Исследование гена пресенилина 1 человека и его гомологов в модельных системах тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Григоренко, Анастасия Петровна

• Григоренко, Анастасия Петровна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Григоренко, Анастасия Петровна

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.И

1.1.1. Клинические и гистопатологические признаки Болезни Альцгеймера.

1.1.2. Генетические факторы и гены Болезни Альцгеймера.

1.2. Функции генов пресенилинов.

1.2.1.1. Участие пресенилинов в протеолитическом расщеплении АРР.

1.2.1.2. Участие пресенилинов в протеолитическом расщеплении Notch.

1.2.1.3. Другие субстраты внутримембранного протеолиза пресенилина.

1.2.2. Обнаружение компонентов у-секретазного комплекса.

1.2.3. Участие пресенилинов в апоптозе.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Программы биоинформатики.

2.2. Векторы, использованные для клонирования.

2.3. Набор методов для получения рекомбинантных конструкций.

2.3.1. Эндонуклеазное расщепление ДНК.

2.3.2. Переосаждение ДНК.

2.3.3. Электрофоретическое разделение ДНК фрагментов.

2.3.4. Выделение фрагментов ДНК из агарозного геля.

2.3.5. Лигирование фрагментов ДНК.

2.3.6. Культивирование клеток Е. coli.

2.3.7. Транформация клеток Е. coli.

2.3.8. Отбор клонов, содержащих плазмидные конструкции.

2.3.9. Секвенирование.

2.4. Общие методы получения кДНК, геномных копий генов, изучения экспрессии генов (ОТ-ПЦР).

2.4.1. Выделение геномной ДНК из периферической венозной крови человека.

2.4.2. Выделение тотальной РНК из периферической венозной крови человека.

2.4.3. Выделение мРНК.

2.4.3. Получение кДНК.

2.4.4. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

2.5. Частные методы, использованные при клонировании, изучении экспрессии генов на уровне транскрипции.

2.5.1. Получение конструкции для наработки N-концевого фрагмента белка hPSl в клетках Е. coli.

2.5.2. Получение конструкций для экспрессии форм альтернативного сплайсинга hPSl в культурах клеток млекопитающих.

2.5.3. Изучение экспрессии форм альтернативного сплайсинга hPSl в клетках крови человека.

2.5.4. Исследование экспрессии IMP AS генов человека.

2.5.4.1. Анализ экспрессии hIMPI гена в различных тканях и органах человека

2.5.4.2. Исследование альтернативных транскриптов гена hIMPI.

2.5.4.3. Получение и клонирование полноразмерных копий альтернативных форм сплайсинга гена hIMPI.

2.5.4.4. Получение и клонирование мутантных форм гена hIMPI.

2.5.4.5. Клонирование делеционных и мутантных форм гена hPSl.

2.6. Набор методов для получения и исследования трансфицированных культур клеток млекопитающих.

2.6.1. Культивирование клеток млекопитающих.

2.6.2. Подготовка плазмидной ДНК для трансфекции культур клеток млекопитающих.

2.6.3. Трансфекция культур клеток PC 12 с помощью электропорации.

2.6.4. Трансфекция культур клеток НЕК293 с использованием набора LipofectAMINE PLUS.

2.6.5. Получение трансфицированных поликлональных культур клеток PC 12 и клонов индивидуального происхождения.

2.6.6. Выделение высокополимерной геномной ДНК клеточных культур.

2.6.7. Анализ стабильно-трансфицированных культур РС12 с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).

2.6.8. Хранение полученных клеточных линий.

2.6.9. Изучение дифференцировки PC 12 клеток.

2.6.10. Анализ пролиферации клеток PC 12.

2.6.11. Изучение апоптоза в трансфицированных культурах клеток PC 12.

2.6.12. Выделение белковых гомогенатов из культур клеток РС12. Электрофорез белков в полиакриламидном геле. Вестерн-блоттинг.

2.6.13. Получение белковых лизатов культур клеток НЕК293. Электрофорез белков в полиакриламидном геле. Вестерн-блоттинг.

2.6.14. Получение антител, использованных в работе.

2.6.15. Изучение гликозилирования белков.

2.7. Материалы и методы исследования на модели дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

2.8. Материалы и методы исследования на модели нематоды Caenorhabditis elegans.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Создание набора плазмидных конструкций, трансфицированных культур клеток млекопитающих, трансгенных линий Drosophila melanogaster.

3.1.1. Создание набора плазмидных конструкций.

3.1.1.1. Плазмидные конструкции для экспрессии в культуре клеток млекопитающих.

3.1.1.2. Плазмидные конструкции для экспрессии генов в трансгенных Drosophila melanogaster.

3.1.1.3. Плазмидные конструкции для наработки белка в Escherichia coli.

3.1.1.4. Плазмидные конструкции для дцРНКи в Caenorhabditis elegans.

3.1.2. Создание набора стабильно трансфицированных культур клеток млекопитающих.

3.1.3. Получение и анализ трансгенных линий Drosophila melanogaster.

3.2.1. Исследование изоформ генов пресенилинов в модели трансфицированных клеточных культур.

3.2.2. Апоптоз и мутантные пресенилины в поликлональных клеточных культурах.

3.2.3. Мутации и высокий уровень непроцессированной формы hPSl замедляют пролиферативную активность и повышают чувствительность к апоптозу моноклональных РС12 культур.

3.3. Изучение альтернативных транскриптов гена PS1 человека.

3.4.1. Обнаружение новых семейств белков, имеющих сходство с пресенилинами.

3.4.2. PA-домен.

3.4.3. IMP AS- гены и IMPAS-белки человека.

3.4.4. Изучение экспрессии hIMPl гена в тканях и органах человека. Исследование альтернативных транскриптов гена ЫМР1.

3.4.5. Изучение экспрессии белка hIMPl в клетках млекопитающих.

3.4.6. Участие hIMPl в протеолитическом расщеплении полноразмерного белка hPSl.Ill

3.4.7. IMPAS не является критическим фактором индукции UPR (Unfolded-Protein Response) в Saccharomyces cerevisiae.

3.4.8. Ингибирование гена-ортолога hIMPl у нематоды Caenorhabditis elegans

Ce-imp-2).

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование гена пресенилина 1 человека и его гомологов в модельных системах»

Актуальность темы

Болезнь Альцгеймера (БА) - распространенное нейродегенеративное заболевание людей среднего и позднего возраста. Обнаружение генов ранних семейных форм БА позволило открыть новую область в исследовании молекулярно-генетических механизмов, лежащих в основе БА. Несмотря на значительное число исследований в данной области, патологические механизмы развития БА и, в частности, причины нейродегенеративного процесса, лежащие в основе заболевания, остаются до конца не выясненными. В этой связи, остается актуальным создание различных моделей Б A in vivo и in vitro. Такие модели необходимы для изучения молекулярных основ заболевания, в частности, механизмов взаимодействия генов и регуляции экспрессии генов и белков, лежащие в основе патологии БА. Исследование генов БА важно также для понимания их роли в жизнедеятельности специализированных клеток (нейронов) и функций целого организма (пролиферации, дифференцировки, гисто- и органогенеза). Такие модельные системы чрезвычайно важны для тестирования и поиска лекарственных средств и препаратов, которые можно было бы использовать для терапии БА.

Исследование функций генов пресенилинов (PS), мутации в которых ответственны за большую часть семейных случаев БА, является приоритетным направлением исследований, важным для понимания молекулярных процессов, приводящих к Б А. На сегодня известно около 150 мутаций в генах пресенилинов, вызывающих БА. Детальное изучение механизмов действия различных мутаций в генах PS и форм альтернативного сплайсинга генов PS в модельных системах позволит охарактеризовать особенности патогенеза, вызываемого мутантными формами белков PS.

За последнее время собраны данные, показывающие, что белки PS могут быть особыми аспартатными протеазами, участвующими во внутримембранном расщеплении рецепторных белков типа 1. Одним из субстратов пресенилинов является белок предшественника амилоида APP. Изменение соотношения продуктов протеолиза АРР в сторону труднорастворимого, фибриллогенного пептида Aß42, предполагается, может быть основной причиной амилоидных отложений при БА, запускающих каскад молекулярных процессов, ведущих к гибели нейронов в специфических отделах мозга. Неизвестным остается, каковы тонкие механизмы расщепления АРР белками пресенилинов, и как на эти механизмы влияют мутации в генах PS. Недавно стало ясно, что пресенилины функционируют в составе так называемого у-секретазного комплекса белков. Было установлено, что в состав у-секретазного комплекса, помимо пресенилинов, входят никастрин, АРН-1 и PEN-2. Важно изучить взаимодействия пресенилинов с белками у-секретазного комплекса для выяснения возможных механизмов регуляции протеолитической активности.

Таким образом, актуальной задачей является создание генных конструкций, несущих нормальные и мутантные формы пресенилинов и других компонентов у-секретазного комплекса для исследования экспрессии этих генов в клетках млекопитающих или беспозвоночных. Кроме того, важное направление исследований представляет поиск новых генов, имеющих структурное или функциональное сходство с пресенилинами. В этой связи, поиск и исследование отдаленных гомологов, внутримембранных аспартатных протеаз, работающих по сходным механизмам, позволили бы выделить общие закономерности функционирования протеаз в норме и патологии.

Цели работы и задачи исследования

Целью данной работы было исследовать функции мутантных и нормальных форм генов пресенилинов в различных модельных системах. Был также проведен поиск возможных гомологов пресенилинов с последующей целью описания и первичного определения функций этих белков.

В соответствии с этими целями были поставлены следующие задачи:

1. Создать модельные системы in vitro и in vivo для изучения функций генов БА. Получить набор рекомбинантных ДНК конструкций, трансфицированных клеточных линий млекопитающих и трансгенных линий плодовых мушек D. melanogaster.

2. Изучить влияние нормальных и мутантных генов пресенилина 1 человека на пролиферацию и чувствительность к апоптотическим стимулам в культуре трансфицированных клеток феохромоцитомы крысы PC 12.

3. Определить и описать формы альтернативного сплайсинга гена пресенилина 1 человека.

4. Провести поиск возможных клеточных гомологов генов PS. Клонировать удаленные гомологи генов пресенилинов и провести первичный анализ экспрессии в клеточной культуре млекопитающих in vitro, и in vivo - на модели нокаутированных дрожжевых клеток и при ингибировании генов у почвенных нематод С. elegans методом дцРНК интерференции.

Научная новизна и практическая ценность работы

1. В настоящей работе создан набор плазмидных конструкций, использованных для получения трансфицированных клеточных линий млекопитающих и трансгенных линий D. melanogaster, которые представляют собой модельные системы in vitro и in vivo для изучения молекулярно-генетических механизмов Болезни Альцгеймера.

2. Впервые исследовано влияние мутаций C410Y и M146V в генах пресенилинов на пролиферацию и чувствительность к апоптотическим стимулам на модели трансфицированных клеточных культур феохромоцитомы крысы PC 12.

3. Выявлены и описаны различные формы альтернативного сплайсинга гена пресенилина 1 человека, а также впервые разработан чувствительный метод детекции транскрипта пресенилина 1 человека с делецией экзона 9.

4. Идентифицировано новое семейство генов-гомологов пресенилинов IMPAS (IMP). Впервые клонированы три изоформы гена ММР1, определены некоторые структурно-функциональные особенности IMP1 гена человека и его гомологов в системах клеток млекопитающих, беспозвоночных и дрожжей. Получены как теоретические, так и экспериментальные данные свидетельствующие о том, что hIMPI, как и пресенилин, является политопной аспартатной протеазой.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Григоренко, Анастасия Петровна

выводы

1. Сконструированы рекомбинантные плазмиды, содержащие нормальные и мутантные формы гена пресенилина 1 человека (hPSl) и его гомологов {IMPAS), способные экспрессироваться в клетках млекопитающих или дрозофилы. Получены клеточные линии млекопитающих (человека НЕК293, крысы PC 12, китайского хомячка СНО) и трансгенные линии Drosophila melanogaster, трансфицированные этими рекомбинантными плазмидами, которые могут быть использованы для изучения молекулярно-генетических механизмов Болезни Альцгеймера (БА).

2. Показано, что гиперэкспрессия мутантных форм пресенилина 1 человека (hPSl) C410Y и M146V в культуре клеток феохромоцитомы крысы линии PC 12 приводит к повышенной чувствительности клеток к апоптотическим стимулам, угнетению их пролиферативной активности, а также проявляется в отрицательной селекции трансгена в поликлональных культурах. Мутации в гене hPSl, приводящие к БА, могут частично ингибировать процессинг полноразмерного белка hPSl.

3. В клетках мозга человека обнаружены две новые формы альтернативного сплайсинга гена hPSl. Разработан эффективный метод детекции транскриптов сплайсированной формы hPSl (hPSl&9) в лейкоцитах человека. Показано, что уровень экспрессии hPSlA9 может варьировать у различных людей.

4. Идентифицировано новое семейство генов, кодирующих консервативные политопные трансмембранные белки эукариот (импасы/ IMPAS/IMP) и архей (мембразы/ Membrase), которые имеют ряд важных структурных сходств с пресенилинами эукариотических организмов, включая инвариантные аминокислотные остатки и домены, регулирующие эндопротеолиз.

5. Клонированы и идентифицированы три альтернативные формы сплайсинга гена IMP1 человека. Показана экспрессия hIMPI в различных тканях и органах человека на уровне транскрипции. В клеточных культурах, трансфицированных геном hIMPI, показано, что белок hIMPI подвергается N-гликозилированию и детектируется в клетке, как в виде мономера, так и в составе высокомолекулярного комплекса.

6. Получены экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что hIMPI является аспартатной мембранной протеазой, отвечающей за расщепление политопных белков. В модельной системе трансфицированных клеточных линий показано участие hIMPI в протеолитическом расщеплении полноразмерной формы hPSl. Определена критическая роль инвариантных аспартатов и С-концевого пролинаhIMPI в протеолизе hPSl.

7. На модели нокаутированных линий дрожжей Saccharomyces cerevisiae показано, что гомолог генов IMP AS у дрожжей не является критическим фактором индукции UPR-сигнального клеточного ответа.

8. На модели нематоды Caenorhabditis elegans при инактивировании гена ортолога hIMPI - Ce-imp-2 методом дцРНК интерференции установлено, что этот ген необходим для нормального развития. Инактивация Ce-imp-2 приводила к эмбриональной гибели, а также гибели личинок на всех стадиях развития нематод за счет специфических нарушений процессов линьки.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенной работы были получены новые векторные ДНК конструкции, содержащие нормальные и мутантные формы гена пресенилина 1 человека (hPSl). Сконструированные плазмиды были использованы для трансфекции клеток феохромацитомы крысы PC 12 и получения стабильных линий. Линии феохромацитомы крысы PC 12, экспрессирующие различные мутантные и нормальные формы гена hPSl, были исследованы на чувствительность к апоптотическим стимулам (депривации по трофическим факторам и факторам роста). Полученные данные свидетельствуют о том, что гиперэкспрессия мутантных форм пресенилина 1 человека (hPSl) C410Y и M146V в культуре клеток феохромоцитомы крысы линии PC 12 приводит к повышенной чувствительности клеток к различным апоптотическим стимулам, угнетению их пролиферативной активности, а также проявляется в отрицательной селекции трансгена в поликлональных культурах. Результаты получены для двух независимых мутаций, вызывающих БА. Наши исследования чувствительности клеток к апоптозу при экспресии мутантных форм hPSl согласуются с данными ряда авторов, полученными на других модельных системах (knock-in мыши, M146V - Guo et al., 1999b), для других мутаций в гене hPSl (L286V - Guo et al., 1999a), для других апоптотических стимулов (M146V, действию Р-амилоида - Guo et al., 1999а), а также для мутаций в гене-гомологе hPS2 (Deng et al., 1996; Wolozin et al., 1996). Стабильные нейрональноподобные культуры PC 12 с негативным действием мутантных генов пресенилинов могут быть использованы в дальнейшем как для изучения взаимодействия различных генов и белков в клетке, экспресии генов, так и для поиска синтетических соединений, потенциальных терапевтических средств БА.

Конструкции с различными формами генов пресенилина и никастрина, были использованы для получения трансгенных линий D. melanogaster. При исследовании влияния мутантных форм на структуру фасеток глаз трансгенных мух, фенотипических изменений выявлено не было. Действительно, независимые исследования группы М. Fortini (Университет Пенсильвании, США) на линиях, экспрессирующих мутантные гены пресенилина, показали, что апоптоз в фасетках глаз можно вызвать только при 2-4-х кратном увеличении дозы генов в трансгенных мухах. При этом фенотип "неровного" глаза обнаруживается как при гиперэкспресии мутантных, так и нормальных форм пресенилина, что по-видимому свидетельствует о не физиологичности наблюдаемых эффектов. В нашей работе мы показали, что экспрессия одной копии трансгена (PS или Net) не нарушала основных функций при формировании структуры фасеток D. melanogaster.

В клетках мозга человека были найдены формы альтернативного сплайсинга гена hPSl - hPSlA9 и hPSlA9tr. Данные изоформы пресенилина интересны тем, что кодируют белки с инактивированным каталитическим центром. Возможно, hPSlД9 является фактором, регулирующим активность основной полноразмерной клеточной формы пресенилина. С помощью нового чувствительного метода амплификации сплайсированного транскрипта, экспрессия HPS1A9 альтернативного транскрипта была обнаружена в клетках крови человека. Предварительные данные показывают, что образование сплайсированной формы hPS!A9 динамически регулируется в клетках крови человека.

В настоящей работе был проведен поиск дальних гомологов пресенилинов. Было идентифицировано и описано новое семейство генов и белков (импас/IMPAS), ранее не описанных в литературе, которые имеют ряд важных структурных и функциональных сходств с пресенилинами эукариотических организмов. Человеческий IMP1 ген был клонирован, выявлены альтернативные транскрипты hIMPI гена в мозге и в клетках крови человека. Исследование транскриптов гена hIMPI показало высокий уровень его экспрессии в различных тканях и органах человека, за исключением сердца и скелетных мышц. В различных культурах клеток млекопитающих (НЕК293, PC 12, СНО) для белка hIMPI характерно образование высокомолекулярных комплексов, встречающихся в клетке наряду с мономерной формой белков. Эндогенный белок hIMPI, также как и экзогенный, детектировался как в виде мономера, так и в составе высокомолекулярных комплексов. Было также найдено, что hIMPI в клетках подвергается N-гликозилированию.

Функциональное исследование гена hIMPI включало несколько модельных систем - трансфицированные клеточные линии млекопитающих, клетки дрожжей, нематод. Получены экспериментальные данные свидетельствующие о том, что hIMPI, как и пресенилины, является политопной аспартатной протеазой. В модельной системе трансфицированных клеточных линий показано участие hIMPI в протеолитическом расщеплении полноразмерной формы hPSl. В независимых исследованиях группы В. Martoglio недавно было показано, что SPP (синоним hIMPl) может расщеплять сигнальные пептиды внутри мембранного домена, что также свидетельствует о функциональном сходстве импасов и пресенилинов (Weihofen et al., 2002). В наших исследованиях было впервые показано, что субстратом интрамембранных протеаз может быть политопный мембранный белок.

На модели нокаутированных линий дрожжей S. cerevisiae были получены данные, свидетельствующих о том, что IMPAS не играет функциональной роли в индукции UPR-сигнального ответа в клетке. Показано, что IMPAS не является жизненно-необходимым геном для нормального развития, образования диплоидов и споруляции дрожжей.

Оригинальное исследование функций ортолога hIMPl гена в многоклеточном организме С. elegans проведено с помощью двуцепочечной РНК интерференции (дцРНКи, dsRNAi). Показано, что Ce-imp-2 играет важную роль как в эмбриональном, так и в личиночном развитии С. elegans, обеспечивая нормальное прохождение процессов линьки. Т.к. Ce-imp-2 является высококонсервативным гомологом гена hIMPl, можно сделать предположение о важной роли гена IMP1 человека в процессах развития.

Таким образом, в данной работе был проведен структурно-функциональный анализ различных изоформ генов пресенилинов и их гомологов с использованием широкого круга методических подходов и разнообразных модельных систем, что позволило получить ряд важных данных в изучении природы аспартатных протеаз и их функций в жизнедеятельности организма, в норме и патологии. Использование полученных конструкций и клеточных линий позволит в дальнейшем провести более детальные исследования роли генов пресенилинов и их гомологов в нормальном развитии и при БА.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Григоренко, Анастасия Петровна, 2005 год

1. Григоренко, А. П., Моляка Ю. К., Коровайцева, Г. И., Рогаев, Е. И. Обнаружение нового класса полнтопных белков с доменами, ассоциированными с возможной протеиназной активностью. Биохимия, 2002, т.67, стр.995-1005.

2. Маниатис, Т., Фрич, Э., Сэмбрук, Д. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1984.

3. Alzheimer's Disease Collaborative Group. The structure of the presenilin 1 (SI82) gene and identification of six novel mutations in early onset AD families. Nat.Genet., 1995, v. 11, pp.219-222.

4. Andersson, С. X., Fernandez-Rodriguez, J., Laos, S., Baeckstrom, D., Haass, C., and Hansson, G. C. Shedding and gamma-Secretase mediated intramembrane proteolysis of the mucin-type molecule CD43. Biochem.J., 2004

5. Araki, W., Yuasa, K., Takeda, S., Shirotani, K., Takahashi, K., and Tabira, T. Overexpression of presenilin-2 enhances apoptotic death of cultured cortical neurons Ann.N.Y.Acad.Sci., 2000, v.920, pp.241-244.

6. Asai, M., Hattori, C., Szabo, В., Sasagawa, N., Maruyama, K., Tanuma, S., and Ishiura, S. Putative function of ADAM9, ADAM 10, and ADAM 17 as APP alpha-secretase. Biochem.Biophys.Res.Commun., 2003, v.301, pp.231-235.

7. Bardy, S. L. and Jarrell, K. F. Cleavage of preflagellins by an aspartic acid signal peptidase is essential for flagellation in the archaeon Methanococcus voltae Mol.Microbiol., 2003, v.50, pp. 1339-1347.

8. Bardy, S. L., Eichler, J., and Jarrell, K. F. Archaeal signal peptides-a comparative survey at the genome level. Protein Sci., 2003, v.12, pp.1833-1843.

9. Barinaga, M. Is apoptosis key in Alzheimer's disease? Science, 1998, v.281, pp.1303-1304.

10. Blacker, D., Bertram, L., Saunders, A. J., Moscarillo, T. J., Albert, M. S., Wiener, H., Perry, R. Т., Collins, J. S., Harrell, L. E., Go, R. C., Mahoney, A., Beaty, Т.,

11. Boulianne, G. L., Livne-Bar, I., Humphreys, J. M., Liang, Y., Lin, C., Rogaev, E., and St George-Hyslop, P. Cloning and characterization of the Drosophila presenilin homologue. Neuroreport, 1997, v.8, pp.1025-1029.

12. Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding Anal.Biochem., 1976, v.72, pp.248-254.

13. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans.Genetics, 1974, v.77, pp.7194.

14. Brown, M.S., Ye, J., Rawson, R.B., and Goldstein, J.L. Regulated intramembrane proteolysis: a control mechanism conserved from bacteria to humans. Cell, 2000, v. 100, pp.391-398.

15. Cao, X. and Sudhof, T. C. A transcriptionally correction of transcriptively. active complex of APP with Fe65 and histone acetyltransferase Tip60. Science, 2001, v.293, pp. 115-120.

16. Cao, X. and Sudhof, T. C. Dissection of amyloid-beta precursor protein-dependent transcriptional transactivation. J.Biol.Chem., 2004, v.279, pp.24601-24611.

17. Capell, A., Steiner, H., Romig, H., Keck, S., Baader, M., Grim, M. G., Baumeister, R., and Haass, C. Presenilin-1 differentially facilitates endoproteolysis of the beta-amyloid precursor protein and Notch. Nat.Cell Biol., 2000, v.2, pp.205-211.

18. Chu, S., DeRisi, J., Eisen, M,, Mulholland, J., Botstein, D., Brown, P. O., and Herskowitz, I. The transcriptional program of sporulation in budding yeast. Science, 1998, v.282, pp.699-705.

19. Combarros, O., varez-Arcaya, A., Sanchez-Guerra, M., Infante, J., and Berciano, J. Candidate gene association studies in sporadic Alzheimer's disease. Dement.Geriatr.Cogn Disord., 2002, v. 14, pp.41-54.

20. Conlon, R. A., Reaume, A. G., and Rossant, J. Notchl is required for the coordinate segmentation of somites. Development, 1995, v.121, pp.1533-1545.

21. Cox, J. S., Shamu, C. E., and Walter, P. Transcriptional induction of genes encoding endoplasmic reticulum resident proteins requires a transmembrane protein kinase. Cell, 1993, v.73, pp.1197-1206.

22. Deng, G., Pike, C. J., and Cotman, C. W. Alzheimer-associated presenilin-2 confers increased sensitivity to apoptosis in PC 12 cells. FEBS Lett., 1996, v.397, pp.50-54.

23. Donoviel, D. B„ Hadjantonakis, A. K., Ikeda, M., Zheng, H., Hyslop, P. S., and Bernstein, A. Mice lacking both presenilin genes exhibit early embryonic patterning defects. Genes Dev., 1999, v.13, pp.2801-2810.

24. Eckert, A., Marques, C. A., Keil, U., Schussel, K., and Muller, W. E. Increased apoptotic cell death in sporadic and genetic Alzheimer's disease. Ann.N.Y.Acad.Sci.,2003, v. 1010, pp.604-609.

25. Edbauer, D., Winkler, E., Haass, C., and Steiner, H. Presenilin and nicastrin regulate each other and determine amyloid beta-peptide production via complex formation. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 2002, v.99, pp.8666-8671.

26. Edbauer, D., Winkler, E., Regula, J. T., Pesold, B., Steiner, H., and Haass, C. Reconstitution of gamma-secretase activity. Nat.Cell Biol., 2003, v.5, pp.486-488.

27. Farrer, L. A., O'Sullivan, D. M., Cupples, L. A., Growdon, J. H., and Myers, R. H. Assessment of genetic risk for Alzheimer's disease among first-degree relatives. Ann.Neurol., 1989, v.25, pp.485-493.

28. Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., and Mello, C. C. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature, 1998, v.391, pp.806-811.

29. Forman, M. S. Genotype-phenotype correlations in FTDP-17: does form follow function? Exp.Neurol., 2004, v. 187, pp.229-234.

30. Fortna, R. R., Crystal, A. S., Moráis, V. A., Pijak, D. S., Lee, V. M., and Doms, R. W. Membrane topology and nicastrin-enhanced endoproteolysis of APH-1, a component of the gamma-secretase complex. J.Biol.Chem., 2004, v.279, pp.36853693.

31. Fraering, P. C., Ye, W., Strub, J. M., Dolios, G., LaVoie, M. J., Ostaszewski, B. L., van, D. A., Wang, R., Selkoe, D. J., and Wolfe, M. S. Purification and characterization of the human gamma-secretase complex. Biochemistry, 2004, v.43, pp.9774-9789.

32. Glenner, G. G. and Wong, C. W. Alzheimer's disease and Down's syndrome: sharing of a unique cerebrovascular amyloid fibril protein. Biochem.Biophys.Res.Commun., 1984, v.122, pp.1131-1135.

33. Glenner, G. G. and Wong, C. W. Alzheimer's disease: initial report of the purification and characterization of a novel cerebrovascular amyloid protein. Biochem.Biophys.Res.Commun., 1984, v. 120, pp.885-890.

34. Goutte, C., Hepler, W., Mickey, K. M., and Priess, J. R. aph-2 encodes a novel extracellular protein required for GLP-1-mediated signaling. Development, 2000, v.127, pp.2481-2492.

35. Goutte, C., Tsunozaki, M., Hale, V. A., and Priess, J. R. APH-1 is a multipass membrane protein essential for the Notch signaling pathway in Caenorhabditis elegans embryos. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 2002, v.99, pp.775-779.

36. Gowrishankar, K., Zeidler, M. G., and Vincenz, C. Release of a membrane-bound death domain by gamma-secretase processing of the p75NTR homolog NRADD. J.Cell Sci., 2004, v.l 17, pp.4099-4111.

37. Graeber, M. B., Kosel, S., Grasbon-Frodl, E., Moller, H. J., and Mehraein, P. Histopathology and APOE genotype of the first Alzheimer disease patient, Auguste D. Neurogenetics., 1998, v.l, pp.223-228.

38. Graeber, M. B. and Mehraein, P. Reanalysis of the first case of Alzheimer's disease. Eur.Arch.Psychiatry Clin.Neurosci., 1999, v.249 Suppl 3, pp.10-13.

39. Grundke-Iqbal, I., Iqbal, K., Quinlan, M., Tung, Y. C., Zaidi, M. S., and Wisniewski, H. M. Microtubule-associated protein tau. A component of Alzheimer paired helical filaments. J.Biol.Chem., 1986, v.261, pp.6084-6089.

40. Guo, Q., Robinson, N., and Mattson, M. P. Secreted beta-amyloid precursor protein counteracts the proapoptotic action of mutant presenilin-1 by activation of NF-kappaB and stabilization of calcium homeostasis. J.Biol.Chem., 1998, v.273, pp.12341-12351.

41. Guo, Q., Fu, W., Holtsberg, F. W., Steiner, S. M., and Mattson, M. P. Superoxide mediates the cell-death-enhancing action of presenilin-1 mutations. J. Neurosci. Res., 1999, v.56, pp. 457-470.

42. Hardy, J. The Genetics of Alzheimer's Disease. Alzheimer's Disease and Related Disorders: Research Advances. Ana Asian Intl. Acad, of Aging, Bucharest, Romania, 2003, pp. 29-47.

43. Hardy, J„ Duff, K., Hardy, K. G., Perez-Tur, J., and Hutton, M. Genetic dissection of Alzheimer's disease and related dementias: amyloid and its relationship to tau. Nat.Neurosci., 1998, v.l, pp.355-358.

44. Hardy, J. A. and Higgins, G. A. Alzheimer's disease: the amyloid cascade hypothesis. Science, 1992, v.256, pp. 184-185.

45. Hecimovic, S., Wang, J., Dolios, G., Martinez, M., Wang, R., and Goate, A. M. Mutations in APP have independent effects on Abeta and CTFgamma generation. Neurobiol.Dis., 2004, v. 17, pp.205-218.

46. Ikeuchi, T. and Sisodia, S. S. The Notch ligands, Deltal and Jagged2, are substrates for presenilin-dependent "gamma-secretase" cleavage. J.Biol.Chem., 2003, v.278, pp.7751-7754.

47. Iso, T., Kedes, L., and Hamamori, Y. HES and HERP families: multiple effectors of the Notch signaling pathway. J.Cell Physiol, 2003, v.194, pp.237-255.

48. Janicki, S. and Monteiro, M. J. Increased apoptosis arising from increased expression of the Alzheimer's disease-associated presenilin-2 mutation (N1411). J.Cell Biol., 1997, v.139, pp.485-495.

49. Jarriault, S., Brou, C., Logeat, F., Schroeter, E. H., Kopan, R., and Israel, A. Signalling downstream of activated mammalian Notch. Nature, 1995, v.377, pp.355358.

50. Kametani, F. Secretion of long Abeta-related peptides processed at epsilon-cleavage site is dependent on the alpha-secretase pre-cutting. FEBS Lett., 2004, v.570, pp.73-76.

51. Kim, D. Y., Ingano, L. A., and Kovacs, D. M. Nectin-1 alpha, an immunoglobulin-like receptor involved in the formation of synapses, is a substrate for presenilin/gamma-secretase-like cleavage. J.Biol.Chem., 2002, v.277, pp.4997649981.

52. Kimberly, W. T., Zheng, J. B., Guenette, S. Y., and Selkoe, D. J. The intracellular domain of the beta-amyloid precursor protein is stabilized by Fe65 and translocates to the nucleus in a notch-like manner. J.Biol.Chem., 2001, v.276, pp.40288-40292.

53. Kitagawa, N., Shimohama, S., Oeda, T., Uemura, K., Kohno, R., Kuzuya, A., Shibasaki, H., and Ishii, N. The role of the presenilin-1 homologue gene sel-12 of Caenorhabditis elegans in apoptotic activities. J.Biol.Chem., 2003, v.278, pp. 1213012134.

54. Kosik, K. S., Joachim, C. L., and Selkoe, D. J. Microtubule-associated protein tau (tau) is a major antigenic component of paired helical filaments in Alzheimer disease. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1986, v.83, pp.4044-4048.

55. Kume, H., Maruyama, K., and Kametani, F. Intracellular domain generation of amyloid precursor protein by epsilon-cleavage depends on C-terminal fragment by alpha-secretase cleavage. Int.J.Mol.Med., 2004, v.13, pp.121-125.

56. Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 1970, v.227, pp.680-685 .

57. LaPointe, C. F. and Taylor, R. K. The type 4 prepilin peptidases comprise a novel family of aspartic acid proteases. J.Biol.Chem., 2000, v.275, pp.1502-1510.

58. LaVoie, M. J. and Selkoe, D. J. The Notch ligands, Jagged and Delta, are sequentially processed by alpha-secretase and presenilin/gamma-secretase and release signaling fragments. J.Biol.Chem., 2003, v.278, pp.34427-34437.

59. Lee, H. J., Jung, K. M., Huang, Y. Z., Bennett, L. B., Lee, J. S., Mei, L., and Kim, T. W. Presenilin-dependent gamma-secretase-like intramembrane cleavage of ErbB4

60. J.Biol.Chem., 2002, v.277, pp.6318-6323.

61. Lee, S. F., Shah, S., Li, H., Yu, C., Han, W., and Yu, G. Mammalian APH-1 interacts with presenilin and nicastrin and is required for intramembrane proteolysis of amyloid-beta precursor protein and Notch. J.Biol.Chem., 2002, v.277, pp.4501345019.

62. Levitan, D. and Greenwald, I. Facilitation of lin-12-mediated signalling by sel-12, a Caenorhabditis elegans S182 Alzheimer's disease gene. Nature, 1995, v.377, pp.351-354.

63. Levitan, D. and Greenwald, I. Effects of SEL-12 presenilin on LIN-12 localization and function in Caenorhabditis elegans. Development, 1998, v. 125, pp.3599-3606.

64. Levitan, D., Lee, J., Song, L., Manning, R., Wong, G., Parker, E., and Zhang, L. PS1 N- and C-terminal fragments form a complex that functions in APP processing and Notch signaling. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 2001, v.98, pp.12186-12190.

65. Levy-Lahad, E., Wasco, W., Poorkaj, P., Romano, D. M., Oshima, J., Pettingell, W. H., Yu, C. E., Jondro, P. D., Schmidt, S. D., Wang, K., and . Candidate gene for the chromosome 1 familial Alzheimer's disease locus. Science, 1995, v.269, pp.973977.

66. Li, J., Xu, M., Zhou, H., Ma, J., and Potter, H. Alzheimer presenilins in the nuclear membrane, interphase kinetochores, and centrosomes suggest a role in chromosome segregation. Cell, 1997, v.90, pp.917- 927.

67. Li, X. and Greenwald, I. HOP-1, a Caenorhabditis elegans presenilin, appears to be functionally redundant with SEL-12 presenilin and to facilitate LIN-12 and GLP-1 signaling. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1997, v.94, pp. 12204-12209.

68. Li, X. and Greenwald, I. Additional evidence for an eight-transmembrane-domain topology for Caenorhabditis elegans and human presenilins. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1998, v.95, pp.7109-7114.

69. Alzheimer's disease with genetic variation in multiple members of the GAPD gene family. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 2004, v.101, pp.15688-15693.

70. Logeat, F., Bessia, C., Brou, C., LeBail, O., Jarriault, S., Seidah, N. G., and Israel, A. The Notch 1 receptor is cleaved constitutively by a furin-like convertase. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1998, v.95, pp.8108-8112.

71. Luo, W. J., Wang, H., Li, H., Kim, B. S., Shah, S., Lee, H. J., Thinakaran, G., Kim, T. W., Yu, G., and Xu, H. PEN-2 and APH-1 coordinately regulate proteolytic processing of presenilin 1. J.Biol.Chem., 2003, v.278, pp.7850-7854.

72. Luo, X. and Hofmann, K. The protease-associated domain: a homology domain associated with multiple classes of proteases. Trends Biochem.Sci., 2001, v.26 , pp. 147-148.

73. Mahon, P. and Bateman, A. The PA domain: a protease-associated domain. Protein Sci., 2000, v.9, pp. 1930-1934.

74. Marambaud, P., Wen, P. H., Dutt, A., Shioi, J., Takashima, A., Siman, R., and Robakis, N. K. A CBP binding transcriptional repressor produced by the PSl/epsilon-cleavage of N-cadherin is inhibited by PS1 FAD mutations. Cell, 2003, v.l 14, pp.635645.

75. Mattson, M. P. Oxidative stress, perturbed calcium homeostasis, and immune dysfunction in Alzheimer's disease. J.Neurovirol., 2002, v.8, pp.539-550.

76. Mattson, M. P. and Chan, S. L. Neuronal and glial calcium signaling in Alzheimer's disease. Cell Calcium, 2003, v.34, pp.385-397.

77. Maurer, K., Volk, S., and Gerbaldo, H. Auguste D and Alzheimer's disease. Lancet, 1997, v.349, pp.1546-1549.

78. May, P., Reddy, Y. K., and Herz, J. Proteolytic processing of low density lipoprotein receptor-related protein mediates regulated release of its intracellular domain. J.Biol.Chem., 2002, v.277, pp. 18736-18743.

79. May, P., Bock, H. H., Nimpf, J., and Herz, J. Differential glycosylation regulates processing of lipoprotein receptors by gamma-secretase. J.Biol.Chem., 2003, v.278, pp.37386-37392.

80. Moliaka, Y. K., Grigorenko, A., Madera, D., and Rogaev, E. I. Impas 1 possesses endoproteolytic activity against multipass membrane protein substrate cleaving the presenilin 1 holoprotein. FEBS Lett., 2004, v.557, pp.185-192.

81. Moon, R. T., Kohn, A. D., De Ferrari, G. V., and Kaykas, A. WNT and beta-catenin signalling: diseases and therapies. Nat.Rev.Genet., 2004, v.5, pp.691-701.

82. Ni, C. Y., Murphy, M. P., Golde, T. E., and Carpenter, G. gamma -Secretase cleavage and nuclear localization of ErbB-4 receptor tyrosine kinase. Science, 2001, v.294, pp.2179-2181.

83. Niwa, M., Sidrauski, C., Kaufman, R. J., and Walter, P. A role for presenilin-1 in nuclear accumulation of Irel fragments and induction of the mammalian unfolded protein response. Cell, 1999, v.99, pp.691-702.

84. Novak, M., Kabat, J., and Wischik, C. M. Molecular characterization of the minimal protease resistant tau unit of the Alzheimer's disease paired helical filament. EMBO J., 1993, v. 12, pp.365-370.

85. Okochi, M., Steiner, H„ Fukumori, A., Tanii, H., Tomita, T., Tanaka, T., Iwatsubo, T., Kudo, T., Takeda, M., and Haass, C. Presenilins mediate a dual intramembranous gamma-secretase cleavage of Notch-1. EMBO J., 2002, v.21, pp.5408-5416.

86. Pedersen, N. L., Gatz, M., Berg, S., and Johansson, B. How heritable is Alzheimer's disease late in life? Findings from Swedish twins. Ann.Neurol., 2004, v.55, pp.180-185.

87. Peterson, G. L. A simplification of the protein assay method of Lowry et al. which is more generally applicable. Anal.Biochem., 1977, v.83, pp.346-356.

88. Prasher, V. P., Farrer, M. J., Kessling, A. M., Fisher, E. M., West, R. J., Barber, P. C., and Butler, A. C. Molecular mapping of Alzheimer-type dementia in Down's syndrome. Ann.Neurol., 1998, v.43, pp.380-383.

89. Raff, T., van der, G. M., Endemann, D., Wiederholt, T., and Paul, M. Design and testing of beta-actin primers for RT-PCR that do not co-amplify processed pseudogenes. Biotechniques, 1997, v.23, pp.456- 460.

90. Ray, W. J., Yao, M., Nowotny, P., Mumm, J., Zhang, W., Wu, J. Y., Kopan, R., and Goate, A. M. Evidence for a physical interaction between presenilin and Notch. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1999, v.96, pp.3263-3268.

91. Rocchi, A., Pellegrini, S., Siciliano, G., and Murri, L. Causative and susceptibility genes for Alzheimer's disease: a review. Brain Res.Bull., 2003, v.61, pp. 1-24.

92. Rocheleau, C. E., Downs, W. D., Lin, R., Wittmann, C., Bei, Y., Cha, Y. H., Ali, M., Priess, J. R., and Mello, C. C. Wnt signaling and an APC-related gene specify endoderm in early C. elegans embryos. Cell, 1997, v.90, pp.707-716.

93. Schlondorff, J. and Blobel, C. P. Metalloprotease-disintegrins: modular proteins capable of promoting cell-cell interactions and triggering signals by protein-ectodomain shedding. J.Cell Sci., 1999, v.l 12 ( Pt 21), pp.3603-3617.

94. Schroeter, E. H., Kisslinger, J. A., and Kopan, R. Notch-1 signalling requires ligand-induced proteolytic release of intracellular domain. Nature, 1998, v.393, pp.382-386.

95. Schulz, J. G., Annaert, W., Vandekerckhove, J., Zimmermann, P., de, S. B., and David, G. Syndecan 3 intramembrane proteolysis is presenilin/gamma-secretase-dependent and modulates cytosolic signaling. J.Biol.Chem., 2003, v.278, pp.4865148657.

96. Serpell, L. C. Alzheimer's amyloid fibrils: structure and assembly. Biochim.Biophys.Acta, 2000, v.1502, pp.16-30.

97. Shearman, M. S., Ragan, C. I., and Iversen, L. L. Inhibition of PC12 cell redox activity is a specific, early indicator of the mechanism of beta-amyloid-mediated cell death. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1994, v.91, pp. 1470-1474.

98. Shen, J., Bronson, R. T., Chen, D. F., Xia, W., Selkoe, D. J., and Tonegawa, S. Skeletal and CNS defects in Presenilin-1-deficient mice. Cell, 1997, v.89, pp.629-639.

99. Sherman, F. Getting started with yeast. Methods Enzymol., 2002, v.350, pp.3-41.

100. Sherrington, R., Rogaev, E. I., Liang, Y., Rogaeva, E. A., Levesque, G., Ikeda, M., Chi, H., Lin, C., Li, G., Holman, K. , and . Cloning of a gene bearing missense mutations in early-onset familial Alzheimer's disease. Nature, 1995, v.375, pp.754760.

101. Simons, M., de, S. B., Multhaup, G., Tienari, P. J., Dotti, C. G., and Beyreuther, K. Amyloidogenic processing of the human amyloid precursor protein in primary cultures of rat hippocampal neurons. J.Neurosci., 1996, v. 16, pp.899-908.

102. Sisodia, S. S. and St George-Hyslop, P. H. gamma-Secretase, Notch, Abeta and Alzheimer's disease: where do the presenilins fit in? Nat.Rev.Neurosci., 2002, v.3, pp.281-290.

103. Six, E., Ndiaye, D., Laabi, Y., Brou, C., Gupta-Rossi, N., Israel, A., and Logeat, F. The Notch Iigand Delta 1 is sequentially cleaved by an ADAM protease and gamma-secretase. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 2003, v. 100, pp.7638-7643.

104. Struhl, G. and Adachi, A. Nuclear access and action of notch in vivo. Cell, 1998, v.93, pp.649-660.

105. Struhl, G. and Greenwald, I. Presenilin is required for activity and nuclear access of Notch in Drosophila. Nature, 1999, v.398, pp.522-525.

106. Struhl, G. and Greenwald, I. Presenilin-mediated transmembrane cleavage is required for Notch signal transduction in Drosophila. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 2001, v.98, pp.229-234.

107. Su, J. H., Anderson, A. J., Cummings, B. J., and Cotman, C. W. Immunohistochemical evidence for apoptosis in Alzheimer's disease. Neuroreport, 1994, v.5, pp.2529-2533.

108. Swiatek, P. J., Lindsell, C. E., del Amo, F. F., Weinmaster, G., and Gridley, T. Notch 1 is essential for postimplantation development in mice. Genes Dev., 1994, v.8, pp.707-719.

109. Tabara, H., Hill, R. J., Mello, C. C., Priess, J. R., and Kohara, Y. pos-1 encodes a cytoplasmic zinc-finger protein essential for germline specification in C. elegans. Development, 1999, v. 126, pp. 1 -11.

110. Takasugi, N., Tomita, T., Hayashi, I., Tsuruoka, M., Niimura, M., Takahashi, Y., Thinakaran, G., and Iwatsubo, T. The role of presenilin cofactors in the gamma-secretase complex. Nature, 2003, v.422, pp.438-441.

111. Taniguchi, Y., Kim, S. H., and Sisodia, S. S. Presenilin-dependent "gamma-secretase" processing of deleted in colorectal cancer (DCC). J.Biol.Chem., 2003, v.278, pp.30425-30428.

112. Tirasophon, W., Lee, K., Callaghan, B., Welihinda, A., and Kaufman, R. J. The endoribonuclease activity of mammalian IRE1 autoregulates its mRNA and is required for the unfolded protein response. Genes Dev., 2000, v. 14, pp. 2725-2736.

113. Urban, S., and Freeman, M. Intramembrane proteolysis controls diverse signalling pathways throughout evolution. Curr. Opin. Genet. Dev., 2002, v. 12, pp.512-518.

114. Van, B. C., Backhovens, H., Cruts, M., De, W. G., Bruyland, M., Cras, P., and Martin, J. J. Mapping of a gene predisposing to early-onset Alzheimer's disease to chromosome 14q24.3. Nat.Genet., 1992, v.2, pp.335-339.

115. Walter, J., Capell, A., Grunberg, J., Pesold, B., Schindzielorz, A., Prior, R., Podlisny, M. B., Fraser, P., Hyslop, P. S., Selkoe, D. J., and Haass, C. The

116. Alzheimer's disease-associated presenilins are differentially phosphorylated proteins located predominantly within the endoplasmic reticulum. Mol.Med., 1996, v.2, pp.673-691.

117. Wang, X. Z., Harding, H. P., Zhang, Y., Jolicoeur, E. M., Kuroda, M., and Ron, D. Cloning of mammalian Irel reveals diversity in the ER stress responses. EMBO J.,1998, v.17, pp.5708-5717.

118. Weihl, C. C., Ghadge, G. D., Kennedy, S. G., Hay, N., Miller, R. J., and Roos, R. P. Mutant presenilin-1 induces apoptosis and downregulates Akt/PKB. J.Neurosci. ,1999, v.19, pp.5360-5369.

119. Weihofen, A., Binns, K., Lemberg, M. K., Ashman, K., and Martoglio, B. Identification of signal peptide peptidase, a presenilin-type aspartic protease. Science, 2002, v.296, pp.2215-2218.

120. Wilhelmsen, K. and van der, G. P. Phorbol 12-myristate 13-acetate-induced release of the colony-stimulating factor 1 receptor cytoplasmic domain into the cytosol involves two separate cleavage events. Mol.Cell Biol., 2004, v.24, pp.454-464.

121. Wimo, A., Winblad, B., guero-Torres, H., and von, S. E. The magnitude of dementia occurrence in the world. Alzheimer Dis.Assoc.Disord., 2003, v. 17, pp.63-67.

122. Wisniewski, K. E., Wisniewski, H. M., and Wen, G. Y. Occurrence of neuropathological changes and dementia of Alzheimer's disease in Down's syndrome. Ann.Neurol., 1985, v. 17, pp.278-282.

123. Wolfe, M. S., De Los, A. J., Miller, D. D., Xia, W., and Selkoe, D. J. Are presenilins intramembrane-cleaving proteases? Implications for the molecular mechanism of Alzheimer's disease. Biochemistry, 1999, v.38, pp.11223-11230.

124. Wolfe, M. S., Xia, W., Ostaszewski, B. L., Diehl, T. S., Kimberly, W. T., and Selkoe, D. J. Two transmembrane aspartates in presenilin-1 required for presenilin endoproteolysis and gamma-secretase activity. Nature, 1999, v.398, pp.513-517.

125. Wood, J. G., Mirra, S. S., Pollock, N. J., and Binder, L. I. Neurofibrillary tangles of Alzheimer disease share antigenic determinants with the axonal microtubule-associated protein tau (tau). Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1986, v.83, pp.4040-4043.

126. Xia, W., Zhang, J., Perez, R., Koo, E. H., and Selkoe, D. J. Interaction between amyloid precursor protein and presenilins in mammalian cells: implications for the pathogenesis of Alzheimer disease. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A, 1997, v.94, pp.82088213.

127. Yamatsuji, T., Okamoto, T., Takeda, S., Murayama, Y., Tanaka, N., and Nishimoto, I. Expression of V642 APP mutant causes cellular apoptosis as Alzheimer trait-linked phenotype. EMBO J., 1996, v. 15, pp.498-509.

128. Ye, Y. and Fortini, M. E. Apoptotic activities of wild-type and Alzheimer's disease-related mutant presenilins in Drosophila melanogaster. J.Cell Biol., 1999, v.146, pp.1351-1364.

129. Ye, Y., Lukinova, N., and Fortini, M. E. Neurogenic phenotypes and altered Notch processing in Drosophila Presenilin mutants. Nature, 1999, v.398, pp.525-529 .

130. Zhang, Z., Nadeau, P., Song, W., Donoviel, D., Yuan, M., Bernstein, A., and Yankner, B. A. Presenilins are required for gamma-secretase cleavage of beta-APP and transmembrane cleavage of Notch-1. Nat.Cell Biol., 2000, v.2, pp.463-465.

131. Zhao, G., Mao, G., Tan, J., Dong, Y., Cui, M. Z., Kim, S. H., and Xu, X. Identification of a new presenil in-dependent zeta -cleavage site within the transmembrane domain of amyloid precursor protein. J.Biol.Chem., 2004,