Исследование молекулярно-генетических причин аутосомно-рецессивного эритроцитоза в Чувашии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Вассерман, Наталья Наумовна

• Вассерман, Наталья Наумовна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Вассерман, Наталья Наумовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ.

ГЛАВА I. Картирование генов человека.

1. Принципы картирования.

1.1. Генетические маркеры и генетические карты.

1.2. Анализ сцепления.

1.3. Полиогеномный скрининг.

1.4. Тонкое генетическое картирование.

ГЛАВА И. Эритроцитоз.

2.1. Эритропоэз и гены, участвующие в его регуляции.

2.2. Характеристика эритроцитоза.

2.3. Наследственные формы эритроцитоза.

2.3.1. Гемоглобинопатии.

2.3.2. Недостаточность 2,3-ДФГ.

2.3.3. Polycythemia rubra vera.

2.3.4. ECYT1 (PFCP).

2.3.5. ECYT2.

2.3.6. ECYT3.

2.4. Семейный рецессивный эритроцитоз в Чувашии.

2.4.1. Клинические исследования.

2.4.2. Этногенез чувашей и эффект основателя.

2.5. Картирование и идентификация мутаций в гене VHL при аутосомно-рецессивном эритроцитозе.

2.5.1. Ген VHL.

2.5.2. Белок pVHL.

2.5.3. Функции pVHL.

2.5.3.1. HIF.

2.5.4. Синдром VHL.

2.5.5. Мутации в гене VHL приводят к аутосомно-рецессивному эритроцитозу.

2.5.5.1. Эффект основателя при мутации Arg200Trp.

MA ТЕ РИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Забор венозной крови.

2. Выделение геномной ДНК.

3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

4.Электрофорез в ПААГ.

5. SSCP-анализ.

6. Определение нуклеотидной последовательности ДНК.

7. Рестрикционный анализ.

8. Real-time PCR.

9. Анализ сцепления.

10. Анализ неравновесия по сцеплению.

11. Расчет возраста мутации.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Генетическая эпидемиологиямейной полицитемии благоприятным течением (наследственного эритроцитоза).

2. Геномный скрининг.

3. Мутация Arg200Trp в гене VHL.

3.1. Мутация Arg200Trp в гене VHL в семьях с больными АРЭ.

3.2. Молекулярно-генетические методы идентификации мутации Arg200Trp.

3.3. Популяционные исследования мутации Arg200Trp.

3.4. Неравновесие по сцеплению полиморфных маркеров, фланкирующих ген VHL, и АРЭ.

3.5. Возраст мутации.

4. Анализ рекомбинаций в локусе llq23 у больных АРЭ.

5. Исследование неравновесия по сцеплению маркеров на хромосоме llq23 и АРЭ.

6. Анализ генов-кандидатов в области локализации гена-моднфикатора.

7. Совместное наследование хромосом 3 и 11 у больных АРЭ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование молекулярно-генетических причин аутосомно-рецессивного эритроцитоза в Чувашии»

Актуальность темы. Картирование, идентификация и исследование генов, ответственных за возникновение наследственных заболеваний, являются одним из важных источников знаний о функционировании организма человека. Знание гена и его локализации, кроме того, делает возможным прямую и косвенную ДНК-диагностику болезни. Становится возможным проведение дифференциальной диагностики сходных клинических заболеваний, а также предсказание развития определенной патологии до появления клинических признаков, в том числе у плода, т.е. проведение дородовой диагностики. Также можно разработать адекватную терапию на основе знания этиологии заболевания, в том числе генотерапию. До настоящего времени нет ясного представления о регуляции процессов кроветворения, в частности, эритропоэза. Исследование генов, приводящих к наследственным эритроцитозам, может помочь понять ключевые этапы этого процесса.

Эритроцитозы характеризуются увеличенным количеством эритроцитов в единице объема крови. В литературе описано несколько клинически отличающихся форм эритроцитоза. Среди них выделяют ненаследственные формы и семейно-наследственные эритроцитозы, которые являются редкими заболеваниями. Они представляют собой гетерогенную по патогенезу группу заболеваний с различным типом наследования. Известны следующие причины семейно-наследственных эритроцитозов: нарушение функциональных свойств гемоглобина (образование мутантных форм гемоглобина с повышенным сродством к кислороду), метаболизма эритроцитов (снижение концентрации 2,3-дифосфоглицерата, увеличение концентрации АТФ), автономное повышение продукции эритропоэтина. В ряде случаев патогенез семейно-наследственых эритроцитозов остается невыясненным.

Среди семейно-наследственных эритроцитозов выделяют аутосомно-рецессивную доброкачественную полицитемию. Это редкое заболевание, характеризующееся эритроцитозом, нормальным количеством лейкоцитов и тромбоцитов, увеличенной продукцией эритропоэтина (OMIM 263400). Заболевание выявляется преимущественно в детском и юношеском возрасте. В мировой литературе описано небольшое число случаев этого заболевания (Adamson et al., 1973; Whitcomb et al., 1980).

В северо-восточных районах Чувашии были обнаружены случаи эритроцитоза, носившие семейный характер. Клиника этих случаев не совпадала ни с одной из известных нозологических форм, для которых были известны мутации в генах, приводящие к заболеванию (Полякова, 1977). Но клиническая картина при данной форме заболевания напоминает клиническую картину семейной доброкачественной полицитемии (OMIM 263400). Эритроцитоз в чувашских семьях является эндемической формой описанных семейно-наследственных эритроцитозов. Его распространенность среди чувашей составляет 1:4450 человек.

Мутация, приводящая к развитию эритроцитоза у чувашей, выявлена в гене VHL, который является геном-супрессором опухолевого роста. При мутациях в нем у больных с синдромом VHL развиваются опухоли. Однако, ни у больных эритроцитозом (гомозиготных носителей мутации), ни у их родственников - гетерозиготных носителей опухоли не обнаружены. Возможно, у них присутствует изменение в другом гене, являющимся модификатором, которое не позволяет развиться опухолям. Идентификация этого гена может помочь в понимании процесса опухолеобразования, а также в разработке генотерапии ряда опухолей.

Целью данной работы являлось изучение молекулярно-генетической природы аутосомно-рецессивного эритроцитоза в Чувашии, картирование и исследование области локализации гена, ответственного за развитие заболевания.

При этом ставились следующие задачи:

1. Провести картирование локуса аутосомно-рецессивного эритроцитоза на выборке семей с больными из Чувашии.

2. Определить популяционную частоту мутации Arg200Trp в гене VHL, расположенном в локусе Зр25, среди чувашей и близких им народностей.

3. Разработать эффективную систему регистрации указанной мутации, пригодную для проведения популяционного скрининга.

4. Установить причину и время распространения мутации Arg200Trp в гене VHL среди чувашей.

5. Провести анализ независимости сегрегации картированных локусов в семьях с аутосомно-рецессивным эритроцитозом.

Научная новизна. Определены популяционные частоты мутации Arg200Trp в гене VHL, приводящей к развитию аутосомно-рецессивного эритроцитоза, среди чувашей и народов Волго-Уральского региона. Определен возраст этой мутации у чувашей. Установлена популяционная частота носительства мутации среди народов Волго-Уральского региона: чувашей, марийцев, удмуртов и башкир.

Показано сцепление локуса аутосомно-рецессивного эритроцитоза с хромосомой llq23. Показана зависимая сегрегация хромосомных локусов Зр25, несущего ген VHL, и 11 q23 в семьях со случаями заболевания. В районе llq23, вероятно, наличие модифицирующего фактора, ответственного за разное течение заболевания и отсутствие опухолей у носителей мутации.

Практическая значимость. В отягощенных семьях из Чувашии возможно проведение уточняющей, пресимптоматической диагностики, а также выявление гетерозиготного носительства в семьях чувашей, марийцев и удмуртов и на популяционном уровне. Разработана система быстрого скрининга носительства мутации Arg200Trp в гене VHL среди большого количества человек на основе real-time PCR. Результаты популяционных исследований распространенности мутации при эритроцитозе, возможно, внесут дополнения в понимание процесса этногенеза народов Волго-Уральского региона.

Положения, выносимые на защиту.

1. Существует генетическое сцепление аутосомно-рецессивного эритроцитоза в Чувашии с хромосомными локусами 1 lq23 и Зр25.

2. Популяционная частота мутации Arg200Trp в гене VHL в чувашской популяции составляет 1.84%, у марийцев - 0.87%, у удмуртов - 0.47%. Среди башкир и русских мутация Arg200Trp не выявлена.

3. Разработана система простой и быстрой идентификации мутации Arg200Trp в гене VHL на основе real-time PCR.

4. Время распространения мутации Arg200Trp в чувашской популяции составляет 1250±733 лет.

5. Показана зависимая сегрегация хромосомных локусов Зр25 и llq23 в семьях со случаями аутосомно-рецессивного эритроцитоза, что может указывать на наличие гена-модификатора в области 1 lq23.

Апробация работы.

По материалам исследования опубликовано 13 научных работ, включая 4 статьи и 1 главу в монографии. Материалы диссертации доложены на 29, 30, 32, 37 съездах Европейского общества генетики человека (Генуя, 1997; Лиссабон, 1998; Амстердам, 2000; Прага, 2005); конференции "Геном человека - 99"; съезде HGM (Шанхай, 2002); на V съезде Российского общества медицинских генетиков (Уфа, 2005) и на Всероссийской научно-практической конференции "Молекулярные методы диагностики моногенных заболеваний: возможности и перспективы" (Москва, 2006).

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ГЛАВА I. Картирование генов человека.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Вассерман, Наталья Наумовна

Заключение.

Полного представления о процессах, регулирующих эритропоэз, нет. Поэтому картирование и исследование генов, повреждение в которых приводит к нарушению какого-либо этапа в процессе образования и функционирования эритроцитов, может помочь более полному пониманию этого процесса. Одним из таких заболеваний, приводящим к увеличению продукции эритроцитов, является аутосомно-рецессивный эритроцитоз, встречающийся преимущественно среди населения Чувашии. Картирование и идентификация гена VHL, мутация в котором приводит к данному типу эритроцитоза, позволило больше узнать о пути регулирования эритропоэза при недостатке кислорода. Локализация гена, ответственного за возникновение аутосомно-рецессивного эритроцитоза, позволяет проводить уточняющую и пресимптоматическую диагностику в отягощенных семьях из Чувашии с помощью прямой ДНК-д иагностики.

При проведении анализа сцепленных с геном VHL полиморфных маркеров выявлено неравновесие по сцеплению, а также общий предковый гаплотип. На основе данных о неравновесии по сцеплению определено время начала распространения мутации в чувашской популяции. Оно относится к VIII веку, что согласуется с историческими данными о резком сокращении численности чувашей в этот период. Также мутация Arg200Trp выявлена у соседних с чувашами народов Волго-Уральского региона: марийцев и удмуртов. В семье из Республики Мари Эл с больным АРЭ выявлен общий гаплотип с гаплотипом у чувашей. Это предоставляет дополнительные данные об общности происхождения этих народов.

Обнаруженное сцепление АРЭ у больных из Чувашии с еще одной областью в геноме (I lq23) может говорить о наличии модифицирующего фактора, влияющего на тяжесть течения заболевания, а также на отсутствие опухолей у больных и их родственников - носителей мутации в гене VHL, несмотря на то, что мутации в этом гене, в том числе и Arg200Trp, приводят к развитию опухолей у их носителей при синдроме VHL, а также к образованию спорадических опухолей.

1. В выборке чувашских семей, отягощенных аутосомно-рецессивным эритроцитозом, обнаружено сцепление заболевания с локусами llq23 и Зр25. Для локуса Зр25 максимальный LOD=12.4 при 9=0 для маркера D3S1263. Локус, возможно содержащий модифицирующий фактор, картирован в области 4,8 сМ между маркерами D11S4111 и D11S1356, максимальный LOD=4,23 при 0=0,05 для маркера АР757/98.

2. Определена популяционная частота носительства мутации Arg200Trp в гене VHL среди чувашей. Аллельная частота мутации равна 1.84%, расчетная частота эритроцитоза - 1:3000 человек, что выше распространенности заболевания, определенной в ходе клинико-эпидемиологических исследований (1:4450 человек). Выявлен бессимптомный носитель двух мутантных аллелей. Полученные данные указывают на возможную неполную пенетрантность мутации Arg200Trp при эритроцитозе в Чувашии.

3. Разработана система молекулярно-генетических методов для простой и быстрой идентификации мутации Arg200Trp в гене VHL в целях диагностики заболевания, а также скрининговая тест-система на основе метода real-time PCR для выявления гетерозиготного носительства мутации.

4. Определены популяционные частоты мутации Arg200Trp среди соседних с чувашами народностей Волго-Уральского региона. Для марийцев аллельная частота составила 0.87%, расчетная частота заболевания - 1:13 150 человек, для удмуртов аллельная частота - 0.47%, расчетная частота заболевания - 1:44 600 человек. Среди башкир и русских мутация Arg200Trp не выявлена.

5. В группе больных аутосомно-рецессивным эритроцитозом из Чувашии выявлено неравновесие по сцеплению с полиморфными маркерами, тесно сцепленными с геном VHL. Эти данные подтверждают влияние эффекта основателя на накопление эритроцитоза в Чувашии. Время распространения мутации Arg200Trp среди чувашей составляет 1250±733 лет.

6. Показана зависимая сегрегация хромосомных локусов Зр25 и llq23 в семьях со случаями аутосомно-рецессивного эритроцитоза (%2=16.14 р<0.001 при сравнении наследования этих локусов у больных с их здоровыми сибсами и х=17.91 р<0.001 при сравнении с контрольной выборкой семей). В локусе llq23 среди чувашей вероятно наличие модифицирующего фактора, ответственного за неполную пенетрантность эритроцитоза и отсутствие опухолевых процессов у носителей мутации Arg200Trp.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Вассерман, Наталья Наумовна, 2007 год

1. Иванов В.П. "Чувашский этнос. Проблемы истории и этнографии." // Чебоксары.-1998-156с.

2. Иванов В.П., Николаев В.В., Дмитриев В.Д. "Чуваши. Этническая история и традиционная культура." // М.:ДИК.-2000-95с.

3. Лакин Г.Ф. "Биометрия." // Высшая школа-М-1980.

4. Ландер Э. "Картирование сложно наследуемых признаков человека." // В книге "Анализ генома. Методы," Под ред. К. Дэйвис.-Мир-М-1990-с.214-239.

5. Павлов А.Д. "Эритропоэтин: достижения и перспективы." // "Гематология и трансфузиология"-1997-т.42-№ 1 -с.25-29.

6. Полякова Л.А. Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук "Семейно-наследственный эритроцитоз (по материалам наблюдений в Чувашской АССР)." // Чебоксары-1977.

7. Румянцев А.Г., Морщакова Е.Ф., Павлов А.Д. "Эритропоэтин в диагностике, профилактике и лечении анемий" // М-2003.

8. Третьяков П.Н. "Вопрос о происхождении чувашского народа в свете археологических данных." // "Советская этнография"-1950-№3.

9. Фишер Д. "Эритропоэтин: механизм гипоксической регуляции." // "Гематология и трансфузиология"-1997-т.42-№1 -с. 19-22.

10. Adamson J.W., Stamatoyannopoulos G., Kontras S., Lascari A., Detter J. "Recessive familial erythrocytosis: aspects of marrow regulation in two families." // Blood.-1973-v.41-p.641-652.

11. Adamson J.W., Fialkow P.J., Murphy S., Prchal J.F., Steinmann L. "Polycythemia vera: stem-cell and probable clonal origin of the disease." // The new England journal of medicine.-1976-v.295-p.913-916.

12. D'Andrea A.D., Yoshimura A., Youssoufian H., Zon L.I., Koo J.W., Lodish H.F. "The cytoplasmic region of the erythropoietin receptor contains nonoverlapping positive and negative growth-regulatory domains." // Mol.Cell.Biol.-1991-v.l 1-p. 1980-1987.

13. Ang S.O., Chen H., Gordeuk V.R., Sergueeva A.I., Polyakova L.A., Miasnikova G.Y., Kralovics R., Stockton D.W., Prchal J.T. "Endemic polycythemia in Russia: mutation in the VHL gene." // Blood Cells, Molecules, and Diseases.-2002a-v.28-p.57-62.

14. Arcasoy M.O., Degar B.A., Harris K.W., Forget B.G. "Familial erythrocytosis associated with a short deletion in the erythropoietin receptor gene." // Blood.-1997-v.89-p.4628-4635.

15. Ascensao J.L., Bilgrami S., Zanjani E.D. "Erythropoietin. Biology and clinical applications." // Am.J.Pediatr.Hematol.Oncol.-1991-v.l3-p.376-387.

16. Barichard F., Joulin V., Henry I., Garel M.C., Valentin C., Rosa R., Cohen-Solal M., Junien C. "Chromosomal assignment of the human 2,3-bisphosphoglycerate mutase gene (BPGM) to region 7q34-7q22." // Hun.Genet.-1987-v.77-p.283-285.

17. Bengtsson B.O., Thomson G. "Measuring the strength of associations between HLA antigens and diseases." // Tissue Antigens-1981-v.l8-p.356-363.

18. Bento M.C., Chang K.-T., Guan Y., Liu E., Caldas G., Gatti R.A., Prchal J.T. "Congenital polycythemia with homozygous and heterozygous mutations of von Hippel-Lindau gene: five new Caucasian patients." // Haematologica.-2005-v.90-p. 128-129.

19. Bern N., McDonald J., Lacombe C., Goldwasser E. "Expression of the erythropoietin gene." // Mol.Cell.Biol.-1986-v.6-p.2571 -2575.

20. Botstein D., White R.L., Skolnick M., Davis R.W. "Construction of a genetic linkage map in man using restriction fragment length polymorphisms." // Am.J.Genet.-1980-v.32-p.314-331.

21. Budarf M., Huebner K., Emanuel В., Croce C.M., Copeland N.G., Jenkins N.A., D'Andrea A.D. "Assignment of the erythropoietin receptor (EPOR) gene to mouse chromosome 9 and human chromosome 19." // Genomics.-1990-v.8-p.575-578.

22. Collins A., Lonjou C., Morton N.E. "Genetic epidemiology of single-nucleotide polymorphisms." // Proc.Natl.Acad.Sci.US A.-1999-v.96-p. 15173-15177.

23. Cooper D.N., Smith B.A., Cooke H.J., Hiemann S., Schmidtke J. "An estimate of unique DNA sequence heterozygosity in the human genome." // Hum.Genet.-1985-v.69-p.201-205.

24. Cooper D.N., Schmidtke J. "Diagnosis of genetic disease using recombinant DNA." // Hum. Genet.-1986-v.71 -p. 1 -11.

25. Corn P.G., McDonald E.R., Herman J.G., El-Deiry W.S. "Tat-binding protein-1, a component of the 26S proteasome, contributing to the E3 ubiquitin ligase function of the von Hippel-Lindau protein."//Nature Genet.-2003-v.35-p.229-237.

26. Dai C.H., Krantz S.B., Zsebo K.M. "Human burst-forming units-erythroid need direct interaction with stem cell factor for further development." // Blood.-1991-v.78-p.2493-2497.

27. Ebert B.L., Bunn H.F. "Regulation of the erythropoietin gene." // Blood.- 1999-v.94-p. 1864-1877.

28. Economou E.P., Bergen A., Warren A.C., Antonarakis S.E. "The polydeoxyadenylate tract of Alu repetitive elements if polymorphic in the human genome." // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1990-v.87-p.2951-2954.

29. Fandrey J., Seydel F.P., Siegers C.P., Jelkmann W. "Role of cytochrome P450 in the control of the production of the erythropoietin." // Life.Sci.-1990-v.47-p.l27-134.

30. Fedele A.O., Whitelaw M.L., Peet D.J. "Regulation of gene expression by the hypoxia-inducible factors." // Molecular Interventions.-2002-v.2-p.229-243.

31. Fisher J.W. "Erythropoietin physiologic and pharmacologic aspects." // Proc.Soc.Exp.Biol.Med.-1997-V.216-p. 3 58-369.

32. Friedrich C.A. "Genotype-phenotype correlation in von Hippel-Lindau syndrome." // Hum.Mol.Genet.-2001 -v. 10-p.763-767.

33. Glasker S., Sohn T.-S., Okamoto H., Li J., Lonser R.R., Oldfield E.H., Vortmeyer A.O., Zhuang Z. "Second hit deletion size in von Hippel-Lindau disease." // Ann. Neurol. ,-2006-v.59-p. 105-110.

34. Glickman M.H., Ciechanover A. "The ubiquitin-proteasome proteolytic pathway: destruction for the sake of the construction." // Physiological Reviews.-2002-v.82-p.373-428.

35. Goldberg M.A., Dunning S.P., Bunn H.F. "Regulation of the erythropoietin gene evidence that the oxygen sensor is a heme protein."// Science.-1988-v.242-p. 1412-1415.

36. Gordeuk V.R., Stockton D.W., Prchal J.T. "Congenital polycythemias/erythrocytoses." // Haematologica.-2005-v.90-p. 109-116.

37. Gordeuk V.R., Prchal J.T. "Vascular complications in Chuvash polycythemia." // Seminars in thrombosis and hemostasis.-2006-v.32-p.289-294.

38. Groulx I., Lee S. "Oxygen-dependent ubiquitination and degradation of hypoxia-inducible factor requires nuclear-cytoplasmic trafficking of the von Hippel-Lindau tumor suppressor protein." // Mol. and Cell.Biol.-2002-v.22-p.5319-5336.

39. Hastbacka J., de la Chapelle A., Kaitila I., Sistonen P., Weaver A., Lander E. "Linkage disequilibrium mapping in isolated founder populations: diastrophic dysplasia in Finland." // Nat.Genet.-1992-v.2-p.204-211.

40. Hergovich A., Lisztwan J., Barry R., Ballschmieter P., Krek W. "Regulation of microtubule stability by the von Hippel-Lindau tumour suppressor protein pVHL." // Nature Cell Biol.- 2003-V.5-p.64-70.

41. Но V., Acquaviva A., Duh E., Bunn H.F. "Use of a marked erythropoietin gene for investigation of its cis-acting elements." // J.Biol.Chem.-1995-v.270-p. 10084-10090.

42. Hoffman M., Ohh M., Yang H., Klco J.M., Ivan M., Kaelin W.G. "von Hippel-Lindau protein mutations linked to type 2C VHL disease preserve the ability to downregulate HIF." // Hum.Mol.Genet.-2001 -v. 10-p. 1019-1027.

43. Holmes N.G. "Microsatellite markers and the analysis of genetic disease." // Br.Vet.J.-1994-v.l50-p.411-421.

44. Iliopoulos O., Ohh M., Kaelin W.G. "pVHL 19 is a biologically active product of the von Hippel-Lindau gene arising from internal translation initiation." // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1998-v.95-p.l 1661-11666.

45. Imagawa S., Izumi Т., Miura Y. "Positive and negative regulation of the erythropoietin gene." // J.Biol.Chem.-1994-v.269-p.9038-9044.

46. Iwai K., Yamanaka K., Kamura Т., Minato N., Conaway R.C., Conaway J.W., Klausner R.D., Pause A. "Identification of the von Hippel-Lindau tumor suppressor protein as part of an active E3 ubiquitin ligase complex" // PNAS.-1999-v.96-p. 12436-12441.

47. Juvonen E., Ikkala E., Fyhrquist F., Ruutu T. "Autosomal dominant erythrocytosis caused by increased sensitivity to erythropoietin." // Blood.-199l-v.78-p.3066-3069.

48. Kamura Т., Sato S., Iwai K., Czyzyk-Krzeska M., Conaway R.C., Conaway J.W. "Activation of HIF-la ubiquitination by a reconstituted von Hippel-Lindau (VHL) tumor suppressor complex." // PN AS ,-2000-v.97-p. 10430-1043 5.

49. Koury S.T., Bondurant M.C., Koury M.J. "Localization of erythropoietin synthesizing cells in murine kidneys by in situ hybridization." // Blood.-1988-v.71-p.524-527.

50. Koury M.J., Bondurant M.C. "Erythropoietin retards DNA breakdown and prevents programmed death in erythroid progenitor cells." // Science.-1990-v.248-p.378-381.

51. Koury M.J. "Progress in understanding erythropoiesis." // "rhErythropoietin in cancer supportive treatment.'-New York-Basel-Hong Kong-1996-p.l-12.

52. Kralovics R., Indrak K., Stopka Т., Berman B.W., Prchal J.F., Prchal J.T. "Two new EPO receptor mutations: truncated EPO receptors are most frequently associated with primary familial and congenital polycythemias." // Blood.-1997a-v.90-p.2057-2061.

53. Kralovics R., Sokol L., Broxson E.H., Prchal J.T. "The erythropoietin receptor gene is not linked with the polycythemia phenotype in a family with autosomal dominant primary polycythemia." // Proc.Assoc.Am.Physicians.-1997b-v.l09-p.580-585.

54. Kralovics R., Prchal J.T. "Congenital and inherited polycythemia." // Curr.Opin.Pediatr.-2000-v.l2-p.29-34,

55. Kralovics R., Passamonti F., Buser A.S., Teo S.S., Tiedt R., Passweg J.R., Tichelli A., Cazzola M., Skoda R.C. "A gain-of-function mutation of JAK2 in myeloproliferative disorders." // New Eng. J.Med.-2005-v.352-p. 1779-1790.

56. Krieg M., Marti H.H., Plate K.H. "Coexpression of erythropoietin and vascular endothelial growth factor in nervous system tumors associated with von Hippel-Lindau tumor suppressor gene loss of function." // Blood.-1998-v.92-p.3388-3393.

57. Kvietikova I., Wenger R.H., Marti H.H., Gassmann M. "The transcrption factors ATF-1 and CREB-1 bind constitutively to the hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1) DNA recognition site." // Nucleic.Acids.Res.-1995-v.23-p.4542-4550.

58. Kuster В., Shainskaya A., Pu H.X., Goldshleger R., Blostein R., Mann M., Karlish S.J.D. "A new variant of the у subunit of renal Na,K-ATPase." // J.Biol.Chem.-2000-v.275-p. 18441-18446.

59. Labuda D., Zietkiewicz E., Labuda M. "The genetic clock and the age of the founder effect in growing populations: a lesson from French Canadians and Ashkenazim." // Am.J.Hum.Genet.-1997-v.61-p.768-771.

60. Lando D., Gorman J.J., Whitelaw M.L., Peet D.J. "Oxygen-dependent regulation of hypoxia-inducible factors by prolyl and asparaginil hydroxylation." // Eur.J.Biochem.-2003-v.270-p.781-790.

61. Lathrop G.M., Lalouel J.M., Julier C., Ott J. "Multilocus linkage analysis in humans: detection of linkage and estimation of recombination." // Am.J.Hum.Genet.-1985-v.37-p.482-498.

62. Law M.L., Cai G.Y., Lin F.K., Wei Q., Huang S.Z., Hartz J.H., Morse H„ Lin C.H., Jones C., Kao F.T. "Chromosomal assignment of the human erythropoietin gene and its DNA polymorphism." // Proc.Natl. Acad.Sci.USA.-1986-v.83-p.6920-6924.

63. Lee Huang S. "Cloning and expression of human erythropoietin cDNA in Escherichia coli." // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1984-v.81-p.2708-2712.

64. Lin F.K., Suggs S., Lin C.H., Browne J.K., Smalling R., Egrie J.C., Chen K.K., Fox G.M., Martin F., Stabinsky Z. et al. "Cloning and expression of the human erythropoietin gene." // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1985-v.82-p.7580-7584.

65. Lisztwan J., Imbert G., Wirbelauer C., Gstaiger M., Krek W. "The von Hippel-Lindau tumor suppressor protein is a component of an E3 ubiquitin-protein ligase activity." // Genes and Development -1999,-v. 13-p. 1822-1833.

66. Litt M., Luty J.A. "A hypervariable microsatellite reveald by in vitro amplification of a dinucleotide repeat within the cardiac muscle actin gene." // Am.J.Hum.Genet.-1989-v.44-p.397-401.

67. Lui W.O., Chen J., Glasker S., Bender B.U., Madura C., Khoo S.K., Kort E., Larsson C., Neumann H.P.H., Teh B.T. "Selective loss of chromosome 11 in pheochromocytomas associated with the VHL syndrome." // 0ncogene.-2002-v.21 .-p. 1117-1122.

68. Mahon P.C., Hirota K., Semenza G.L. "FIH-1: a novel protein that interacts with HIF-la and VHL to mediate repression of HIF-1 transcriptional activity" // Genes and Developm.-2001-v.15-p.2675-2686.

69. Maxwell P. "HIF-1 an oxygen respons system with special relevance to the kidney." // J. Am.Soc.Nephrol.-2003-v. 14-p.2712-2722.

70. Messinezy M., Pearson T.C. "The classification and diagnostic criteria of the erythrocytoses (polycythaemias)." // Clic.Lab.Haematol.-1999-v.21-p.309-316.

71. Minor N.T., Sha Q., Nichols C.G., Mercer R.W. "The gamma subunit of the Na-K-ATPase induces cation channel activity." // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1998-v.95-p.6521-6525.

72. Noguchi C.T., Bal K.S., Chin K., Wada Y., Schechter A.N., Hankins W.D. "Cloning of the human erythropoietin receptor gene." // Blood.-1991-v.78-p.2548-2556.

73. Orita M., Suzuki Y., Hayashi K. "Rapid and sensitive detection of point mutations and DNA polymorphisms using the polymerase chain reaction." // Genomics.-1989-v.5-p.874-879.

74. Orita M., Sekiya Т., Hayashi K. "DNA sequence polymorphisms in Alu repeats." // Genomics.-1990-v.8-p.271-278.

75. Ott J. "Analysis of human genetic linkage" // Johns Hopkins University Press.-Baltimore-1991.

76. Pastore Y.D., Jelinek J., Ang S., Guan Y., Liu E., Jedlickova K., Krishnamurti L., Prchal J.T. "Mutations in the VHL gene in sporadic apparently congenital polycythemia." // Blood. -2003a-v.l 01-p.1591-1595.

77. Pastore Y., Jedlickova K., Guan Y., Liu E., Fahner J., Hasle H., Prchal J.F., Prchal J.T. "Mutations of von Hippel-Lindau tumor suppressor gene and congenital polycythemia." // Am .J .Hum. Genet. -2003b-v. 73 -p. 412-419.

78. Penny L.A., Forget B.G. "Genomic organization of the human erythropoietin receptor gene.' // Genomics.-1991-v.l l-p.974-980.

79. Percy M.J., McMullin M.F., Lappin T.R.J. "Sequence analysis of the 3' hypoxia-responsive element of the human erythropoietin gene in patients with erythrocytosis." // Biochem.Mol.Med.-1997-v.62-p. 132-134.

80. Percy M.J., McMullin M.F., Roques A.W., Westwood N.B., Acharya J., Hughes A.E., Lappin T.R., Pearson T.C. "Erythrocytosis due to a mutation in the erythropoietin receptor gene." // Br. J.Haematol.-1998-v. 100-p.407-410.

81. Percy M.J., McMullin M.F., Jowitt S.N., Potter M., Treasy M., Watson W.H., Lappin T.R. "Chuvash type congenital polycythemia in 4 families of Asian Western European ancestry." // Blood.-2003-v.l02-p. 1097-1099.

82. Percy M.J., Zhao Q., Flores A., Harrison C., Lappin T.R.J., Maxwell P.H., McMullin M.F., Lee F.S. "A family with erythrocytosis establishes a role for prolyl hydroxylase domain protein 2 in oxygen homeostasis." // PNAS.-2006-v.l03-p.654-659.

83. Powell J.S., Berkner K.L., Lebo R.V., Adamson J.W. "Human erythropopietin gene: high level expression in stable transfected mammalian cells and chromosome localization." // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1986-v.83-p.6465-6469.

84. Prchal J.T., Crist W.M., Goldwasser E., Perrine G., Prchal J.F. "Autosomal dominant polycythemia." // Blood.-1985-v.66-p. 1208-1214.

85. Prowse A.H., Webster A.R., Richards F.M., Richard S., Olschwang S., Resche F., Affara N.A., Maher E.R. "Somatic inactivation of the VHL gene in Von Hippel-Lindau disease tumors." // Am. J. Hum. Genet.-1997-v.60-p.765-771.

86. Randi M.L., Murgia A., Pitti M.K., Martella M., Casarin A., Opocher G., Fabris F. "Low frequency of VHL gene mutations in young individuals with polycythemia and high serum erythropoietin." // Haematologica.-2005-v.90-p.689-691.

87. Safran M., Kaelin W.G. "HIF hydroxylation and the mammalian oxygen-sensing pathway." // J.Clin.Invest.-2003-v.l 1 l-p.779-783.

88. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., Schart S.J., Heguchi R., Horn G.T., Mullis K.B.,Erlich H.A. "Primer-directed enzymatic amplification of DNA with thermostable DNA polymerase." // Science.-1988-v.239-p.487-491.

89. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. "DNA sequencing with chain-terminating inhibitors." // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1977-v.74-p.5463-5467.

90. Schoenfeld A., Davidowitz E.J., Burk R.D. "A second major native von Hippel-Lindau gene product, initiated from an internal translation start site, functions as a tumor suppressor." // Proc. Nat. Acad. Sci.-1998-v.95-p.8817-8822.

91. Semenza G.L. "HIF-1: mediator of physiological and pathophysiological responses to hypoxia." //J.Appl.Physiol.-2000a-v.88-p. 1474-1480.

92. Semenza G.L. "HIF-1 and human disease: one highly involved factor." // Genes and Development.-2000b-v. 14-p.l 983-1991.

93. Sergeyeva A., Gordeuk V.R., Tokarev Y.N., Sokol L., Prchal J.F., Prchal J.T. "Congenital polycythemia in Chuvashia." // Blood.-1997-v.89-p.2148-2154.

94. Service S.K., Lang D.W., Freimer N.B., Sandkuijl L.A. "Linkage-disequilibrium mapping of disease genes by reconstruction of ancestral haplotypes in founder populations." // Am.J.Hum.Genet.-1999-v.64-p. 1728-1738.

95. Sistonen P., Traskelin A.L., Lehvaslaiho H., de la Chapelle A. "Genetic mapping of the erythropoietin receptor gene." // Human.Genetics.-1993-v.92-p.299-301.

96. Spivak J.L. "Erythropoietin: a brief review." // Nephron.-1989-v.52-p.289-294.

97. Sutter C.H., Laughner E., Semenza G.L. "Hypoxia-inducible factor la protein expression is controlled by oxygen-regulated ubiquitination that is disrupted by deletions and missense mutations." // PNAS.-2000-v.97-p.4748-4753.

98. Sweadner K.J., Rael E. "The FXYD gene family of small ion transport regulators or channels: cDNA sequence, protein signature sequence, and expression." // Genomics.-2000-v.68-p.41-56.

99. Takeuchi M., Kobata A. "Structures and functional roles of the sugar chains of human erythropoietins." // Glycobiology.-1991-v.l-p.337-346.

100. Tefferi A. "JAK2 mutations in polycythemia vera molecular mechanisms and clinical applications." // N.Engl.J.Med.-2007-v.356-p.444-445.

101. Therien A.G., Blostein R. "Mechanisms of sodium pump regulation." // Am.J.Physiol.Cell.Physiol.-2000-v.279-p.541-566.

102. Wait S.D., Vortmeyer A.O., Lonser R.R., Chang D.T., Finn M.A., Bhowmick D.A., Pack S.D., Oldfield E.H., Zhuang Z. "Somatic mutations in VHL germline deletion kindred correlate with mild phenotype." // Ann. Neurol.-2004-v.55-p.236-240.

103. Weber J.L., May P.E. "Abundant class of human DNA polymorphisms which can be typed using the polymerase chain reaction." // Am.J.Hum.Genet.-1989-v.44-p.388-396.

104. Weber J.L. "Informativeness of human (dC-dA)n(dG-dT)n polymorphisms." // Genomics.-1990-v.7-p.524-530.

105. Webster A.R., Richards F.M., MacRonald F.E., Moore A.T., Maher E.R. "An analysis of phenotypic variation in the familial cancer syndrome von Hippel-Lindau disease: evidence for modifier effects." // Am.J.Hum.Genet.-1998-v.63-p.l025-1035.

106. Wenger R.H. "Cellular adaptation to hypoxia: Ог-sensing protein hydroxylases, hypoxia-inducible transcription factors, and Ог-regulated gene expression." // FASEB J.-2002-v.l6-p.l 1511162.

107. Whitcomb W.H., Peschle C., Moore M., Nitschke R., Adamson J.W. "Congenital erythrocytosis: a new form, associated with an erythropoietin-dependent mechanism." // Br J.Haematol.-1980-v.44-p. 17-24.

108. Wiesener M.S., Eckardt K.-U. "Erythropoietin, tumors and the von Hippel-Lindau gene: towards identification of mechanisms and dysfunction of oxygen sensing." // Nephrol.Dial.Transplant.-2002-v.l7-p.356-359.

109. Woodward E.R., MacDonald F., Maher E.R. "VHL mutation analysis in sporadic haemangioblastoma." // Eur.J.ofHum.Genet.-2005-v.l3-p. 194.

110. Yamaguchi K., Akai K., Kawanishi G., Ueda M., Masuda S., Sasaki R. "Effects of side-directed removal of N-glycosylation sites in human erythropoietin on its production and biological properties." // J.Biol.Chem.-1991 -v.266-p.20434-20439.

111. Yang H., Kaelin W.G. "Molecular pathogenesis of the von Hippel-Lindau hereditary cancer syndrome." // Cell Growth and Differentiation.-2001-v.l2-p.447-455.

112. Yu F., White S.B., Zhao Q., Lee F.S. "Dinamic site-specific interaction of hypoxia-inducible factor-la with the von Hippel-Lindau tumor suppressor protein." // Cancer Research.-2001-v.61-p.4136-4142.