Исследование нуклеиновых кислот сыворотки крови и асцитной жидкости при злокачественных опухолях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Грикурова, Нина Константиновна

• Грикурова, Нина Константиновна
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Грикурова, Нина Константиновна

Введение.

Обзор литературы.

Глава I. Нуклеиновые кислоты биологических жидкостей

1.1. Нуклеиновые кислоты сыворотки крови в норме и при различных патологиях

1.2. Нуклеиновые кислоты асцитной и синовиальной жидкости.

1.3. Нуклеиновые кислоты,выделяющиеся в культура-льну ю среду при выращивании клеток

1.4. Гипотезы о функциональном значении внеклеточных нуклеиновых кислот

Собственные исследования.4

Глава 2. Материал и методы исследования.4

2.1. Анализируемый материал .4

2.2. Выделение нуклеиновых кислот из тканей . 4

2.2.1. Получение ДНК из ткани печени крыс . 4

2.2.2. Получение тотальных РНК из гепатомы Зайдела крыс. 4

2.3. Выделение нуклеиновых кислот из биологических жидкостей. «

2.3.1. Получение нуклеиновых кислот из асцитной жидкости опухолевого происхождения

2.3.2. Получение нуклеиновых кислот из сыворотки крови . .4

2.4. Определение дезоксирибозы ЛДК по методу Бар-тона .4

2.5. Определение рибозы РНК орциновым методом . . 4.

2.6. Ультрацентрифугирование в градиенте плотности

2.7. Определение устойчивости высокомолекулярных нуклеиновых кислот сыворотки крови к действию ферментов.4

2.7.1. Обработка препаратов нуклеиновых кислот сыворотки крови ДНКазой

2.7.2. Обработка препаратов РНКазой.

2.7.3. Обработка препаратов нуклеиновых кислот проназой.

2.7.4. Определение устойчивости высокомолекулярных нуклеиновых кислот сыворотки крови к действию фосфодиэстеразы

2.7.5. Определение чувствительности нуклеиновых кислот сыворотки крови к щелочному гидролизу

2.8. Аналитический электрофорез в 8$-ном ПАГ

2.9. Окраска электрофореграмм "stain all",

2.10. Аналитический электрофорез в агарозе

2.11. Выделение высокомолекулярных ДНК из 0,4%-ного агарозного геля методом электроэлюции

2.12. Рестрикционный анализ высокомолекулярных

ДНК биологических жидкостей

2.13. Спиртовая хроматография препарата нуклеиновых кислот.

2.14. Метод ник-трансляции высокополимерных ДНК с использованием ^ ^

2.15. Гибридизация высокомолекулярных ДНК сыворотки крови крыс при большом избытке клеточной ДНК в растворе.

2.16. Гибридизация нуклеиновых кислот по методу Саузерна (блот-гибридизация)

2.17. Определение формы высокомолекулярной ДНК сыворотки крови с помощью электронной микроскопии (Miller et al.,1978).

2.18. Методы очистки некоторых реактивов

2.18.1. Очистка этанола.

2.18.2. Очистка хлороформа

2.18.3. Перекристаллизация акриламида . ^

2.18.4. Перекристаллизация бисакриламида . . . . &q

2.19. Реактивы,использовавшиеся в работе.

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1. Нуклеиновые кислоты сыворотки крови здоровых крыс

3.1.1. Особенности нуклеиновых кислот сыворотки крови крыс по данным спектрофотометрии •

3.1.2. Оценка величины потери нуклеиновых кислот в процессе выделения из сыворотки крови

3.1.3. Соотношение ДНК и РНК в сыворотке крови крыс.

3.1.4. Фракционный состав нуклеиновых кислот сыворотки крови

3.1.5. Одноцепочечная структура РНК сыворотки крови

3.1.6. Осаждаемость РНК сыворотки крови при центрифугировании в градиенте плотности CsCi.

3.1.7. Генетическая уникальность наиболее высокомолекулярных ДНК (17 и 20 МД) сыворотки крови крыс.

3.1.8. Фрагментация 20 и 17 МД ЖК сыворотки крови крыс рестриктазой Крс I.

3.1.9. Электронно-микроскопическое выявление высокополимерной ДНК в сыворотке крови крыс

3.2. Нуклеиновые кислоты сыворотки крови крыс с опухолями.

3.2.1. Спектрофотометрические особенности нуклеиновых кислот сыворотки крови крыс с ге-патомой Зайдела.

3.2.2. Изменение соотношения отдельных фракций высокополимерных ДНК в сыворотке крови крыс с гепатомой Зайдела и в асцитной жидкости.

3.2.3. Стабильность спектра низкомолекулярных

РНК сыворотки крови при гепатоме Зайдела

3.2.4. Спектр низкомолекулярных нуклеиновых кислот асцитной жидкости гепатомы Зайдела

3.2.5. Сходство и отличия спектра нуклеиновых кислот асцитной жидкости у онкологических больных и экспериментальных животных с гепатомой Зайдела.

Обсуздение результатов.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование нуклеиновых кислот сыворотки крови и асцитной жидкости при злокачественных опухолях»

Актуальность исследования. Роль нуклеиновых кислот в хранении и передаче наследственных свойств клеток,в программировании структуры белков и таким образом определении их функциональной специфики в наши дни общепризнана. Новейшие достижения молекулярной биологии,однако,убездают,что эти ключевые элементы жизни при известных обстоятельствах могут играть и негативную роль,порождая в результате минимальных изменений структуры отдельных клеточных генов,управляющих в норме дифференциацией и развитием,канцерогенные факторы-онкогены.

Указанные события развиваются на уровне клетки,её генома. Однако их побудительные импульсы имеют экстрацеллюлярную природу, поступают извне,из окружающей среды. С этой точки зрения кровь,омывающая ткани и клетки,представляет первостепенный интерес и как возможный источник упомянутых инициирующих малигниза-цию агентов,и как среда,содержащая продукты неопластического процесса.

Мевду тем,сравнительно мало внимания в этом плане до настоящего времени уделялось анализу такой ткани,как кровь,сыворотка крови,которую можно рассматривать как интегральный метаболический резервуар организма,суммарно отражающий ассимилятор-но-диссимиляторный баланс целостного организма. В то же время, в литературе накапливаются данные,свидетельствующие о сложном спектре нуклеиновых кислот бесклеточной части крови,происхождение и функциональное назначение которых не только при патологических состояниях,но и в норме остаются все ещё неясными. Являются ли они лишь конечными продуктами обмена,предназначениими на выброс,или играют какую-то биологическую роль.

Показано, что содержание нуклеиновых кислот в сыворотке крови млекопитающих, в том числе и человека,невелико и составляет ОКОЛО 0,5 - I мкг/мл РНК ( Сох and Gokcen,1977)»а ДОС -около 0,01 мкг/мл ( Dennin,1979).

Лучше изучены нуклеиновые кис лоты, продуцируемые in vitro лимфоцитами или эмбриональными клетками ( Anker et al.,1972,1975, Disterhorst,1976,Jacherts et aivi97^B случае выделения нуклеиновых кислот лимфоцитами довольно хорошо обоснована их необходимость в переносе иммунной информации (Jacherts,1979). Выделение нуклеиновых кислот эмбриональными тканями и органами может быть необходимым для координации внутригеномных перестроек в процессе дифференцировки. Получение экспериментальных результатов о природе и изменениях спектра нуклеиновых кислот биологических жидкостей при росте опухоли представляется важным для понимания причин и механизмов взаимодействия опухоли и организма. Анализ изменений фракционного состава сыворотки крови при раке является актуальным ещё и потому, что повышение содержания ДОС в сыворотке крови предложено использовать как диагностический тест на наличие опухолей при ряде их локализаций (Shapiro et ai.,1983). Эти данные могут быть также полезны для выяснения механизма переноса генетической информации мезду клетками в норме и при неопухолевой патологии.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является изучение высоко - и низкомолекулярных нуклеиновых кислот ( ДОС и РНК ) в сыворотке крови и асцитной жидкости при экспериментальных перевивных опухолях у крыс и мышей, а также у больных опухолями яичников. В связи с указанной целью были поставлены следующие задачи:

1. Дать количественную и физико-химическую характеристику нуклеиновых кислот сыворотки крови и асцитной жидкости у экспериментальных животных с опухолями и у онкологических больных.

2. Охарактеризовать электрофоретически фракционный состав нуклеиновых кислот сыворотки крови крыс в норме и при гепатоме Зайдела, а также опухолевой асцитной жидкости.

3. Осуществить молекулярно-генетический анализ нуклеиновых кислот сыворотки крови крыс с помощью рестрикционных нуклеаз, гибридизации, а также электронной микроскопии и других современных методов.

Научная новизна. Впервые дана подробная физико-химическая и молекулярно-биологическая характеристика нуклеиновых кислот сыворотки крови животных с некоторыми экспериментальными опухолями и онкологических больных опухолями яичников, а также выявлены изменения в спектре нуклеиновых кислот биологических жидкостей при опухолях. Показано, что содержание нуклеиновых кислот в сыворотке крови крыс составляет 1,0-2 мкг/мл. Выявлен сложный фракционный состав нуклеиновых кислот сыворотки крови человека и крыс. В сыворотке крови доноров и интактных животных содержатся две гомогенные по электрофоретической подвижности высокомолекулярные ДЩ с мол.массой 20 и 17 мегадальтон (МД), составляющие около 1% тотального препарата ДНК. Кроме того, обнаружена геторогенная область с мол.массой от 2 до 15 МД. Рест-рикционный анализ показал наличие гомогенных последовательностей в наиболее высокомолекулярных фракциях ДНК сыворотки кр°вд. С помощью молекулярной гибридизации были выявлены два типа последовательностей в 17 и 20 Щ ДВК: уникальные и повторяющиеся.

Наряду с ДЕК, в сыворотке крови содержатся 5 фракций низкомолекулярной РНК с константой седиментации 8-I0S . Эти РНК составляют более 90% препарата. Наличие выраженного подобия фракционного состава нуклеиновых кислот биологических жидкостей у человека и ряда животных говорит об их какой-то жизненно-важной функции. При опухолях содержание ДНК в сыворотке крови увеличивается. Спектр низкомолекулярных РНК остается стабильным и при опухолевой патологии.

Теоретическое и практическое значение работы. Теоретическое значение работы заключается в установлении впервые детального спектра и получении физико-химических характеристик фракций РНК и ДНК в сыворотке крови и асцитных жидкостях человека, а также крыс - носителей опухолей ( гепатома Зайдела, асцитная карцинома Эрлиха).

Показано отличие по ряду энзимо-химических параметров РНК сыворотки крови от низкомолекулярных ядерных РНК клеток.

Получены данные в пользу стабильности фракционного состава РНК сыворотки крови в жизнедеятельности животных в норме и при опухолях и нарушении фракционного состава ДНК.

Эти экспериментально-теоретические результаты могут в перспективе при дальнейшей разработке послужить рациональной основой возможного диагностического теста на рак и способом прослеживания динамики онкологического процесса и хода лечения, тем более, что для этих целей уже предложено определять тотальное содержание ДНК при различных опухолях в сыворотке крови.

Практическое значение работы заключается в том, что обнаруженное при опухолях изменение соотношения 17 и 20 МД ДНК в сторону увеличения 20 МД ДНК может составить теоретическую основу для разработки метода отбора групп с повышенной вероятностью присутствия опухоли при массовых обследованиях населения. Полученные в работе данные об изменении спектра нуклеиновых кис~ лот асцитной жидкости при раке могут быть полезны при разработке дифференциальной диагностики асцитов опухолевого и застойного происхождения.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, раздела собственных данных, обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Работа изложена на 132 страницах машинописного текста, включает 9 таблиц и 21 рисунок. Список цитируемой литературы включает 140 наименований работ отечественных и зарубежных авторов.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Грикурова, Нина Константиновна

выводы

1. В сыворотке крови интактных крыс содержится около I мкг/мл (1,13 - 0,02) нуклеиновых кислот, в том числе около 0,1 мкг/мл ДИК, остальная масса - РНК. При гепатоме Зайдела их суммарное количество достоверно не увеличивается (1,38 -0,10).

2. Низкомолекулярные РНК в сыворотке крови здоровых крыс представлены II-ю фракциями. Более 90% среди них составляют приблизительно в равных количествах 2 фракции 10s РНК, 2 фракции 8 s РНК. Остальные минорные фракции РНК имеют меньшую электрофоретическую подвижность, соответствующую от менее 4s до 7 s .

Спектр низкомолекулярных нуклеиновых кислот сыворотки крови у крыс при гепатоме Зайдела не меняется.

3. Высокомолекулярные ДНК в сыворотке крови интактных крыс представлены двумя фракциями: 20 мегадальтон и 17 мегадаль-тон и широкой областью гетерогенной ДНК 2-15 мегадальтон.

В сыворотке крови здоровых крыс количество ДНК с мол. массой 17 мегадальтон преобладает над фракцией ДНК 20 мегадальтон, а при гепатоме Зайдела этого не наблюдается.

4. Нарушение фракционного состава нуклеиновых кислот сыворотки крови при опухолях может послужить основой для разработки онко-диагностического теста.

5. По характеру нуклеотидных последовательностей 17 и 20 мегадальтон ДНК сыворотки крови интактных крыс не гомологичны клеточной ДНК. Уровень гибридизации, не превышающий 10%, обусловлен повторяющимися последовательностями.

6. Согласно данным электронной микроскопии, высокополимерные ДНК сыворотки крови интактных крыс являются двухцепочечны-ми линейными молекулами. В небольшом количестве представлены молекулы, имеющие ветвистую структуру.

7. В асцитной жидкости опухолевого происхождения у крыс с гепатомой Зайдела и у онкологических больных с опухолями яичников присутствует 5s ДНК, хотя у последних она выявляется не во всех случаях (в 75$ случаев).

Заключение

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Грикурова, Нина Константиновна, 1984 год

1. Абдурахманов Б.А. и Каинова А.С. ДНК и РНК плазмы крови в оценке активности ревматоидного артрита.-Терапевт.арх., 1979,т.51, № 7,с.29-33.

2. Абдурахманов Б.А. и Каинова А.С. Клиническое значение определения нуклеиновых кислот плазмы и синовиальной жидкости при ревматоидном артрите.-Сов.медицина,1980, $ 4, с.23-28.

3. Аглиулина Д.Г., Эстулина Л.А., Винтер В.Г. Вторичная структура РНК, секретируемой клетками асцитной опухоли Эрлиха.-Биохимия,1979, т.44, J6 8, с.1409-1415.

4. Аглиулина Д.Г., Вегнер Е.О., Винтер В.Г. Синтез РНК, выделяемой клетками опухоли Эрлиха.-Эксперим.онкология,1982, т.4, В 2, с.38-40.

5. Аглиулина Д.Г., Вегнер Е.О., Лапина Л.А., Винтер В.Г. Характеристика нуклеиновых кислот, выделяемых клетками асцитно-го рака Эрлиха.-Эксперим.онкология,1984, т.6, 2, с.29-32.

6. Бартон Методы определения нуклеиновых кислот.-Химия и биохимия нуклеиновых кислот.Под редакцией Збарского И.Б.Изд. медицина,1968,с.76.

7. Белохвостов А.С. Йммунодепрессивное действие опухоли.-Вопр.онкологии,1978, т.24, Ш 3, с.99-106.

8. Белохвостов А.С. ДНК-содержащий фактор опухолей с им-мунодепрессивным действием.-Автореферат докт.дисс.,Л.,1984.

9. Белохвостов А.С., Зеленкова Н.К. Устойчивость к панкреатической дезоксирибонуклеазе ДНК иммунодепрессивного фактора асцитной жидкости.-Биохимия,1979, т.44,в.4, с.711-714.

10. Белохвостов А.С. и Климов Н.А. Участие нуклеиновых кислот в иммунном ответе.-Успехи совр.биологии,1980,т.89,в.2,с.189-204.

11. Белохвостов А.С. и Войтенков Б.О. Роль иммунодепрес-сивных факторов опухолей в трех стадиях иммунного взаимодействия опухоли и организма.-Успехи совр.биологии,1983,т.95,в.2,с.255-271.

12. Белохвостов А.С., Козлов А.С., Зеленкова Н.К. Внеклеточная нуклеиновая кислота в асцитных экспериментальных опухолях. -Вопр. онкологии, 1976, т.22, № 8, с.45-49.

13. Белохвостов А.С., Зеленкова Н.К., Калиновский В.П. и др. Исследование фактора асцитической жидкости опухоли Эрлиха.-Вопр.онкологии,1976,т.22, Ш 10, с.66-72.

14. Белохвостов А.С., Грикурова Н.К., Глебов А.В. Изучение некоторых свойств нуклеопротеида асцитной жидкости опухолей, содержащего 5s ДНК.-Эксперимен.онкология,1983, т.5, № 6,с.43-45.

15. Васильев В.К. Возмогшость индукции гидрокортизоном межтканевой рекомбинации участков ДНК.-Бюл.эксперим.биологии и медицины,1984, т.97, № 2, с.165-167.

16. Винтер В.Г., Аглиулина Д.Г., Андреева И.М. Специфичность действия РНК, выделяемой клетками карциномы Эрлиха, на прививаемость и рост гомологичной опухоли.-Вопр.онкологии,1978, т.24, № 10, с.38-41.

17. Волкова З.И. Нуклеиновые кислоты и реактивные глико-протеины крови при системной красной волчанке.-Терапевт.арх., 1979, т.51, № 8, с.103-109.

18. Волкова З.И.,Соловьев Г.Я.,Фоломеева О.М. Выделение и характеристика ДНК плазмы крови доноров и больных системной красной волчанкой.-тБюл.эксперим.биологии и медицины, 1980,$ 6,с.689-680.

19. Георгиев Г.П. Методы определения, выделения и фракционирование нуклеиновых кислот. В кн.:"Химия и биохимия нуклеиновых кислот ",Л.,Медицина,1968, с.74-120.

20. Загребельный С.Н. и Орешкова С.Ф. Изучение свойств фосфодиэстеразы яда гюрзы, иммобилизованной на агарозе.- Биохимия, 1981, т.46, в.7, с.1277-1282.

21. Замчук JI.A. Иммунохимический анализ структуры и функции дезоксирибонуклеиновых кислот крупных бактериальных вирусов. -Автореферат докт.дисс.,1981.

22. Зелинский С.И., Гончаров Л.И., Зелинский Б.А. и др. Содержание нуклеиновых кислот и сульфгидрильных групп в плазме крови больных сахарным диабетом.-Врач.дело,1980, № 6, с.82-83.

23. Казначеев В.П., Поляков Я„В. Исследование некоторых показателей нуклеинового обмена у больных атеросклерозом.-Кардиология, 1967, № 7, с.22-25.

24. Козлов А.П. и Сейц И.Ф. Сравнительное изучение низкомолекулярных ядерных РНК крысы и гепатомы Зайдела.-Вопр.онкологии, 1975,т.21, J£ I, с.68-71.

25. Колюбаева С.Н. Изучение некоторых свойств межклеточной ДНК облученного костного мозга.-Автореф.канд.дисс.,Л.,1982.

26. Липова В.А. Цитоморфологическая характеристика и особенности роста in vitro опухолевых клеток из эксудатов при раке яичников.-Вопр.онкологии,1972, т.18, 8, с.35-43.

27. Мазин А.Л. Низкомолекулярные РНК эукариот:биогенез, субклеточная локализация, функции (обзор).-Мол.биология,1983, т.17, в.4, с.755-784.

28. Maзин А.Л. Классификация низкомолекулярных РНК млекопитающих .-Мол.биология,1983а ft.I7fb.4,c.784-791.

29. Мазин А.Л. и Сулимова Г.Е. Хроматография нуклеиновых кислот,белков и некоторых фагов на гранулированном гидроксиапа-тите.-Биохимия,1975, т.40, в.1, с.115-122.

30. Мейбаум В.В. Определение пентоз в нуклеотидах и нуклео-зидах посредством реакции Биаля.-Биохимия,1945, J& 4, с.353-359.

31. Рязанцева И.Н. Выделение РНК из асцитной жидкости карциномы Эрлиха.Сборник аспир.работ (естественные науки) Казанскийун-т,1969, с.125-128.

32. Рязанцева И.Н., Беляева М.И., Винтер В.Г. Активность ДНКаз при опухолевом росте и действие на неё РНК асцитной жидкости опухоли Эрлиха.-Вопр.онкологии,1972,т.18, $ 9,с.33-37.

33. Сейц И.Ф., Князев П.Г., Перевозчиков А.П. и др. Поиск раковых и структурных вирусных генов в ДНК нормальных и опухолевых клеток человека методами трансфекции и молекулярной гибридизации. Сб. Вирусы рака и лейкоза,1979,с.172-175.

34. Сейц И.Ф., Белохвостов А.С.,Князев П.Г. и др. Изучение вирусоподобных частиц, изолированных из культуральной жидкости лимфоцитов человека, стимулированных фитогемагглютинином. Сб. Вирусы рака и лейкоза,1980, с.106-108.

35. Сейц И.Ф., Белохвостов А.С., Князев П.Г. Перенос гена тимидинкиназы при обработке ТК~-клеток мышей с помощью препаратов .ЩЖ из опухолевых клеток человека.-Докл.АН СССР,1983,т.268, & 5, с.1235-1237.

36. Таняшин В.И. Рестрикционные эндонуклеазы.-Мол.биология, Итоги науки.,М.,1979,изд.ВИНИТИ,т.12,часть I,с.36-98.

37. Федоров Н.А., Янева И.О., Кузьмичев В.А. Экскреция ДНК лимфоцитами крови больных хроническим лимфолейкозом.-Биологические науки, 1982, № 6, с. 18-21.

38. Федоров Н.А. и Янева И.О. Экскреция ДНК лимфоцитами человека.-Успехи совр.биологии,1982а,т.93,в.2.,с.I7I-I82.

39. Фетисова Т.В. и Нилердинова Л.И. Обмен нуклеиновых кислот в сердечной мышце и их содержание в крови при экспериментальном инфаркте миокарда. -Кардиология,1980,т.20, № 5,с.76-80.

40. Шибальский В. Равновесное центрифугирование в градиенте и плотности сульфата цезия.-В кн.:Методы исследования нуклеиновых кислот.Изд."Мир",1970,с.192-215.

41. Allen R.C., Рорр R.A., Moore D.J. Separation and relative quantitation of mouse plasma esterases with disc electrophoresis.-J.Histochem.Cyt ochem. ,1965, v. 1p.249-254.

42. Anker P. and Stroun M. Spontaneous release of nucleic acids by living Bacteria and cells of higher organisms.-Abstracts,Eighth Internat.Congress of cell Biology,Brighton, 1972,p.2.

43. Anker P., Stroun M. Bacterial ribonucleic acid in the frog brain after a bacterial peritoneal infection.-Science, 1972a,v.178,p.621-623.

44. Anker P., Stroun M.,Maurice P. Spontaneous extracellular synthesis of DNA normally released by human lymphocytes.-Abstr.XI internat.Cancer Congr.I4orence,1974,v.2,p.24.

45. Anker P., Stroun M.,Maurice P. Spontaneous release of DNA by human blood lymphocytes as show in an vitro system.-Cancer Res.,1Э75,v.33,P.2373-2382.

46. Anker P. and Stroun M. Spontaneous extraclellular synthesis of DNA released by frog auriclea.-Arch.Sci.,Geneve, 1977,v.30,p.263.

47. Barnett E.V. Detection of nuclear antigens (ША) in normal and pathologic human fluids by quantitative complement fixation.-Arthritis Rhem.,1968,v.11,p.407-417.

48. Belokhvostov A.S. and Zelenkova U.K. Low-moleccularweight nucleic acids in the blood of rats with Zajdela s hepatoma.-Cancer Letters,1978,v.5,p.351-356.

49. Brehm S.P., Hoch S.O. and Hoch J.A. DNA-binding proteins in human serum.-Biochem.and Biophys.Res.Communs.,1973» v.63,p.24-31.

50. Borenstein A. and Ephrati-Elizur E. Spontaneous release of ША in sequential genetic order by Bacillus subtilis.-J.Mol.Biol.,1969,v.45,p.137-132.

51. Burton K. Determination of DNA concentration with diphenylamine.- Meth.Enzymol., 1968,v. 12, part B, p.163-166,

52. Cox R.A. and Gokcen M. Comparison of serum DUA,native DNA-binding and deoxyribonuclease levels in ten animal species and man.-Life Sci.,1976,v.19,p.1609-1614.

53. Cox ^R.A. and Gokcen M. Circulating DNA levels in man.-Biochem.Med.,1976a,v.15,p.126-137.

54. Cox R.A. and Gokcen M. ША concentrations in serum and plasma.-Clin*Chem.,1977,v.23,p.297.

55. David J.R. and David R.A. Cellular hypersensitivity and immunity.Inhibition of macrophage migration and the lymphocyte mediators.-Prog.Allergy,1972,v.16,p.300-449.

56. Davis G.L. and Davis J.S. Detection of circulating DNA by counterimmunoelectrophoresis (CIE).-Arthritis Rheumat.,1973,v.16,p.52-58.

57. De'onin R.H. DNA of free and complex origin in human plasma concentration and length distribution.-Klin.V/ochenschr., 1979,v.57,P.451-456.

58. Difilippo R.A., Vischi N. and Cimarosti L. Nucleopro-tein of normal and cancerous serum.-Acta Unio Inst.Contra Cancrum.,1956,v.12,p.416-419.

59. Distelhorst C.W., Cramer K. and Rogers J.C. Selective release of excreted DNA sequences from phytohemagglutinin-sti-mulated human peripheral blood lymphocytes.-J.Clin.Invest., 1978,v.61,p.1204-1217.

60. Feldman M. Cell interactions in the immune responsein vitro.-J.Exptl.Med.,1972,v.136,p.737-760.

61. Glick J.L. and Goldberg A.R. The action of thymus DNA on L 1210 leukemia cells.-Trans.N.Y.Acad.Sci.,1966,Ser.II.v.28, p.741-753.

62. Guin L.W., Griswold K.E., Patton-S. et al. Electropho-retic characterization of plasma RNA.-Biochem.Med.,1975>v.13,p. 224-230.

63. Hall M.R., Meinke W., Goldstein D.A. et al. Synthesis of cytoplasmic membrane-associated DNA in lymphocyte nucleus.-Nature New Biol.,1971 ,v.234,p.227-229.

64. Hamilton Т.О., Smith A.G., Griffin Gh.A. et al. Ribonucleic acid in plasma from normal adults and multiple myeloma patients.-Clin.Chem.,1979,v.25,P.1774-1779.

65. Harris G. and Olsen I. Cell division and deoxyribonucleic acid (ША) synthesis in cultures of stimulated lymphocytes.-Immunology,1976,v.31,p.195-204.

66. Hasselbacher P. and LeRoy E.C. Serum ША binding activity in healthy subjects and in rheumatic disease.-Arthritis Rheum.,1974,v.17,p.6^-71.

67. Hirschhorn R.,Grossman J.,Troll W. et al. The effect of epsilon amino caproic acid and other inhibitors of proteolysis upon the response of human peripheral blood lymphocytes to phytohemagglutinin.-J.Clin.Invest.,1971,v.50,p.1206-1217.

68. Hoch S.O.,Longmire R.L.,Hoch J.A. Unique DNA-binding protein in the serum of patients with various neoplasms.-Nature, 1975,v.255,P.560-562.

69. Hoessli D., Eisenstadt J.M. and Waksman B.H. Release of low molecular weight DNA by Mitogen activated lymphocytes.-Pederat.Proc.,1975,v.34,p.1011-1014.

70. Hung P.P., Mao J.C.H., Ling C.M. et al. Hybridization of Dane particle MA with the free plasma DM of hepatitis carriers.-Nature,1975,v.253,P»571-572.

71. Hurst R.O. and Becking G.C. Hydrolysis of calf thymus deoxyribonucleate by pancreatic deoxyribonuclease.-Canad.J.

72. Bi ochem.,1963,v.41,p.469-480.

73. Jachertz D. Gene activation during immune reaction.-Mol.Cell.Biochfcm.,1979,v.24,p.93-126.

74. Jachertz D., Anker P., Maurice P.A. et al. Information carried by the DNA released by antigen-stimulated lymphocytes.-Immunology, 1979a, v.37, p.753-763.

75. Kafatos F.C., Jones C.W., Efstradiadis A. Determination of nucleic acid sequence homologies and relative concentrations by a dot hybridization procedure.-Nucleic Acid Res., 1979,v.7,p.1541-1532.

76. Kamm R.C. and Smith A.G. Nucleic acid concentrations in normal human plasma.-Clin.Chem.,1972,v.18,p.519-522.

77. Kirby K.S. A new method for the isolation of ribonucleic acids from mammalian tissues.-Biochem.J.,1956,v.64,p.405-407.

78. Koffler D., Agnello V., Winchester R. et al. The occurrence of single-stranded DM in the serum of patients with SLE and other diseases.-J.Clin.Invest.,1973,v.62,p.198-204.

79. Ledoux L. Uptake of DNA by living cells.-ft?ogress Nucl.Acids.Res.,1965,v.4,p.231-267.

80. Leon S.A., Shapiro В., Sklaroff D.M. et al. Itee DNA in the serum of cancer patients and the effect of therapy.-Can-cer Res.,1977,v.37,p.646-650.

81. Leon S.A., Shapiro В., Servi P. et al. A comparison of DNA and DNA-binding protein levels in malignant disease.-Europ.J.Cancer,1981,v.17,P.533-338.

82. Lerner R.A., Meinke W, and Goldstein D. A membrane-associated DNA in the cytoplasm of diploid human lymphocytes.-Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1971,v.68,p.1212-1216.

83. Lippman M,, Morgan L.,Fein N. et al. Plasma and serum concentrations of DNA in pulmonary thromboembolism.-Amer.Rev. Respir.Dis.,1982,v.125,p.416-419.

84. Loeining U.E. Fractionation of high-molecular-weigth ribonucleic acid by polyacrylamide-gel electrophoresis.-Biochem.J.,1967,v.102,p.251-257.

85. Lomanto В., Agostoni A. and Vergani C. Characterization of serum proteins by thin-layer gel filtration combined with immunodiffusion.-J.Lab.Clin.Med.,1967,v.69,p.522-529.

86. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Parr A.R. et al. Protein measurement with the folin phenol reagent.-J.Biol.Chem.,1951,v.193,P.265-275.

87. Mandel P. and Metais P. Les acids nucleiques du plasma Sanguin chez I ^homme.-C.R.Hebd.Seances Acad.Sci.,1947,v.112,p.241-243.95 • Mandel P. and Metais P. Nucleic acids of human bloodplasma.-C.R.Seances Soc.Biol.Paris.,1948,v.142,p.241-243.52

88. Mandel J.D. and Nussbaum J.L. Incorporation of ^ P in to the phosphatides of myelin sheaths and intracellular membranes .-J.Neurochem.,1966,v.13,P.629-642.

89. Meinke W., Hall M.R.,Goldstein A. Membrane-associated DNA in the cytoplasm of diploid human lymphocytes.-Proc.Natl. Acad.Sci.USA,1971»v.68,p.12.

90. Meinke W., Hall M.R.,Goldstein D.A. et al. Physical properties of cytoplasmic membrane-associated DNA.-J.Mol.Biol.,1973,v.78,p.43-56.

91. Meinke W. and Goldstein D.A. Reassociation and dissociation of cytoplasmic membrane-associated DNA.-J.Mol.Biol.,1974,v.86,p.757-773.

92. Miller P.,Jgo-Kemenes T.,Lachun H.G. Characterization of restridion nuclease prepared chromatin by electron microscopy .-Chromosoma (Bene),1978,v.68,p.327-336.

93. Nakasaki H.,Mitomi T.,0goshi K. et al. Clinical significance of a serum DNA binding protein (164-DP) in evaluating malignant disesses.-Gann,1981,v.72,p.280-288.

94. NdJemer H. and Stadler E. Blood nucleotides in health and in leukemia.-Klin.V/ochschr. ,1949, v,27,p.278-280.

95. Olsen I.,Harris G. Uptake and release of DNA by lymphoid tissue and cells.-Immunology,1974,v.27,p.973-98?.

96. Ottolenghi E, and Hotchkiss R.D. Appearance of genetic transforming activity in pneumococcal cultures.-Nature,1960, v. 132,p.1257-1258.

97. Ottolenghi E.,Hotchkiss R.D. Release of genetic transforming agent from pneumococcal cultures during growth anddisintegration,-J.Exptl,Med.,1962,v.116,p.491-519,

98. Paffenholz V.,Wan Le H., Ho Yan-Kwan et al. Uptake of partially thiolated DNA by ascites tumor cells.-Cancer Res., 1976,v.36,p.1445-1452.

99. Parsons R.G. and Hoch J.A. Purification and identification of a human serum DNA-binding protein associated with malignant diseases.-Europ.J.Biochem.,1976,v.71,p.1-8.

100. Peacock A.C. and Dingman C.W. Resolution of multiple ribonucleic acid species by polyacrylami'de gel electrophoresis.-Biochemistry, 1967, v. 6, p. 1818-1827.

101. Pelc S.Rj? Turnover of DNA and function.-Nature,1968, v.219,P.162-163.

102. Petzoldt D.,Sturm V. and Priesleben H. Simultane Gra-be von penizillin und Probenezid bci der GonorrhBbehandlung, Unter Suchungen von Penizillinse rum-piegeln.-Hantarzt•,1980, Bd.31,H.8,S.444-446.

103. Pincus T.P.H.,Schur J.,Rose J.L, et al. Measurement of serum !DNA-binding activity in systemic lupus erythematosus.-N.Engl.J.Med.,1969,v,281,p.701-705.

104. Politis G.,Plassara M.G.,Thomon-Politi H. DNA present in multilayer rosette formed by lymphocytes stimulated with phyt oha ema gglutinin.-Na ture,1975,v,257,p,485-486.

105. Polgar P.R. and Kibrick S. Origin of small lymphocytes following blastogenesis induced by short-term RNA stimulation. -Nature,1970,v.225,p.857-858.

106. Rechenberger J. tfber deft nachweis von nukleinsd'urenin den Bluteiweibkorpern.-Naturwissenschoften,1957,v.44,p.494 495.

107. Reddi К.К. and Holland J.P. Elevated serum ribonuclease in patients with pancreatic cancer.-Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1976, v.73,P.2308-2310.

108. Robertson H.D. and Hunter T. Sensitive methods for the detection and characterization of double Helical ribonucleic acid.-Biol.Chem.,1975,v.250,p.418-425.

109. Rochnis P.G.,Palefsky H.,Becker M. et al. Native DNA binding in rheumatic arthritis.-Ann.Rheum.Dis.,1974,v.33»P«357-360.

110. Rogers J.C.,Bold T.D.,Kornfeld S. et al. Excretion of deoxyribonucleic acid by lymphocytes stimulated with phytohemag-glutinin or antigen.-Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1972,v.69,p.1685-1689

111. Rogers J.C, Identification of an intracellular precursor to DNA excreted by human lymphocytes.-Proc,Natl.Acad.Sci.USA, 1976,v.73,P.3211-3215.

112. Rogers J.C. Characterization fof DNA^excreted from phy-tohemagglutinin-stimulated lymphocytes.-J.Exp.Med.,1976,v.143, p.1249-1264.

113. Rosenberg B. Possible mechanisms for the antitumor activity of platinum coordination complexes.-Cancer Chemotherapy Rept.,1975,v.59,P.589-598.

114. Rossi R. and Yiola-Magni M.P. Changes in endonuclease activity and in chromatin structure of rat hepatocytes during fetal and neonatal life.-Cell differentiation,1982,v.11,p.91-98.

115. Sarma D.S.R.,Rutman J. Synthesis and fragmentation of DNA in phyt©hemagglutinin stimulated human circulating lymphocytes. -Pederat. Proc. ,1972, v. 31, p. 607

116. Scherrer K.,Darnell J.E. Sedimentation characteristics of rapidly labelled RNA from Hela cells.-Biochem.Biophys.Res. Commun. ,1962, v.7,p.486-490.

117. Schleich H.G. and Wieet W. Increasing human serum ribo-nuclease activity is a concomitant phenomenon of ovarian carcinoma.-J.Cancer Res.Clin.Oncol.,1980,v,97,P.307-J14

118. Schwab J.H. Suppression of the Immune respouse by microorganisms. -Bacteriological Reviews,1975,v.39,P«121-143.

119. Shapiro В., Chakrabarty M.D.M.,Cohn M.D. et al. Determination of circulating DM levels in patients witn Ьедадп oz malignant Gastro intestinal disease.-Cancer,1983,v.51,p.2116-2120.

120. Shutach J.G., Baxt J, and Nasni£-wski J.J. A study of the RNA levels of normal blood serum.-J.Am.Osteopath.Assoc., 1968, v.67,p.1051 1053.

121. Sipes J.N., Suratt P.M.,Teates C.D. et al. Aprospecti-ve study of plasma DNA in the diagnosis of pulmonary embolism.-Am.Rev.Res.,Pir.Dis.,1978,v.118,p.475-478.

122. Southern Е.Ы. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis.-J.Mol.Biol., 1975,v.98,p.503-517.

123. Steinman C.R., Ackad A. Appearance of circulating

124. DNA during hemodialysis.-Amer.J.Med.,1977,v.62,p.693-697.

125. Stewart С.С., Cramer С.P. and Steward P.G. The response of human peripheral blood lymphocytes to phytohernagglutini: determination of cell numbers.-Cell Immunol.,1973,v.16,p.237

126. Stroun M. and Anker P. Bacterial nucleic acid synthesis in plants following bacterial contact.-Mol.Gen,Genet.,1971, v.113,P.92-98.

127. Tan E.M., Schur P.H., Carr R.I. et al. Deoxyribonucleic acid (DNA) and antibodies to DNA in the serum of patients with systemic lupus erythematosus.-J.Clin.Invest.,1966,v.45,p.1732-1740.

128. Taussing M.J. T cell factor which can replace T cells in vivo.-Nature,1974,v.248,p.234-236.

129. Touietti G., Oldstone M.B.A., Dixon P.J. The effectof induced chronic viral infections on the immunologic deseases of New Zealand mice.-J.Exptl.Med.,1970,v.132,p.89-109.

130. Yoshida Т.О. Recent advances in human tumor virology and immunology .-Eds.w.Nakahara.K.Nishioka K.T.Hirayaina and

131. Y.Ito.Baltimore Univ.Park Press,1971,p.443-460.