Исследование путей реализации апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Трубицына, Мария Сергеевна
- Специальность ВАК РФ03.00.02
- Количество страниц 174
Оглавление диссертации кандидат биологических наук Трубицына, Мария Сергеевна
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Структурно-функциональные свойства лимфоцитов.
1.1.1. Общая характеристика лимфоцитов.
1.1.2. Т-лимфоциты.151.1.3. В-лимфоциты.
1.1.4. Натуральные киллеры.
1.2. Механизмы реализации апоптоза.
1.2.1. Определение, морфологические признаки, физиологическое значение апоптоза.
1.2.2. Пути реализации апоптоза.
1.2.3. Регуляторы апоптоза.
1.3. Структурно-функциональные фотомодификации лимфоцитарных клеток .361.4. Активные формы кислорода: механизмы образования, свойства, утилизация, биологическая роль.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
ГЛАВА 2. Объект и методы исследования.
2.1. Объект исследования.
2.2. Методы исследования.
2.2.1. Выделение лимфоцитов из крови доноров.
2.2.2. Определение жизнеспособности клеток.
2.2.3. Определение уровня экспрессии Fas-рецепторов лимфоцитов методом иммуноферментного анализа.
2.2.4. Определение уровня цитохрома с в лизатах лимфоцитов при помощи метода иммуноферментного анализа.
2.2.5. Определение уровня р53 в лизатах лимфоцитов при помощи метода иммуноферментного анализа.
2.2.6. Определение активности каспазы-3 лимфоцитов при помощи флуоресцентного метода.
2.2.7. Выделение ДНК из лимфоцитов и исследование ее структурных свойств методом электрофореза в агарозном, геле.
2.2.8. Исследование структурного состояния ДНК методом ДНК-комет.
2.2.9. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов.
2.2.101 Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран лимфоцитов при помощи метода флуоресцентных зондов.
2.2.11. УФ-облучение исследуемых образцов.
2.2.12. Системы генерации активных форм кислорода.
2.2.13. Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА1 3. Исследование рецепторного- каспазозависимого пути апоптоза лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света и активных форм,кислорода.
3.1. Исследование жизнеспособности лимфоцитов человека после воздействия УФ-излучения и активных форм кислорода.
3.2. Изменения уровня экспрессии рецепторов смерти CD95 лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и активных форм кислорода.
3.2.1. Изменения уровня экспрессии рецепторов смерти CD95 лимфоцитов человека после воздействия УФ-света.
3.2.2. Изменения уровня экспрессии рецепторов смерти CD95 лимфоцитов человека после воздействия активных форм кислорода.
3.3. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и генерации активных форм кислорода. 92.
3.3.1. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции лимфоцитов человека после воздействия УФ-света.
3.3.2. Исследование люминолзависимой хемилюминесценции^ лимфоцитов человека после генерации активных форм кислорода*.
3.4. Изменения функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека после воздействия УФ-излучения и активных форм кислорода.
3.4.1. Изменения функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека после воздействия УФ-излучения.
3.4.2. Изменения функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека после воздействия активных форм кислорода.
ГЛАВА 4. Исследование р53-зависимого > пути- апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных кислородных метаболитов.
4.1. Структурные модификации ДНК лимфоцитов человека в динамике развития- апоптоза, индуцированного воздействием УФ-излучения и' активных форм кислорода.
4.1.1. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов, модифицированных воздействием УФ-света, методом электрофореза в агарозном геле.
4.1.2. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов, модифицированных воздействием- активных форм кислорода, методом электрофореза в агарозном геле.
4.1.3. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов. человека при помощи метода ДНК-комет.
4.1.3.1. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света, при помощи метода ДНК-комет.ИЗ
4.1.3.2. Исследование изменений структурного состояния ДНК лимфоцитов человека, модифицированных воздействием пероксида водорода, при помощи метода ДНК-комет.
4.2. Изменения уровня р53 в цитозоле лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света и активных форм кислорода.
ГЛАВА 5. Исследование митохондриального пути апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода.
5.1. Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и активных форм кислорода.
5.1.1. Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран УФ-облученных лимфоцитов человека.
5.1.2. Исследование изменений структурного состояния митохондриальных мембран после модификации лимфоцитов активными формами кислорода.
5.2. Изменения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света и активных форм кислорода.
5.2.1'. Изменения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов человека, модифицированных воздействием УФ-света.
5.2.2. Изменения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов человека. модифицированных воздействием пероксида водорода.
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Биофизика», 03.00.02 шифр ВАК
Воздействие УФ-света и активированных кислородных метаболитов на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека в присутствии биогенных аминов2008 год, кандидат биологических наук Попова, Людмила Ивановна
УФ-индуцированные структурно-функциональные модификации компонентов эритроцитарных и лимфоцитарных клеток человека в присутствии биогенных аминов и активных форм кислорода2006 год, доктор биологических наук Наквасина, Марина Александровна
Исследование процессов модуляции структурно-функциональных свойств лимфоцитов человека в условиях воздействия УФ-света и активных форм кислорода: роль ионов кальция, цАМФ и NO2013 год, кандидат наук Лидохова, Олеся Владимировна
Исследование механизмов действия УФ-света на структурно-функциональное состояние и метаболизм лимфоцитов крови человека2012 год, кандидат биологических наук Земченкова, Ольга Владимировна
Гибель лимфоидных клеток при воздействии окислительного стресса и генотоксических агентов2000 год, кандидат биологических наук Коноплянников, Михаил Анатольевич
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование путей реализации апоптоза лимфоцитов человека, индуцированного воздействием УФ-света и активных форм кислорода»
Актуальность проблемы. Гибель клеток в результате апоптоза — основное свойство практически всех клеток (M.D. Jacobson et al., 1997). Это обязательный процесс нормального развития органов, тканевого гомеостаза, развития нервной системы и регуляции иммунной системы. Недостаточная илк избыточная гибель клеток ведет к различным заболеваниям человека, включая злокачественные образования, дегенеративные заболевания, иммуноде-фицитные состояния (С.В. Thompson, 1995). Высокая степень координации и стереотипность процессов индуцированной гибели клеток свидетельствуют о том, что клетки активируют типовую программу гибели, к которой сводятся разнообразные пути сигнальной трансдукции (A.M. Chinnaiyan, V.M. Dixit, 1996; E. White, 1996; J. Yang, 1997).
К настоящему времени накоплены обширные сведения о типах программированной клеточной гибели, ее морфологических проявлениях, путях реализации, основных «участниках» и регуляторах апоптоза (Е.Б. Владимирская, 2002).
Вместе с тем отсутствуют детальные представления о взаимосвязи отдельных этапов программированной клеточной смерти, составляющих ее основные независимые фазы: инициацию, эффекторную фазу и деградацию, и оценке их временных характеристик. Не менее значимыми представляются вопросы, касающиеся изучения способов инициации различных путей апоптоза (рецепторопосредованного, митохондриального, каспазонезависимого и др.), выяснения точек («сайтов») их интеграции и возможности целенаправ: ленного регулирования процессов клеточной гибели при помощи физико-химических агентов.
Поскольку апоптоз — физиологическое явление, то в организме должны быть факторы, приводящие к ПКГ. В настоящее время известно, что таковыми могут быть как внутриклеточные сигналы, так и внешние, опосредующие свое действие через рецепторные системы, которые сами по себе не являются токсическими или деструктивными. Это могут быть неспецифические факторы, такие как температура, токсические агенты, оксиданты, свободные радикалы, гамма- и УФ-излучение, бактериальные токсины и др. Во всех этих случаях происходит индукция апоптоза, но при увеличении дозы соответствующего агента развивается некроз клетки (Т.А. Ушакова и др., 2004).
УФ-свет известен как потенциальный индуктор апоптоза в различных типах клеток (И.Ф. Донская и др., 1997). Показано, что УФ-свет может индуцировать апоптоз в клетках некоторых лимфоидных линий. Известно, что апоптоз иммунокомпетентных клеток в условиях УФ-В-излучения запускается С095(РаБ/Аро-1)-рецепторно/лигандной системой (R. Caricchio et al., 1998). Однако молекулярные механизмы этого процесса и последовательность начальных этапов развития клеточной гибели в условиях облучения изучены далеко не полностью. Остаются открытыми вопросы, касающиеся выявления способов запуска различных путей реализации апоптоза в условиях воздействия УФ-света.
Особое внимание в последние годы уделяется изучению роли активированных кислородных метаболитов в развитии апоптоза. Известно, что программированная гибель клеток, как правило, сопровождается образованием значительного количества активных форм кислорода. В то же время АФК способны инициировать апоптоз в различных типах клеток (О.Ю. Плетюш-кина и др., 2006). Показано (В.В. Новицкий и др., 2008), что интенсификация внутриклеточной продукции АФК связана с вовлечением митохондриального и TNFR(tumor necrosis factor гесер!ог)-опосредованного путей. Однако, несмотря на очевидную взаимосвязь окислительного стресса с апоптозом, роль АКМ в саморазрушении клеток неясны (Н.К. Зенков и др., 1999).
В связи с вышеизложенным нами были исследованы механизмы и последовательность этапов программированной клеточной гибели лимфоцитов крови доноров в условиях воздействия УФ-света и активных форм кислорода.
Цель и задачи диссертационной работы. Целью работы явилось выявление путей реализации апоптоза лимфоцитов периферической крови доноров, индуцированного воздействием УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м" и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода). Задачи работы предусматривали:
1. Исследование изменений уровня экспрессии мембранных рецепторов смерти CD95 (Fas) лимфоцитов человека после воздействия УФ-света и АФК.
2. Исследование изменений функциональной активности эффекторной* каспазы-3 лимфоцитов доноров после УФ-облучения клеток и генера1 ции АФК.
3. Изучение структурных модификаций ДНК лимфоцитов человека в динамике развития апоптоза, индуцированного воздействием УФ-излучения и АФК.
4. Исследование изменений уровня белка р53 в лимфоцитах доноров после У Ф-облучения* клеток и генерации АФК.
5. Исследование изменений уровня цитохрома с в цитозоле и структурного состояния митохондриальных мембран лимфоцитарных клеток после воздействия УФ-света и АФК.
Научная новизна. Впервые изучены изменения структурного состояния ДНК, уровня экспрессии мембранного Fas-рецептора, функциональной активности каспазы-3, концентрации белков р53 и цитохрома с лимфоцитарных клеток человека в динамике развития апоптоза, индуцированного воздействием УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м2 и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода). Установлено, что УФ-свет и АФК индуцируют фрагментацию ДНК лимфоцитов после 20 ч инкубации модифицированных клеток. Показано, что в течение 1 -5 ч после воздействия
УФ-света и АФК на лимфоциты наблюдается повышение уровня экспрессии мембранных Fas-рецепторов смерти по сравнению с интактными клетками. Обнаружено увеличение функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов через 4 ч после генерации синглетного кислорода, гидроксильного радикала и добавления пероксида водорода, а также через 8и24и6и8ч после УФ-облучения клеток соответственно в дозах 151 и 1510 Дж/м . С использованием метода ДНК-комет выявлено, что повреждения ДНК (двунитевые разрывы) появляются сразу после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 1510 и 3020
- О {л
Дж/м" и добавления пероксида водорода в концентрации 10" моль/л (кометы типа С1) и достигают максимума через 6 ч после модификации клеток (кометы типов С2 и СЗ). Установлено, что через 6 ч после воздействия пероксида водорода и УФ-света в дозах 1510 и 3020 Дж/м" на лимфоциты происходит повышение уровня р53 в исследуемых клетках. Сделано заключение о ведущей роли рецепторопосредованного (Fas-зависимого)* каспазного и р53-зависимого путей в реализации апоптоза лимфоцитов, индуцированного воздействием УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м и пероксида водорода (10" моль/л). Предложена схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптотической гибели лимфоцитов после их УФ-облучения.
Практическая значимость. Теоретические положения диссертационной работы углубляют современные представления о путях и механизмах реализации апоптоза иммунокомпетентных клеток человека, индуцированного воздействием физико-химических факторов. Они могут быть использованы для разработки способов целенаправленного управления программами жизнедеятельности клеток организма при патологических состояниях, связанных с усилением или ослаблением процессов клеточной гибели. Результаты работы используются в учебном процессе Воронежского государственного университета при проведении занятий по дисциплинам «Биофизика», «Биофизика мембран», «Физико-химические основы межклеточных взаимодействий», «Медицинская биохимия и биофизика», а также в ходе выполнения магистерских и дипломных работ студентами кафедры биофизики и биотехнологии.
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на IV съезде фотобиологов России (Саратов, 2005); 3-й Международной конференции ИНТЕРНАС-2007 "Актуальные проблемы современного естествознания" (Калуга, 2007); 15-ой Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов-2008" (Москва, 2008); Международной научной конференции "Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем" (Беларусь, Минск,
2008); 5-ом съезде Российского фотобиологического общества "Преобразование энергии света при фотосинтезе" (Пущино, 2008); 6-ом Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008);. на Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов-2009" (Москва, 2009); Научной сессии сотрудников Воронежского госуниверситета (Воронеж,
2009).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 статей и 8 тезисов, в том числе 2 статьи в журнале системы РАН.
На защиту выносятся следующие положения:
1. В реализации апоптоза лимфоцитов периферической крови доноров, индуцированного воздействием УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 1510 Дж/м" и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетногб кислорода) ведущая роль принадлежит рецепторопосредованному кас-пазному и р53-зависимому путям. л
2. В условиях УФ-облучения лимфоцитов в дозе 3020 Дж/м осуществляются рецепторопосредованный без участия каспазы-3, р53зависимый и каспазонезависимый пути инициации программированной клеточной гибели.
3. Гибель лимфоцитов в условиях воздействия УФ-света и Н2С>2 происходит через промежуточное состояние С1 с образованием высокомолекулярных фрагментов ДНК (> 300 т.п.н.) и состояние С2, характеризующееся наличием фрагментов ДНК (< 50 т. п.н.) до состояния СЗ, характеризующегося межнуклеосомной фрагментацией ДНК (Nxl80 п. н.).
4. Схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптоти-ческой гибели лимфоцитов после их УФ-облучения.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа включает 172 страницы машинописного текста, 4 таблицы, 50 рисунков. Состоит из "Введения", 5 глав, "Заключения", "Выводов" и "Приложения". Список литературы содержит 240 источников, из них 88 - отечественных и 152 — зарубежных.
Похожие диссертационные работы по специальности «Биофизика», 03.00.02 шифр ВАК
Фотоиндуцированные изменения структурно-функциональных свойств некоторых изоформ лактатдегидрогеназы в присутствии биогенных аминов2002 год, кандидат биологических наук Агишева, Наталья Владимировна
Нарушения апоптоза клеток-мишеней при различных вариантах бронхиальной астмы2005 год, доктор медицинских наук Нестерович, Ирина Ивановна
Анализ структурно-функциональных изменений церулоплазмина человека в растворе и в составе крови при действии УФ- и лазерного излучений2007 год, кандидат биологических наук Рязанцев, Сергей Вячеславович
Исследование механизмов действия монооксида углерода и УФ-света на структурно-функциональное состояние лимфоцитов и эритроцитов крови человека2015 год, кандидат наук Тюнина, Ольга Ивановна
Исследование влияния УФ-света и иммуномодуляторов на антиоксидантный статус и состояние мембран лейкоцитов2005 год, кандидат биологических наук Савостина, Ирина Евгеньевна
Заключение диссертации по теме «Биофизика», Трубицына, Мария Сергеевна
ВЫВОДЫ
1. Установлено, что в течение 1-5 ч после воздействия УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м2 и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода) наблюдается повышение уровня экспрессии мембранных рецепторов смерти - Fas (CD95) — по сравнению с таковым для интактных клеток.
2. Показано, что увеличение уровня экспрессии CD95 лимфоцитов, модифицированных воздействием УФ-излучения в использованных дозах и пероксида водорода в концентрации 10"6 моль/л, обусловлено демаскированием ранее скрытых (предсуществующих) и синтезом новых молекул Fas-рецепторов. Экзогенная генерация в исследуемых образцах синглетного кислорода, супероксидного анион-радикала и гидроксильного радикала индуцировала демаскирование ранее недоступных молекул CD95 лимфоцитарных мембран.
3. Обнаружено повышение функциональной активности эффекторной каспазы-3 по отношению к контролю через 8 и 24 ч; 6 и 8 ч; 4 ч соответственно после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 151; 1510 Дж/м"; воздействия АФК (синглетного кислорода, пероксида водорода, гидроксильного радикала).
4. Выявлена фрагментация ДНК лимфоцитов через 20 ч после воздействия УФ-света в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м" и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала, пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода).
5. Установлено, что повреждения ДНК (двунитевые разрывы) появляются сразу после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 1510 и 3020 Дж/м и добавления пероксида водорода в концентрации 10"6 моль/л (кометы типа С1) и достигают максимума через 6 ч после модификации клеток (кометы типов С2 и СЗ).
6. Обнаружено, что гибель лимфоцитов по типу апоптоза в условиях воздействия УФ-света и пероксида водорода происходит через промежуточные состояния С1 и С2 с образованием соответственно высокомолекулярных фрагментов ДНК размером > 300 т.п.н. и фрагментов размером < 50 т.п.н. до состояния СЗ, характеризующегося межнуклеосомной фрагментацией ДНК (Nxl80 п.н.).
7. Показано, что через 6 ч после облучения клеток в дозах 1510 и 3020 Дж/м и воздействия пероксида водорода наблюдается повышение уровня белка р53 по сравнению с таковым для интактных лимфоцитов.
8. Увеличение внутриклеточной концентрации цитохрома с по отношению к контролю зарегистрировано через 1,5 ч после УФ-облучения лимфоцитов в дозе 151 Дж/м .
9. Нарушения структурного состояния митохондриальных мембран обнаружены после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м", синглетного кислорода и пероксида водорода.
10. Выявлена ведущая роль рецепторопосредованного каспазного и р53: зависимого путей в реализации апоптоза лимфоцитов в условиях воздействия УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м и активных форм кислорода, в частности, пероксида водорода.
11 .Постулируется возможность инициации рецепторопосредованного без участия каспазы-3, р53-зависимого и каспазонезависимого путей
2 i апоптоза в условиях УФ-облучения лимфоцитов в дозе 3020 Дж/м .
12. Предложена схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптотической гибели лимфоцитов после их УФ-облучения.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
При помощи методов иммуноферментного анализа, люминесценции, электрофореза в агарозном геле, ДНК-комет исследованы пути- реализации апоптоза лимфоцитов периферической крови доноров, индуцированного воздействием УФ-света (240-390 нм) в дозах 151, 1510, 3020 Дж/м2 и активных форм кислорода (супероксидного анион-радикала; пероксида водорода, гидроксильного радикала, синглетного кислорода)
Обнаружено повышение по отношению к контролю уровня экспрессии мембранных рецепторов* апоптотических сигналов CD95 лимфоцитов, суспендированных в питательной среде RPMI-16401 и растворе Хенкса, в течение 1-5 ч после УФ-облучения клеток в использованных дозах. Установлено, что' увеличение экспрессии Fas-рецепторов^ лимфоцитов, модифицированных воздействием УФ-света, в растворе Хенкса связано не только с демаскированием ранее недоступных (скрытых) молекул CD95, но и с синтезом их новых молекул через 4 и 5 после облучения иммуноцитов. Показано, что динамика исследуемого5 параметра суспензии лимфоцитов в условиях воздействия УФ-света. обусловлена изменением уровня5 Fas-рецепторов Т-клеток.
Обнаружено повышение уровня функциональной активности каспазы-3 лимфоцитов человека по отношению > к, таковому для интактных образцов через 8и24чи6и8ч соответственно после облучения клеток в дозах 151 и
О О
1510 Дж/м". УФ-модификация лимфоцитов в дозе 3020 Дж/м" индуцирует инактивацию каспазы-3.
Установлено, что после 20 ч инкубации лимфоцитов, УФ-облученных в л дозах 151, 1510,' 3020 Дж/м(, происходит фрагментация ДНК, на что указывает совокупность полос («апоптозная лестница») на электрофореграмме, соответствующая фрагментам ДНК меньшего* размера по сравнению с контролем.
Повреждения ДНК (двунитевые разрывы) обнаруживаются сразу после УФ-облучения лимфоцитов в дозах 1510 и 3020 Дж/м2 (ДНК-кометы типа С1) и достигают максимума через 6 ч после модификации клеток (кометы типов С2 и СЗ). Вероятно, двунитевые разрывы ДНК являются сигналом к запуску апоптоза, осуществляющегося с участием транкрипционного фактора р53, проапоптозного белка Вах и других митохондриальных факторов апоптоза. Изменения структурного состояния митохондриальных мембран были обнаружены нами после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозах 151 и 1510 Дж/м".
Через 20 ч после облучения лимфоцитов в дозе 151 Дж/м обнаружены фрагменты ДНК с размерами 6000 п.н. и менее 1500 п.н. Использование метода ДНК-комет в этих условиях позволило выявить кометы класса С2, характерные для предапоптотических клеток (фрагменты ДНК < 50 т.п.н.).
Через 20 ч после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозе 1510 Дж/м зарегистрировано образование фрагментов ДНК менее 1500 п.н. и ДНК-комет СЗ-класса, что указывает на межнуклеосомную фрагментацию ДНК, характерную для погибающих клеток.
Через 20 ч после воздействия на лимфоциты УФ-света в дозе 3020 Дж/м" обнаружены фрагменты ДНК размером примерно 5000 п.н. и менее 1500 п.н., кометы СЗ- и С4-классов. В этих же условиях наблюдалась инактивация каспазы-3. По-видимому, эти результаты указывают на возможность реализации р53-зависимого пути апоптоза, сопровождающегося выходом из митохондрий AIF - фактора, индуцирующего апоптоз, и индукцией каспазонезависимого пути программированной клеточной смерти. В то же время ингибирование каспаз и снижение уровня АТФ в клетке могут приводить к блокированию фазы деградации апоптоза, переходу апоптоза во вторичный некроз.
Предположение о возможности участия р53 в осуществлении апоптоза лимфоцитов было подтверждено нами после обнаружения (по сравнению с интактными иммуноцитами) более высокого уровня этого белка через 6 ч " после облучения клеток в дозах 1510 и 3020 Дж/м2.
На основании результатов определения уровня цитохрома с в цитозоле лимфоцитов через 1,5 и 4 ч после УФ-облучения клеток предполагается* возможность участия цитохрома с в осуществлении программированной клеточной смерти лимфоцитов человека, индуцированной воздействием УФ-света в минимальной из использованных доз (151 Дж/м ).
Полученные нами результаты позволили сделать заключение о ведущей роли рецепторопосредованного (Fas-зависимого) каспазного пути в реализации апоптоза лимфоцитов после воздействия УФ-света в дозах 151 й 1510 Дж/м~ (рис. 50). УФ-облучение индуцирует активациюг мембранных рецепторов смерти CD95, что приводит к запуску каспазного каскада- и активации эффекторной каспазы-3, следствием чего является фрагментация ДНК. Через 6 ч после облучения клеток, когда выявляется, максимальный уровень повреждений ДНК и рост количества р53 в лимфоцитах по сравнению с контрольными образцами, дополнительно запускается р53-зависимый путь программированной клеточной! смерти, также завершающийся фрагментацией ДНК. В случае УФ-облучения исследуемых клеток в дозе 3020 Дж/м" можно предположить участие рецепторопосредованного без участия каспазы-3 (с участием каспазы-12), р53-зависимого и каспазонезависимого путей реализации1 апоптоза лимфоцитов.
Нельзя исключить и роль ионов кальция в инициации апоптоза (рис. 50), так как обнаружено (М.А. Наквасина и др., 2008)» повышение внутриклеточной концентрации этого иона1 после УФ-облучения лимфоцитов.
При исследовании структурно-функциональных модификаций лимфоцитов человека в динамике развития» апоптоза, индуцированного воздействием АФК, выявлено повышение по сравнению с контролем уровня экспрессии Fas-рецепторов иммуноцитов, суспендированных в среде RPMI-1640, растворе Хенкса, а также их Т-клеточной суспензии.
Через 4 ч после генерации синглетного кислорода, гидроксильного радикала и добавления пероксида водорода к лимфоцитам наблюдалось повышение функциональной активности каспазы-3 по отношению к таковому для контрольных образцов.
После 20 часов инкубации лимфоцитов, модифицированных воздействием пероксида водорода (10*6 моль/л) происходит образование фрагментов ДНК, размеры которых составляют 1500-4000 п. н. После обработки лимфоцитов раствором пероксида водорода наблюдали образование комет класса С1, через 6 и 20 ч инкубации модифицированных клеток соответственно - комет С2/СЗ и СЗ/С4 классов. Наибольший объем, повреждений ДНК приходился на время 6 ч после обработки лимфоцитов Н2О2. Через 6 ч регистрировали также повышение уровня р53 в лимфоцитах, модифицированных воздействием пероксида водорода.
Следовательно, полученные результаты свидетельствуют в пользу представления о реализации рецепторопосредованного. каспазного и р53-зависимого путей апоптоза лимфоцитов в условиях воздействия АФК и, в частности, пероксида водорода. По-видимому, структурно-функциональные модификации;лимфоцитов под влиянием АФК вносят определенный вклад в. реализацию последовательности внутриклеточных событий, приводящих к программированной клеточной смерти иммуноцитов в условиях воздействия УФ-света.
Освобождение (мобилизация) Fas-L
Активация фосфоинозитидного пути передачи информации
Повышение уровня Са2+ в цитозоле
Активация каспазы-12
УФ-свет
Плазматическая мембрана лимфоцита
Активация Fas (демаскирование, синтез de novo)
Запуск рецепторного пути апоптоза
Активация каспаз (в т.ч. каспазы-3)
Образование радикальных соединений (в т. ч. АФК)
ДНК 1
Образование разрывов ДНК
Сенсорные белки
Активация киназы ATM
Трансактивация Fas
Активация Вах
Каспазонезависимый путь апоптоза
Экспрессия генов PIG Репрессия гена Bcl-2
Оксидативный стресс
Изменения структурного состояния митохондриальных мембран
Выход AIF
Выход цитохрома с
Повышение уровня цитохрома с
Цитохром-с Снижение независимый <— уровня путь апоптоза цитохрома с
Рис. 50. Схема возможных внутриклеточных событий, приводящих к апоптотической гибели лимфоцитов после их УФ-облучения: > - через промежуточные стадии; L -1 - вклад автора (результаты собственных исследований)
Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Трубицына, Мария Сергеевна, 2009 год
1. Апоптоз клеток Hela и антиапоптозное действие онкобелка Bcl-2 не зависят от дыхания и мембранного потенциала митохондрий / J1. А. Щепина и др. // Биохимия. 2002. - Т. 67, вып. 2. - С. 265-270:
2. Артюхов В.Г. Оптические методы анализа интактных й модифицированных биологических систем / В. Г. Артюхов, О. В. Путинцева. — Воронеж : Изд-во Воронеж, ун-та, 1996. 240 с.
3. АртюховВ.Г. Структурно-функциональное состояние биомембран и межклеточные взаимодействия / В.Г. Артюхов, М.А. Наквасина. Воронеж. -2008. - 156 с.
4. Барышников А.Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин. М. : Эдитореал УРСС, 2002. - 320 с.
5. Борисов Л. Б; Медицинская- микробиология, вирусология, иммунология / Л.Б. Борисов. М. : Медицинское информационное агентство, 2001. — 736 с.
6. Бра М. Митохондрии в программированной гибели клетки: различные механизмы гибели / М. Бра, Б. Квинан, С.А. Сузин // Биохимия. 2005. — Т. 70, вып. 2.-С. 284-293.
7. Брондз Б.Д. Молекулярные и клеточные аспекты иммунологического рас-познвания / Б.Д. Брондз, О.В. Рохлин. — М. : Наука, 1978. — 336 с.
8. Влияние ультрафиолетового света и дексаметазона на функциональные свойства лимфоцитов и нейтрофилов В.Г. Артюхов и др. // Радиационная биология. Радиоэкология. 2005. - Т. 45, № 2. - С. 196-200.
9. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз / Н.К. Зенков и и др. // Успехи современной биологии. 1999. - Т. 119, № 5. - С. 440-450.
10. Волгарева Е.В. Влияние УФ-облучения в терапевтической дозе и УФ-облученной крови на пролиферативную и рецепторную- активность ауто-логичных лимфоцитов / Е.В. Волгарева // Цитология. 1991. - № 9. - С~ 59.;
11. Волгарева Е.В. Влияние УФ-облучения и УФ-облученной аутологичной крови на функциональное состояние лимфоцитов периферической крови человека / Е.В. Волгарева, А.П. Волгарев, К.А. Самойлова // Цитология. — 1990. -№ 12.-С. 1217-1223.
12. Вольский Н.Н. Влияние супероксидного радикала на пролиферацию лимфоцитов, стимулированную митогеном / Н.Н. Вольский, Н.В. Кашлакова, В.А. Козлов // Цитология. — 1988. — Т. 30, № 7. — С. 898—902.
13. Галактионов В.Г. Иммунология / В.Г. Галактионов. М. : Изд-во МГУ, 1998.-480 с.
14. Гамалей И.А. Перекись водорода как сигнальная молекула / И.А. Гамалей, И.В. Клюбин // Цитология. 1996. - Т. 38, № 12. - С. 1233-1247.
15. Двурекова Е.А. Структурно-функциональное состояние иммуноцитов при их взаимодействии с гуморальными факторами иммунной-системы в условиях УФ-облучения: дис. . канд. биол. наук / Е.А. Двурекова. — Воронеж, 2005.-208 с.
16. Дмитриев Е.В. Модуляция структурно-функциональных изменений- мемт бран Т- и В-лимфоцитов крови человека некоторыми химическими и физическими агентами: дис. . канд. биол. наук / Е.В. Дмитриев. — Воронеж, 2003. — 161 с.
17. Иммунология / Е.С. Воронин и др.; Под ред. Е.С. Воронина. — М. : Колос-Пресс, 2002 .- 405 с.
18. Кассирский И. А. Клиническая гематология / И.А. Кассирский, Г.А. Алексеев. М. : Медгиз, 1955. - С. 61-88.
19. Кетлинский С.А. Роль Т-хелперов типов 1 и 2 в регуляции клеточного и гуморального иммунитета / С.А. Кетлинский // Иммунология. — 2002. — N22. С. 77-79.
20. Клинико-иммунологические параллели при лечении больных аутотранс-фузией УФ-облученной крови / А.Ф. Гаврилова и др. // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на- организм человека и животных. Л., 1986. — С. 74-79.
21. Колтаков И.А. Исследование структурно-функционального состояния Т-лимфоцитов крови человека при модификации а-интерфероном. и в условиях УФ-облучения: Автореф. дис. . канд. биол. наук / И.А.Колтаков. — Воронеж, 2007. 24 с.
22. Косолапов В.А. Хемилюминесцентные методы в оценке свободноради-кальных реакций / В.А. Косолапов, О.В. Островский, А. А. Спасов // Клин, и лаб: диагност. 1999. - № 9. - С. 41.
23. Красновский^А.А. Синглетный молекулярный кислород: механизмы образования и пути дезактивации в фотосинтетических системах / А.А. Крас-новский // Биофизика. — 1994: — Т. 39, вып. 2. — С. 236—250.
24. Крыленков В.А. Электронно-микроскопическое исследование поверхности необлученных и УФ-облученных лимфоцитов крови человека / В. А. Крыленков, М. С. Брудная, Я. Ю. Комиссарчик // Цитология. — 1983. Т. 25, №4.-С. 476-481.
25. Куклина Е. М. сАМФ-зависимая сигнальная трансдукциЯ|В контроле активации Т-лимфоцитов / Е. М. Куклина, С. В. Ширшев // Биохимия, 2000. — Т. 65, вып. 6.-С. 741-752.
26. Кульберг А .Я. Молекулярная иммунология / А.Я. Кульберг. — М. : Высш. шк., 1985.-287 с.
27. Куцый М.П. Участие протеаз в апоптозе / М.П. Куцый, Е.А. Кузнецова,
28. A.И. Газиев // Биохимия 1999: - Т. 64, № 2. - С. 149-163.
29. Лимфоциты: методы / Под ред. Дж. Клауса. — М.: Мир, 1990 — 395 с.
30. Лонская И.А. Индукция и подавление апоптоза в тимоцитах крысы ультрафиолетовым облучением / И.А. Лонская, В.Н. Афанасьев, В.А. Печатников // Биофизика. 1997. - Т.42, вып. 3. - С. 680-685.
31. Мартынова Е.А. Влияние сфинголипидов на активацию Т-лимфоцитов / Е.А. Мартынова // Биохимия. 1998. -Т.63, № 1. - С. 122-132.
32. Маянский А.Н. Реактивность и медиаторные функции интестинальных эпителиоцитов в системе мукозального гомеостаза / А.Н. Маянский, И.В: Маянская // Иммунология. 2004. - № 3. - С. 185-192.
33. Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс при воспалении / Е.Б. Меныци: кова, Н.К. Зенков // Успехи современной биологии. — 1997. — Т. 117, вып. 2.-С. 155-157.
34. Михилева Е.А. Модуляция физико-химическими- агентами структурно-функционального состояния нейтрофилов крови человека: дис. . канд. биол. наук / Е.А. Михилева. Воронеж, 2006. - 20 Г с.
35. Модуляция апоптоза мононуклеаров в условиях окислительного стресса /
36. B.В. Новицкий, и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2008. - Т. 45, №3.-С. 251-254.
37. Молекулярная биология клетки : В 5 т. / Б. Албертс, Д; Брей, Дж. Льюис, М. Рэфф, К. Роберте, Дж. Уотсон ; Пер. с англ. под ред. Р.П. Георгиева. — М. : Мир, 1986.
38. Наградов Н.К. Взаимодействие «гидрофобной пробы» 1-анилин-8-нафталинсульфоната с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой / Р.А.
39. Асриянц // Доклады АН СССР.-1971.-Т. 199,№2.- С. 474-477.
40. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. Е.Б. Меньшикова и др.. М. : Слово. - 2006. - 556 с.
41. Осипов А.Н. Активированные формы кислорода и их роль в организме / А.Н. Осипов, О.А. Азизова, Ю.А. Владимиров // Успехи биол. химии. -1990.-Т. 31.-С. 180-208.
42. Пероксид водорода, образуемый внутри митохондрий; участвует в neper даче апоптозного сигнала от клетки к клетке / О.Ю. Плетюшкина и др. // Биохимия. 2006. - Т. 71, № 1, С. 75-84.
43. Петров Р.В. Иммунология / Р.В. Петров. М. : Медицина, 1987. — 416 с.
44. Пол У. Иммунология: в 3 т. / У. Пол, А. Сильверстайн, М. Купер и др.; перевод* с англ. Т. И. Власик; под ред. У. Пола.-М. : Мир, 1987-Т. 1. 476 с.
45. Практикум по иммунологии / И.А. Кондратьева и др.; Подг ред. И.А. Кондратьевой, В.Д. Самуилова. М. : Изд-во Моск. ун-та, 2001. - С. 3031.
46. Разумовский С.Д. Кислород — элементарные формы и свойства / С.Д. Разумовский. -М.: Химия, 1979. 126 с.
47. Робинсон М.В. Морфология и метаболизм лимфоцитов / М.В. Робинсон, А. Б. Топоркова, В. А. Труфакин. Новосибирск : Наука, 1986. — 128 с.
48. Ройт А. Основы иммунологии / А. Ройт / Пер. с англ. М. : Мир, 1991. — 328 с.
49. Савостина И.Е. Исследование влияния УФ-света и иммуномодуляторов на антиоксидантный статус и состояние мембран лейкоцитов. Автореф. дис. . канд. биол. наук. Воронеж, 2005. 23 с.
50. Самойлова К. А. Выход веществ* из лимфоцитов периферической крови человека, облученных коротковолновыми УФ-лучами / К. А. Самойлова, А. П. Миронова, Г. А. Арцишевская // Цитология. — 1984. — Т. 26, № 1. С. 102-107.
51. Самуилов В.Д. Программируемая клеточная смерть / В.Д. Самилов, А.В. Олескин, Е.М. Лагунова // Биохимия. 2000. - Т. 65, вып. 8. — С. 10291046.
52. Свободные радикалы в биологии: в 2-х т. / Под ред. У. Прайора. — М.: Мир, 1979.—Т. 1. —320 с.
53. Сидорик Е.П. Биохемилюминесценция клеток при опухолевом процессе / Е.П. Сидорик, Е.А. Баглей, М.И. Данко. — Киев: Наукова думка, 1989. —г 218 с.
54. Сидорова Е.В. Субпопуляции В-лимфоцитов и их функциональная роль / Е.В. Сидорова// Успехи современной биологии. 2002. — Т. 122, № 5. — С. 467-479.
55. Стимулирующее действие УФ-излучения на активность антител и комплемента крови человека / К.А. Самойлова и др. // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных Л., 1986. - С. 226-237.
56. Теория и практика иммуноферментного анализа / Под ред. В. А. Егорова. М. : Высшая школа, 1991. - 288 с.
57. Тронов В. А. Метод ДНК-комет индивидуальных клеток. Принцип и применение метода / В.А. Тронов, И.И. Пелевина // Цитология. 1996. — Т.38, №4/5. С. 631-641.
58. Тронов В.А. Механизм радиационной гибели лимфоцитов периферической крови человека, оцениваемой методом ДНК-комет / В.А. Тронов, Д.Г. Терещенко, М! А. Коноплянников // Биофизика. — 1998. — Т. 43, № 1. -С. 115-124.
59. Тронов В.А. Репарация ДНК и апоптоз. / В.А. Тронов // Цитология. — 1999. -Т. 41, №5.-С. 405-411.
60. Тронов В.А. Репарация ДНК и гибель покоящихся лимфоцитов крови человека, индуцированные перекисью водорода / В.А. Тронов, В.М. Константинов // Биохимия. — 2000. — Т.65, вып.1. — С. 1516-1524.
61. Турпаев К.Т. Активные формы-кислорода и регуляция экспрессии генов / К.Т. Турпаев // Биохимия. 2002. - Т. 67. - С. 281-292.
62. Ушакова Т.А. Механизм и роль апоптоза при патологии: актуальность ис-1 следования в комбустиологии (обзор литературы)' / Т.А. Ушакова, А.А.
63. Карелин, А.Г. Глоба // Комбустиология, электронная версия, 2004. №14.
64. Финкелыптейн Б.Б. Опыт применения аутотрансфузии УФ-облученной крови в детской дерматологии / Б.Б. Финкельштейн, Ф.А. Зверькова, Ю.В.ч i
65. Попов // Механизмы влияния облученной ультрафиолетовыми лучами крови на организм человека и животных. JL, 1986. - С. 122-132.
66. Фотобиология и мембранная биофизика / Под ред. И.Д. Волотовского. —-Минск.: Технопринт, 1999. 352 с.
67. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты: руководство для врачей / И.С. Фрейдлин. — СПб: НТФФ : «Полисан», 1998. 113 с.
68. Хаитов P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. М. : Медицина, 2000. - 432 с.
69. Хаитов P.M. Иммунология : учебник для вузов с компакт-диском : учебник для студ. мед. вузов / P.M. Хаитов. М. : ГЭОТАР-Медиа, 2006. - 311 с.
70. Хаитов P.M. Экологическая иммунология / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин; Х.И. Истамов. М. : Изд - во ВНИРО, 1995. - 219 с.
71. Ярилин А. А. Основы иммунологии : Учебник для студ. мед. вузов / А.А. Ярилин . М. : Медицина, 1999. - 606 с.
72. A hemopoietic specific gene encoding a smallGTP binding protein is overex-pressed during T cell activation»/ L. Reibel et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1991. - V. 175. - P. 451-458.
73. Adams JiM. The Bcl-2 Protein Family: Arbiters of Cell Survival / J.M. Adams, S. Cory // Science. 1998.- V. 281. -P. 1322-1326.
74. Adenosine: an endogenous inhibitor of neutrophil-mediated injury to endothelial cells / B.N. Cronstein et al. // J. Clin. Invest. 1986. - V. 78. - P. 760770.
75. Albina J.E. Role of nitric oxide in mediation of macrophage cytotoxicity and apoptosis / J.E. Albina and J.S. Reichner // Cancer and Metastasis Reviews. — 1998.-V. 17.-P. 39-53.
76. Apparent hydroxyl radical production by peroxynitrite: Implications for endothelial injury from nitric oxide and superoxide / Beckman J.S. et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - V. 87.-P. 1620 -1624.
77. Aravind L. The domains of death: evolution of the apoptosis machinery / L. Aravind, V.M. Dixit, E.V. Koonin // Trends Biochem Sci. 1999. - V. 24, №2. -P. 47-53.
78. Bandy B. Mitochondrial mutations may increase oxidative stress — Implications for carcinogenesis and aging / B. Bandy, A.J. Davison // Free Radical Biol, and Med. 1990. - V. 8. - P. 523-535.
79. Bast A. Oxidants and antioxidants: State of the art / A. Bast, G.R.M.M. Haenen,
80. C.J.A. Doelman // Amer. J. Med. 1991. -V. 91. - P. 2S-13S.
81. Basu-Modak S., Tyrell R.M. Singlet oxygen: a primary effector in the ultraviolet A / near-visible light induction of the human heme oxygenase gene / S.Basu-Modak, R.M. Tyrell // Cancer Res. 1993. - V. 53. - P.4510-4550.
82. Berki T. Photo-immunotargeting with haematoporphyrin conjugates activated by a lowpower He-Ne laser / T. Berki; P. Nemeth // Cancer Immunol, and Im-munother. 1992. - V. 35. - P. 69-74.
83. Bokoch G.M. The role of small GTP-binding proteins in leukocyte function / G.M. Bokoch, U.G. Knaus // Curr. Opin. Immunol. 1994. - V. 6. - P. 98-105.
84. Bossy-Wetzel E. Mitochondrial cytochrome с release in apoptosis occurs upstream of DEVD-specific caspase activation and independently of mitochondrial transmembrane depolarization / E. Bossy-Wetzel, D.D Newmeyer,
85. D.R. Green // EMBO J. 1998.-V. 17.- P. 37-49.
86. Cadenas E. Low-level chemiluminescence of biological systems / E. Cade-nas, A. Boveris, Bv. Chance // Methods in Enzymology. 1984. - V. 105. - P. 211-242.
87. Caricchio R. Fas/Fas Ligand Interactions Are Involved in Ultraviolet-B-Induced Human Lymphocyte Apoptosis / R. Caricchio, E.A. Reap, P.L. Cohen // The Journal of Immunology. 1998. - V. 161. - P. 241-251.
88. Cell Surface Trafficking of Fas: A Rapid Mechanism of p53-Mediated Apoptosis / M. Bennett et al. // Science. 1998. - V. 282. - P.290-293.
89. Chemiluminescence determination of hydroperoxides following radiolysis and photolysis of free amino acids / S. Robinson et al. // FEBS Lett. 1998. -V. 430, №3.- P. 297-300.
90. Chinnaiyan A.M. The cell-death machine / A.M. Chinnaiyan, V.M. Dixit // Curr. Biol. 1996. - V. 6. - P. 555-562.
91. Cohen G.M. Caspases: the executioners of apoptosis / G.M. Cohen // Bio-chem. J. 1997.-V. 326.-P. 1-16.
92. Collier J. Endothelium-derived relaxing factor is an endogenous vasodilator in man / J. Collier, P. Vallanse // British. J. Pharmacol. 1989. - V. 97. - P. 639-641.
93. Cornwell D.G. Fatty acid paradoxes in the control of cell proliferation: Prostaglandins, lipid peroxides, and cooxidation reactions / D.G. Cornwell, N. Morisaki // Free Radicals in Biology. 1984. - V. 6. - P. 96-149.
94. Do human neutrophils form hydroxyl radical? Evaluation of an unresolved controversy / M.S. Cohen et al. // Free Radical Biol, and Med. 1988. - V. 5. -P. 81-88.
95. Kulms D. Molecular mechanisms of UV-induced apoptosis / D. Kulms, T. Schwarz // Photodermatol Photoimmunol Photomed. 2000. - V. 16. — P. 195-201.
96. Ashkenazi A. Death Receptors: Signaling and Modulation / A. Ashkenazi, V.M. Dixit//Science. 1998.-V.281.-P. 1305-1308.
97. Differential requirement for caspase-9 in apoptotic pathways in vivo / R.Hakem et al. // Cell. 1998. - V. 94, № 3. - P.339-52.
98. Droge W. Free radicals in the physiological control of cell function / W. Droge // Physiol. Rev. 2002. - V. 82. - P. 47-95.
99. Dougherty T.J. Photodynamic therapy / T.J. Dougherty, S.L. Marcus // Eun J. Cancer. -1992. V. 28A. - P. 1734-1742.
100. Dysregulated Fas and Bcl-2 expression leading to enhanced apoptosis in T-cell of multiple myeloma patients / M. Massaia et al. // Blood. — 1995. V. 85.-P. 3679-3687.
101. Earnshaw W.C. Mammalian caspases: Structure, activation, substrates and functions during apoptosis / W.C. Earnshaw, L.M. Martins, S.H. Kaufmann // Annu. Rev. Biochem. 1999. -V. 68. - P. 383-424.
102. Engel P. Expression of bcl-2 in fetal thymus, thymomas and thymic carcinomas. Association with p53 expression and review of the literature / P. Engel", D. Francis, N. Graem // APMIS. 1998 - V. 106. - P 449 - 455.
103. Ermak G. Calcium and oxidative stress: from cell signaling to cell death / G.Ermak, K.J. Davies // Mol. Immunol. 2002. - V. 38, № 10. - P. 713-721.
104. Exposure of phosphatidylserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages / V. A. Fadok et al. // J: Im Munol. 1992. - V. 148, № 7. - P. 2207-2216.
105. Free radicals and other reactive oxygen metabolites in inflammatory bowel disease / M.L. Harris et al. // Pharmacol, and Therapy. 1992. - V. 53. - P. 375-408.
106. Freeman B.A. Biology of disease: free radicals and tissue injury / B.A. Freeman, J.D. Crapo // Lab Invest, (1982). 47, 412-426.
107. Frei B. Ascorbate is an outstanding antioxidant in human plasma / B. Frei, L. England, B.N. Ames//PNAS USA-1989.-V. 86.-P. 6337-6381.
108. Goeptar A.R. Oxygen and xenobiotic reductase activities of cytochrome P450 / A.R.Goeptar, H. Scheerens, N.P. Vermeulen // Crit. Rev. Toxicol. -1995.-V. 25.-P. 25-65.
109. Golstein P. Cell death: TRAIL and its receptors / P. Golstein // Current Biol. 1997. - V. 7. - P. R750-R753.
110. Goldstein S. Mannitol as an OH" scavenger in aqueous solutions and in biological systems / S. Goldstein, G. Czapski // Int. J. Radiat. Biol. 1984. - V. 46. - P. 725-729.
111. Green D. R. Apoptosis. Death deceiver / D.R. Green // Nature. 1998.-V. 396. - P. 629-630.
112. Green D. R. Apoptotic pathways: the roads to ruin / D.R. Green // Cell. -1998.-V. 94, №6-P. 695-698.
113. Green D.R. Mitochondria and Apoptosis / D.R. Green, J. Reed // Science. -1998.-V. 281.-P. 1309-1312.
114. Green D.R. T cell development: some cells get all the breaks / D.R. Green, M. Schuler // Nat. Immunol. 2000. - V. 1. - P. 15-17.
115. Gross A. BCL-2 family members and the mitochondria in apoptosis / A. Gross, J. M. McDonnell, S. Korsmeyer // Genes Dev. 1999. - V. 13. - P. 1899-1911.
116. Hamers M.N. Oxidative stress in human neutrophilic granulocytes: Host defense and self-defense / M.N. Hamers, D. Roos // Oxidative stress. 1985. - V. 145.-P. 351-381.
117. Hansen R. p53; from inductive signal to cellular effect / R. Hansen, M. Oren // Curr. Opin. Genet. Develop. 1997. - V. 7, № 1. - P.46-51.
118. Harman D. Free radicals theory of aging / D. Harman // Mutat. Res. 1992. - V. 275. - P. 257-266.
119. Haunstetter A. Apoptosis: Basic mechanisms and implications for cardiovascular disease/ A. Haunstetter, S. Izumo // Circ. Res. 1998. - V. 82. - P. 1111-1129.
120. Hengartner M. Apoptosis. Death by crowd control / M. Hengartner // Science. 1998. - V. 281.-P. 1298-1299.
121. Huppertz B. The apoptosis cascade morphological and immunohistochemi-cal methods for its visualization / B. Huppertz, H.-G. Frank, P. Kaufmann // Anat. Embryol. - 1999. - V. 200. - P. 1-18.
122. Imlay J.A. Assay of metabolic superoxide production in Escherichia coli / J. A. Imlay, I. Fridovich // J. Biol. Chem. 1991. - V. 266. - P.6957-6965.
123. Jacobson M.D. Programmed cell death in animal development / M.D. Jacob-son, M. Weil, M.C. Raff// Cell. 1997. - V. 88. - P. 347-354.
124. Juond A.F. Effects of oxygen intermediates on cellular functions / A.F. Juond // Amer. Revs. Respir. Dis. 1987. - V. 135. - P.S32-S34.
125. Kanofsky J!R. Singlet oxygen production by biological systems / J.R. Kanofsky // Chem.-Biol. Interact. 1989. - V. 70. - P. 1-8.
126. Kidd VJ. Proteolytic activities that mediate apoptosis / V.J. Kidd // Annu. Rev. Physiol. 1998. - V. 60. - P.533-573.
127. Klebanoff S.J. Myeloperoxidase: contribution to the microbicidal activity of intact leukocytes / S.J. Klebanoff// Science. 1970. - V. 169. - P. 1095-1097.
128. Koga S. Mechanism for the generation of superoxide anion and singlet oxygen during heme compound-catalyzed linoleic acid hydroperoxide decomposition / S. Koga, M. Nakano, K. Uehara // Arch. Biochem. and Biophys. — 1991. — V. 289. P. 223-229.
129. Kohler C. Evaluation of caspase activity in apoptotic cells / C. Kohler, S. Orrenius, B. Zhivotovsky // J. Immunol. Methods. 2002. - V. 265. - P. 97110.
130. Koppenol W.H. The Centennial of the Fenton reaction / Koppenol W.H. // Free Rad. Biol. Med.- 1993. V. 15. - P. 645-651.
131. Kroemer G. The proto-oncogene Bcl-2 and its role in regulating apoptosis / G. Kroemer // Nature Med. 1997. - V. 3. - P. 614-620.
132. Kroemer G. The mitochondrial death/life regulator in apoptosis and necrosis / G. Kroemer, B. Dallaporta, M. Resche-Rigon // Annu. Rev. Physiol. 1998. -V. 60. P. 619-642.
133. Kroemer G. Mitochondrial control of apoptosis / G. Kroemer, N. Zamzami, S.A. Susin. Immunol. Today. - 1997. -V. 18. P. 44-51.
134. Krueger 312-nanometer Ultraviolet В Light (Narrow-Band UVB) Induces Apoptosis of T Cells within Psoriatic Lesions Exp / M. Ozawa et al. // Med — 1999. V. 189, № 4. — P.711-718.
135. Krutmann J. Involvement of cytokines, DNA damage, and reactive oxygen intermediates in ultraviolet radiation — induced modulation of intercellular adhesion molecule-1 expression / J. Krutmann, M. Grewe // J. Invest. Dermatol. -1995.-V. 105.-P. 67-70.
136. Kulms D: Molecular mechanisms of UV-induced apoptosis / D. Kulms; T. Schwarz // Photodermatol. Photoimmunol. Photomed. 2000. - V. 16. - P. 195-201.
137. Kumar S. Prodomains, adaptors, oligomerization: the pursuit of caspase activation in apoptosis / S. Kumar, P.A. Colussi // Trends Biochem. Sci. 1999. -V. 24.-P. 14.
138. Cytochrome с and dATP-dependent formation of Apaf-l/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease cascade / P. Li et al. // Cell. — 1997. V. 91. P. 479-489.
139. Liang H. Three-dimensional structures of proteins involved in programmed cell death / H. Liang, S.W. Fesik // J. Mol. Biol. 1997. - V. 274, № 3. - P. 291-302.
140. Role of tissue glutation in prevention of surgical trauma / P.T. Liu et al. // Xenobiotica. 1993. - V. 23. - P. 899-911.
141. Induction of the apoptotic program in cell-free extracts: requirement for dATP and cytochrome с / X. Liu et al. // Cell. 1996. - V. 86. P. 147-157.
142. Apoptosis inducing factor (AIF): a phylogenetically old, caspase-independent effector of cell death / Lorenzo H.K. et al. // Cell Death Differ.1999.-V. 6.-P. 516-524.
143. Cytochrome с is rapidly released from the cell upon apoptosis induction: a new marker for cell death in vivo / M. Los et al. // IFES Congress, Poland,2000.
144. Loss of Function of Cytochrome с in Jurkat Cells Undergoing Fas-mediated Apoptosis / A. Krippner et al. //jbc online. 1996. - V. 271, № 35. - P. 2162921636.
145. Lovaas E. Free radical generation and coupled thiol oxidation by lactoper-oxidase/SCN7H2C>2 / E. Lovaas // Free Radical Biol, and Med. 1992. - V. 13. -P. 187-195.
146. The Caspase-3 Precursor Has a Cytosolic and Mitochondrial Distribution: Implications for Apoptotic Signaling / M. Mancini et al. // JCB. 1998. - V. 140.-P. 1485-1495.
147. Martin S.J. Ultraviolet В Irradiation of Human Leukaemia HL-60 Cells in Vitro Induces Apoptosis / S.J. Martin, T.G. Gotter // Int. J. Radiat. Biol. -1991. -V.59.-P. 1001-1016.
148. McCordJ. M. Superoxide dismutase. An enzymic function for erythrocu-prein (hemocuprein) / J.M. McCord, I. Fridovich // J. Biol. Chem. 1969. -V. 244.-P. 6049-6055.
149. McCaughan J.S. Photodynamic therapy: a review / J.S. McCaughan // Drugs Aging. 1999. - V. 15. - P. 49-68.
150. Mehmet H. Apoptosis Caspases find a new place to hide / H. Mehmet // NATURE. - 2000. - V.403. - P. 29-30.
151. Meikrantz W. Apoptosis and the cell cycle / W. Meikrantz, R. Schlegel // J. Cell. Biochem., 1995.-V.-58.-P. 160-174.167. p53 Phosphorylation: biochemical and functional consequences / G.J. Milczarek et al.//Life Sci. 1997. V. 60, № l.-P.l-ll
152. Milner J. Structures and functions of the tumor suppressor p53 / J. Milner Pathol. Biol. (Paris). 1997. - V. 45, № 10. - P. 797-803.
153. Moncada S. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology / S. Moncada, R.M.J. Palmer, E.A. Higgs // Pharmacol. Revs. 1991. - V. 43. -P. 109-142.
154. Mullarkey C.J. Free radical generation by early glycation products: a mechanism for accelerated atherogenesis in diabetes / C.J. Mullarkey, D. Edelstein, M. Brownlee // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 1990. — V. 173, № 3. P. 932-939.
155. An induced proximity model for caspase-8 activation / M. Muzio et al. // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273. - P. 2926-2930.
156. Nagata S. Apoptosis by death factor / S. Nagata // Cell. 1997. - V. 88. - P. 355-365.
157. Caspase-12 mediates endoplasmic reticulum-specific apoptosis and cytotoxicity by amyloid-b / T. Nakagawa et al. // Nature. 2000. -V. 403. - P. 98103.
158. Biological Sources of Reduced Oxygen Species. In: Analysis of Free Radicals in Biological Systems. / A.E. Favier et al. // eds., Basel, Boston, Berlin: Birkhauser.- 1995.-P. 11-19.
159. Noronha-Dutra A.A. Reaction of nitric oxide with hydrogen peroxide as a model for nitric oxide-mediated killing / A.A. Noronha-Dutra, M.M. Epperlein, N. Woolf // FEBS Lett. 1993. - V. 321. - P. 59-62.
160. Optical measurement of the catalase-hydrogen peroxide intermediate (Compound I) in the liver of anaesthetized rats and its implication to hydrogen peroxide production in situ / N. Oshino et al. // Biochem J. 1975. — V. 146, № 1. -P. 67-77.
161. Protective role of vitamin E in biological systems / L. Parker // Am. J. Clin. Nutrition.-1991.-V. 53.-P. 150S-1055S.
162. Perez H.D. Generation of a chemotactic lipid from arachidonic acid by exposure to a superoxidegenerating system / H.D. Perez // Inflammation. 1980. -V. 4.-P. 313-328.
163. Perspectives on the mitochondrial permeability transition / P.Bernardi et al. // Biochim. Biophys. V. 1365. - P. 200-206.
164. Peter M.E. Advances in apoptosis research / M.E. Peter, A.E Heufelder, M.O. Hengartner // Proc. Natl. Acad. Sci. 1997. - V. 94. - P. 12736-12737.
165. Free radicals and inflammation: superoxidedependent activation of a neutrophil chemotactic factor in plasma / W.F. Petrone et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. - V. 77. - P. 1159-1163.
166. Physico-chemical modeling the role of free radicals in photodynamic therapy / A. Nemeth et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. — 1999i — V. 255, №2. -P. 360-366.
167. Physiological production of singlet molecular oxygen in the myeloperoxi-dase-H202-chloride system / C. Kiryu et al. // FEBS Lett. 1999. - V. 443. -P. 154-158.
168. Popov I. Photochemiluminescent detection of antiradical activity / I. Popov, G. Levin//Luminescence. 1999. -V. 14, №3.-P. 169-174.
169. Possible contribution of apoptosis-inducing factor (AIF) and reactive oxygen species (ROS) to UVB-induced caspase-independent cell death in the T cell line Jurkat / H. Murahashi et al. // Journal of Leukocyte Biology. 2003. -V.73. — P.399-406.
170. Prodczacy J.J. Reduction of iodonitrotetrazolium violet by superoxide radicals / J.J. Prodczacy, R. Wei // Biochem. and Biophys. Res. Comm. 1988. — V. 150.-P. 1294-1301.
171. Pooled analysis of p53 mutations in hematological malignancies. M. Proko-cimer et al.. Hum. Mutat. - 1998.-V. 12, № l.-P. 4-18.
172. Pryor W.A. Oxy-radicals and related species: their formation, lifetimes, and reactions / W.A. Pryor // Ann. Rev. Physiol. 1986. - V. 48. - P. 657-667.
173. Raff M. (1998). Cell suicide for beginners / M. Raff»// Nature. V. 396. - P. 119-122.
174. Reed J.C. Bcl-2 family proteins and mitochondria / J.C. Reed, J.M. Jur-gensmeier, S. Matsuyama // Biochim. Biophys. Acta. 1998. — V. 1366. P. 127-137.
175. Reed, J.C. Cytochrome c: can't live with it -can't live without it / J.C. Reed. Cell. - 1997. - V. 91, № 5. - P. 559-62.
176. Regulation of apoptotic protease activating factor—1 oligomerization and apoptosis by the WD-40 repeat region / Adrain C. et. al. // J. Biol. Chem. — 1999. V. 274. P. 20855-20860.
177. Riley J.C.M. Oxygen radicals and reactive oxygen species in reproduction / J.C.M. Riley, H.R. Behrman // Proc. Soc. Exp. Biol, and Med. 1991. - V. 198.-P. 781-791.
178. RGD peptides induce apoptosis by direct caspase-3 activation / C.D. Buckley et al. // Nature. V.397. - P. 534-539.
179. Caricchio R. Fas/Fas Ligand Interactions Are Involved in Ultraviolet-B-Induced Human Lymphocyte Apoptosis / R. Caricchio, E.A. Reap, P.L. Cohen //The Journal of Immunology. 1998. - V. 161. - P. 241-251.
180. Role of cytochrome с and dATP/ATP hydrolysis in Apaf-1-mediated'cas-pase-9 activation and apoptosis/ Y. Hu et al.'// EMBO J. 1999. - V. 18, № 18.-P. 3586-3595.
181. Rubanyi C.M: Vascular effects, of oxygen-derived free radicals / C.M. Rubanyi // Free Radical Biol, and,Med. 1988: - V. 4. - P. 107-121.
182. Ruoslahti R. A new way to active caspases / R. Ruoslahti, J. Reed // Nature. 1999. - V. 397. - P. 479-480.
183. Sajithal G.B. The role of metalcatalysed oxidation in the formation of advanced glycation end products: an in vitro study on.collagen,/ G.B. Sajithal, P. Chithra, G. Chandrakasan // Free Radic. Biol'. Med. 1998. - V. 25. - P. 264269.
184. Saran M. Radical functions in vivo: a critical review of current concepts and hypotheses / M. Saran, C. Michel, W. Bors // Naturforsch С. 1998. - V. 53, №3-4.-P. 210-227.
185. Servomaa К. UV light and ionizing radiations cause programmed death of rat chlorleukemia cells by inducing retropositions of a mobile DNA element (LIRn) / K. Servomaa, T. Rytomaa // Int. J. Radiat. Biol. 1990. - V. 57, № 2. -P. 331-343.
186. Shaw P.H. The role of p53 in cell cycle regulation / P.H. Shaw Pathol. Res. Pract. 1996. -V. 192, № 7. - P. 669-675.
187. Singlet oxygen ('Ag 02) as the principal oxidant in myeloperoxidase-mediated bacterial killing in neutriphil phagosome / H. Tatsuzawa et al. // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1999. - V. 262. - P.' 647-650.
188. Sjoodin B. Biochemical1 mechanisms for oxygen free radical formation during exercise / B. Sjoodin, Y.H. Westing, E.S. Apple // Sports Med. 1990. - V. 10.-P. 236-254.
189. Skulachev V.P. Cytochrome с in the apoptotic and antioxidant cascades / V.P. Skulachev // FEBS Lett. 1998.- V. 423.- P. 275-280.
190. Ordering the cytochrome c- initiated caspase cascade: hierarchical activation of caspases-2,-3,- 6,-7,-8, and -10 in a caspase-9-dependent manner / E.A. Slee et ah. // J. Cell Biol. 1999. - V. 144, № 2. - P.281-292.
191. The WD repeat: a common architecture for diverse functions / T.F. Smith et al. // Trends Biochem. Sci. 1999. - V. 24. - P. 181-185.2091 p53: prospects for cancer gene therapy / Soddu S. et al. // Cytokines Cell Mol. Ther. 1998. - V. 4,№3.-P. 177-185.
192. The p53 tumour suppressor gene // Steele R.J. et al. // Br. J. Surg. 1998. -V. 85, № 11.-P. 1460-1467.
193. Steinbeck M.J. Intracellular singlet oxygen generation by phagocytosing neutrophils in response to particles coated with a chemical trap / M.J Steinbeck, A.U. Khan, M.G. Karnovsky // J. Biol. Chem. 1992. - V. 267. - P. 1342513423.
194. Sundqvist T. Bovine aortic endothelial cells release hydrogen peroxide / T. Sundqvist//J. Cell. Physiol.-1991.-V. 148.-P. 152-156.
195. Mitochondrial release of caspase-2 and -9 during the apoptotic process / SusinS.A. et al. //J. Exp. Med. 1999.-V. 189. - P. 381-394.
196. Takahama U. Hydrogen peroxide-dependent generation of singlet molecular oxygen by human saliva: Its detection by chemiluminescence from a cypridina luciferin analog / U. Takahama // Photochem. and Photobiol. — 1993. V. 57. -P. 376-379.
197. The release of cytochrome с from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis / R.M. Kluck // Science. 1997. - V. 275: - P. 11321136.
198. The* superoxide generating system of В cell lines. Structural homology with the phagocytic oxidase and triggering' via surface Ig / F.E. Maly et al.- // J. Immunol. 1988. - V. 140. - P. 2334-2339.
199. Thompson C.B: Apoptosis in the pathogenesis and'treatment of disease i C.B. Thompson // Science. 1995. - V. 267. - P. 1456-1462.
200. Thombery N.A. Caspases: Enemies Within / N.A. Thombery, Y. Lazebnik // Science. 1998-.-V. 281.-P. 1312-1316.219: p53 from basic research to clinical applications / O. Tominaga et al. Crit. Rev. Oncog. 1992. - V. 3, № 3. - P. 257-282.
201. The* fight of viruses against apoptosis / J. Tschopp et al. // Curr. Opin. Gen. Develop. 1998. - V. 8, № 1. - P. 82-87.
202. Tumor-suppressor p53: implications for tumor development and prognosis / Kirsch D.G. et al. / J. Clin. Oncol. 1998. -V. 16, № 9. - P. 3158-3168.
203. Vanasbeck B.S. Involvement of oxygen radikals and blood cells in the pato-genesis of ARDS by endotoxin and hyperoxia /B.S. Vanasbeck // Appl. Car-diopulm. and Pathophysiol. 1991.- V. 4.-P. 127-138.
204. Vaux DiL. Cell death in development / D.L. Vaux, S.J. Korsmeyer // Cell. — 1999.-V. 96.-P. 245-254.
205. Voeikov V.L. Reactive Oxygen Species, Water, Photons, and Life / Voeikov V.L.// Rivista di Biologia / Biology Forum 2001. V. 94: - P. 193-214.
206. Walsh G. Enzymatic reaction mechanisms / C. Walsh-// W.H; Freeman and: Company, San-Francisco. 1979. - P. 978.
207. Weisfeldt M.L. Oxygen-derived free radicals and'myocardial ischemic injury / M.L. Weisfeldt, J.L. Zweier, J.T. Flaherty // Heart Dis. 1988. - № 3. -P. 60-72.
208. White E. Life, death and the pursuit, of apoptosis / E. White // Genes Dev. -1996. -V. 10.-P. 1-15.
209. Wu; S.M: Mechanism of hypochlorite-mediated inactivation of proteinase inhibition by alpha 2-macroglobulin / S.M. Wu, S.V. Pizzo // Biochemistry. -1999. V. 38.-P. 13983-13990.
210. Prevention of apoptosis by Bcl-2: release of cytochrome с from mitochondria blocked / J. Yang et al. // Science. 1997.-V. 275. - P. 1129-1132.
211. Yu B.R. Cellular defenses against damage from» reactive oxygen? species / B.R. Yu // Physiol: Revs. 1994. - V. 74. - P. 139-162.
212. Zamojska R., Travers P. // T-cell Receptors. Oxford, 1995 - P. 46-49.
213. Apaf-1, a human protein homologous to C. elegans CED-4, participates in cytochrome c-dependent activation of caspase-3 / H. Zou et al. // Cell. -1997.-V. 90.-P. 405-413.
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.