1985.-287 с.

27. Куцый М.П. Участие протеаз в апоптозе / М.П. Куцый, Е.А. Кузнецова,

28. A.И. Газиев // Биохимия 1999: - Т. 64, № 2. - С. 149-163.

29. Лимфоциты: методы / Под ред. Дж. Клауса. — М.: Мир, 1990 — 395 с.

30. Лонская И.А. Индукция и подавление апоптоза в тимоцитах крысы ультрафиолетовым облучением / И.А. Лонская, В.Н. Афанасьев, В.А. Печатников // Биофизика. 1997. - Т.42, вып. 3. - С. 680-685.

31. Мартынова Е.А. Влияние сфинголипидов на активацию Т-лимфоцитов / Е.А. Мартынова // Биохимия. 1998. -Т.63, № 1. - С. 122-132.

32. Маянский А.Н. Реактивность и медиаторные функции интестинальных эпителиоцитов в системе мукозального гомеостаза / А.Н. Маянский, И.В: Маянская // Иммунология. 2004. - № 3. - С. 185-192.

33. Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс при воспалении / Е.Б. Меныци: кова, Н.К. Зенков // Успехи современной биологии. — 1997. — Т. 117, вып. 2.-С. 155-157.

34. Михилева Е.А. Модуляция физико-химическими- агентами структурно-функционального состояния нейтрофилов крови человека: дис. . канд. биол. наук / Е.А. Михилева. Воронеж, 2006. - 20 Г с.

35. Модуляция апоптоза мононуклеаров в условиях окислительного стресса /

36. B.В. Новицкий, и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2008. - Т. 45, №3.-С. 251-254.

37. Молекулярная биология клетки : В 5 т. / Б. Албертс, Д; Брей, Дж. Льюис, М. Рэфф, К. Роберте, Дж. Уотсон ; Пер. с англ. под ред. Р.П. Георгиева. — М. : Мир, 1986.

38. Наградов Н.К. Взаимодействие «гидрофобной пробы» 1-анилин-8-нафталинсульфоната с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой / Р.А.

39. Асриянц // Доклады АН СССР.-1971.-Т. 199,№2.- С. 474-477.

40. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. Е.Б. Меньшикова и др.. М. : Слово. - 2006. - 556 с.

41. Осипов А.Н. Активированные формы кислорода и их роль в организме / А.Н. Осипов, О.А. Азизова, Ю.А. Владимиров // Успехи биол. химии. -1990.-Т. 31.-С. 180-208.

42. Пероксид водорода, образуемый внутри митохондрий; участвует в neper даче апоптозного сигнала от клетки к клетке / О.Ю. Плетюшкина и др. // Биохимия. 2006. - Т. 71, № 1, С. 75-84.

43. Петров Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М. : Медицина, 1987. — 416 с.

44. Пол У. Иммунология: в 3 т. / У. Пол, А. Сильверстайн, М. Купер и др.; перевод* с англ. Т. И. Власик; под ред. У. Пола.-М. : Мир, 1987-Т. 1. 476 с.

45. Практикум по иммунологии / И.А. Кондратьева и др.; Подг ред. И.А. Кондратьевой, В.Д. Самуилова. М. : Изд-во Моск. ун-та, 2001. - С. 3031.

46. Разумовский С.Д. Кислород — элементарные формы и свойства / С.Д. Разумовский. -М.: Химия, 1979. 126 с.

47. Робинсон М.В. Морфология и метаболизм лимфоцитов / М.В. Робинсон, А. Б. Топоркова, В. А. Труфакин. Новосибирск : Наука, 1986. — 128 с.

48. Ройт А. Основы иммунологии / А. Ройт / Пер. с англ. М. : Мир, 1991. — 328 с.

49. Савостина И.Е. Исследование влияния УФ-света и иммуномодуляторов на антиоксидантный статус и состояние мембран лейкоцитов. Автореф. дис. . канд. биол. наук. Воронеж, 2005. 23 с.

50. Самойлова К. А. Выход веществ* из лимфоцитов периферической крови человека, облученных коротковолновыми УФ-лучами / К. А. Самойлова, А. П. Миронова, Г. А. Арцишевская // Цитология. — 1984. — Т. 26, № 1. С. 102-107.

51. Самуилов В.Д. Программируемая клеточная смерть / В.Д. Самилов, А.В. Олескин, Е.М. Лагунова // Биохимия. 2000. - Т. 65, вып. 8. — С. 10291046.

52. Свободные радикалы в биологии: в 2-х т. / Под ред. У. Прайора. — М.: Мир, 1979.—Т. 1. —320 с.

53. Сидорик Е.П. Биохемилюминесценция клеток при опухолевом процессе / Е.П. Сидорик, Е.А. Баглей, М.И. Данко. — Киев: Наукова думка, 1989. —г 218 с.

54. Сидорова Е.В. Субпопуляции В-лимфоцитов и их функциональная роль / Е.В. Сидорова// Успехи современной биологии. 2002. — Т. 122, № 5. — С. 467-479.

55. Стимулирующее действие УФ-излучения на активность антител и комплемента крови человека / К.А. Самойлова и др. // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных Л., 1986. - С. 226-237.

56. Теория и практика иммуноферментного анализа / Под ред. В. А. Егорова. М. : Высшая школа, 1991. - 288 с.

57. Тронов В. А. Метод ДНК-комет индивидуальных клеток. Принцип и применение метода / В.А. Тронов, И.И. Пелевина // Цитология. 1996. — Т.38, №4/5. С. 631-641.

58. Тронов В.А. Механизм радиационной гибели лимфоцитов периферической крови человека, оцениваемой методом ДНК-комет / В.А. Тронов, Д.Г. Терещенко, М! А. Коноплянников // Биофизика. — 1998. — Т. 43, № 1. -С. 115-124.

59. Тронов В.А. Репарация ДНК и апоптоз. / В.А. Тронов // Цитология. — 1999. -Т. 41, №5.-С. 405-411.

60. Тронов В.А. Репарация ДНК и гибель покоящихся лимфоцитов крови человека, индуцированные перекисью водорода / В.А. Тронов, В.М. Константинов // Биохимия. — 2000. — Т.65, вып.1. — С. 1516-1524.

61. Турпаев К.Т. Активные формы-кислорода и регуляция экспрессии генов / К.Т. Турпаев // Биохимия. 2002. - Т. 67. - С. 281-292.

62. Ушакова Т.А. Механизм и роль апоптоза при патологии: актуальность ис-1 следования в комбустиологии (обзор литературы)' / Т.А. Ушакова, А.А.

63. Карелин, А.Г. Глоба // Комбустиология, электронная версия, 2004. №14.

64. Финкелыптейн Б.Б. Опыт применения аутотрансфузии УФ-облученной крови в детской дерматологии / Б.Б. Финкельштейн, Ф.А. Зверькова, Ю.В.ч i

65. Попов // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных. JL, 1986. - С. 122-132.

66. Фотобиология и мембранная биофизика / Под ред. И.Д. Волотовского. —-Минск.: Технопринт, 1999. 352 с.

67. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты: руководство для врачей / И.С. Фрейдлин. — СПб: НТФФ : «Полисан», 1998. 113 с.

68. Хаитов P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. М. : Медицина, 2000. - 432 с.

69. Хаитов P.M. Иммунология : учебник для вузов с компакт-диском : учебник для студ. мед. вузов / P.M. Хаитов. М. : ГЭОТАР-Медиа, 2006. - 311 с.

70. Хаитов P.M. Экологическая иммунология / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин; Х.И. Истамов. М. : Изд - во ВНИРО, 1995. - 219 с.

71. Ярилин А. А. Основы иммунологии : Учебник для студ. мед. вузов / А.А. Ярилин . М. : Медицина, 1999. - 606 с.

72. A hemopoietic specific gene encoding a smallGTP binding protein is overex-pressed during T cell activation»/ L. Reibel et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1991. - V. 175. - P. 451-458.

73. Adams JiM. The Bcl-2 Protein Family: Arbiters of Cell Survival / J.M. Adams, S. Cory // Science. 1998.- V. 281. -P. 1322-1326.

74. Adenosine: an endogenous inhibitor of neutrophil-mediated injury to endothelial cells / B.N. Cronstein et al. // J. Clin. Invest. 1986. - V. 78. - P. 760770.

75. Albina J.E. Role of nitric oxide in mediation of macrophage cytotoxicity and apoptosis / J.E. Albina and J.S. Reichner // Cancer and Metastasis Reviews. — 1998.-V. 17.-P. 39-53.

76. Apparent hydroxyl radical production by peroxynitrite: Implications for endothelial injury from nitric oxide and superoxide / Beckman J.S. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - V. 87.-P. 1620 -1624.

77. Aravind L. The domains of death: evolution of the apoptosis machinery / L. Aravind, V.M. Dixit, E.V. Koonin // Trends Biochem Sci. 1999. - V. 24, №2. -P. 47-53.

78. Bandy B. Mitochondrial mutations may increase oxidative stress — Implications for carcinogenesis and aging / B. Bandy, A.J. Davison // Free Radical Biol, and Med. 1990. - V. 8. - P. 523-535.

79. Bast A. Oxidants and antioxidants: State of the art / A. Bast, G.R.M.M. Haenen,

80. C.J.A. Doelman // Amer. J. Med. 1991. -V. 91. - P. 2S-13S.

81. Basu-Modak S., Tyrell R.M. Singlet oxygen: a primary effector in the ultraviolet A / near-visible light induction of the human heme oxygenase gene / S.Basu-Modak, R.M. Tyrell // Cancer Res. 1993. - V. 53. - P.4510-4550.

82. Berki T. Photo-immunotargeting with haematoporphyrin conjugates activated by a lowpower He-Ne laser / T. Berki; P. Nemeth // Cancer Immunol, and Im-munother. 1992. - V. 35. - P. 69-74.

83. Bokoch G.M. The role of small GTP-binding proteins in leukocyte function / G.M. Bokoch, U.G. Knaus // Curr. Opin. Immunol. 1994. - V. 6. - P. 98-105.

84. Bossy-Wetzel E. Mitochondrial cytochrome с release in apoptosis occurs upstream of DEVD-specific caspase activation and independently of mitochondrial transmembrane depolarization / E. Bossy-Wetzel, D.D Newmeyer,

85. D.R. Green // EMBO J. 1998.-V. 17.- P. 37-49.

86. Cadenas E. Low-level chemiluminescence of biological systems / E. Cade-nas, A. Boveris, Bv. Chance // Methods in Enzymology. 1984. - V. 105. - P. 211-242.

87. Caricchio R. Fas/Fas Ligand Interactions Are Involved in Ultraviolet-B-Induced Human Lymphocyte Apoptosis / R. Caricchio, E.A. Reap, P.L. Cohen // The Journal of Immunology. 1998. - V. 161. - P. 241-251.

88. Cell Surface Trafficking of Fas: A Rapid Mechanism of p53-Mediated Apoptosis / M. Bennett et al. // Science. 1998. - V. 282. - P.290-293.

89. Chemiluminescence determination of hydroperoxides following radiolysis and photolysis of free amino acids / S. Robinson et al. // FEBS Lett. 1998. -V. 430, №3.- P. 297-300.

90. Chinnaiyan A.M. The cell-death machine / A.M. Chinnaiyan, V.M. Dixit // Curr. Biol. 1996. - V. 6. - P. 555-562.

91. Cohen G.M. Caspases: the executioners of apoptosis / G.M. Cohen // Bio-chem. J. 1997.-V. 326.-P. 1-16.

92. Collier J. Endothelium-derived relaxing factor is an endogenous vasodilator in man / J. Collier, P. Vallanse // British. J. Pharmacol. 1989. - V. 97. - P. 639-641.

93. Cornwell D.G. Fatty acid paradoxes in the control of cell proliferation: Prostaglandins, lipid peroxides, and cooxidation reactions / D.G. Cornwell, N. Morisaki // Free Radicals in Biology. 1984. - V. 6. - P. 96-149.

94. Do human neutrophils form hydroxyl radical? Evaluation of an unresolved controversy / M.S. Cohen et al. // Free Radical Biol, and Med. 1988. - V. 5. -P. 81-88.

95. Kulms D. Molecular mechanisms of UV-induced apoptosis / D. Kulms, T. Schwarz // Photodermatol Photoimmunol Photomed. 2000. - V. 16. — P. 195-201.

96. Ashkenazi A. Death Receptors: Signaling and Modulation / A. Ashkenazi, V.M. Dixit//Science. 1998.-V.281.-P. 1305-1308.

97. Differential requirement for caspase-9 in apoptotic pathways in vivo / R.Hakem et al. // Cell. 1998. - V. 94, № 3. - P.339-52.

98. Droge W. Free radicals in the physiological control of cell function / W. Droge // Physiol. Rev. 2002. - V. 82. - P. 47-95.

99. Dougherty T.J. Photodynamic therapy / T.J. Dougherty, S.L. Marcus // Eun J. Cancer. -1992. V. 28A. - P. 1734-1742.

100. Dysregulated Fas and Bcl-2 expression leading to enhanced apoptosis in T-cell of multiple myeloma patients / M. Massaia et al. // Blood. — 1995. V. 85.-P. 3679-3687.

101. Earnshaw W.C. Mammalian caspases: Structure, activation, substrates and functions during apoptosis / W.C. Earnshaw, L.M. Martins, S.H. Kaufmann // Annu. Rev. Biochem. 1999. -V. 68. - P. 383-424.

102. Engel P. Expression of bcl-2 in fetal thymus, thymomas and thymic carcinomas. Association with p53 expression and review of the literature / P. Engel", D. Francis, N. Graem // APMIS. 1998 - V. 106. - P 449 - 455.

103. Ermak G. Calcium and oxidative stress: from cell signaling to cell death / G.Ermak, K.J. Davies // Mol. Immunol. 2002. - V. 38, № 10. - P. 713-721.

104. Exposure of phosphatidylserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages / V. A. Fadok et al. // J: Im Munol. 1992. - V. 148, № 7. - P. 2207-2216.

105. Free radicals and other reactive oxygen metabolites in inflammatory bowel disease / M.L. Harris et al. // Pharmacol, and Therapy. 1992. - V. 53. - P. 375-408.

106. Freeman B.A. Biology of disease: free radicals and tissue injury / B.A. Freeman, J.D. Crapo // Lab Invest, (1982). 47, 412-426.

107. Frei B. Ascorbate is an outstanding antioxidant in human plasma / B. Frei, L. England, B.N. Ames//PNAS USA-1989.-V. 86.-P. 6337-6381.

108. Goeptar A.R. Oxygen and xenobiotic reductase activities of cytochrome P450 / A.R.Goeptar, H. Scheerens, N.P. Vermeulen // Crit. Rev. Toxicol. -1995.-V. 25.-P. 25-65.

109. Golstein P. Cell death: TRAIL and its receptors / P. Golstein // Current Biol. 1997. - V. 7. - P. R750-R753.

110. Goldstein S. Mannitol as an OH" scavenger in aqueous solutions and in biological systems / S. Goldstein, G. Czapski // Int. J. Radiat. Biol. 1984. - V. 46. - P. 725-729.

111. Green D. R. Apoptosis. Death deceiver / D.R. Green // Nature. 1998.-V. 396. - P. 629-630.

112. Green D. R. Apoptotic pathways: the roads to ruin / D.R. Green // Cell. -1998.-V. 94, №6-P. 695-698.

113. Green D.R. Mitochondria and Apoptosis / D.R. Green, J. Reed // Science. -1998.-V. 281.-P. 1309-1312.

114. Green D.R. T cell development: some cells get all the breaks / D.R. Green, M. Schuler // Nat. Immunol. 2000. - V. 1. - P. 15-17.

115. Gross A. BCL-2 family members and the mitochondria in apoptosis / A. Gross, J. M. McDonnell, S. Korsmeyer // Genes Dev. 1999. - V. 13. - P. 1899-1911.

116. Hamers M.N. Oxidative stress in human neutrophilic granulocytes: Host defense and self-defense / M.N. Hamers, D. Roos // Oxidative stress. 1985. - V. 145.-P. 351-381.

117. Hansen R. p53; from inductive signal to cellular effect / R. Hansen, M. Oren // Curr. Opin. Genet. Develop. 1997. - V. 7, № 1. - P.46-51.

118. Harman D. Free radicals theory of aging / D. Harman // Mutat. Res. 1992. - V. 275. - P. 257-266.

119. Haunstetter A. Apoptosis: Basic mechanisms and implications for cardiovascular disease/ A. Haunstetter, S. Izumo // Circ. Res. 1998. - V. 82. - P. 1111-1129.

120. Hengartner M. Apoptosis. Death by crowd control / M. Hengartner // Science. 1998. - V. 281.-P. 1298-1299.

121. Huppertz B. The apoptosis cascade morphological and immunohistochemi-cal methods for its visualization / B. Huppertz, H.-G. Frank, P. Kaufmann // Anat. Embryol. - 1999. - V. 200. - P. 1-18.

122. Imlay J.A. Assay of metabolic superoxide production in Escherichia coli / J. A. Imlay, I. Fridovich // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266. - P.6957-6965.

123. Jacobson M.D. Programmed cell death in animal development / M.D. Jacob-son, M. Weil, M.C. Raff// Cell. 1997. - V. 88. - P. 347-354.

124. Juond A.F. Effects of oxygen intermediates on cellular functions / A.F. Juond // Amer. Revs. Respir. Dis. 1987. - V. 135. - P.S32-S34.

125. Kanofsky J!R. Singlet oxygen production by biological systems / J.R. Kanofsky // Chem.-Biol. Interact. 1989. - V. 70. - P. 1-8.

126. Kidd VJ. Proteolytic activities that mediate apoptosis / V.J. Kidd // Annu. Rev. Physiol. 1998. - V. 60. - P.533-573.

127. Klebanoff S.J. Myeloperoxidase: contribution to the microbicidal activity of intact leukocytes / S.J. Klebanoff// Science. 1970. - V. 169. - P. 1095-1097.

128. Koga S. Mechanism for the generation of superoxide anion and singlet oxygen during heme compound-catalyzed linoleic acid hydroperoxide decomposition / S. Koga, M. Nakano, K. Uehara // Arch. Biochem. and Biophys. — 1991. — V. 289. P. 223-229.

129. Kohler C. Evaluation of caspase activity in apoptotic cells / C. Kohler, S. Orrenius, B. Zhivotovsky // J. Immunol. Methods. 2002. - V. 265. - P. 97110.

130. Koppenol W.H. The Centennial of the Fenton reaction / Koppenol W.H. // Free Rad. Biol. Med.- 1993. V. 15. - P. 645-651.

131. Kroemer G. The proto-oncogene Bcl-2 and its role in regulating apoptosis / G. Kroemer // Nature Med. 1997. - V. 3. - P. 614-620.

132. Kroemer G. The mitochondrial death/life regulator in apoptosis and necrosis / G. Kroemer, B. Dallaporta, M. Resche-Rigon // Annu. Rev. Physiol. 1998. -V. 60. P. 619-642.

133. Kroemer G. Mitochondrial control of apoptosis / G. Kroemer, N. Zamzami, S.A. Susin. Immunol. Today. - 1997. -V. 18. P. 44-51.

134. Krueger 312-nanometer Ultraviolet В Light (Narrow-Band UVB) Induces Apoptosis of T Cells within Psoriatic Lesions Exp / M. Ozawa et al. // Med — 1999. V. 189, № 4. — P.711-718.

135. Krutmann J. Involvement of cytokines, DNA damage, and reactive oxygen intermediates in ultraviolet radiation — induced modulation of intercellular adhesion molecule-1 expression / J. Krutmann, M. Grewe // J. Invest. Dermatol. -1995.-V. 105.-P. 67-70.

136. Kulms D: Molecular mechanisms of UV-induced apoptosis / D. Kulms; T. Schwarz // Photodermatol. Photoimmunol. Photomed. 2000. - V. 16. - P. 195-201.

137. Kumar S. Prodomains, adaptors, oligomerization: the pursuit of caspase activation in apoptosis / S. Kumar, P.A. Colussi // Trends Biochem. Sci. 1999. -V. 24.-P. 14.

138. Cytochrome с and dATP-dependent formation of Apaf-l/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease cascade / P. Li et al. // Cell. — 1997. V. 91. P. 479-489.

139. Liang H. Three-dimensional structures of proteins involved in programmed cell death / H. Liang, S.W. Fesik // J. Mol. Biol. 1997. - V. 274, № 3. - P. 291-302.

140. Role of tissue glutation in prevention of surgical trauma / P.T. Liu et al. // Xenobiotica. 1993. - V. 23. - P. 899-911.

141. Induction of the apoptotic program in cell-free extracts: requirement for dATP and cytochrome с / X. Liu et al. // Cell. 1996. - V. 86. P. 147-157.

142. Apoptosis inducing factor (AIF): a phylogenetically old, caspase-independent effector of cell death / Lorenzo H.K. et al. // Cell Death Differ.1999.-V. 6.-P. 516-524.

143. Cytochrome с is rapidly released from the cell upon apoptosis induction: a new marker for cell death in vivo / M. Los et al. // IFES Congress, Poland,2000.

144. Loss of Function of Cytochrome с in Jurkat Cells Undergoing Fas-mediated Apoptosis / A. Krippner et al. //jbc online. 1996. - V. 271, № 35. - P. 2162921636.

145. Lovaas E. Free radical generation and coupled thiol oxidation by lactoper-oxidase/SCN7H2C>2 / E. Lovaas // Free Radical Biol, and Med. 1992. - V. 13. -P. 187-195.

146. The Caspase-3 Precursor Has a Cytosolic and Mitochondrial Distribution: Implications for Apoptotic Signaling / M. Mancini et al. // JCB. 1998. - V. 140.-P. 1485-1495.

147. Martin S.J. Ultraviolet В Irradiation of Human Leukaemia HL-60 Cells in Vitro Induces Apoptosis / S.J. Martin, T.G. Gotter // Int. J. Radiat. Biol. -1991. -V.59.-P. 1001-1016.

148. McCordJ. M. Superoxide dismutase. An enzymic function for erythrocu-prein (hemocuprein) / J.M. McCord, I. Fridovich // J. Biol. Chem. 1969. -V. 244.-P. 6049-6055.

149. McCaughan J.S. Photodynamic therapy: a review / J.S. McCaughan // Drugs Aging. 1999. - V. 15. - P. 49-68.

150. Mehmet H. Apoptosis Caspases find a new place to hide / H. Mehmet // NATURE. - 2000. - V.403. - P. 29-30.

151. Meikrantz W. Apoptosis and the cell cycle / W. Meikrantz, R. Schlegel // J. Cell. Biochem., 1995.-V.-58.-P. 160-174.167. p53 Phosphorylation: biochemical and functional consequences / G.J. Milczarek et al.//Life Sci. 1997. V. 60, № l.-P.l-ll

152. Milner J. Structures and functions of the tumor suppressor p53 / J. Milner Pathol. Biol. (Paris). 1997. - V. 45, № 10. - P. 797-803.

153. Moncada S. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology / S. Moncada, R.M.J. Palmer, E.A. Higgs // Pharmacol. Revs. 1991. - V. 43. -P. 109-142.

154. Mullarkey C.J. Free radical generation by early glycation products: a mechanism for accelerated atherogenesis in diabetes / C.J. Mullarkey, D. Edelstein, M. Brownlee // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 1990. — V. 173, № 3. P. 932-939.

155. An induced proximity model for caspase-8 activation / M. Muzio et al. // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273. - P. 2926-2930.

156. Nagata S. Apoptosis by death factor / S. Nagata // Cell. 1997. - V. 88. - P. 355-365.

157. Caspase-12 mediates endoplasmic reticulum-specific apoptosis and cytotoxicity by amyloid-b / T. Nakagawa et al. // Nature. 2000. -V. 403. - P. 98103.

158. Biological Sources of Reduced Oxygen Species. In: Analysis of Free Radicals in Biological Systems. / A.E. Favier et al. // eds., Basel, Boston, Berlin: Birkhauser.- 1995.-P. 11-19.

159. Noronha-Dutra A.A. Reaction of nitric oxide with hydrogen peroxide as a model for nitric oxide-mediated killing / A.A. Noronha-Dutra, M.M. Epperlein, N. Woolf // FEBS Lett. 1993. - V. 321. - P. 59-62.

160. Optical measurement of the catalase-hydrogen peroxide intermediate (Compound I) in the liver of anaesthetized rats and its implication to hydrogen peroxide production in situ / N. Oshino et al. // Biochem J. 1975. — V. 146, № 1. -P. 67-77.

161. Protective role of vitamin E in biological systems / L. Parker // Am. J. Clin. Nutrition.-1991.-V. 53.-P. 150S-1055S.

162. Perez H.D. Generation of a chemotactic lipid from arachidonic acid by exposure to a superoxidegenerating system / H.D. Perez // Inflammation. 1980. -V. 4.-P. 313-328.

163. Perspectives on the mitochondrial permeability transition / P.Bernardi et al. // Biochim. Biophys. V. 1365. - P. 200-206.

164. Peter M.E. Advances in apoptosis research / M.E. Peter, A.E Heufelder, M.O. Hengartner // Proc. Natl. Acad. Sci. 1997. - V. 94. - P. 12736-12737.

165. Free radicals and inflammation: superoxidedependent activation of a neutrophil chemotactic factor in plasma / W.F. Petrone et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. - V. 77. - P. 1159-1163.

166. Physico-chemical modeling the role of free radicals in photodynamic therapy / A. Nemeth et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. — 1999i — V. 255, №2. -P. 360-366.

167. Physiological production of singlet molecular oxygen in the myeloperoxi-dase-H202-chloride system / C. Kiryu et al. // FEBS Lett. 1999. - V. 443. -P. 154-158.

168. Popov I. Photochemiluminescent detection of antiradical activity / I. Popov, G. Levin//Luminescence. 1999. -V. 14, №3.-P. 169-174.

169. Possible contribution of apoptosis-inducing factor (AIF) and reactive oxygen species (ROS) to UVB-induced caspase-independent cell death in the T cell line Jurkat / H. Murahashi et al. // Journal of Leukocyte Biology. 2003. -V.73. — P.399-406.

170. Prodczacy J.J. Reduction of iodonitrotetrazolium violet by superoxide radicals / J.J. Prodczacy, R. Wei // Biochem. and Biophys. Res. Comm. 1988. — V. 150.-P. 1294-1301.

171. Pooled analysis of p53 mutations in hematological malignancies. M. Proko-cimer et al.. Hum. Mutat. - 1998.-V. 12, № l.-P. 4-18.

172. Pryor W.A. Oxy-radicals and related species: their formation, lifetimes, and reactions / W.A. Pryor // Ann. Rev. Physiol. 1986. - V. 48. - P. 657-667.

173. Raff M. (1998). Cell suicide for beginners / M. Raff»// Nature. V. 396. - P. 119-122.

174. Reed J.C. Bcl-2 family proteins and mitochondria / J.C. Reed, J.M. Jur-gensmeier, S. Matsuyama // Biochim. Biophys. Acta. 1998. — V. 1366. P. 127-137.

175. Reed, J.C. Cytochrome c: can't live with it -can't live without it / J.C. Reed. Cell. - 1997. - V. 91, № 5. - P. 559-62.

176. Regulation of apoptotic protease activating factor—1 oligomerization and apoptosis by the WD-40 repeat region / Adrain C. et. al. // J. Biol. Chem. — 1999. V. 274. P. 20855-20860.

177. Riley J.C.M. Oxygen radicals and reactive oxygen species in reproduction / J.C.M. Riley, H.R. Behrman // Proc. Soc. Exp. Biol, and Med. 1991. - V. 198.-P. 781-791.

178. RGD peptides induce apoptosis by direct caspase-3 activation / C.D. Buckley et al. // Nature. V.397. - P. 534-539.

179. Caricchio R. Fas/Fas Ligand Interactions Are Involved in Ultraviolet-B-Induced Human Lymphocyte Apoptosis / R. Caricchio, E.A. Reap, P.L. Cohen //The Journal of Immunology. 1998. - V. 161. - P. 241-251.

180. Role of cytochrome с and dATP/ATP hydrolysis in Apaf-1-mediated'cas-pase-9 activation and apoptosis/ Y. Hu et al.'// EMBO J. 1999. - V. 18, № 18.-P. 3586-3595.

181. Rubanyi C.M: Vascular effects, of oxygen-derived free radicals / C.M. Rubanyi // Free Radical Biol, and,Med. 1988: - V. 4. - P. 107-121.

182. Ruoslahti R. A new way to active caspases / R. Ruoslahti, J. Reed // Nature. 1999. - V. 397. - P. 479-480.

183. Sajithal G.B. The role of metalcatalysed oxidation in the formation of advanced glycation end products: an in vitro study on.collagen,/ G.B. Sajithal, P. Chithra, G. Chandrakasan // Free Radic. Biol'. Med. 1998. - V. 25. - P. 264269.

184. Saran M. Radical functions in vivo: a critical review of current concepts and hypotheses / M. Saran, C. Michel, W. Bors // Naturforsch С. 1998. - V. 53, №3-4.-P. 210-227.

185. Servomaa К. UV light and ionizing radiations cause programmed death of rat chlorleukemia cells by inducing retropositions of a mobile DNA element (LIRn) / K. Servomaa, T. Rytomaa // Int. J. Radiat. Biol. 1990. - V. 57, № 2. -P. 331-343.

186. Shaw P.H. The role of p53 in cell cycle regulation / P.H. Shaw Pathol. Res. Pract. 1996. -V. 192, № 7. - P. 669-675.

187. Singlet oxygen ('Ag 02) as the principal oxidant in myeloperoxidase-mediated bacterial killing in neutriphil phagosome / H. Tatsuzawa et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1999. - V. 262. - P.' 647-650.

188. Sjoodin B. Biochemical1 mechanisms for oxygen free radical formation during exercise / B. Sjoodin, Y.H. Westing, E.S. Apple // Sports Med. 1990. - V. 10.-P. 236-254.

189. Skulachev V.P. Cytochrome с in the apoptotic and antioxidant cascades / V.P. Skulachev // FEBS Lett. 1998.- V. 423.- P. 275-280.

190. Ordering the cytochrome c- initiated caspase cascade: hierarchical activation of caspases-2,-3,- 6,-7,-8, and -10 in a caspase-9-dependent manner / E.A. Slee et ah. // J. Cell Biol. 1999. - V. 144, № 2. - P.281-292.

191. The WD repeat: a common architecture for diverse functions / T.F. Smith et al. // Trends Biochem. Sci. 1999. - V. 24. - P. 181-185.2091 p53: prospects for cancer gene therapy / Soddu S. et al. // Cytokines Cell Mol. Ther. 1998. - V. 4,№3.-P. 177-185.

192. The p53 tumour suppressor gene // Steele R.J. et al. // Br. J. Surg. 1998. -V. 85, № 11.-P. 1460-1467.

193. Steinbeck M.J. Intracellular singlet oxygen generation by phagocytosing neutrophils in response to particles coated with a chemical trap / M.J Steinbeck, A.U. Khan, M.G. Karnovsky // J. Biol. Chem. 1992. - V. 267. - P. 1342513423.

194. Sundqvist T. Bovine aortic endothelial cells release hydrogen peroxide / T. Sundqvist//J. Cell. Physiol.-1991.-V. 148.-P. 152-156.

195. Mitochondrial release of caspase-2 and -9 during the apoptotic process / SusinS.A. et al. //J. Exp. Med. 1999.-V. 189. - P. 381-394.

196. Takahama U. Hydrogen peroxide-dependent generation of singlet molecular oxygen by human saliva: Its detection by chemiluminescence from a cypridina luciferin analog / U. Takahama // Photochem. and Photobiol. — 1993. V. 57. -P. 376-379.

197. The release of cytochrome с from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis / R.M. Kluck // Science. 1997. - V. 275: - P. 11321136.

198. The* superoxide generating system of В cell lines. Structural homology with the phagocytic oxidase and triggering' via surface Ig / F.E. Maly et al.- // J. Immunol. 1988. - V. 140. - P. 2334-2339.

199. Thompson C.B: Apoptosis in the pathogenesis and'treatment of disease i C.B. Thompson // Science. 1995. - V. 267. - P. 1456-1462.

200. Thombery N.A. Caspases: Enemies Within / N.A. Thombery, Y. Lazebnik // Science. 1998-.-V. 281.-P. 1312-1316.219: p53 from basic research to clinical applications / O. Tominaga et al. Crit. Rev. Oncog. 1992. - V. 3, № 3. - P. 257-282.

201. The* fight of viruses against apoptosis / J. Tschopp et al. // Curr. Opin. Gen. Develop. 1998. - V. 8, № 1. - P. 82-87.

202. Tumor-suppressor p53: implications for tumor development and prognosis / Kirsch D.G. et al. / J. Clin. Oncol. 1998. -V. 16, № 9. - P. 3158-3168.

203. Vanasbeck B.S. Involvement of oxygen radikals and blood cells in the pato-genesis of ARDS by endotoxin and hyperoxia /B.S. Vanasbeck // Appl. Car-diopulm. and Pathophysiol. 1991.- V. 4.-P. 127-138.

204. Vaux DiL. Cell death in development / D.L. Vaux, S.J. Korsmeyer // Cell. — 1999.-V. 96.-P. 245-254.

205. Voeikov V.L. Reactive Oxygen Species, Water, Photons, and Life / Voeikov V.L.// Rivista di Biologia / Biology Forum 2001. V. 94: - P. 193-214.

206. Walsh G. Enzymatic reaction mechanisms / C. Walsh-// W.H; Freeman and: Company, San-Francisco. 1979. - P. 978.

207. Weisfeldt M.L. Oxygen-derived free radicals and'myocardial ischemic injury / M.L. Weisfeldt, J.L. Zweier, J.T. Flaherty // Heart Dis. 1988. - № 3. -P. 60-72.

208. White E. Life, death and the pursuit, of apoptosis / E. White // Genes Dev. -1996. -V. 10.-P. 1-15.

209. Wu; S.M: Mechanism of hypochlorite-mediated inactivation of proteinase inhibition by alpha 2-macroglobulin / S.M. Wu, S.V. Pizzo // Biochemistry. -1999. V. 38.-P. 13983-13990.

210. Prevention of apoptosis by Bcl-2: release of cytochrome с from mitochondria blocked / J. Yang et al. // Science. 1997.-V. 275. - P. 1129-1132.

211. Yu B.R. Cellular defenses against damage from» reactive oxygen? species / B.R. Yu // Physiol: Revs. 1994. - V. 74. - P. 139-162.

212. Zamojska R., Travers P. // T-cell Receptors. Oxford, 1995 - P. 46-49.

213. Apaf-1, a human protein homologous to C. elegans CED-4, participates in cytochrome c-dependent activation of caspase-3 / H. Zou et al. // Cell. -1997.-V. 90.-P. 405-413.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.