Исследование контрольных точек клеточного цикла клеток тератокарциномы мыши линии F9 при действии повреждающих агентов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Малашичева, Анна Борисовна

• Малашичева, Анна Борисовна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Малашичева, Анна Борисовна

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность проблемы.

1.2. Цели и задачи исследования.

1.3. Основные положения, выносимые на защиту.

1.4. Научная новизна работы.

1.5. Теоретическое и практическое значение работы.

1.6. Апробация работы.

1.7. Объём и структура диссертации.

ГЛАВА 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.i i

2.1. Регуляция клеточного цикла.

2.2. Контрольные точки клеточного цикла.

2.2.1. Роль белков р53 и p21/Wafl в функционировании контрольных точек.

2.2.1.1. Контрольные точки повреждения ДНК.

2.2.1.2. Контрольная точка сборки веретена деления.

2.3. Опухолевый супрессор р53: структура и функции.

2.3.1. Общие сведения.

2.3.2. Участие белкар53 в эмбриональном развитии.

2.3.3. Структура белка р53.

2.3.3.1. N-концевой домен белкар53.

2.3.3.2. Центральный домен белка р53.

2.3.3.3. С-концевой домен.

2.3.4. Гомологи белка р53.'.

2.3.5. Участие белка р53 в ответе на стрессовые воздействия.

2.3.6. Механизмы активации белка р53.

2.3.6.1.Опосредованная белком mdm2 деградация белкар53.

2.3.6.2. Активация белка р53 при помощи белка ARF.

2.3.6.3. Независимая от белка Mdm2 деградация белка р53.

2.3.6.4. Регуляция активности белка р53 путем фосфорилирования.

2.3.7. Мишени белка р53.

2.4. Ген p21AVafl.

2.4.1. Белок p21/Wafl участвует в остановке клеточного цикла.

2.4.2. Регуляция p21/Wafl.1.

2.4.2.1 .Зависимая от белка р53 регуляция гена p21/Wafl.

2.4.2.2. Независимая от белка р53 активация гена p21/Wafl.

2.4.4.3. Пост-транскрипционная регуляция экспрессии гена p21/Wafl. 49 2.4.3. р53-Ш>зависимый путь опухолевой супрессии.

2.5. Тератокарциномы и эмбриональные стволовые клетки.

2.5.2. Регуляция клеточного цикла ранних эмбриональных клеток млекопитающих.

2.5.3. Белок р53 в клетках эмбриональных карцином и в эмбриональных стволовых клетках.

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА.

3.1. Культивирование клеток.

3.2. Облучение клеток и обработка ингибиторами клеточного цикла.

3.3. Анализ распределения клеток по фазам клеточного цикла.

3.4. Анализ активации транкрипции репортерных плазмид.

3.5. Анализ содержания белков-регуляторов клеточного цикла методом иммуноблоттинга.

3.6. Анализ конформационного состояния белкар53 методом иммунопреципитации.

3.7. Анализ связывания белков p21/Wafl и р27. с циклин-киназными комплексами.

3.8. Анализ функциональной активности. циклин-киназных комплексов in vitro.

3.9. Оценка гибели клеток.

3.9.1. Метод клоногенной выживаемости.

3.9.2. Оценка жизнеспособности клеток. по активности митохондриальных ферментов.

3.9.3. Анализ фрагментации клеточной ДНК.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ.

4.1. Повреждающие агенты не вызывают в клетках F9 полноценных остановок клеточного цикла в контрольных точках.

4.1.1. Ионизирующее излучение не вызывает остановку клеточного цикла G1/S в клетках F9.

4.1.2. Повреждение ДНК клеток F9 адриамицином не приводит к блокированию входа в фазу S.

4.1.3. Остановка G1/S не происходит в клетках F9 при блокировании синтеза нуклеотидов.

4.1.4. Ингибирование митотического веретена вызывает полиплоидизацию в клетках F9.

4.2. Повреждённые клетки F9 вступают в апоптоз.

4.3. Анализ активации р53-зависимого пути в клетках F9 при^действии повреждающих агентов.

4.3.1. Белок р53 в клетках F9 функционально активен.

4.3.2. Клетки F9 имеют низкое содержание белка p21/Wafl.

4.3.3. Белок p21/Wafl подвергается протеасомной деградации в клетках F9.

4.4. Анализ содержания циклинов, циклин-зависимых киназ и активности циклин-киназных комплексов в клетках F9.

4.5. Анализ связывания белка p21/Wafl с циклин-киназными комплексами.

4.6. Эмбриональные стволовые клетки не имеют полноценных остановок клеточного цикла в контрольных точках.

4.6.1. Анализ клеточного цикла ES клеток в ответ на действие повреждающих агентов.

4.6.2. Анализ функций белка p21/Wafl в облучённых ES клетках.

4.7. Анализ изменений, происходящих в клетках F при дифференцировке.

4.7.1. Индукция дифференцировки клеток F9 приводит к изменению структуры клеточного цикла.

4.7.2. Статус белка р53 не изменяется при дифференцировке клеток F9.

4.7.3. Изменения активности циклин-киназных комплексов при дифференцировке клеток F9.

4.7.4. Анализ свойств белков р21/Wafl и р при дифференцировке клеток F9.

ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ.

5.1. Анализ функционирования р53-Ш>зависимого пути в клетках F9.

5.1.1. Клетки F9 имеют функционально активный белок р53 и низкое содержание белка p21/Wafl.

5.1.2. Белок р21 не связывается в клетках F9 с комплексами, содержащими циклин Е.

5.1.3. Активность комплексов, содержащих циклин Е, определяет ответ клетки на повреждение ДНК.

5.1.4. Уровень фосфорилирования белка Rb не изменяется после повреждения ДНК в клетках F9.

5.2. Анализ остановки G2/M после повреждения ДНК в клетках F9.

5.3. Анализ функционирования митотической контрольной точки в клетках F 9.

5.4. Контроль целостности генома в клетках F9.

5.5. Запуск апоптоза в клетках F9 в ответ на действие повреждающих агентов.

5.5.6. Анализ участия белка р53 в запуске апоптоза в клетках F9.

5.5.7. Регуляция клеточного цикла и апоптоз.

5.6. Анализ G1/S блока в дифференцированных клетках F9.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование контрольных точек клеточного цикла клеток тератокарциномы мыши линии F9 при действии повреждающих агентов»

1.1. Актуальность проблемы

Одно из главных отличий опухолевых клеток от нормальных состоит в нарушении контроля клеточного цикла. Как следствие, опухолевые клетки имеют нерегулируемую пролиферацию, нестабильный геном и часто перестроенный кариотип. В нормальных клетках сопряжение регуляции пролиферации и стабильности генома происходит благодаря наличию в клеточном цикле так называемых контрольных точек на границе переходов G1/S и G2/M. В зависимости от состояния клеточной ДНК в контрольных

Т^ ГЛ Т Т ~ТГ г\ Ц Я йпп TTVN ATT Л» Л Л Г\ тттТТ"1Т АЛГГПТТЛ»ПТЛП Т'ПО'^АТТТТЛ'ПЛ гттттл утл jujtlivcLa. iviw/iYv^L uvianuDiva jxjjlv^ j.v^-anwi \J i-j^ruvJia. ^vji ruin vjL. UJUJA^.

Прохождение клеточного цикла, в свою очередь, зависит от периодической активности циклин-зависимых киназ. Эта активность позитивно регулируется специфическими циклинами; существуют также негативные регуляторы циклин-зависимых киназ: ингибиторы клеточного цикла - белки семейств INK и KIP (Elledge, 1996).

Опухолевый супрессор транскрипционный фактор р53 - один из ключевых белков, участвующих в реализации контрольных точек (Levine, 1997). Функция опухолевой супрессии, осуществляемая белком р53, состоит в сопряжении контроля стабильности генома и регуляции клеточного цикла. Неслучайно в 50% гистологических типов опухолей человека ген р53 мутирован, а в остальных случаях инактивирован функционально (Hollstein et al., 1991). В ответ на повреждение ДНК и многие другие факторы стресса белок р53 трансактивирует свои гены-мишени, что вызывает остановку клеточного цикла на границе перехода G1/S и/или апоптоз. Одной из главных транскрипционных мишеней р53 является ген, кодирующий универсальный ингибитор циклин-зависимых киназ белок р21 /Waf 1 /Cip 1 (далее p21/Wafl) (El-Deiry et al., 1993), принадлежащий к семейству KIP.

Опухолевые клетки тератокарцином (эмбриональных карцином) происходят от клеток внутренней клеточной массы бластоцисты. Клетки тератокарциномы мыши линии F9 сохранили способность к дифференцировке в нескольких направлениях при действии ретиноевой кислоты, причем дифференцировка сопровождается утратой признаков малигнизации. Кроме того, клетки линии F9, в отличие от большинства опухолевых линий, имеют стабильный, почти неперестроенный кариотип. В этих клетках, как и во многих тератокарциномах, ген р53 не мутирован (Pennica et al., 1984). Поэтому существует предположение, что в клетках тератокарцином - в частности, в линии F9 - не утрачен механизм сопряжения контроля клеточного цикла и стабильности генома (Lutzker, Levine, 1996).

Эмбриональные стволовые (ES - от embryonal stem) клетки - это плюрипотентные нормальные клетки внутренней клеточной массы бластоцисты. Эти клетки имеют много общего с клетками тератокарцином, но в отличие от последних ES клетки способны к дифференцировке в любых направлениях. В последнее время изучению биологии ES клеток уделяют пристальное внимание, так как их рассматривают как перспективный источник дифференцированных клеток для заместительной терапии при самых разных заболеваниях (Pera et al., 2000). Поскольку клетки раннего эмбриона дают начало целому организму, очевидно, что целостность их генома должна строго контролироваться.

Клетки тератокарциномы мыши линии F9, таким образом, являются опухолевыми производными ES клеток. Поэтому изучение регуляции клеточного цикла и функционирования контрольных точек в этих клетках представляет особый интерес с точки зрения как биологии опухолей, так и биологии раннего развития.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Малашичева, Анна Борисовна

ВЫВОДЫ

1. Недифференцированные клетки тератокарциномы мыши линии F9 имеют высокий уровень белка р53 дикого типа, который способен накапливаться при действии повреждающих агентов и трансактивировать свои мишени, в частности ген p21/Wafl.

2. Клетки F9 имеют низкий уровень белка p21/Wafl, отчасти обусловленный его протеасомной деградацией. Одним из следствий этого является отсутствие к клетках F9 остановки клеточного цикла G1/S при повреждении ДНК.

3. Эмбриональные стволовые клетки не останавливаются при переходе G1/S клеточного цикла в ответ на действие повреждающих агентов, что позволяет рассматривать это качество как общее свойство клеток тератокарцином и эмбриональных стволовых клеток.

4. При подавлении образования веретена деления нокодазолом в клетках тератокарциномы F9 и в эмбриональных стволовых клетках происходит полиплоидизация, что свидетельствует о нарушении функционирования митотической контрольной точки.

5. При действии повреждающих агентов клетки F9 вступают в апоптоз, что позволяет рассматривать индукцию апоптотической гибели как основу сохранения целостности генома в популяции эмбриональных клеток.

6. При индукции дифференцировки под действием ретиноевой кислоты и дибутирил-цАМФ в клетках F9 изменяется структура клеточного цикла и регуляция перехода G1/S.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Орловская Е.И., Кислякова Т.В., Осипов К.А., Малашичева А.Б., Поспелов В.А. 1997. Функциональное состояние гена р53 в клетках эмбриональной тератокарциномы мыши линии F9. Молек. биол. 31(2): 223-230.

2. Малашичева А .Б., Кислякова Т.В., Поспелов В.А. 1998. Апоптотическая гибель клеток эмбриональной тератокарциномы мыши F9 зависит от плотности клеточной популяции. Цитология, 40(1): 14-22.

3. Malashicheva А.В., Kislyakova T.V., Pospelov V.A. 1998. The DNA-damage-dependent G1 checkpoint is deficient in mouse teratocarcinoma F9 cell line in spite of the functional active wild-type p53 protein.- American Association of Cancer Research Special Conference "Gene Regulation and Cancer", Hot Springs, Roanoke, Virginia, USA, 14-19 October, 1998.

4. Малашичева А. Б., Кислякова T.B., Поспелов В.А. 1998. Функциональная активация опухолевого супрессора р53 при облучении не вызывает G1 -блока в клетках линии F9 тератокарциномы мыши.-Тезисы Всероссийского симпозиума "Биология клетки в культуре", Санкт-Петербург, 20-22 октября.

5. Малашичева А.Б., Кислякова Т.В., Поспелов В.А. 2000. Отсутствие блока G1/S в клетках тератокарциномы F9 обусловлено деградацией ингибитора циклин-зависимых киназ p2lWAF1/CIP1. Цитология, 42(5): 438445.

6. Малашичева А.Б., Кислякова Т.В., Аксенов Н. Д., Поспелов В.А. 1999. В клетках тератокарциномы мыши F9 не функционируют контрольные точки клеточного цикла «Структура и функции клеточного ядра», Тезисы Всероссийского симпозиума Санкт-Петербург, 19-21 октября.

7. Malashicheva А. В., Kislyakova Т. V., Aksenov N. D. and Pospelov V. А. 2000. F9 teratocarcinoma cells have defective cell cycle checkpoints.

138

БЛАГОДАРНОСТИ

Я выражаю глубокую благодарность и искреннюю признательность моим научным руководителям Татьяне Витальевне Кисляковой и Валерию Анатольевичу Поспелову за огромную помощь, постоянное внимание к моей работе, поддержку и за всё, что было сделано ими для того, чтобы эта работа могла быть выполнена.

Я выражаю свою большую признательность Николаю Дмитриевичу Аксёнову и Юрию Михайловичу Розанову за помощь в проведении цитофлюориметрического анализа.

Благодарю коллектив лаборатории Молекулярных основ дифференцировки клеток Института цитологии - научных сотрудников С. Б. Светликову и А. Н. Кукушкина, аспирантку М. Абрамову, а также Н. Д. Тарарову и Д. В. Булавина за создание тёплой атмосферы и помощь в работе. Также я благодарна нашим студентам М. Лянгузовой, П. Круглякову, Н. Голоудиной. Я признательна всем сотрудникам Института цитологии РАН, которые помогали мне при работе над диссертацией. Я благодарна также и всей своей большой семье, которая все эти годы оказывала мне всестороннюю помощь и поддержку.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Начиная представленную работу, мы обратились к клеткам тератокарциномы мыши линии F9 как к представителям опухолевых клеток и намеревались исследовать в этих клетках функционирование контрольных точек клеточного цикла в связи с их опухолевым фенотипом. Однако в процессе исследования, сравнивая клетки F9 с другими опухолевыми клетками с одной стороны, и с эмбриональными стволовыми клетками, являющимися ближайшими родственниками тератокарцином - с другой, мы обнаружили большое сходство ES клеток и клеток тератокарцином. Подводя итог проведённым исследованиям, мы приходим к выводу, о том, что свойства клеток тератокарциномы, которые мы анализировали, скорее обусловлены их эмбриональным происхождением, чем опухолевой природой. Вопрос о функционировании р53-11Ь-зависимого пути опухолевой супрессии приобретает таким образом для клеток, имеющих раннее эмбриональное происхождение, несколько иной оттенок. Мы полагаем, на основании наших собственных данных и данных других авторов, что ES клетки имеют те же базовые регуляторные механизмы клеточного цикла, что и клетки тератокарцином. В этих типах клеток р53-Ш>зависимый путь опухолевой супрессии скорее не повреждён в принятом смысле, а функционирует иначе, чем в клетках взрослого организма. Наиболее вероятно, что такое функционирование этого пути обеспечивает высокую скорость деления и относительную независимость клеточного цикла ранних эмбриональных клеток от внешних факторов, что необходимо в самом начале развития организма. Тем не менее, следствием такой первичной регуляции р53-Ш>зависимого пути неизбежно являются злокачественные свойства, характерные как для клеток тератокарцином, так и для эмбриональных стволовых клеток. При этом основным механизмом сохранения целостности генома этих клеток служит, по-видимому,

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Малашичева, Анна Борисовна, 2001 год

1. Кислякова Т.В., Поспелова Т.В., Поспелов В.А. 1990. Ростовые и морфологические характеристики недифференцированных и дифференцированных клеток линии тератокарциномы мыши F9. Цитология. 32: 54-60.

2. Орловская Е.И., Кислякова Т.В., Осипов К.А., Малашичева А.Б., Поспелов В.А. 1997. Функциональное состояние гена р53 в клетках эмбриональной тератокарциномы мыши линии F9. Мол. Биол. 31(2): 223-230.

3. Малашичева А.Б., Кислякова Т.В., Поспелов В.А. 1998. Апоптотическая гибель клеток эмбриональной тератокарциномы мыши F9 зависит от плотности клеточной популяции. Цитология. 40(1): 14-22.

4. Розанов Ю.М. 1988. Проточная цитометрия. С. 221-231 в кн.: Методы культивирования клеток. Ленинград: Наука.

5. Aladjem M.I., Spike В.Т., Rodewald L.W., Hope T.J., Klemm M., Jaenisch R., Wahl G.M. 1998. ES cells do not activate p53-dependent stress responses and undergo p53-independent apoptosis in response to DNA damage. Curr. Biol. 8: 145-155.

6. Amundson S.A., Myers T.G., Fornace A.J. 1998. Roles for p53 in growth arrest and apoptosis: putting on the brakes after genotoxic stress. Oncogene. 17(25): 3287-3299.

7. Andreassen P.R., Margolis R.L. 1994. Microtubule dependency of p34cdc2 inactivation and mitotic exit in mammalian cells. J Cell Biol. 127(3): 789-802.

8. Andrews P.W. 1998. Teratocarcinomas and human embryology: pluripotent human EC cell lines. APMIS. 106(1): 158-167.

9. Ashcroft M., Yousden K.H. 1999. Regulation of p53 stability. Oncogene. 18(53): 7637-7643.

10. Asker C., Wiman K.G., Selivanova G. 1999. p53-induced apoptosis as a safeguard against cancer. Biochem. Biophys. Res. Commun. 265(1): 1-6.

11. Askew D.S., Ashmun R.A., Simmons B.C., Cleveland J.L. 1991 Constitutive c-myc expression in an IL-3-dependent myeloid cell line suppresses cell cycle arrest and accelerates apoptosis. Oncogene. 6(10): 1915-1922.

12. Atencia R., Garcia-Sanz M., Unda F., Arechaga J. 1994. Apoptosis during retinoic acid-induced differentiation of F9 embryonal carcinoma cells. Exp. Cell Res. 214: 663-667.

13. Bates S., Ryan K.M., Phillips A.C., Yousden K.H. 1998. Cell cycle arrest and DNA endoreduplication following p21Wafl/Cipl expression. Oncogene. 17(13): 1691-1703.

14. Bernards R. 1999. CDK-independent activities of D type cyclins. Biochim. Biophys. Acta. 1424(2-3): Ml7-22.

15. Beroud C., Soussi T. 1998. p53 gene mutation: software and database.Nucleic Acids Res. 26(1): 200-204.

16. Blagosklonny M.V., Wu G.S., Omura S., El-Deiry W.S. 1996. Proteasome dependent regulation of p21WAFl/CIPl expression. Biochem. Biophys. Res. Commun. 227: 564-569.

17. Blaydes J.P., Gire V., Rowson J.M., Wynford-Thomas D. 1997. Tolerance of high levels of wild-type p53 in transformed epithelial cells dependent on auto-regulation by mdm-2. Oncogene. 14(15): 1859-1868.

18. Brain R., Jenkins J.R. 1994. Human p53 directs DNA strand reassociation and is photolabelled by 8-azido ATP. Oncogene. 9(6): 1775-1780.

19. Brinster R.L. 1974. The effect of cells transferred into the mouse blastocyst on subsequent development. J. Exp. Med. 140(4): 1049-1056.

20. Brown J.P., Wei W., Sedivy J.M. 1997. Bypass of senescence after disruption of p21CIPl/WAFl gene in normal diploid human fibroblasts. Science. 277(5327): 831-834.

21. Brugarolas J., Chandrasekaran C., Gordon J.I., Beach D., Jacks Т., Harmon G.J. 1995. Radiation-induced cell cycle arrest compromised by p21 deficiency. Nature. 377(6549): 552-557.

22. Brugarolas J., Moberg K., Boyd S.D., Taya Y., Jacks Т., Lees J.A. 1999. Inhibition of cyclin-dependent kinase 2 by p21 is necessary for retinoblastoma protein-mediated G1 arrest after gamma-irradiation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96(3): 1002-1007

23. Bulavin D.V., Saito S., Hollander M.C., Sakaguchi K., Anderson C.W., Appella E., Fornace A.J. 1999a. Phosphorylation of human p53 by p38 kinase coordinates N-terminal phosphorylation and apoptosis in response to UV radiation. EMBO J. 18(23): 6845-6854.

24. Bulavin D.V., Tararova N.D., Aksenov N.D, Pospelov V.A., Pospelova T.V. 1999b. Deregulation of p53/p21Cipl/Wafl pathway contributes to polyploidy and apoptosis of ElA+cHa-ras transformed cells after gamma-irradiation. Oncogene. 18(41): 5611-5619.

25. Bunz F., Dutriaux A., Lengauer C., Waldman Т., Zhou S., Brown J.P., Sedivy J.M., Kinzler K.W., Vogelstein B. 1998. Requirement for p53 and p21 to sustain G2 arrest after DNA damage. Science. 282(5393): 1497-1501.

26. Butz K., Geisen C., Ullmann A., Zentgraf H., Hoppe-Seyler F. 1998. Uncoupling of p21WAFl/CIPl/SDIl mRNA and protein expression upon genotoxic stress. Oncogene. 17(6): 781-787.

27. Caelles С., Helmberg A., Karin M. 1994. p53-dependent apoptosis in the absence of transcriptional activation of p53-target genes. Nature. 370(6486): 220-223.

28. Cahill D.P., Lengauer C., Yu J., Riggins G.J., Willson J.K., Markowitz S.D., Kinzler K.W., Vogelstein B. 1998. Mutations of mitotic checkpoint genes in human cancers. Nature. 392(6673): 300-303.

29. Cai K., Dynlacht B.D. 1998. Activity and nature of p21(WAFl) complexes during the cell cycle. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95(21): 12254-12259.

30. Cairns J. 1975. Mutation selection and the natural history of cancer. Nature. 255(5505): 197-200.

31. Canman C.E., Gilmer T.M., Coutts S.B., Kastan M.B. 1995. Growth factor modulation of p53-mediated growth arrest versus apoptosis. Genes Dev. 9(5): 600-611.

32. Casagrande F., Darbon J.M. 2000. p21CIPl is dispensable for the G2 arrest caused by genistein in human melanoma cells. Exp. Cell Res. 258(1): 101108.

33. Cayrol C., Ducommun B. 1998. Interaction with cyclin-dependent kinases and PCNA modulates proteasome-dependent degradation of p21. Oncogene. 17: 2437-2444.

34. Cayrol C., Knibiehler M., Ducommun B. 1998. p21 binding to PCNA causes G1 and G2 cell cycle arrest in p53-deficient cells. Oncogene. 16(3): 311-320

35. Chan T.A., Hermeking H., Lengauer C., Kinzler K.W., Vogelstein B. 1999. 14-3-3Sigma is required to prevent mitotic catastrophe after DNA damage. Nature: 401(6753): 616-20.

36. Chan T.A., Hwang P.M., Hermeking H., Kinzler K.W., Vogelstein B. 2000. Cooperative effects of genes controlling the G(2)/M checkpoint. Genes Dev. 14(13): 1584-1588.

37. Chao C., Saito S., Kang J., Anderson C.W., Appella E., Xu Y. 2000. p53 transcriptional activity is essential for p53-dependent apoptosis following DNA damage. EMBO J. 19(18): 4967-4975.

38. Chen J., Jackson P.K., Kirschner M.W., Dutta A. 1995. Separate domains of p21 involved in the inhibition of Cdk kinase and PCNA. Nature. 374(6520): 386-388.

39. Chen X., Ко L.J., Jayaraman L., Prives C. 1996. p53 levels, functional domains, and DNA damage determine the extent of the apoptotic response of tumor cells. Genes Dev. 10(19): 2438-2451.

40. Chen Y.N., Sharma S.K., Ramsey T.M., Jiang L., Martin M.S., Baker K., Adams P.D., Bair K.W., Kaelin W.G. 1999. Selective killing of transformed cells by cyclin/cyclin-dependent kinase 2 antagonists. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96(8): 4325-4329.

41. Cheng M., Olivier P., Diehl J.A., Fero M., Roussel M.F., Roberts J.M., Sherr C.J. 1999. The p21(Cipl) and p27(Kipl) CDK 'inhibitors' are essential activators of cyclin D-dependent kinases in murine fibroblasts. EMBO J. 18(6): 1571-1583.

42. Chernova O.B., Chernov M.V., Agarwal M.L., Taylor W.R., Stark G.R. 1995. The role of p53 in regulating genomic stability when DNA and RNA synthesis are inhibited. Trends Biochem. Sci. 20(10): 431-434.

43. Cho Y., Gorina S., Jeffrey P.D., Pavletich N.P. 1994. Crystal structure of a p53 tumor suppressor-DNA complex: understanding tumorigenic mutations. Science. 265(5170): 346-355.

44. Chowdary D.R., Dermody J.J., Jha K.K., Ozer H.L. 1994. Accumulation of p53 in a mutant cell line defective in the ubiquitin pathway. Mol. Cell Biol. 14(3): 1997-2003.

45. Chresta C.M., Hickman J.A. 1996. Oddball p53 in testicular tumors. Nat. Med. 2(7): 745-746.

46. Clarke A.R., Purdie C.A., Harrison D.J., Morris R.G., Bird C.C., Hooper M.L., Wyllie A.H. 1993. Thymocyte apoptosis induced by p53-dependent and independent pathways. Nature. 362(6423): 849-852.

47. Collins M., Perkins G.R., Rodriguez-Tarchardu G., Nieto M.A., Lopez-Rivas A.B. 1994. Growth factors as survival factors. Regulation of apoptosis. BioAssays. 16: 133-137.

48. Corbet S.W., Clarke A.R., Gledhill S., Wyllie A.H. 1999. P53-dependent and -independent links between DNA-damage, apoptosis and mutation frequency inES cells. Oncogene. 18(8): 1537-1544.

49. Cross S.M., Sanchez C.A., Morgan C.A., Schimke M.K., Ramel S., Idzerda R.L., Raskind W.H., Reid В J. 1995. A p53-dependent mouse spindle checkpoint. Science. 267(5202): 1353-6.

50. D'Arpa P., Liu L.F. 1989. Topoisomerase-targeting antitumor drugs. Biochim. Biophys. Acta. 989(2): 163-177.

51. Dameron K.M., Volpert O.V., Tainsky M.A., Bouck N. 1994. Control of angiogenesis in fibroblasts by p53 regulation of thrombospondin-1. Science. 265(5178): 1582-1584.

52. Dannenberg J.H., van Rossum A., Schuijff L., te Riele H. 2000. Ablation of the retinoblastoma gene family deregulates G(l) control causingimmortalization and increased cell turnover under growth-restricting conditions. Genes Dev. 14(23): 3051-3064.

53. David-Pfeuty T. 1999. Potent inhibitors of cyclin-dependent kinase 2 induce nuclear accumulation of wild-type p53 and nucleolar fragmentation in human untransformed and tumor-derived cells. Oncogene. 18(52): 7409-7422.

54. Delavaine L, La Thangue N.B. 1999. Control of E2F activity by p21 Wafl/Cipl. Oncogene. 18(39): 5381-5392.

55. Deng C., Zhang P., Harper J.W., Elledge S.J., Leder P. 1995. Mice lacking p21/WAFl/CIPl undergo normal development, but are defective in G1 checkpoint control. Cell. 82: 675-684.

56. Di Cunto F., Topley G., Calautti E., Hsiao J., Ong L., Seth P.K., Dotto G.P. 1998. Inhibitory function of p21WAFl/CIPl in differentiation of primary mouse keratinocytes independent of cell cycle control. Science. 280: 10691072.

57. Di Leonardo A., Linke S.P., Clarkin K.C., Wahl G.M. 1994. DNA damage triggers a prolonged p53-dependent G1 growth arrest and long term induction of Cipl in normal human fibroblasts. Genes Dev., 8: 2540-2551.

58. Di Leonardo A., Khan S.H., Linke S.P., Greco V, Seidita G., Wahl G.M. 1997. DNA rereplication in the presence of mitotic spindle inhibitors in human and mouse fibroblasts lacking either p53 or pRb function. Cancer Res. 57(6): 1013-1019.

59. Dixon F.J., Moore R.A. 1953. Testicular tumors: a clinico-pathologic study. Cancer. 6: 427-454.

60. Donehower L.A., Harvey M., Slagle B.L., McArthur M.J., Montgomery C.A., Butel J.S., Bradley A. 1992. Mice deficient for p53 are developmentally normal but susceptible to spontaneous tumours. Nature. 356(6366):215-221.

61. Dotto G.P. 2000. p21(WAFl/Cipl): more than a break to the cell cycle? Вiochim.-Вiophys. Acta. 1471(1): M43-M56.

62. Dulic V., Kaufmann W.K., Wilson S.J, Tlsty T.D, Lees E., Harper J.W, Elledge S.J., Reed S.I. 1994. p53-dependent inhibition of cyclin-dependentkinase activities in human fibroblasts during radiation-induced G1 arrest. Cell. 76(6): 1013-1023.

63. Dulic V., Stein G.H., Far D.F., Reed S.I. 1998. Nuclear accumulation of p21Cipl at the onset of mitosis: a role at the G2/M-phase transition. Mol. Cell Biol. 18(10): 546-557.

64. Dynlacht B.D. 1995. Retinoblastoma protein. Pol I gets repressed. Nature. 374(6518): 114.

65. Dyson N., Howley P.M., Munger K., Harlow E. 1989. The human papilloma virus-16 E7 oncoprotein is able to bind to the retinoblastoma gene product. Science. 243(4893): 934-937.

66. El-Deiry W.S., Tokino Т., Velculescu V.E., Levy D.B., Parsons R., Trent J.M, Lin D., Mercer W.E., Kinzler K.W, Vogelstein B. 1993. WAF1, a potential mediator of p53 tumor suppression. Cell. 75(4): 817-825.

67. El-Deiry W.S., Harper J.W., O'Connor P.M., Velculescu V.E., Canman C.E., Jackman J., Pietenpol J.A., Burrell M., Hill D.E., Wang Y., et al 1994. WAF1/CIP1 is induced in p53-mediated G1 arrest and apoptosis. Cancer Res. 54(5): 1169-1174.

68. El-Deiry W.S., Tokino Т., Waldman Т., Oliner J.D., Velculescu V.E., Burrell M., Hill D.E., Healy E., Rees J.L., Hamilton S.R., et al. 1995. Topological control of p21WAFl/CIPl expression in normal and neoplastic tissues. Cancer Res. 55(13): 2910-2919.

69. Elkeles A., Juven-Gershon Т., Israeli D., Wilder S., Zalcenstein A., Oren M. 1999. The c-fos proto-oncogene is a target for transactivation by the p53 tumor suppressor. Mol. Cell Biol. 19(4): 2594-2600.

70. Elledge S.J. 1996. Cell cycle checkpoints: preventing an identity crisis. Science. 274: 1664-1672.

71. Evan G.I., Wyllie A.H., Gilbert C.S., Littlewood T.D., Land H, Brooks M., Waters C.M., Penn L.Z., Hancock D.C. 1992. Induction of apoptosis in fibroblasts by c-myc protein. Cell. 69: 119-128.

72. Farr K.A., Hoyt M.A. 1998. Bublp kinase activates the Saccharomyces cerevisiae spindle assembly checkpoint. Mol. Cell Biol. 18(5): 2738-2747.

73. Fearon E.R., Burke P.J, Zehnbauer B.A., Vogelstein В., Schiffer С.А. 1986. Differentiation of blast cells in acute nonlymphocytic leukemia. N. Engl. J. Med. 315(23): 1488-1493.

74. Fenteany G., Standaert R.F., Lane W.S., Choi S., Corey E.J., Schreiber S.L. 1995. Inhibition of proteasome activities and subunit-specific amino-terminal threonine modification by lactacystin. Science. 268: 726-731.

75. Florenes V.A., Oyjord Т., Holm R., Skrede M., Borresen A.L., Nesland J.M., Fodstad O. 1994. TP53 allele loss, mutations and expression in malignant melanoma. Br. J. Cancer. 69(2): 253-259.

76. Fornace A.J., Nebert D.W., Hollander M.C., Luethy J.D., Papathanasiou M., Fargnoli J., Holbrook N.J. 1989. Mammalian genes coordinately regulated by growth arrest signals and DNA-damaging agents. Mol. Cell Biol. 9(10): 41964203.

77. Fuchs S.Y., Adler V., Buschmann Т., Yin Z., Wu X., Jones S.N., Ronai Z. 1998. JNK targets p53 ubiquitination and degradation in nonstressed cells. Genes Dev. 12(17): 2658-2663.

78. Gao C.Y., Zelenka P.S. 1997. Cyclins, cyclin-dependent kinases and differentiation. BioEssays. 19(4): 307-315.

79. Gartel A.L., Tyner A.L. 1999. Transcriptional regulation of the p21(WAFl/CIPl) gene. Exp. Cell Res. 246: 280-289.

80. Gervais J.L., Seth P., Zhang H. 1998. Cleavage of CDK inhibitor p21(Cipl/Wafl) by caspases is an early event during DNA damage-induced apoptosis. J. Biol. Chem. 273(30): 19207-19212.

81. Giaccia A.J., Kastan M.B. 1998. The complexity of p53 modulation: emerging patterns from divergent signals. Genes Dev. 12(19): 2973-2983.

82. Goga A., Liu X., Hambuch T.M., Senechal K., Major E., Berk A.J., Witte O.N., Sawyers C.L. 1995. p53 dependent growth suppression by the c-Abl nuclear tyrosine kinase. Oncogene. 11(4): 791-799.

83. Gorospe М., Wang X., Holbrook N.J. 1998. p53-dependent elevation of p21Wafl expression by UV light is mediated through mRNA stabilization and involves a vanadate-sensitive regulatory system. Mol. Cell Biol. 18(3): 1400-1407.

84. Gottlieb T.M., Oren M. 1996. p53 in growth control and neoplasia. Biochim. Biophys. Acta. 1287(2-3): 77-102.

85. Gottlieb T.M., Oren M. 1998. p53 and apoptosis. Semin. Cancer Biol. 8(5): 359-368.

86. Gratzner H.G. 1982. Monoclonal antibody to 5-bromo- and 5-iododeoxyuridine: A new reagent for detection of DNA replication. Science. 218:474-475

87. Gualberto A., Aldape K., Kozakiewicz K., Tlsty T.D. 1998. An oncogenic form of p53 confers a dominant, gain-of-fimction phenotype that disrupts spindle checkpoint control. Proc. Natl. Acad. Sci., USA. 95(9): 5166-5171.

88. Guillou L., Estreicher A., Chaubert P., Hurlimann J., Kurt A.M., Metthez G., Iggo R., Gray A.C., Jichlinski P., Leisinger H.J., Benhattar J. 1996. Germ cell tumors of the testis overexpress wild-type p53. Am. J. Pathol. 149(4): 12211228.

89. Haapajarvi Т., Kivinen L., Heiskanen A., des Bordes C., Datto M.B., Wang X.F., Laiho M. 1999. UV radiation is a transcriptional inducer of p21(Cipl/Wafl) cyclin-kinase inhibitor in a p53-independent manner. Exp. Cell Res. 248(1): 272-279.

90. Haapajarvi Т., Pitkanen K., Laiho M. 1999. Human melanoma cell line UV responses show independency ofp53 function. Cell Growth Differ. 10(3): 163-171.149 I

91. Hainaut P., Milner J. 1993. Redox modulation of p53 conformation and sequence-specific DNA binding in vitro. Cancer Res. 53(19): 4469-4473.

92. Halevy O., Novitch B.G., Spicer D.B., Skapek S.X., Rhee J., Hannon G.J., Beach D., Lassar A.B. 1995. Correlation of terminal cell cycle arrest of skeletal muscle with induction of p21 by MyoD. Science. 267(5200): 10181021.

93. Harbour J.W., Dean D.C. 2000. The Rb/E2F pathway: expanding roles and emerging paradigms. Genes Dev. 14(19): 2393-2409.

94. Harper J.W., Adami G.R., Wei N., Keyomarsi K., Elledge S.J. 1993. The p21 Cdk-interacting protein Cipl is a potent inhibitor of G1 cyclin-dependent kinases. Cell. 75(4): 805-816.

95. Harper J.W., Elledge S.J., Keyomarsi K., Dynlacht В., Tsai L.H., Zhang P., Dobrowolski S., Bai C., Connell-Crowley L., Swindell E., et al. 1995. Inhibition of cyclin-dependent kinases by p21. Mol. Biol. Cell. 6(4): 387-400.

96. Harvey M., McArthur M.J., Montgomery C.A., Bradley A., Donehower L.A. 1993. Genetic background alters the spectrum of tumors that develop in p53-deficient mice. FASEB J. 7(10): 938-943.

97. Harvey M., Sands A.T., Weiss R.S., Hegi M.E., Wiseman R.W., Pantazis P., Giovanella B.C., Tainsky M.A., Bradley A., Donehower L.A. 1993. In vitro growth characteristics of embryo fibroblasts isolated from p53-deficient mice. Oncogene. 8(9): 2457-2467.

98. Haupt Y., Rowan S., Shaulian E., Vousden K.H., Oren M. Induction of apoptosis in HeLa cells by trans-activation-deficient p53. Genes Dev. 1995 9(17): 2170-2183.

99. Hermeking H., Eick D. 1994. Mediation of c-Myc-induced apoptosis by p53. Science. 265(5181): 2091-2093.

100. Hermeking H., Lengauer C., Polyak К., He T.C., Zhang L., Thiagalingam S., Kinzler K.W., Vogelstein B. 1997. 14-3-3 sigma is a p53-regulated inhibitor ofG2/M progression. Mol. Cell. 1(1): 3-11.

101. Hershko A., Ciechanover A. 1998. The ubiquitin system. Annu. Reb. Biochem. 67: 425-479.

102. Hollstein M., Sidransky D., Vogelstein В., Harris C. 1991. p53 mutation in human cancer. Science. 253: 49-53.

103. Hollstein M., Rice K., Greenblatt M.S., Soussi Т., Fuchs R., Sorlie Т., Hovig E., Smith-Sorensen В., Montesano R., Harris C.C. 1994. Database of p53 gene somatic mutations in human tumors and cell lines. Nucleic Acids Res. 22(17): 3551-3555.

104. Honda R., Tanaka H., Yasuda H. 1997. Oncoprotein MDM2 is a ubiquitin ligase E3 for tumor suppressor p53. FEBS Lett. 420(1): 25-27.

105. Hoyt M.A., Totis L., Roberts B.T. S. cerevisiae genes required for cell cycle arrest in response to loss of microtubule function. Cell. 1991 66(3): 507-517.

106. Hsiao M., Low J., Dorn E., Ku D., Pattengale P., Yeargin J., Haas M. 1994. Gain-of-function mutations of the p53 gene induce lymphohematopoietic metastatic potential and tissue invasiveness. Am. J. Pathol. 145(3): 702-714.

107. Hupp T.R., Meek D.W., Midgley C.A., Lane D.P. 1993. Activation of the cryptic DNA binding function of mutant forms of p53. Nucleic Acids Res. 21(14): 3167-3174.

108. Hupp T.R., Sparks A., Lane D.P. 1995. Small peptides activate the latent sequence-specific DNA binding function of p 53. Cell. 83(2): 237-245.

109. Israeli D., Tessler E., Haupt Y., Elkeles A., Wilder S., Amson R., Telerman A., Oren M. 1997. A novel p53-inducible gene, PAG608, encodes a nuclear zinc finger protein whose overexpression promotes apoptosis. EMBO J. 16(14): 4384-4392.

110. Iwabuchi K, Li В., Massa H.F., Trask B.J., Date Т., Fields S. 1998. Stimulation of p53-mediated transcriptional activation by the p53-binding proteins, 53BP1 and 53BP2. J. Biol. Chem. 273(40):26061-26068.

111. Jayaraman L., Prives C. 1999. Covalent and noncovalent modifiers of the p53 protein. Cell Mol. Life Sci. 55(1): 76-87.

112. Jiang H., Lin J, Su Z.Z., Collart F.R., Huberman E, Fisher P.B. Induction of differentiation in human promyelocytic HL-60 leukemia cells activates p21, WAF1/CIP1, expression in the absence of p53. Oncogene. 1994 9(11): 33973406.

113. Jimenez G.S, Khan S.H, Stommel J.M., Wahl J.M. (1999). p53 regulation by post-translational modification and nuclear retention in response to diverse stresses. Oncogene. 18: 7656-7665.

114. Jin S, Antinore M.J, Lung F.D, Dong X, Zhao H, Fan F, Colchagie A.B, Blanck P, Roller P.P., Fornace A.J, Zhan Q. 2000. The GADD45 inhibition of Cdc2 kinase correlates with GADD45-mediated growth suppression. J. Biol. Chem. 275(22): 16602-16608.

115. Kastan M.B, Onyekwere O, Sidransky D, Vogelstein B, Craig R.W. 1991. Participation of p53 protein in the cellular response to DNA damage. Cancer Res. 51(23 Pt 1): 6304-6311.

116. Kastan M.B, Zhan Q, el-Deiry W.S, Carrier F, Jacks T, Walsh W.V, Plunkett B.S, Vogelstein B, Fornace A.J. 1992. A mammalian cell cycle checkpoint pathway utilizing p53 and GADD45 is defective in ataxia-telangiectasia. Cell. 71(4): 587-597.

117. Kasten MM, Giordano A. 1998. pRb and the cdks in apoptosis and the cell cycle. Cell Death Differ. 5(2): 132-140.

118. Kelman Z. 1997. PCNA: structure, functions and interactions. Oncogene. 14(6): 629-640.

119. Khan S.H, Wahl G.M. 1998. p53 and pRb prevent rereplication in response to microtubule inhibitors by mediating a reversible G1 arrest. Cancer Res. 58(3): 396-401.

120. Khan S.H, Moritsugu J, Wahl G.M. 2000. Differential requirement for pl9ARF in the p53-dependent arrest induced by DNA damage, microtubule disruption, and ribonucleotide depletion. Proc. Natl. Acad. Sci, USA. 97(7): 3266-3271.

121. Kieser A., Weich H.A., Brandner G., Marme D., Kolch W. 1994. Mutant p53 potentiates protein kinase С induction of vascular endothelial growth factor expression. Oncogene. 9(3): 963-969.

122. King K.L., Cidlowski J.A. 1998. Cell cycle regulation and apoptosis. Annu. Rev. Physiol. 60: 601-617.

123. Kitaura H., Shinshi M., Uchikoshi Y., Ono Т., Iguchi-Ariga S.M., Ariga H. 2000. Reciprocal regulation via protein-protein interaction between c-Myc and p21(cipl/wafl/sdil) in DNA replication and transcription. J. Biol. Chem. 275(14): 10477-10483.

124. Ко L.J., Shieh S.Y., Chen X., Jayaraman L., Tamai K., Taya Y., Prives C., Pan Z.Q. 1997. p53 is phosphorylated by CDK7-cyclin H in a p36MATl-dependent manner. Mol. Cell Biol. 17(12): 7220-7229.

125. Koepp D.M., Harper J.W., Elledge S.J. 1999. How the cyclin became a cyclin: regulated proteolysis in the cell cycle. Cell. 97(4): 431-434.

126. Kranenburg O., de Groot R.P., Van der Eb A.J., Zantema A. Differentiation of PI9 EC cells leads to differential modulation of cyclin-dependent kinase activities and to changes in the cell cycle profile. Oncogene. 1995 10(1): 8795.

127. Krek W., Ewen M.E., Shirodkar S., Arany Z., Kaelin W.G., Livingston D.M. 1994. Negative regulation of the growth-promoting transcription factor E2F-1 by a stably bound cyclin A-dependent protein kinase. Cell. 78(1): 161-172.

128. Kubbutat M.H., Jones S.N., Vousden K.H. 1997. Regulation of p53 stability by Mdm2. Nature. 387(6630): 299-303.

129. Kubbutat M.H., Vousden K.H. 1997. Proteolytic cleavage of human p53 by calpain: a potential regulator of protein stability. Mol. Cell Biol. 17(1): 460468.

130. Kuerbitz S.J., Plunkett B.S., Walsh W.V., Kastan M.B. 1992. Wild-type p53 is a cell cycle checkpoint determinant following irradiation. Proc. Natl. Acad. Sci., USA 89(16): 7491-7495.

131. Kung A.L., Zetterberg A., Sherwood S.W., Schimke R.T. 1990. Cytotoxic effects of cell cycle phase specific agents: result of cell cycle perturbation. Cancer Res. 50(22): 7307-7317.

132. LaBaer J., Garrett M.D., Stevenson L.F., Slingerland J.M., Sandhu C., Chou H.S., Fattaey A., Harlow E. 1997. New functional activities for the p21 family ofCDK inhibitors. Genes Dev. 11(7): 847-862.

133. Lakin N.D., Jackson S.P. 1999. Regulation of p53 in response to DNA damage. Oncogene. 18(53): 7644-7655.

134. Lane D.P., Crawford L.V. 1979. T antigen is bound to a host protein in SV40-transformed cells. Nature. 278(5701): 261-263.

135. Lane D. P. 1992. p53, guardian of the genome. Nature. 358: 15-16.

136. Lanni J.S., Jacks T. 1998. Characterisation of the p53-dependent postmitotic checkpoint following spindle disruption. Mol. Cel. Biol., 18: 1055-1064.

137. Levine A.J. 1997. P53, the cellular gatekeeper for growth and division. Cell. 88:323-331.

138. Li Y., Glozak M.A., Smith S.M., Rogers M.B. The expression and activity of D-type cyclins in F9 embryonal carcinoma cells: modulation of growth by RXR-selective retinoids. Exp. Cell Res. 1999 253(2): 372-384.

139. Linke S.P., Clarkin K.C., Di Leonardo A., Tsou A., Wahl G.M. 1996. A reversible, p53-dependent G0/G1 cell cycle arrest induced by ribonucleotide depletion in the absence of detectable DNA-damage. Genes Dev., 10: 834947.

140. Linzer D.I., Levine A J. 1979. Characterization of a 54K dalton cellular SV40 tumor antigen present in SV40-transformed cells and uninfected embryonal carcinoma cells. Cell. 17(1): 43-52.

141. Liu M., Iavarone A., Freedman L.P. 1996. Transcriptional activation of the human p21(WAFl/CIPl) gene by retinoic acid receptor. Correlation with retinoid induction of U937 cell differentiation. J. Biol. Chem. 271(49): 3172331728.

142. Lohrum M.A., Vousden K.H. 2000. Regulation and function of the p53-related proteins: same family, different rules. Trends Cell Biol. 10(5): 197202.

143. Lowe S.W., Ruley H.E., Jacks Т., Housman D. E. 1993. p53-dependent apoptosis modulates the cytotoxicity of anticancer agents. Cell. 74: 957-967.

144. Lowe S.W., Schmitt E.M., Smith S.W., Osborne B.A., Jacks T. 1993. p53 is required for radiation-induced apoptosis in mouse thymocytes. Nature. 362(6423): 847-849.

145. Luo J.C., Neugut A.I., Garbowski G., Forde K.A., Treat M., Smith S., Carney W.P., Brandt-Rauf P.W. 1995. Levels of p53 antigen in the plasma of patients with adenomas and carcinomas of the colon. Cancer Lett. 91(2): 235-240.

146. Lutzker S.G. 1998. P53 tumour suppressor gene and germ cell neoplasia. APMIS. 106(1): 85-89.

147. Lutzker S.G., Levine A.J. 1996. A functionally inactive p53 protein in teratocarcinoma cells is activated by either DNA damage or cellular differentiation. Nature Med. 2(7): 82-110.

148. Mack D.H., Vartikar J., Pipas J.M., Laimins L.A. 1993. Specific repression of TATA-mediated but not initiator-mediated transcription by wild-type p53. Nature. 363(6426): 281-283.

149. Maki C.G., Howley P.M. 1997. Ubiquitination of p53 and p21 is differentially affected by ionizing and UV radiation. Mol. Cell Biol. 17(1): 355-363.

150. Maki C.G., Huibregtse J.M., Howley P.M. 1996. In vivo ubiquitination and proteasome-mediated degradation ofp53(l). Cancer Res. 56(11): 2649-2654.

151. Marin M.C., Kaelin W.G. 2000. рбЗ and p73: old members of a new family. Biochim. Biophys. Acta. 1470(3): M93-M100.

152. Martin G. 1980. Teratocarcinomas and mammalian embryogenesis. Science. 209: 768-775.

153. Matsumura I., Ishikawa J., Nakajima K., Oritani K., Tomiyama Y., Miyagawa J., Kato Т., Miyazaki H., Matsuzawa Y., Kanakura Y. 1997. Thrombopoietin-induced differentiation of a human megakaryoblastic leukemia cell line,

154. CMK, involves transcriptional activation of p21(WAFl/Cipl) by STAT5. Mol. Cell Biol. 17(5): 2933-2943.

155. May P., May E. 1999. Twenty years of p53 research: structural and functional aspects of the p53 protein. Oncogene. 18(53): 7621-7636.

156. Mayo L.D., Berberich S. 1996. Wild-type p53 protein is unable to activate the mdm-2 gene during F9 cell differentiation. Oncogene. 13: 2315-2321.

157. Mazumder S., Gong В., Almasan A. 2000. Cyclin E induction by genotoxic stress leads to apoptosis of hematopoietic cells. Oncogene. 19(24): 28282835.

158. McDonald E.R., Wu G.S., Waldman Т., El-Deiry W.S. 1996. Repair Defect in p21 WAF1/CIP1 -/- human cancer cells. Cancer Res. 56(10):.2250-2255.

159. Medema R.H., Klompmaker R., Smits V.A., Rijksen G. 1998 p21/Wafl can block cells at two points in the cell cycle, but does not interfere with processive DNA-replication or stress-activated kinases. Oncogene. 16(4): 431-441.

160. Minn A.J., Boise L.H., Thompson C.B. 1996. Expression of Bcl-xL and loss of p53 can cooperate to overcome a cell cycle checkpoint induced by mitotic spindle damage. Genes Dev. 10(20): 2621-2631.

161. Miyashita Т., Krajewski S., Krajewska M., Wang H.G., Lin H.K, Liebermann D.A., Hoffman В., Reed J.C. 1994. Tumor suppressor p53 is a regulator of bcl-2 and bax gene expression in vitro and in vivo. Oncogene. 9(6): 17991805.

162. Moll U.M., Ostermeyer A.G., Haladay R., Winkfield В., Frazier M., Zambetti G. 1996. Cytoplasmic sequestration of wild-type p53 protein impairs the G1 checkpoint after DNA damage. Mol. Cell Biol. 16(3): 1126-1137.

163. Mosmann T. 1983. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J. Immunol. Methods. 65(1-2): 55-63.

164. Mosner J., Mummenbrauer Т., Bauer C., Sczakiel G., Grosse F., Deppert W. 1995. Negative feedback regulation of wild-type p53 biosynthesis. EMBO J. 14(18): 4442-4449.

165. Mummery C.L., van Rooijen M.A., van den Brink S.E., de Laat S.W. 1987. Cell cycle analysis during retinoic acid induced differentiation of a human embryonal carcinoma-derived cell line. Cell Differ. 20(2-3): 153-160.

166. Murphy et al. 1999. Transcriptional repression by wild-type p53 utilizes histone deacetilases mediated by interaction with . Genes Dev. 13:2490-2501.

167. Namba H., Нага Т., Tukazaki Т., Migita K., Ishikawa N., Ito K., Nagataki S., Yamashita S. 1995. Radiation-induced G1 arrest is selectively mediated by the p53-WAFl/Cipl pathway in human thyroid cells. Cancer Res. 55(10): 2075-2080.

168. Nelson W.G., Kastan M.B. 1994. DNA strand breaks: the DNA template alterations that trigger p53-dependent DNA damage response pathways. Mol. Cell Biol. 14(3): 1815-1823.

169. Noda A., Ning Y., Venable S.F., Pereira-Smith O.M., Smith J.R. 1994. Cloning of senescent cell-derived inhibitors of DNA synthesis using an expression screen. Exp. Cell Res. 211(1): 90-98.

170. Owen-Schaub L.B, Zhang W, Cusack J.C, Angelo L.S, Santee S.M, Fujiwara T, Roth J.A, Deisseroth A.B, Zhang W.W, Kruzel E, et al. 1995. Wild-type human p53 and a temperature-sensitive mutant induce Fas/APO-1 expression. Mol. Cell Biol. 15(6): 3032-3040.

171. Pardee A.B. 1989. G1 events and regulation of cell proliferation. Science. 246(4930): 603-608.

172. Paulson T.G, Almasan A., Brody L.L, Wahl G.M. 1998. Gene amplification in a p53-deficient cell line requires cell cycle progression under conditions that generate DNA breakage. Mol. Cell Biol. 18(5): 3089-3100.

173. Pennica D, Goeddel D.V, Hayflick J.S, Reich N.C, Anderson C.W, Levine A.J. 1984. The amino acid sequence of murine p53 determined from a c-DNA clone. Virology. 134(2): 477-482.

174. Pera M.F, Reubinoff B, Trounson A. 2000. Human embryonic stem cells. J. Cell Sci. 113(Pt 1): 5-10.

175. Perreault J, Lemieux R. 1993. Rapid apoptotic cell death of B-cell hybridomas in absence of gene expression. J. Cell Physiol. 156: 286-293.186.Piskley et al, 1994

176. Polyak K, Waldman T, He T.C, Kinzler K.W, Vogelstein B. 1996. Genetic determinants of p53-induced apoptosis and growth arrest. Genes Dev. 10(15): 1945-1952.

177. Polyak K, Xia Y, Zweier J.L, Kinzler K.W, Vogelstein B. 1997. A model for p53-induced apoptosis. Nature. 389(6648): 300-305.

178. Poon R.Y.C, Hunter T. 1998. Expression of a novel form of p21WAFl/ CIP1 in UV-irradiated and transformed cells. Oncogene. 16: 1333-1343.

179. Porter D.C, Keyomarsi K. 2000. Novel splice variants of cyclin E with, altered substrate specificity. Nucleic Acids Res. 28(23): El01.

180. Prendergast G.C. 1999. Mechanisms of apoptosis by c-Myc. Oncogene. 18(19): 2967-2987.

181. Prost S., Bellamy C.O., Clarke A.R., Wyllie A.H., Harrison D.J. 1998. p53-independent DNA repair and cell cycle arrest in embryonic stem cells. FEBS Lett. 425(3): 499-504.

182. Quelle D.E., Ashmun R.A., Hannon G.J., Rehberger P.A., Trono D., Richter K.H., Walker C., Beach D., Sherr C.J., Serrano M. 1995. Cloning and characterization of murine pl6INK4a and pl5INK4b genes. Oncogene. 11(4): 635-645.

183. Radford I.R. 1994. p53 status, DNA double-strand break repair proficiency, and radiation response of mouse lymphoid and myeloid cell lines. Int. J. Radiat. Biol. 66(5): 557-560.

184. Rieder C.L., Palazzo R.E. 1992. Colcemid and the mitotic cycle. J. Cell Sci. 102(Pt 3): 387-392.

185. Roberts J.M., Koff A., Polyak K., Firpo E., Collins S., Ohtsubo M., Massague J. 1994. Cyclins, Cdks, and cyclin kinase inhibitors. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 59: 31-38.

186. Robertson E.J. 1987. Teratocarcinomas and embryonic stem cells: a practical approach. IRL Press: Oxford, UK, 71-112.

187. Rosenstraus M.J., Sundell C.L., Liskay R.M. 1982. Cell-cycle characteristics of undifferentiated embryonal carcinoma cells. Dev. Biol. 89: 516-520.

188. Sabapathy K., Klemm M., Jaenisch R., Wagner E.F. 1997. Regulation of ES cell differentiation by functional and conformational modulation of p53. EMBOJ. 16(20): 6217-6229.

189. Sabbatini P., Lin J., Levine A.J., White E. 1995. Essential role for p53-mediated transcription in ElA-induced apoptosis. Genes Dev. 9(17): 21842192.

190. Savatier P., Huang S., Szekely L., Wiman K.G., Samamt J. 1994. Contrasting patterns of retinoblastoma protein expression in mouse embryonic fibroblasts. Oncogene. 9: 809-818.

191. Scheffner M., Huibregtse J.M., Viestra R.D., Howley P.M. 1993. Cell. 75: 495-505.

192. Schneider E., Montenarh M., Wagner P. 1998. Regulation of CAK kinase activity by p53. Oncogene. 17(21): 2733-2741.

193. Schott A.F., Apel I.J., Nunez G., Clarke M.F. 1995. Bcl-XL protects cancer cells from p53-mediated apoptosis. Oncogene. 11(7): 1389-1394.

194. Selivanova G., Kawasaki Т., Ryabchenko L., Wiman K.G. 1998. Reactivation of mutant p53: a new strategy for cancer therapy. Semin. Cancer Biol. 8(5): 369-378.

195. Selivanova G., Ryabchenko L., Jansson E., Iotsova V., Wiman K.G. 1999. Reactivation of mutant p53 through interaction of a C-terminal peptide with the core domain. Mol. Cell Biol. 19(5): 3395-3402.

196. Shaw P., Freeman J., Bovey R., Iggo R. 1996. Regulation of specific DNA binding by p53: evidence for a role for O-glycosylation and charged residues at the carboxy-terminus. Oncogene. 12(4): 921-930.

197. Sheaff R.J., Singer J.D., Swanger J., Smitherman M., Roberts J.M., Clurman B.E. 2000. Proteasomal turnover of p21Cipl does not require p21 Cipl ubiquitination. Mol. Cell. 5(2): 403-410.

198. SherrC.J. 1996. Cancer cell cycles. Science. 274(5293): 1672-1677.

199. Sherr C.J. 2000. The Pezcoller lecture: cancer cell cycles revisited. Cancer Res. 60(14): 3689-3695.

200. Sherr C.J., Roberts J.M. 1999. CDK inhibitors: positive and negative regulators ofGl-phase progression. Genes Dev. 13(12): 1501-1512.

201. Sherr C.J., Weber J.D. 2000. The ARF/p53 pathway. Curr. Opin. Genet. Dev. 10(1): 94-99.

202. Schmidt-Kastner P.K., Jardine K., Cormier M., McBurney M.W. 1998. Absence of p53-dependent cell cycle regulation in pluripotent mouse cell lines. Oncogene. 16(23): 3003-3011.

203. Siu W.Y., Yam C.H., Poon R.Y. 1999. G1 versus G2 cell cycle arrest after adriamycin-induced damage in mouse Swiss3T3 cells. FEBS Lett. 461(3): 299-305.

204. Sleigh M.J. 1992. Differentiation and proliferation in mouse embryonal carcinoma cells. BioAssays. 14: 769-775

205. Snowden A.W, Anderson L.A., Webster G.A., Perkins N.D. 2000. A novel transcriptional repression domain mediates p21(WAFl/CIPl) induction of рЗОО transactivation. Mol.Cell Biol. 20(8): 2676-2686.

206. Solter D., Skreb N., Damjanov I. 1970. Extrauterine growth of mouse egg-cylinders results in malignant teratoma. Nature. 227(257): 503-504.

207. Somasundaram K., Zhang H., Zeng Y.X., Houvras Y., Peng Y., Zhang H., Wu G.S., Licht J.D., Weber B.L., El-Deiry W.S. 1997. Arrest of the cell cycle by the tumour-suppressor BRCA1 requires the CDK-inhibitor p21WAFl/CiPl. Nature. 389(6647): 187-190.

208. Spruck C.H., Won K.A., Reed S.I. 1999. Reregulated cyclin E induces chromosome instability. Nature. 401(6750): 297-300.

209. Stevens LC. 1967. Origin of testicular teratomas from primordial germ cells in mice. J. Natl. Cancer Inst. 38(4): 549-552.

210. Stewart Z.A., Mays D., Pietenpol J.A. 1999. Defective Gl-S cell cycle checkpoint function sensitizes cells to microtubule inhibitor-induced apoptosis. Cancer Res. 59(15): 3831-3837.

211. Strickland S., Smith K.K., Marotty K.R. 1980. Hormonal induction of differentiaton in teratocarcinoma stem cells: generation of parietal endoderm by retinoic acid and dibutiril cAMP. Cell. 21: 347-355.

212. Strickland S., Mahdavi V. 1978. The induction of differentiation in teratocarcinoma stem cells by retinoic acid. Cell. 15: 393-403.

213. Thomas K.R., Capecchi M.R. 1987. Site-directed mutagenesis by gene targeting in mouse embryo-derived stem cells. Cell. 51(3): 503-512.

214. Van Meir E.G., Polverini P.J., Chazin Y.R., Su Huang H.J., de Tribolet-N., Cavenee W.K. 1994. Release of an inhibitor of angiogenesis upon inductionof wild type p53 expression in glioblastoma cells. Nature Genet. 8(2): 171176.

215. Vistica D.T., Skehan P., Scudiero D., Monks A., Pittman A., Boyd M.R. 1991. Tetrazolium-based assays for cellular viability: a critical examination of selected parameters affecting formazan production. Cancer Res. 51(10): 25152520.

216. Wagner A.J., Kokontis J.M., Hay N. 1994. Мус mediated apoptosis requires wild-type p53 in a manner independent of cell cycle arrest and the ability of p53 to induce p21wafl/cipl. Genes Dev. 8(23): 2817-2830.

217. Waldman Т., Kinzler K.W., Vogelstein B. 1995. p21 is necessary for the p53 mediated Gl-arret in human cancer cells. Cancer Res. 55: 5187-5190.

218. Waldman Т., Lengauer C., Kinzler K.W., Vogelstein B. 1996. Uncoupling of S phase and mitosis induced by anticancer agents in cells lacking p21. Nature. 381(6584): 713-716.

219. Walker K.K., Levine A.J. 1996. Identification of a novel p53 functional domain that is necessary for efficient growth suppression. Proc. Natl. Acad. Sci., USA. 93(26): 15335-15340.

220. Wang X.W., Zhan Q., Coursen J.D., Khan M.A., Kontny H.U., Yu L., Hollander M.C., O'Connor P.M., Fornace A.J., Harris C.C. 1999. GADD45 induction of a G2/M cell cycle checkpoint. Proc. Natl. Acad. Sci., USA. 96(7): 3706-3711.

221. Waterman M.J., Stavridi E.S., Waterman J.L, Halazonetis T.D. 1998. ATM-dependent activation of p53 involves dephosphorylation and association with 14-3-3 proteins. Nature Genet. 19(2): 175-178.

222. Weiss J, Heine M., Arden K.C., Korner В., Pilch H., Herbst R.A., Jung E.G. 1995. Mutation and expression of TP53 in malignant melanomas. Recent Results Cancer Res. 139: 137-154.

223. Z--r-r. VV U ./V., JLJClji^ J .11., WlDVJll J-^-, J(V^V111C/ ГА-J. i. У У J . 1 111^ jj^j-linaiil-z.autoregulatory feedback loop. Genes Dev. 7(7A): 1126-1132.

224. Xiong Y., Hannon G.J., Zhang H., Casso D., Kobayashi R., Beach D. 1993. p21 is a universal inhibitor of cyclin kinases. Nature. 366(6456): 701-704.

225. Yam В., Jiang W., Meng R., Krantz I.D., Kao G., Gan D.D., Zhou J.Y. 1999. Mol. Cell Biol., 284: 25478-25482.

226. Yewdell J.W., Gannon J.V., Lane D.P. 1986. Monoclonal antibody analysis of p53 expression in normal and transformed cells. J. Virol. 59(2): 444-452.

227. Yonish-Rouach E., Deguin V., Zaitchouk Т., Breugnot C., Mishal Z., Jenkins J.R., May E. 1995. Transcriptional activation plays a role in the induction of apoptosis by transiently transfected wild-type p53. Oncogene. 11(11): 21972205.

228. Yonish-Rouach E. 1996. The p53 tumour suppressor gene: a mediator of a G1 growth arrest and of apoptosis. Experientia. 52(10-11): 1001-1007.164

229. Zamble D.B., Jacks Т., Lippard S.J. 1998. p53-Dependent and -independent responses to cisplatin in mouse testicular teratocarcinoma cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95(11): 6163-6168.

230. Zauberman A., Lupo A., Oren M. 1995. Identification of p53 target genes through immune selection of genomic DNA: the cyclin G gene contains two distinct p53 binding sites. Oncogene. 10(12): 2361-2366.

231. Zhan Q., Alamo I., Yu K., Boise L.H., Cherney В., Tosato G., O'Connor P.M., Fornace A.J. The apoptosis-associated gamma-ray response of BCL-X(L) depends on normal p53 function. Oncogene. 1996 13(10): 2287-2293.

232. Zhan Q., Chen I.T., Antinore M.J., Fornace A.J. 1998. Tumor suppressor p53 can participate in transcriptional induction of the GADD45 promoter in the absence of direct DNA binding. Mol. Cell Biol. 18(5): 2768-2778.

233. Zhan Q., Antinore M.J., Wang X.W., Carrier F., Smith M.L., Harris C.C., Fornace A.J. Association with Cdc2 and inhibition of Cdc2/Cyclin В1 kinase activity by the p53-regulated protein Gadd45. Oncogene. 1999 18(18): 28922900.

234. Zhang Y., Fujita N., Tsuruo T. 1999. Caspase-mediated cleavage of p21Wafl/Cipl converts cancer cells from growth arrest to undergoing apoptosis. Oncogene. 18(5): 1131-1138.