Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Владыченская, Елизавета Александровна

• Владыченская, Елизавета Александровна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Владыченская, Елизавета Александровна

Список сокращений.

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1 Форменные элементы крови - краткая характеристика.

2.2. Гомоцистеин и гомоцистеиновая кислота.

2.3. Глутаматные рецепторы в нервной и иммунной системах.

2.3.1. Глутаматные рецепторы в нейронах.

2.3.2. Глутаматные рецепторы в лимфоцитах.

2.4. Роль свободных радикалов в нейронах и клетках крови.

2.4.1. Источники свободных радикалов в нервных клетках.

2.4.2. Источники свободных радикалов в лимфоцитах.

A) НАДФН-оксидаза - источник АФК в лимфоцитах.

Б) Участие РКС и PI-3-киназы в свободнорадикальной продукции.

B) NO-синтаза - источник радикала в лимфоцитах.

3. Материалы и методы.

3.1.Объекты исследования.

3.1.1. Выделение лимфоцитов.

3.1.2. Подсчет клеток в камере Горяева.

3.1.3. Первичная культура периферических лимфоцитов.

3.2 Методы исследования.

3.2.1. Использование проточной цитометрии для характеристики клеток.

3.2.2. Использование различных флуоресцентных зондов для характеристики клеток.

A) Измерение уровня свободных радикалов.

Б) Измерение количества ионизированного кальция.

B) Окраска лимфоцитов с помощью антител.

Г) Определение доли мертвых клеток.

Д) Связывание цитоплазматического кальция.

Е) Определение уровня свободных радикалов в митохондриях.

3.2.2. Количественное определение IFN-y и TNF-a с помощью иммуноферментого анализа.

3.2.3 Обработка результатов.

4. Результаты.

4.1. Характеристика действия ГЦ и ГЦК на лимфоциты.

4.2. Обнаружение функционально активных NMDA-рецепторов на мембране лимфоцитов периферической крови крыс.

4.3. Исследование действия ГЦК на NMDA-рецепторы лимфоцитов.

4.4. Исследование роли РКС и PI-3 киназы в активации лимфоцитов ГЦК.

4.5. Источники свободных радикалов при активации лимфоцитов ГЦК.

4.6. Влияние ГЦ и ГЦК на продукцию цитокинов лимфоцитами крыс.

5. Обсуждение результатов.

6. Выводы.

7. Благодарности.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование действия гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на лимфоциты»

Гомоцистеин (ГЦ) и различные продукты его окисления, в частности гомоцистеиновая кислота (ГЦК), являются факторами риска при возникновении многих сердечно-сосудистых и нейродегенеративных заболеваний. Так, известно, что гипергомоцистеинемия (состояние, характеризующееся повышенной концентрацией ГЦ и продуктов его метаболизма в крови) может приводить к развитию атеросклероза [Refsum et al., 1998; Thambyrajah et al., 2000], к инфаркту миокарда [Stampfer et al., 1992], инсульту [Perry et al., 1995] и болезни Альцгеймера [Seshadri et al., 2002].

ГЦ, находясь в крови в избыточной концентрации, оказывает патологическое воздействие на эндотелиальные клетки, клетки гладкой мускулатуры сосудов, а также на клетки крови.

Как известно, глутамат является основным нейромедиатором в центральной нервной системе, обеспечивающим передачу электрического сигнала в синапсах, которая реализуется через активацию глутаматных рецепторов. В последнее время глутаматные рецепторы вызывают особый интерес у исследователей в связи с тем, что эти рецепторы, ранее считающиеся структурами, присущими, в основном, нервной ткани, были обнаружены и в других тканях, в частности в лимфоцитах [Ganor et al., 2003; Boldyrev et al., 2004; Болдырев и соавт., 2005; Pacheco et al., 2004; Mashkina et al., 2007].

Недавно в нашей лаборатории методом ОТ-ПЦР было продемонстрировано наличие мРНК, необходимой для синтеза глутаматных рецепторов в лимфоцитах грызунов. Кроме этого, было обнаружено, что лимфоциты мыши и человека способны отвечать на добавление NMDA ростом свободных радикалов, а также ростом уровня кальция в этих клетках [Тунева и соавт., 2003; Boldyrev et al., 2004;

Болдырев и соавт., 2005]. В последнее время обнаружена способность гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты, которые могут рассматриваться как структурные аналоги глутамата, взаимодействовать с глутаматными рецепторами в нейронах [Zieminska et al., 2003; Gortz et al., 2004; Boldyrev et al., 2004].

Гомоцистеин, находясь в кровотоке, способен взаимодействовать с различными клетками крови. К настоящему времени в литературе детально не описано влияние ГЦ и ГЦК на лимфоциты, хотя известно о патологичсеких изменениях в деятельности сердечно-сосудистой системы в условиях гипергомоцистеинемии.

В связи с этим целью наших исследований стало изучение действия ГЦ и ГЦК на лимфоциты, которое предположительно может реализоваться через глутаматные рецепторы, В нашей работе мы сфокусировали свое внимание на влиянии ГЦ и ГЦК на продукцию свободных радикалов в этих клетках. Уровень свободных радикалов в клетках крови является важной характеристикой метаболического состояния клетки и его изменение служит сигнальным механизмом для запуска различных клеточных процессов, таких как дифференцировка, пролиферация, апоптоз. В качестве объекта исследования мы использовали лимфоциты крысы.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Владыченская, Елизавета Александровна

6. выводы

1. Методом иммуноцитохимического анализа выявлены ионотропные рецепторы NMDA-класса на мембране лимфоцитов периферической крови крыс.

2. ГЦ и ГЦК вызывают увеличение продукции свободных радикалов в лимфоцитах крысы через активацию NMDA-рецепторов.

3. Охарактеризованы концентрационная и временная зависимости действия ГЦ и ГЦК. Показано, что увеличению внутриклеточного уровня свободных радикалов в лимфоцитах предшествует увеличение в них уровня ионизированного кальция.

4. В реализации эффекта ГЦК участвуют РКС, а также НАДФН-оксидаза и NO-синтаза.

5. Активация лимфоцитов в присутствии ГЦ и ГЦК приводит к усилению продукции IFN-y и TNF-a.

7. БЛАГОДАРНОСТИ

Я выражаю глубокую благодарность Александру Александровичу Болдыреву за качественное и ответственное научное руководство над диссертацией. Я также благодарю к.б.н. Тюлину Ольгу Владимировну и к.б.н. Булыгину Елена Романовну за неоценимую помощь в работе и поддержку. Я благодарна всем сотрудникам лаборатории нейрохимии ГУ Научного Центра Неврологии РАМН, в особенности Сергею Львовичу Стволинскому, за всестороннюю помощь и ценные рекомендации.

Выражаю особую благодарность профессору Широ Урано, и всем сотрудникам его лаборатории в Shibaura Institute of Technology (Токио, Япония), в которой была выполнена часть экспериментов по исследованию влияния гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на синтез цитокинов лимфоцитами.

И в заключении мне хотелось бы выразить благодарность всему коллективу лаборатории Болдырева А.А. на кафедре биохимии МГУ имени М.В. Ломоносова, в которой я выполнила свою курсовую, дипломную и диссертационную работы за дружескую и теплую атмосферу, понимание и поддержку.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Владыченская, Елизавета Александровна, 2010 год

1. Алейникова Т.Л., Авдеева JI.B., Андрианова Л.Е. и соавт. (2004) Биохимия Под редакцией Е.С. Северина, Изд-во ГЭОТАР-МЕД, Москва. С. 260-261, 665-680

2. Березов Т.Т, Коровкин Б.Ф. (2002) Биологическая химия, Изд-во «Медицина», Москва. С. 296-297, 568, 599-605.

3. Болдырев А.А. (2009) Молекулярные механизмы токсичности гомоцистеина. Биохимия, 74(6), 725-736.

4. Болдырев А.А., Тунева Е.О. (2005) N-MeTmi-D-аспартат усиливает образование активных форм кислорода и активирует каспазу-3 в лимфоцитах мыши. Биол. мембраны, 22, 142-145.

5. Булыгина Е.Р., Карпова JI.B., Степанова М.С., Болдырев А.А. Экспериментальная нейрохимия (практические работы). Учебное пособие, электронная версия. 20, 23-26.

6. Галактионов В.Г. (2000) Иммунохимия, Изд-во РИЦ МДК, Москва. С. 134-139.

7. Калмыков Ю.М., Кузнецова Н.Н., Мирошниченко И.И., Птицына С.Н. (2009) Гомоцистеин предиктор патологических изменений в организме человека. Рос. Мед. Ж., 17, 224-228.

8. Костанян И. А., Наволоцкая Е. В., Нуриева Р. И., Завьялов В. П., Липкин В. М. (1997) Взаимодействие L-глутаминовой кислоты с Т-лимфоцитами человека. Биоорг. химия, 23, 805-808.

9. Марри Р., Греннер Д., Майес П., Родуэлл В. (1993) Биохимия человека, Изд-во Мир, Москва, 304-305, 335-336.

10. Maxpo A.B., Булыгина E.P., Болдырев А.А. (2007) Влияние гомоцистеина и гомоцистеиновой кислоты на гранулярные клетки мозжечка. Нейрохимия, 1(2), 127-132.

11. Николлс Дж.Г., Мартин А.Р., Валлас Б.Дж., Фукс П. А. (2003) От нейрона к мозгу. Изд-во «Едиториал УРСС», Москва. С. 65, 66, 186, 190, 297.

12. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. (2000) Иммунология. М., Мир.

13. Тунева Е.О., Бычкова О.Н., Болдырев А.А. (2003) Эффект NMDA на продукцию активных форм кислорода лимфоцитами человека. Бюлл. Эксп. Биол. Мед., 136(2), 159-166.

14. Alam Z., Coombes N., Waring R.H., Williams A.C., Steventon G.B. (1998) Plasma levels of neuroexcitatory amino acids in patients with migraine or tension headache. J. Neurol. Sci., 156(1), 102-106.

15. Alderton W.K., Cooper С. E., Knowles R. G. (2001) Nitric oxide synthases: structure, function and inhibition Biochem. J., 357, 593-615.

16. Baier G. (2007) PKC isotype functions in T lymphocytes. Ernst. Scher. Found Symp. Proc., 3, 29-41.

17. Berman R.S., Martin W. (1993) Arterial endothelial barrier dysfunction: actions of homocysteine and the hypoxanthine-xanthine oxidase free radical generating system. Br. J. Pharmacol., 108, 920-926.

18. Berridge M.J., Bootman M.D., Lipp P. (1998) Calcium -a life and death signal. Nature, 395, 645-648.

19. Boldyrev A.A., Kazey V.I., Leinsoo T.A., Mashkina A.P., Tyulina O.V., Johnson P., Tuneva J.O., Chittur S., Carpenter D.O. (2004) Rodent lymphocytes express functionally active glutamate receptors. Biochem. Biophys. Res. Commun., 324, 133139.

20. Boldyrev A.A. Homocysteinic acid causes oxidative stress in lymphocytes by potentiating toxic effect of NMDA. (2005) Bull. Exp. Biol. Med., 140(1), 33-37.

21. Brennan A.M., Suh S.W, Won S.J., Narasimhan P, Kauppinen T.M., Lee H., Edling Y, Chan P.H., Swanson |R.A. (2009) NADPH oxidase is the primary source of superoxide induced by NMDA receptor activation. Nat. Neurosci., 12(7), 857-863.

22. Burdon R.H. (1996) Control of cell proliferation by reactive oxygen species. Biochem. Soc. Trans., 24, 1028-1032.

23. Chan S.L., Lee M.C., Tan K.O., Yang L.K., Lee A.S., Flotow H., Fu N.Y., Butler M.S., Soejarto D.D., Buss A.D., Yu V.C. (2003) Identification of chelerythrine as an inhibitor of BclXL function. J. Biol. Chem, 278(23), 20453-20456.

24. Chao M.D., Chen I.S., Cheng J.T. (1998) Inhibition of protein kinase С translocation from cytosol to membrane by chelerythrine. Planta Med., 64(7), 662-663.

25. Choi D.W. (1994) Calcium and excitoxic neuronal injury. Ann. N.-Y. Acad. Sci., 747, 162-171.

26. Clarke R., Smith A.D., Jobst K.A., Refsum H., Sutton L., Ueland P.M. (1998) Folate, vitamin В12, and serum total homocysteine levels in confirmed Alzheimer disease. Arch. Neurol., 55(11), 1449-1455.

27. Collingridge G.L., Randall A.D., Davies C.H., Alford S. (1992) The synaptic activation of NMDA receptors and Ca signaling in neurons. Ciba Found Symp., 164, 162-171, 172-175.

28. Collins R.C., Dobkin B.H., Choi D.W. (1989) Selective vulnerability of the brain: new insights into the pathophysiology of stroke. Ann. Intern. Med., 110(12), 992-1000.

29. Cuenod M., Do K.Q., Streit P. (1990) Homocysteic acid as an endogenous excitatory amino acid. Trends Pharmacol. Sci.,11(12), 477-478.

30. Culcasi M., Lafon-Cazal M., Pietri S., Bockaert J. (1994)

31. Glutamate receptors induce a burst of superoxide via activation of nitric oxide synthase in arginine-depleted neurons. J. Biol. Chem., 269, 12589-12593.

32. Danysz W., Parsons C.G. (1998) Glycine and N-methyl-D-aspartate receptors: physiological significance and possible therapeutic applications. Pharmacol. Rev., 50(4), 597-664.

33. Davies S.P., Reddy H., Caivano M., Cohen P. (2000) Specificity and mechanism of action of some commonly used protein kinase inhibitors. Biochem. J., 351, 95-105.

34. Domagala T.B., Undas A., Libura M., Szczeklik A. (1998) Pathogenesis of vascular disease in hyperhomocysteinaemia. J. Cardiovasc. Risk, 5, 239-247.

35. Duan W., Ladenheim В., Cutler R.G., Kruman I.I., Cadet J.L., Mattson M.P. (2002) Dietary foliate deficiency and elevated homocysteine levels endanger dopaminergic neurons in models of Parkinson's disease. J. Neurochem., 80, 101-110.

36. Esaki Т., Hayashi Т., Asai Y., Kumar T.N., Капо H., Muto E., Iguchi A. (1997) Expression of inducible nitric oxide synthase in T lymphocytes and macrophages in vessels with advanced atherosclerosis. Heart Vessels, 12, 89-92.

37. Fenech M. (1999) Micronucleus frequency in human lymphocytes is related to plasma vitamin В12 and homocysteine. Mutat. Res., 16, 428, 299-304.

38. Gomperts В., Kramer I., Tathan P. (2003) Signal transduction, Elsevier/Academic Press, 119-125, 198-205.

39. Gortz P., Hoinke A., Fleischer W., Otto F., Schwahn В., Wendel U., Siebler M.J. (2004) Implications for hyperhomocysteinemia: not homocysteine but its oxidized forms strongly inhibit neuronal network activity. Neurol. Sci., 218, 109-114.

40. Gosh A., Greenderg M.E. (1995) Calcium signaling in neurons: molecular mechanisms and cellular consequences. Science, 268, 239-247.

41. Grimble RF. (2006) The effects of sulfur amino acid intake on immune function in humans. J. Nutr., 136, 1660S-1665S.

42. Halliwell В., Whiteman M. (2004) Measuring reactive species and oxidative damage in vivo and in cell culture: how should you do it and what do the results mean? Br. J. Pharm., 142, 231-255.

43. Hardingham G.E. (2009) Coupling of the NMDA receptor to neuroprotective and neurodestructive events. Biochem. Soc. Trans., 37, 1147-1160.

44. Harriague J., Bismuth G. (2002) Imaging antigen-induced PI3K activation in T cells. Nat. Immunol., 3(11), 1090-1096.

45. Hayashi K, Altman A. (2007) Protein kinase С theta PKCtheta): a key player in T cell life and death. Pharmacol. Res., 55(6), 537-544.

46. Herbert J.M., Augereau J.M., Gleye J., Maffrand J.P. (1990) Chelerythrine is a potent and specific inhibitor of protein kinase C. Biochem. Biophys. Res. Commun., 172(3), 993-999.

47. Hildeman D. A., Mitchell Т., Teague Т.К., Henson P., Day B.J., Kappler J., Marrack P.C. (1999) Reactive oxygen species regulate activation-induced T cell apoptosis. Immunity, 10, 735-744.

48. Ignarro L.J., Gruetter C.A. (1980) Requirement of thiols for activation of coronary arterial guanylate cyclase by glyceryltrinitrate and sodium nitrite: possible involvement of S-nitrosothiols. Biochim. Biophys. Acta, 631, 221-231.

49. Irani K., Xia Y., Zweier J. L., Sollott S. J., Der C.J., Fearon E.R., Sundaresan M., Finkel Т., Goldschmidt-Clermont P.J. (1997) Mitogenic signaling mediated by oxidants in ras-transformed fibroblasts. Science, 275, 1649-1652.

50. Jackson S.H., Devadas S., Kwon J., Pinto L.A., Williams M.S. (2005) T cells express a phagocyte-type NADPH oxidase that is activated after T cell receptor stimulation. Nat. Immunol., 5(8), 818827.

51. Jeremy J.Y., Rowe D., Emsley A.M., Newby A.C. (1999) Nitric oxide and the proliferation of vascular smooth muscle cells. Cardiovasc. Res., 43, 580-594.

52. Jia L., Furchgott R.F. (1993) Inhibition by sulfhydryl compounds of vascular relaxation induced by nitric oxide and endothelium derived relaxing factor. J. Pharmacol. Exp. Ther., 267, 371-378.

53. Jing D., Xian W. (2007). Immunoregulatory effects of homocysteine on cardiovascular diseases. Act. Physiologic. Sin., 59 (5), 585-592.

54. Jones O. T.G., Hancock J. T. (2000). Free radicals and inflammation (Blake P.R. and Evans C.H., Eds.) Switzerland.

55. Joyal J. L., Burks D.J., Pons S., Matter W.F., Vlahos C.J., White M.F., Sacks D.B. (1997) Calmodulin activates phosphatidylinositol 3-kinase. J. Biol. Chem., 272, 28183-28186.

56. Karupiah G., Hunt N.H., King N.J., Chaudhri G. (2000) NADPH oxidase, Nrampl and nitric oxide synthase 2 in the host antimicrobial response. Rev. Immunogenet., 2(3), 387-415.

57. Kashiwada M., Lu P., Rothman P.B. (2007) PIP3 pathway in regulatory T cells and autoimmunity. Immunol. Res., 39(1-3), 194-224.

58. Kawakami N., Takemasa H., Yamaguchi Т., Hayakawa Т., Shimohama S., Fujimoto S. (1998) Indication of a protein kinase C-independent pathway for NADPH oxidase activation in human neutrophils. Arch. Biochem. Biophys., 349(1), 89-94.

59. Kim J.P., ICoh J.Y., Choi D.W. (1987) L-homocysteate is a potent neurotoxin on cultured cortical neurons. Brain Res., 437(1), 103-110.

60. Kim W.K. (1996) S-nitrosation ameliorates homocysteine-mediated neurotoxicity in primary culture of rat cortical neurons. Korean J. Pharmac. (South Korea), 32, 169-175.

61. Kim W.K., Рае Y.S. (1996) Involvement of N-methyl-D-aspartate receptor and free radical in homocysteine-mediated toxicity on rat cerebellar granule cells in culture. Neurosci. Lett. 216, 117-120.

62. Kobayashi S., Imajoh-ohmi S., Nakamura M., Kanegasaki S. (1990) Occurrence of cytochrome b558 in В cells lines of human lymphocytes. Bl., 74, 458-461.

63. Koponen S., Kurkinen K., Akerman K.E., Mochly-Rosen D., Chan P.H., Koistinaho J. (2003) Prevention of NMDA-induced death of cortical neurons by inhibition of protein kinase Czeta. J Neurochem., 86(2), 442-450.

64. Krogsgaard-Larsen P., Hansen J.J. (1992) Excitatory amino acid receptors design of agonists and antagonists, 13-17, 18.

65. Kruman, I.I., Culmsee, C., Chan, S.L., Kruman, Y., Guo, Z., Penix, L., Mattson, M.P. (2000) Homocysteine elicits a DNA damage response in neurons that promotes apoptosis and hypersensitivity to excitotoxicity. J. Neurosci., 20, 6920-6926.

66. Kwon J., Devadas S., Williams M.S. (2003) T cell receptor-stimulated generation of hydrogen peroxide inhibits MEK-ERK activation and lck serine phosphorylation. Free Rad. Biol. Med., 35(4), 406-417.

67. Lombardi G., Dianzani C., Miglio G., Canonico P.L and Fantozzi R. (2001) Characterization of ionotropic glutamate receptors in human lymphocytes. British J. Pharmacol., 133, 936-944.

68. Lombardi G., Miglio G., Dianzani C., Mesturini R., Varsaldi F., Chiocchetti A., Dianzani U., Fantozzi R. (2004) Glutamate modulation of human lymphocyte growth: in vitro studies. Biochem. Biophys. Res. Commun., 318(2), 496-502.

69. Loscalzo J. (1996) The oxidant stress of hyperhomocyst(e)inemia. J. Clin. Invest., 98, 5-7.

70. Maron B.A., Loscalzo O. (2009) The treatment of hyperhomocysteinemia. Annu. Rev. Med., 60, 39-54

71. Mashkina A., Tyulina O., Solovyova Т., Kovalenko E., Kanevski L., Johnson J., Boldyrev A. (2007) The excitotoxic effect of NMDA on human lymphocyte immune function. Neuroch. Int., 51, 356-360.

72. Mattson M.P., Shea T.B. (2003) Folate and homocysteine metabolism in neural plasticity and neurodegenerative disorders. Trends Neurosci., 26(3), 137-146.

73. Mattson, M.P., Kruman, I.I., Duan, W. (2002) Folic acid and homocysteine in age-related disease. Ageing Res. Rev., 1(1), 95111.

74. Mayer M.L., Miller R.J. (1990) Excitatory amino acid receptors, second messengers and regulation of intracellular Ca" in mammalian neurons. Trends Pharmacol. Sci., 11(6), 254-260.

75. Mayer M.L., Westbrook G.L. (1987) Permeation and block of N-methyl-D-aspartic acid receptor channels by divalent cationes in mouse cultured central neurons. J. Physiol., 394, 500-527.

76. McCully K.S., Wilson R.B. (1975) Homocysteine theoiy of arteriosclerosis. Atherosclerosis 22, 215-227.

77. Michaels R.L., Rothman S.M. (1990) Glutamate neurotoxicity in vitro: antagonist pharmacology and intracellular calcium concentrations. J. Neurosci., 10, 283-292.

78. Miglio G., Varsaldi F., Lombardi G. (2005) Human T lymphocytes express N-methyl-D-aspartate receptors functionally active in controlling T cell activation. Biochem. Biophys. Res. Commun, 338(4), 1875-1883.

79. Moilanen E., Vapaatalo H. (1995) Nitric oxide in inflammation and immune response. Ann. Med., 27(3), 359-367.

80. Muijsers R.B.R., Worm E.v.D., Folkerts G., Beukelman C.J., Koster A.S., Postma D.S., Nijkamp F. P. (2000) Apocynin inhibits peroxynitrite formation by murine macrophages. Br. J. Pharmacol., 130(4), 932-936.

81. Mutus В., Rabini R.A., Staffolani R., Ricciotti R., Fumelli P., Moretti N. (2001) Homocysteine-induced inhibition of nitric oxide production in platelets: a study on healthy and diabetic subjects. Diabetologia, 44, 979-982.

82. Nagy G., Koncz A., Perl A. (2003) T cell activation-induced mitochondrial hyperpolarization is mediated by Ca and redox dependent production of nitric oxide. J. Immunol., 171, 5188 -5197.

83. Obeid R., Herrmann W. (2006) Mechanisms of homocysteine neurotoxicity in neurodegenerative diseases with special reference to dementia. FEBS Lett., 580(13), 2994-3005.

84. Obeid R., Schorr H., Eckert R., Herrmann W. (2004) Vitamin В12 status in the elderly as judged by available biochemical markers. Clin. Chem. J., 50(1), 238-241.

85. Olney J.W., Price M.T., Salles K.S., Labruyere J., Ryerson R., Mahan K., Frierdich G., Samson L. (1987) L-homocysteic acid: an endogenous excitotoxic ligand of the NMDA receptor. Brain Res. Bull., 19(5), 597-602.

86. Ostanin D.V., Barlow S., Shukla D., Grisham M.B. (2007) NADPH oxidase but not myeloperoxidase protects lymphopenic mice from spontaneous infections. Biochem. Biophys. Res. Commun., 355(3), 801-806.

87. Pacheco R., Ciruela F., Casado V., Mallol J., Gallart Т., Lluis C., Franco R. (2004) Group of metabotropic glutamate receptors mediates a dual role of glutamate in T cell activation. J. Biol. Chem., 279,33352-33358.

88. Pani G., Colavitti R., Borrello S., Galeotti T. (2000) Redox regulation of lymphocyte signaling. IUBMB Life, 49(5), 381389.

89. Pellegrini-Giampietro D.E. (2003) The distinct role of mGluj receptors in post-ischemic neuronal death. Trends Pharmacol. Sci., 9, 461-470.

90. Perkinton M.S., Ip J.K., Wood G.L., Crossthwaite A.J., Williams R.J. (2002) Phosphatidylinositol 3-kinase is a central mediator of NMDA receptor signaling to MAP kinase (Erkl/2), Akt/PKB and CREB in striatal neurons. J. Neurochem., 80(2), 239254.

91. Perry I.J., Refsum H., Morris R.W., Ebrahim S.B., Ueland P.M., Shaper A.G. (1995) Prospective study of serum total homocysteine concentration and risk of stroke in middle-aged British men. Lancet, 346, 1395-1398.

92. Peterson J.R., Sharma R.V., Davisson R.L. (2006) Reactive oxygen species in the neuropathogenesis of hypertension. Curr. Hypertens. Rep., 8(3), 232-241.

93. Purves D., Augustine G.J., Fitzpatrick D., Katz L.C., Lamantia A-S., McNamara J., Williams S.M. (2001) Neuroscience (2nd edition), 176-177, 547.

94. Ravaglia G., Forti P., Maioli F., Martelli M., Servadei L., Brunetti N., Porcellini E., Licastro F. (2005) Homocysteine and folate as risk factors for dementia and Alzheimer disease. Am. J. Clin. Nutr., 82(3), 636-643.

95. Refsum H., Ueland P.M., Nygard O., Vollset S.E. (1998) Homocysteine and cardiovascular disease. Annu. Rev. Med., 49, 3162.

96. Reiling N., Kroncke R., Ulmer A.J., Gerdes J., Flad H.D., Hauschildt S. (1996) Nitric oxide synthase: expression of the endothelial, Ca /calmodulin-dependent isoform in human В and T lymphocytes. Eur. J. Immunol., 26 (3), 511-516.

97. Robert K., Pages C., Ledru A., Delabar J., Caboche J., Janel N. (2005) Regulation of extracellular signal-regulated kinase by homocysteine in hippocampus. Neuroscience, 133(4), 925-935.

98. Rodionov R., Lentz S.R. (2008) The homocysteine paradox. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol., 28(6), 1031-1033.

99. Sauer D., Fagg G.E. (1992) in "Excitatory amino acid receptors. Desing of agonists and antagonists" (Krogsgaard-Larsen P. and Hansen J.J. Eds.) Ellis Horwood, Chichester, pp. 13-34.

100. Seshadri S., Beiser A., Selhub J., Jacques P.F., Rosenberg I.H., D'Agostino R.B., Wilson P.W.F., Wolf P.A. (2002) Plasma homocysteine as a risk factor for dementia and Alzheimer's disease. N. Engl. J. Med., 346, 476-483.

101. Signorello M. G., Pascale R., Leoncini G. (2002) Effect of homocysteine on arachidonic acid release in human platelets. Eur. J. Clin. Invest., 32, 279-284.

102. Singh S.S., Chauhan A., Brockerhoff H., Chauhan V.P. (1993) Activation of protein kinase С by phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate. Biochem. Biophys. Res. Commun., 195(1), 104-112.

103. Stamler J.S., Osborne J.A., Jaraki O., Rabbani L.E., Mullins M., Singel D., Loscalzo J. (1993) Adverse vascular effects of homocysteine are modulated by endothelium-derived relaxing factor and related oxides of nitrogen. J. Clin. Invest., 91, 308-318.

104. Stampfer M.J., Malinow M.R., Willett W.C., Newcomer L.M., Upson В., Ullmann D, Tishler P.V., Hennekens C.H. (1992) A prospective study of plasma homocysteine and risk of myocardial infarction in US physicians. J. Am. Med. Assoc., 268, 877-881.

105. Starkebaum G., Harlan J.M. (1986) Endothelial cell injury due to copper-catalyzed hydrogen peroxide generation from homocysteine. J. Clin. Invest., 77, 1370-1376.

106. Stefanska J., Pawliczak R. (2008) Apocynin: molecular aptitudes. Mediators Inflamm., 2008, 106507.

107. Suh Y.A., Arnold R.S., Lassegue В., Shi J., Xu X., Sorescu D., Chung A.B., Griendling K.K., Lambeth J.D. (1999) Cell transformation by the superoxide-generating oxidase Moxl. Nature, 401, 79-82.

108. Sundaresan M., Yu Z.X., Ferrans V.J., Sulciner D.J., Gutkind J.S., Irani K., Goldschmidt-Clermont P.J., Finkel T. (1995) Regulation of reactive-oxygen-species generation in fibroblasts by Racl. Biochem. J., 318, 379-382.

109. Sung F.L., Slow Y.L., Wang G., Lynn E.G., О К. (2001) Homocysteine stimulates the expression of monocyte chemoattractant protein-1 in endothelial cells leading to enhanced monocyte chemotaxis. Mol. Cell Biochem., 216, 121-128.

110. Sweeney J.F., Nguyen P.K., Atkins K.B., Hinshaw D.B. (2000) Chelerythrine chloride induces rapid polymorphonuclear leukocyte apoptosis through activation of caspase-3. Shock, 13(6), 464-71.

111. Thambyrajah J., Townend J.N. (2002) Homocysteine and atherothrombosis — mechanisms for injury. Eur. Heart, 21, 967-974.

112. Upchurch G.R., Jr., Welch G.N., Fabian A.J. (1997) Homocysteine decreases bioavailable nitric oxide by a mechanism involving glutathione peroxidase. J. Biol. Chem., 272, 17012-17017.

113. Van den Berg M., van der Knaap M.S., Boers G.H., Stehouwer C.D., Rauwerda J.A., Valk J. (1995) Hyperhomocysteinaemia with reference to its neuroradiological aspects. Neuroradiol, 37, 403-411.

114. Verhoef P., Stampfer M.J., Buring J.E., Gaziano J.M., Allen R.H., Stabler S.P., Reynolds R.D., Kok F.J., Hennekens C.H.,

115. Willett W.C. (1996) Homocysteine metabolism and risk of myocardial infarction: relation with vitamins B6, В12, and folate. Am. J. Epidemiol., 1, 143(9), 845-859.

116. Vig M., Kinet J.P. (2009) Calcium signaling in immune cells. Nat. Immunol., 10(1), 21-7.

117. Vlahos C.J., Matter W.F., Hui K.Y., Brown R.F. (1994) A specific inhibitor of phosphatidylinositol 3-kinase, 2-(4-morpholinyl)-8-phenyl-4H-l-benzopyran-4-one (LY294002). J. Biol. Chem., 18, 269(7), 5241-5248.

118. Wall R.T., Harlan J.M., Harker L.A., Striker G.E. (1980) Homocysteine induced endothelial cell injury in vitro: a model for the study of vascular injury. Thromb. Res., 18, 113-121.

119. Wan K.F., Chan S.L., Sukumaran S.K., Lee M.C., Yu V.C. (2008) Chelerythrine induces apoptosis through a Bax/Bak-independent mitochondrial mechanism. J. Biol. Chem., 283(13), 8423-8433.

120. Watkins D., Rosenblatt D.S., (1989) Functional methionine synthase deficiency (cdlE and cbIG): clinical and biochemical heterogeneity. Am. J. Med. Genet., 34, 427-434.

121. Williams M.S., Henkart P.A. (1996) Role of reactive oxygen intermediates in TCR-induced death of T cell blasts and hybridomas. J Immunol., 157(6), 2395-2402.

122. Williams S., Kwon J. (2004) T-cell receptor stimulation, reactive oxygen species, and cell signaling. Fr. Rad. Biol. Med., 37, 1144-1141.

123. Wolos J.A., Frondorf K.A., Davis G.F., Jarvi E.T., McCarthy J.R., Bowlin T.L. (1993) Selective inhibition of T cell activation by an inhibitor of S-adenosyl-l-homocysteine hydrolase. J. Immunol. 150, 3264-3273.

124. Xiao L., Eneroth P.H., Qureshi G.A. (1995) Nitric oxide synthase pathway may mediate human natural killer cell cytotoxicity. Scand. J. Immunol., 42(5), 505-511.

125. Yaname H., Fukunaga Т., Nigorikawa K., Okamura N., Ishibashi S. (1999) Pervanadate activates NADPH oxidase via protein kinase C-independent phosphorylation of p47-phox. Arch. Biochem. Biophys., 361(1), 1-6.

126. Yang Q., Botto L.D., Erickson J.D., Berry R.J., Sambell C., Johansen H., Friedman J.M. (2006) Improvement in stroke mortality in Canada and the United States, 1990 to 2002. Circulation, 113(10), 1335-1343.

127. Zeng X., Dai J., Remick D.G., Wang X. (2003) Homocysteine mediated expression and secretion of monocyte chemoattractant protein-1 and interleukin-8 in human monocytes. Circ. Res., 93, 311-320.

128. Zhang D., Lipton S.A. (1992) L-homocysteic acid selectively activates N-methyl-D-aspartate receptors of rat retinal ganglion cells. Neurosci Lett., 139(2), 173-177.

129. Zhang Q., Zeng X., Guo J., Wang X. (2002) Oxidant stress mechanism of homocysteine potentiating Con A-induced proliferation in murine splenic T lymphocytes. Cardiovasc. Res., 53(4), 1035-1042.

130. Zieminska E, Stafiej A, Lazarewicz JW. (2003) Role of group I metabotropic glutamate receptors and NMDA receptors in homocysteine-evoked acute neurodegeneration of cultured cerebellar granule neurons. Neurochem. Int., 43(4-5), 481-492.