Исследование динамики численности нормальных киллеров аутологических эритроцитов как ответной реакции организма на стресс-воздействие тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.16, кандидат биологических наук Пономаренко, Людмила Давидовна

• Пономаренко, Людмила Давидовна
• кандидат биологических наук
• 1997

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Пономаренко, Людмила Давидовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

стр.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I СОВРЕМЕННЫЙ ВЗГЛЯД НА СТРЕСС И ОДИН ИЗ МЕХАНИЗМОВ

НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ОТВЕТНОЙ РЕАКЦИИ ОРГАНИЗМА.

1.1. Формирование концепции стресса и анализ адаптационных возможностей организма

1.2. Свойства лимфоцитов-киллеров, участвующих в неспецифической ответной реакции на стресс-воздействие

1.3. Изменения антигенных детерминант эритроцитов в процессе их функционирования

ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Методика определения и подсчета клеток-киллеров в препаратах эритроцитов периферической крови с лимфоцитами периферической крови и органов

2.2. Методы разделения клеток

\

2.3.Получение иммунной сыворотки против мембран эритроцитов

2.4. Получение антитимоцитарной сыворотки

2.5. Получение иммунной сыворотки против

клеток головного мозга мышей

2.6. Источники комплемента, используемого в

экспериментах

2.7. Обработка клеток ферментами

2.8. Определение гематологических

показателей

2.9. Методы создания гипоксического

состояния

2.10. Используемые животные и \

экспериментальный материал

2.11 .Обработка экспериментальных данных

ГЛАВА III ИССЛЕДОВАНИЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ И ФЕНОТИПИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПОПУЛЯЦИИ КЛЕТОК, УЧАСТВУЮЩИХ В ПРОЦЕССЕ РАСПОЗНАВАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ

\

3.1. Постановка препаратов в свободной суспензии клеток на стекле для наблюдения зон

локального гемолиза

3.2. Исследование морфологической принадлежности клеток-киллеров аутологических эритроцитов

3.3. Исследование адгезивных свойств клеток-киллеров аутологических эритроцитов

3.4. Исследование природы рецепторовЧслеток-киллеров, взаимодействующих с аутологическими эритроцитами

3.5. Исследование цитотоксического действия лимфоцитов против аутологических 4 эритроцитов

ГЛАВА IV ФОРМИРОВАНИЕ ПОПУЛЯЦИИ НОРМАЛЬНЫХ КИЛЛЕРОВ АУТОЛОГИЧЕСКИХ ЭРИТРОЦИТОВ В ОТВЕТ НА РАЗЛИЧНЫЕ СТРЕСС-ВОЗДЕЙСТВИЯ.

4.1. Формирование популяции НКАЭ гцэи

массивной кровопотере

4.2. Формирование популяции НКАЭ при многократных введениях кобальта

4.3. Формирование популяции НКАЭ при гипоксической гипоксии разного уровня

4.4. Исследование взаимодействия нормальных киллеров с аутологическими эритроцитами

разного возраста

\

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование динамики численности нормальных киллеров аутологических эритроцитов как ответной реакции организма на стресс-воздействие»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Общенаучная значимость проблемы экологического равновесия и адаптации выдвигают экологию в разряд интенсивно развивающихся медикЬ-биологических дисциплин. В свою очередь развитие экологии не представляется возможным без познания молекулярно-клеточных механизмов ответной реакции организма на изменение экологической ситуации. В связи с этим исключительный интерес представляет возможность экспресс-оценки возникновения в организме стресс ситуации в ответ на повреждающее воздействие и ее коррекция. Сложность этой задачи усугубляется генетическим разнообразием ответных реакций каждого индивидуума. Генотип влияет как на вероятность тех или иных повреждений, так и на степень их компенсации и репарации: Изыскание способов оценки глубины повреждающего действия стресс-фактора и оценки адаптации к нему организма является актуальной проблемой современной экологии, физиологии и медицины. Актуальность этой проблемы усугубляется с ростом урбанизации, связанной с концентрацией населения.

Функциональная нагрузка, вызванная действием факторов внешней среды, тесно связана с изменениями на самом глубоком

V

генетическом уровне. Именно там происходит увеличение синтеза нуклеиновых кислот и белков, и как следствие формирование структурного следа в системах, специфически ответственных за адаптацию организма к данному конкретному фактору среды. Суть системного следа состоит в том, что растет масса мембранных структур, ответственных за восприятие клеткой управляющих

сигналов, ионный транспорт, энергообеспечение и других. Таким образом организм приобретает в ходе адаптации отсутствующую ранее устойчивость к определенному фактору внешней среды и создание условий дальнейшей жизни при изменившихся условиях среды. Потенциальные генетически детерминированные возможности организма преобразуются в ответ на требования внешней среды.

В нашей работе мы придерживаемся определения стресса, данного Се лье Г. Он указывает на универсальный характер стресса и считает, что стресс - это «состояние, выражающееся синдромом всеобщей адаптации», это «неспецифическая реакция организма на любое предъявленное ему требование». Селье полагает, что любое воздействие не организм вызывает стресс, а отсутствие этих воздействий есть смерть.

В процессе эволюции в организме человека сформировалась

сложная система защитных приспособлений, позволяющих ему без

\

вреда для своего здоровья взаимодействовать с различными факторами внешней среды, в которой он живет и действует. Диапазон безопасных воздействий среды ограничен спецификой вида, задаваемой его генотипом и нормой адаптации индивида, определяемой его фенотипом. Кроме того, существует индивидуальность каждого человека в пределах его генотипа, а следовательно собственная норма адаптации. В экстремальных для организма условиях включаются адаптивно-компенсаторные

V

механизмы, обеспечивающие приспособление 4 организма к повышенным нагрузкам с целью сохранения гомеостаза.

Иммунная система одной из первых реагирует на изменение экологической ситуации с помощью своих неспецифических и

специфических реакций. Система иммунитета являётся достаточно гибкой системой, и может корректировать реакции организма на повреждающие факторы появившиеся вновь, с которыми человек ранее не встречался.

В свою очередь система эритрон, включающая и клетки иммунной системы является наиболее чувствительной к стресс-воздействию и, следовательно, удобной моделью для понимания формирования компенсаторных механизмов, обуславливающих в конечном итоге процессы разрушения и воспроизводства клеток в ответ на изменения привносимые внешними или внутренними повреждающими агентами. Результатом любого стресс-воздействия является в конечном счете гипоксия тканей и органов, что в свою очередь, как известно, приводит в системе крови к ускоренному разрушению эритроцитов.

Целью настоящей работы является исследование динамики численности нормальных киллеров аутологических эритроцитов

(НКАЭ) как одного из высокочувствительных информативных тестов

\

оценки в организме стресс-ситуации. Задачи исследования:

1. Исследование свойств НКАЭ.

2. Исследование динамики численности НКАЭ в крови животных в ответ на стресс-воздействия вызванные кровопотерей, действием солей тяжелых металлов (хлористый кобальт) и гипоксической гипоксией.

3. Исследование механизмов взаимодействия НКАЭ с эритроцитами. \

Диссертационная работа состоит из настоящего введения, четырех глав, заключения и выводов.

Первая глава носит обзорный характер. В ней рассматриваются различные теоретические подходы и накопленный к настоящему времени фактический материал по вопросам ответной реакции организма на стресс-воздействие со стороны внешней среды, а также современные представления о клетках иммунной системы, участвующих в описанной нами реакции.

Во второй главе приводятся методики, используемые автором в настоящем исследовании.

Главы третья и четвертая посвящены изучению свойств нормальных киллеров, ответственных за разрушение аутологических эритроцитов, и исследованию динамики численности этих клеток в ответ на стресс-воздействия, а так же исследованию избирательности взаимодействия этих клеток со старыми функционально неполноценными эритроцитами.

В заключении обсуждены основные результаты исследований, полученные в работе, которые сформулированы в разделе выводы.

Новизна и фундаментальность работы. Впервые описана

V

высокочувствительная стереотипная информативная реакция, выражающаяся в увеличении численности нормальных киллеров аутологических эритроцитов в ответ на стресс-воздействия, которая имеет определенные динамические характеристики.

Практическая значимость. Полученные результаты могут быть использованы для оценки экологической ситуации с целью обнаружения в организме человека стрессового состояния, а так же в

практической медицине для оценки тяжести состояния больного и эффективности проводимой терапии.

Положения, выносимые на защиту.

Решение поставленных задач привело к следующим основным принципиально новым результатам, которые "имеют важное фундаментальное и практическое значение и выносятся автором на защиту:

1) Предложен количественный метод экспресс оценки возникновения в организме человека и животных стресс-ситуации по количеству в крови нормальных- киллеров аутологических лимфоцитов.

2) Установлена избирательная киллерная активность НКАЭ в отношении «старых» функционально неполноценных эритроцитов.

3) Показано, что описанная в работе ответная реакция организма на стресс-воздействие, проявляющаяся в увеличении числа НКАЭ к периферической крови, является универсальной адаптационной реакцией организма, направленной на поддержание гомеостаза системы эритрон.

Публикации. Результаты диссертации опубликованы в девяти печатных работах.

Апробация работы. Основные результаты исследований докладывались на I Всесоюзном биофизическом съезде (Москва, 1989г.); на VII Всероссийском симпозиуме «Коррекция гомеостаза» (Красноярск, 1996г.); на VIII Всероссийском симпозиуме «Гомеостаз и окружающая среда» (Красноярск, 1996г.); «Проблемы экологии человека на Севере» (Красноярск, 1996г.); на Всесоюзных научно-практических конференциях «Проблемы химико-лесного комплекса» (Красноярск, 1996, 1997).

В заключение приношу глубокую благодарность моему научному руководителю доктору биологических наук, профессору Я.И.Пуховой за постановку задачи и большую помощь в работе, а также коллективу сектора иммунологии Института биофизики РАН, где была выполнена работа.

\

\

\

\

\

\

и

ГЛАВА!

СОВРЕМЕННЫЙ ВЗГЛЯД НА СТРЕСС И ОДИН ИЗ

МЕХАНИЗМОВ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ОТВЕТЦОЙ РЕАКЦИИ

\

ОРГАНИЗМА

1.1. Формирование концепции стресса и анализ адаптационных

возможностей организма

В настоящее время отмечается значительный интерес к проблемам экологии, что связано с нарастанием антропогенного воздействия на окружающую среду. Общенаучная важность проблемы экологического равновесия и адаптации4 выдвигают эту науку в разряд интенсивно развивающихся медико-биологических дисциплин. Следует отметить комплексный характер экологии как области научных и прикладных исследований. Сейчас не представляется возможным ее развитие без познания клеточных и молекулярных механизмов ответной реакции организма на изменение окружающей среды. Воздействие отрицательных факторов окружающей среды на организм человека обуславливает глубокие нарушения на организменном, тканевом, клеточном и молекулярном уровнях II/. В связи с этим исключительно важным является изыскание информативных тестов, позволяющих в довольно ранние сроки оценить возникновение стресс ситуации в организме человека в ответ на повреждающее воздействие и провести необходимую коррекцию.

Существует достаточно много методов оценки изменения здоровья человека в ответ на нарушение экологического равновесия. Введен термин - состояние здоровья населения, позволяющий оценить изменения на популяционном уровне 121. Но индикатор состояния здоровья населения, который дает хорошие прогностические результаты относительно адаптации человека к тем или иным условиям внешней среды, не позволяет оценить момент появления в организме чрезвычайной стрессовой ситуации, а следовательно, не может быть использован для оперативного управления экологической ситуацией. Кроме того, этот метод дает хорошие результаты для оценки состояния здоровья населения по уровню адаптированности к условиям окружающей среды при анализе достаточно большого числа взаимодействующих параметров /3, 4, 51. Особую актуальность в связи с этим приобретает разработка информативных экспресс тестов индикации стресс-состояния. Кроме того популяционный анализ проблемы адаптации, который дает возможность оценки состояния здоровья населения через состояние антропоэкологического напряжения не дает информации о состоянии отдельного индивида. Такой анализ требует описания и оценки множества признаков и взаимодействующих между собой факторов. Безусловно этот метод, называемый методом корреляционной адаптометрии, является весьма информативным и позволяет делать выводы относительно воздействия множественных ^факторов среды на организм по уровню их скоррелированности, который оказывается значительно выше в самом процессе адаптации, чем в состоянии адаптированности. В качестве меры скоррелированности используется показатель, называемый весом корреляционного графа.

Этот метод удачно применялся, например, для оценки антропоэкологического напряжения при краткосрочной адаптации к условиям Крайнего Севера /3/, исследовании адаптивных изменений секреторной функции желудка, традиционной для европейского и коренного населения Севера, при исследовании раннего постнатального периода /6, 7, 8/.

Возможность быстрой оценки повреждения в системе в ответ на изменение внешних условий неразрывно связана с о^нкой процессов старения организма, если принимать за старение «процессы, делающие индивидуум, по мере того как он становится старше, более чувствительным к различным факторам, внутренним и внешним, которые могут привести к смерти» /4/. Изменения, которые возникают в процессе старения носят неблагоприятный характер, они повышают вероятность гибели животного, в конечном итоге старение ведет к уменьшению способности животных и человека

приспосабливаться к окружающей среде. Факторы среды оказывают

\

влияние на старение как на популяционном уровне, так и на тканевом и органном уровне. Например, в условиях сухости организм будет терять воду, что изменит осмотическое давление и ионный состав жидкостей тела, а это в свою очередь отрицательно скажется на клеточных функциях. На молекулярном уровне внешняя среда будет влиять на характер и частоту молекулярных повреждений и таким образом сокращение жизни /5/. Безусловно, реакция на повреждающие события тесно связана с генотипом индивидуума. Он влияет как на вероятность тех или иных повреждений, так и на степень их компенсации и репарации /9, 10, 11, 12/.

В индустриальном обществе существует реальная опасность

V

загрязнения окружающей среды и соответственна растет число факторов влияющих на жизнь человека и животных и оценка уровня такого воздействия, а также возможности прогнозирования ситуации представляется совершенно необходимой. Именно на молекулярном уровне в первую очередь происходят изменения функций организма и оценка этих изменений предполагает наличие некоторого теста, позволяющего эти изменения оценит количественно.

В целом, вызванный любым фактором среды стресс внешне выглядит как генерализованная реакция мобилизации охватывающая весь организм.

Организм при действии на него различных раздражителей физической или химической природы реагирует появлением неспецифических признаков. На эту особенность первым обратил внимание Г.Селье (1936). Селье выдвинул оригинальную концепцию о возникновении стрессовой ситуации, заставив тем самым обратить внимание и пересмотреть взгляды на вопрос возникновения состояния болезни /13, 14, 15, 16/.

С проблемой стресса человек столкнулся очень давно, .когда обнаружил, что реакции организма на продолжительное непривычное и суровое испытание протекают по одной схеме: первоначально ощущается некоторое затруднение в выполнении того или иного действия, а затем достигается предел в выполнении организмом своих функций. Были отмечены некоторые сходные реакции организма на разные сверхсильные раздражители /17/.

Вопрос реакции организма на действие чрезвычайных раздражителей изучался достаточно давно, он являлся предметом классических исследований.

Селье Г. впервые была выдвинута идея, рассматривать болезни не только по их различию, но и по сходству. Он отметил значение симпатико-адреналовой и нервной системы в механизмах экстренной мобилизации. Было установлено, что в результате чрезвычайных раздражений нервной системы возникают не только неврозы, но и генерализованные нарушения трофики. Внутренняя среда живого организма должна сохранять постоянство при любых колебаниях среды. Селье Г. уже в 1936 году начинает заниматься проблемой неспецифических реакций организма и выдвигает свою концепцию стресса и одновременно такие понятия как «общий адаптационный синдром», «адаптационная энергия», «болезни адаптации». Он отметил ряд признаков сопутствующих развитию стрессовой ситуации: значительное увеличение коркового слоя надпочечников и исчезновение секреторных гранул из клеток железистой ткани, острую инволюцию тимико-лимфатической системы, появление кровоточащих язв желудка и двенадцатиперстной кишки. Селье Г. сделал вывод, что появление этих неспецифических признаков отражает некоторый дисбаланс в системе организма, отражающий характер защитной реакции его на повреждающее воздействие. Предъявление требования к перестройке организма, вызываемое различными внешними агентами одновременно имеет специфический характер, но и неспецифично, т.к. оно состоит в адаптации к возникшей ситуации Этот важнейший биологический феномен, присущий всем живым существам с достаточно высокой степенью

структурно-функциональной организации получил название «общего адаптационного синдрома».

Общий адаптационный синдром проходит три фазы: 1) фазу тревоги, когда организм, подвергнутый стрессу меняет свои характеристики, 2) фазу сопротивления, когда при совместимости действия стресса с возможностями адаптации организма поднимается его уровень сопротивляемости и 3) фазу истощения, когда постепенно запасы адаптационной энергии истощаются и вновь появляются признаки тревоги, но реакции уже необратимы.

Отмечается важнейшая роль симпатико-адреналовой системы в развитии общего адаптационного синдрома. Две системы: гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая и симпатико-адреналовая составляют компоненты первой триады в учении о стрессе.

Сегодня интенсивно изучаются механизмы , цитолитического

\

действия стресса, обуславливающего инволюцию тимико-лимфатической системы (второй компонент триады Селье). На лимфоцитах обнаружены рецепторы к кортизолу, но точных механизмов, описывающих этот процесс не существует, так же как их нет для описания третьего компонента триады- появления глюкокортикоидов, ответственных за развитие язв желудка и двенадцатиперстной кишки /18, 19, 20 /.

В настоящее время очевидно, что феноменологически стресс давно перерос рамки предложенные Селье Г. Отмечается важнейшее действие центральной нервной системы. Само явление стресса не идентично эмоциональному возбуждению или нервному напряжению. В частности стресс может развиваться у наркотизированных больных и у экспериментальных животных даже

после полной хирургической деафферентации гипоталамуса, которая устраняет все нейрогенные входы. Предложенное Селье Г. прекрасное определение стресса, как «неспецифической реакции организма на любое предъявляемое к нему требование» /7/ представляется наиболее всеобъемлющим.

Биологическое значение стресса состоит в достижении организмом резистентности при действии на него повреждающего фактора. С помощью определенной системы ^специфических реакций организм старается избежать повреждающего воздействия эффекта до того, как процессы повреждения станут необратимыми, что обеспечивает надежность адаптивного поведения биосистемы в быстро меняющихся условиях существования. Однако, стресс одновременно и важнейший инструмент закаливания системы, он повышает сопротивляемость организма, тренирует его защитные механизмы. Чем более выражены приспособительные механизмы, тем

больше у живого организма возможности адаптироваться и выжить в

\

экстремальных условиях окружающей среды /21, 22, 23/. Именно, изучив молекулярные механизмы стресса мы смогли бы расширить наши знания о возможности поддержания гомеостаза, т.е. устойчивости внутренней среды организма, как функциональной системы, лежащей в основе адаптивного поведения.

Что же происходит в организме в результате развития общего адаптационного синдрома? Мы отмечали, что в своем развитии общий адаптационный синдром проходит следующие стадии: первая - реакции тревоги, вторая - резистентность и третья ч истощение. На первой стадии мобилизуются защитные силы организма, начинается процесс перестройки системы регуляции. В этот момент

сопротивляемость организма снижается и, если результат действия раздражителя выходит за пределы компенсации, мЬожет наступить смерть. Если сила действия чрезвычайного раздражителя не превышает компенсаторных возможностей организма, развивается вторая стадия - резистентности или адаптации. В этот период сопротивляемость организма повреждающему воздействию внешнего раздражителя повышается. После длительного действия чрезвычайного раздражителя могут исчерпаться компенсаторные возможности и организм переходит в третью стадию - истощение. При этом изменения могут носить необратимый ^характер. Таким образом, повышение резистентности организма адекватно" качественной и количественной характеристике раздражителя. Наличие тестов, способных распознать неспецифические изменения, наступающие в организме уже на первой стадии позволили бы принять соответствующие меры помощи организму в ответ на стресс воздействие, т.к. организм можно рассматривать как функциональную систему, которая несет врожденные или

динамически складывающиеся в данной ситуации черты

\

саморегуляции с характерными только для нее узловыми механизмами.

Селье Г. полагал, что внешне развитие адаптационного синдрома, а именно три его фазы напоминают процесс жизни с ее различными периодами, в этом смысле протекание жизни можно было бы сравнить с растянутым во времени адаптационным синдромом. По теории Селье Г. продолжительность жизни зависит от количества адаптационной энергии, запрограммированной генетически и передающейся по наследству, X от меры ее

потребления в ходе жизни, приносящей с собой стрессовые ситуации в результате воздействия внешних раздражителей. На генетическую детерминированность повлиять достаточно сложно, но оценить влияние экологических факторов и резистентность организма гораздо доступнее.

Нарушение гомеостаза, вызванное фактором внешней среды, активирует системы, ответственные за адаптацию, что приводит к возникновению двух явлений: мобилизации функциональной системы и развитию неспецифического стресс-синдрома. В результате стресса в организме не просто мобилизуются все силы, но происходит их неравномерное перераспределение, направленное на

те системы, которые осуществляют основную функцию. Ярким

\

примером такого перераспределения ресурсов является тот факт, что при попадании организма в новую опасную обстановку, или при введении чужеродного антигена формируются оборонительные условные рефлексы, или специфический иммунитет к новому антигену, т.е. происходит передача информации из систем, не участвующих в адаптации к данному конкретному фактору, в системы, специфически ответственные за адаптацию. При повторении подобной стрессовой ситуации стресс-синдром носит менее выраженный характер, вследствие сформировавшегося структурного следа /24/, он и составляет основу адаптации. В процессе функционирования в организме создается целая система структурных следов, т.к. организм постоянно сталкивается с изменяющейся окружающей действительностью. При этом сформировавшийся один раз системный структурный след в процессе функционирования постоянно изменяется, на смену сформировавшемуся набору

долговременных адаптационных реакций приходит новый, и спектр адаптации постоянно меняется. Стресс-синдром, составляющий необходимое начальное звено любой адаптации одновременно генерирует процесс стирания старых структурных следов и формирование новых. Таким образом, стресс-синдром не только предшествует развитию устойчивой адаптации, но ^ играет важную роль в ее формировании. В тех случаях, когда требования среды не" могут быть адекватно восприняты организмом, не происходит формирование адекватной ответной реакции и адаптация не реализуется. Возникают стрессорные заболевания, занимающие одно из основных мест в современной медицине. В связи с этим большой интерес представляет изучение дальнейшего поведения организма, основанное на адаптации к таким тяжелым стрессовым состояниям и в конечном итоге профилактика стрессовых ситуаций /25, 26, 27/.

Система иммуногенеза, наряду с нервной и гормональной, относится к регуляторным системам и играет исключительную роль в формировании механизмов адаптации /28, 29/. Клеточные элементы иммунной системы организованы в тканевые и органные структуры, к которым относятся селезенка, лимфатические узлы, пейеровы бляшки кишечника, миндалины, тимус и костный мозг. Кроме того, весьма значительная часть лимфоцитов и макрофагов составляет рециркулирующую популяцию клеток крови и лимфы. Способность организма отвечать практически на любой антигей,\ обеспечивается наличием достаточно большого числа различных групп лимфоцитов, каждая из которых имеет специфические рецепторы для определенных антигенов. Среди лимфоцитов различают в основном две популяции: Т и В клеток. Кроме этих двух главных классов

\

лимфоцитов известны еще лимфоциты, осуществляющие некоторые «неспецифические» цитотоксические реакции. К ним относятся так называемые природные (естественные, натуральные, нормальные) клетки киллеры (natural killer cells, NK), способные убивать некоторые виды опухолевых клеток, причем они имеют свои собственные механизмы распознавания /30, 31/. Существуют и специфические иммунные защитные механизмы. Ослабление

иммунной системы приводит к снижению компенсаторных

\

возможностей организма к стресс-факторам в качестве которых могут выступать вирусные и грибковые заболевания индукторы неопластических и аутоиммунных процессов. Наличие иммунных тестов, отражающих реакцию организма на изменение экологической ситуации дает возможность быстрой и успешной терапии.

Клетки системы иммуногенеза (белые клетки) тесно связаны по происхождению, и в значительной степени по локализации с клетками красного ряда, которым принадлежит исключительная роль в формировании механизмов адаптации, поскольку сЧэтими клетками связано обеспечение всех систем кислородом. В этой связи значительный интерес представляет рассмотрение такой популяции клеток, как нормальные киллеры аутологических эритроцитов (НКАЭ).

1.2. Свойства лимфоцитов-киллеров, участвующих в неспецифической ответной реакции на стресс-воздействие

\

\

Сам термин нормальные киллеры (естественные киллеры, ЕК) происходит от английского Natural killer (NK, НК) cells, природные

истребители, киллеры. В настоящее время свойства этих клеток интенсивно изучаются в связи с их ролью, в частцости, в создании противоопухолевой защиты в организме. Наряду с интересом в изучении свойств натуральных киллеров необходимо изучение их рецепторов, играющих важнейшую роль в механизмах распознавания. Нас особенно интересует вопрос взаимодействия этих клеток с клетками красного ряда человека и животных.

Исследование функций нормальных киллеров и их роли в неспецифическом иммунном ответе позволило выделить ряд свойств этих клеток. Рассмотрим некоторые из них.

Общая схема киллинга в настоящее время вюпЬчает в себя три возможных пути разрушения клетки-мишени: 1) введение в мембрану -мишень молекул, формирующих поры (это свойство присуще в основном лимфоцитам), 2) «прожигание» мембраны метаболитами кислорода (свойственно в основном эозинофилам и макрофагам), 3) разрушение мембраны посредством растворимых цитотоксических факторов (свойственно в основном лимфоцитам и макрофагам) /30, 31/.

.Естественные клетки -киллеры здоровых людей способны лизировать аутологические и аллогенные лимфоциты периферической крови, причем только тогда, когда лимфоциты" обрабатывают нейраминидазой, лишая их тем самым сиаловой кислоты. Очевидно, терминальные остатки сиаловой кислоты защищают аутологичные лимфоциты периферической крови от аутолизиса под влиянием №С /32/.

Лимфоциты, называемые №С способны разрушать аллогенные или сингенные опухолевые клетки без предварительной их

сенсибилизации к клеткам-мишеням. Они представлены у человека в основном крупными гранулярными лимфоцитами /33, 34, 35/.

Интерферон стимулирует созревание предшественников NK

Клеточная цитотоксичность связана с двумя типами клеток: ЕК и ЕЦК (естественные цитотоксические клетки). Эти клетки имеют общего предшественника, но отличаются временем лизиса и поверхностными маркерами /37/.

NK угнетают пролиферацию эритроидных стволовых клеток человека in vitro. Отмечено, что они проявляют регуляторную функцию в отношении эритропоэза /38, 34/.

NK осуществляют свой лизис через рецептор для трансферина, но это не единственная мишень для этих клеток /39/. \

Ультраструктурные исследования показали, что нормальные киллеры богаты цитоплазмой с крупными митохондриями и различными гранулами. При контакте НК с клеткой мишенью обнаружено проникновение ворсинок из EDK в клетку мишень. Лизис начинается уже через 5 секунд после начала инкубации при 4° С /40, 41/.

РЖ осуществляют инактивацию и элиминацию чужеродных и

измененных собственных клеток в отсутствие ^предварительной

\

иммунизации /34, 35, 42/.

Исследование стадий дифференцировки НК человека в процессе развития от зародыша до взрослого организма показало, что в процессе созревания они могут менять свой фенотип и морфологическое строение /43/.

У неиммунизированных мышей имеются цитотоксические лимфоциты против сингенных эритроцитов, которые авторы относят к незрелым Т клеткам, родственным НК /44, 45/.

Имеются данные о том, что НК регулируют антителообразование человеческими лимфобластными линиями клеток /46/.

НК клетки имеют рецептор к определенным видам опухолевых и некоторым видам естественных клеток, но их рецепторы изучены мало. Важна степень сиалирования клеток мишеней. Раковые клетки и зараженные вирусом клетки более гликозилированы, поэтому они являются хорошей мишенью.

НК клетки относят к не прилипающим клеткам. Активность этих клеток стимулирует интерферон. Эти клетки имеют антигены сходные с антигенами Т клеток, например это антигены Ьу-5 (Т-200) у

мышей, С>е-4, С)е-5. Кроме того, они имеют уникальные антигены №С

\

1.1, 1.2. Определенная часть этих клеток имеют антигены ТЬу-1.2,-Ьу 1.1,С>а-2.Количество этих клеток в крови составляет примерно 5-10%.В созревании Ж. ни тимус, ни вторичные лимфоидные органы не имеют значения. Потенциальный стимулятор их киллерной активности интерлейкин 2 /47, 48, 49/.

Таким образом нормальные киллеры это коммитированные клетки, т.е. клетки, способные отвечать на определенную группу структурно сходных антигенов. Они имеют мембранные рецепторы, специфические для антигена еще до встречи с ним. 4

По мнению большинства исследователей нормальные киллеры представлены малыми лимфоцитами и несут антиген ТЬу-1. Эти клетки регистрируются в селезенке, лимфатических узлах, крови,

костном мозге и тимусе (в этом органе их значительно меньше). Есть достаточное количество данных указывающих на то, что №С не только осуществляют противоопухолевую функцию, но и участвуют в поддержании физиологического гомеостаза. Кроме того нормальные клетки или сходные с ними клетки, предшественники лимфоцитов оказывают цитотоксическое действие на эритроциты /50, 51/.

Значительное внимание исследователи уделяют изучению свойств антигена ТЬу-1. \

\

Впервые этот антиген был обнаружен Райф и Аллен одновременно на Т клетках тимуса и в ткани головного мозга взрослых мышей. Его первичная структура хорошо исследована /52/. Ген ТЪу-1 антигена клонирован для мышей, крыс и человека /53/. Этот антиген принадлежит к суперсемейству иммуноглобулиновых молекул. По аналогии с константным фрагментом иммуноглобулина Т1ту-1 антиген может выполнять эффекторные функции, выступая в роли лиганда /54, 55/. Известно, что мышиный мозг имеет перекрестные антигены с ТЪу-1 антигеном. Приче^ антисыворотка против мышиного мозга содержит антитела против мышиных эритроцитов. Этот антиген можно обнаружить уже на поверхности корковых мышиных тимоцитов. По этому маркеру можно отличить тимоциты и периферические Т-лимфоциты о других лимфоцитов, например от В-лимфоцитов или «нуль-клеток» /28, 29/. Антисыворотка а этому антигену в комплемент-зависимой цитотоксической реакции разрушает клетки, несущие этот антиген.

ТЪу-1 антиген человека имеет общие антигенное детерминанты с О человека, а именно общие детерминанты ассоциированы с

первым и третьим константными доменами, содержащими остатки цистеина в молекуле О. Подобные детерминанты присоединены дисульфидной связью в молекуле ТЬу-1 антигена в ^положении 9-112 /55/. Этот антиген у мышей является классическим маркером поверхности Т-клеток, это гликопротеид с молекулярным весом 25 ООО Д. У человека его гомологом является антиген р 25, выделенный из головного мозга. Эти антигены характеризуются высоко сходными, но неидентичными пептидными картами и аминокислотным составом. Выявлена структурная родственность между антигенами р 25 из мозга человека и очищенными гликопротеидами из мозга крыс, собак и кур. ТЬу-1 подобный

V.

антиген выделен в очищенной форме из мозга беспозвоночных (например, у кальмара). Обнаружена гомология между доменами этого антигена и доменами константной и вариабельной областей иммуноглобулинов, а также доменами полипептидной цепи и бэта-2 микроглобулином антигенов НЬА-А, НЬА-В, НЬА-С. Считается что гликопротеид ТЪу-1 подобен зародышевому (исходному) домену иммуноглобулинов, т.е. молекуле предшественнице общей для суперсемейства иммуноглобулинов /56,57,58,59/. Ген Т11у-1 может экспрессироваться в клетках человеческих линий МЦЬТ-З, НИТ-78 и НИТ-102 /60/. Этот антиген имеется на стволовых клетках." Синтезируется этот антиген, очевидно, клетками эпителия тимуса и автономно от тимуса - нейронами /61, 53/. Он участвует в регуляции процессов иммуногенеза и высшей нервной деятельности.

Ген ТЬу-1 антигена клонирован для мышей, крыс и человека

Все выше сказанное свидетельствует об участии ТЪу-1 антигена в межклеточной кооперации в процессах, протекающих как в нервной, так и в иммунной системе /62/.Существенно важно, что повышение активности нормальных киллеров происходит в первые 12 дня после воздействия. Очевидно, они представляют собой только

V.

первый барьер в распознавании каких-то чужеродных образований^ например, новообразующейся опухоли /63/.

1.3. Изменения антигеннных детерминант эритроцитов в процессе их функционирования

Структура компонентов мембраны нормального эритроцита достаточно хорошо изучена. Эритроциты лишены органелл и имеют только одну мембрану - плазматическую. Порченные путем осмотического лизиса тени мембран эритроцитов разделили в полиакриламидном геле . Оказалось, что на цитоплазматической части мембраны эритроцита локализуются белки соответствующие полосам 1, 2, 4.1, 4.2, 5 и 6 /64/ На них действуют протеолитические ферменты. Полосы 1 и 2 - это спектрин, который образует разветвленную волокнистую цепь, он стабилизирует форму мембраны эритроцита. Полосы 3 и 7 представлены интегральными

белками, их можно отделить только с помощью детергентов. Белок

\

зоны 3 локализуется на обеих сторонах мембраны эритроцита-и все его молекулы одинаково ориентированы. Димер этого белка представляет собой анионный канал. Углеводный компонент этого белка расположен на наружной поверхности. Трансмембранная локализация белка полосы 3 вполне соответствует его функции

канала через мембрану /65/.Трудно недооценить роль этого белка. Взаимодействие эритроцитов с химитрипсином показало, что этот белок локализован на обеих сторонах эритроцитарной мембраны и все молекулы белка одинаково ориентированы. Его углеводный компонент расположен на наружной поверхности. К

трансмембранным белкам относится и гликофорин А. На долю

углеводов приходится 60% массы этого белка. Он достаточно хорошо

\

изучен, но тем не менее его функция еще не ясйа. С изучением строения мембраны эритроцита тесно связано исследование механизма распознавания эритроцитов, который еще изучен не достаточно хорошо, но существует несколько попыток его описать. С помощью метода электронной микроскопии /66/ удалось показать возможность распознавания старых эритроцитов макрофагами, реализуемую с помощью аутоантител. Значительное внимание при этом уделяется белку зоны 3. В частности показано, что на поверхности старых, или поврежденных эритроцитов появляется гликолизированный полипептид, антиген старых эритроцитов.-Появление этого антигена вызывает связывание с эритроцитами аутоантител ^ в классса, специфичных к этому антигену и удаление старых эритроцитов. Причем было показано, что, по-видимому, этот антиген имеет родство с мембранными белками, обозначенными как белок зоны 3 (БЗ-З) и участвует в транспорте анионов через мембрану эритроцитов. Методом иммуноблотинга показали, что БЗ-З связывается с аутоантителами к антигенам старых эритроцитов. С помощью двумерного пептидного картирования Остановили, что АСК, БЗ-З и протеолитические фрагменты БЗ-З распознаются аутоантителами, которые реагируют на антигенные детерминанты,

локализованные на внешней части трансмембранного фрагмента БЗ-З /67/. 4

Эритроциты крови являются популяцией наиболее быстро обновляющихся клеток. Их численность и состав динамично изменяются не только при возникновении заболевания организма, но и в условиях адаптации к факторам внешней среды. При этом изменения возникают как на стадии процесса кроветворения, так и на стадии разрушения эритроцитов. С помощью математического моделирования описано специфическое действие гипоксии на скорость старения эритроцитов. Показано, что наибольшее влияние гипоксия оказывает на группу среднестойких клеток,, стойкость которых изменяется в норме с наименьшей скоростью /68/. Влияние среды на низкостойкие клетки менее заметно. Высокостойкие клетки практически не реагируют на изменения внешней среды по отношению к эритроцитам. В условиях гипоксии наряду с активацией системы транспорта 02, гипервентиляцией легких, увеличением минутного объема сердца, расширением сосудов мозга и сердца,

повышением кровяного давления, депрессией функции ряда систем, в

\

\

частности высших отделов головного мозга, происходит активация адренергической и гипофизарно-адреналовой систем , что является классический примером возникновения в организме стресс синдрома.

Таким образом в ответ на гипоксию возникает классическая ответная реакция, сопровождающаяся стресс-синдромом /24/.

Такое неспецифическое воздействие мобилизует аппарат кровообращения и внешнего дыхания, но одновременно проявляется отрицательный азотистый баланс, потеря веса, атрофия жировой ткани и т.д. \

На продолжительность жизни эритроцитов оказывают влияние внеклеточные факторы любой природы /69, 70/. В работах Я.Г. Ужанского /71/ проведен подробный анализ разрушения эритроцитов в условиях развивающейся в организме гипоксии, вызванной различными факторами.

В мембранах стареющих эритроцитов с помощью электрофореза в геле наблюдали полимеризацию ее компонентов, особенно в зоне 1 и 2 спектрина, вызванную пероксидацией липидов мембраны, которая в свою очередь изменяет биохимические и механические свойства стареющих эритроцитов. Такие изменения приводят к секвестрации стареющих эритроцитов. /72/

На поверхности старых или поврежденных эритроцитов

\

появляется гликозилированный полипептид, мигрирующий- при электрофорезе в 8Б8- полиамидном геле в зону 4,5. Его назвали антигеном старых эритроцитов. Было показано, что антиген старых эритроидных клеток ( АСК ) имеет родство с мембранным белком, обозначенным как белок зоны 3 (БЗ - 3) и участвует в транспорте анионов через мембрану эритроцитов.

Методом иммуноблотинга показали, что БЗ-З связывается с аутоантителами к АСК, элюированными со старых эритроцитов /73,74/. С помощью двумерного пептидногоч картирования установили, что АСК, БЗ-З и протеолитические фрагменты БЗ-З распознаются аутоантителами, которые реагируют на антигенные детерминанты, локализованные на внешней части трансмембранного фрагмента Что еще раз подтверждает тот факт, что при старении эритроцита БЗ-З расщепляется в трасмембранном районе. С помощью иммуноэлектронно-микроскопического анализа показано, что

связывание антител ^ О класса к белку «зоны 3» с белком «зоны 3», называемым антигеном стареющих эритроцитов, значительно улучшается при обработке эритроцитов трипсином, отщепляющим гликофорины А и С, но не разрушающим сам белок. Очевидно, что в интактных эритроцитах этот белок экранирован гликофоринами /65,67/.

\

В стареющих клетках возникают повреждения мембраны,-которые могут быть вызваны как внутренними причинами (например, ненормальным соотношением белков и липидов) так и внешними факторами: физическими, химическими или иммунологическими стрессами /75/.

Для старых эритроцитов характерно снижение средних показателей объема гемоглобина, увеличение средних показателей концентрации гемоглобина и уменьшение сиаловых кислот. На мембране старых эритроцитов фиксировано больше 0,М, А Ъ С3с1, чем на молодых эритроцитах. Очевидно, что фиксированные компоненты плазмы играют роль при старении эритроцитов /76/

Ежедневно из кровотока удаляется 1% от общего количества эритроцитов. Причин такого удаления по накопленным экспериментальным данным достаточно много, но единый механизм его пока все еще не ясен. Длительно циркулирующие эритроциты теряют сиаловые кислоты с поверхности мембраны, что меняет их заряд. Плотность же поверхностного заряда остается постоянной в течение всей жизни эритроцита./77./ Мы уже отмечали изменения к липидном составе мембраны эритроцитов с возрастом. Также в процессе функционирования мембраны обедняются

\

аденозинтрифосфатом, что влияет на их деформабильность" из-за изменения проницаемости мембраны для ионов Са ++ /78/.

В появлении сферичности формы эритроцитов вносит вклад их дегидратация. В процессе жизнедеятельности они подвергаются воздействию со стороны химически активных радикалов. В результате интенсивных окислительных реакций в эритроцитах накапливаются сильные окислительные факторы.

Было показано, что эритроциты со специфической плотностью больше 1,110 г на мл , характерной для старых клеток^ а их около 30% от всей популяции, имеют на поверхности своей мембраны аутологический иммуноглобулин, которого нет у эритроцитов с меньшей плотностью. Наличие такого иммуноглобулина предполагает, что есть адаптивный иммунный ответ для удаления с помощью иммунной элиминации старых эритроцитов. Возможно, этот рецептор эритроцитарной мембраны является возрастнозависимым антигеном /79/.

Возможно, что маскировка О рецепторов на мембране предотвращает раннюю элиминацию эритроцитов из периферической крови /80/.

Отмечено, что микровязкость мембран эритроцитов в процессе их старения увеличивается, что отражается на снижении активности такого фермента как (ТЧа+ К+) атефаза. Известна высокая чувствительность этого фермента к вязкости мембранных липидов /81,82/.

Значительно меняется аминокислотный состав в эритроцитах. А

\

\

именно с увеличением возраста эритроцита наряду со снижением концентрации креатина наблюдается значительное уменьшение

содержания глицина, гистидина, изолейцина, метионина, фенилаланина, серина и тирозина. Уровни валина, треонина,

V

\

глутаминовои и аспарагиновои кислот не изменялись с увеличением возраста эритроцита/83/.

Есть данные о том, что появление на поверхности эритроцитов фосфатидилаланина является сигналом к их удалению из циркуляции /84/.

Показано, что эритроцит удаляется из циркуляции и разрушается тогда, когда он начинает утрачивать свою важнейшую первоначальную функцию, а именно функцию транспорта кислорода. Это вызвано денатурацией гемоглобина с Чформированием гипохромов, пронизывающих белок зоны 3 и образованием там агрегатов. Такие кластеры являются сигналом к удалению старой клетки из циркуляции /85/.

При старении эритроцитов меняются в значительной степени их

1 о ч/

физические свойства: нарастает удельный вес, снижается их осмотическая резистентность, уменьшается электрический заряд, уменьшается объем, снижается эластичность и клетка становится

регидной /86/. Уменьшается содержание общего количества липидов,

\

фосфолипидов, холестерина /87/. Значительно меняется биохимия эритроцита: снижается активность гликолиза, пентозофосфатного цикла и сопряженных ферментативных систем. Уменьшается общее количество белка, меняются соотношения отдельных белковых фракций, нарушаются физико-химические свойства белковых молекул. Увеличивается количество натрия и уменьшается количество калия, нарастает кальций. Во фракции старых

эритроцитов по сравнению с молодыми эритроцитами увеличивается

\

вязкость /88,89/. В мембранах старых эритроцитов наблюдается денатурация белков на их поверхности /90/. С возрастом меняется форма эритроцитов. В более плотной фракции эритроцитов (т.е. в старых эритроцитах) обнаруживаются элиптоциты, но ни одного такого эритроцита нет среди ретикулоцитов, т.е. \более молодых эритроидных клеток/91/.

Таким образом, за время функционирования эритроциты претерпевают ряд существенных изменений как их физико-химических свойств, так и свойств, связанных с осуществлением тонких молекулярных взаимодействий. Такие изменения в конечном итоге приводят к нарушению функциональной деятельности этих клеток и их дальнейшему удалению из русла.

В норме эритроциты человека и животных жирут определенное количество времени и мы можем говорить о постепенности изменений, происходящих в эритроидной клетке, которые, очевидно, генетически детерминированы и приводят, в конечном счете, к ее старению и разрушению. Но достаточно часто встречаются ситуации, приводящие к ускоренному старению клетки и их секвестрации. Причины, вызывающие такое ускоренное старение могут быть самыми разными, начиная от воздействия из вне организма со стороны внешней среды и кончая нарушением аппарата контроля за

V.

развитием клетки и ее разрушением в самом организме. Во всех этих случаях лимитирующим является создание гипоксического состояния, приводящее в конечном счете к удалению клетки из циркуляции.

Заключение диссертации по теме «Экология», Пономаренко, Людмила Давидовна

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ

1. Исследованы свойства нормальных киллеров \аутологических эритроцитов, и показано, что они представлены лимфоцитами различного диаметра, в основном малыми лифоцитами, не адгезирующимися на нейлоновой вате и имеющими в фенотипе ТЪу-1 антиген.

2. Показано, что НКАЭ избирательно взаимодействуют и в первую очередь разрушают «старые» функционально неполноценные эритроциты.

3. Показано, что численность НКАЭ в крови при стресс-воздействиях V имеет специфическую динамику, временные характеристики которой не зависят от природы стресс-фактора, а зависят от глубины его воздействия.

4. Показано, что динамика численности НКАЭ в крови является высокочувствительной информативной стереотипной универсальной адаптационной реакцией организма в ответ на стресс-воздействие, направленной на поддержание гомеостаза системы эритрон.

5. Предложен количественный экспресс-метод Чидентификации стресс-ситуации в организме по динамике численности НКАЭ в крови (по количеству НКАЭ в крови), который может быть использован для оценки экологической ситуации и в клинической практике.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одной из наиболее актуальных проблем экологии, физиологии и медицины является проблема оценки в организме человека и животных наличия стресс-ситуации и способности противостоять стресс-воздействиям, обусловленным факторами различной природы. Наличие теста, позволяющего определить возникновение стрессовой ситуации в организме уже на самых ранних этапах ее развития представляется важным, поскольку дает возможность не только оценить ее глубину, но и провести соответствующую коррекцию.

Это особенно важно для оценки экологической ситуации, когда в условиях интенсивно развивающегося общества, организм человека испытывает воздействие множества экстремальных факторов. Это важно и для практической медицины, когда Стресс достигает чрезвычайной силы и организм, пройдя стадию резистентности, уже" не может адекватно отреагировать на изменение, вызванное повреждающими агентами.

Существующие в настоящее время методы оценки стрессовой ситуации базируются на сложном анализе большого числа факторов, описывающих состояние организма. Часто такой анализ не дает своевременной информации о начальном этапе формирования стресс-ситуации в организме. Кроме того, они мало информативны в отншении глубины воздействия повреждающего фактора.

Нами предложен универсальный метод быстрой оценки развития стрессовой ситуации в организме человека и животных по оценке количества нормальных киллеров аутологических эритроцитов (НКАЭ). Увеличение числа НКАЭ в ответ на различные стресс-воздействия является универсальной и стереотипной ответной реакцией организма с целью поддержания его гомеостаза. С помощью этого метода мы можем не только обнаружить начальные стадии формирования стрессовой ситуации, но и проследить за ее развитием, а так же оценить уровень повреждающего воздействия. Информация о количестве с ЫКАЭ в совокупности с другими стандартными гематологическими показателями позволяет предложить методы по коррекции терапии. Область применения этого метода не ограничена какими-то определенными рамками, т.к. он позволяет определить наличие стрессовой ситуации для самых разных повреждающих агентов.

Исследование нормальных НКАЭ показало, что они представлены лимфоцитами различного диаметра, в основном малыми лимфоцитами. С точки зрения фенотипа это клетки не обладающие адгезивной способность. Они несут на свой поверхности ТЪу-1 антиген. Результаты обработки этих клеток протеолитическими ферментами позволили сделать вывод о прямом киллерном механизме их взаимодействия с аутологическими эритроцитами.

Таким образом, по ряду свойств НКАЭ имеют ряд общих признаков с предшественниками Т-лимфоцитов и нормальными киллерами, и осуществляют свои функции иммуннологического надзора за популяцией аутологических эритроцитов.

Показано, что такие НКАЭ обладают распознавательной функцией и взаимодействуют, и избирательно разрушают старые, функционально неполноценные эритроциты, причем вне зависимости от скорости старения эритроцитов. Они одинаковым образом распознают как старые эритроциты, прошедшие свой нормальный генетически детерминированный жизненный цикл, так же и ускоренно, в результате стресс-воздействия, состарившиеся эритроциты, не зависимо от природы повреждающего фактора, вызвавшего это ускоренное старение. В экспериментах с сывороткой против мембран молодых эритроцитов и в экспериментах по обработке их поверхности протеолитическими ферментами (такая обработка приводит к искусственному старению эритроцитов) мы-показали, что сигналом к распознаванию таких эритроцитов является изменение их антигенной структуры, которое распознается НКАЭ.

Исследование динамики численности НКАЭ в ответ на различные стресс-воздействия: кровопотеря, гипоксия разного уровня, интоксикация показало следующее.

При кровопотере (2% от веса тела) отмечается характерная динамика численности НКАЭ с максимумом на 3 сутки. Этот максимум численности НКАЭ коррелирует с ростом количества ретикулоцитов, направленным на поддержание гомеостаза красной крови.

При кобальтовой интоксикации, являющейся примером действия на организм солей тяжелых металлов (вводили кроликам по 3 мг соли хлористого кобальта на 1 кг массы тела, всего было сделано 26 инъекций), установлено, что в ответ на инъекции кобальта у кроликов наблюдается достоверное увеличение численности НК аутоэритроцитов по отношению к фоновым значением уже через 24 часа после инъекций. После 26 инъекции количество" НЮ уменьшилось до фонового значения.

При кобальтовой интоксикации также как и при кровопотере существует достоверная корреляционная зависимость между числом НК и ретикулоцитами с коэффициентом корреляции г=0,88.

Важнейшим регулятором состояния организма является количество потребляемого им кислорода. В связи с этим исследование влияния гипоксии на организм, и оценка состояния стресса являются наиболее актуальными. Мы исследовали влияние гипоксии двух уровней: 0,5 атм и 0,75 атм как на Vпериферическую кровь, так и на главные органы иммунной системы.

При гипоксии 0,5 атм. в периферической крови отмечается достоверное увеличение НКАЭ (р<0,01) уже через 10 часов после гипоксического воздействия, и к 10 суткам достоверное (Р<0,01) снижение их численности. Пик численности НКАЭ предшествует пику численности ретикулоцитов и полицитемии. Динамика формирования популяций НАЭК в костном мозге и селезенке имеет сходный характер, с максимальным возрастанием в первые 24 часа после данного стресс-воздействия. 4

При исследовании количества НКАЭ в периферической крови при гипоксии меньшего уровня, равной 0,75 атм, оказалось, что имеется два пика, соответствующих росту числа НКАЭ по сравнению с фоном. А именно, наблюдается максимум с небольшой амплитудой (р<0,05) через 3 часа после гипоксического воздействия и максимум с большой амплитудой (р<0.05) на 6 сутки после гипоксического воздействия.

В костном мозге и селезенке через 3 часа наблюдалось уменьшение количества НКАЭ (р<0,05), а затем динамика" численности НКАЭ в костном мозге и селезенке повторяла динамику их численности в периферической крови. \

Показано, что существует ответная реакция организма на разную степень гипоксического воздействия, отражающаяся на динамике формирования популяции нормальных киллеров аутоэритроцитов как в периферической крови,так и в костном мозге и селезенке, причем уровень чувствительности зависит от глубины воздействия. При гипоксической гипоксии, равной 0,5 атм формирование популяции НКАЭ происходит в более ранние сроки, а при меньшем уровне гипоксии, равной 0,75 , атм максимум численности НКАЭ наблюдается в более поздние сроки после-воздействия/115, 116/.

Итак, выявлено достоверное увеличение количества НКАЭ по сравнению с их фоновым значением (физиологическая норма) при всех выше перечисленных стресс-воздействиях. Обнаружено, что абсолютное количество НКАЭ зависит от вида стресс-воздействия и его глубины. Показано, что глубина гипоксического воздействия обуславливает различные динамические характеристики, касающиеся V времени появления максимума численности нормальных киллеров аутологических эритроцитов. При действии гипоксии более высокого уровня (0,5 атм) максимум численности НКАЭ формируется в более ранние сроки по сравнению с временем появления максимума при более щадящем гипоксическом режиме (0,75 атм).

Таким образом, предложен чувствительный метод быстрой количественной оценки возникновения в организме человека и животных стрессовой ситуации в ответ на различные внешние повреждающие факторы. \

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Пономаренко, Людмила Давидовна, 1997 год

ЛИТЕРАТУРА \

1. Одум Ю. Экология. - М.: Мир, 1986. - т.1, 326 е., т.2, 376 с

2. Лисицын Ю.П. Здоровье населения. Теории медицины. - М.: Медицина, 1982. - 328 с.

3. Горбань А.Н., Манчук В.Т., Петушкова Е.В. Динамика корреляций между физиологическими параметрами при адаптации и эколого-эволюционный принцип полифакториальности // Проблемы

экологического мониторинга и моделирования экосистем. - Л.:

\

Гидрометеоиздат, 1987. - Т.10. - С.187-198.

4. Семевский Ф.Н., Семенов С.М. Математическое моделирование экологических процессов. - Л.: Гидрометеоиздат, 1982. - 297 с.

5. Смирнова Е.В. Корреляционная адаптометрия в оценке систем жизнеобеспечения // Проблемы информатизации региона. Труды межрегиональной конференции. - Красноярск, 1995. - С.111-117.

6. Седов K.P., Смирнова Е.В., Кулинский A.B., Полонская М.Г., Большакова Т.Д. Мониторинг состояния антропоэкологического напряжения у коренного населения Крайнего Севера // Проблемы экологического мониторинга и моделирования экосистем. - Санкт-Петербург, 1992. - Т. 14. - С.78-87.

7. Полонская М.Г. Исследование динамики корреляционных связей между физиологическими параметрами на разных стадиях патологического процесса. - Диссертация кандидатская. Красноярск, 1991. - 151 с.

8. Maynard Smith J. Review lectures on senescense. 1. The causes of ageing // Proc. R. Soc. Long., Ser. В. - 1962.-Vol.l57.v-JP.l 15-127.

9. Лэмб M. Биология старения. - M.: Мир, 1980. - 206 с.

10.Фролышс B.B. Старение и функциональная специфика клеток //

Вестник АМН СССР. - 1984. - № 3.- С. 9-14. П.Фролькис В.В. Старение и биологические возможности организма. М.: Наука, 1975. - 272 с.

12.Физиологические механизмы старения. Под редакцией Чеботарева. Д.Ф., Фролькиса В.В - Л.: Наука, 1982. - 228 с.

13.Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М., Медгиз, 1960. -254 с.

14.Селье Г. Неспецифическая резистентность // Патол.физиология и экспериментальная терапия. -1961. -Т. 5, № 3. - С. 3-15, № 4. -С. 312.

15.Селье Г. На уровне целого организма. М., 1972. - 1^1 с.

lö.Selye Н. The stress of life. Revised edition. - N.Y. - London - Toronto.

- 1976.- 225 p.

17.Слоним А. Д. Физиологическая адаптация и поддержание вегетативного гомеостаза // Физиология человека. 1982, т.8., No 3, с.355-361.

18.Казначеев В.П. Современные аспекты адаптации. - Н.: Наука, 1980.

- 190 с.

19.Панин JI.E.. Биохимические механизмы стресса.^.: Наука, 1983, 232 с.

20.Хочачка П., Сомеро Дж. Биохимическая адаптация. М.: Мир, 1988. -568 с

21.Анохин П.К. Очерки по физиологии фукциональных систем. М.: Медицина, 1975. - 446 с.

22.Анохин П.К. Узловые вопросы теории функциональных систем. Москва. - Медицина, 1980. -196 с.

23.Экологическая физиология человека. Адаптация человека к различным климато-географическим условиям. Л.: Наука, 1980. -под. Редакцией Василевского Н.Н., 549 с.

24.Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика. М.: Наука., 1981.

- 279 с.

V.

25.Воложин А.И., Субботин Ю.К.. Адаптация и компенсация универсальный биологический механизм приспособления. М.: Медицина, 1987.-. 176 с.

26.Воложин А.И., Субботин Ю.К., Чикин С.Я.. Путь к здоровью. -Москва. Знание, 1990. - 160 с.

27.Гомеостаз. Под редакцией Горизонтова П. Д.. М.: Медицина, 1981.

- 576 с.

28.Фримель X., Брок И. Основы иммунологии. М.: Мир, 1986. - 254 с.

29.Иммунология. Под редакцией Пола У. - 1987. - томЛ. - 476 с.

30.John Ding-E Young and Lanvill A. Cohn. Cell-mediated killing: a common mechanism? // Cell.- 1986.- Vol.46.- P.641-642.

31.Lachman Peter J. A common form of killing // Nature.- 1986.- Vol.321, No 6070.- P.560.

32.Rooney C.M., Minro A.J. NK cells can recognize asialylated autologous lymphocytes and ABO-mismatched lymphocytes // Immunology. - 1984. - Vol.51, No 1. - P.183-199.

33.Wigzell Hans, Orn Anders, Gidlund Magnus, Axbei;g Inger, Ramstedt

\

Urban. Regulation of natural killer cell activity // Fundam. Mech.Human-Cancek Immunol. Proc 1. Int. Conf., Galveston, Tex., N.Y. - 1981.-' P.161-166.

34.Herberman Ronald B. Natural killer cells and their possible relevance to transplantation biology // Transplantation.- 1982.- Vol.34, No 1, P. 1-7.

35.Helberman Ronald В. Natural killer cells and their possible roles in resistance against disease // Clin. Immunol. Rev. - 1981. - Vol.1, No 1. -P. 1-65.

36.Merrill Stephen J. A model of the role of natural killer cells in immune surveillance // Immunology. - 1983. - Vol.17, No 2. - P. 153-162.

37.Gantam S.C., Beckman K., Battisto J.R. Natural cytotoxic T cell (NCTC) that differ from natural killer cytotoxic (NK) cells are present in Peyer's patches of mice // Cell Immunol. - 1986. - Vol.101, No 2. -P.463-475.

38.Mangan K.F., Hartnett M.E., Matis S.A., Winkelstein A., Abo T. Natural killer cells supress human erythroid stem cell proliferation in vitro // Blood.-1984.-Vol.63,No 2.-P.260-269.

39.Newman Ronald A., Warner John F., Deunert Gunther. NK recognition of target structures: is the transferrin receptor the NK target structure? // J. Immunol. - 1984. -Vol.133, No 4. - P.1841-1845.

40.Kawaguchi Yoshinori, Kittaka Eishi, Tanaka Yoshito, Tanake Takeo, Usui Tomafusa. Ultrastractural study of human natural killrt (NK) cell. //-Hiroshima J. Med. Sci. - 1982. - Vol.31, No 1. - P.31-35.

41.Шахматов B.A., Ванько JI.B., Черников В.П., Б.Б. Фукс. Ультраструктура и взаимодействие нормальных киллеров из крови человека и чувствительных к ним клеток-мишеней // Архив анатомии гистологии и эмбриологии. - 1982. - Том.83, № 12. - С.82-86.

42.Blaumont T.J., Roder J.L., Elliott В.Е., Kerbel R.S., Deunis J.W., Kasai

V

M., Okumura K. A comparative analysis of cell surface markers on murine NK cells and CTL target-effector conjugates // Scand J. Immunol. - 1982. - Vol.16, No 2. - P.123-133.

43 Abo Torn, Miller Charles F., Gartland G. Larry, Balch Charles M. Differentiation studies of human natural killer cells irb lymphoid tissue from fetal to adult life // J. Exp. Med. - 1983. - Vol.157, No 1. - P.273-284.

44.Charreire J., Bach J. Binding of autologous erythrocytes to immature T-cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1975. - Vol.72, No 8. - P.3201-3205.

45.Charreire J., Bach J.F. Studies on mouse auto-reactive cells . Cytotoxicity exerted by mouse lymphocytes against syngenic erythrocytes // Scand. J. Immunol. - 1982. - Vol.16. - РЛ-8.

46.James K. and Ritchic A.W.S.Do natural killer cells regulate B-celf activity // Immunology Today. - 1984. - Vol.5, No 7. - P.193-194.

47.Petranyi Gy. G., Benczur M., Zaskai Т., Batory G., Onody C., Gyodi E., Pocsik E. Natural killer cells in man: genetic and other factors regulating their activity // Progr. Immunol.-1984. - Vol.5. - P.1169-1180.

48.Lewis L. Lanier., Joseph H. Philips, John Hackett, Michell Tutt and Vinay Kumar. Natural killer cells: definition of a cell type rather than a

V

function // The Journal of immunology. - 1986. - Vol.137, No 9. -P.2735-2739.

49.Хаитов P.M., Маджидов A.B. Естественные киллеры, феноменология // Успехи биологических наук.- 1984. - Вып. 1. -С.3-19.

5 О.Ломакин М.С., Майский И.Н. NK - клетки как фактор иммунологического надзора // Успехи биологических наук. - 1985. -Том 99, вып. 2.- С. 249-263.

51.Малыгин A.M. Натуральные киллеры и их физиологическое значение // Цитология. - 1985. - Том.27, № 10. - С.1091-1100.

52.Белокрылов Г.А. Thy-1 антиген и его функции // Успехи биологических наук. - 1986. - Том 102, № 1(4). - С.\39-50.

53.Suranne Pout. Thy-1, a lymphoid cell subset marker capable of delivering an activation signal to mouse T lymphocytes // Biochimie.-1987.-Vol.69.-P.315-320.

54.Golub E. Immunological markers of human mononuclear cells / J. Exp.Med. - 1972. - Vol.136, No 2. - P.369-374.

55.Bonewald L.,Wang A.C., Wang I.Y., Balch C.M., Ades E.Antigenic determinants shared by the human Thy-1 and human Jg G // Jmmunobiology. - 1984. - Vol.166, No 4-5. - P.428-438.

56.Tse A.G.D., Barclay A.N., .Watts A, Williams A.E. A glycophospholipid tail at the carboxyl terminus of the Thy-1 glycoprotein of neurons and thymocytes // Science.-1985. - Vol.230, No 4729.-P. 1003-1009.

57.Levy Jose, Rabinowitz Ruth, Schlesinger Michael. Implication of the Thy-1 antigen on mouse thymus cells in the recognition of self structures//Thymus.- 1985.

58.Rowley Donald A., Shah Prakash D.The immunological meaning of Thy-1 negative NK cells // Immunol. Today. - 1986.4Vol.7, No 7-8. -P.196-198.

59.Корнева E.A. Нервная система и иммунитет // Вестник АМН СССР.-1988. - Том 11. - С. 76-82.

60.Feng S.H., Woodley С., Chao L., Wang A.C. Expression of the Thy-1 gene in human T lymphoid cell lines // Immunol.Leff. - 1988. - Vol.19, No 2.-P. 109-113.

61 .Mansour M.H., Negm H.I. and Cooper E.L. Thy-1 evolution // Developmental and comparative immunology. - 1987. - Vol.11. - P.3-

15.

62.Иммунология..Под редакцией Пола У. Москва.Мир., 1988. - Том 2. - 456 с.

63.Kimber I. Natural killer cells // Med.Lab.Sci. - 1985. - Vol.42, No 1. -

V

P.60-77.

64.Страйер Л. Биохимия. M., «Мир», 1984. - Т. 1. - 229 с.

65.Кау М.М.В. Localization of senescent cell antigenon band 3 // Proc.Nat. Acad. Sci. USA. Biol. Sci.. - 1984. - Vol. 81, No 1. - P 57535757.

66.Кау M.M. Mechanism of removal of senescent cells by human macrophages in situ // Proc.Natl. Acad. Sci. U.S. - 1975. - Vol.72. -P.3521-3525.

67.Kay M.M.B., Goodman J.R.Jg G antibodies do not bind to band 3 in intact erythrocytes: enzymatic treatment of cells is required for Ig G binding // Biomed. Biochim. Acta. - 1984. - Vol. 43, No 6. - P. 841-846.

68.Шашкин A.B., Терсков И.А. Продукция и деструкция эритроцитов в организме. Наука, Сибирское отделение. - 1986, 89 с.

69.Harris J.W., Kellermeyer R.W. The red cell. - N.Y., 1970, 795 p.

70.Горизонтов П.Д., Федотова М.И. К вопросу о ранней реакции лимфоидной ткани и костного мозга на кровопускание // Пат. Физиология. - 1971. - № 6. - С. 69-74.

\

71.Ужанский Я.Г. Физиологические механизмы регенерации крови. -М., Медицина, 1968. - 264 с.

\

72.Sushil K. Jain and Paul Hochstein. Polymerization of membrane-components in aging red blood cells // Blood. - 1980.-Vol.92, No 1. -P,247-254.

73.Shunozuka T. Changes in human red blood cells during aging in vivo //Am. J. Med.. 1994. - Vol.43 (3). P. 155-163.

74.Chiarantini L, Antonelli A., Rossi L., Fratermale A., Magnani M. Red blood cells phagocytosis following hexokinase inactivation // Blood. -1994.-Vol. 12(3).-P. 217-220.

V

75.Stephen B. Shohet, Paul M. Ness. Hemolitic anemias7/ Symposium on advances in hematology. - 1976. - Vol. 60, No 5. - P.913.

76.Freedman J.Membrane-bound immunoglobulins and complement components on young and old red cells // Transfusion. - 1984. - No 6. P.477-481.

77.Walter H., Krob E.J, Tamblyn Ch.H. and Seaman G.V.F. Surface alterations of erythrocytes with cell age: rat red cell is not a model for human red cell // Bich. And Bioph. Res. Com. - 1980. - Vol.97, No 1,-P.107-114. vx

78.Clark M.R, Shohet S.B. Red cell senescence// Clin. Haematol. - 1985. Vol.14, No 1. - P.223-258.

79.Alderman E.M, Fudenberg H.H. and Lovins R.E. Isolation and characterization of an age-related antigen present on senescent human red blood cells // Blood. - 1981. - Vol.56, No 2. - P.341-350.

80.Haebhuber K.J. , N. Zimmermann, H. Ochring, D. Stibenz and W. Linss. Red blood cell aging: membrane skeleton alteration and Ig G receptor expression. // Folia Histochem cytobiol. - 1987. - Vol.25, No 2. - P.137-142. X

81 .Abe Hiroko, Orita Machiko, Arichi Shigeru. Erythrocyte deformability in aging // Mech Ageing and Dev. - 1984. - Vol.27, No 3. - P.383-390.

82.Ли B.C., Халилов Э.М., Сабурова В.И., Горбатенкова Е.А. Азизова О.А., Арчаков А.И. Липидный состав и структурно-функциональные свойства мембран эритроцитов разного возраста. // Вопросы медицинской химии. 1982. - Том 28, № 6. - С. 66-71.

83.Bartosz G., Michalak W., Gong Ко R. Ageing of the erythrocyte. Free amino acid content // Experientia. - 1982. - Vol.38, No 8. - P.939-940.

84.Schroit. Alan J., John W. Madsen and Iutaka Tanaka. In vivo recognition and clearance of red blood cells containing phosphatidilserin in their plasma membranes // J. Biol. Chem. - 1985. \Vol.260, No 8. -P.5131-5138.

85.Philip S. Low, Stephen M. Waugh, Karen Zinke, Detlev Drenck hahn. The role of hemoglobin denaturation and band 3 clustering red blood cell aging. // Science. - 1985. - Vol.227, No 4686. - P.531-533.

86.Phillips J., Dodge J.T., Howe C. The effect of aging of human red cells in vivo on their fatty acid composition.. // Lapids.-1969. - Vol.4,No 6. -P.544-549.

87.Kadlubowsky M., Harris J.P. The appearance of a protein in the human

\

erythrocytes membrane during aging. // Febs Letters. - 1974. - Vol.47,. No 2. - P.252-254.

88.Usami S., Chein S., Cregersen M.I. Viscometric behavior of young and aged erythrocytes. // Ther. Clin Hemorhed., Berlin. - 1971. - P.266-270.

89.Rifkind J.M., Abugo O.O. Alterations in erythrocytes deformability under hypoxia: implications for impared oxygen transport // Adv. Exp. Med. Bol. - 1994. - Vol.351. - P.345-351.

90.Conrad MJ, Penniston J.T. Surface protein of erythrocyte membrane effect of aging // Vox.Sang. - 1974. - Vol.26, No 1. - P.l-13.

91.Nash G.B, .Parmor J. and Reid M.E. Effects of difficienciens of glycophorins С and D on the physical properties of red cells. // British Journal of Haematology.-1990.-Vol.76.- P. 282-287. \

92.1ngraham J, Bussard A. Application of a localized hemolizin reaction for specific of individual antibody-forming cells detection. // J.Exptl. Med., 1964. - Vol. 119, № 4. - P.667-685.

93.Cunningham A. J. A method of increase sensitivity for detection single antibody-forming cells. // Nature, 1965. - Vol. 207, № 4. - P. 1106-1107.

94.Клемпарская H.H. Исследование динамики аутоиммунных процессов путем выявления бляшкообразующих клеток. // Ж. микроб, эпид. и иммун. - 1969, № 8. - С.18-21. s

\

95.Roseman J.M, Leserman L.D, Fitch F.W, Rowley D.A. Do antibody -forming cells circulate in the blood? // J. Immunol, 1969, vol. 102, № 4. - P.1002-1007.

96.Fabia F, Gattengno L, Gluckman J.C, Conillot P. Effects of ageing surface sialic acid and glycopeptides of erythrocytes on auto-rosettes in man // .Clin, and Exptl. Immunol. - 1975. - Vol.37, No2. - P.255-301.

97.Краскина H.A. Антилимфоцитарные препараты как инструмент иммунологических исследований. - В кн.: Современные

V

иммунологические методы. - М, 1976, с. 171-180. 4

98.Чередеев А.Н. Количественная и функциональная характеристика Т и В систем иммунитета у человека. - В кн.: Общие вопросы патологии. - М, 1976, т. 4, с. 124- 160.21.

99.Lay W.H, Nussenzweig V. Receptor for complement on leucocytes // J. Exptl. Med, 1968. - Vol. 128, № 5. - P.991-1007.

100.Рождественская М.А. Определение гемоглобина в плазме консервированной крови. - В кн. : Актуальные вопросы переливания крови. - М.: Медгиз, 1955, в.4 , с. 55-57.

101.Пустыльник Е.И. Статистические методы анализа и обработки наблюдений. Москва: Наука, 1968. - 288 с.

102.Абрамов М.Г. Гематологический атлас. -М.: Медицина, 1985. -344 с.

\

ЮЗ.Зарецкая Ю.Н.. Клиническая иммуногенетика. Москва:-Медицина, 1983.- 298 с.

104.Пухова Я.И. Аутоиммунный клеточный механизм физиологического разрушения эритроцитов. Новосибирск. -.Наука, 1979. - 136с.

105.Пухова Я.И. Клеточный нефагоцитарный механизм физиологического разрушения эритроцитов // Диссертация докторская. - 1981.- Красноярск. - 273с.

V

Юб.Пухова Я.И., Гительзон И.И., Терсков И.А., чАникина А.Я., Пономаренко Л.Д. Торможение эритропоэза при угнетении феномена аутоиммунного бляшкообразования // Доклады Академии наук СССР. - 1975. - Том 225, № 4. - С.955-957.

Ю7.Пухова Я.И., Терсков И.А., Пономаренко Л.Д., Аникина А.Я. Механизм взаимодействия АБОК с эритроцитами в аутоиммунном гемолизе in vitro.// Механизмы регуляции в системе крови. -Красноярск, 1978. - С.72-73.

Ю8.Трахтенберг И.М., Тимофеевская A.A., Кв^тковская И.Я.. Методы изучения хронического действия химических и биологических загрязните лей.Рига. Зинатне, 1987.- 172 с.

109.Голиков С.Н, Саноцкий И.В,Тиунов JI.A. Об^цие механизмы токсического действия. Москва. Медицин, 1986. - 280 с.

11 O.Gordon-Smith E.G. Drug-Induced Oxidative Haemolysis // Clinic in Haematology. - 1980. - Vol. 9, No 3. - P.557-586.

111.Munday R, Smith B.L, Fowke E.A Haemolytic activity and nephrotoxicity of 2-hydroxy-1,4-naphtoquinone in rats //. J. Appl. Toxicol. - 1991. - Vol. 11, No 2. - P.85-90.

112.Kaleagasioglu F, Berner M.R, Kolar G.F. Acute oral toxicity in rats of 3,7-bis-( 4-trifluoromethylphenyl) -1,5,3,7-dioxadiazocane compared with 3,7-bis-(3-trifluoromethylphenyl) -1,5,3,7-dioxadiazocane and N,N -oxydimethylenebis (2-trifluoromethylaniline) // Toxicology. -1995. -Vol.97 (1-3).-P.123-131.

113.Wang S.W,Chu C.Y, Hsu J.D, Wang C.J. Haemotoxic effect of phenylurea herbicides in rats, role of haemoglobin-adduct formation in splenic toxicity // Food-Chem-Toxicol. 1993.- Vol.31(4). - P.285-295.

114.Пономаренко JI. Д. Кинетические характеристики при фенилгидразиновой анемии у мышей // В сборнике трудов VII Всероссийского симпозиума "Коррекция \омеостаза". Красноярск, 1996.

115.Пухова Я.И, Гительзон И.И. ,Терсков И.А,Аникина А .Я, Пономаренко Л.Д. Кислородная зависимость кинетики формирования популяции аутоиммунных бляшкообразующих клеток в крови, костном мозге и селезенке // Известия Сибирского отделения Академии наук СССР. -1976. - Серия биологических наук. - Выпуск 1. - С.145-151.

\

116.Пономаренко Л.Д. Ответная реакция организма на гипоксию как фактор стресс-воздействия // Проблемы экологии человека на

Севере. Материалы научной конференции. - 1996. - С.43.

\

117.Luner S.J., Szklarek D., Knox R.J. Red cell charge is not a function of cell age //Nature. - 1977. - Vol. 269.-P. 719-721.

118.Nordt F.J. Alteration in surface charge density versus changes in surface charge topography in aging red blood cells.// Blud. - 1980. - Vol. 40. - P. 240-274.

119.Alderman E.M., Fudenbery H., Lovins R.E. Binding of immunoglobulin clasess to subpopulation of human red cell separation by density-gradient centrifugat // Blood. -1980. - Vol. 55. - P. 817-823.

120.Gray L.S., Kleeman J.E., Masouredis S.P. Differential binding of IgG anti - D and IgG autoantibodies to reticulocytes and red blood cells. // Brit. J. Haematol. - 1983. - Vol. 55. - P. 335-346.

121.Inoue M., Moti M., Seno S., Utsumi K., Iasuda T. Structural difference in site on surface membrane of mature and immature erythrocytes. // Nature. - 1974. - Vol. 250. - P.247-248.

122.Borsook K.H., Pather K., Fattric. Differential immune lysis of erythroblasts. //Nature. - 1969. - Vol. 221. - P. 1261-1262.

123.Minio F., Howe C., Hsu K.S., Rifkind R.A. Antigen dencity on

\

differentiating erythroid cells // Nature. New Biology. - 1972. - Vol.-237.-P. 187- 188.

124.Skutelsky E., Marikovsky Y., Danon D. Immunoferritin analysis of membrane antigen density: a) Young and old human blood cells.b) Development erythroid cells and extruded erythroid nuclei // Eur. J. Immunol. - 1974. - No 7. - P.512-518.

125.Поэтова В.Т. Изменения в качественном составе эритроцитов, продуцируемых при напряженном эритропоэзе // Диссертация кандидатская. - Красноярск. - 1965. - 213 с.

126.Fabia F, Gattengno L, Gluckman J.C, Connilot P. Effects of ageing surface sialic acid and glycopeptides of erythrocytes on auto-rosettes in man // Clin. A. Exptl. Immunol. - 1975. - Vol. 37, No 2>- P. 255-310.

127.Гительзон И.И, Терсков И.А. О механизме гемолиза // В кн.; Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов. -Красноярск - 1961. - С. 3-10.

128.Пухова Я.И, Терсков И.А, Пономаренко Л.Д, Лукьянова Е.Ю. Распознавание эритроцитов различных возрастных групп иммунокомпетентными аутологическими лимфоцитами-киллерами // Гуморальная регуляция эритропоэза. - Красноярск, 1982. - С.37-41.

129.Пухова Я.И, Терсков И.А,Пономаренко Л.Д. Нормальные" лимфоциты-киллеры в механизме избирательного физиологического распознавания и деструкции старых эритроцитов // Доклады Академии наук СССР. - 1984. - Том.277, № 2. - С.509-512.

130.Пономаренко Л.Д. Оценка состояния стресса, обусловленного различными повреждающими факторами // Сборник тезисов докладов Всесоюзной научно-практической конференции

V

«Проблемы химико-лесного комплекса». - 1997. -Красноярск. -.С.