Исследование генетических механизмов корегуляции метаболизма азота и фосфора у дрожжей Saccharomyces cerevisiae тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.07, кандидат биологических наук Савинов, Владимир Александрович

• Савинов, Владимир Александрович
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Савинов, Владимир Александрович

Список использованных сокращений

Введение

1. Регуляция экспрессии генов у дрожжей БасскаготусеБ сегеу'1$'ше в ответ на изменение состава среды (Обзор литературы)

1.1. Регуляция транскрипции у дрожжей

1.1.1. Семейство транскрипционных факторов GATA

1.1.2. Регуляторные некодирующие РНК у дрожжей

1.2. Генетический контроль метаболизма азота и фосфора у дрожжей

1.2.1. Регуляция метаболизма азота у дрожжей

1.2.2. Регуляция метаболизма фосфора у дрожжей

1.2.3. Взаимодействия метаболических путей в клетке дрожжей

2. Материалы и методы

2.1. Основные обозначения

2.2. Штаммы дрожжей и бактерий

2.3. Плазмиды

2.4. Праймеры

2.5. Среды и условия культивирования штаммов

2.6. Методы

3. Результаты и обсуждение

3.1. Влияние источника азота на экспрессию гена PHOS и активность фермента КФ Pho3p

3.2. Разработка системы селективного отбора мутантов с нарушенной регуляцией гена PHOS

3.3. Получение и анализ мутантов Ure+ у трансформантов

YM954[pTLl] и [pSF28]

3.4. Анализ последовательности промотора гена PHOS

3.5. Поиск генов, компенсирующих эффект мутаций giibl и giib

3.6. Идентификация гена, компенсирующего эффект мутации

3.7. Определение нуклеотидной последовательности гена RSP5 у мутантного штамма 5-YM

3.8. Выделение плазмид, содержащих фрагменты ДЬЖ, компенсирующих эффект мутации gubl, из генных библиотек дрожжей

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование генетических механизмов корегуляции метаболизма азота и фосфора у дрожжей Saccharomyces cerevisiae»

Актуальность проблемы. Физиология микроорганизмов, от бактерий Escherichia coli до дрожжей Saccharomyces cerevisiae, в значительной степени зависит от условий изменчивой окружающей среды. Адаптивный ответ клетки заключается в коррекции метаболических процессов, изменении скорости роста и деления, переходе к споруляции, мицелиальному росту и так далее. Дефицит в среде одного из макроэлементов, углерода, азота или фосфора, в короткий срок приводит к истощению его внутриклеточных резервов и одновременно меняет уровень экспрессии целых групп генов: некоторые активируются, другие репрессируются.

В бактериальных клетках координирование экспрессии генов достигается за счет оперонной организации генома: группа тесно сцепленных структурных генов, кодирующих ферменты и транспортные белки одного метаболического пути, находится под контролем общего промотора и оператора, с которым связывается фактор транскрипции, продукт регуляторного гена. Часто этот транскрипционный регулятор является одновременно внутриклеточным рецептором для молекул, которые синтезируются или расщепляются в ходе работы закодированных в данном опероне ферментов, как, например, в случае триптофанового и лактозного оперонов, соответственно (Jacob & Monod, 1961; Morse et al., 1969). Таким образом, в клетках бактерий сигнальный каскад, оповещающий о колебаниях состава среды, максимально компактизован и обеспечивает мгновенную передачу сигнала, изменение метаболизма и адаптивную реакцию клетки.

В эукариотических клетках и у дрожжей, в частности, опероны отсутствуют, сигнальные каскады многоэтапные, а регуляция экспрессии значительно усложнена. Тем не менее, на изменение состава среды клетки стремительно отвечают перестройкой метаболизма. Мишенями для сигнальных молекул являются как регуляторные белки, так и гены, кодирующие ключевые ферменты метаболизма. Определенный транскрипционный фактор способен влиять на уровень экспрессии целого ряда генов, кодирующих ферменты какого-либо метаболического пути, за счет наличия в их промоторах сходных последовательностей. Несмотря на физическую разобщенность таких генов, они регулируются координировано, аналогично бактериальному оперону, что позволяет говорить о наличии так называемых «регулонов» в геноме дрожжей. Другие регуляторные белки могут влиять на экспрессию генов, кодирующих третьи регуляторы, которые могут контролировать работу генов того же метаболизма или взаимодействовать с генами, обеспечивающими иные процессы в клетке. Известно, что у дрожжей более 30% генома составляют гены, промоторные области которых распознаются несколькими транскрипционными факторами, что это является характерной чертой эукариот (Lee et al., 2002). Некоторые гены располагают в промоторах сайтами связывания для активаторов или репрессоров разных метаболических путей и могут воспринимать сигналы об изменении качества и количества разных биогенных элементов. Кроме того, одни и те же регуляторные белки могут быть активаторами одних путей и репрессорами других (Попова и др., 2000; Pina et al., 2003). Таким образом, отдельный внешний стимул может усиливаться при передаче по внутриклеточным каскадам и вызывать глобальные изменения экспрессии всего генома. У дрожжей изучена экспрессия более 6000 генов в ответ на недостаток в среде отдельных биогенных элементов, таких как азот, углерод или фосфор. Предложены модели интегрального ответа клетки на дефицит того или иного компонента среды (Самбук, 2005; Bradley et al., 2009; Ogawa et al., 2000; Staschke et al., 2010).

Несмотря на широкое применение современных технологий, особенности регуляции отдельных генов в ответ на различные сигналы среды часто изучены недостаточно. Можно предположить, что в дрожжевой клетке существует гораздо более разветвленная сеть регуляторных каскадов, чем известно сейчас. Для поиска новых точек пересечения таких каскадов необходимо использовать удобные генетические модели. В настоящей работе в качестве модели для изучения механизмов координированной регуляции был выбран ген РНОЗ, кодирующий кКФ дрожжей.

Азот - важнейший компонент макромолекул, выполняющих центральные функции в живых системах. В связи с этим прокариотические и эукариотические организмы выработали сложные механизмы для обеспечения клеток азотом. В 2006 году был проведён анализ транскриптома дрожжей с помощью ДНК-биочипов. Были выявлены 392 гена, уровень экспрессии которых каким-либо образом реагировал на изменение источника азота в среде и обработку клеток рапамицином, антибиотиком, вызывающим у дрожжей состояние азотного голодания. Авторы распределили эти гены на четыре группы. В первую группу были объединены гены, экспрессия которых была значительно индуцирована и после переноса клеток на среду с пролином, менее удобным источником азота, и после обработки рапамицином. Эти гены кодируют ферменты катаболизма азотистых соединений, транскрипционные регуляторы генов азотного метаболизма, белки-переносчики, белки протеолиза и другие. Вторая группа включает гены, индуцируемые при азотном голодании, но степень их дерепрессии на пролине меньше. В этой группе - гены ответа на стресс. Третья группа объединяет гены, экспрессия которых снижается в ответ на азотное голодание. В основном, сюда относятся гены аминокислотного и нуклеотидного метаболизма, белкового синтеза и транспорта. Четвертая группа состоит из генов, также репрессируемых во время роста на среде с бедным источником азота. Большая часть генов кодирует компоненты белок-синтезирующего аппарата, факторов сборки рибосом. В этой же группе идентифицированы гены изозима репрессибельной кислой фосфатазы PHOll (Scherens et al., 2006). Уровень экспрессии генов РНОЗ и PHÖ5, кодирующих основные фракции КФ дрожжей, отвечающих за утилизацию всевозможных фосфорсодержащих соединений, также уменьшается при азотном голодании

Hardwick et al., 1999; Gasch et al., 2000; Bradley et al., 2009). Таким образом, очевидно, что регуляторы метаболизма азота играют ключевую роль в координации клеточных процессов. Однако генетический контроль азотной регуляции экспрессии генов РНО не изучен. Особый интерес представляет ген PHOS. Экспрессия этого гена не регулируется в зависимости от концентрации фосфата в среде, однако строго репрессируется тиаминпирофосфатом.

Целью данной работы являлся поиск общих путей регуляции метаболизма азота и фосфора на примере гена РНОЗ у дрожжей S. cerevisiae. В задачи исследования входило:

1) изучить зависимость уровня экспрессии гена РНОЗ от качества источника азота в среде;

2) получить и охарактеризовать регуляторные мутации, влияющие на экспрессию гена РНОЗ в ответ на изменение источника азота в среде;

3) клонировать гены, мутации в которых влияют на экспрессию гена РНОЗ при изменении источника азота в среде;

4) предложить модели регуляции экспрессии гена РНОЗ в зависимости от типа источника азота.

Научная новизна исследования. В ходе работы показано, что экспрессия гена РНОЗ регулируется в зависимости от типа источника азота в среде. Ген РНОЗ не является объектом азотной катаболитной репрессии. Впервые показано, что экспрессия этого гена существенно возрастает на средах с глутаматом в качестве единственного источника азота. Предложенная в работе селективная система позволила расширить спектр мутаций, влияющих на экспрессию гена РНОЗ в зависимости от источника азота. Были выявлены возможные механизмы регуляции экспрессии гена РНОЗ: на уровне транскрипции при участии репрессора генов азотного метаболизма Gzßp и на посттранскрипционном уровне - с помощью убиквитин-лигазы Rsp5p.

Практическая ценность. Изучение регуляции промотора гена РНОЗ различными факторами среды представляет теоретический и практический интерес. Экспрессия гена РНОЗ имеет достаточно высокий уровень, но в отличие от гена РН05, не зависит от изменений концентрации фосфата в среде. Промотор РНОЗ может быть использован в биотехнологии (Okabayashi et al., 1990), однако, в отличие от промотора PHÖ5, его практически не используют, так как в некоторых случаях конститутивная экспрессия гетерологичного гена может быть токсична для клеток дрожжей (Парфенова и др., 2002; Matsuyama et al., 2008). Исследование генетического контроля экспрессии гена РНОЗ в ответ на изменение характера азотного питания позволит выявить новые регуляторные механизмы и может существенно расширить возможности его применения в биотехнологии для гетерологичного синтеза.

Штаммы и плазмиды, полученные в данной работе, используются при выполнении исследовательских работ в лаборатории биохимической генетики биолого-почвенного факультета СПбГУ.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Савинов, Владимир Александрович

Выводы

1. Выявлена зависимость экспрессии гена РНОЗ, кодирующего конститутивную кислую фосфатазу дрожжей Saccharomyces cerevisiae, от источника азота. Уровень экспрессии гена РНОЗ увеличивается на среде с глутаматом и снижается на среде с пролином.

2. Использование селективной системы гена ADE2 под контролем промотора гена РНОЗ позволило обнаружить регуляторные мутации, влияющие на экспрессию гена РНОЗ при росте дрожжей на среде с мочевиной. Мутации распределены по двум группам комплементации.

3. Генетический анализ мутантов 1,4,5,6-YM954 и секвенирование показали, что мутации gub 1,4,5,6 картируются в хромосоме V дрожжей и произошли в гене RSP5, кодирующему структуру убиквитин-лигазы.

4. Генетический анализ мутанта 7-YM954 показал, что мутация gub7 соответствует гену GZF3, кодирующему структуру белка-репрессора азотного метаболизма.

5. Выявлены общие механизмы регуляции метаболизма азота и фосфора на транскрипционном и посттранскрипционном уровне.

4. Заключение

Дрожжи S. cerevisiae являются удобным модельным объектом для изучения наследственности, изменчивости и, следовательно, эволюционных процессов. Этому способствуют короткий клеточный цикл, способность использовать широкий спектр химических соединений в среде для роста и развития, а также простота изучения генома. Накопленные знания свидетельствуют о том, что на молекулярном уровне эволюция происходит за счет фенотипического многообразия, обеспечиваемого в первую очередь изменениями механизмов генной регуляции, а не изменением функций отдельных генов и их продуктов. Исследования генома дрожжей показывают, что регуляторные связи быстро эволюционируют за счет взаимодействия консервативных транскрипционных факторов с различными группами генов и за счет накопления изменений одновременно в регуляторных последовательностях генов и связвающих доменах регуляторов (Hahn & Young, 2011).

Гены РН05 и PHOS изозимов КФ являются частным примером эволюции за счет изменения механизма регуляции. Эти гены произошли в результате дупликации общего предкового гена, тесно сцеплены в хромосоме И, обладают высокой степенью сходства на нуклеотидном (82%) и аминокислотном (87%) уровне. В сторону фланкирующих некодирующих последовательностей эта степень уменьшается до 65%. И совсем низкая степень сходства наблюдается в области промоторов этих генов (Bajwa et al., 1984). Модификация и дивергенция промоторных участков дуплицированных генов КФ привели к возникновению разных систем регуляции экспрессии близкородственных генов. Ген репрессибельной КФ РН05 регулируется количеством фосфата в среде (Johnston & Carlson, 1992). Экспрессия гена конститутивной КФ PHOS не зависит от фосфата, однако репрессируется тиамином (Singleton, 1997). Уровень экспрессии генов PHOS и РН05 также снижается при азотном голодании (Hardwick et al., 1999; Gasch et al., 2000; Bradley et al., 2009).

В результате проделанной работы с использованием селективного маркера для изучения регуляции гена РНОЗ нам удалось обнаружить общие элементы в регуляции генов метаболизма азота и фосфора. Были выявлены гены, продукты которых действуют на транскрипционном и посттранскрипционном уровне. Это ген, кодирующий структуру регулятора азотного метаболизма Gzf3p, который подавляет экспрессию гена РНОЗ при росте дрожжей в среде с мочевиной. Кроме того, были обнаружены мутанты по гену RSP5, кодирующему структуру убиквитин-лигазы. Эта группа мутантов выявила роль эпигенетического контроля в регуляции гена РНОЗ в зависимости от источника азота. Тот факт, что мутации в генах GZF3 и RSP5 приводят не только к усилению экспрессии РНОЗ, но и одновременно ведут к отсутствию роста на глутамате, свидетельствует о том, что мы выявили общие регуляторные белки и для гена РНОЗ, и для генов, отвечающих за утилизацию глутамата. На основании наших данных могут быть предложены несколько моделей регуляции гена РНОЗ в зависимости от источника азота в среде.

На среде с мочевиной и глюкозой фактор Gzf3p связывается с промоторной областью гена РНОЗ и блокирует его транскрипцию, координируя уровень экспрессии этого гена с потребностями клетки. Таким образом, не только фактор Gln3p (Staschke et al., 2010), но и фактор Gzf3p участвует в репрессии гена РНОЗ. Особенно интересно, что для генов азотного метаболизма фактор Gln3p - это активатор транскрипции, тогда как фактор Gzf3p - репрессор, а для гена РНОЗ оба фактора выступают в роли репрессоров. По всей видимости, убиквитин-лигаза Rsp5p способна регулировать активность белка Gzf3p, поскольку в настоящее время показано, что Gzfip имеет сайты убиквитинирования (Peng et al., 2003), а между генами GZF3 и RSP5 установлена регуляторная связь (Costanzo et al., 2010). Транкрипционный фактор Gzf3p, в свою очередь, может воздействовать на промотор гена РНОЗ напрямую или, как минимум, опосредованно через изменение количества тиаминпирофосфата в клетке.

Тиамин (витамин В1) необходим клетке для реакций цикла трикарбоновых кислот и пентозофосфатного пути окисления углеводов. Тиамин поступает в клетки дрожжей с помощью специфического мембранного белка-транспортера, продукта гена THI7. Кроме того, дрожжи могут синтезировать тиамин с помощью фермента, продукта гена THI4. Ген THI4 и другие THI-теяы полностью репрессируются с увеличением концентрации тиамина в среде, но в среде без тиамина уровень их экспрессии очень высок. В клетках тиамин становится функционально активным после фосфорилирования до тиаминпирофосфата и тиаминтрифосфата, которые являются кофакторами ферментов, например а-кетоглутаратдегидрогеназы, транскетолазы и других, участвующих в метаболизме аминокислот и углеводов (Singleton, 1997; Li et al., 2010). Фермент a-кетоглутаратдегидрогеназа при участии тиамина обеспечивает декарбоксилирование a-кетоглутарата, участника цикла трикарбоновых кислот, и образование глутамата, который является важным элементом метаболизма азота. С другой стороны, метаболизм тиамина тесно связан с обменом НАД1" и НАМ. Кроме того, НАД* является кофактором дегидрогеназ, например Gdh2p, контролирующей образование а-кетоглутарата из глутамата (Magasanik & Kaiser, 2002; Li et al., 2010). Перенос фосфатных групп на тиамин катализирует тиаминпирофосфокиназа, продукт гена THI80. Экспрессия THI80 регулируется внутриклеточным количеством тиаминпирофосфата по механизму обратной связи и также требует позитивных регуляторов, продуктов генов THI2 и THI3. Экспрессия THI80 существенна для роста клеток, а тиаминпирофосфокиназа является единственным ферментом у дрожжей, способным синтезировать тиаминпирофосфаты (Nosaka, 1990). В отличие от кКФ, тиаминпирофосфокиназа постоянно синтезируется хотя бы в малом количестве и её ген THI80 не репрессируется полностью при добавлении тиамина в среду (Nosaka et al., 1993). Добавление тиамина подавляет активность кКФ РЬоЗр и ферментов биосинтеза тиамина. Этот эффект обусловлен фактором негативной регуляции, продуктом гена THI81 (Nishimura et al., 1997).

Было показано, что фактор Gzf3p может связываться с промотором гена THI80 тиаминпирофосфокиназы, обеспечивающей активацию тиамина в клетке (Chua et al., 2006). В промоторе гена THI80 обнаружена последовательность GATAAG. Другой возможной мишенью фактора Gzf3p является тиазол-синтаза, кодируемая геном THI4, необходимая для биосинтеза тиамина. В промоторе этого гена в комплементарной цепи выявлены два сайта GATAAG (http://www.yeastract.com/). Таким образом, ген РНОЗ, как и гены THI80 и THI4, регулируются фактором Gzf3p.

Кроме этого, мутации rsp5 могут приводить к нарушению транспорта аминокислот в клетку и влиять на активность фактора Gln3p (Tate et al., 2006) и, следовательно, Gzf3p. Убиквитин-лигаза Rsp5p также участвует в убиквитинировании РНК-полимеразы II и, таким образом, может опосредованно влиять на уровень базальной транскрипции гена РНОЗ (Harreman et al., 2009).

Таким образом, мы показали, что экспрессия гена РНОЗ зависит от качества источника азота, и выявили участников регуляторного каскада, координирующих метаболизм азота и фосфата у дрожжей S. cerevisiae.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Савинов, Владимир Александрович, 2012 год

1. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. 460 с.

2. Захаров И.А., Кожин С.А., Кожина Т.Н. и др. Сборник методик по генетике дрожжей-сахаромицетов. Л.: Наука, 1984.

3. Остерман JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. М.: МЦНМО, 2002. 248 с.

4. Падкина М.В. Изучение функции генов, контролирующих активность кислой фосфатазы I у дрожжей Saccharomyces cerevisiae II Автореферат дисс. на соискание уч. ст. к. б. н. Л., 1978. 24 с.

5. Парфенова Л.В., Смирнов М.Н., Самбук Е.В., Падкина М.В. Продукция ß-интерферона человека в дрожжах Saccharomyces cerevisiae ведет к снижению активности цитохром-С-оксидазы // Биотехнология. 2002. № 6. С. 23-30.

6. Попова Ю.Г., Падкина М.В., Самбук Е.В. Влияние мутаций в генах РН085 и РН04 на утилизацию пролина у дрожжей Saccharomyces cerevisiae II Генетика. 2000. Т. 36, N 12. С. 1622-1628.

7. Савинов В. А., А. М. Румянцев, Е. В. Самбук, М. В. Падкина. Создание тест-системы для изучения генетического контроля регуляции гена алкогольоксидазы 1 дрожжей Pichia pastoris // Вестн. С.-Петерб. Ун-та. 2009. Сер.З, Вып.4. С. 114-119.

8. Савинов В. А., Самбук Е. В., Падкина М. В. Природные и рекомбинантные фитазы микроорганизмов // Вестн. С.-Петерб. Ун-та. 2007. Сер.З, Вып.2. С. 66-75.

9. Савинов В.А., Физикова А.Ю., Румянцев A.M., Самбук Е.В. Изучение механизмов регуляции гена РНОЗ в зависимости от источника азота в среде у дрожжей Saccharomyces cerevisiae II Экологическая генетика. 2011. Т. 9, N4. С. 70-78.

10. Самбук Е.В. Генетические механизмы реализации закона лимитирующего фактора у дрожжей Saccharomyces cerevisiae // Жур. общ. биол. 2005. Т. 66. № 4. С. 310-325.

11. Самбук Е.В., Попова Ю.Г., Физикова А.Ю. и др. Генетический анализ плейотропных эффектов мутаций pho85 у дрожжей Saccharomyces cerevisiae I/ Генетика. 2003. Т. 39, N 8. С. 1039-1045.

12. Самсонова М.Г., Падкина М.В., Краснопевцева Н.Г. и др. Генетико-биохимическое изучение кислых фосфатаз дрожжей Saccharomyces cerevisiae II Генетика. 1975. Т. 11, N 9. С. 104-115.

13. Тер-Аванесян М.Д. Генетический контроль активности экзогенной кислой фосфатазы I у дрожжей Saccharomyces cerevisiae II Дисс. на соискание уч. ст. к. б. н. Д., 1974. 169 с.

14. Adkins M.W., Tyler J.K. Transcriptional activators are dispensable for transcription in the absence of Spt6-mediated chromatin reassembly of promoter regions // Mol Cell. 2006. V. 21. P. 405-416.

15. Almeida R., Allshire R.C. RNA silencing and genome regulation // Trends in cell biol. 2005. V. 15, N 5. P. 251-258.

16. Aimer A., Rudolph H., Hinnen A., Horz W. Removal of positioned nucleosomes from the yeast PH05 promoter upon PH05 induction releases additional upstream activating DNA elements // EMBO J. 1986. V. 5. P. 2689-2696.

17. Andlid T.A., Veide J., Sandberg A. Metabolism of extracellular inositol hexaphosphate (phytate) by Saccharomyces cerevisiae II Int. J. of Food

18. Microb. 2004. N 97. P. 157-169.

19. Bajwa W., Meyhack B., Rudolph H. et al. Structural of two tandemly repeated acid phosphatase genes in yeast // Nucleic Acids Res. 1984. V. 12, N 20. P. 7721-7739.

20. Belova I.V., Sambuk E.V, Padkina M.V., Smirnov M.N. PH02 and GCN4 transcription activators in the regulation of Saccharomyces cerevisiae acid phosphatase synthesis // Genetika. 1992. V. 5, N 28. P. 11-18.

21. Berretta J., Pinskaya M., Morillon A. A cryptic unstable transcript mediates transcriptional trans-silencing of the Tyl retrotransposon in S. cerevisiae II Genes Dev. 2008. V. 22, N 5. P. 615-626.

22. Bertram P.G., Choi J.H., Carvalho J. et al. Convergence of TOR-nitrogen and Snfl-glucose signaling pathways onto Gln3 // Mol.Cell.Biol. 2002. V.22, N 4. P. 1246-1252.

23. Bhoite L.T., Allen J.M., Garcia E. et al. Mutations in the Pho2 (Bas2) transcription factor that differentially affect activation with its partner proteins Basl, Pho4, and Swi5 // J. Biol. Chem. 2002. V. 277, N 40. P. 37612-37618.

24. Bird A .J., Gordon M., Eide D.J., Winge D.R. Repression of ADH1 and ADH3 during zinc deficiency by Zap 1-induced intergenic RNA transcripts // EMBO J. 2006. V. 25, N 24. P. 5726-5734.

25. Bousquet-Antonelli C., Presutti C., Tollervey D. Identification of a regulated pathway for nuclear pre-mRNA turnover // Cell. 2000. V. 102, N 6. P. 765775.

26. Bun-Ya M., Harashima S., Oshima Y. Putative GTP-binding protein, Gtrl, associated with the function of the Pho84 inorganic phosphate transporter in Saccharomyces cerevisiae II Mol. Cell. Biol. 1992. V. 12. P. 2958-2966.

27. Bradley P.H., Brauer M.J., Rabinowitz J.D., Troyanskaya O.G. Coordinatedconcentration changes of transcripts and metabolites in Saccharomyces cerevisiae II PLoS ComputBiol. 2009. V. 5, N 1. P. 1-15.

28. Bun-Ya M., Nishimura M., Harashima S., Oshima Y. The PH084 gene of Saccharomyces cerevisiae encodes an inorganic phosphate transporter // Mol. Cell. Biol. 1991. V. 11, N 6. P. 3229-3238.

29. Camblong J., Beyrouthy N., Guffanti E. et al. Trans-acting antisense RNAs mediate transcriptional gene cosuppression in S. cerevisiae // Genes & development. 2009. N 23. P. 1534-1545.

30. Camblong J., Iglesias N., Fickentscher C. et al. Antisense RNA stabilization induces transcriptional gene silencing via histone deacetylation in S. cerevisiae II Cell. 2007. N 131. P. 706-717.

31. Cardenas M.E., Cutler N.S., Lorenz M.C et al. The TOR signaling cascade regulates gene expression in response to nutrients // Genes Dev. 1999. V. 13, N24. P. 3271-3279.

32. Cardillo S.B., Moretti M.B., Garcia S.C. Uga3 and Uga35/Dal81 transcription factors regulate UGA4 transcription in response to y-aminobutric acid and leucine//Eucar. Cell. 2010. V. 9, N 8. P. 1262-1271.

33. Carvalho J., Zheng X.F.S. Domains of Gln3p interacting with karyopherins, Ure2p, and the Target of Rapamycin Protein // J. of Biol. chem. 2003. V. 278, N19. P. 16878-16886.

34. Chua G., Morris Q.D., Sopko R. et al. Identifying transcription factor functions and targets by phenotypic activation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. V.103, N 32. P. 12045-12050.

35. Clark D. W., Tkacz J. S., Lampen J. O. Asparagine-linked carbohydrate does not determine the cellular location of yeast vacuolar nonspecific alkaline phosphatase //J. Bacteriol. 1982. V. 152. P. 865-873.

36. Coffrnan J.A., Rai R., Cooper T.G. et al. Genetic evidence for Gln3p-independent, nitrogen catabolite repression-sensitive gene expression in Saccharomyces cerevisiae II J. of Bacteriol. 1995. V. 177, N 23. P. 69106918.

37. Coffman J.A., Rai R., Loprete D.M. et al. Cross regulation of four GATA factors that control nitrogen catabolic gene expression in Saccharomyces cerevisiae // J. of Bacteriol. 1997. V. 179, N 11. P. 3416-3429.

38. Cooper T.G., Ferguson D., Rai R. et al. The GLN3 gene product is required for transcriptional activation of allantoin system gene expression in Saccharomyces cerevisiae 111. of Bacteriol. 1990. V. 172, N 2. P. 1014-1018.

39. Cooper T.G., Lam C., Turoscy V. Structural analysis of the dur loci in S. cerevisiae: two domains of a single multifunctional gene // Genetics. 1980. V. 94, N3. P. 555-580.

40. Costanzo M., Baryshnikova A., Bellay J. et al. The genetic landscape of a cell // Science. 2010. V 327, N5964. P. 425-431.

41. Crespo J.L., Daicho K., Ushimaru T. et al. The GATA transcription factors GLN3 and GAT1 link TOR to salt stress in Saccharomyces cerevisiae I I J. Biol. Chem. 2001. V. 276, N 37. P. 34441-34444.

42. Crespo J.L., Helliwell S.B., Wiederkehr C. et al. NPR1 kinase and RSP5-BUL1/2 ubiquitin ligase control GLN3-dependent transcription in Saccharomyces cerevisiae II J. Biol. Chem. 2004. V. 279, N 36. P. 3751237517.

43. David L., Huber W., Granovskaia M. et al. A high-resolution map of transcription in the yeast genome // PNAS. 2006. V 103, N 14. P. 5320-5325.

44. Deed N.K., van Vuuren H.J.J., Gardner R.C. Effect of nitrogen catabolite repression and di-ammonium phosphate addition during wine fermentation by a commercial strain of S. Cerevisiae II Appl. Microbiol. Biotechnol. 2011. V. 89. P. 1537-1549.

45. Doi S., Watanabe M., Tanabe K. et al. Induction of repressible acid phosphatase by unsaturated fatty acid in Saccharomyces cerevisiae II J. Cell Sci. 1989. N94. P. 511-516.

46. Forsberg H., Gilstring C.F., Zargari A. et al. The role of the yeast plasma membrane SPS nutrient sensor in the metabolic response to extracellular amino acids //Mol. Microbiol. 2001. V. 42(1). P. 215-228.

47. Gancedo J.M. Yeast carbon catabolite repression // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. V.62,N2. P. 334-361.

48. Gasch A.P., Spellman P.T., Kao C.M. et al. Genomic expression programs in the response of yeast cells to environmental changes // Mol. Biol, of Cell. 2000. V. 11. P.'4241-4257.

49. Georis I., Feller A., Vierendeels F., Dubois E. The yeast GATA factor Gatl occupies a central position in nitrogen catabolite repression-sensitive gene activation // Mol. And Cell. Biol. 2009. V. 29, N 13. P. 3803-3815.

50. Godard P., Urrestarazu A., Yissers S. et al. Effect of 21 different nitrogensources on global gene expression in the yeast Saccharomyces cerevisiae II Mol. And Cell. Biol. 2007. V. 27, N 8. P. 3065-3086.

51. Gottesman S., Morris N.R. Cell regulation variations on every theme // Cur. Op. in Microb. 2000. N 3. P. 115-117.

52. Guthrie C., Fink G.R. Guide to yeast genetics and molecular biology. Academic Press. 1991. V. 194. 933 p.

53. Hahn S., Young E.T. Transcriptional regulation in Saccharomyces cerevisiae: transcription factor regulation and function, mechanisms of initiation, and roles of activators and coactivators // Genetics. 2011. V. 189. P. 705-736.

54. Hardwick J.S., Kuruvilla F.G., Tong J.K. et al. Rapamycin-modulated transcription defines the subset of nutrient-sensitive signaling pathways directly controlled by the Tor proteins // PNAS. 1999. V. 96. P. 14866-14870.

55. Harreman M., Taschner M., Sigurdsson S. et al. Distinct ubiquitin ligases act sequentially for RNA polymerase II polyubiquitylation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2009. V. 06, N 49. P. 20705-20710.

56. Harrison B.R., Yazgan O., Krebs J.E. Life without RNAi: noncoding RNAs and their functions in Saccharomyces cerevisiae II Biochem. Cell. Biol. 2009. N 87. P. 767-779.

57. Hirota K., Miyoshi T., Kugou K. et al. Stepwise chromatin remodelling by a cascade of transcription initiation of non-coding RNAs // Nature. 2008. V. 456, N7218. P. 130-134.

58. Hofman-Bang J. Nitrogen catabolite repression in Saccharomyces cerevisiae //Mol. Biotechnol. 1999. V. 12. P. 35-73.

59. Hongay C.F., Grisafi P.L., Galitski T. et al. Antisense transcription controls cell fate in Saccharomyces cerevisiae I I Cell. 2006. N 127. P. 735-745.

60. Horak J. The role of ubiquitin in down-regulation and intracellular sorting of membrane proteins: insights from yeast // Biochimica et Biophysica Acta. 2003. V.1614,N2. P. 139-155.

61. Houseley J., Rubbi L., Grunstein M., et al. A ncRNA modulates histone modification and mRNA induction in the yeast GAL gene cluster // Mol Cell. 2008. V. 32, N5. P. 685-695.

62. Huang H.L., Brandriss M.C. The regulator of the yeast proline utilization pathway is differentially phosphorylated in response to the quality of the nitrogen source // Mol. Cell. Biol. 2000. V.20, N 3. P. 892-899.

63. Huang K., Ferrin-O'Connell I., Zhang W. et al. Structure of the Pho85-Pho80 CDK-cyclin complex of the phosphate-responsive signal transduction pathway // Mol Cell. 2007. V. 28, N 4. P. 614-623.

64. Jacob F., Monod J. Genetic regulatory mechanisms in the synthesis of proteins // J. Mol. Biol. 1961. V. 3. P. 318-356.

65. Jensen L.T., Ajua-Alemanji M., Culotta V.C. The Saccharomyces cerevisiae high affinity phosphate transporter encoded by PH084 also functions in manganese homeostasis // J Biol Chem. 2003. V. 278, N 43. P. 42036^12040.

66. Johnston M., Carlson M. Regulation of carbon and phosphate utilization // Mol. Cell. Biol, of the Y. Sacch.: Gene Expression. 1992. V. 2. P. 193-255.

67. Kaffman A., Herskowitz I., Tajian R. et al. Phosphorylation of the transcription factor PH04 by a cyclin-CDK complex, PH080-PH085 II Science. 1994. N263. P. 1153-1156.

68. Kaneko Y., Tamai Y., Toh-e A., Oshima Y. Transcriptional and post-transcriptional control of PH08 expression by PHO regulatory genes in Saccharomyces cerevisiae II Mol. Cell. Biol. 1985. V. 5. P. 248-252.

69. Kim V.N., Nam J.-W. Genomics of microRNA // Trends in Genetics. 2006. V. 22, N3.

70. Kodama Y., Omura F., Takahashi K. et al. Genome-wide expression analysis of genes affected by amino acid sensor Ssylp in Saccharomyces cerevisiae II Mol. Microbiol. 2001. V. 42(1). P. 215-228.

71. Komeili A., O'Shea E.K. Nuclear transport and transcription // Curr. Opin. Cell. Biol. 2000. V.12, N 1. P. 355-360.

72. Komeili A., Wedaman K.P., O'Shea E.K. et al. Mechanism of metaboliccontrol. Target of rapamycin signaling links nitrogen quality to the activity of the Rtgl and Rtg3 transcription factors // J. Cell.Biol. 2000. V.151, N 4. P. 863-878.

73. Kulkarni A.A., Abul-Hamd A.T., Rai R. et al. Gln3p nuclear localization and interaction with Ure2p in Saccharomyces cerevisiae II J. Biol. Chem. 2001. V. 276, N34. P. 32136-32144.

74. Lazard M., Blanquet S., Fisicaro P. et al. Uptake of selenite by Saccharomyces cerevisiae involves the high and low affinity orthophosphate transporters//J. Biol. Chem. 2010. V. 285, N. 42. P. 32029-32037.

75. Lee J., Colwill K., Aneliunas V. et al. Interaction of yeast Rvsl67p and Pho85 cyclin-dependent kinase complexes may link the cell-cycle to the actin cytoskeleton // Curr. Biol. 1998. V. 8. P. 1310-1321.

76. Lee M., O'Regan S., Moreau J.L. et al. Regulation of the Pcl7-Pho85 cyclin-cdk complex by pho81 // Mol. Microbiol. 2000. V. 38. P. 411^22.

77. Lee T.I., Rinaldi N.J., Robert F. et al. Transcriptional regulatory networks in Saccharomyces cerevisiae // Science. 2002. V. 298, N 5594. P. 799-804.

78. Li M., Petteys B.J., McClure J.M. et al. Thiamine biosynthesis in Saccharomyces cerevisiae is regulated by the NAD+-dependent histone deacetylase Hstl II Mol. and Cell. Biol. 2010. V. 30, N 13. P. 3329-3341.

79. Liu Z., Butow R.A. A transcriptional switch in the expression of yeast tricarboxylic acid cycle genes in response to a reduction or loss of respiratory function // Mol.Cell.Biol. 1999. V.19, N 10. P.6720-6728.

80. Magasanik B. Regulation of nitrogen utilization // Mol. and Cel. Biol, of the yeast Sacch.\ Gene expression. NY: Cold Spring Harbor, 1992. P.283-317.

81. Magasanik B., Kaiser C.A. Nitrogen regulation in Saccharomyces cerevisiae //Gene. 2002. N290. P. 1-18.

82. Martens J.A., Laprade L., Winston F. Intergenic transcription is required to repress the Saccharomyces cerevisiae SER3 gene // Nature. 2004. V 429. P. 571-574.

83. Martin O., Brandriss M.C., Schneider G. et al. Improved anaerobic use of arginine by Saccharomyces cerevisiae II App. and Env. Microbiol. 2003. V. 69, N3. P. 1623-1628.

84. Martinez P., Persson B.L. Identification, cloning and characterization of a derepressible Na+-coupled phosphate transporter in Saccharomyces cerevisiae II Mol. Gen. Genet. 1998. V. 258. P. 628-638.

85. Marzluf G.A. Genetic regulation of nitrogen metabolism in the fungi // Microb. and Mol. Biol. Rev. 1997. V. 61, N 1. P. 17-32.

86. Matsuyama A., Shirai A., Yoshida M. A series of promoters for constitutive expression of heterologous genes in fission yeast // Yeast. 2008. V. 25, N 5. P. 371-376.

87. Maxon M.E., Herskowitz I. Ashlp is a site-specific DNA-binding protein that actively represses transcription // Proc. Natl. Acad. Sci. 2001. V. 98(4). P. 1495-1500.

88. Measday V., Moore L., Retnakaran R., Lee J. et al. A family of cyclin-like proteins that interact with the PH085 cyclin-dependent kinase // Mol. Cell. Biol. 1997. V. 17. P. 1212-1223.

89. Meselson M., Yuan Y. DNA restriction enzyme from E. coli // Nature. 1968. V. 217. P. 1110-1114.

90. Messenguy F., Andre B., Dubois E. Diversity of nitrogen metabolism among yeast species: regulatory and evolutionary aspects // Rosa C.A., Peter G. Biodiversity and ecophysiology of yeasts / Springer. 2006. P. 123-153.

91. Meyhack B., Bajwa W., Rudolph H. et al. Two yeast acid phosphatase structural genes are the result of a tandem duplication and show different degrees of homology in their promoter and coding sequences // EMBO J. 1982. V. 1,N6.P. 675-680.

92. Monod M., Sive S., Haguenauer-Tsapis R. et al. In vivo and in vitro studies of

93. PH05 mutants at the signal peptidase cleavage site // Proc. Alko Symp. on Industr. Yeast Genet. Helsinki. 1987. V.5. P. 149-154.

94. Morse D.E., Mosteller R.D., Yanofsky C. Dynamics of synthesis, translation, and degradation of trp operon messenger RNA in E. coli II Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1969. V. 34. P. 725-740.

95. Mullaney E.J., Ullah A.H. The term phytase comprises several different classes of enzymes // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. V. 312, N 1. P. 179-184.

96. Natarajan K., Meyer M.R., Jackson B.M. et al. Transcriptional profiling shows that Gcn4p is a master regulator of gene expression during amino acid starvation in yeast//Mol. And Cell. Biol. 2001. V. 21, N 13. P. 4347-4368.

97. Nishimura H., Kawasaki Y., Nosaka K et al. Mutation thi81 causing a deficiency in the signal transduction of thiamine pyrophosphate in Saccharomyces cerevisiae IIFEMS Microbiol. Lett. 1997. N 156. P. 245-249.

98. Nishizawa M., Komai T., Katou Y. et al. Nutrient-regulated antisense and intragenic RNAs modulate a signal transduction pathway in yeast // PLoS Biol. 2008. V. 6, N 12. P. 2817-2830.

99. Nosaka K. High affinity of acid phosphatase encoded by PH03 gene in Saccharomyces cerevisiae for thiamin phosphates // Biochim. Biophys. Acta. 1990. N 1037. P. 147-154.

100. Nosaka K., Kaneko Y., Nishimura H. et al. A possible role for acid phosphatase with thiamin-binding activity encoded by PH03 in yeast // FEMS Microbiol Lett. 1989. N 51. P. 55-59.

101. Nosaka K., Kaneko Y., Nishimura H. et al. Isolation and characterization of a thiamin pyrophosphokinase gene, THI80, from Saccharomyces cerevisiae II J. of Biol. Chem. 1993. V. 268, N23. P. 17440-17447.

102. O'Donnell A.F., Apffel A., Gardner R.G., Cyert M.S. Alpha-arrestins Alyl and Aly2 regulate intracellular trafficking in response to nutrient signaling // Mol. Biol. Cell. 2010. V. 21(20). P. 3552-3566.

103. O'Neill E.M., Kaffman A., Jolly E.R, O'Shea E.K. Regulation of PH04 nuclear localization by the PH080-PH085 cyclin-CDK complex // Science. 1996. V. 271. P. 209-212.

104. Ogawa N., De Risi J., Brown P.O. New components of system for phosphate accumulation and polyphosphate metabolism in Saccharomyces cerevisiae revealed by genomic expression analysis // Mol. Biol. Cell. 2000. V. 11, N 12. P. 4309-4321.

105. Okabayashi K., Oi H., Hirabayashi K. et al. Albumin gene-containing plasmid, transformant carrying same, production of such transformant and production of albumin // Green Cross. 1990. EP0399455.

106. Oshima Y. The phosphatase system in Saccharomyces cerevisiae II Genes Genet. Syst. 1997. V. 72. P. 323-334.

107. Padkina M.V. Nonspecific acid phosphatases of yeast Saccharomyces cerevisiae'. regulation of biosynthesis // Vestnik of Saint-Petersburg State University. 1998. V. 3, N 4. P. 52-57.

108. Padkina M.V., Krasnopevtceva N.G., Petrashen M.G., Kozhin S.A., Smirnov M.N. Genetical and biochemical research of acid phosphatases in yeast Saccharomyces cerevisiae. I. Acid phosphatases characteristics // Genetika. 1974. V. 10. P. 100-110.

109. Peng J., Schwartz D., Elias J.E. et al. A proteomic approach to understanding protein ubiquitination//Nat. Biotechnol. 2003. V. 21, N 8. P. 921-926.

110. Persson B.L., Petersson J., Fristedt U. et al. Phosphate permeases of Saccharomyces cerevisiae: structure, function and regulation // Biochim. Biophys. Acta. 1999. V. 1422. P. 255-272.

111. Pina B., Fernandez-Larrea J., Garcia-Reyro N., et al. The different (sur)faces ofRaplp //Mol. Gen. Genomics. 2003. N268. P. 791-798.

112. Plankert U., Purwin C., Holzer H. Yeast fructose-2,6-bisphosphate 6-phosphatase is encoded by PH08, the gene for nonspecific repressible alkaline phosphatase // Eur. J. Biochem. 1991. Y. 196. P. 191-196.

113. Praekelt U.M., Byrne K.L., Meacock P.A. Regulation of THI4 (MOL1), a thiamine-biosynthetic gene of Saccharomyces cerevisiae II Yeast. 1994. N 10. P. 481-490.

114. Proudfoot N., Gullerova M. Gene silencing CUTs both ways // Cell. 2007. V. 131. P. 649-651.

115. Rouxel T., Danchin A., Henaut A. METALGEN.DB: metabolism linked to the genome of Escherichia coli, a graphics-oriented database // Comput. Appl. Biosci. 1993. V. 9. P. 315-324.

116. Sambrook J., Russell D. W. Molecular cloning. A laboratory manual. NY.: Cold Spring Harbor Laboratory Press., 2001. 2222 p.

117. Sambuk E.V., Fizikova A.Yu., Savinov V.A., Padkina M.V. Acid Phosphatases of Budding Yeast as a Model of Choice for Transcription Regulation Research // Enzyme Research. 2011.16 pp.

118. Scazzocchio C. The fungal GATA factors // Cur. Op. in Microb. 2000. N 3. P. 126-131.

119. Schneider K.R., Smith R.L., O'Shea E.K. Phosphate-regulated inactivation of the kinase PH080-PH085 by CDK inhibitor PH081 // Science. 1994. Y. 266. P. 122-126.

120. Sekito T., Liu Z., Thornton J. et al. i?rG-dependent mitochondria-to-nucleus signaling is regulated by MKS1 and is linked to formation of yeast prion URE3. // Mol.Biol.Cell. 2002. V. 13, N 3. P. 795-804.

121. Sekito T., Thornton J., Butow R.A. Mitochondria-to-nuclear signaling is regulated by the subcellular localization of the transcription factors Rtglp and Rtg3p // Mol.Biol.Cell. 2000. V. 11, N 6. P. 2103-2115.

122. Singleton C.K. Identification and characterization of the thiamine transporter gene of Saccharomyces cerevisiae II Gene. 1997. N 199. P. 111-121.

123. Spellman P.T., Sherlock G., Zhang M.Q. et al. Comprehensive identification of cell cycle-regulated genes of the yeast Saccharomyces cerevisiae by microarray hybridization // Mol Biol Cell. 1998. V. 9, N 12. P. 3273-3297.

124. Springael J.Y., Penninckx MJ. Nitrogen-source regulation of yeast gamma-glutamyl transpeptidase synthesis involves the regulatory network including the GATA zinc-finger factors Gln3, Nill/Gatl and Gzf3 // Biochem. J. 2003. V. 371. P. 589-595.

125. Stanbrough M., Rowen D.W., Magasanik B. Role of the GATA factors Gln3p and Nillp of Saccharomyces cerevisiae in the expression of nitrogen-regulated genes // Biochem. 1995. V. 92. P. 9450-9454.

126. Staschke K.A., Dey S., Zaborske J.M. et al. Integration of general amino acid control and target of rapamycin (TOR) regulatory pathways in nitrogen assimilation in yeast//J. Biol. Chem. 2010. V. 285, N22. P. 16893-16911.

127. Svaren J., Horz W. Transcription factors vs nucleosomes: regulation of the PH05 promoter in yeast // Trends Biochem. Sci. 1997. V. 22. P. 93-97.

128. Tait-Kamradt A.G., Turner K.J., Kramer R.A. et al. Reciprocal regulation of the tandemly duplicated PH05/PH03 gene cluster within the acid phosphatase multigene family of Saccharomyces cerevisiae II Mol. And Cel. Biol. 1986. V.6, N 6. P. 1855-1865.

129. Tan Y.S., Morcos P.A., Cannon J.F. Pho85 phosphorylates the Glc7 protein phosphatase regulator Glc8 in vivo IIJ Biol Chem. 2003. V. 278, N 1. P. 147153.

130. Tate J.J., Cooper T.G. Stress-responsive Gln3 localization in S. cerevisiae is separable from and can overwhelm nitrogen source regulation // JBC Papers in Press. 2007. P. 1-13.

131. Tate J.J., Rai R., Cooper T.G. Ammonia-specific regulation of Gln3 localization in Saccharomyces cerevisiae by protein kinase Nprl // J. Biol. Chem. 2006. V.281, N 38. P. 28460-28469.

132. Toh-E A., Nakamura H., Oshima Y. A gene controlling the synthesis of non specific alkaline phosphatase in Saccharomyces cerevisiae II Biochim. Biophys. Acta. 1976. V. 428. P. 182-192.

133. Toh-E A., Tanaka K., Uesono Y., Wickner R.B. PH085, a negative regulator of the PHO system, is a homolog of the protein kinase gene, CDC28, of Saccharomyces cerevisiae II Mol Gen Genet. 1988. V. 214. P. 162-164.

134. Uhler J.P., Hertel C., Svejstrup J.Q. A role for noncoding transcription in activation of the yeast PH05 gene // PNAS. 2007. V. 104, N 19. P. 80118016.

135. Vats P., Banerjee U.C. Production studies and catalytic properties of phytases (wyo-inositolhexakisphosphate phosphohydrolases): an overview // Enz. and Microb. Tech. 2004. N 35. P. 3-14.

136. Veide J., Andlid T. Improved extracellular phytase activity in Saccharomyces cerevisiae by modifications in the PHO system // Int. J. of Food Microb. 2006. P. 1-8

137. Venter U., Horz W. The acid phosphatase genes PHO 10 and PHO 11 in S. cerevisiae are located at the telomeres of chromosomes VIII and I // Nucleic

138. Acids Res. 1989. V. 17, N4. P. 1353-1369.

139. Vignols F., Brehelin C., Surdin-Kerjan Y. et al. A yeast two-hybrid knockout strain to explore thioredoxin-interacting proteins in vivo // PNAS. 2005. V. 102, N46. P. 16729-16734.

140. Vogel K., Horz W., Hinnen A. The two positively acting regulatory proteins PH02 and PH04 physically interact with PH05 upstream activation regions //Mol. Cell. Biol. 1989. V. 9. P. 2050-2057.

141. Wang H., Wang X., Jiang Y. Interaction with Tap42 is required for the essential function of Sit4 and type 2A phosphatases // Mol. Biol. Cell. 2003. V.14, N 11. P. 4342-51.

142. Wodzinski R.J., Ullah A.H. Phytase // Adv. Appl. Microbiol. 1996. N 42. P. 263-302

143. Wykoff D.D., O'Shea E.K. Phosphate transport and sensing in Saccharomyces cerevisiae II Genetics. 2001. V. 159, N 4. P. 1491-1499.

144. Xu Z., Wei W., Gagneur J. et al. Bidirectional promoters generate pervasive transcription in yeast // Nature. 2009. V 457, N 7232. P. 1033-1037.

145. Yang J.W., Schweingruber M.E. The structural gene coding for thiamin-repressible acid phosphatase in Schizosaccharomyces pombe II Curr. Genet. 1990. N 18. P. 269-272.