Исследование на клеточных культурах молекулярных механизмов антипролиферативного и цитотоксического действия витамина К3 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Коваленко, Дмитрий Владимирович

• Коваленко, Дмитрий Владимирович
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Коваленко, Дмитрий Владимирович

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Молекулярные механизмы апоптоза - общая характеристика

1.1. Морфологические и биохимические

признаки апоптоза

1.2. Каспазы - эффекторные молекулы апоптоза

2. Система Раз-рецептор / Рав-лиганд в контроле апоптоза

2.1. Структурно-функциональная характеристика РаБ-рецептора и Раэ-лиганда

2.2. Роль РаБ-системы в контроле программированной

клеточной гибели в естественных условиях

2.3. Роль РаБ-системы в контроле искусственно

вызываемого апоптоза

2.4. Роль РаБ-системы в апоптозе, вызываемом действием противоопухолевых химиопрепаратов

3. Витамины группы К как противоопухолевые химиопрепараты

3.1. Химическая структура и физиологическая

роль витаминов К

3.2. Противоопухолевая активность витаминов К

и струтурно близких к ним соединений

3.3. Молекулярные механизмы цитотоксичности

витаминов К

Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Реагенты

2. Аденовирусные векторы и вирусная трансдукция

3. Клеточные культуры

4. Обнаруждение разрывов в клеточном хроматине и анализ фрагментации ДНК

5. Измерение клеточной пролиферации и

анализ синтеза геномной ДНК

6. Анализ экспрессии РНК с помощью Нозерн-блоттинга

7. Детекция апоптоза

8. Иммуноблоттинг. 65 Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Исследование влияния ВКЗ на клеточную

пролиферацию и синтез ДНК

2. Обнаружение повреждений в клеточном хроматине и

анализ фрагментации геномной ДНК при действии ВКЗ

3. Исследование влияния восстановленной формы глютатиона и азидотимидина на антипролиферативное

действие ВКЗ

4. Селекция клеточных клонов линии Дигка^ устойчивых

к цитотоксическому действию Баз-лиганда

5. Анализ развития апоптоза под влиянием ВКЗ

в исходной клеточной популяции и полученных клонах

6. Определение активации каспазы-3 при действии ВКЗ

7. Анализ уровня экспрессии Баз-рецептора и

секреции Баз-лиганда при действии ВКЗ на клетки 1игка1;

8. Исследование развития апоптоза, индуцированного ВКЗ, в спленоцитах линий мышей,

дефектных по функционированию Гав-системы

9. Влияние растворимой формы Баз-рецептора на апоптоз, вызываемый ВКЗ в спленоцитах мышей линии С57ВЬ/6

10. Определение зависимости жизнеспособности клеток

при действии БаБ-лиганда или ВКЗ от активности ЫБ-кВ

Глава IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВКЗ - витамин КЗ

АЗТ - 3'-азидо-З'-дезокситимидин

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование на клеточных культурах молекулярных механизмов антипролиферативного и цитотоксического действия витамина К3»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Изучение молекулярных механизмов противоопухолевого действия химиотерапевтических препаратов является актуальной задачей современной молекулярной биологии. В последнее время возросший интерес к этой проблеме связан прежде всего с открытием и разработкой механизмов, лежащих в основе такого явления как программированное самоубийство клетки или апоптоз [4]. Одной из центральных систем, контролирующих развитие апоптоза, является система Раз-рецептор/Раз-лиганд (Раз-система), принадлежащая к суперсемейству фактора некроза опухоли [30]. Недавние исследования показали, что Раз-система играет важную роль в индукции программированной клеточной гибели под действием гамма- и ультрафиолетового излучения, окислительного стресса, теплового шока, а также некоторых противоопухолевых химиотерапевтических препаратов [31-35]. Также было установлено, что феномен множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток можно связать с поломкой в функционировании данной системы [58].

Витамины группы К, являющиеся кофакторами в синтезе протромбина и других факторов системы свертования крови, обладают также выраженными цитотоксическими свойствами, что позволило исследовать их химиотерапевтический потенциал [62]. Витамин КЗ -

клинически апробированный как противоопухолевый препарат 5 обладает антипролиферативным и цитотоксическим действием на многие типы опухолевых клеток как in vitro так и in vivo [83]. Основой теории, объясняющей цитотоксические свойства витамина КЗ, является способность витамина быть индуктором окислительныго стресса [100]. В то же время, как недавно было установлено, окислительный стресс является одной из причин и характерным атрибутом апоптоза, опосредованного Fas-системой [55].

Поэтому представлялось целесообразным изучить роль Fas-системы в развитии апоптоза при действии витамина КЗ в комплексе с исследованием других молекулярных процессов, лежащих в основе антипролиферативной активности витамина.

Без все более глубокого понимания молекулярных механизмов противоопухолевой активности как известных так и новых химиопрепаратов невозможно улучшение терапии неоплазий за счет целенаправленного подбора наиболее эффективных комбинаций противоопухолевых препаратов, а также борьбы с феноменом множественной лекарственной устойчивости.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлось изучение на клеточных культурах молекулярных механизмов, ответственных за антипролиферативные свойства витамина КЗ, а также

выяснение роли системы Раз-рецептор/Раз-лиганд в индукции апоптоза

при действии витамина КЗ.

В ходе работы предстояло решить следующие задачи:

1. Исследовать влияние витамина КЗ на пролиферацию клеток линии 1игка1 и синтез геномной ДНК в данной клеточной культуре.

2. Выявить повреждающий эффект действия витамина КЗ на геномную ДНК клеток 1игка1

3. Установить характер влияния комбинаций витамина КЗ с восстановленной формой глютатиона или азидотимидином на клеточную пролиферацию.

4. На клеточной линии 1игка1 показать способность витамина приводить к развитию апоптоза.

5. Путем культивирования исходной клеточной линии Ритка! в присутствии Баз-лиганда получить клеточные клоны, устойчивые к его цитотоксическому действию.

6. Определить уровень апоптоза, возникающего под действием витамина КЗ в ряде клеточных культур (полученные клоны клеточной линии 1игка1:, первичные культуры спленоцитов двух линий мышей с функциональными нарушениями в Раз-системе), и сравнить его с уровнем апоптоза в контрольных культурах (исходная линия 1игка1 и спленоциты мышей дикого типа).

7. Исследовать влияние витамина на уровень экспрессии мРНК Баз-рецептора и секрецию Баз-лиганда.

8. Изучить способность растворимой формы Баз-рецептора ингибировать цитотоксичность витамина КЗ.

9. Определить зависимость снижения жизнеспособности клеток при действии Баз-лиганда или витамина КЗ от активности транскрипционного фактора ЫБ-кВ.

Научная новизна и практическая ценность работы. В данной работе впервые исследовано влияние витамина КЗ на пролиферацию и жизнеспособность клеток линии 1игка1:. Показана способность витамина КЗ снижать рост популяции клеток данной клеточной линии, что, в частности, связано с установленным фактом ингибирования синтеза геномной ДНК.

В экспериментах с восстановленной формой глютатиона подтверждена связь антипролиферативного действия витамина с его способностью быть индуктором окислительного стресса. Показано образование разрывов в геномной ДНК под влиянием витамина КЗ, что также можно связать с развитием окислительного стресса при действии витамина.

Впервые исследованная в данной работе комбинация витамина КЗ и азидотимидина имела синергический ингибирующий эффект на пролиферацию клеток ]игка1, что возможно послужит основой для

дальнейшего изучения эффективности данной комбинации препаратов в противоопухолевой терапии.

В работе показана способность витамина КЗ вызывать апоптоз в клеточной культуре линии 1игка^ что было подтверждено как на морфологическом, так и на биохимическом уровне. При этом впервые установлена роль системы Раз-рецептор/Таз-лиганд в индукции апоптоза под действием витамина КЗ: на трех клеточных культурах показано, что устойчивость клеток к индуцированному Баз-лигандом апоптозу коррелирует с устойчивостью их к цитотоксическому действию витамина КЗ; выявлено, что витамин вызывает усиление экспрессии мРНК гена Баз-рецептора и высвобождение Баз-лиганда из клеток в культуральную среду; установлено, что конкурентное ингибирование взаимодействия Баз-лиганда с Баз-рецептором с помощью растворимой формы Раз-рецептора приводит к снижению цитотоксического действия витамина КЗ.

Таким образом, данная работа, направленная на дальнейшее понимание молекулярных механизмов противоопухолевого действия витамина КЗ как химиотерапевтического препарата, представляет не только научный, но в перспективе и практический интерес, связанный с дальнейшим использованием витамина КЗ в медицинской практике.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Коваленко, Дмитрий Владимирович

выводы

1. Исследовано влияние витамина КЗ на пролиферацию клеточной линии 1игка1. Показано, что антипролиферативный эффект связан, в частности, с ингибированием синтеза ДНК.

2. Установлено, что обработка клеток 1игка1 витамином КЗ ведет к образованию разрывов в геномной ДНК.

3. Обнаружено, что глютатион ослабляет, а азидотимидин усиливает антипролиферативное действие витамина КЗ.

4. Показано, что цитотоксическое действие витамина КЗ на клетки 1игкаг связано с индукцией апоптоза, что подтверждено установлением факта активации каспазы-3 и фрагментацией геномной ДНК.

5. Получены клоны клеточной линии Дитка^ устойчивые к цитотоксическому действию Баз-лиганда.

6. На трех клеточных культурах (полученных клонах клеточной линии 1игка1:, спленоцитах мышей линий С57ВЬ/6^М и С57ВЬ/6-1рг) показано, что устойчивость клеток к действию Баз-лиганда коррелирует с устойчивостью к цитотоксическому действию витамина КЗ.

7. Установлено, что обработка клеток витамином КЗ вызывает усиление экспрессии мРНК гена Баз-рецептора и высвобождение в ростовую среду Баз-лиганда.

8. Показано, что специфическое ингибирование взаимодействия РаБ-лиганда с РаБ-рецептором приводит к снижению цитотоксического действия витамина КЗ.

9. Показано снижение жизнеспособности клеток при действии как РаБ-лиганда, так и витамина КЗ в условиях ингибирования активности транскрипционного фактора ОТ-кВ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Коваленко, Дмитрий Владимирович, 1999 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Kerr J.F.R., Wyllie А.Н., Currie A.R. Apoptosis: a basic biologic phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. // Br. J. Cancer, I972, v. 26, pp. 239-257.

2. Steller H. Mechanisms and genes of cellular suicide. // Science, 1995, v. 267, pp. 1445-1449.

3. Rudin C.M., Thompson C.B. Apoptosis and disease: regulation and clinical relevance of programmed cell death. // Annu. Rev. Med., 1997, v. 48, pp. 267281.

4. Vaux D.L., Strasser A. The molecular biology of apoptosis. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, v. 93, pp. 2239-2244.

5. Salvesen G.S., Ditix V.M. Caspases: intracellular signaling by proteolysis. // Cell, 1997, v. 91, pp. 443-446.

6. Hetts S.W. To die or not to die. // JAMA, 1998, v. 279, pp. 300-307.

7. Miagkov A.V., Kovalenko D.V., Brown C.E., Didsbury J.R., Cogswell J.P., Stimpson S.A., Baldwin A.S., Makarov S.S. NF-kB activation provides the potential link between inflammation and hyperplasia in the arthritic joint. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998, v. 95, pp.13859-13864.

8. Vaishnaw A.K., McNally J.D., Elkon K.B. Apoptosis in the rheumatic diseases. //Arthritis and Rheumatism, 1997, v.40, pp. 1917-1927.

9. Vaux D.L., Haecker G., Strasser A. An evolutionary perspective on apoptosis. // Cell, 1994, v.76, pp. 777-779.

1 O.Ellis R.E., Yuan H., Horvitz H.R. Mechanisms and functions of cell death. // Ann. Rev. Cell Dev. Biol., 1991, v.7, pp. 663-698.

11.Yuang J.Y., Horvitz R.H. Genetic mosaic analysis of ced-3 and ced-4, two genes that control programmed cell death in the nematode C elegans. // Dev. Biol., 1990, v.138, pp.33-41.

12.Hengartner M.O., Ellis R.E., Horvitz R.H. Caenorhabditis elegans gene ced-9 protects cells from programmed cell death. // Nature, 1992, v.356, pp. 494499.

13.Enari M., Hase A., Nagata S. Apoptosis by a cytosolic extract from Fas-activated cells. // EMBO J., 1995, v. 14, 5201-5208.

14.Enari M., Talanian R.V., Wong W.W., Nagata S. Sequential activation of ICE-like and CPP32-like proteases during Fas-mediated apoptosis. // Nature, 1996, v.380, pp.723-726.

15.Li P., Allen H., Banerjee S., Franklin S., Herzog L., Johnston C., McDowell J., Paskind M., Rodman L., Salfeld J. Mice deficient in IL-lb-converting enzyme are defective in production of mature IL-lb and resistant to endotoxic shock. // Cell, 1995, v.80, pp. 401-411.

lö.Kuida K, Zheng T.S., Na S.Q., Kuan C.Y., Yang D., Karasuyama H., Rakic P., Flavell R.A. Decreased apoptosis in the brain and premature lethality in CPP32-deficient mice. //Nature, 1996, v.384, pp. 368-372.

17-Zou H., Henzel W.J., Liu X., Lutschg A., Wang X. Apaf-1, a human protein homologous to C elegans ced-4, participates in cytochrome c-dependent activation of caspase-3. // Cell, 1997, v. 90, pp. 405-413.

18.Hengartner M.O., Horvitz H.R. C. elegans cell survival gene ced-9 encodes a functional homolog of the mammalian protooncogene bcl-2. // Cell, 1994, v. 76, pp. 665-676.

19.Hockenbery D.M., Oltvai Z.N., Yin X.M., Milliman C.L., Korsmeyer S.J. Bcl-2 functions in an antioxidant pathway to prevent apoptosis. // Cell, 1993, v. 75, pp. 241-251.

20.Yang E., Korsmeyer S.J. Molecular thanatopsis: a discourse on the Bcl2 family and cell death. // Blood, 1996, v. 88, pp. 386-401.

21.Motoyama N., Wang F., Roth K.A., Sawa H., Nakayama K., Negeshi I., Senju S., Zhang Q., Fujii S., Loh D.Y. Massive cell death of immature hematopoietic cells and neurons in Bcl-x-deficient mice. // Science, 1995, v. 267, pp. 1506-1510.

22.Veis D.J., Sorenson C.M., Shutter J.R., Korsmeyer S.J. Bcl-2-deficient mice demonstrate fulminant lymphoid apoptosis, polycystic kidneys and hypopigmented hair. // Cell, 1993, v. 75, pp. 229-240.

23.Knudson C.M., Tung K.S., Tourtellotte W.G., Brown G.A., Korsmeyer S.J. Bax-deficient mice with lymphoid hyperplasia and male germ cell death. // Science, 1995, v. 270, pp. 96-99.

24.Muchmore S.W., Sattlet M., Liang H., Meadows R.P., Harlan J.E., Yoon H.S., Nettesheim D., Chang B.S., Thompson C.B., Wong S.L., Ng S.L., Fesik S.W. X-ray and NMR structure of human Bcl-xL, an inhibitor of programmed cell death. //Nature, 1996, v. 381, pp. 335-341.

25.Zamzami N., Susin S.A., Marchetti P., Hirsch T., Gomez-Monterrey I., Castedo M., Kroemer G. Mitochondrial control of nuclear apoptosis. // J. Exp. Med., 1996, v. 183, pp. 1533-1544.

26.Krippner A., Matsuno-Yagi A., Gottlieb R., Babior B. Loss of function of cytochrome c in Jurkat cells undergoin Fas-mediated apoptosis. // J. Biol. Chem., 1996, v. 271, pp. 21629-21636.

27.Ray C.A., Black R.A., Kronheim S.R. Viral inhibition of inflammation: cowpox virus encodes an inhibitor of the interleukin-lß converting enzyme. // Cell, 1992, v. 69, pp. 597-604.

28.Clem R.J., Hardwick J.M., Miller L.K. Anti-apoptotic genes of baculoviruses. // Cell Death Differentiation, 1996, v. 3, pp. 9-16.

29.Nagata S. Apoptosis by death factor. // Cell, 1997, v. 88, pp. 355-365.

30.Nagata S., Golstein P. The Fas death factor. // Science, 1995, v. 267, pp. 1449-1456.

31.Reap E., Roof K., Maynor K., Borrero M., Booker J., Cohen P. Radiation and stress-induced apoptosis: a role for Fas/Fas ligand interaction. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, v. 94, pp. 5750-5755.

32.Rehemtulla A., Hamilton C.A., Chinnaiyan A.M., Dixit V. Ultraviolet radiation-induced apoptosis is mediated by activation of CD-95 (Fas/Apo-1). // J. Biol. Chem., 1997, v. 272, pp. 25783-25786.

33.Hug H., Strand S., Grambihler A., Galle J., Hack V., Stremmel W., Krammer P.H., Galle P.R. Reactive oxygen intermediates are involved in the induction of CD95 ligand mRNA expression by cytostatic drugs in hepatoma cells. // J. Biol. Chem., 1997, v. 272, pp. 28191-28193.

34.Friesen C., Herr I., Krammer P.H., Debatin K.M. Involvement of the CD95 (Apo-l/Fas) receptor/ligand system in drug-induced apoptosis in leukemia cells. //Nat. Med., 1996, v. 2, pp. 574-577.

35.Hueber A.O., Zornig M., Lyon D., Suda T., Nagata S., Evan G. Requirement for the CD95 receptor-ligand pathway in c-myc-induced apoptosis. // Science, 1997, v. 278, pp. 1305-1309.

36.Cohen P.L., Eisenberg R.A. Lpr and gld: single gene models of systemic autoimmunity and lymphoproliferative disease. // Annu. Rev. Immunol., 1991, v. 9, pp. 243-269.

37.Tanaka M., Suda T., Haze K., Nakamura N., Sato K., Kimura F. Fas ligand in human serum. // Nat. Med., 1996, v.2, pp. 317-322.

38.Trauth B.C., Klas C., Peters A.MJ., Matzuku S., Moller P., Falk W., Debatin K.M., Krammer P.H. Monoclonal antibody-mediated tumor regression by induction of apoptosis. // Science, 1989, v. 245, pp. 301-305.

39.Kishkel F.C., Hellbardt S., Behrmann I., Germer M., Pawlita M., Krammer P.H., Peter M.E. Cytotoxicity-dependent APO-1 (Fas/CD95)-associated proteins from a death-inducing signaling complex (DISC) with the receptor. // EMBO J., 1995, v. 14, pp. 5579-5588.

40.Boldin M.P., Varfolomeev E.E., Pancer Z., Mett I.L., Camonis J.H., Wallach D. A novel protein that interacts with the death domain of Fas/Apol contains a sequence motif related to the death domain. // J. Biol. Chem., 1995, v. 270, pp. 7795-7798.

41.Boldin M.P., Goncharov T.M., Goltsev Y.V., Wallach D. Involement of MACH, a novel MORTl/FADD-interacting protease, in Fas/Apol- and TNF receptor-induced cell death. // Cell, 1996, v. 85, pp. 803-815.

42.Itoh N., Yonehara S., Ishii A., Yonehara M., Mizushima S., Sameshima M., Hase A., Seto Y., Nagata S. The polypeptide encoded by the cDNA for human cell surface antigen Fas can mediate apoptosis. // Cell, 1991, v. 66, pp. 233243.

43.Schulze-Osthoff K., Walczak H., Droge W., Krammer P.H. Cell nucleus and DNA fragmentation are not required for apoptosis. // J. Cell Biol., 1994, v. 127, pp. 15-20.

44.0gasawara J., Watanabe-Fukunaga R., Adachi M., Matsuzawa A., Kasugai T., Kitamura Y., Itoh N., Suda T., Nagata S. Lethal effect of the anti-Fas antibody in mice. // Nature, 1993, v. 364, pp. 806-809.

45.Adachi M., Suematsu S., Kondo T., Ogasawara J., Tanaka T., Yoshida N., Nagata S. Targeted mutation in the Fas gene causes hyperplasia in the peripheral lymphoid organs and liver. //Nat. Gen., 1995, v. 11, pp. 294-300.

46.Fisher G.H., Rosenberg F.J., Straus S.E., Dale J.K., Middelton L.A., Lin A.Y., Strober W., Lenardo M.J., Puck J.M. Dominant interfering Fas gene mutations impair apoptosis in a human autoimmune lymphoproliferative syndrome. // Cell, 1995, v. 81, pp. 935-946.

47.Rieux-laucat F., Le Deist F., Hivroz C., Roberts I.A., Debatin K.M., Fisher A., Villarty J.P. Mutations in Fas associated with human lymphoproliferative syndrome and autoimmunity. // Science, 1995, v. 268, pp. 1347-1349.

48.Darmon A.J., Nicholson D.W., Bleackley R.C. Activation of the apoptotic protease CPP32 by cytotoxic T-cell-derived granzyme B. // Nature, 1995, v. 377, pp. 446-448.

49.Braun M.Y., Lowin B., French L., Acha-Orbea H., Tschopp J. Cytotoxic T cells deficient in both functional Fas ligand and perforin show residual cytolytic activity yet lose their capacity to induce lethal acute graft-versys-host disease. // J. Exp. Med., 1996, v. 183, pp. 657-661.

50.Bellgrau D., Gold D., Selawary H., Moore J., Franzusoff A., Duke R.C. A role for CD95 ligand in preventing graft rejection. // Nature, 1995, v. 377, pp. 630-632.

51.Griffith T.S., Brunner T., Fletcher S.M., Green D.R., Ferguson T.A. Fas ligand-induced apoptosis as a mechanism of immune privilege. // Science, 1995, v. 270, pp. 1189-1192.

52.Muller M., Strand S., Hug H., Heinemann E.M., Walczak H., Hoftnann W.J., Stremmel W., Krammer P.H., Galle P.R. Drug-induced apoptosis in hepatoma cells is mediated by the CD95(APO-l/Fas) receptor/ligand system and involves activation of wild-type p53. // J. Clin. Invest., 1997, v. 99, pp. 403413.

53.Kasahara B.Y., Iwai K., Yachie A., Ohta K., Konno A., Seki H., Miyawaki T., Taniguchi N. Involvement of reactive oxygen intermediates in spontaneous and CD95(Fas/APO-l)-mediated apoptosis of neutrophils. // Blood, 1997, v. 89, pp. 1748-1753.

54.Um H.D., Orenstein J.M., Wahl S.M. Fas mediates apoptosis in human monocytes by a reactive oxygen intermediate dependent pathway. // J. Immunol., 1996, v. 156, pp. 3469-3477.

55.Kohno T., Yamada Y., Hata T., Mori H., Yamamura M., Tomonaga M., Urata Y., Goto S., Kondo T. Relation of oxidative stress and glutathione synthesis to

CD95(Fas/APO-l)-mediated apoptosis of adult T cell leukemia cells. // J. Immunol., 1996, v. 156, pp. 4722-4728.

56.Chiba T., Takahashi S., Sato N., Ishii S., Kikuchi K. Fas-mediated apoptosis is modulated by intracellular glutathione in human T cells. // Eur. J. Immunol., 1996, v. 26, pp. 1164-1169.

57.Dobbelsteen D.J., Nobel C.S., Schlegel J., Cotgreave I.A., Orrenius S., Slater A.F. Rapid and spesific efflux of reduced glutathione during apoptosis induced by anti-Fas/APO-1 antibody. // J. Biol. Chem., 1996, v. 271, pp. 15420-15427.

58.Landowski T.H., Gleason-Guzman M.C., Dalton W.S. Selection for drug resistance results in resistance to Fas-mediated apoptosis. // Blood, 1997, v. 89, pp. 1854-1861.

59.Villunger A., Egle A., Kos M., Hartmann B.L., Geley S., Kofler R., Greil R. Drug-induced apoptosis is associated with enhanced Fas(Apo-l/CD95) ligand expression but occurs independently of Fas(Apo-l/CD95) signaling in human T-acute lymphatic leukemia cells. // Cancer Res., 1997, v. 57, pp. 3331-3334.

60.McGahon A.J., Pereira A.P., Daly L., Cotter T.G. Chemotherapeutic drug-induced apoptosis in human leukaemic cells is independent of the Fas(APO-1/CD95) receptor/ligand system. // Br. J. Haematol., 1998, v. 101, pp. 539547.

61.Dam H. The antihemorrhagic effects of vitamin K in the chick. // Biochem. J., 1935, v. 29, pp. 1273-1275.

62.Chlebowski R.T., Akman S.A., Block J.B. Vitamin К in the treatment of cancer. // Cancer Treat. Reviews, 1985, v. 12, pp. 49-63.

63.Машковский M.Д. Лекарственные средства. // Москва, "Медицина", 1993, 4.2, стр. 38.

64.Dendy P.P. Further studies on the uptake of Synkavite and a radioactive analog into tumor cells in tissue culture. // Br. J. Cancer, 1970, v. 24, pp. 817825.

65.Buchal S.D., Bell R.G. Vitamin К dependent carboxylation in spleen and kidney. // Vitamin К Metabolism and Vitamin К Dependent Protein. University Park Press, Baltimore, 1980, pp. 299-302.

66.Young R.C., Ozols R.F., Myers C.E. The anthracycline antibiotic drug. // N. Engl. J. Med., 1981, v. 305, pp. 139-153.

67.Mitchell J.S. Investigation of tritiated menadiol sodium diphosphate (T-MNDP) as a radioactive drug. // Br. J. Cancer, 1974, v. 229, pp. 373-388.

68.Rao K., McBride, Oleson J.J. Recognition and evaluation of lapachol as an antitumor agent. // Cancer Res., 1968, v. 28, pp. 1952-1954.

69.Block J.B., Serpick A.A., Miller W., Weirnik P.W. Early clinical studies with lapachol (NSC:11905). // Cancer Chemother. Rep., 1974, v. 4, pp. 27-28.

70.Block J.B., Chlebowski R.T., Dietrich M.F. Potential for lapachol clinical trials reassessment with adjuvant quinone therapy. // Med. Ped. Oncol., 1983, v. 11, pp. 492A-493A.

71 .Brossman H.B., McMinn M. Synthesis of macromolecules by Hela cells in the presence of vitamin K and warfarin. // Chem. Biol. Interactions, 1971, v. 3, pp. 223-232.

72.Kummer D., Kraml F. Studies on thymidine-triphosphate synthesis in malignant tumors. // Radiology Krebsforch. Klin. Onkol., 1971, v. 99, pp. 409415.

73.Chang J., Hall T. In vitro effects of sodium warfarin on DNA and RNA synthesis of mouse L1210 leukemia cells and Walker tumor cells. // Oncology, 1973, v. 28, pp. 232-237.

74.Ryan J.J., Ketcham A.S., Wexler H. Reduced incindence of spontaneous metastases with long-term coumarin therapy. // Ann. Surg., 1968, v. 168, pp. 163-168.

75.Ryan J.J., Ketcham A.S., Wexler H. Warfarin treatment of mice bearing tumors: Effect on spontaneous metastases. // Science, 1968, v. 62, pp. 14931494.

76.Zacharski L., Henderson W.G., Rickles F.R., Forman W., Cornell C., Forcier R., Edwards R., Heardley E. Effect of warfarin anticoagulation on survival in carcinoma of the lung, colon, head and neck, and prastate. // Cancer, 1984, v. 53, pp. 2046-2052.

77.Zacharski L., Henderson W.G., Rickles F.R., Forman W., Cornell C., Forcier R., Harrower H.W., Johnson R.D. Effect of warfarin on survival in small cell carcinoma of the lung. // J. Am. Med. Assoc., 1981, v. 245, pp. 831-835.

78.Chlebowski R.T., Block J.B., Dietrich M., Octay E., Barth N., Yanigahara R., Gota C., Ali I. Inhibition of human tumor growth and DNA biosynthetic activity by vitamin K and warfarin in vitro and clinical results. // Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 1983, v. 24, pp. 653.

79.Chlebowski R.T., Dietrich M., Akman S.A., Block J.B. Vitamin K3 inhibition of human tumor growth in the soft agar assay system. // Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 1984, v. 3, pp. 93.

80.Akman S.A., Takamura K., Chlebowski R.T., Kusu F., Block J.B. Analysis of menadione (vitamin K3) in plasma by differential pulse polarography. // Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 1984, v. 3, pp. 37.

81.Chlebowski R.T., Block J.B., Dietrich M. Use of quinones, vitamin K and warfarin to enhance antimetabolite effects in caner: laboratory and clinical observations. // Curr. Chemother. Immunother., 1981, v. 2, pp. 1532-1533.

82.Nishikawa Y., Carr B.I., Wang M., Kar S., Finn F., Dowd P., Zheng Z.B., Kerns J., Naganathan S. Growth inhibition of hepatoma cells induced by vitamin K and its analogs. // J. Biol. Chem., 1995, v. 270, pp. 28304-28307.

83.Wu F.Y., Chang N.T., Chen W.J., Juan C.C. Vitamin K3-induced cell cycle arrest and apoptotic cell death are accompanied by altered expression of c-fos

and c-myc in nasopharyngeal carcinoma cells. // Oncogene, 1993, v. 8, pp. 2237-2241.

84. Yaguchi M., Miyazawa K., Katagiri T., Nishimaki J., Kizaki M., Tohyama K., Toyama K. Vitamin K2 and its derivatives induce apoptosis in leukemia cells and enchance the effect of all-trans retinoic acid. // Leukemia, 1997, v. 11, pp. 779-783.

85.Jamison M., Gilloteaux, Venugopal M., Koch J.A., Sowick C., Shah R., Summers J.L. Flow cytometric and ultrastructural aspects of the synergistic antitumor activity of vitamin C-vitamin K3 combinations against human prostatic carcinoma cells. // Tissue Cell, 1996, v. 28, pp. 687-692.

86.Juan C.C., Wu F.Y. Vitamin K3 inhibits growth of human hepatoma HepG2 cells by decreasing activities of both p34cdc2 kinase and phosphatase. // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1993, v. 190, pp. 907-913.

87.Rossi F., Zoppi G. Effect of menadione on the phagocytic activity of guinea pig polymorphonuclear leukocytes. // Experientia, 1966, v. 22, pp. 433-434.

88.Bellomo G., Jewell S.A., Orrenius S. The metabolism of menadione impairs the ability of rat liver mitochondria to take up and retain calcium. // J. Biol. Chem., 1982, v. 257, pp. 11558-11562.

89.Malaisse W.J., Sever A., Boschero A.C., Kawasu S., Davis G., Somers G. The stimulus-secretion coupling of glucose induced insulin release. Cationic

and secretory effects of menadione in the endocrine pancreas. // Eur. J. Biochem., 1978, v. 87, pp. 111-120.

90.Gallin J.I., Seligmann B.E., Cramer E.B., Schiffinan E., Fletcher M.P. Effects of vitamin K on human neutrophil function. // J. Immunol., 1982, v. 128, pp. 1399-1408.

91.Jewell S.A., Bellomo G., Thor H., Orrenius S., Smith M.T. Bleb formation in hepatocytes during drug metabolism is caused by disturbances in thiol and calcium ion homeostasis. // Science, 1982, v. 217, pp. 1257-1258.

92.Kameda T., Miyazawa K.T., Mori Y., Yuasa T., Shiokawa M., Nakamaru Y., Mano H., Hakeda Y., Kameda A., Kumegawa M. Vitamin K2 inhibits osteoclastic bone resorption by inducing osteoclast apoptosis. // Biochem. Biophys. Res. Commun., 1996, v. 220, pp. 515-519.

93.McConkey D.J., Hartzell P., Nicotera P., Wyllie A.H., Orrenius S. Stimulation of endogenous endonuclease activity in hepatocytes exposed to oxidative stress. // Toxicol Lett., 1988, v. 42, pp. 123-130.

94.Schulze-Osthoff K., Walczak H., Droge W., Krammer P.H. Cell nucleus and DNA fragmentation are not required for apoptosis. // J. Cell Biol., 1994, v. 127, pp. 15-20.

95.Gabai V.L., Seilanov A.S., Makarova Y.M., Mosin A.F. Oxidative stress, disturbance of energy balance, and death of ascites tumour cells under menadione (vitamin K3) action. // Biomed. Sci., 1990, v. 1, pp. 407-413.

96.Malorni W., Iosi F., Mirabelli F., Bellomo G. Cytoskeletion as a target in menadione-induced oxidative stress in cultured mammalian cells: alterations underlying surface bleb formation. // Chem. Biol. Interact., 1991, v. 80, pp. 217-236.

97.Malorni W., Iosi F., Santini M.T., Testa U. Menadione-induced oxidative stress leads to a rapid down-modulation of transferrin receptor recycling. // J. Cell Sci., 1993, v. 106, pp. 309-318.

98.Malorni W., Masella R., Santini M.T., Iosi F., Samoggia P., Cantafora A., Merrell D., Peterson S.W. Human erythrocyte insulin receptor processing is affected by the oxidizing agent menadione. // Exp. Cell Res., 1993, v. 206, pp. 195-203.

99.Ross D., Thor H., Threadgill M.D., Sandy M.S., Smith M.T., Moldeus P., Orrenius S. The role of oxidative processes in the cytotoxicity of substituted 1,4-naphtoquinones in isolated hepatocytes. // Archives Biochem. Biophys., 1986, v. 248, pp. 460-466.

100.Ngo E.O., Sun T.P., Chang J.Y., Wang C.C., Chi K.H., Cheng A.L., Nutter L.M. Menadion-induced DNA damage in a human tumor cell line. // Biochem. Pharmacol., 1991, v. 42, pp. 1961-1968.

101.Collins A.R., Dobson V.L., Dusinska M., Kennedy G., Stetina R. The comet assay: what can it really tell us? // Mutation Res., 1997, v. 375, pp. 183-193.

102.Gratzner H.G. Monoclonal antibody to 5-bromo- and 5-iododeoxyuridine: a new reagent for detection of DNA replication. // Science, 1982, v. 218, pp. 474-475.

103.Roberts R.A., Nebert D.W., Hickman J.A., Richburg J.H., Goldsworthy T.L. Perturbation of the mitosis/apoptosis balance: a fundamental mechanism in toxicology. // Fundamental Applied Toxicology, 1997, v. 38, pp. 107-115.

104.Su Y.Z., Duarte T.E., Weisenthal L.M. Selective enchancement by menadiol of in vitro drug activity in human lymphatic neoplasms. // Cancer Treat. Rep., 1987, v. 71, pp. 619-625.

105.Parekh H., Chavan S., Chitnis M. Modulation of thiol pools by vitamin K3 and its effect on survival of sensitive and resistant murine tumor cells. // Anticancer Drugs, 1991, v. 2, pp. 159-168.

106.Venugopal M., Jamison J.M., Gilloteaux J., Koch J.A., Summer M., Giammar D., Sowick C., Summers J.L. Synergistic antitumor activity of vitamin C and K3 on human urologic tumor cell lines. // Life Sciences, 1996, v. 59, pp. 1389-1400.

107.Zhen Y.S., Taniki T., Weber G. Azidothymidine and dipyridamole as biochemical response modifiers: synergism with methtrexate and 5-fluorouracil in human colon and pancreatic carcinoma cells. // Oncol. Res., 1992, v. 4, pp. 73-78.

108.Schreck R., Albermann K., Baeuerle P.A. Nuclear factor kappa B: an oxidative stress-responsive transcription factor of eukaryotic cells. // Free Radicals Res. Commun., 1992, v. 17, pp. 221-237. 109. Chen Q., Cederbaum A.I. Menadion cytotoxicity to HepG2 cells and protection by activation of nuclear factor-icB. // Mol. Phar., 1997, v. 52, pp. 648-657.