Исследование функциональной компетентности ооцитов при нормальном и патологическом фолликулогенезе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат наук Тепляшина, Елена Анатольевна

• Тепляшина, Елена Анатольевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Тепляшина, Елена Анатольевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Фолликулогенез и стероидогенез в яичниках

1.1.1. Фолликулогенез в норме

1.1.2. Стероидогенез в растущих фолликулах яичниках

1.2. Гуморальные факторы в регуляции роста и атрезии фолликулов

1.2.1. Семейство инсулиноподобных факторов роста

1.2.2. Семейство эпидермального фактора роста

1.2.3. Семейство фактора некроза опухолей (РазЬ/РазЯ)

1.3. Ангиогенез в растущих фолликулах яичника. Факторы роста

в регуляции неоангиогенеза

1.3.1. Сосудисто-эндотелиальный фактор роста

1.3.2. Эндотелии-1

1.4. Нарушение фолликуло- и стероидогенеза при гиперандроге- 41 нии и гиперпролактинемии

Глава 2. Материал и методы исследования

2.1. Объект и методы экспериментальной части исследования

2.2. Метод иммуноферментного анализа

2.3. Расчетные коэффициенты

2.4. Статистическая обработка результатов

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1. Стероидогенез на разных этапах роста и созревания фолликулов при гиперандрогении и гиперпролактинемии

3.2. Маркеры апоптоза в динамике роста фолликулов при гиперандрогении и гиперпролактинемии

3.3. Маркеры ангиогенеза в динамике роста фолликулов при гиперандрогении и гиперпролактинемии

3.4. Маркеры пролиферации в динамике роста фолликулов при

гиперандрогении и гиперпролактинемии

3.5. Корреляционный анализ полученных результатов

3.6. Метод математического моделирования

Глава 4. Обсуждение полученных результатов

Выводы

Практические рекомендации

Список использованных источников

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

Ал - андростендиол;

Ан - андростендион;

АТФ — аденозинтрифосфорная кислота;

ВРТ - вспомогательные репродуктивные технологии;

ГнТ - гонадотропины;

ГБОУ ВПО — государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования; ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота; ДЭА - дегидроэпиандростендион;

ДЭА-С, (ДЭА-сульфат) - дегидроэпиандростендион-сульфат; Е] -эстрон; Е2 - эстрадиол;

ИФА - иммуноферментный метод анализа;

ИФР — инсулиноподобный фактор роста;

ИФР-СБ - ИФР-связывающий белок;

ЛГ - лютеинезирующий гормон;

мРНК — матричная рибонуклеиновая кислота;

ОГНГ - овариальная гиперандрогения неопухолевого генеза;

оФРФ — фактор роста фибробластов основной;

ПБР - периферический бензодиазепиновый рецептор;

Прог - прогестерон;

РЛДЦ ИХМИ - региональный лабораторно - диагностический центр имму-нохимических методов исследования; РНК - рибонуклеиновая кислота; Т — тестостерон;

ТПФ — трубно-перитонеальный фактор бесплодия (контрольная группа); ТФР-р1 - трансформирующий фактор роста (31; СЭФР — сосудисто-эндотелиальный фактор роста; ФГП — функциональная гиперпролактинемия;

ФНОа - фактор некроза опухолей альфа;

ФРП — фактор роста плаценты;

ФСГ- фолликулостимулирующий юрмон;

цАМФ - цикло аденозинмонофосфорная кислота;

чХГ - человеческий хорионический гонадотропин;

ЭКО - экстракорпоральное оплодотворение;

ЭФР - эпидермальный фактор роста;

Apaf-1 - протеаза активирующая апоптоз;

FasL - Fas-лиганд;

FasR - Fas-рецептор;

NO - оксид азота;

NF-kB - ядерный фактор каппа В;

Puma — р53 модулятор апоптоза;

TNF - фактор некроза опухоли;

Bcl-2, Вах, IAP - ингибиторы апоптоза.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование функциональной компетентности ооцитов при нормальном и патологическом фолликулогенезе»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

На современном этапе развития биологических знаний о репродуктивных процессах все большее значение придается изучению закономерностей развития фолликулов в процессе фолликулогенеза, физиологической регуляции этого процесса, а также системному анализу воздействия основных регу-ляторных модуляторов на клетки и функциональные уровни репродуктивной системы в целом.

Изучение молекулярно-биологических маркеров при эндокринном бесплодии показывает различные состояния функционирования яичников и позволяет получить ценную объективную информацию о состоянии процессов пролиферации, апоптоза, неоангиогенеза. Детальное рассмотрение поступательного развития фолликулов в динамике развития патологического процесса может способствовать раннему выявлению неизвестных закономерностей их функционирования.

Исследование молекулярно-биологических маркеров развития фолликулов в процессе фолликулогенеза - одно из наиболее перспективных и социально-значимых направлений репродуктивной биологии. В настоящее время актуальность изучения проблемы оогенеза и фолликулогенеза обусловлена высоким процентом числа бесплодных браков, связанных с проблемами в репродуктивной сфере.

Согласно данным ВОЗ рождаемость в России не достигает уровня, необходимого для простого воспроизводства населения. Суммарный коэффициент рождаемости составляет 1,6. тогда как для простого воспроизводства населения без прироста численности необходим суммарный коэффициент рождаемости 2,11-2,15 [6].

Эндокринное бесплодие у женщин является важнейшей составляющей многофакторной структуры бесплодного брака. На первый план выступают такие заболевания как овариальная гиперандрогения неопухолевого генеза

(ОГНГ) и функциональная гиперпролактинемия (ФГП). В основе патогенеза указанных вариантов эндокринного бесплодия лежит функционирование репродуктивной системы в условиях измененного гормонального статуса, что приводит к последовательному нарушению стероидо- и фолликулогенеза, овуляции и оплодотворения [30,31].

Измененный гормональный статус женщин оказывает непосредственное воздействие на дифференцировку, пролиферацию и гибель клеток фолликула и эндометрия [157]. При этом развитие ооцитов в растущем пуле фолликулов во многом зависит от состава фолликулярной жидкости (ФЖ) [62].

Поскольку ФЖ формирует микроокружение для ооцита и является источником веществ, необходимых для его правильного развития, представляется вероятным, что содержание того или иного вещества может свидетельствовать об оптимальных или, напротив, неоптимальных условиях для развития конкретного ооцита. Изменения средней концентрации этих молекул-маркеров в образцах ФЖ указывают на нарушение репродуктивной функции в целом [4]. В настоящее время выявлена корреляция между уровнем стероидных гормонов в антральной жидкости, количеством митозов в клетках гра-нулезы и качественными характеристиками ооцитов [99].

Рост сосудов и васкуляризация играют определяющую роль для развития доминантного фолликула, который характеризуется высокой концентрацией сосудисто-эндотелиального фактора роста (СЭФР) [8]. В контексте рассматриваемой проблемы важно отметить факт мало изученной роли эндоте-лина-1 в регуляции неоангиогенеза и его значения для развивающегося фолликула [122].

Известно, что в ФЖ доминантных фолликулов при ОГНГ и ФГП увеличена концентрация митогенных факторов и снижено содержание факторов выживаемости, что определяет развитие ускоренной атрезии фолликулов и функциональную незрелость яйцеклеток при обеих эндокринопатиях [74],

что соотносится с большой частотой невынашивания беременности после лечения ЭКО [30].

Анализ литературных данных показывает, что для выявления причин рассматриваемых вариантов эндокринного бесплодия и его диагностики большое значение имеет понимание патофизиологических механизмов, приводящих к функциональной неполноценности женских гамет. К ним следует отнести нарушенный ангиогенез, дизрегуляцию эффектов стероидных гормонов, активацию апоптоза клеток гранулезы фолликулов, изменение соотношений про- и антиапоптотических факторов и накопление цитокинов в составе ФЖ [37, 52, 58]. Обозначенные проблемы показывают перспективы дальнейшего исследования в данной сфере.

В этой связи является актуальным изучение условий протекания гормонально-зависимого этапа формирования пула антральных фолликулов, регуляции их роста и селекции доминантного фолликула, а также идентификация факторов ФЖ, под влиянием которых развивающиеся ооциты при ОГНГ и ФГП становятся неполноценными.

Цель исследования

состоит в исследовании функциональной компетентности ооцитов при некоторых вариантах эндокринного бесплодия человека и эффективности стимуляции овуляции в программах экстракорпорального оплодотворения.

Задачи исследования

1. Исследовать уровень маркеров функциональной компетентности ооцитов (эстрадиола (Е2), тестотерона (Т), индекса эстрадиол/тестостерон (Ег/Т), РаБ-лиганд/Раз-рецептор (БРазЬ/зРазЯ), основной фактор роста фиб-робластов (оФРФ), инсулиноподобный фактор роста-1 (ИФР-1), эпидермаль-ный фактор роста (ЭФР), индекс инсулиноподобный фактор роста-1/эпидермальный фактор роста (ИФР-1/ЭФР), трансформирующий фактор роста-В1 (ТФР-В1) в фолликулярной жидкости в динамике созревания фол-

ликулов при овариальной гиперандрогении неопухолевого генеза и функциональной гиперпролактинемии.

2. Изучить влияние эндотелина-1 и сосудисто-эндотелиального фактора роста (СЭФР) в фолликулярной жидкости на развитие фолликулов при исследуемых вариантах эндокринного бесплодия.

3. Определить роль пролиферации, ангиогенеза и апоптоза в процессе созревания пула малых антральных фолликулов, их роста и селекции доминантного фолликула при овариальной гиперандрогении неопухолевого генеза и функциональной гиперпролактинемии.

4. Оценить характер взаимосвязи маркеров физиологических механизмов и развития фолликулов при овариальной гиперандрогении неопухолевого генеза и функциональной гиперпролактинемии.

5. Выявить маркеры фолликулогенеза, прогнозирующие исход лечебных циклов ЭКО при рассматриваемых вариантах эндокринного бесплодия.

Научная новизна

1. Выявлено патологическое изменение фолликулярного микроокружения при овариальной гиперандрогении неопухолевого генеза и функциональной гиперпролактинемии. (снижение Е2/Т и накопление тестостерона) начиная с IV стадии гормонально-зависимого этапа фолликулогенеза.

2. Установлено, что увеличение секреции БраБЯ в фолликулярной жидкости при овариальной гиперандрогении неопухолевого генеза и функциональной гиперпролактинемии является косвенным свидетельством готовности гранулезных клеток развивающихся фолликулов к реализации программы апоптоза или отражает запуск механизма апоптоза гранулезных клеток.

3. Обнаружено, что снижение содержания основных маркеров пролиферации (ИФР-1, ЭФР) в развивающемся доминантном фолликуле может свидетельствовать о нарушенной пролиферации гранулезных клеток при

овариальной гиперандрогении неопухолевого генеза и функциональной ги-перпролактинемии, начиная со стадии раннего преовуляторного фолликула.

4. Показано, что сниженная секреция основных маркеров неоангиоге-неза (СЭФР, оФРФ) в растущем фолликуле позволяет судить о недостаточном кровоснабжении доминантного фолликула как одном из механизмов развития преждевременной атрезии фолликула и/или созревания ооцита со сниженным фертилизационным потенциалом. Секреция СЭФР в растущем фолликуле при изученных вариантах эндокринного бесплодия зависит от стероидного микроокружения ооцитов.

Личный вклад соискателя

Научные выводы и результаты, полученные при проведении диссертационного исследования, получены Тепляшиной Е.А. самостоятельно. Диссертантом лично осуществлено:

- формулирование цели, разработка конкретных задач работы и плана их выполнения;

- обработка экспериментального материала;

- проведение экспериментальной части исследования;

- создание компьютерной базы данных исследованных образцов фолликулов разной степени зрелости у женщин;

- статистическая обработка полученных данных и интерпретация результатов;

- написание текста диссертации и автореферата.

Теоретическая значимость работы

Полученные данные о характере и выраженности патологических изменений развивающихся фолликулов при овариальной гиперандрогении неопухолевого генеза и функциональной гиперпролактинемии могут быть использованы в курсах обучения физиологии и эндокринологии, при планировании экспериментальных протоколов направленных на изучение молеку-

лярных механизмов нарушения репродуктивной функции, ассоциированных с дизрегуляцией фолликулогенеза.

Практическая значимость работы

Выявленные закономерности развития фолликулов в зависимости от гуморального микроокружения целесообразно учитывать при оценке репродуктивного статуса пациенток с эндокринопатиями, а также при определении индивидуальных схем лечения в циклах вспомогательных репродуктивных технологий.

Настоящая работа представляет практический интерес в связи с выяснением прогностической роли ряда маркеров, которые могут быть использованы для оценки исходов лечебных циклов ЭКО у женщин с овариальной ги-перандрогенией неопухолевого генеза и функциональной гиперпролактине-мией.

Положения, выносимые на защиту

1. При нормальном фолликулогенезе молекулами, маркирующими эффективность фолликулогенеза, оплодотворения и имплантацию эмбриона, являются эстрогены, оФРФ и ЭФР; при функциональной гиперпролактине-мии - тестостерон, ТФР-(31, эндотелии-1; при овариальной гиперандрогении неопухолевого генеза - оФРФ, ТФР-Р1, эндотелии-1. Сниженная секреция основных маркеров неоангиогенеза в растущем фолликуле может приводит к недостаточному кровоснабжению доминантного фолликула. Имеется отрицательная корреляция между концентрацией оФРФ и степенью зрелости фолликула для пациенток с овариальной гиперандрогенией неопухолевого генеза (г=-0,93; р=0,001).

2. Особенностью развивающихся ооцитов у пациенток с исследуемыми вариантами эндокринного бесплодия является снижение их пролиферативной активности, регистрируемой по подавлению секреции полипептидных факторов и интенсификации апоптоза вследствие дизрегуляции БРавЯ/зРазЬ вза-

имодействий на фоне нарушенного синтеза стероидных гормонов, что в результате приводит к снижению эффективности оплодотворения и имплантации эмбриона.

Внедрение результатов исследования

Результаты работы внедрены в научно-исследовательский процесс НИИ молекулярной медицины и пагобиохимии, в диагностическую деятельность РЛДЦ ИХМИ г. Красноярска, в учебный процесс кафедры биохимии с курсами медицинской, фармацевтической и токсикологической химии, кафедры патологической физиологии, кафедры клинико-лабораторной диагностики ИПО ГБОУ ВПО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.

Апробация работы

Основные положения диссертационного исследования представлены и обсуждены:

- на V Международной конференции молодых ученых «Современные вопросы акушерства, гинекологии и перинатологии» (Москва, 2011 год);

- на V Международном конгрессе по репродуктивной медицине (Москва, 2011 год);

- на III Съезде физиологов СНГ (Ялта, 2011 год);

- на Всероссийской научной конференции молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, 2010 год);

- на семинарах НИИ молекулярной медицины и патобиохимии ГБОУ ВПО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого (Красноярск, 2009-2011 гг.);

- на заседании проблемной комиссии «Фундаментальная медицина» (выписка из протокола №3 от 22 декабря 2009 года).

13

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ: из них в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ - 5, в тезисах докладов на конгрессе и конференциях всероссийского и международного уровней - 9. Издано методическое пособие «Диагностика нарушения стерои-догенеза в клетках кумулюса фолликулов яичников у женщин с эндокринным бесплодием в лечебных циклах ЭКО», рекомендованное к печати центральным координационным методическим советом ГБОУ ВПО КрасГМУ им.проф.В.Ф.Войно-Ясенецкого (протокол № 9 от 16.06.2011).

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста, иллюстрирована 9 таблицами и 33 рисунками. Состоит из введения, 4 глав, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, содержащего 173 источников (отечественных и иностранных).

Благодарности

Автор выражает благодарность к.б.н. A.B. Светлакову, С.А.Сыромятниковой, коллективам Центров репродуктивной медицины и гинекологической эндокринологии и репродукции «Три сердца» за предоставленный исследовательский материал, коллективу РЛДЦ ИХМИ г. Красноярска за помощь в его обработке, к.т.н., доц. С.А. Арутюняну за помощь в обработке статистических данных, а также сотрудникам НИИ молекулярной медицины и патобиохимии ГБОУ ВПО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого (к.б.н. Е.А. Пожиленковой, к.м.н. H.A. Малиновской) за методическую помощь.

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Фолликулогенез и стероидогенсз в яичниках

1.1.1. Фолликулогенез в норме

Реализация репродуктивной функции женщины связана с процессом фолликулогенеза. Данный процесс включает совокупность регуляторных компонентов и факторов роста на различных молекулярных уровнях. В настоящее время важный вклад в изучение патогенеза эндокринного бесплодия вносят исследования необратимого дегенеративного процесса гибели фолликулов (атрезии), сопряженного с циклическим стероидогенезом в яичниках, и тесно связанным с ним ангиогенезом. Молекулярно-биологические маркеры позволяют оценить функционирование яичников и получить ценную объективную информацию о состоянии фолликулогенеза.

Вместе с тем, имеющиеся в настоящее время литературные данные не в полной мере отражают пути решения проблем в области репродукции и не в полной мере показывают всю гамму молекулярно-биологических подходов к пониманию патогенеза эндокринного бесплодия.

Одним из современных подходов к пониманию патогенеза различных заболеваний является изучение процессов регуляции клеточной гибели (апоптоза). Косвенным маркером готовности гранулезных клеток яичника к вступлению в апоптоз является увеличение содержания в ФЖ растворимой формы FasR — sFasR. Вместе с тем в основе физиологического обеспечения функционирования репродуктивном системы женщины лежат процессы циклического ангиогенеза. Изучение взаимосвязи данных процессов в норме позволяет объяснить возникновение и характер определенных заболеваний и роль молекулярно-биологических маркеров в регуляции.

Так, молекулярно-биологические маркеры при различных заболеваниях выступают в качестве потенциальных прогностических факторов, а также дают ценную информацию о процессах, протекающих на молекулярном уровне.

Анализ причинных факторов неудач при проведении программ ЭКО позволяет признать их мультифакторный характер, опосредованный нарушением всех этапов репродуктивного процесса, в регуляции которого принимают участие нервная, эндокринная и иммунная системы.

Измененная фолликулярная среда при некоторых вариантах эндокринного бесплодия может оказывать влияние на качество ооцитов, которое в свою очередь обусловливает сниженную имплантацию. Мониторинг данной проблемы является весьма сложной задачей, решение которой возможно с использованием математических методов исследования.

Так, в современной медицине использование математических моделей решает многие не только прогностические, но и диагностические задачи. В нашем исследовании определенные методы статистической обработки применялись для изучения влияния определенных факторов роста и гормонов на результаты лечебных циклов ЭКО.

Одним из важнейших репродуктивных органов женщины являются яичники, выполняющие две основные функции. Одна из этих функций -оогенез, связана с образованием зрелых гамет (яйцеклеток), а другая - сте-роидогенез, сопряжена с производством стероидных гормонов, необходимых для развития фолликула и подготовки репродуктивных органов женщины к беременности [24, 41].

Основной структурной и функциональной единицей яичника является фолликул. Каждый фолликул состоит из ооцита, окруженного слоем или слоями соматических клеток. Соматические компоненты яичника (гранулеза, те-ка, эндотелиальные клетки и поддерживающая соединительная ткань) развиваются из недифференцированных гонад эмбриона. Главное предназначение гранулезных клеток связано с выработкой стероидных гормонов [11,72,73].

Доказательством сложных преобразований в яичниках является факт экспрессии в них 20-30 % всех генов человека. Например, в мышечной ткани экспрессируется только 6-7 % генов. Ключевую роль в формировании яичников играет ген РЮЫА. Экспрессия чанного фактора приводит к синтезу бел-

ков блестящей оболочки (zona pellucida). Важным представителем, отвечающим за взаимодействие ооцита с клетками гранулезы и теки, является ген, экспрессирующий фактор BMP 15 (CDF9B). Указанный фактор относится к семейству ТФР-pl, который контролирует процесс формирования роста первичных фолликулов. Мутация в данном гене приводит к возникновению дис-генезии яичников [8,31]. Зависимое! ь динамики фолликулярного развития от указанных факторов и сигналов показана в таблице 1.

Временные параметры фолликулогенеза ограничиваются поздним этапом фазы менструального цикла и началом пика гонадотропинов [106]. Скоординированные эндо-, экзо- и паракринные взаимодействия способствуют поэтапному развитию фолликулов [10,161].

Согласно современным данным, процесс фолликулогенеза можно разделить на следующие стадии: 1) формирование пула растущих фолликулов; 2) базальный рост (рост до стадии антрального фолликула); 3) селекция и созревание доминантного фолликула; 4) овуляция доминантного фолликула [42,160]. Первые две стадии представляют этап гормонально-независимого развития фолликулов, третья и четвертая стадия - этап гормонально-зависимого развития фолликулов [8,98].

Таблица 1

Факторы, оказывающие влияние на динамику фолликулярного развития

Представители Оказываемое влияние

Вс1-2, ТФР-ß, kit-лиганд (стволовой клеточный фактор), BMP, GATA-4, ингегрип Способствуют выживанию фолликулов

Вс1-2, Вах, ФСГ, ингибин, Fas-лиганд, кас-пазы Осуществляют селекцию

Fas, каспазы, TNF, р53, прогибитин, интерферон и эндотелины Обеспечивают процесс фолликулярной ат-резии

Fas/ Fas-лиганд, касиаза 3, Вах, прогибитин, BMP лиганды, рецепторы (BMP рецептор и простагландин) Способствуют процессу лютеогенеза (лю-теолиз/лютеонизация)

Процесс фолликулогенеза наглядно показан в классификации Pedersen & Peters (1968 год). Данная классификация отражает наиболее развернутую картину основных морфологических событий: инициацию роста ооцита, про-

лиферацию гранулезных и слоя тека-клеток, формирование антрального фолликула. На рис.1 показан процесс атрезии, овуляции и лютеинизации фолликула.

В соответствии с существующими представлениями развитие фолликула в репродуктивном периоде женщины имеет ряд особенностей и претерпевает обозначенные на рисунке 1 стадии [98].

На основании процессов, протекающих в яичниках женщины, обнаруживается существование двух пулов фолликулов - группы «спящих» при-мордиальных фолликулов и группы первично инициированных антральных фолликулов. Основное депо представлено пулом примордиальных фолликулов, в то время как, пул антральных фолликулов способен к дальнейшему росту и длительной стабилизации на данном этапе развития [10].

Антральные фолликулы мог у г быть разделены на следующие виды: малые антральные фолликулы с диаметром 1-3 мм и большие антральные фолликулы диаметром 5-6 мм. Формирование доминантного фолликула из когорты растущих антральных фолликулов находится в непосредственной зависимости от ФСГ. Формирование когорты растущих антральных фолликулов начинается в конце второй фазы предыдущего менструального цикла. В данной фазе наблюдается пропорциональное уменьшение объема желтого тела с одновременным увеличением секреции ФСГ гипофизом и, соответственно, снижается секреция Прог, Е? и ингибина [31].

В основе роста и селекции доминантного фолликула лежит так называемая «теория окна», предложенная J. Brown (1978) & D. Baird (1987).

Согласно данной теории каждый из антральных фолликулов имеет свой индивидуальный порог чувствительности к концентрации ФСГ, который, как уже отмечалось, зависит от коли1,оства рецепторов к ФСГ в гранулезных клетках.

Для каждого из антральных фолликулов с диаметром 3-5 мм в начале фолликулярной фазы менструального цикла уровень ФСГ должен достигать определенного значения или порога. Этот порог строго индивидуален и зави-

сит от сохранности овариальных резервов. В нормальных условиях снижается уровень ФСГ в середине фолликулярной фазы цикла и доминантным становится один фолликул, который далее овулирует [9].

Рост преантрального фолликула Инициация

Рост ооцита

Формирование антральиои полости

Преовуляторныи фолликул

Примордиальный

Типы фолликулов по классификации Ре<1ег8еп

Формирование наружного с юя клеток токи

> ','» /

Щ

и /л

V.

За

ЗЬ

" Атрезия 5Ь \

2-5 <20 21-60 61-100 (101-200) 201-400 \ 401-600 (>600)

8

(>С00(

Количество гранулезных клеток

Овуляция

Лю типизация

Атрвтическии фолликул

Ооцит

Желтое тело

Рис. 1. Стадии фолликулярного развития с указанием диаметра и гипа фолликула [Е1у1п 1, МаШк М., 1998]

Последовательное развитие фолликула осуществляется за счет поступающих к нему питательных веществ из окружающей ФЖ. Состав ФЖ зависит от гормональных изменений в период фолликулогенеза [70,158].

1.1.2. Стероидогенез в растущих фолликулах яичника

Реализация стероидогенной функции яичника осуществляется, в основном, посредством таких гормонов как Прог, андрогены и эстрогены, действующие через специфические ядерные рецепторы.

Механизм действия стероидных гормонов различен у разных видов животных. Так, у мышей эмбриональные яичники не продуцируют стероид-

ные гормоны. Однако, у ряда других видов животных стероидогенез в развивающихся яичниках достаточно активен. Данный факт подтверждается тем, что выделение этих гормонов у обезьян и овец во внутриутробном состоянии нарушает развитие гонад, фолликулов, существенно изменяет морфологию яичников и приводит, в конечном счете, к формированию кист [125,157,163].

Весьма показателен процесс стероидогенеза в развивающихся фолликулах овец. Клетки этих фолликулов экспрессируют рецепторы для эстрогенов (ERa и ER(3) и андрогенов (AR), за исключением Прог (PR), которые обнаруживаются методом гибридизации in situ и иммуногистохимией в эмбриональный период [137].

Экспрессия перечисленных рецепторов наблюдалась у овец с 26 по 75 день эмбрионального развития. В свою очередь ER(3 обнаруживался в гранулезных клетках в течение всего периода развития яичников. Рецепторы к ан-дрогенам обнаруживались на 55 день в клетках стромы. мРНК рецепторов PR не наблюдалась в указанный период, однако проявлялась в малых антраль-ных и больших фолликулах [127].

Экспрессия ERa и ER|3, AR, PR наблюдается в поверхностном эпителии и строме яичников эмбриональных, новорожденных и взрослых особей. В конечном счете, стероидные гормоны у данных животных являются регуляторами развития различных типов клеток яичника и фолликулов в целом на ранних стадиях [137].

J. Е. Fortune (2003) проанализировал эффекты стероидных гормонов на ранних стадиях фолликулогенеза у различных животных. Результаты его исследования представлены в табл. 2.

На протяжении постнатального развития экспрессия мРНК ERp возрастает в соответствии с пролиферацией гранулезных клеток, а мРНК ERa напротив, остается стабильной. Исследования последних лет позволили определить роль ERa и ER(3 в репродуктивной функции женщины. Так, ERa посредством неизвестного пока механизма подавляют процесс овуляции, в то

время как ERß стимулируют рост фолликулов, подавляя атрезию и инициируя экспрессию специфических генов' [137].

В 2002 году К. Britt & J. Findlay продемонстрировали на экспериментальных моделях (мыши линии АгКО - линия с недостаточным количеством Е2 и, как следствие этого, приостановленным процессом фолликулогенеза на антральной стадии и отсутствием овуляции) биологическое действие Е2 на репродуктивную функцию. Назначение Е2 крысам с удаленным гипофизом стимулирует пролиферацию гранулезных клеток в малых преантральных фолликулах и снижает атрезию. Последующее назначение ФСГ крысам с экзогенным Е2, способствует росту фолликулов, дифференциации и образованию антральной полости [89].

Необходимо отметить, что сам по себе Е2, является потенциальным ми-тогеном, действуя на гранулезные клетки in vivo у кроликов. В условиях in vitro он лишен митогенной активности. Это показывает, что in vitro культура не способна поддерживать митогенный эффект Е2 на гранулезные клетки и/или воздействие других внутрифолликулярных факторов роста. Неизвестные факторы, вырабатываемые клетками теки, способны оказывать влияние на митогенный эффект эстрогенов. Научная группа под руководством M. Bley в 1997 году доказала, что комбинация эстрогенов и ФСГ или андро-генов стимулирует пролиферацию гранулезных клеток in vitro и этот эффект возрастает в присутствии инсулина или ИФР-1 [89].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Тепляшина, Елена Анатольевна, 2014 год

Список ИСПОЛЬЗОВАННЫХ источников

1. Апоптоз в гормонально-зависимых тканях репродуктивной системы / Т. Г. Сухих, М. М. Дементьева, В. Н. Серов [и др.] // Акушерство и гинекология. - 1999. -№ 5. - С. 12-15.

2. Апоптоз клеток гранулезы и показатели фертилизации ооцитов у женщин с эндокринным бесплодием и эндометриозом в программе ЭКО / М. В. Яманова, А. Б. Салмина, А. В. Свеглаков [и др.] // Проблемы репродукции. -2004.-№5.-С. 31-36.

3. Ахкубекова, Н. К. Взаимодействие эстрогенов, прогестерона и дофамина в регуляции секреции пролактина / Н. К. Ахкубекова // Проблемы эндокринологии. - 2009. - № 6. - С. 46-47.

4. Баркалина, Н. В. Антагонисты гонадотропин-рилизинг-гормона в программах вспомогательных репродуктивных технологий (обзор литературы) / Н. В. Баркалина, Н. Г. Мишиева, А. Н. Абубакиров // Проблемы репродукции. - 2012.-№ 1.-С. 65-69.

5. Баркалина, Н. В. Фолликулярная жидкость и прогноз исходов ВРТ / Н. В. Баркалина // Проблемы репродукции. - № 6. - С. 57-64.

6. Бесплодный брак. Современные подходы к диагностике и лечению / под ред. Г. Т. Сухих, Т. А. Назаренко. - М. : Гэотар-Медиа, 2010. - 784 с.

7. Биохимические основы патологических процессов : учебное пособие / под ред. Е. С. Северина. - М. : Медицина, 2000. - 304 с.

8. Боярский, К. Ю. Молекулярные основы фолликулогенеза. От первичных половых клеток до антральных фолликулов (обзор литературы) / К. Ю. Боярский // Проблемы репродукции. - 2006. - № 4. - С. 26-37.

9. Боярский, К. Ю. Влияние гликозилирования ФСГ на фолликулярную динамику и овариальную стимуляцию в программах ЭКО/ИКСИ (обзор литературы) / К. Ю. Боярский // Проблемы репродукции. — 2012. — № 4. -С. 40-44.

10. Боярский, К. Ю. Фолликулогенез и современная овариальная стимуляция (обзор литературы) / К. Ю. Боярский // Проблемы репродукции.

- 2002. -№3.- С. 36-43.

11. Боярский, К. Ю. Молекулярные основы фолликулогенеза: от стадии больших антральных фолликулов до овуляции / К. Ю. Боярский // Проблемы репродукции. - 2010. - № 5. - С. 13-23.

12. Биохимия и физиология семейства эндотелинов / С. А. Патарая, Д.

B. Преображенский, Б. А. Сидоренко [и др.] // Кардиология. - 2000. - № 6. -

C. 78-85.

13. Бурлев, В. А. Регуляция ангиогенеза гестационного периода / В. А. Бурлев, 3. С. Зайдиева, Н. А. Ильясова // Проблемы репродукции. - 2008. -№3. - С. 18-22.

14. Бутрова, С. А. Метаболический синдром: патогенез, клиника, диагностика, подходы к лечению / С.А. Бутрова // Рус. мед. журн. - 2001. — №2.

- С. 56-76.

15. Василевская, С. Е. Классификация и морфометрические показатели жизнеспособных бластоцист / С. Е. Василевская, А. В. Иванов, К. Ю. Боярский // Проблемы репродукции. - 2004. - № 3. - С. 17-21.

16. Влияние возраста пациенток на частоту биологических потерь в программах ЭКО: опыт работы / JI. Д. Белоцерковцева, JI. В. Коваленко, Е. В. Корнеева [и др.] // Проблемы репродукции. - 2008. - № 3. - С. 53-56.

17. Гиперандрогения и оксидантный стресс / И. Б. Манухин, Т. Н. Федорова, С. О. Смирнова [и др.] // Проблемы Репродукции. - 2012. - № 2. -С.42-45.

18. Гуморальные факторы микроокружения ооцитов на разных стадиях роста фолликулов при эндокринном бесплодии / М. В. Екимова, Е. А. Тепляшина, Е. А. Пожиленкова [и др.] // Проблемы репродукции. - 2011. - № 4.-С. 19-22.

19. Диагностическое значение маркеров ангиогенеза в биологических жидкостях больных с аденомиозом / В. А. Бурлев, Н. А. Ильясова, Е. Д. Дубинская [и др.] // Проблемы репродукции. - 2009. - № 1. - С. 86-88.

20. Дисфункция эндотелия как предиктор развития метаболического синдрома у женщин в период перименопаузы / Л. Д. Белоцерковцева, Л. В. Коваленко, Е. В. Корнеева [и др.] ,/ Вестн. новых мед. технологий. - 2010. -№1.-С. 91-93.

21. Дисфункция эндотелия. Причины, механизмы, фармакологическая коррекция / под ред. Н. Н. Петрищева. - СПб.: СПбГМУ, 2003. - 184 с.

22. Годюнин, С. В. Инсулинорезистентность и регуляция метаболизма / Гордюнин С. В. // Проблемы эндокринологии. - 2012. - № 3. - Т.58 -С.31-34.

23. Иловайская, И. А. Биология пролактина: нейроэндокринный контроль и регуляция секреции / И. А. Иловайская, Е. И. Марова // Акушерство и гинекология. - 2000. - № 5. - С. 42-44.

24. Йен, С.С.К. Репродуктивная эндокринология : пер. с англ. / С.С.К Йен - М. : Медицина, 1998. - 1136 с.

25. Калиниченко, С.Г. Мофлогическая характеристика апоптоза и его значение в нейрогенезе / С. Г. Калиниченко, И. Ю. Матвеева // Морфология. - 2007. -Т.131, №2. - С. 16-27.

26. Капустина, И. Н. Значение сосудистого фактора в развитии опухолей яичников / И. И. Капустина, И. С. Сидорова // Рос. вестн. акушера-гинеколога - 2003. - № 6. - С. 27-32.

27. Колычев, А.П. Структурная организация связывающих детерминант в молекуле инсулиноподобного фактора роста I (ИФР-1) / А. П. Колычев // Журн. эволюционной биохимии и физиологии. - 2010. - №1. - С. 7491.

28. Кузьмичев, Л.Н. Экстракорпоральное оплодотворение. Отбор, подготовка и тактика ведения больных / Л. Н. Кузьмичев, В. И. Кулакова, Б. В. Леонова. -М.: Мир, 2001.- 165 с.

29. Кулаков, В. И. Апоптоз в клинике гинекологических заболеваний (обзор литературы) / В. И. Кулаков, Г. Т. Сухих, Р. Г. Гатаулина // Проблемы репродукции. - 1999. - №2. - С. 15-25.

30. Лечение женского и мужского бесплодия. Вспомогательные репродуктивные технологии / под ред. В. И. Кулакова, Б. В. Леонова, Л. Н. Кузьмичева. -М.: Медицинское информационное агентство, 2005. - 592 с.

31. Линде, В. А. Фолликулогенез: от примордиальной зародышевой клетки до белого тела (обзор литературы) / В. А. Линде, А. В. Иванов // Проблемы репродукции. - 2007. - № 4. - С. 21-25.

32. Манухин, И. Б. Роль апоптоза в патофизиологии синдрома поли-кистозных яичников / И. Б. Манухин, Н. Е. Кушлинский, М. А. Геворкян // Проблемы репродукции. - 2001. - № 4. - С. 31-34.

33. Марков, X. М. Оксидантный стресс и дисфункция эндотелия / X. М. Марков // Патологическая физиология и эксперимент, терапия. - 2005. -№3. - С. 5-9.

34. Марченко, Л. А. Преждевременное выключение функции яичников: можно ли преодолеть бесплодие? / Л. А. Марченко, Г. Т. Сухих, Н. В. Александрова // Проблемы репродукции. - 2006. - № 5. - С. 31-38.

35. Метаболические нарушения у больных с синдромом поликистоз-ных яичников / М. А. Геворкян, И. Б. Манухин, Н. Е. Кушлинский [и др.] // Проблемы репродукции. - 2000. - № 6. - С. 38 - 42.

36. Межклеточные взаимодействия / М. А. Пальцев, А. А. Иванов, С. Е. Северин - 2-е изд. перераб. и дополн. - М.: Медицина, 2003. - 288 с.

37. Микроокружение ооцитов при эндокринном бесплодии / М. В. Яманова, А. В. Светлаков, А. Б. Салмина [и др.] // Бюл. эксперимент, биологии и медицины - 2004. - № 1. - С. 94-98.

38. Мойбенко, А. А. Ферментативные механизмы апоптоза / A.A. Мойбенко, В. Е. Досенко, В. С. Нагибин // Патол. физиология и эксперимент, терапия. - 2005. - № 3. - С. 17-26.

39. Назаренко, Т. А. Ингибиторы ароматазы в репродуктивной медицине / Т. А. Назаренко, Д. В. Дмитриев // Проблемы репродукции. - 2007. -№ 1. - С. 14-20.

40. Ниаури, Д. А. Репродуктивное здоровье женщины и недостаточность функции яичников / Д. А. Ниаури, JI. X. Джемлиханова, А. М. Гзглян // Журн. акушерства и женских болезней. - 2010. - № 1. - С. 84-89.

41. Никитин, А. И. Фолликуло- и оогенез при стимуляции овуляции синдром / А. И. Никитин // Журн. акушерства и гинекологии. - 1998. - № 1. -С. 41-45.

42. Обухова, Ю. Д. Морфология яичников в различные периоды онтогенеза (обзор литературы) / Ю. Д. Обухова // Вестн. новых мед. технологий. - 2010. - № 2. - С. 301-305.

43. Овсянникова, Т. В. Андрогены в физиологии и патофизиологии женского организма / Т. В. Овсянникова, Н. В. Сперанская, О. И. Глазкова // Гинекология. - 2000. - № 2. — С. 42-46.

44. Овсянникова, Т. В. Эндокринное бесплодие у женщин при гипер-пролактинемии / Т. В. Овсянникова // Гинекология. - 2004. - Т. 6, №4. - С. 121-123.

45. Ожирение и репродуктивная функция женщин / Е. А. Карпова, М. Ф. Белоярцева, А. А. Шарова [и др.] // Проблемы репродукции. - 2006. - № 4. - С. 57-62.

46. Ольховская, М.А. Биомаркеры «имплантационного окна» (обзор литературы) / М.А. Ольховская // Проблемы репродукции. - 2007. — № 1. -С. 72-77.

47. Основные принципы лечения больных с различными формами гиперандрогении / Р. А. Саидова, Э. М. Арутюнян, Е. В. Першина [и др.] // Журн. акушерства и женских болезней. - 2009. - № 1. - С. 84-92.

48. Особенности оплодотворения ооцитов и развития эмбрионов в культуре в зависимости от реакции яичников на стимуляцию суперовуляции / О. А. Воробьева, В. В. Потин, В. С. Корсак [и др.] // Проблемы репродукции.

- 1998.-№5.-С. 53-58.

49. Оценка морфологии преимплантационных эмбрионов на различных стадиях развития in vitro (обзор литературы) / М. М. Левиашвили, Н. Г. Мишиева, Н. Ю. Костромина [и др.] // Проблемы репродукции. - 2011. - № 3.

- С. 74-79.

50. Оценка эффективности программы ЭКО: день переноса эмбрионов в полость матки и показатели контролируемой индукции овуляции / Н.С. Щетинина, Л.Н. Кузьмичев, В.А. Бурлев [и др.] // Проблемы репродукции. -2011. -№ 3. — С. 56-62.

51. Повещенко, А. Ф. Механизмы и факторы ангиогенеза / А. Ф. По-вещенко, В. И. Коненков // Успехи физиологических наук. - 2010. - № 2. - С. 68-89.

52. Пожиленкова, Е. А. Влияние фолликулярного микроокружения на жизнеспособность гранулезных клеток при некоторых формах эндокринного бесплодия : автореф. дис. ... канд. биол. наук: 14.00.16 / Пожиленкова Елена Анатольевна. - Иркутск, 2008. - 25 с.

53. Пожиленкова, Е. А. Внутриклеточная локализация периферических бензодиазепиновых рецепторов у пациенток с эндокринным бесплодием / Е. А. Пожиленкова, М. В. Екимова, А. Б. Салмина // Проблемы репродукции. - 2009. - № 3. - С. 21-25.

54. Пищулин, А. А. Овариальная гиперандрогения и метаболический синдром / А. А. Пищулин, Е. А. Карпова // Рус. мед. журн. - 2001. - № 2. - С. 93-98.

55. Репродуктивная функция: роль N0 в обеспечении овуляции и имплантации / Т. В. Блашкив, О. Н. Сердюк, Т. Ю. Вознесенская [и др.] // Проблемы репродукции. - 2012. - № 3. С. 11-15.

56. Секреты репродуктивной медицины / П. Т. К. Чен, М. Гоулд-стайн, 3. Розенвэкс / под общ. ред. акад. РАМН, проф. В. И. Кулакова - М. : МЕДпресс-информ, 2006. - 448 с.

57. Светлаков, А. В. Вероятность наступления имплантации у женщин с разными формами бесплодия при лечении методом ЭКО / А. В. Свет-лаков, М. В. Яманова, А. Б. Салмина // Проблемы репродукции. - 2002. - № 3.-С. 61-67.

58. Сидорова, И. С. Маркеры дисфункции эндотелия в оценке степени тяжести гестоза и эффективной терапии беременных, страдающих этим осложнением / И. С. Сидорова, Н. Б. Зарубенко, О. И. Турина // Рос. вестн. акушера-гинеколога - 2012. - № 1. - С. 8-12.

59. Состояние овариального резерва при некоторых формах функционального бесплодия / Д. О. Жорданидзе, Т. А. Назаренко, Э. Р. Дуринян [и др.] // Акушерство и гинекология. - 2010. - № 5. - С. 25-31.

60. Сотникова, Е. И. Синдром поликистозных яичников: вопросы патогенеза / Е. И. Сотникова, Э. Р. Дуринян, Т. А. Назаренко // Акушерство и гинекология. - 1998. - № 1. - С. 36--42.

61. Стимуляция функции яичников / под ред. Т. А. Назаренко. - М.: Медпресс-информ, 2009. - 272 с.

62. Репродуктивная эндокринология / под ред. С. С. К. Йена, Р. Б. Джаффе. - М. : Медицина, 1998. - 273 с.

63. Роговская, С. И. Андрогены и антиандрогены / С. И. Роговская // Гинекология. - 2000. - № 2- С. 47-51.

64. Телунц, А. В. Гиперандрогения у девочек-подростков / А. В. Те-лунц // Акушерство и гинекология. - 2001. - № 1. - С. 8-11.

65. Тишкевич, О. Л. Клинико-эмбриологическая оценка результатов экстракорпорального оплодотворения в зависимости от возраста пациенток / О. Л. Тишкевич, А. Б. Жабинская, F,. В. Малышева // Проблемы репродукции. -2004.-№2.-С. 33-37.

66. Ткачук, В. А. Введение в молекулярную эндокринологию: учебное пособие / В. А. Ткачук. - М. : Изд-во моек, ун-та, 1983. - 256 с.

67. Тюренков, И. Н. Развитие эндотелиальной дисфункции при недостаточности половых гормонов / И. Н. Тюренков, А. В. Воронков, А. И. Ро-бертус // Патол. физиология и эксперимент, терапия. - 2009. - № 4. - С. 3336.

68. Уварова, Е. В. Возможности негормональной коррекции уровня пролактина на фоне гормональной контрацепции у сексуально активных молодых женщин / Е. В. Уварова, Н. В. Болдырева // Рус. мед. журн. - 2007. — № 3. - С. 191-196.

69. Факторы роста и их роль в регуляции репродуктивной функции у больных с синдромом поликистозных яичников / В. А. Бурлев, А. С. Гасгта-ров, Н. С. Аванесян [и др.] // Проблемы репродукции. - 1998. - № 3. - С. 1725.

70. Фолликулярная жидкость как среда, определяющая качество оо-цита и исход программ ВРТ (обзор литературы) / А. А. Ильина, И. И. Калинина, Т. Г. Трошина [и др.] // Проблемы репродукции. - 2008. - № 4. - С. 2738.

71. Чагай, Н. Б. Функция коры надпочечников при синдроме поликистозных яичников / Н. Б. Чагай, М. А. Геворкян // Проблемы репродукции. -2007.-№4.-С. 35-39.

72. Экстракорпоральное оплодотворение и его новые направления в лечении женского и мужского бесплодия (теоретические и практические подходы): руководство для врачей / под ред. В. И. Кулакова, Б. В. Леонова. -М. : Медицинское информационное агентство, 2004. - 782 с.

73. Элдер, К. Экстракорпоральное оплодотворение: пер. с англ. / К. Элдер, Б. Дэйл. / - М.: МЕДпресс-информ, 2008. - 304 с.

74. Эндокринное бесплодие: клеточная и молекулярная патология имплантации / М. В. Яманова, А. Б. Салмина - М. : Медика, 2009. - 208 с.

75. Abramovich, D. Effect of a Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) Inhibitory Treatment on the Folliculogenesis and Ovarian Apoptosis in Gonadotropin-Treated Prepubertal Rats / D. Abramovich, F. Parborell, M. Tesone // Biol. Reprod. - 2006. - Vol. 75, № 3. - P. 434-441.

76. Ambrosini, G. Oestrogen stimulates endothelial progenitor cells via oestrogen receptor-alpha / G. Ambrosini, A. Ferlin // Clin. Endocrinol. - 2007. -Vol. 67, №4.-P. 520-525.

77. Angiogenesis and vascular function in the ovary / R. Robinson, K. Woad, A. Hammond [et al.] // Reproduction. - 2009. - Vol. 138, № 5. - P. 869881.

78. Angiogenic factors and ovarian follicle development / J. Bruno, M. Matos, R. Chaves [et al.] // Anim. Reprod. - 2009. - Vol. 6, № 2. - P. 371-379.

79. Agrawal, R. Serum vascular endothelial growth factor concentrations and ovarian stromal blood flow are increased in women with polycystic ovaries / R. Agrawal // Hum. Reprod. - 1998. - Vol. 13, № 3. - P. 651-655.

80. Antipsychotics and hyperpolactinaemia: pathophysiology, clinical relevance, diagnosis and therapy / A. Riecher-Rossler, C. Schmid, S. Bleuer [et al.] // Neuropsychiatria. - 2009. - Vol. 23, № 2. - P. 71-83.

81. Bachelot, A. Reproductrve role of prolactin / A. Bachelot, N. Binart // Reproduction.-2007.-Vol. 133.-P. 361-369.

82. Bonnet, A Opportunities and challenges in applying genomics to the study of oogenesis and folliculogenesis in farm animals / A. Bonnet, R. Dalbies-Tran, M. A. Sirard // Reproduction. - 2008. - Vol. 135, № 1. - P. 119-128.

83. Castedo, M. Mitochondrial apoptosis and the peripheral benzodiazepine receptor: a novel target for viral and pharmacological manipulation / M.

Castedo, J.-L. Perfettini, G. Kroemer // J. Exp. Med. - 2002. - Vol. 196, № 9. - P. 1121-1125.

84. Cellular and molecular aspects of ovarian follicle ageing / C. Tatone, A. Fernanda, M. Carbone [et al.] // Hum. Reprod. - 2008. - Vol. 14, № 2. - P. 131-142.

85. Changes of Messenger RNA Expression of Angiogenic Factors and Related Receptors During Follicular Development in Gilts / T. Shimizu, J. Jiang, H. Sasada [et al.] // Biol. Reprod. - 2002. - Vol. 67, № 6. - P. 1846-1852.

86. Characterization of endothelin-land nitric oxide generating system in corpus luteum-derived endothelial cells / E. Klipper, T. Gilboa, N. Levy [et al.] // Reproduction. - 2004. - Vol. 128. - P. 463-473.

87. Cloning and Characterization of a 5' Regulatory Region of the Prolactin Receptor-Associated Protein/ 17ß Hydroxysteroid Dehydrogenase 7 Gene / M. Risk, A. Shehu, J. Mao [et al.] // Endocrinology. - 2005. - Vol. 146, № 6. - P. 2807-2816.

88. Comparison of follicle steroidogenesis from normal and polycystic ovaries in women undergoing IVF: relationship between steroid concentrations, follicle size, oocyte quality and fecundability / M. P. Teissier, H. Chable, S. Paul-hac [et al.] // Hum. Reprod. - 2000. - Vol. 15, № 12. - P. 1271-2477.

89. Drummond, A. The role of steroids in follicular growth / A. Drum-mond // Reprod. Biol, and Endocrinol - 2006. - Vol. 4, № 16. - P. 143-152.

90. Early Impairment of Endothelial Structure and Function in Young Normal-Weight Women with Polycystic Ovary Syndrome / F. Orio, S. Palomba, T. Cascella [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2004. - Vol. 89, № 9. - P. 4588 -4593.

91. Early Human Preantral Follicles Have Relaxin and Relaxin Receptor (LGR7), and Relaxin Promotes Their Development / K. Shirota , K. Tateishi, T. Koji [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2005. - Vol. 90, № 1. - P. 516-521.

92. Effect of androgens on the development of mouse follicles growing in vitro / A. A. Murray, R. S. Gosden, V. Allison [et al.] // J. Reprod. Fertil. - 1998. -Vol. 113.-P. 27-33.

93. Effects of fetal bovine serum, FSH and 17ß-estradiol on the culture preantral follicles / S. C. Hulshof, J. R. Figueiredo, J. R. Beckers [et al.] // Therio-genology. - 1995. - Vol. 44, № 2. - P. 217-226.

94. Effect of epidermal growth factor and insulin-like growth factor I on porcine preantral follicular growth, antrum formation, and stimulation of granu-losal cell proliferation and suppression of apoptosis in vitro / J. Mao, M. Smith, E. Rucker [et al.] // J. Anim. Sei. - 2004. - Vol. 82, № 7. - P. 1967-1975.

95. Endothelin-1 and Endotelin-3 Promote Invasive Behavior via Hypoxia-Inducible Factor-la in Human Melanoma Cells / F. Spinella, L. Rosano, V. Di Castro [et al.] // Cancer Res. - 2007. - Vol. 67. - P. 1725-1734.

96. Endothelin-1-, Endothelin-A-, and Endothelin-B-Receptor Expression Is Correlated with Vascular Endothelial Growth Factor Expression and Angio-genesis in Breast Cancer / P. Wülfing, C. Kersting, J. Tio [et al.] // Clin. Cancer Res. - 2004. - Vol. 10. - P. 2393-2400.

97. Endothelin-2 in Ovarian Follicle Rupture / K. CheMyong, M. Gieske, L. Al-Alem [et al.] // Endocrinology. - 2006. - Vol. 147, №4. - P. 1770-1779.

98. Elvin, A. J. Mouse models of ovarian failure / A. J. Elvin, M. M. Matzuk//Rev. Reprod. - 1998.-Vol. 3.-P. 183-195.

99. Erickson, G. The physiology of folliculogenesis: the role of novel growth factors / G. Erickson, S. Shimasaki // Fertil. Steril. - 2001. - Vol. 76, № 5. - P. 943-949.

100. Erickson, G. The role of the oocyte in folliculogenesis / G. Erickson, S. Shimasaki // Trends Endocrinol. Metab. - 2000. - Vol. 11, №5. - P. 193-198.

101. Franks, S. Follicle dynamics and anovulation in polycystic ovary syndrome / S. Franks, J. Stark, K. Hard\ U Hum. Reprod. Update - 2008. - Vol. 14, №4.-P. 367-378.

102. Fraser, H. Regulation of the ovarian follicular vasculature / H. Fraser // Reprod. Biol. Endocrinol. - 2006. - Vol. 4, № 18. - P. 4-18.

103. Fritz, M. The endocrinology of the menstrual cycle: the interaction of folliculogenesis and neuroendocrine mechanism / M. Fritz, R. Speroff // Fértil. Steril. -1982. - Vol. 38, № 5. - P. 509-529.

104. Expression of Growth Differentiation Factor 9 Messenger RNA in Porcine Growing and Preovulatory Ovarian Follicles / R. Prochazka, L. Nemcova, E. Nagyova [et al.] // Biol. Reprod. - 2004. - Vol. 71, № 4. - P. 1290-1295.

105. Geva, E. Role of vascular endothelial growth factor in ovarian physiology and pathology / E. Geva, R. Jaffe // Fértil. Steril. - 2000. - Vol. 74, № 3. -P. 429^138.

106. Gougeon, A. Regulation of ovarian follicular development in primates: facts and hypotheses / A. Gougeon // Endocr. Rev. - 1996. - Vol. 17, № 2. -P. 121-155.

107. Grimshaw, M. Endothelins and hypoxia-inducible factor in cancer / M. Grimshaw // Endocr. Relat. Cancer. - 2007. - Vol. 14, № 2. - P. 233-244.

108. Growth Differentiation Factor 9 Promotes Rat Preantral Follicle Growth by Up-Regulating Follicular .Androgen Biosynthesis / M. Orisaka, J. Jiang, S. Orisaka [et al.] // Endocrinology. - 2009. - Vol. 150, № 6. - P. 2740-2748.

109. Growth Differentiation Factor-9 Stimulates Rat Theca-Interstitial Cell Androgen Biosynthesis / E. V. Solovyeva, M. Hayashic, K. Margia [et al.] // Biol. Reprod. -2000. - Vol. 63, № 4. - P. 1214- 1218.

110. Hendersen, H. L. Direct effects of prolactin and dofamine on the gonadotroph response to GnRH / H. L. Hendersen, J. Townsend, D. Tortonese // J. Endocrinology. - 2008. - Vol. 197. - P. 343-350.

111. Hillier, S. Paracrine support of ovarian stimulation / S. Hillier // Hum. Reprod. - 2009. - Vol. 15, № 12. - P. 843-850.

112. Hormonal regulation of apoptosis in early antral follicles: follicle-stimulating hormone as a major survival factor / S-Y. Chun, K. Eisenhauer, S. Minami [et al.]//Endocrinology. - 1996.-Vol. 137, № 4.-C. 1447-1456.

113. Houmburg, R. Androgen circle of polycystic syndrome / R. Houm-burg // Hum. Reprod. - 2009. - Vol 24, № 7. - P. 1548-1555.

114. Human ovarian granulosa cells and follicular fluids indices: the relationship to oocyte maturity and fertilization in vitro / W. M. Eni en, E. Chantler, M.W. Seif [et al.] //Hum. Reprod. - 1998. - Vol. 13, № 5. - P. 1303-1306.

115. Hütt, K. J. An oocentric view of folliculogenesis and embryogenesis / K. J. Hütt, D. F. Albertini // Reprod. Biomed. Online. - 2007. - Vol. 14, № 6. - P. 758-764.

116. Hydroxyestrogens inhibit angiogenesis in swine ovarian follicles / G. Bassini, S. Bussolati, S. Santini [et al.] // J. Endocrinol. - 2008. - Vol. 199, № 1. -P. 127- 135.

117. Identification, Characterization and Biological Activity of Endothelin Receptors in Human Ovary / R. Mancina, T. Barni, E. Aldo [et al.] // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1997. - Vol. 82, № 12. - P. 4122-4129.

118. Induction of Endothelin-2 Expression by Luteinizing Hormone and Hypoxia: Possible Role in Bovine Corpus Luteum Formation / E. Klipper, A. Levit, Y. Mastish [et al.] // Endocrinology. - 2010. - Vol. 151, № 4. - P. 19141922.

119. Induction of Follicular Development by Direct Single Injection of Vascular Endothelial Growth Factor Gene Fragments into the Ovary of Miniature Gilts / T. Shimizu, J. Jiang, K. Iijiama [et al.] // Biol. Reprod. - 2003. - Vol. 69, № 4.-P. 1388-1393.

120. Immunolocalization of Fas and Fas ligand in the ovaries of women with polycystic ovary syndrome: relationship to apoptosis / N. A. Cataldo, D. A. Dumesic, P. C. Goldsmith [et al.] // Hum. Reprod. - 2000. - Vol. 15, № 9. - P. 1889-1897.

121. Kaczmarek, M. M. Role of vascular endothelial growth factor in ovarian physiology - an overview / M. M. Kaczmarek, D. Schams, A.J. Ziecik // Re-prod. Biol. - 2005. - Vol. 5, № 2. - P. 111-136.

122. Kedzierski, R. Endothelin system: the double-edged sword in health and disease / R. Kedzierski, M. Yanagisawa // Annu Rev. Pharmacol. Toxicol. -2001.-Vol. 41.-P. 851-876.

123. Knil, P Focus on TGF- p superfamily members and ovarian follicle development / P. Knil, C. Glister // Hum. Reprod. - 2006. - Vol. 132. - P. 191206.

124. Lam, P. Vascular endothelial growth factor plays more than an angiogenic role in the female reproductive system / P. Lam, C. Haines // Fertil. Steril. -2005.-Vol. 84, №6.-P. 1775-1778.

125. Lenie, S. Steroidogenesis-disrupting compounds can be effectively studied for major fertility-related endpoints using in vitro cultured mouse follicles / S. Lenie, J. Smith//Toxicol. Lett. - 2009. - Vol. 185,№3.-P. 143-152.

126. Location-dependent role of the human glioma cell peripheral-type benzodiazepine receptor in proliferation and steroid biosynthesis / R. C. Brown, B. Degenhardt, M. Kotoula [et al.] // Cancer Lett. - 2000. - Vol. 156, № 2. - P. 125132.

127. Losordo, D. Estrogen and Angiogenesis / D. Losordo, J. Isner // Arte-rioscler Thromb. Vase. Biol. -2001. - Vol. 21, № 6. - P. 6-12.

128. Mahmound, R. Hussein Apoptosis in the ovary molecular / M. R. Hussein // Hum. Reprod. Update. - 2005. - Vol. 11, № 2. - P. 162-178.

129. Mechanisms regulating follicular development and selection of the dominant follicle / R. Webb, B. Nicholas, J. G. Gong [et al.] // Reprod. Suppl. -2003.-Vol. 61.-P. 71-90.

130. Messinis, I. E. Ovarian feedback, mechanism of action and possible clinical implications / I. E. Messinis ¡' Hum. Reprod. - 2006. - Vol. 12, № 5. - P. 557-571.

131. Miller, W. L. Minireview: Regulation of Steroidogenesis by Electron Transfer / W. L. Miller // Endocrinology. - 2005. - Vol. 146, № 6. - P. 25442550.

132. Muller, K. Histomorphoiogical and immunohistochemical study of angiogenesis and angiogenic factors in the ovary of the mare / K. Muller, C. Ellen-berger, C. Schoon // Res. Vet. Sci. - 2009. - Vol. 87, № 3. - P. 421 - 431.

133. Multiple Signaling Pathways Regulating Steroidogenesis and Steroidogenic Acute Regulatory Protein Expression: More Complicated than We Thought / D. Stocco, X. Wang, Y. Jo [et al.] // Mol. Endocrinol. - 2005. - Vol. 19, № 11.-P. 2647-2659.

134. Novel function of ovarian growth factors: combined studies by DNA microarray, biochemical and physiological approaches / 1. Ben-Ami, S. Freimann, L. Armon [et al.] // Mol. Hum. Reprod. - 2006. - Vol. 12, № 7. - P. 413-419.

135. Novel Pathway Involving Progesterone Receptor, Endothelin-2, and Endothelin Receptor B Controls Ovulation in Mice / G. Palanisamy, Y. Cheon, J. Kim [et al.] // Mol. Endocrinol. - 2006 - Vol. 20, №11. - P. 2784-2795.

136. O'Donnell, J. B Epidermal growth factor activates cytosolic [Ca2+J elevations and subsequent membrane permeabilization in mouse cumulus-oocyte complexes / J. B. O'Donnell, J. L. Hill, D. J. Gross // Reproduction. - 2004. - Vol. 127.-P. 207-220.

137. Oestrogen receptor and (3, androgen receptor and progesterone receptor mRNA and protein localization within the developing ovary and in small growing follicles of sheep / J. Juengel, D. Heath, L. Quirke [et al.] // Hum. Reprod. -2006.-Vol. 131.-P. 81-92.

138. Oosterhuis, G. J. Apoptotic cell death in human granulosa-lutein cells: a possible indicator of in vitro fertilization outcome / G. J. Oosterhuis, H. W. Michgelsen, C. B. Lambalk // Fertil. Steril. - 1998. - Vol. 70, № 4. - P. 747-749.

139. Parborell, F. Intrabursal Administration of the Antiangiopoietin 1 Antibody Produces a Delay in Rat Follicular Associated with an Increase in Ovarian

Apoptosis Mediated by Changes in the Expression of BCL2 Related Genes / F. Parborell, D. Abramovich, M. Tesone // Biol. Reprod. - 2008. - Vol. 78, № 3. - P. 506-513.

140. Peptide Hormone Regulation of Angiogenesis / C. Clapp, S. Thebault, M. Jeziorski [et al.] // Physiol. Rev. - 2009. - Vol. 89, № 4. - P. 1177-1215.

141. Pregnancy and pituitary disorders / Z. Karaca, F. Tanriverdi, K. Unlu-hizardci [et al.] // Eur. J. Endocrinol. - - 2010. - Vol. 162. - P. 453-475.

142. Production and binding of endothelin-2 (EDN-2) in the rat ovary: en-dothelin receptor subtype A (EDNRA)-mediated contraction / P. Bridges, M. Jo, L. Alem [et al.] // Reprod. Fertil. Dev. - 2010 - Vol. 22, № 5. - P. 780 - 787.

143. Prolactin (PRL) and Its Receptor: Actions, Signal Tranduction Pathways and Phenotypes Observed in PRL Receptor Knockout Mice / C. Bole-Feysot, V. Goffin, M. Edery [et al.] // Endocr. Rev. - 1998. - Vol. 19, № 3. - P. 225-268.

144. Pru, J. K. Programmed Cell Death in the Ovary: Insights and Future Prospects Using Genetic Technologies / J. K. Pru, J. L. Tilly // Mol. Endocrinol. -2001. - Vol. 15, № 6. - P. 845-853.

145. Quirk, S.M. Regulation of Fas antigen (Fas, CD95)-mediated apoptosis of bovine granulosa cells by serum and growth factors / S.M. Quirk, R.M. Harman, R.G. Cowan //Biol Reprod. - 2000. - Vol. 63, № 5. - P. 1278-1284.

146. Relaxin-Induced Angiogenesis in Ovary Contributes to Follicle Development / K. Shirota, K. Tateishi, M. Emoto [et al.] // Ann. N. Y. Acad. Sci. -

2005.-Vol. 1041.-P. 144-146.

147. Sanderson, J. T. The Steroid Hormone Biosynthesis Pathway as a Target for Endocrine-Disrupting Chemicals / J. T. Sanderson // Toxicol. Sci. -

2006. - Vol. 94, № 1. - P. 3-21.

148. Serum and follicular fluid levels of soluble Fas, soluble Fas ligand and apoptosis of luteinized granulosa celli in PCOS patients undergoing IVF / G. Ona-lan, B. Selam, Y. Baran [et al.] // Hum. Reprod. - 2005. - Vol. 20, № 9. - P. 23912395.

149. Sites of prolactin inhibition on gonadotropin-induced estrogen production in cultured rat granulosa cells / F. Larrea, S. Sanchez-Gonzalez, R Garcia-Becerra [et al.] // Gac. Med. Mex. - 2005. - Vol. 141, № 4. - P. 259-266.

150. Szoltys, M. Immunohistochemical localization of androgen receptor in rat oocytes / M. Szoltys, M. Slomczynska, Z. Tabarowski // Folia Histochem. Cy-tobiol. - 2003. - Vol. 41, №2. - P. 59-64.

151. Signaling by Hypoxia-Inducible Factors Is Critical for Ovulation In Mice / J. Kim, C. Indrani, M. Bagchi [et al.] // Endocrinology. - 2009. - Vol. 150, № 7. - P. 3392-3400.

152. Silva, J. R. V. Involvement of growth hormone (GH) and insulin-like growtn factors (IGF) system in ovarian folliculogenesis / J. R. V. Silva, J. R. Fi-gueiredo, R. van den Hurk // Theriogenology. - 2009. - Vol. 71, № 8. - P. 1193— 1208.

153. Soccio, R. E. Intracellular cholesterol transport / R. E. Soccio, J. L. Breslow // Ateroscler. Thromb. Vase. Biol. - 2004. - Vol. 24. - P. 1150-1160.

154. Son, D.-S. Tumor Necrosis Factor-a (TNF-a) Increases Granulosa Cell Proliferation: Dependence on c-Jun and TNF Receptor Type 1 / D-S. Son, K. Y. Roby, P. F. Terranova // Endocrinology. - 2004. - Vol. 145, № 3. - P. 1218 -1226.

155. Son, D.-S. Tumor Necrosis Factor-a Induces Serum Amyloid A3 in Mouse Granulosa Cells / D.-S. Son, K.F. Roby, P. F. Terranova // Endocrinology. - 2004. - Vol. 145, № 5 - P. 2245-2252.

156. Spatiotemporal analysis of the protein expression of angiogenic factors and their related receptors during folliculogenesis in rats without hormonal treatment / D. Abramovich, A. Celin, F. Hernandez [et al.] // Reproduction. -2009. - Vol. 137, № 2. - P. 309 - 320.

157. Steroidogenesis and apoptosis in the mammalian ovary / A. Amsterdam, I. Keren-Tal, D. Aharoni [et al.] // Steroids. - 2003. - Vol. 68, № 10-13. - P. 861-867.

158. Stevenson, A. F. Human granulosa cells in vitro: characteristics of growth, morphology and influence of some cytokines on steroidogenesis / A. F. Stevenson // Indian J. Exp. Biol. - 2000. - Vol. 38, № 12. - P. 1183-1191.

159. Suhail, A. R. Irregular cycles and steroid hormones in polycystic ovary syndrome / A. R. Suhail, M. Al-Zaid, P. A. Towers [et al.] // Hum. Reprod. -2005. - Vol. 20, № 9. - P. 2402-2408.

160. Taylor, P. Effect of GnRH antagonist treatment on follicular development and angiogenesis in the primate ovary / P. Taylor, S. Hillier, H. Fraser // J. Endocrinology. -2004. Vol. 183.-P 1-17.

161. Taira, H. Activity of Three-B-Hydroxy steroid Dehydrogenase in Granulosa Cells Treated in Vitro with Luteinizing Hormone, Follicle-Stimulating Hormone, Prolactin, or a Combination / H. Taira, M. Beck // Poult. Sci. - 2006. -Vol. 85.-P. 176-1774.

162. Trombospondin and Vascular Endothelial Growth Factor Are Cyclically Expressed in an Inverse Pattern During Bovine Ovarian Follicle Development / J. Greenaway, P. Gentry, J. Feige [et al.] // Biol. Reprod. - 2005. - Vol. 72, №5.-P. 1071-1078.

163. The effect of follicle-stimulating hormone on follicular development, granulosa cell apoptosis and steroidogenesis and its mediation by insulin-like growth factor-I in the goat ovary / Y. Yu, W. Li, Z. Han [et al.] // Theriogenology. -2003.-Vol. 60, №9.-P. 1691-1704.

164. The level of vascular endothelial growth factor, nitric oxide, and endo-thelin-1 was correlated with ovarian volume or antral follicle counts: A potential predictor of pregnancy outcome in INF / M. Zhao, C. Chang, Z. Liu [et al.] // Growth Factors. - 2010. - Vol. 28, № 5. - P. 299-305.

165. Vascular endothelial growth factor production in growing pig antral follicles / B. Barboni, M. Galeati, M. Spinaci [et al.] // Biol. Reprod. - 2000. - Vol. 63.-P. 858-864.

166. Vascular endothelial growth factor receptor 2-mediated angiogenesis is essential for gonadotropin-dependent follicle development / R. C. Zimmermann, T. Hartman, S. Kavic [et al.] // J. Clin. Invest. - 2003. Vol. 112, № 5. - P. 659669.

167. Vascular supply as a discriminanting factor for pig preantral follicle selection / A. Martelli, N. Bernabo, P. Berardinelli [et al.] // Reproduction. - 2009. -Vol. 137.-P. 45-58.

168. Vascularity and expression of angiogenic factors in bovine dominant follicles of the first follicular wave / A. Grazul-Bilska, C. Navanukraw, M. Johnson [et al.] // J. Anim. Sei. - 2007. - Vol. 85, №8. - P. 1914-1922.

169. Yang, P. Epidermal Growth Factor Modulates Transforming Growth Factor Receptor Messenger RNA and Protein Levels in Hamster Preantral Follicles In Vitro / P. Yang, S. K. Roy // Biol. Reprod. - 2001. - Vol. 65. - P. 847-854.

170. Wang, C. Development of Primordial Follicles in the Hamster: Role of Estradiol-17ß / C. Wang, S. K. Roy // Endocrinology. - 2007. - Vol. 148, № 4. -P. 1707-1716.

171. Watts, S. Endothelin receptors: what's new and what do we need to know? / S. Watts // Am J. Physiol. Regulatory Integrative Comp. Physiol. - 2010. - Vol. 298, № 2. - P. 254-260.

172. Wu, J. The effect of sex steroids on human ovarian granulosa cell apoptosis / J. Wu, L. Zhang, T. Li // Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi. - 1998. - Vol. 33, №3.-P. 157-159.

173. Yang, M. Y. Vascular endothelial growth factor stimulates the primary to secondary follicle transition in bovine follicles in vitro / M. Y. Yang, J. E. Fortune // Mol. Reprod. Dev. - 2007. - Vol. 74, № 9. - P. 1095-1104.