Использование молекулярных маркеров для анализа полиморфизма генома перца и оптимизации селекционного процесса тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.07, кандидат биологических наук Снигирь, Екатерина Андреевна

• Снигирь, Екатерина Андреевна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Снигирь, Екатерина Андреевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Ботаническая характеристика перца (род Capsicum).

1.2. Классификация рода Capsicum.

1.3. Генетика перца.

1.4. Селекция на гетерозис.

1.5. Комбинационная способность образцов.

1.6. Технологии молекулярного маркирования в селекции.

1.7. Применение молекулярных систем маркирования для идентификации генотипов перца.

1.7.1. Использование микросателлитных повторов для маркирования растительного генома.

1.7.2. Использование AFLP-метода для маркирования растительного генома.

1.8. Углеводный обмен растений.

1.8.1. Ферменты углеводного обмена растений и кодирующие их гены.

1.8.2. Альфа-глюкан фосфорилазы растений.

1.8.3. Фермент сахарозосинтаза и его функции в растениях.

1.8.4. Гены сахарозосинтазы семейства Solanaceae.

1.8.5. Инвертазы растений.

2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Молекулярно-генетические методы.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Анализ генома сортов перца Capsicum аппиит и его близкородственных видов методом AFLP.

3.1.1. Подбор AFLP-комбинаций праймер/фермент, выявляющий внутри- и межвидовой полиморфизм у представителей Capsicum.

3.1.2. AFLP-анализ межвидового полиморфизма нуклеотидных последовательностей ДНК перцев.

3.2. SSR анализ генома сортов перца Capsicum аппиит и близкородственных видов Capsicum.

3.2.1. Подбор микросателлитных локусов для проведения SSR анализа видов и сортов перца.

3.2.2.Оптимизация ПЦР для амплификации микросателлитных локусов перца.

3.2.3. Микросателлитный анализ сортов перца С.аппиит, а также близкородственных культурных видов C.frutescens, C.chinense, C.baccatum.

3.2.3.1. Характеристика полиморфизма микросателлитного локуса СЗ.

3.2.3.2. Характеристика полиморфизма микросателлитного локуса С 1а.

3.2.3.3. Характеристика полиморфизма микросателлитного локуса С5.

3.2.3.4. Характеристика полиморфизма микросателлитного локуса С9а.

3.2.4. Сравнение частот встречаемости аллелей SSR локусов сортов перца С.аппиит и видов C.frutescens, C.chinense, C.baccatum.

3.2.5. Применение исследованных микросателлитных локусов для паспортизации сортов перца С.аппиит и видов C.frutescens, C.chinense, C.baccatum.

3.3. Проведение предварительного сортоиспытания, расчет ОКС и СКС родительских линий.

3.3.1. Эффект гетерозиса по основным хозяйственно ценным признакам.

3.4. Анализ полиморфизма генов углеводного обмена.

3.4.1. Анализ полиморфизма гена Stp23.

3.4.2. Анализ полиморфизма гена Sus4.

3.4.3. Анализ полиморфизма гена Ртп-1.

ВЫВОДЫ.

Рекомендации к практическому использованию в селекции.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Использование молекулярных маркеров для анализа полиморфизма генома перца и оптимизации селекционного процесса»

В настоящее время перец (род Capsicum) является одной из основных овощных культур. Перец был введен в культуру около 8 тыс. лет тому назад (Газепбуш, 1958), Центральная Америка - родина этого овощного растения. Перец стал выращиваться любителями в Европе после открытия Америки, а затем стал распространяться по всему свету и на данный момент занимает одно из первых мест среди овощных культур.

Культура перца возделывается почти во всех странах земного шара, там где позволяют климатические условия (от 55° ю.ш. до 55-56° с.ш.). Мировое товарное производство перца составляет более 27,55 млн. тонн (РАО, 2010).

В настоящее время в России интерес к культуре перца постоянно возрастает. В зелёных плодах перца содержится 150-270 мг % витамина С, а в красных плодах - до 480 мг %, что значительно превышает его содержание в других овощных растениях (Аникеенко, 1979, Лудилов, Гикало, Гиш, 1999). Перец по содержанию каротина (9-12 мг %) можно сравнить с морковью, также он занимает ведущее место среди овощных культур по содержанию витаминов группы В. Р-активные вещества - биофлавоноиды, придают плодам перца особую важность, это биологически активные вещества, они уменьшают проницаемость и повышают прочность капилляров при взаимодействии с витамином С (Лудилов, Лудилова, 1977). Также одним из важнейших биологически активных веществ, содержащихся в перце, является капсаицин, обеспечивающий горечь плодов. В остром перце содержится наибольшее его количество - до 1,9%. В перце также содержатся такие минеральные вещества, как калий, железо, магний, фосфор, цинк и кремний (Милованова, 1961).

Кроме того, плоды перца сладкого отличаются высокими вкусовыми качествами и пригодны для употребления в свежем виде, что обеспечивает устойчивый спрос на них в течение года.

В настоящее время многие селекционные проблемы связанные с выведением новых сортов, такие как например подбор родительских форм для скрещиваний, оценка однородности и размножение полученных перспективных линий, контроль наследования генетического материала, а также регистрация готового сорта решаются с помощью надежных, быстрых и высокоточных систем молекулярного маркирования ДНК, которые основываются на оценке геномого биоразнообразия.

В семеноводстве для определения степени гибридности при получении коммерческих гибридов, а также для контроля сортовой чистоты при размножении сортов отдельное значение приобретают молекулярные маркеры и разработанные на их основе молекулярно-генетические паспорта сортов.

В связи с введением в действие законов РФ «О селекционных достижениях» создание молекулярно-генетических паспортов для сортов сельскохозяйственных культур имеет особое значение, особенно для защиты прав селекционеров.

Вхождение России в ВТО и выход Российских семеноводческих компаний на зарубежный рынок ставит перед сортовой идентификацией следующие задачи - жесткое сортовое соответствие продаваемой продукции и защита прав отечественных семеноводческих компаний.

Молекулярная идентификация и разработка новых систем ДНК генотипирования особенно актуальна именно для овощных культур. Так как например, белковые маркеры, которые наиболее широко и эффективно применяются при сортовой идентификации злаковых культур, не могут быть использованы для идентификации овощных. Это объясняется тем, что запасные белки овощных культур, как правило, представленные альбуминовой и глобулиновой фракциями, значительно зависят от внешних факторов среды и поэтому такие белки не могут быть надежными маркерами для идентификации овощных культур.

На современном этапе с помощью современных методов молекулярного маркирования, таких как RAPD, SSAP, AFLP, SSR, ISSR, SNP и ряда других осуществляется оценка полиморфизма как всего генома, так и его отдельных функциональных участков. Полученные с помощью этих методов данные используются для разработки ДНК маркеров, которые применяются для генотипирования сортов и линий, идентификации ценных генотипов, а также для маркирования конкретных генов и локусов растений.

В последние годы в связи с тенденцией увеличения потребления перца, количество новых сортов ежегодно возрастает и проблема геномной идентификации становится особенно актуальной, но несмотря на это в России не проводилось целенаправленной научно-исследовательской работы по созданию систем молекулярного маркирования генотипов сортов перца отечественной селекции. Молекулярная идентификация сортов с помощью созданных маркерных систем могла бы стать основой Государственного реестра отечественных сортовых стандартов.

Все вышесказанное определяет актуальность разработки систем молекулярной идентификации геномов отечественных сортов перца и оценку их геномной вариабельности.

Исходя из этого целью исследования является разработка систем маркирования генома культурных видов Capsicum для оценки генетического полиморфизма и получения молекулярных маркеров для идентификации сортов перца отечественной селекции, а также для ускорения отдельных этапов селекционного процесса.

Для реализации поставленной цели выделены следующие задачи: 1) Используя молекулярные системы маркирования (мультилокусное AFLP маркирование, система микросателлитных SSR маркеров) определить уровни вариабельности генома образцов рода Capsicum, включающих сорта С.аптшт отечественной и зарубежной селекции, а также гибриды Fi;

2) Для каждого микросателлитного локуса определить аллельный состав и частоту встречаемости каждого аллеля у сортов перца отечественной и зарубежной селекции;

3) На основе определенных аллельных вариантов микросателлтиных локусов составить молекулярно-генетические паспорта анализируемых сортов;

4) По результатам молекулярно-генетического анализа подобрать родительские пары и провести скрещивания; определить ОКС и СКС родительских форм и эффект гетерозиса у гибридных комбинаций;

5) Определить и проанализировать последовательности генов глюканфосфорилазы, инвертазы и сахарозосинтазы у перца, выявить уровень полиморфизма и аллельные варианты.

Научная новизна. Впервые с помощью молекулярных методов маркирования (SSR, AFLP) генома охарактеризовано генетическое разнообразие сортов Capsicum аппиит отечественной селекции, а также образцов родственных видов. С использованием отобранных SSR маркеров разработана система (минимальный набор локусов) для идентификации сортов перца и анализа гибридных комбинаций. Для каждого сортообразца получены индивидуальные SSR спектры, которые могут стать основой паспортизации сортов.

На основе систем AFLP и SSR маркирования впервые проведено молекулярное генотипирование сортов перца отечественной селекции.

Впервые были определены и проанализированы последовательности генов глюканфосфорилазы, инвертазы и сахарозосинтазы у перцев, определен уровень полиморфизма и аллельные варианты.

Практическая значимость. Результаты AFLP анализа позволяют обоснованно подходить к подбору родительских форм для скрещиваний, прогнозировать эффект гетерозиса и оптимизировать селекционный процесс за счет сокращения вовлекаемого в него селекционного материала.

Молекулярные микросателлитные маркеры и разработанные на их основе молекулярно-генетические паспорта сортов могут применяться для контроля сортовой чистоты и определения степени гибридности при получении коммерческих гибридов, а также обеспечивают защиту авторских прав селекционера.

Исследование вариабельности генов может быть использовано для выявления и маркирования аллельных вариантов ассоциированных с содержанием Сахаров в плодах и холодоустойчивостью.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Снигирь, Екатерина Андреевна

ВЫВОДЫ

1. Разработана система AFLP маркирования, позволившая оценить генетическое разнообразие представителей рода Capsicum:

- идентифицировано 956 полиморфных AFLP фрагмента, определены уровни межвидовой и внутривидовой вариабельности ДНК последовательностей перца.

- показано, что с помощью двух праймерных комбинаций можно дифференцировать генотипы всех 45 сортов и для каждого из них получены специфичные спектры фрагментов;

-для 24 сортов получены сортоспецифичные фрагменты, которые могут быть преобразованы в монолокусные SCAR маркеры;

- выявлены наиболее генетически родственные и отдаленные группы сортов для оптимизации селекционного процесса.

2. Методом SSR анализа четырех микросателлитных локусов у 45 сортов и видов рода Capsicum выявлено 19 аллельных вариантов, определены их точные размеры и нуклеотидные последовательности, частоты встречаемости и коэффициенты информативности.

3. Показана возможность использования разработанных систем микросателлитного и AFLP маркирования при подборе родительских пар для получения гибридов с высоким эффектом гетерозиса.

4. Для защиты авторских прав селекционера составлены молекулярно-генетические паспорта сортов перца сладкого, представленные сортоспецифичными формулами аллельных вариантов четырех микросателлитных локусов.

5. Определены и проанализированы последовательности функциональных участков генов альфа-глюканфосфорилазы, инвертазы и сахарозосинтазы у видов и сортов Capsicum, выявлен уровень полиморфизма нуклеотидных и аминокислотных последовательностей.

Рекомендации к практическому использованию в селекции

1. Для получения гибридных комбинаций с высоким эффектом гетерозиса и оптимизации селекционного процесса использовать результаты АБЬР анализа (дендрограмма, генетические расстояния) при подборе родительских форм для скрещиваний.

2. Молекулярные маркеры и разработанные на их основе молекулярно -генетические паспорта сортов применять для контроля сортовой чистоты при размножении сортов и определения степени гибридности при получении коммерческих гибридов, а также для защиты авторских прав селекционера.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Снигирь, Екатерина Андреевна, 2013 год

1. Алпатьев A.B. Перцы и баклажаны./ A.B. Алпатьев// М:1952. С.80.

2. Алпатьев A.B. Получение новых форм помидоров и сладкого перца при опылении смесью пыльцы. / A.B. Алпатьев, A.B. Бендерская// Агробиология.- 1964.-№6.

3. Аникеенко А.П. Химический состав сладкого перца как исходный материал для селекции./ А.П. Аникеенко// Научные труды Майкопской опытной станции ВИР. в. 1(13).- 1979. С. 10-17.

4. Велик В.Ф. Методика опытного дела в овощеводстве и бахчеводстве./ В.Ф.Белик//М.: Агопромиздат,- 1992.- С.319.

5. Боос Г.В. Гетерозис овощных культур./ Г.В. Боос, Г.В. Бадина, В.И. Буре-нин//Л.- 1990.-С.215.

6. Блащук И. П. Оценка КС линий томата с генетическими маркерами./ И. П. Блащук//В кн.: Генетические и методические аспекты селекции с.-х. Растений и животных. Киев. - 1983. - С.8-10.

7. Бороевич С. Принципы и методы селекции растений./ С. Бороевич// М.- 1984. 344с.

8. Брюбейкер Д.Л. Сельскохозяйственная генетика./ Д.Л. Брюбейкер// Пер. E.H. Болотова. М. Колос. - 1966. - С.300.

9. Бухарова А.Р. Анализ наследования и формирования признаков при межвидовой гибридизации перца./ А.Р. Бухарова, А.Ф. Бухаров// Селекция и семеноводствоовощных культур. М. - 2003. - В. 38 - С. 125-140.

10. Ю.Газенбуш О.В. Перец Capsicum Toum.l O.B. Газенбуш //Культурная флора СССР. М-Л. 1958. - Т.20 - С.394-487.

11. Газенбуш В. Л. Перцы./ В. Л. Газенбуш//В кн.: культурная флора СССР,-1956.-Т. 20. С.394-484.

12. Гикало Г.С. Перец./Г.С. Гикало//М.: Колос. 1982. - С. 119.

13. Гусева Jl.И. Методы селекции томата для интенсивных технологий./ Л.И. Гусева/ЛСишинев. 1989.- С.233.

14. Даскалов X. Овощеводство./X. Даскалов/ЛТловдив. 1958. - С. 1-502.

15. Даскалов X. Нови хетерозисни сортове пипер за оранжерейно, парниково и ранно полеко производство./ X. Даскалов, Т. Муртазов// Изв. И.Р. София. -1955. -№ 33. С.3-17.

16. Даскалов X. Нови хибридны сортове пипер за оранжерейно, парниково и ранно полско протзводство. / X. Даскалов, Д. Попова//Селскостоп. Миеъл. -1957. -№9. -С.561-563.

17. Даскалов X. Рщви хибридни сортове пипер/ X. Даскалов, Д. Попова// Ово-щарство и градинарство. Б. 1958. - С.38-42.

18. Даскалов X. Нови ранни гибридны сортове пиперы/ X. Даскалов, Д. Попова// Изв. ИР. София. 1960. - №3. с. 185-186.

19. Дикий С. П. Гетерозис у перца./ С. П. Дикий, Л. И. Студенцова, В. С. Аникеенко //Тр. По прикл. Бот., ген. и сел., 49, вып.2.-1973.

20. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта. / Б.А. Доспехов//М.: Агропромиз-дат. 1985. - С.351.

21. Жуковский П.М. Мировой генофонд растений (мега и микрогеноцентры)./ П.М. Жуковский//В сб.: «Генетические основы селекции растений». М. -1971.-С.88

22. Жученко A.A. Изменчивость и наследуемость хозяйственно-ценных признаков у томатов./ A.A. Жученко// Кишинев: Картя Молд. 1973. - С.157.

23. Игнатова С.И. Селекция тепличных сортов и гибридов томата./ С.И. Игнатова, Н.С. Горшкова, Е.И. Кондакова// В кн. Селекция и семеноводство овощных и бахчевых культур. М. 1989. - С.115-128.

24. Курганская Н.В. Подбор родительских компонентов для получения гетерозисных гибридов томата./ Н.В. Курганская//В сб.: Селекции и семеноводства картофеля и овощебахчевых культур. Алма-Ата. 1979.1. С.74-81.

25. Лудилов В.А., Лудилова М.И. Содержание Р-активных веществ и витамина С в различных видах и сортах перца/ В.А. Лудилов, М.И. Лудилова // Бюллетень ВИР. 1977. - вып.74. - С.27-32.

26. Лудилов В.А. Культура перца на Северном Кавказе./ В.А. Лудилов, Г.С. Гикало, Р.А Гиш//Краснодар: КГАУ. 1999. - С.214.

27. Лукьяненко А. Н. Актуальные вопросы генетики и селекции томата./ А. Н. Лукьяненко, С. Ф. Гавриш// Картофель и овощи. 1982. - №7.- С.37-39.

28. Марфутина В.П. Устойчивость гибридов первого поколения сладкого перца к болезням./ В.П. Марфутина // Тр. мол. учен, и аспирант, по сел. и Семенов, овощ, культ. М. 1969. - вып.2. - С.22-24.

29. Марфутина В.П. К вопросу выведения гетерозисных гибридов перца сладкого для Центрально-Черноземной зоны./ В.П. Марфутина//М. 1970. - Авто-реф. канд. с.-х. наук. - С.27.

30. Милкова Л. Комбинативна способит в диаллелна кръетоска пипер (Capsicum аппиит L.)J Л. Милкова //Генетика и селекция (НРБ). 1979. - т. 12. - №1. -С.62-67.

31. Милованова Л.В. Биохимия перца. Биохимия овощных культур./ Л.В. Мило-ванова// М.-Л. -1961.

32. Пышная О.Н. Баклажаны и перцы./Пышная O.II.//M. 2002. - С. 126.

33. Руководство по апробации овощных культур и кормовых корнеплодов.// М. 1982.-С.46-65.

34. Русанов Б.Г. Перцы и баклажаны./ Б.Г. Русанов//Л.:Агропромиздат. 1988. -С.72.

35. РыжоваН.Н. Молекулярное маркирование линий и полученных на их основе сортов перца сладкого Capsicum аппиит L./ Рыжова H.H., Кочиева Е.З., Пышная О.Н.// Сельскохозяйственная биология. 2010. - № 3. - С.36-40.

36. Струнников В.А. Новая гипотеза: ее научное и практическое значение./ В.А. Струнников//Вестник сельскохозяйственной науки. М. 1983. №1(16). - С.34-40.

37. Тимин О.Ю. Создание гибридов Fi перца сладкого с улучшенным биохимическим составом на стерильной основе./ О.Ю. Тимин//автореф.кан. с/х н. -М.2005,- С.24

38. Турбин Н.В. Гетерозис. Теория и методы практического использования. О принципах и методах селекции растений на комбинационную способность./ Н.В. Турбин, Л.В. Хотылева//Минск,- 1967. С.59-111.

39. Турбин Н.В. Гетерозис и генетический баланс. Гетерозис./ Н.В. Турбин// Минск. 1961.-С.3-34.

40. Турбин Н.В. Генетика гетерозиса и методы селекции на комбинационную способность. Генетические основы селекции растений./ IIB. Турбин// М.-1971. -С.112-165.

41. Филов А.И. Перцы и баклажаны./ А.И. Филов//М.-Л.: Сельхозиздат.- 1956. -С.367.

42. Христова А. Проучване качеството на плодовете на някои хетерозисни сортове пипери./ А. Христова, Д. Попова// Селекостопанска наука. София. -№1.- 1963.

43. Шевцов И.А. Использование инбридинга в гетерозисной селекции. Цитологические и математические подходы к изучению биосистем./И.А. Шевцов// Доклады МОИП. М. 1986. - С.78-81.

44. Шевцов И.А. Применение инбридинга в селекции на гетерозис. Гетерозис (теория и практика)./И.А. Шевцов// Тез. докл. Харьков.-1988. С. 150-151.

45. Шмараев Г.Е. Изучение гетерозиса у перцев, баклажан и огурцов на Приаральской опытной станции./ Шмараев Г.Е., Курятникова P. А.//В кн.: Использование гетерозиса в овощеводстве. Крымская опытно-селекционная станция, ВИР. 1963.- С.225-228.

46. Ahmed N. Inheritance studies in chili (Cspsicum annuum L.). / N. Ahmed // M. Sci. thesis, Punjab. Agr. Uni., Ludhiana.-1981.

47. Ahmed N. Inheritance yield and yield attributing characters in pepper./ N. Ahmed, M.Y. Bhat, M.I. Tanki, G. Zargar //Capsicum and Eggplant Newsletter. 1994. -V13.-P.58-60.

48. Ahmed N. Combining ability analisis for fruit yield and its component characters in sweet pepper {Capsicum annuum L.)./ N. Ahmed, S.H. Khan, M.I. Tanki// Capsicum and Eggplant Newsletter. 1997. - V. 16. - P.72-75.

49. Ahmed N. Inheritance of earliness in red pepper (iCapsicum annuum L.). / N. Ahmed, M.I. Tanki, A.S. Gulzar// Capsicum and Eggplant Newsletter. 1993. -V.12. -P.53.

50. Aktas H. Genetic diversity in some Turkish pepper (iCapsicum annuum L.) genotypes revealed by AFLP analyses./ H. Aktas, K. Abak, S. Sen-soy//African J. Biotechnol. -2009. V.8(18). -P.4378-4386.

51. Angeli H.A. Csokros paprica nemesitese./ ILA. Angeli//Kert. Sroc. Poisk. Kusl., Brest.- 1964.-V. 1(28).

52. Arcade A. Application of AFLP, RAPD and ISSR markers to genetic mapping of European and Japanese larch./ A. Arcade, F. Anselin, P. Faivre Rompant, M.C. Lasage, L.E. Paques, D. Prat //Theor Appl Genet 100.-2000. -P. 299-307.

53. Arumuganathan K. Nuclear DNA content of some important plant species./ K. Arumuganathan, E.D. Earle// Plant Mol. Biol. Rep. 1991. - V.9. - P.208-218.

54. Ashkenazi V. Development of micro satellite markers in potato and their use in phylogenetic and fingerprinting analyses./ V. Ashkenazi, E. Chani, U. Lavi, D. Levy, J. Ilillel, R.E. Veilleux//Genome. 2001. - V.44. - P. 50-62.

55. Avigad G. Sucrose and other disaccharides./ G. Avigad//In Encyclopedia of Plant Physiology New Series, F.A. Loewus and W. Tanners, eds (Berlin: SpringerVerlag). 1982. - V.13A. -P.217-347.

56. Baral J.B. An Updeted Synthesis of the Capsicum Genus/ J.B. Baral, P.W. Bosland //Capsicum and Eggplant Newsletter. -2002. -V.21. P. 11-21.

57. Baudry E. Species and Recombination Effects on DNA Variability in the Tomato Genus./ E. Baudry, C. Kerdelhue, FI. Innan, W. Stephan // Genetics. 2001. -. V.158. P.1725-1735.

58. Behera T.K Relative efficiency of DNA markers (RAPD, ISSR andAFLP) in detecting genetic diversity of bitter gourd (Momordica charantia L.)./ T.K. Behera, A.B.Gaikwad, A.K. Singh, J.E. Staub // J Sei Food Agric.- 2008a.- V. 88. P.733-737.

59. Belletti P. Flow cytometric measurement of nuclear DNA content in Capsicum (Solanaceae)./ P. Belletti, C. Marzachi, S. Lanteri/ZPlant Syst. Evol. 1998. -V.209. -P.85-91.

60. Betlach I. Vivi factoru urodnosti na ulkovy vynos plody Fi hybridy zelwninove papricy(C.aw?wz//w L.)./1. Betlach// Bull. Vyzk. Ustav. Zelin.,01omouc. -1965.

61. Betlach I. Some results of the hybridization in Sweet pepper (C. annuum L.). /1. Betlach//Bull. Uctav. Zelin. Olomouc. 1966. - V.10.-P.99-112.

62. Betlach I. The intensity of photosynthesis of heterotic combinations of sweet pepper./1. Betlach, Frydrych// Bull Univ. Ustav Zelin Olomouc. 1966. - P.99-112.

63. Bosland P.W. Peppers: Vegetable and Spice Capsicums./ P.W. Bosland, E.J. Votava//Crops Production Science in Horticulture 12. CABI Publishing, Wallingford. 2000.

64. Boswell V.R. Improvement and genetics of tomatoes, peppers, and eggplant./ V.R. Boswell//Yearbook of agriculture. In: U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 1937. - P. 176-206.

65. Boukema I.W. Allelism of genes controlling resistance to TMV in Capsicum L./ I.W. Boukema// Euphvtica. 1980. - V.29. - P.433-439.

66. Boukema I.W. Resistanse to TMV in Capsicum chacoense Hunz. is governed by an allele of the L-locus. / I.W. Boukema // Capsicum and Eggplant Newsletter. -1984.-V.3.-P.47-49.

67. Brauer H.O. Untersuchungen über Qualität. Scigenschaften in Fj Hybriden von paprica (C. annum L.)./ H.O. Brauer// Zeitschr. Pflanzenzuchtung. 1962. - V.48.- P.21-27.

68. Brauer H. O. Influencia de los progenifors sorbe la calidan de les hibridos Fi de chile, Capsicum annum L./ H.O. Brauer// Proc caribb. Reg. Amer. Soc. Hort. Sei.- 1963. -P.54-59.

69. Caicedo A.L. Population structure and phylogeography of Solarium pimpinellifolium inferred from a nuclear gene./ A.L. Caicedo, B.A. Schaal //Mol. Ecol. 2004. - V. 13. - P. 1871-1882.

70. Chaim B.A. QTL mapping of fruit-related traits in pepper (Capsicum annuum). A. Paran, R.C. Grube, M.K. Jahn, R. van Wijk, J. PeIeman.//Theor. Appl. Genet. -2001.-V.102.-P.1016- 1028.

71. Chaim B.A. Linkage of the A locus for the presence of anthocyanin and fslO. 1, a major fruit-shape QTL in pepper. / B.A. Chaim, Y. Borovsky, W. De Jong, I. Paran //Theor. Appl. Genet. 2003. - V. 102. - P. 1016 - 1028.

72. Chalukova M.S. Beta-orange mutant in pepper {Capsicum annuum L.)./ M.S. Chalukova, Daskolov, E. Lukarska, D. Baralieva//Capsicum Eggplant Nswl. -1993. V.12. -P.57-58.

73. Chen X. A potato molecular function map for carbohydrate metabolism and transport./ X. Chen, F. Salamini, C. Gebhardt//Theor Appl Genet. 2001. - V.102. -P.284-295.

74. Chengappa S. Cloning, expression and mapping of a second tomato sucrose synthase gene Sus 3./ S. Chengappa, N. Loader, R. Shields// Plant Phisiology. -1998. V.l 18. - P. 1533-1543.

75. Choboczek E. Lancovv heterozyinia papryki atobkicg w porownania z admisnami standerdowyni w stielte dos wlasezen w C.S.R.S.N.R.D. Iw Polsce./ E. Choboczek, I. Karasinska, M. Mijvasova, H. Fajkowska/ZPocrn. Nauk Pol., Scr. A. 1966. -V.91. -P.229-328.

76. Csillery G. Self-eliminating genes suitable for the purpose of hybrid seed production./ G. Csillery//Proc. 4th Eucarpia Meeting of Capsicum Working Group, Wageningen, the Netherlands. 1980b. P.27-28.

77. Csillery G. New Capsicum mutants found on seedling, growth type, leaf, flower and fruit./ G. Csillery//Proc. 5th Eucarpia Meeting of Capsicum and Eggplant Working Group, Plovdiv. 1983. -P.127-130.

78. Daskalov S. Investigation of induced mutants in Capsicum anmium L. III. Mutants in the variety Zlaten Medal/ S. Daskalov // Genet. Plant Breeding. 1973. -V.6.-P. 419-429.

79. Daskalov S. Investigation on induced mutants in sweet pepper (Capsicum annuum L.)./ S. Daskalov// Proc. I st Meeting of the Capsicum Breeding and Genetics, Budapest, Hungary. 1974. -P.81-90.

80. Daskalov S. Investigations on mutagenesis and heterosis in peppQr(Capsicum annuum L.). /S. Daskalov//D.Sc. Thesis. 1987 in Bulgarian.,

81. Daskalov S. Updated Capsicum gene list. Capsicum and Eggplant./ S. Daskalov, J. Poulos//Newsletter. 1994. -V. 13. - P. 15-26.

82. Deshpande R.B. Studies in Indian chillies. 3. The inheritance of some characters in Capsicum annuum L./ R.B. Deshpande// Indian Jour. Agr. Sci. 1933. - V.3. -P.219-300.

83. Deshpande R.B. Studies in Indian chillies. 4. Inheritance of pungency in Capsicum annuum L.I R.B. Deshpande//Indian J. Agr. Sci. 1935. - V.5. - P.513-516.

84. Doshi K.M. Expression of heterosis in Chilli (Capsicum annuum L.)/K.M. Doshi// Capsicum and eggplants Newsletter. 2000. - V.19. - P.66-67.

85. Doshi K.M. Combining ability analysis for fresh fruit yield and its components over environments in chilli (Capsicum annuum L.)/ Doshi K.M., Shukla P.T.// Capsicum and eggplants Newsletter. 2000. - V.19. - P. 82-85.

86. Draffehn A.M. Natural diversity of potato (Solanum tuberosum) invertases. / A.M. Draffehn, M. Sebastian, L. Li, C. Gebhardt//BMC Plant Biology. 2010. - V.10. -P.271-286.

87. Edwards S.K Simple and rapid method for the preparation of plant genomic DNA for PCR analysis./ S.K. Edwards, J.C. Thompson// Nucleic Acids Res. 1991. -V.19. - P. 1349.

88. Erwin A.T. The Pepper./ A.T. Erwin//Jova Agric. Exp. Sta. Bull.-1932.- P.293.

89. Eshbaugh W.H. The taxonomy of the genus Capsicum (Solanaceae)./ W.H. Eshbaugh// Phytologia. 1980. - V.47. - P.153-166.

90. Eshbaugh W.H. Peppers: Histori and explatation of serendipitous new crop discovery./ W.H. Eshbaugh, J.E. Janickand//Simon New Crops. Wiley, New York. 1996.

91. FAO Production year book. 2010. - P.256

92. Fettke J. Eukaryotic starch degradation: integration of plastidial and cytosolic pathways./ J. Fettke, M. Hejazi, J. Smirnova, E. Hochel, M. Stage, M. Steup// Journal of Experimental Botany. 2009. - V.60 - P.2907-2922.

93. Fu H. Sink- and vascular-associated sucrose synthase functions are encoded by different gene classes in potato./ Fu H., Park W.DV/The Plant Cell. 1995. - V.7. -P. 1369-1385.

94. Fu FI. High-level tuber expression and sucrose inducibility of a potato Sus4 sucrose synthase gene require 5' and 3' flanking sequences and the leader intron./ H. Fu, S.Y. Kim, W.D. Park//Plant Cell. 1995. - V.7. - P. 1387-1394.

95. Gaddagimath W.B. Genetics analysis of yield and components in chili (Capsicum annuum L.)/ W.B. Gaddagimath // Mysore J. Agr. Sci. 1988. -V.22. -P.51.

96. Gill PI.S. Correlation path coefficient and multiple regression analysis in sweet pepper./ H.S. Gill, B.M. Asowa, P.C. Thakur, T.C. Thakur// Indian I. Agr. Sci. 1977. - V.47. - P.408-410.

97. Gopalkrishmen T.R. Heterosis and combining ability analysis in chilli./ T.R. Gopalkrishmen//Indian I. Genet. 1987. - V.47(2). - P.205-209.

98. Gopalakrishnan T.R. Inheritance of clusterness and fruit orientation in chilli {Capsicum annuum L.)./ T.R. Gopalakrishnan, P.K. Gopalakrishnan, K.V. Pe-ter//Indian J. Genetics. 1989. - V.49. -P.219-222.

99. Greenleaf W.H. Inheritance of resistance to tobacco etch virus in Capsicum frutescens and in Capsicum annuum.I W.H. Greenleaf//Phytopathology.- 1956. -V.46. P.371-375.

100. Greenleaf W.H. Pepper breeding./ W.H. Greenleaf// In: Mark J. Bassett (ed.). Breeding vegetable crops. AVI Publishing, Westport, Conn.- 1986. P. 67134.

101. Griffing B.A. Generalized treatment of the use of diallel in guantitative inheritance/B.A. Griffing//Heredity. -1956. V.10. - P. 31-50.

102. Gustafsson A. Apomixis in Higher Plants: the mechanism of apomixis./ A. Gustafsson// In: Lunds Universitets Arsskrift. 1946. - P. 1-364.

103. Hanggi E. Sucrose synthase expression pattern in young maize leaves: implications for phloem transport./ E. Hanggi, A.J. Fleming// Planta. 2001. -P.326-329.

104. Herison C. Rustikawati and Sudarsono Cienetics of resistance against cucumber mosaic virus (CMV) in hot pepper (Capsicum annuum L.)./ C. Heri-son//Capsicum Eggplant Nswl. 2004. - V.23. - P. 113-116.

105. Hiroaki E. Genetic diversity of the «peruvianum-complex» {Lycopersicon peruvianum L. Mill, and L. chilense Dun.) revealed by RAPD analysis./ E. Hiroaki, I. Hiroyuki, T. Tadashi, I. Shigeru//Euphytica.- 2000. V.116. -P.23-31.115. http://www.licor.com//

106. Hurtado-Hernandez H. Inheritance of mature fruit colour in Capsicum annuum L./ H. Hurtado-Hernandez, P. Smith// Journal of Heredity. 1985. - V.76. -P.211-213.

107. Jaccard P. Nouvelles rescherches sur la distribution florale./ P. Jaccard //Bull. Soc. Vaud. Sci. Nat. 1908. - V.44. - P.223-270.

108. Ji X. Structure, evolution and expression of the two invertase gene families of rice./ X. Ji, W. Van den Ende, A. Van Laere// Molecular Evolution. 2005. -V.60. -P.615-634.

109. Joshi S. Resalts of the combining ability studies in sweet pepper {Capsicum annuum L.)./ S. Joshi, B. Singh//Capsicum Newsletter. -1987. № 6. - P.49-50.

110. Kamble C. Combining ability for earliness and productivity in sweet pepper (Capsicum annuum L.)./ C. Kamble, R. Mulge, M.B. Madalageri//Karnataka J. Agric. Sci. 2009. - V.22(l). - P. 151 -154.

111. Kardolus J.P. The potential of AFLPs in biosystematics: a first application in Solanum taxonomy (Solanaceae)./ J.P. Kardolus, H.J. van Eck, R.G. van den Berg//Plant Systematics and Evolution 210. 1998. - P.87-103.

112. Karp A. DNA markers, a global overview./ A. Karp, K.J. Edwards//In: Caetano-Anolles G. and Gresshoff P.M. (eds), DNA Markers, Protocols, Applications, and Overviews. Wiley-Liss, New York. 1997. -P.364.

113. Kaul B.L. Heterosis and combining ability studies for some fruit characters in bell pepper (Capsicum annuum L.)./B.L. Kaul, P.P. Sharma// Vegetable Science. 1988. -V. 15. - P. 171-180.

114. Kim K.S. Replication of coxsackievirus B3 in primary cell cultures generates novel viral genome deletions./ K.S. Kim, N.M. Chapman, S. Tracy//J. Virol. 2008. - V.82 (4). - P.2033-2037.

115. Koch K.E. Sucrose metabolism: regulatory mechanisms and pivotal roles in sugar sensing and plant development./ K.E. Koch//Curr. Opin. Plant Biol. 2004. —V.7. -P.235-246.

116. Kochieva E.Z. Assessment of genetic relationships in the genus Capsicum using different DNA marker systems./ E.Z. Kochieva, N.N. Ryzhova, W. van Dooijeweert //Eucarpia. 2004. - P.44-50.

117. Kumar O.A. Ascorbic Acid Heterosis in Chili Peppers (Capsicum L.)./ O.A. Kumar, S.S. Tata// Journal of Phytology. 2010. - V.2. - № 2

118. Legesse G. Combining ability study for green fruit yield and its components in hot pepper {Capsicum annuum L.). / G. Legesse//Acta Agronomica Hungarica. -2000. V.48(4). -P.373-380.

119. Li L. Statistical epistasis between candidate gene alleles for complex tuber traits in an association mapping population of tetraploid potato./ L. Li, M.J. Paulo, F. van Eeuwijk, C. Gebhardt //Theor Appl Genet. 2010. - V. 121(7). - P. 13031310.

120. Lippert L.F. Gene list for the pepper./ L.F. Lippert, B.O. Bergh, P.G. Smith.//J. Hered. 1965. -V.56. -P.30-34.

121. Lippert L.F. Cytogenetics of the vegetable crops./ L.F. Lippert, P.G. Smith, B.O. Bergh// Garden pepper, Capsicum sp. Bot. Rev. 1966. - V.32. -P.24-55.

122. Lippert L.F. Heterosis and combining ability in chilli peppers by diallel analysis./ L.F. Lippert//Corp. Sci. 1975. - V. 15. - №3. - P.323.

123. Martin J. A. Several types of sterility in Capsicum frutescens./ J. A. Martin, J.H. Crawford//Proc. Amer. Soc. Hort. Sci. -1951. V.57. - P.335-338.

124. Menendez C.M. Cold-sweetening in diploid potato. Mapping QTL and candidate genes./ C.M. Menendez, E. Ritter, R. Scha 'fer-Pregl, B. Walkemeier, A. Kalde, F. Salamini, C. Gebhardt //Genetics. -2002. V. 162. P. 1423-1434.

125. Michna M. Work on paprika breeding./ M. Michna//In.: Roczniki wijzszej Szkoij Rolniczej wPoznanin. 1966. - V.29. - P. 169-175.

126. Michna M. Zjawisko heterozii I rwato se efectu neterozyjnego u capsicum annum L./M. Michna/ZHowowla Roslin aklimatuz. Nasiennie two. 1963. - V.7. -P.531-581.

127. Milcova L.I. Genetics of guantitative charactters in sweet pepper./L.I. Milcova//Acta Universities of Agriculture. Brno (Facultus Agronomics). 1986. -V.32(4).-P. 379-384.

128. Milkova L.I. Combining ability in the pepper (Capsicum annuum L.)./L.I. Milcova// "Capsicum 77" 3 congres Eucarpia genet, et selec. Piment, AVIGNON-MONTPAVET. 1977. -P.171.

129. Minamiyama Y. An SSR-based linkage map of Capsicum annuum./ Y. Minamiyama, M. Tsuro, M. Hira //Mol Breeding. 2006. - V.18. - P. 157-169.

130. Miranda I.E.C. Diallel analysis in sweet pepper. I. Combining ability./ I.E.C. Miranda, C.P. De Costa, C.D. Cruz//Analise Brasileira deGenetica. 1988. -V.l 1(2).-P.431-440.

131. Mishra R.S. Result of heterosis breeding in chili (Capsicum annuum L.)./ R.S. Mishra, R.E. Lotha, S.N. Mishra, P.K. Paul, H.N. Mishra//Capsicum Newsletter. -1988. V.7. - P.49-50.

132. Mital R.K., Singh H. N. Genetics of yield and its components in tomato \\ Indian J. Agr. Sc., 1978.- V. 48.- №3,- P. 159-162.

133. Moury B. A CAPS marker to assist selection of tomato spotted wilt virus (TSWV) resistance in pepper./ B. Moury, S. Pflieger, A. Blattes, V. Lefebvre, A. Palloix//Genome. 2000. - V.43. - P. 137-142.

134. Odland, A.M. Porter. //Proc. Amer. Soc. Ilort. Sci. 1938. - V.36. -P.647-651.

135. Panday S.C. Studies on heterosis in Chillies Capsicum annuum L./ S.C. Panday, M.L. Pandita, J. Dixit//Haryana J. Hort. Sci. 1981,-V.10. -P.l 16-121.

136. Paran I. Variation in Capsicum annuum revealed by RAPD and AFLP markers./1. Paran, E. Aftergoot, C. Shifriss//Euphytica. 1998. -V.99. - P. 167-173.

137. Patel I.A. Combining ability analysis for green fruit yield and yield components in chilli (Capsicum annuum L.)./1.A. Patel, M.R. Shukla, K.M. Doshi// Capsicum and Eggplant Newsletter. 1998. - №17. - P.34-38.

138. Pathak C.S. Male and female sterility in chilli pepper (Capsicum annuum L.)./ C.S. Pathak, D.P. Singh, A.A. Deshpande// Capsicum Nswl. 1983b. - V.2. -P.95-96.

139. Payakhapaab S. Evaluation of heterosis and combining ability of yield components in Chillies./ S. Payakhapaab, D. Boonyakiat, M. Nikornpun//Journal of Agricultural Science. 2012. - V.4. - P. 154-161.

140. Pearson O.H. Heterosis of vegetable crops./ O.H. Pearson//IN.: Heterosis. -1983. -P.181-225.

141. Peterson P.A. Linkage of fruit shape and color genes in Capsicum.lP.A. Peterson//Genetics. -1959. V.44. -P.407-419.

142. Pochard E. A major gene with quantitative effect on two different viruses, CMV and TMV./E. Pochard// Capsicum Nswl. 1982. - V.I.- P.56-58.

143. Popova D. The effect of certain vitamins on the heterosis effect of F1 in peppers (C.annuum L.)./ D. Popova, I. Mihailov// C. R. Acad. Sci., Bulgaria. -1970. -V.3.

144. Popovsky S. Molecular genetics of the y locus in pepper: its relation to capsanthin-capsorubin synthase and to fruit color./ S. Popovsky, I. Paran// Theor Appl Genet. 2000. -V.101. - P.86-89.

145. Portis E. Effect of farmer's seed selection on genetic variation of landrace population of pepper (C. annuum L.), grown in North-west Italy./ E. Portis, A. Acquadro, C. Comino, S. Lanteri//Genet. Res. Crop Evol.-2004. -V.51.-P.581-590.

146. Raj put S. Reproducibility testing of RAPD and SSR markers in tomato./ S. Rajput, G.K.J. Wable, K.M. Sharma, P.D. Kubde, S.A. Mula//African J. Biotechnol. 2006. - V.5. - P. 108-112.

147. Rao G.U. Polygalacturonase: A candidate gene for the soft flesh and deciduous fruit mutation in Capsicum.! G.U. Rao, I. Paran//Plant Mol. Biol. -2003. -V.51. -P.135-141.

148. Renganayaki K . Genetic diversity among Texas bluegrass genotypes (Poaa-rachnifera Torr.) revealed by AFLP and RAPD markers./ K. Renganayaki, J.C. Read, A.K. Fritz//Theor. Appl. Genet. 2001. - V. 102. - P. 1037-1045.

149. Ruan Y.L. Suppression of sucrose synthase gene expression represses cotton fiber initiation, elongation and seed development./ Y.L. Ruan, D.J. Llewellyn, R.T. Furbank//Plant Cell. 2003. - V. 15. - P.952-964.

150. Sanatombi K. DNA profiling of Capsicum landraces of Manipur./K. Sanatombi, S. Sen-Mandi, G.J. Sharma//SciHort. 2010. - V. 124. P.405-408.

151. Sarwat M. Analysis of genetic diversity through AFLP, SAMPL, ISSR and RAPD markers in Tribulus terrestris./M. Sarwat, S. Das, P.S. Srivastava//A medicinal herb plant cell Reports. 2008. - V.27. - P.519 -528.

152. Sato T. Intercellular localization of acid invertase in tomato fruit and molecular cloning of a cDNA for the enzyme./T. Sato, T. Iwatsubo, M. Takahashi// Plant Cell Physiology. 1993. - V.34. -P.263-269.

153. Sensi E. DNA fingerprinting and genetic relatedness among cultivated of OleaeuropaeaL. estimated by AFLP analysis./ E. Sensi, R. Vignani, M. Scali, E. Masi, M. CrestiV/SciHort. 2003. - V.97. - P.379-388.

154. Shifriss C. A male sterile (ms-2) gene in 'California Wonder1 pepper (C. annuum).! C. Shifriss, I. Rylski//HortScience.- 1972. V.7. -P.36.

155. Shuh D.M. Gene transfer of multiple flowers and pubescent leaf from Capsicum chinense into Capsicum annuum backgrounds./ D.M. Shuh, J.F. Fontenot//J. Am. Soc. Hort. Sci. 1990. - V.115.-P.499-502.

156. Singh A. Combining ability in chilli./A. Singh, H.N. Singh// Indian J. Genet. And Plant Breed. 1976. - V.36. - №2. - P.201.

157. Singh A. Genetic components for yield and its contributing fruits in chili {Capsicum annuum L.)./A. Singh, H.M. Singh//Haryana J. Hort. Sci. 1977. - V.6. -P.155-160.

158. Singh A. Combining ability in chilli./A. Singh, FI.M. Singli//Indian J. Agr. Sci. 1978. - V.48. - №1. - P. 29-34.

159. Soh A.C. Heterosis and combining ability in diallel cross of chilli {Capsicum annuum L.)./A.C. Soh, T.C. Gap, K.M. Graham// Agr. Sci. 1976. - V.87. - №2 -P.447-449.

160. Soleimani V.D. AFLP and pedigreebased genetic diversity estimates in modern cultivars of durum wheat Triticum turgidum L. subsp. durum (Desf.) Husn../V.D. Soleimani, B.R. Baum, D.A. Johnson//Theor. Appl. Genet. 2002.104. -P.350-357.

161. Smith P.G. Inheritance of brown and green mature color in peppers./ P.G. Smith//J. Hered. 1950. - V.41. -P.138-140.

162. Sprague G.F. General use specific combining ability in single crosses of corn. / G.F. Sprague, L.A. Tatum//J. Amer. Soc. Agron. -1942. V.34. -P.923-931.

163. Stewart C. The Pun I gene for pungency in pepper encodes a putative acyl-transferase./C. Stewart, B.C. Kang, K. Liu, M. Mazourek, S.L. Moore, E.Y. Yoo, B.D. Kim, I. Paran, M.M. Jahn//Plant J. 2005. - V.42. -P.675-688.

164. Suthanthirapandian R. Combining ability for yield and yield components in chillies (Capsicum annuum L.)./ R. Suthanthirapandian, K.G. Shanmugavelu// South Indian Hort. V.40(4). - 1992. - P.202-206.

165. Talhinhas P. AFLP, ISSR and RAPD markers reveal high levels of genetic diversity among Lupinus spp./P. Talhinhas, J. Neves-Martins, J. Leitao// Plant Breed. 2003. - V.122. - P.507-510.

166. Tamiru M. Genetic diversity in yam germplasm from Ethiopia and their relatedness to the main cultivated Dioscorea species assessed by AFLP markers./ M. Tamiru, H.C. Becker, B.L. Maass//Crop Sci. 2007. - V.47. -P.1744-1753.

167. Thakur M.R. Inheritance of ascorbic acid content in pepper./ M.R. Thakur, H.C. Brar// SABRO. 1975. - V.7. - P.225-229.

168. Thakur P.C. Diallel analisis of some quantitative traits in sweet pepper./ P.C. Thakur , H.C. Gill, P.M. Bhagchndani//Indian J. Agric. Sci. 1981. - V.50. -P.811-817.

169. Vos P. AFLP: a new technique for DNA fingerprinting./ P. Vos, R. Hogers, M. Bleeker, M. Reijans, T. van de Lee, M. Homes, A. Frijters, J. Pot, J. Peleman, M. Kuiper, M. Zabeau//Nucleic Acids Research.- 1995. V.23. - P. 4407-4414.

170. Walsh B.M. Phylogenetic relationships of Capsicum (Solanaceae) using DNA sequences from two noncoding regions: the chloroplast atpB-rbcL spacer region and nuclear waxy introns./ B.M. Walsh, S.B. Hoot// Int. J. Plant Sei. 2001.-V.162. -P. 1409-1418.

171. Wang, F. Isolation and Sequencing of Tomato Fruit Sucrose Synthase cDNA Text. / F. Wang, A. C. Smith, M. Brenner // Plant Physiology 1993. - V. 103 -P. 1463-1464.

172. Wang H. Advances in the heterosis breeding using the CMS lines./ H. Wang, D. Wang, Y. Li// J. Guangdong Agri. Sei. 2003. - V.5 - P. 16-18.

173. Yuan J. Study of floral organ morphology and inheritance of a new functional male sterile pepper line./ J. Yuan, S. Li// Hereditas (Beijing). 2000. - V.22. -P.28-30.

174. Zeeman, S.C. The diurnal metabolism of leaf starch Text. / S. C. Zeeman, S. M. Smith, A. M. Smith // Biochem 2007. - V. 401 - P. 13-28.

175. Zrenner R. Evidence of the crucial role of sucrose synthase for sink strength using transgenic potato plants (Solanum tuberosum L.)./ R. Zrenner, M. Salanou-bat, L. Willmitzer, U. Sonnewald// Plant J. 1995. - V.7. - P.97-107.