Исследование аномалий ядер в популяциях соматических клеток, подвергшихся лучевым воздействиям in vitro и in vivo тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.46, кандидат биологических наук Ибрагимова, Наталья Владимировна

• Ибрагимова, Наталья Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ибрагимова, Наталья Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Морфологические изменения ядер соматических клеток, индуцированные ионизирующей радиацией.

1.2. Морфологические аномалии ядер соматических клеток,

• обусловленные геномной нестабильностью.

1.3. Цитохалазиновый метод определения морфологических аномалий ядер в культуре лимфоцитов и его использование для оценки спонтанной и индуцированной цитогенетическойнестабильности.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Обследуемые группы ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской атомной электростанции, группы сравнения и доноры.

2.2. Приготовление гематологических препаратов.

2.3. Определение частоты встречаемости лимфоцитов с морфологическими аномалиями ядер.

2.4. Получение препаратов метафазных хромосом из лимфоцитов периферической крови человека.

2.5. Получение препаратов лимфоцитов периферической крови человека в цитохалазиновом блоке.

2.6. Схема проведения эксперимента с рентгеновским облучением в культуре лимфоцитов человека in vitro для определения дозовых зависимостей.

2.7. Выявление ядрышек в ядрах лимфоцитов периферической крови.

2.8. Исследование морфологических аномалий ядер в сквамозных клетках буккального эпителия.

2.9. Статистическая обработка экспериментальных данных

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Исследование морфологических аномалий ядер в культуре лимфоцитов периферической крови человека in vitro в эксперименте с рентгеновским облучением.

3.2. Морфологические аномалии ядер лимфоцитов в периферической крови человека in vivo.

3.3. Частота встречаемости лимфоцитов с морфологическими аномалиями ядер в периферической крови у здоровых доноров и у ликвидаторов последствий аварии наЧАЭС.

3.3.1. Частота встречаемости лимфоцитов с ядерными протрузиями в периферической крови у здоровых доноров и у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС.

3.3.2. Частота встречаемости лимфоцитов с межъядерными хромосомными мостами в периферической крови у здоровых доноров и у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС.

3.3.3. Частота встречаемости лимфоцитов с микроядрами в периферической крови у здоровых доноров и у ликвидаторов последствий аварии на

ЧАЭС.

3.4. Исследование количества ядрышек в ядрах лимфоцитов периферической крови у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС.

3.5. Морфологические аномалии ядер в сквамозных клетках буккального эпителия у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование аномалий ядер в популяциях соматических клеток, подвергшихся лучевым воздействиям in vitro и in vivo»

Использование энергии атома наряду с решением проблемы обеспечения цивилизации необходимой энергией имеет негативные последствия из-за угрозы техногенных радиационных катастроф, а также возможностью проведения террористических актов с применением ядерных зарядов. Известно, что радиационный фактор опасен для здоровья человека и вызывает необратимые пагубные изменения в организме. Воздействия ионизирующей радиации на клеточные популяции приводят к появлению в них клеток с аномально измененными ядрами (Лаптева-Попова М.С. и др., 1959; Bhattathiri

N.V. et al., 1998; Thomas P. et al., 2003), которые в клинической цитологии относятся к проявлению лучевых патоморфозов (Агамова К.А., 1997).

Возникновение клеток с определенными видами морфологических аномалий ядер может быть обусловлено хромосомными аберрациями (дицентрическими и кольцевыми хромосомами), являющимися надежными цитогенетическими t маркерами лучевых воздействий (Giselsson D., 2000; Никифоров A.M. и др., 2000). Таким образом, количественный учет клеток с радиоспецифическими аномалиями ядер может стать лабораторным экспресс-методом лучевой биоиндикации и оказаться востребованным в условиях чрезвычайных ситуаций.

Лимфоциты периферической крови являются наиболее изученными, удобными и вместе с тем радиочувствительными клетками для практического использования их в целях биоиндикации лучевых факторов. Стандартным лабораторным методом для оценки влияния мутагенных, в том числе и радиационных факторов, является цитохалазиновый метод оценки микроядер в культуре лимфоцитов человека (Fenech М., Morley А.А., 1985). В настоящее время разработчиками цитохалазинового метода вносятся в протокол существенные дополнения, усиливающие его информативность (Thomas P. et al., 2003; Fenech М., 2003). Предлагается наряду с микроядрами в цитохалазиновом методе учитывать межъядерные хромосомные мосты и ядерные почки (Kimura М. et al., 2004). Справедливым будет отметить, что наряду с перечисленными выше видами аномалий ядер в культуре лимфоцитов цитохалазиновым методом после рентгеновского облучения обнаруживаются клетки с гантелевидными ядрами, возникновение которых может быть обусловлено дицентриками и кольцами (Никифоров A.M. и др., 2000). Однако этот вид аномалий ядер остался не включенным в ныне усовершенствованный протокол цитохалазинового метода.

Поскольку количественный учет клеток с радиоспецифическими аномалиями ядер является лабораторным методом биоиндикации лучевых факторов, практически очень важным представляется изучение радиационно-индуцированных аномалий ядер лимфоцитов не только в условиях культуры in vitro, но и в популяциях соматических клеток in vivo. Лабораторный метод выявления таких аномалий в стандартных мазках крови (из пальца) в отличие от культурального метода требует гораздо меньших временных и материальных-затрат. Он вполне может выполняться в условиях медицинских пунктов в случае возникновения чрезвычайных радиационных ситуаций.

В связи с вышесказанным, целью настоящего исследования стало изучение аномалий ядер в культурах лимфоцитов, облученных в экспериментальных условиях in vitro и в лимфоцитах периферической крови in vivo у лиц, подвергшихся воздействию факторов аварии на Чернобыльской АЭС.

При этом были поставлены следующие задачи.

1. В диапазоне малых доз облучения путем проведения эксперимента в режиме "доза-эффект" в культуре лимфоцитов человека (цитохалазиновым методом) определить характер дозовых зависимостей для клеток с морфологическими аномалиями ядер (и в первую очередь с гантелевидными ядрами). Определить коррелятивные связи между дицентрическими и кольцевыми хромосомами с одной стороны и межъядерными мостами, ядерными протрузиями и гантелевидными ядрами - с другой.

2. Определить частоту встречаемости лимфоцитов с морфологическими аномалиями ядер (гантелевидными ядрами, микроядрами, ядерными протрузиями и межъядерными мостами) в периферической крови у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС через 13 - 15 лет после пребывания в зоне аварии.

3. Изучить особенности расположения протрузий в ядрах лимфоцитов in vivo в периферической крови человека.

4. Исследовать in vivo количество ядрышек в ядрах лимфоцитов у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС в отдаленные сроки после пребывания в зоне аварии.

5. Определить частоту встречаемости клеток буккального эпителия с морфологическими аномалиями ядер (микроядрами, ядерными протрузиями и межъядерными мостами) у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС в отдаленные сроки после пребывания в зоне аварии.

Научная новизна.

Впервые установлен характер зависимости от дозы рентгеновского облучения для показателя "частота встречаемости клеток с гантелевидными ядрами" в культуре лимфоцитов человека и представлена калибровочная дозо-зависимая кривая в диапазоне малых доз облучения.

Впервые установлено неслучайное расположение протрузий в ядрах лимфоцитов человека Впервые выявлены повышенные частоты встречаемости лимфоцитов с морфологическими аномалиями ядер в периферической крови чернобыльских ликвидаторов через 13-15 лет после пребывания в зоне аварии на ЧАЭС.

Впервые обнаружено, что у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС в отдаленные сроки после пребывания в зоне аварии увеличено количество ядрышек в ядрах лимфоцитов периферической крови.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Рентгеновское облучение в диапазоне малых доз индуцирует образование морфологических аномалий ядер: гантелевидных ядер, ядерных протрузий и межъядерных хроматиновых мостов в цитохалазиновых культурах лимфоцитов человека.

2. Частота клеток с гантелевидными ядрами, ядерными протрузиями, межъядерными хроматиновыми мостами зависят от дозы облучения (характер зависимости линейно-квадратичный) и положительно коррелируют с частотами метафаз с дицентрическими и кольцевыми хромосомами. Основной пул дицентрических хромосом в облученных in vitro и культивированных с добавлением цитохалазина Б лимфоцитах человека трансформируется в гантелевидные ядра.

3. В лимфоцитах периферической крови in vivo у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС в отдаленные сроки после пребывания в зоне аварии (через 13-15 лет) достоверно повышена частота встречаемости лимфоцитов с ядерными протрузиями (р<0.001), микроядрами (р<0.01) и межъядерными мостами (р<0.01) по сравнению с контрольной группой.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены на 2-м Международном Симпозиуме "Хроническое радиационное воздействие: возможности биологической индикации" (Челябинск, 2000), 4-ом Съезде по радиационным исследованиям (Москва, 2001), Международной научно-практической конференции "Медико-биологические последствия чрезвычайных ситуаций" (Санкт-Петербург, 2001), Международной научно-практической конференции "Чрезвычайные ситуации: предупреждение и ликвидация" (Минск, 2001). и

1 .ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Ибрагимова, Наталья Владимировна

105 ВЫВОДЫ

1. В популяциях облученных и культивированных с цитохалазином Б лимфоцитов большинство морфологических аномалий ядер относятся к классу гантелевидных ядер, причиной возникновения которых становятся дицентрические (и кольцевые) хромосомы.

2. В диапазоне малых доз рентгеновского облучения выявлена положительная корреляция между показателями "частота встречаемости ядерных протрузий", "частота встречаемости межъядерных хромосомных мостов", "частота встречаемости клеток с гантелевидными ядрами" в популяциях лимфоцитов человека, культивированных цитохалазиновым методом и показателем "частота встречаемости метафаз с дицентрическими (кольцевыми) хромосомами".

3. Выявлено неслучайное расположение протрузий в ядрах лимфоцитов периферической крови человека. В лимфоцитах с ядрами бобовидной формы ядерные протрузии, как правило (в 81,4%±2,9% случаев) локализуются на вогнутой части ядра, что вероятно, обусловлено закономерностями движения хромосом в митозе.

4. В периферической крови у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС частота встречаемости лимфоцитов с морфологическими аномалиями ядер, которые обусловлены геномной нестабильностью, остается стабильно повышенной в течение длительного срока (13-15 лет) после пребывания в зоне аварии ЧАЭС.

5. В лимфоцитах периферической крови in vivo у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС в отдаленные сроки после пребывания в зоне аварии увеличено количество ядрышек

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. При проведении микроядерного теста в культурах лимфоцитов цитохалазиновым методом целесообразно дополнительно учитывать клетки с гантелевидными ядрами, межъядерными мостами и ядерными протрузиями.

2. Метод, основанный на определении частоты встречаемости клеток с морфологическими аномалиями ядер предпочтительнее применять в лимфоцитах периферической крови, чем в клеточных популяциях плоского эпителия.

107

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ибрагимова, Наталья Владимировна, 2004 год

1. Агамова К.А. Клиническая цитология в изучении лучевого патоморфоза рака молочной железы. // Новости клинической цитологии России. 1997. - Т.1, № 2. - С.52 - 58.

2. Алов И.А. Цитофизиология и патология митоза. М.: Медицина, 1972.-264 с.

3. Богадельников И.В., Никитина Н.В., Готовкин Г.Л. Морфологические изменения клеток крови у детей, подвергавшихся воздействию ионизирующей радиации. // Пед1атр1я, акушерство i пнеколог.1993. № 1. - С.14 - 15.

4. Бочков Н.П., Дёмин Ю.С., Лучник Н.В. Классификация и методы учёта хромосомных аберраций в соматических клетках. // Генетика. 1972. -Т.8, № 5. - С.133 - 141.

5. Бочков Н.П., Кулешов Н.П., Сергеев А.С., Яковенко К.Н. Идентификация хромосом человека, образующих дицентрики после облучения. // Генетика. 1970. - С. 12-18.

6. Глузман Д.Ф., Мутэ А., Пинчук Л.Б., Скляренко Л.М., Надгорная В.А., Казьмина Э.В. Изменение структуры ядер лимфоцитов крови у детей, находившихся в Припяти в момент аварии на ЧАЭС. // Эксперим.онкология.- 1992. -Т.14,№6.-С.41-48.

7. Гольдберг Д.И., Гольдберг Е.Д. Атлас микрофотограмм костного мозга при острой лучевой болезни и действии цитостатических препаратов. — М.: Медицина, 1973.- 142 с.

8. Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л., 1973. - 141 с.

9. Даллакян A.M., Оганджанян А.А. // Биол. журн. Армении. 1983. -T.XXXV, № 7. - С.616-618.

10. Зак К.П., Бутенко З.А., Николаенко Н.И., Гринченко И.М., Каменовский А.К. Количественные и цитологические изменения различных видов лейкоцитов крови у ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС. // Гематол.и трансфузиол. 1995. - Т.40, № 4. - С.39 - 42.

11. Иванов В.В., Стрельцова В.Н. // VIII Всесоюзная научная конференция "Восстановительные и компенсаторные процессы при лучевых поражениях". Тезисы докладов. Л., 1982. - С.57 - 58.

12. Иванов В.В., Стрельцова В.Н. И Радиобиология. 1985. - Т. XXV, вып. 3. - С.372 - 373.

13. Казанцева И.А. Патология митоза в опухолях человека. — Новосибирск: Наука, 1981. 144 с.

14. Кравцов В.Ю. Радиоспецефические аномалии ядер интерфазных клеток в прескрининге хромосомных аберраций у ликвидаторов. В сб.: "Социально-психологические последствия Чернобыльской катастрофы". -1998.-С.261 -262.

15. Кравцов В.Ю., Прошин С.Н., Яковлев А.Ф., Каминская Е.В., Бахтин Ю.Б. Мосты и многополюсные митозы в популяциях клеток РА-23 крыс. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1997. — Т.123. - С.569 - 572.

16. Кравцов В.Ю., Федорцева Р.Ф., Логинова Ю.А., Старкова Е.В. Ядерные протрузии в лимфоцитах периферической крови у облученных пациентов. // Новости клинической цитологии России. 1999. — Т.З, № 3-4. -С.103-107.

17. Кузоватов С.Н., Кравцов В.Ю., Бахтин Ю.Б. Межъядерные хромосомные мосты и ядра с протрузиями в клеточных популяциях рабдомиосаркомы РА 23 крыс. // Цитология. - 2000. - Т.42, № 11. - С. 1097 -1102.

18. Кузоватов С.Н., Кравцов В.Ю., Каминская Е.В., Бахтин Ю.Б. Аномалии ядер в клеточных популяциях рабдомиосаркомы РА 23 крыс, подвергнутых лучевым воздействиям. // Новости клинической цитологии России. - 2000. - Т.4, № 3 - 4. - С.72 - 78.

19. Куницкая Е.Л., Сухих Т.Р., Мамаева С.Е. Изменения характера и частоты хромосомных ассоциаций в лимфоцитах периферической крови человека при действии колцемида. // Цитология. 1998. - Т.40, №7. - С.682 -685.

20. Лаптева-Попова М.С., Губин В.А., Соколов В.В., Александрова Н.Ф. Клетки крови при лучевой болезни. Атлас. М., 1959.

21. Любченко П.Н. Гематологические показатели у участников ликвидации последствий аварии на ЧАЭС через 3 года после работы в Чернобыле. // Лаб.дело. 1991. - № 8. - С.47 -51.

22. Макгрегор Г., Варли Дж. Методы работы с хромосомами животных. М.: Мир, 1986. - 272 с.

23. Мамаев Н.Н., Мамаева С.Е., Либуркина И.Л., Козлова Т.В., Медведева Н.В., Макаркина Г.Н. Активность ядрышковых организаторов в нормальных и лейкозных клетках человека // Цитология. 1984. - Т.26, № 1. -С.46-51.

24. Оганджанян Э.Е., Будагов Р.С., Нестеренко B.C., Оганджанян А.А. Оценка степени тяжести лучевого поражения собак по денсито-геометрическим параметрам лимфоцитов крови. // Радиобиология. 1989. -T.XXIX, вып.2. - С.226-229.

25. Прокофъева-Бельговская А.А. Радиационные поражения хромосом на ранних стадиях развития лосося. // Цитология. 1961. - Т.З, № 4. - С.437 -445.

26. Прошин С.Н., Кравцов В.Ю., Ольнев М.Ю., Яковлев А.Ф., Бахтин Ю.Б. Хромосомные мосты и "хвостатые" ядра в популяциях злокачественных клеток. // Генетика. 1998. - Т.34, № 1. - С.61 - 64.

27. Рыбаченко В.В. Хронический необструктивный бронхит у ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС в отдаленный период (через 10-12 лет): Автореф. дис. . канд. мед. наук: 14.00.43. М., 2003.-25 с.

28. Салимов А.Г. Карпухин А.В., Кузьмина И.В., Спитковский Д.М. Малые дозы ионизирующей радиации индуцируют изменение положения хромосом в интерфазных ядрах лимфоцитов человека. // Третий съезд по радиационным исследованиям. М., 1997. - T.l. - С.40 - 41.

29. Сепетлиев Д. Статистические методы в научных медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1968. - 420 с.

30. Степанова Е.И., Кондрашова В.Г., Давиденко О.А., Князева О.Б., Галичанская Т.Я. Гематологические эффекты Чернобыльской аварии у детей. // Гематология и трансфузиология. 1992. - Т.37, № 7-8. - С.31 - 32.

31. Степанова H.JI. Частота обменов между сестринскими хроматидами кольцевых хромосом дрозофилы в нормальном митозе. // Генетика. 1970. -Т.6, № 3. - С.123 - 129.

32. Флиднер Т.М. В кн. "Руководство по радиационной гематологии". -М.: Медицина, 1974.

33. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М.: Медицина, 2000. 430 с.

34. Хлопин Н.Г. Гистологические элементы опухолей. В кн.: Злокачественные опухоли. Под редакцией Петрова Н.Н. JL: Медгиз, 1947. — С.39-63.

35. Хэм А., Кормак Д. Гистология. М.: Мир, 1973.

36. Atkin N.B., Baker М.С. A nuclear protrusion in a human tumor associated with an abnormal chromosome // Acta cytol. 1964. - V.8, № 6. -P.132— 135.

37. Atkin N.B., Baker M.C. Nature of nuclear projections in adenocarcinoma of the breast // Lancet. 1974. - September 7. - P.599.

38. Atkin N.B., Baker M.C., Wilson S // Stem-line karyotypes of 4 carcinomas of the cervix uteri // A.J. of Obstetrics and gynecology. 1967. - V.99, № 4. - P.506 - 514.

39. Bhattathiri N.V., Bindu L., Remani P., Chandralekha В., Nair K.M. Radiation-induced acute immediate nuclear abnormalities in oral cancer cells. // Acta Cytol. 1998. - V.42, № 5. - P. 1084 - 1090.

40. Brenneke H. Strahlenchadigung von Mause- und Rat-tensperm an der Fruhentwicklung der Eier // Strahlentherapie. 1937. - V.60. - P.214 - 238.

41. Busch H., Smetana K. The nucleolus. New York, London: Acad. Press., 1970.-626 p.

42. Carrano A.V., Heddle J.A. The fate of chromosome aberrations // J. Theor. Biol. 1973. - V.38. - P.289 - 304.

43. Chapelle A., Stenstrand K. Dicentric human X chromosomes // Hereditas. 1974. - V.76. - P.259 - 268.

44. Claussen U., Mazur A., Rubtsov N. Chromosomes are highly elastic and can be stretched // Cytogenet Cell Genet. 1994. - V.66. - P. 120 - 125.

45. Cohen J.J. Apoptosis // Immunol. Today. 1993. - V. 14. - P. 126 - 130.

46. Darlington C.D. Misdivision and the genetics of the centromere // J. Genet. 1939. - V.37. - P.341 - 364.

47. Das B.C., Sharma T. The fate of X-ray-induced chromosome aberrations in blood lymphocyte culture // Mutat. Res. 1987. - V.176. - P.93 - 104.

48. Denko N., Stringer J., Maqsood Wani, Stambrook P. Mitotic and postmitotic consequences of genomic instability induced by oncogenic Ha-Ras // Somatic cell and molecular genetics. 1995. - V 21, № 4. - P.241 - 258.

49. Dienstbier L., Pospisil J., Arient M. // Int. J.Radiat. Biol. 1964. - V.2.1. P.333.

50. Dijkhuizen Т., Vandenberg E., Molenaar W.M., Meuzelaar J.J., Dejong B. Rearrangements involving 12pl2 in two cases of cardiac myxoma // Cancer Genet and Cytogenet. 1995. - V.82, № 2. - P. 161 - 162.

51. Evans H.J. Mutation cytogenetics: past, present and future // Mutat. Res.- 1988.-V.204.-P.355 -363.

52. Fedortseva R.F., Kravtsov V.Yu., Belyakov O.V., Vorobtsova I.Ye., Nekrasov V.N., Nikiforov A.M. Late cytogenetics concequences of Chernobyl accident in child // Internetional Jounal of Pediatric Hematology & Oncology. -1997. V.4, № 3. - P.295 - 299.

53. Fenech M., Morley A.A., Measurement of micrenuclei in lymphocytes // Mutat. Res. 1985. - № 147. - P.29 - 36.

54. Figgitt M, Savage JR., 1999 Interphase chromosome domain reorganization following irradiation.// Int J Radiat Biol. 1999. - Jul; 75(7). - P.811 -817.

55. Geraud G., Laquerriere F., Masson C., Arnoult J., Labidi В., Hernandes-Verdan D. Three-dimensional organization of micronuclei induced by colchicine in PtKl cells. // Exp. Cell Res. 1989. - V. 181. - P.27 - 39.

56. Ghosh S., Paweletz N. Sychronous DNA synthesis and mitosis in multinucleate cells with one chromosome in each nucleus // Chromosoma. 1984. -V.89.-P.304-311.

57. Gisselsson D. Chromosomal Instability and Genomic Amplification in Bone and Soft Tissue Tumours. Lund: University., 2000. 73 p.

58. Gisselsson D., Bjork J., Hoglund M., Mertens F., Cin P.D., Akerman M., Mandahl N. Abnormal nucler morphology in tumors reflects chromosomal bridge-breakage instability.// Am. J. Pathol. 2003.

59. Gisselsson D., Hoglund M., Mertens F., Mandahl N. Variable stability of chromosomes containing amplified a-satellite sequences in human mesenchymal tumours. // Chromosoma. 1999. — V.108. - P.271 - 277.

60. Gisselsson D., Pettersson L., Hoglund M., Heidenblad M., Gorunova L., Wiegant J., Mertens F., Cin P.D., Mitelman F., Mandahl N. Chromosomalbreakage-fusion-bridge events cause genetic intratumor heterogeneity. // PNAS. -2000.

61. Heddle J.A., Benz R.D., Countryman P.I. Measurement of chromosomal breakage in cultured cells by the micronucleus technique. Evans H.J., Lloyd D.C. (eds) Mutagen induced chromosome damage in man. Edinburg: Edinburg University Press, 1978. P. 185 - 200.

62. Heddle J.A., Carrono A.V. The DNA content of micronuclei induced in mouse bone marrow by gamma-irradiation: evidence that micronuclei arise acentric chromosomal fragments // Mutat. Res. 1977. - V.44. - P.63 - 69.

63. Heddle J.A., Hite M., Kirhart В., Mavournin K., MacGregor J.T., Nowell G.W., Salamone M.F. The induction of micronuclei as a measure of genotoxicity//Mutat. Res. 1983. - V.123. - P. 61 - 118.

64. Helde M. Connection between roentgen ray risks for workers and changes in their blood pictures // Acta Radiol. 1946. V.27, № 2. - P.308 - 315.

65. Hibner U., Coutinho A. Signal antonymy a mechanism for apoptosis induction // Cell Death Different. 1994. - V.l, № 1. - P.33 - 37.

66. Hogstebt B.A., Karlsson A. The size of micronuclei in human lymphocytes varies assoding to inducihg agent used // Mutat. Res. 1985. - V. 156.-P. 229-232.

67. Holbrook N.J., Fornace A.Jr. Response to adversity molecular control of gene activation following genotoxic stress // New Biol. 1991. - V.3. - P.825 -833.

68. Howell W.H The life-history of the formed elements of the blood corpuscles //J. Morfol.- 1891.-V.4.-P.57- 116.

69. Hsu T.C., Pathak S., Cailleau R., Cowles R. S. Nature of nuclear projections in an adenocarcinoma of the breast // Lancet. 1974. - August 17. -P.413 - 414.

70. Ingram M., Adams M., Coonan L. et al. The occurrence of lymphocytes with bilobed nuclei in cyclotron personned // Science. 1952. - V.l 16, № 3026. -P.706 - 708.

71. Jolly J. Recherches sur la frmation des mammiferes // Arch. Anat. Microsc. 1907. - V.9. - P. 133 - 314.

72. Kaufman R.J., Sharp P.A., Latt S.A. Evolution of chromosomal regions containing transfected and amplified dihydrofolate reductase sequences // Mol cell Biol. 1983.-V.3.-P.699-711.

73. Kerr J.F. Schrinkage necrosis: A distinct mode of cellular death // J. Pathol. 1971.-V.105.-P.13.

74. Kim N.W., Piatyszck M.A., Prowse K.R. Specific association of human telomerase activity with immortal cells and cancer // Science. 1994. - V. 226. -P.2011 -2016.

75. Koizumi J. Nipplelike protrusions in endocervical and other cells: futher observations. // Acta cytol. 1996. - № 40. - P.519 - 528.

76. Kormos C., Koteles G. Dose-effect relationship of appearance of micronuclei in CB cell after X-irradiation // Mutat Res. 1988. - № 199. - P.31 -35.

77. Kramer J., Schaich-Walch G., Nusse M. DNA synthesis in radiation-induced micronuclei studied by bromodeoxy-uridine (BrdUrd) labelling and anti-BrdUrd antibodies. // Mutagenesis. 1990. - V.5. - P.491 - 495.

78. Kravtsov V.Yu., Fedortseva R.F., Starkova Ye.V., Yartseva N.M., Nikiforov A.M. Tailed nuclei and dicentric chromosomes in irradiated subjects. // Applied Radiation and Isotopes. 2000. - V.52. - P. 1121 - 1127.

79. Kuhn E.M., Therman E., Susman B. Amitosis and endocycles in early cultered mouse trophoblast// Placenta. 1991. - May, 12:3. - P.251 - 261.

80. Labidi В., Gregoire M., Frackowiak S., Hernandez Verdun D., Bouteille M. RNA polymerase activity containing individual chromosomes. An in vitro and in situ study // Exp. Cell. Res. 1987. - V.169. - P. 233 - 244.

81. Lichter P., Boyle A.L., Cremer Т., Ward D.C. Analisis of genes and chromosomes by non-isotopic in situ hybridization. // Genet. Anal. Tech. — 1991. -Apr. 8. P.24 - 35.

82. Lichter P., Cremer T. Non-isotopic in situ hybridization to metaphase chromosomes and interphase nuclei. EMBO Practical Course. 1992.

83. Longwell A.C., Yerganian G. Some observations on nuclear budding and nuclear extrusions in a Chinese hamster cell culture // J. Natl. Cancer. Inst. -1965.-V.34.-P.53-69.

84. Magalhres M.C., Pignatelli D., Magalhres M.M. Amitosis in human adrenal cells // Histol Histopathol. 1991. - Apr. 6:2. - P.251 - 256.

85. Majno G., Joris I. Apoptosis, oncosis and necrosis. An overview of cell death // Amer. J. Pathol. 1995. - V. 146, № 1. - P.3 - 15.

86. Mamaev N.N., Mamaeva S.E. Nucleolar organizer region activity in human chromosomes and interphase nuclei of normal, leukemic and tumor cells as evaluated by silver staining. // Int. Rev. Cytol. 1990. - V. 121. - P.233 - 266.

87. McCallum S.M. 1988. New observations on the significance of nipplelike protrusions in the nuclei of endocervical cells. // Acta Cytol. 1988. -V.32,№3.-P.331 -334.

88. McClintock B. The fusion of broken ends of chromosomes followig nuclear fusion // Proc. Nat. acad. sci. 1942. - V.28. - P.458 - 463.

89. Mitchell J.C., Norman A. // Int. J. Radiat. Biol. 1987. - V.52, № 4. -P.527 - 535.

90. Neronova E., Slozina N., Nikiforov A. Chromosome Alteration in Cleanup Workers Sampled Years after the Chernoyl Accident.// Radiation Research. 2003. - V.l60. -P.46 - 51.

91. Nordenson N.G. Blood changes in radiologic work. // Acta Radiol. -1946. V.27, № 3-4. - P.416 - 432.

92. Norman A., Sasaki M.S., Ottoman R.E., Fingerhat A.G. Use of chromosome aberrations to estimate X-ray and gamma-ray dose to man // Blood. -1966. V.27.-P.706-714.

93. Ostapenko V., Prishchepova E., Ostapenko S., Zhukotsky. Computer TV morphodensitometry to study epigenetic changes in blood lymphocytes from children affected by low-dose irradiation.// A Stem Cells. 1997. - № 15, Suppl 2. -P.103 - 109.

94. Plug-Demangio A.W., Sundvold Т., Wurscher M.A., Koop J.I., Klingethutz A.J., McDougall J.K. Telomerec erosion and chromosomal instability in cell expressing the HPV oncogene 16E6. // Oncogene. 2004. - Apr 29;23 (20). -P.3561 -3571.

95. Qumsiyeh M.B. Impact of rearrangements on function and position of chromosomes in the interphase nucleus and on human genetic disorders // Chromosome Res. 1995. - V. 3, №. 8. - P.455 - 465.

96. Royle M. The proterminal regions and telomere of human chromosomes // Adv Genetics. 1995. - V.32. - P.273 - 315.

97. Schiffmann D., De Boni U. Dislocation of chromatin elements in prophase induced by diethylstilbestrol: a novel mechanism by which micronuclei can arise // Mutat Res. 1991. - V. 246. - P. 113 - 122.

98. Schmid W. The micronucleus test // Mutat Res. 1975. - V. 31. - P.915.

99. Sciot R., Samson I., Dalcin P., Lateur L., Vandamme В., Vandenberghe H., Desmet V. Giant cell rich parosteal osteosarcoma. // Histopathology. 1995. -V.27, № 1. - P.51 - 55.

100. Screek R. // Proc. Soc. exp. Biol. 1945. - V.58. - P.285.

101. Siroky J., Zlulova J., Riha K., Shippen DE., Vyscot B. Reargement of ribosomal DNA clasters in late generation telomerase-deficient Arabidosis // Chromosoma. -2003. Oct., 112 (3). - P.l 16 - 123.

102. SlosinaN., Neronova E., Kharchenko Т., Nikiforov A. Increased level of chromosomal aberrations in lymphocytes of Chernobyl liquidators 6-10 years after the accident // Mutation Research. 1997. - V.379. - P. 121 - 125.

103. Somosi Z., Pikli A., Kubasova T. // Radiobiol. Radiother. 1985. V.XXVI, № 3. - P.305 - 310.

104. Sternes K.L., Vig B.K. Satellite I. DNA in transformed rat cells. // Cancer Genet and Cytogenet. 1995. - V.79, № 1. - P.64 - 69.

105. Straffer C., Muller W.U., Kriscio A., Bocko V. Micronuclei -biological indicator for retrospective dosimetry after exposure to ionizing radiation // Mutat Res. 1998. - Aug 3; 404(1-2). - P.101 - 105.

106. Tanaka K., Izumi Т., Ohkita Т., Kamada N. Micronuclei and chromosome aberratios found in bone marrow cells and lymphocytes from thorotrast patients and atomic bomb survivors. Hiroshima // J. Med. Sci. 1984. -V.33.-P.101 - 111.

107. Taylor R. S. Nippling of endocervical cell nuclei. // Acta Cytol. 1984. - V.28, № 1. -P.86 - 88.

108. Thomas P., Umegaki K., Fenech. M., 2003 Nucleocytoplasmic bridges are a sensitive measure of chromosome rearrangement in the cytokinesis-block micronuclei test // Mutagenesis. 2003. - Mar; 18(2). - P. 187 - 194.

109. Trowell O.A. // J. Path. Bact. 1952. - V.64. - P.687.

110. Wandall A. Clonal origin of partially inactivated centromeres in a stable dicentric chromosome. // Cytogenet Cell Genet. 1995. - V.69. - P. 193 -195.

111. Yalon M., Gal., Segev Y., Selig S., Skorseki K.L., 2004. Sister chromatid separation at human telomeric regions // J.Cell Sci. 2004. - May 15; 117 (Pt 10). - P. 1961 - 1970.

112. Zaharopoulos P., Wong J., Wen J.W. Nuclear protrusions in cells from cytologic specimens. Mechanisms of formation. // Acta Cytol. 1988. - V.42, № 2. -P.317 - 328.

113. Zotti-Marelli L.} Migilore L., Panasiuk G.} Barale R. Micronucleus frequency in Gomel children afected and not affected by thyroid cancer. // Mutat. Res. 1999. - Mar 15; 440(1). - P.35 - 43.1. БЛАГОДАРНОСТИ