Использование фаговых мини-антител для иммуноанализа диагностически-значимых антигенов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Фомин, Александр Сергеевич

• Фомин, Александр Сергеевич
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Фомин, Александр Сергеевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Общие сведения об иммунной системе; биосинтез поликлональных антител

1.2. Получение мини-антител с использованием технологии фагового дисплея

1.3. Иммунохимические методы в биотехнологической и

микробиологической практике

Глава 2. Собственные исследования

2.1. Объекты, материалы и методы исследований

2.1.1. Объекты исследования

2.1.2. Выделение ферритина из печени крупного рогатого скота

2.1.3. Процедура аффинной селекции мини-антител

2.1.4. Дот-иммуноанализ

2.1.5.Выделение перитонеальных клеток

2.1.6. Микроскопические методы

2.1.7. Фармакодинамические методы

2.1.8. Хроматографический анализ

2.1.9. Получение наночастиц золота и их конъюгатов с антителами

2.2. Результаты исследований и их обсуждение

2.2.1. Применение антител для детекции ферритина

2.2.1.1. Получение мини-антител на ферритин и их использование в дот-анализе

2.2.1.2. Получение поликлональных антител на ферритин и исследование уровня выработки интерлейкинов в процессе иммунизации

2.2.1.3. Конструирование сэндвич-метод ИФА для обнаружения ферритина в сыворотке крови крупного рогатого скота

2.2.1.3.1. Протокол прямого ИФА ферритина при помощи поликлональных антител

2.2.1.3.2. Протокол прямого ИФА ферритина при помощи фаговых антител

2.2.1.3.3. Исследования чувствительности и специфичности поликлональных и фаговых антител на ферритин

2.2.1.3.4. Протокол выявления ферритина с помощью фаговых и поликлональных антител сэндвич-методом

2.2.2. Использование мини-антител для определения биодинамических , параметров различных лекарственных форм диминазена

2.2.3. Применение мини-антител для детекции возбудителя туберкулеза животных

2.2.4. Получение мини-антител к поверхностным антигенам АгояртПит

ЬгаяИете Бр245 и их использование для детекции микробных клеток

Заключение

Выводы

Список сокращений и условных обозначений

Список литературы

ч

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Использование фаговых мини-антител для иммуноанализа диагностически-значимых антигенов»

Введение

Актуальность темы. Успехи современной медицины, ветеринарии и фитопатологии зачастую зависят от того, удается ли детектировать специфические антигены в организме животных или человека, в растениях, почве, воде или других объектах окружающей среды. В частности, профилактику и лечение многих инфекционных заболеваний существенно облегчает точное и быстрое обнаружение вызвавших их патогенных микроорганизмов. Для диагностики многих заболеваний необходимо сначала вырастить культуру потенциального патогенного микроорганизма и проанализировать спектр его физиолого-биохимических особенностей. Хотя классические микробиологические тесты проверены временем и обладают достаточно высокой специфичностью, они весьма трудоемки и дорогостоящи. Кроме того, имеются сложности идентификации тех патогенных микробов, которые неактивно растут в культуре или совсем не поддаются культивированию. Чтобы устранить эти принципиальные ограничения был разработан (наряду с методиками молекулярной диагностики) широкий спектр иммунохимических методов [5, 122, 149].

К иммунохимическим относятся методы, основанные на взаимодействии растворимых или корпускулярных антигенов (Аг) со специфическими антителами (Ат). Как сами методы, так и их приложения в клинической лабораторной практике чрезвычайно разнообразны [35].

Степень разработанности проблемы. Современная иммунохимия предлагает широкий ассортимент качественных и количественных методов анализа Аг, отличающихся по чувствительности и степени сложности [13, 113, 132].

В основе современного иммунохимического исследования лежат, прежде всего, разнообразные модификации иммунохроматографических и иммунопреципитационных методов [40, 99]. Эти методы, основанные на обнаружение различных Аг, варьируются от простых (иммуноанализ) к более сложным (иммуносенсоры).

Для оценки качества современных иммунохимических анализов есть определенные требования, которых придерживаются в современной иммунодиагностике. Во-первых, Ат для проведения анализа должны соответствовать определенным условиям для создания надежного биоспецифического взаимодействия (нормы ISO 15087). Во-вторых, нормы наличия целевых соединений (Аг) в матрице продукта, который будет исследоваться, должны быть приняты во внимание в связи с пределом обнаружения в рабочем диапазоне анализа [134].

Однако в целом все иммунохимические методы зависят, в первую очередь, от качества специфических Ат, используемых для получения диагностических систем.

Одним из способов улучшения качества Ат стал метод получения моноклональных антител с использованием гибридомной технологии [121]. Однако гибридомы, как и большинство культур животных клеток, растут довольно медленно, не достигая высокой плотности, и требуют дорогих сложных сред. Получаемые моноклональные антитела весьма дороги, что не дает возможности широко использовать их в клинической практике. Для решения этой проблемы, были созданы своего рода «биореакторы» с использованием генетически модифицированных бактерий и растений. Для использования Ат в качестве иммунотерапевтических средств достаточно только антигенсвязывающей области (Fab- или scFv-фрагмента), т.е. присутствие тяжелого Fc-фрагмента антитела необязательно [5].

Одним из таких методов является технология фагового дисплея Ат, ее основоположниками являются Джон Маккаферти с соавт. [157]. Ими было показано, что антиген-связывающие фрагменты Ат (scFv, Fab), эксппонированные на поверхности нитевидных фагов, возможно выделить с использованием иммобилизации Аг. Использование в диагностичеких методах мини-антител, отобранных из рекомбинантной фаговой библиотеки является весьма актуальной проблемой современной биотехнологии и микробиологии.

Цель работы - использование высокоспецифичных фаговых мини-антител и их применение для детекции биоактивных молекул и микроорганизмов в биологических объектах.

Задачи исследования:

1. Выделить ферритин из печени коров и получить к нему специфические мини-антитела с использованием фагового дисплея антител.

2. Разработать эффективный метод идентификации ферритина с использование поликлональных и фаговых антител.

3. Получить мини-антитела на диминазен и разработать метод детекции диминазена в биологических жидкостях с использованием иммунодот-анализа.

4. Разработать методы применения мини-антител на туберкулин для идентификации возбудителя туберкулеза с помощью световой и электронной микроскопии и твердофазного иммуноанализа.

5. Оценить эффективность применения фаговых мини-антител для иммуноанализа бактерий рода Azospirillum.

Научная новизна работы. Впервые был разработан метод идентификации ферритина в сыворотке крови коров методом

твердофазного иммуноанализа с использованием мини-антител на ферритин. Разработан метод индикации диминазена в биологических жидкостях методом иммунодот-анализа с использованием мини-антител на диминазен. Впервые получены мини-антитела на туберкулин и изучена возможность их применения для идентификации возбудителя туберкулеза методами световой и электронной микроскопии и твердофазного иммуноанализа. Полученные мини-антитела на антигенные структуры бактерий рода АгояртИит предложено использовать для детекции данного микроорганизма микроскопическими методами.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные в настоящей работе высокоспецифичные мини-антитела на ферритин, диминазен, туберкулин и антигены азоспирилл и разработанные эффективные методики их применения для идентификации этих (и других) диагностически значимых антигенов в биологических объектах, являются перспективным направлением при создании разнообразных тест-систем для решения широкого круга научных и прикладных задач в области микробиологии, биотехнологии, ветеринарии и медицины. По материалам диссертационной работы опубликовано учебно-методическое пособие «Этиология, диагностика и профилиактика железодефицитной анемии поросят», для студетов 3, 4, 5-го курсов специальности «Ветеринария» (в соавторстве с Винниковым Н.Т., Анниковой Л.В., 2010). Материалы исследований используются в учебном процессе и научной работе ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ», ИБФРМ РАН, ФГБОУ ВПО «Донской ГАУ», ФГБОУ ВПО «Воронежский ГАУ», УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины» (Республика Беларусь).

Методология и методы исследования. Методологической базой послужили труды отечественных и зарубежных ученых по вопросам

получения моноклональных и поликлональных антител и их использование в иммунологических тест системах. Основу данного исследования составляют комплексный анализ и системный подход в изучении рассматриваемой темы.

При проведении исследования и изложения материала автором были применены общенаучные методы: теоретико-методологический анализ литературных источников, эмпирические методы исследования в форме наблюдения, эксперимента, описания, измерения и сравнительно-сопоставительного анализа.

Применение указанных методов, а так же анализ фактического материала позволили обеспечить объективность полученных выводов и результатов.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Использование фаговой библиотеки антител обеспечивает получение in vitro мини-антител против ферритина, диминазена, туберкулина и азоспирилл.

2. Одновременное использование поликлональных и мини-антител для диагностики ферритина методом ИФА является оптимальным способом детекции ферритина в биологических жидкостях животных.

3. Полученные при помощи фаговой библиотеки мини-антитела к диагностически значимым антигенам обладают высокой специфичностью и чувствительностью и могут быть использованы для создания современных иммунологических тест-систем.

Апробация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на: IX семинаре

Ассоциации практикующих ветеринарных врачей РФ (Казань, 2010); V Всероссийской конференции молодых ученых «Стратегия взаимодействий микроорганизмов и растений с окружающей средой» (Саратов, 2010); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии» (Краснодар, 2011); Международной научно-практической конференции «От теории - к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины» (Саратов, 2011); IV съезде биофизиков России (Нижний Новгород, 2012); VIII молодежной школе-конференции с международным участием «Актуальные аспекты современной микробиологии» (Москва, 2012).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Работа выполнена на кафедре «Терапия, акушерство и фармакология» факультета ветеринарной медицины и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова.

Работа частично поддержана грантом Министерства образования и науки Российской Федерации № 8852 (2012-2013 гг.).

Структура и объем диссертации: диссертация состоит из введения, литературного обзора, собственных исследований, включающих объекты, материалы и методы исследования, результаты исследований и их обсуждение, а также заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 118 страницах, иллюстрирована 36 рисунками и включает 4 таблицы. Список литературы включает в себя 190 источников.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Общие сведения об иммунной системе; биосинтез поликлональных антител

В настоящее время система иммуннитета рассматривается как контрольный механизм, который обеспечиваеет целостность организма и его индивидуальность. Действие иммунй сисеммы основано на способности различать собственные структуры организма и чужеродные генетически, а также элиминировать и перерабатывать последние. Началом всякой иммунологической реакции является процесс распознавания Аг: если иммунная система организма определяет, что это «чужое», а не «свое», то запускаются механизмы иммунного ответа [10].

Система врожденного и приобретенного (адаптивного) иммунитета, фибринолиз и гемостаз является единой гуморально-клеточной защитной системой организма (ретикулоэндотелиальная система). В общей работе этой системы основную роль играют лейкоциты (лимфоциты, моноциты и др.), система комплемента, макрофаги и эндотелий сосудистой стенки [18].

Как правило, иммунный ответ основан на распознавании патогена или другого чужеродного вещества и запуска неспецифических или специфических реакций, направленных на их устранение. В широком смысле, все разнообразие форм иммуннологического ответа разделяют на два типа - врожденный и приобретенный (адаптивный) иммунитет. Принципиальное различие между этими двумя типами иммунных реакций состоит в том, что адаптивный иммунитет обладает высокой специфичностью по отношению к каждому конкретному виду антигена [34].

Принято разделять естественный (врожденный) и адаптивный (приобретенный) иммунитет. Врожденный иммунитет обеспечивает природную устойчивость организма. Основной механизмам этого типа резистентности - фагоцитоз. Если возбудитель не устраняется путем фагоцитоза, в организме синтезируются сенсибилизированные лимфоциты и Ат (иммуноглобулины). Их специфическое взаимодействие с чужеродными Аг обеспечивает необходимую защиту. Иммуноглобулины составляют основу адаптивного гуморального иммунного ответа. Его можно приобрести пассивно - с помощью иммунной сыворотки. Сенсибилизированные лимфоциты обеспечивают клеточный иммунитет [21].

Система иммунитета образована специализированными органами и клетками. К клеткам иммунной системы относят лимфоциты, фагоциты, гранулярные лейкоциты, тучные клетки, а также несколько типов эпителиальных и ретикулярных клеток. Органы иммунной системы представлены костным мозгом, вилочковой железой, селезенкой, лимфатическими узлами, пейеровыми бляшками, миндалинами и другими скоплениями лимфоидных клеток. Иммунная система состоит из огромного количества клеток. Часть их локализована в органах иммунной системы. Другие разрознены и способны самостоятельно передвигаться по всему организму [28].

Лимфоидные органы (или органы иммунной системы) подразделяют на два типа: первичные (центральные) и вторичные (периферические). В центральных органах созревание лимфоцитов происходит без существенного влияния Аг, развитие периферических, напротив, непосредственно зависит от антигенного воздействия. Лишь при контакте с Аг в них начинаются процессы пролиферации и дифференцировки [56].

К центральным органам иммунной системы относят тимус и сумку Фабрициуса {Bursa Fabricii), обнаруженную только у птиц. У млекопитающих роль сумки Фабрициуса, возможно, выполняет костный мозг, в котором вырабатываются стволовые клетки - предшественники лимфоцитов. Полного эквивалента сумки Фабрициуса у млекопитающих обнаружить, пока не удалось. Оба центральных органа иммунной системы являются местами дифференцировки определенных популяций лимфоцитов: в тимусе образуются тимусзависимые, или Т-лимфоциты, а в сумке Фабрициуса - В-лимфоциты [93, 104].

К периферическим лимфоидным органам относят селезенку, лимфатические узлы, миндалины, а также ассоциированную с кишечником и бронхами лимфоидную ткань. К моменту рождения они еще практически не сформированы, так как контакта с Аг не было. Лимфопоэз осуществляется в них лишь при наличии антигенной стимуляции. Периферические органы иммунной системы заселяются Т- и В-лимфоцитами из центральных органов, при этом каждая популяция лимфоцитов мигрирует в определенные области периферических органов, которые называются тимусзависимыми и тимуснезависимыми зонами. Экспериментально было показано, что тимусзависимые зоны у неонатально тимэктомированных мышей практически лишены лимфоцитов, в то время как тимуснезависимые зоны заселены нормально [106].

Большинство лимфоцитов периферических лимфоидных органов не фиксированы в них постоянно, а через определенное время, в основном после контакта с Аг, включаются в рециркуляцию лимфоцитов. За небольшим исключением (например, передняя камера глаза) лимфоциты способны достигнутть практически всех систем органов, так что ни один Аг не остается незамеченным [29, 186]. Кроме распознавания Аг они

отвечают за, передачу информации в другие органы и клетки иммунной системы и за защитные механизмы организма в целом [55].

Лимфоциты подразделяются на три группы: 1) Т-клетки (тимусного происхождения), 2) В-клетки (бурсального или костно-мозгового происхождения), 3) «ни Т, ни В» («нулевые» лимфоциты), к которым относится натуральные киллеры и ряд других мононуклеарных клеток.

Каждый клон лимфоцитов способен распознавать определенный Аг с помощью специфических рецепторов. Поскольку число возможных Аг практически безгранично, иммунная система не в состоянии заранее синтезировать все возможные клоны, которые могут когда-нибудь потребоваться. Проблема решается благодаря тому, что гены, кодирующие рецепторы, способны к рекомбинации, дающей огромное число новых сочетаний [89].

На поверхности В-клеток рецепторами для Аг служат специфические иммуноглобулины. После того как с их помощью В-клетка связывает растворимый Аг, происходит ряд процессов (пролиферация, дифференцировка), завершающихся секрецией молекул иммуноглобулина, которые представляют собой специфические Ат к данному Аг [19].

Т-клетки не имеют поверхностных но способны узнавать Аг, пользуясь Т-клеточными рецепторами - своей главной структурой иммунологического узнавания - и привлекая дополнительно молекулы межклеточной адгезии. Гены, кодирующие Т-клеточные рецепторы, принадлежат к суперсемейству генов иммуноглобулинов. Как и гены они могут подвергаться рекомбинациям, в результате которых возникает большое количество клонов Т-клеток, каждый из которых способен специфически реагировать на какой-либо один Аг.

Обе популяции лимфоцитов разделяются на субпопуляции по функциональным характеристикам или по поверхностным маркерам. Располагая антилимфоцитарными моноклональными Ат, можно идентифицировать ряд субпопуляций лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности сочетание определенных молекул. Эти поверхностные маркеры получили название кластеров дифференцировки [30].

Идентификация каждого типа клеток-киллеров зависит от рестрикции по главному комплексу гистосовместимости, необходимости в сенсибилизации, специфичности мишеней и ответа на цитокины. Макрофаги могут стать цитотоксичными в результате активации, но такая цитотоксичность не специфична в отношении Аг и возникает вследствие активации определенными цитокинами [30].

К фагоцитам относят нейтрофилы и моноциты крови, а также тканевые макрофаги. Последние располагаются между паренхимой того или иного органа и эрителиальными клетками кровеносных сосудов и полостей, например альвеолярные макрофаги (легкие), купферовские клетки (синусы печени), синовиальные клетки (полости суставов), клетки периваскулярной микроглии (центральная нервная система), мезангиальные фагоциты (почки) [183].

В формировании гуморальных иммунных реакций участвует целый ряд молекул-посредников, таких как Ат и цитокины, выделяемые лимфоцитами, а также различные пептиды сыворотки, обычно содержащиеся в ней в малых концентрациях [144].

К гуморальным факторам врожденного иммунитета относят природные антибактериальные и антивирусные агенты (лизоцим, интерферон) и комплемент. Лизоцим - фермент класса гидролаз, синтезируется в макрофагах и нейтрофилах. Он разрушает (3-(1-4)-

гликозидные связи в гликозаминогликанах оболочки бактерий, что приводит к лизису микроорганизмов. Интерфероны - группа низкомолекулярных белков, которые синтезируются клеткой в ответ на проникновение в нее вирусов, продуктов бактерий и специфических индукторов. Интерфероны защищают здоровые клетки от проникновения вирусов. Комплементом называют группу из ~20 белков плазмы, с которыми связаны многие биологические механизмы специфического и неспецифического иммунитета [6].

Специфический гуморальный ответ опосредован В-клетками и образованием Ат, свободно циркулирующих в крови и других жидкостях организма (в виде иммуноглобулинов). Биологические свойства иммуноглобулинов того или иного класса определяются аминокислотной последовательностью в константной области тяжелой цепи. Функции разных классов иммуноглобулинов различны [1,51].

Выделяют две большие субпопуляции В-лимфоцитов, отличающиеся как направленностью по отношению к разным типам Аг, так и механизмом взаимодействия с клетками-помощниками. Эти субпопуляции В-клеток картируют по маркерному белку ЬуЬ5 на их внешней мембране. Одни В-клетки имеют такой белок, их обозначают ЬуЬ5+. Другие - лишены этого маркёра, их обозначают как ЬуЬ5*. Показано, что (ЬуЬ5+)-В-лимфоциты реагируют, в основном, на растворимые полисахариды. Они получают помощь от клеток-помощников на расстоянии в виде растворимых мессенджеров. В то же время, (ЬуЬ 5 ")-В-лимфоцитам необходимы контактные взаимодействия с Т-хелперами, и они реагируют на различные типы Аг (клетки, белки, липополисахариды и т.д.) [3].

В-клетки дифференцируются в плазматические клетки, вырабатывающие иммуноглобулины. Молекулы Ат - это

иммуноглобулины с особой аминокислотной последовательностью и третичной структурой, обеспечивающей их связывание с комплементарными структурами Аг [139, 151].

Первое взаимодействие Аг с В-клетками провоцирует реакцию, названную первичным иммунным ответом, в ходе которого В-клетки, детерминированные к ответу на определенный Аг, начинают пролиферировать, образовывать клон и затем дифференцироваться. Некоторые из них становятся клетками памяти, другие превращаются в плазматические клетки, синтезирующие Ат. Главные особенности первичного иммунного ответа - существование латентного периода до появления Ат, затем они вырабатываются лишь в небольших количествах, сначала ^М и позднее (с участием Т-клеток) - происходит переключение на синтез других изотипов иммуноглобулинов - 1§А или ^Е. Клетки памяти обладают способтью в будущем реагировать на тот же Аг. Вторичный иммунный ответ развивается при последующем контакте с тем же самым Аг. Его основная особенность - быстрая пролиферация В-клеток с дифференцировкой их в зрелые плазматические клетки и, соответственно, быстрая выработка специфических Ат, главным образом

которые попадают в кровь и тканевую жидкость, где могут встретиться с Аг и эффективно взаимодействовать с ним [167].

Первыми клетками, захватывающими Аг, практически всегда становятся макрофаги. Они его процессируют и экспонируют на поверхности, представляя Т-лимфоцитам. В-клетки умеют сами распознавать Аг в среде. Однако, в подавляющем большинстве случаев этого не достаточно, чтобы В-клетки начали активно пролиферировать и трансформироваться в плазматические клетки, им необходима помощь Т-лимфоцитов [65].

Антигены разделяют на два типа. На одни Аг В-лимфоциты реагируют сами, на другие - только при помощи Т-клеток. К первым относят липополисахариды (ЛПС), другие полисахариды, агрегированные белки. Подобные Аг получили название тимуснезависимыхх. Ко вторым причисляют чужеродные клетки, вирусные Аг, гаптены, растворимые белки, опухоли, тканевые трансплантаты. Эти Аг называют тимусзависимыми [4, 17].

Однако реакция на тимуснезависимые Аг, как выяснилось в прследнее время, тоже требует участия Т-клеток. В некоторых случаях они могут влиять лишь на интенсивность реакции В-клеток, но в ряде ситуаций даже обеспечивают запуск иммунных реакций [146, 154, 190].

Антитела, экскретируемые в сыворотку крови разными клонами В-лимфоцитов и способные связываться с различными антигенными эпитопами (детерминантами) Аг, называют поликлональными Ат. Поликлональные Ат широко используются в иммунодиагностике, для их получения иммунизируют лабораторных животных. Использование поликлональных Ат имеет два недостатка, критичных для отдельных методов диагностики:

• содержание Ат одной специфичности в поликлональном препарате может изменятся от одной партии к другой;

• поликлональные Ат практически нельзя использовать, если необходимо различить две сходные мишени, например, когда патогенная и непатогенная формы Аг различаются единственным эпитопом.

В дополнении к поликлональным было предложено использовать Ат, специфичные к одной определенной антигенной детерминанте, то есть моноклональные Ат. Однако и поликлональные Ат в настоящее время

продолжают широко использовать в иммунохимической лабораторной практике - в первую очередь из-за низкой стоимости их получения.

1.2. Получение мини-антител с использованием технологии фагового

дисплея

Исторически первым источником Ат были сыворотки иммунизированных животных. Ат, получаемые таким образом, содержат набор различных изотипов, специфично узнающих «свой» Аг. Ат иммунной сыворотки узнают сразу несколько различных антигенных детерминант. Таким образом, сыворотка полиспецифична (поликлональна), что нередко является недостатком [58].

Следующим способом получения Ат явилось создание гибридомной технологии [121], которая позволила получать Ат, продуцируемые одним клеточным клоном, узнающие один эпитоп и сохраняющие свои свойства во .многих поколениях гибридной линии (моноклональные Ат). К достоинствам моноклональпых Ат относят высокую моноспецифичность и возможность их выработки в больших количествах. К недостаткам можно отнести тот факт, что гибридомная технология разработана для мышей (и крыс) и является трудно применимой в случае получения человеческих Ат, в то время как для терапевтических нужд необходимы именно человеческие Затруднения возникают и в тех случаях, когда иммунизация животных невозможна или не удается обойти иммунотолерантность к Аг. Кроме того, моноклональные Ат невозможно использовать в традиционных и популярных иммунологических методах, основанных на реакции преципитации.

Для разрешения этих проблем в настоящее время предложены методы молекулярного клонирования генов узнающих фрагментов Ат.

Одним из таких методов является технология фагового дисплея Ат, впервые предложенная в работе [157]. Авторами было показано, что Аг-связывающие фрагменты (scFv, Fab), экспонированные на поверхности нитевидных фагов, могут быть отобраны на иммобилизованных Аг. Основной идеей метода является получение комбинаторной библиотеки, в которой вариабельные участки тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов соединены случайным образом и экспонированы на поверхности капсида фага. Каждый бактериофаг, по аналогии с В-лимфоцитом, экспрессирует Ат единственной специфичности. При достаточно большом размере библиотеки репертуар узнающих фрагментов иммуноглобулинов будет сравним с репертуаром Ат в организме. К достоинствам метода можно отнести следующие:

• возможность получения Ат in vitro, без иммунизации животных;

• отсутствие необходимости длительного поддержания долговременных культур гибридных клеток;

• время получения мини-Ат составляет 10-14 дней, по сравнению с несколькими месяцами при использовании гибридомной технологии;

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Фомин, Александр Сергеевич, 2013 год

Список литературы

1. Барбер, X. Р. Иммунобиология для практических врачей / X. Р. Барбер - М.: Медицина, 1980. - 355 с.

2. Белковый иммуноблот и иммунодот в биохимических исследованиях / Н. Ф. Стародуб [и др.]. // Украинский биохимический журнал. - 1987. - Т. - 59. - С. 108-120.

3. ; Болдырева, А. А. Биохимия мембран. Рецепторы клеточных мембран / А. А. Болдырева, А. Я. Кульберг. - М.: Высшая школа, 1987. -103 с.

4. Брондз, Б. Д. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом использовании / Б.Д. Брондз. - М.: Наука, 1987. - 471 с.

5. Глик, Б. Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение / Б. Глик. - М.: Мир. -2002. -589 с.

6. Дейл, М. М. Руководство по иммунофармакологии / М. М Дейл, Дж. К. Формен - М.: Медицина, 1998. - 332 с.

7. Дыкман, JI. А., Богатырев В. А. Коллоидное золото в твердофазных методах анализа // Биохимия. 1997. Т. 62. С. 411-418.

8. Дыкман, JI. А. Наночастицы золота: получение, функционализация, использование в биохимии и иммунохимии / JI. А. Дыкман., В. А. Богатырев // Усп. химии. - 2007. - Т. 76. - С. 199-213.

9. Дыкман, JI. А. Золотые наночастицы: синтез, свойства, биомедицинское применение / JL А. Дыкман [и др.] - М: Наука, 2008. -319с .

10. Йегера, JT. Клиническая иммунология и аллергология / J1. Йегера. - М.: Медицина, 1990. - 528 с.

11. Илюкевич, Г. В. Ферропротеины как маркеры системного воспалительного ответа при остром распространенном перитоните/ Г. В

Илюкевич., J1. А. Смирнова // Весщ HAH Беларусь Сер. мед-б1ял.навук. -2002. - №2. - С.23-25.

12. Иммуноферментный анализ / под ред. Т. Т. Нго, Г. Ленхофф. -М.: Мир, 1988.-446 с.

13. Иммунохимия в клинической лабораторной практике /под ред. А. М. Уорда, Дж. Т. Уичера. -М.: 1981. -238 с.

14. Использование золотых нанооболочек в твердофазном иммуноанализе / Б. Н. Хлебцов [и др.]. // Российские нанотехнологии. -2008. - Т. 3, № 7-8. - С. 50-63.

15. Карпищенко, А. И. Медицинские лабораторные технологии / А. И. Карпищенко. - Санкт-Петербург: Интермедика, 2002. -408 с.

16. Кленин, В. И. Характеристика реакции преципитации на стадии формирования агрегатов комплексов «антиген-антитело» спектротурбидиметрическим методом / В. И. Кленин, Б. И. Шварцбурд, Н. Г. Астафьева. // ЖМЭИ. - 1979. - № 6. - С. 18-23.

17. Коэн, А. Р. Свое, чужое и аутоиммунитет / А. Р. Коэн. // В мире науки.- 1988.-№6.-С. 14-23.

18. Кузник, Б. И., Максимова О.Г. Общая гематология / Б. И. Кузник, О. Г. Максимова. - Ростов-на-Дону: Феникс, 2007. - 575 с.

19. Лисуков, И. А. Иммунокомпрометированный пациент (нозокомиальные инфекции в гематологической практике) / И. А. Лисуков. - Новосибирск: Наука, 2005. - 180 с.

20. Логинова, Н. В. Ведение в фармацевтическую химию / Н. В. Логинова, Г. И. Полозов. - Минск: БГУ, 2003. - 250 с.

21. Луценко, В. К. Молекулярная патофизиология / В. К. Луценко. - М.: Наука : Интерпериодика, 2004. - 270 с.

22. Михайлов, А. Т. Методы иммунохимического анализа в биологии развития / А.Т. Михайлов, В.Н. Симирский. - М.: Наука, 1991. -228 с.

23. Нанотехнология в ближайшем десятилетии / под ред. М. К Роко, Р. С. Уильямса, П. Аливисатоса. - М.: Мир, 2002. - 292 с.

24. Некоторые закономерности иммуноферментного анализа бактериальных клеток / А. Ю. Карулин [и др.] // ЖМЭИ. - 1987. - № 9. -С. 12-18.

25. Новые методы иммуноанализа / под ред. У. П. Коллинза. - М.: Мир, 1991.-280 с.

26. Падюков, Л. Н. Перспективы развития средств иммунохимической диагностики бактериальных инфекций / Л. Н. Падюков, Б. Ф. Семенов // Журнал всесоюзного химического общества, им. Д. И. Менделеева. - 1989. - Т. 34. - С. 11-17.

27. Пастер, Е. У. Иммунология пракикум. / Е. У. Пастер, В. В. Овод. -1989. - Киев: Выща школа.

28. Петров, Р. В. Клеточные мембраны и иммунитет / Р. В. Петров, Р. И. Атауллаханов. - М.: Высшая школа, 1991. - 144 с.

29. Петров, Р. В. Иммунология / Р. В. Петров. - М.: Медицина, 1982.-368 с.

30. Пол, У. Иммунология. / У. Пол. - М.: Мир, 1988. - Т. 1. - 486с.

31. Полак, Д. Введение в иммуноцитохимию: современные методы и проблемы / Д. Полак, С. Ван Норден. - М.: Мир, 1987. - 74 с.

32. Получение фаговых мини-антител и их использование для детекции микробных клеток с помощью электроакустического датчика / О. И. Гулий [и др.]. // Биофизика. - 2012. - Т. 57.№. 3. - С. 460^167.

33. Постраш, И. Ю. Обмен сывороточного железа у дойных коров и телят раннего возраста / И. Ю. Постраш, В. М. Холод // Известия Национальной АН Беларуси, Сер. аграрных наук. - 2004. -№3. - С. 91-93.

34. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. - М.: Мир, 2000. - 592 с.

35. Руководство по гематологии / под ред. А. И. Воробьева // М.: Ньюдиамед-2002. - Т. 1. - 280 с.

36. Сирота, А. И. Электро-оптический метод регистации взаимодействия антиген-антитело для детекции антитромбоцитарных антител при геморрагичеких тромбоцитопатиях / А. И. Сирота, Е. А, М. Н. Шаталаева // Клиническая лаб. диагностика. - 1993. - № 3. - С. 50-54.

37. Тику нова, Н. В. Фаговый дисплей на основе нитчатых бактериофагов: применение для отбора рекомбинантных антител / Н. В. Тикунова, В. В. Морозова // Acta Naturae. - № 3. - 2009. - С. 22-31.

38. Ферритин и другие белки острой фазы при различных формах ишемической болезни сердца / А. Д. Парамонов [и др.]. // Клиническая медицина. - 2005.-№ 2. - С.25 - 29.

39. Холод, В. М. Справочник по ветериной биохимии / В. М. Холод, Г.Ф. Ермолаев. - Минск: Ураджай, 1988. - 168 с.

40. Чернохвостова, Е. В. Иммунохимическая диагностика гаммапатий: Методические рекомендации / Е. В. Чернохвостова, Г. П. Герман. -. М.,1984. - 54 с.

41. Электрооптические свойства микробных суспензий при взаимодействии клеток с антителами различной специфичности / О.И. Гулий [и др.]. // Прикл. биохим. микробиол. - 2010. - Т. 46. - С. 69-72.

42. A novel cancer testis antigen that is frequently expressed in pancreatic, lung, and endometrial cancers / T. Okada [et al.] // Clinical Cancer Research. - 2006. - Vol. 12. - P. 191-197.

43. A solid-phase dot assay using silica/gold nanoshells / B. N. Khlebtsov [et al.] // Nanoscale Res. Lett. - 2007. - Vol. 2. - P. 6-11.

44. Aboofazeli, R. Investigations into the formation and characterization of phospholipid microemulsions. I. Pseudo-ternary phase diagrams of systems containing water - lecithin - alcohol - isopropyl miristate / R. Aboofazeli, M. Lawrence // Int. J. Pharm. - 1993. - Vol. 93. - P. 161-175.

45. Adenovirus El A blocks oxidantdependent ferritin induction and sensitizes cells to pro-oxidant cytotoxicity / K. Orino [et al.] // FEBS Lett. -

1999.-Vol.-461.-P. 334-338.

46. Analysis of the diversity of a sheep antibody repertoire as revealed from a bacteriophage display library / K. A Charlton [et al.] // J. Immunol. -

2000. - Vol. 164. - P. 6221-6229.

47. Angelety, L.H. Agar diffusion method for the differentiation of Bacillus anthracis / L. H. Angelety, G.G. Wright // Appl Microbiol. - 1971. -Vol. 21.-P. 157-159.

48. Antibodies selected from combinatorial libraries block a tumor antigen that plays a key role in immunomodulation / J. R McWhirter [et al.] // PNAS.-2006.-Vol. 103.-P. 1041-1046.

49. Are there naturally occurring pleomorphic bacteria in the blood of healthy humans? / R. W McLaughlin // J. Clin. Microbiol. - 2002. - Vol. 40. -P. 4771-4775.

50. Babesiosis / M. J. Homer [et al.] // Clin. Microbiol. Rev. - 2000. -Vol. 13.-P. 451-469.

51. Barker, W. Origins of immunoglobulin heavy chain domains / W. Barker, L. Ketchan, M. Dayhoff// J. Mol. Evol. - 1980. - Vol. 15. - P. 113— 127.

52. Barnard, G. J. The development of luminescence immunoassays / G. J. Barnard, W. P. Collins // Med. Lab. Sci. - 1987. - Vol. 44. - P. 249 - 256.

53. Bayne-Jones, S. The coexistence of a single free antigen and its antibody in the same serum. Equilibria in precipitin reactions / S. Bayne-Jones // J. Exp. Med.- 1917. - Vol25. -P. 837-853.

54. Bio-Rad Labs Bulletin 1310. Western blotting detection systems: how do you choose. - 1987. - P. 3.

55. Birkeland, H. Age dependence of subpopulations and functions of human peripheral lymphocytes / H. Birkeland // J. Clin. Lab. Immunol. - 1980. -Vol. 5.-P. 47-51.

56. Boehme, H. Expression of receptor diversity in T-lymphocytes / H. Boehmer H. // In: Immunology 80 / Eds. Fougereau M., Dausset J.London, New York: Academic Press. - 1980. - P. 113.

57. Brada, D. Golden blot"-detection of polyclonal and monoclonal antibodies bound to antigens on nitrocellulose by protein A - gold complexes / D. Brada, J. Roth J. // Anal. Biochem. - 1984. - Vol. 142. - P. 79-83.

58. Carrel, A. The production of antibodies by tissues living outside of the organism / A. Carrel, R. Ingebrigtsen // J. Exp. Med. - 1912. - Vol. 15. - P. 287-291.

59. Carroll G. Bull. The agglutination of bacteria in vivo / G. Carroll Bull // J Exp. Med. - 1915. - Vol. 22. - P. 484-491.

60. Cellular and humoral mechanisms involved in the control of tuberculosis / J. Zuniga [et al.] // Clin. Dev. Immunol. - 2012. -P. 193.

61. Chance, B. The enzyme-substrate compounds of horseradish peroxidase and peroxides; kinetics of formation and decomposition of the primary and secondary complexes / B. Chance [et al.] // Arch Biochem. - 1949. -Vol. 22.-P. 224-252.

62. Characterization of human anti-high molecular weight-melanoma-associated antigen single-chain Fv fragments isolated from a phage display antibody library / S. A. Desai // Cancer Res. - 1998. - Vol. 58. - P. 2417-2425.

63. Characterization of purified protein derivative of tuberculin by use of monoclonal antibodies: isolation of a delayed-type hypersensitivity reactive component from M. tuberculosis culture filtrate / J. Klausen [et al.] // Scand. J. Immunol. - 1994. - Vol. 40. - P. 345-349.

64. Charlton, K. The isolation of super-sensitive anti-hapten antibodies from combinatorial antibody libraries derived from sheep / K.

Charlton, W. J. Harris, A. J. Porter // Biosensors and Bio- electronics. - 2001. -Vol. 16.-P. 639-646.

65. Charron, D. Regulation of MHC II and CD1 antigen presentation: from ubiquity to security / D. Charron, C. Gelin, I. Sloma, N. Mooney // J. Leukoc. Biol. - 2009. - Vol. 85. - P. 215-224.

66. Chrichton, R. R. Inorganic biochemistry of iron metabolism. Ellis Horwood series in inorganic chemistry / R. R. Chrichton. - 1991. - 259 p.

67. Comoglu, T. Microemulsions / T. Comoglu, N. Gonul // J. Fac. Pharm. Ankara. - 1997. - Vol. 26. - P. 95-108.

68. Construction of a diabody (small recombinant bispecific antibody) using a refolding system / S. I. Takemura [et al.] // Protein Engineering. - 2000. - Vol. 13. - P. 583- 588.

69. Coons, A. H. Immunological properties of an antibody containing a fluorescent group / A. H. Coons, H. J. Creech., R. N. Jones // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1941. - Vol. 47. - P. 200-202.

70. Coons, A. H. Localisation of antigen in tissue cells / A. H. Coons., M. H. Kaplan // J. Exp. Med. - 1950. - Vol. 91. - P. 1-13

71. Cotton, F. Measurement of soluble transferrin receptor by immunoturbidimetry and immunonephelometry / F. Cotton, P. Thiry, J. Boeynaems // Clin. Biochem. - 2000. - Vol. 33. - P. 263-267.

72. Craig cf. observations upon the noguchi modification of the wassermann complement fixation test in the diagnosis of lues in the military service//J. exp med. - 1910. - Vol. 1. - P.726-745.

73. Danscher, G. Localization of gold in biological tissue. A photochemical method for light and electron microscopy / G. Danscher. -Histochemistry. 1981. - Vol. 71. - P. 81-88.

74. Degradation of berenil a (diminazene aceturate) in acidic aqueous solution / M. Campbell // J. Pharm. Pharmacol. - 2004. - Vol. 56. - P. 13271332.

75. Delaimy, Al. Reliability of biomarkers of iron status, blood lipids, oxidative stress, vitamin D, C-reactive protein and fructosamine in two Dutch cohorts. / Al. Delaimy, W. K., Jansen, E. H. Reliability // Biomarkers. - 2006. -Vol. 11.-P. 370-382

76. Designing antimicrobial peptides: form follows function./ C. D. Fjell [et al.] // Nat. Rev. Drug Dis- cov. - 2012. - Vol. 11. - P. 37-51.

77. Detection of analyte binding to microarrays using gold nanoparticle labels and a desktop scanner / A. Han [et al.] // Lab. Chip. - 2003. - Vol. 3. - P. 329-332.

78. Development of zeptomole and attomolar detection sensitivity of biotin-peptide using a dot-blot goldnanoparticle immunoassay / S.-Y. Hou [et al.] // Anal. Chem. - 2007. - Vol. 79. - P. 980-985.

79. Deverill, I. Light scattering and absorption - developments in immunology /1. Deverill, W. G. Reeves // J. Immunol. Meth. - 1980. - Vol. 38. -P. 191-204.

80. Display and selection of chicken IgA Fab fragments / W. H. Wieland // Veterinary Immunology and Immunopathology. - 2006. - Vol. 110. -P. 129-140.

81. Display technologies: application for the discovery of drug and gene delivery agents / A. Sergeeva // Adv. Drug Deliv. Rev. - 2006. - Vol. 58. - P. 1622-1654.

82. Dot blot assay for the serotyping of pneumococci / A. Fenoll [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 1997. - Vol. 35. - P. 764-766.

83. Dykman, L. A. Use of the dot-immunogold assay for the rapid diagnosis of acute enteric infections / L. A. Dykman, V. A. Bogatyrev // Fems Immunol. Med. Microbiol. - 2000. - Vol. 27. - P. 135-137.

84. ELISA and multiplex technologies for cytokine measurement in inflammation and aging research / S. X Leng [et al.] // J. Gerontol. A. - 2008. -Vol. 63.-P 879-884.

85. Engvall, E. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA): Quantitative assay of immunoglobulin / G. Engval, P. Perlmann // J. Immunochem. - 1971. - Vol. 8. - P. 871-874.

86. Everall, P.H. The double diffusion precipitin test in human fascioliasis / P.H. Everall // J. Clin. Pathol. - 1970. - Vol. 23. - P. 636-639.

87. Evolutionary divergence and functions of the human interleukin (IL) gene family / C. Brocker [et al.] // Hum. Genomics. - 2010. - Vol. 5. - P. 60 -62.

88. Fab MAbs specific to HA of influenza virus with H5N1 neutralizing activity selected from immunized chicken phage library. / P. Pitaksajjakul [et al.] // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2010, Vol. 395. -496-501.

89. Fathman, C.G. Isolation, Characterization, and Utilization of T Lymphocyte Clones / C. G. Fathman, F.W. Fitch. - N.Y.: Academic Press, 1982.-549 p.

90. Frens, G. Controlled nucleation for the regulation of the particle size in monodisperse gold suspensions / G. Frens // Nature Phys. Sci. - 1973. - Vol. 241.-P. P.20-22.

91. Fubini, B. Gallarate M. Microcalorimetric study of microemulsions as potential drug delivery systems. II. Evaluation of enthalpy in the presence of drugs / B, Fubini., M. Gasco, M. Gallarate // Int. J. Pharm. - 1989. - Vol. 50. -P. 213-217.

92. Garen, A. Anti-melanoma antibodies from melanoma patients immunized with genetically modified autologous tumor cells: Selection of specific antibodies from single-chain Fv fusion phage libraries / A. Garen, X. Cai // Med. Sci. - 1995. - Vol. 92. - P. 6537-6541.

93. Gershon, R. K. Suppressor T cells: a miniposition paper celebrating a new decade // In: Immunology 80 / R. K. Gershon // Dausset J. - London, New York: Academic Press, 1980. - P. 375.

94. Giaever, I. The antibody-antigen reaction: A visual observation /1. Giaever // J. Immunol. - 1973. - Vol. 110.-P. 1424-1426.

95. Giuliani, A. Antimicrobial peptides: an over- view of a promising class of therapeutic / A. Giuliani, G. Pirri, S. Nicoletto // Cent. Eur. J. Biol. - 2007. - Vol. 2. - P. 1-33.

96. Hahn, G. Universal immuno-stick test for direct rapid identification of microbial antigens within 5 minutes / G. Hahn., B. Bransch // Zbl. Bakteriol. Mikrobiol. Hyg. - 1988. - Vol. 267. - P. 519-527.

97. Halbert, S. The analysis of streptococcal infections. VI. Immunoelectrophoretic observations on extracellular antigens detectable with human antibodies / S. Halbert, S. Keatinge // J Exp Med. - 1961. - Vol. 113. -P. 1013- 1028.

98. Harris, W. J. Cunniugham C. Antibody therapeutics / W. J. Harris. -Berlin: Springer-Verlag, 1995.-P. 150.

99. Heremans, J. F. Specific analysis of immunoglobulins. Techhniques and clinical value / J. F. Heremans., P. L. Masson // Clin. Chem. - 1973. - Vol. 19.-P. 294-300.

100. Ho, M. M. Tuberculin purified protein derivative (PPD) immunoassay as an in vitro alternative assay for identity and confirmation of potency / M. M Ho, S. K. Kairo, M. J. Corbel // Hum. Vaccin. - 2006. - Vol. 2. -P. 29-33.

101. Hornbeck, P. Enzyme-linked immunosorbent assays / P. Hornbeck // Current Protocols in Immunology. - 1991. - P. 211 - 212.

102. Hsu, Y.-H. Immunogold for detection of antigen on nitrocellulose paper / Y.-H. Hsu. // Anal. Biochem. - 1984. - Vol. 142. - P. 221-225.

103. Huang, H. H. Association of in vitro oxidative stress, serum ferritin concentration and C-reactive protein in febrile emergency room patients. / H. H. Huang, H. C Yan // J. Clin. Invest. - 2005. - Vol. 28. - P. 48-54.

104. Human prothymocytes. Membrane properties, differentiation patterns, glucocorticoid sensitivity, and ultrastructural features / U. Galili [et al.] // J. Exp. Med. - 1980. - Vol. 152. - P. 796-807.

105. Human scFv antibody fragments specific for hepatocellular carcinoma selected from a phage display library / B. Yu [et al.] // World J. Gastroenterol. - 2005. - Vol. 11. - P. 3985-3989.

106. Hume, D. A. Mitogenic lymphocyte transformation. A general model for the control of mammalian cell proliferation and differentiation. / D. A. Hume, M. J. // Weidemann. - Amsterdam: Elsevier, 1982. - P. 251.

107. Humoral immunity in tuberculin skin test anergy and its role in high-risk persons exposed to active tuberculosis / L. Encinales // Mol. Immunol. - 2010. - Vol. 47. - P. 1066 - 1073.

108. Identification of a new peptide for fibrosarcoma tumor targeting and imaging in vivo / C. C. Wu [et al.] // Journal of Biomedicine and Biotechnology. - 2010. - Vol. 2010. - P. 167045.

109. Identification of a putative Crf splice variant and generation of recombinant antibodies for the specific detection of Aspergillus fumigatus / M. Schütte [et al.] // PloS One. - 2009, - Vol.4. - 625 - 626.

110. Identification of genes coding for B cell antigens of Mycoplasma mycoides subsp. mycoides Small Colony (MmmSC) by using phage display / D. R. Miltiadou // BMC Microbiol. - 2009. - Vol. 9. - P. 215.

111. Identification of immunogenic polypeptides from a Mycoplasma hyopneumoniae genome library by phage display / J. Kügler [et al.] // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2008. -Vol. 80. - P. 447^158.

112. Immunochemistry of Solid-Phase Immunoassay / J. E, Butler - [et al.] // Boca Raton: CRC Press Inc., 1991. - P. 336.

113. Immunoglobulins.-in Myeloma. Biology and management / D. E. Joshua [et al.]. - Oxford, 1995. - P. 3 - 29.

114. Inhibition of the acute-phase response in vivo by anti-gp 130 monoclonal antibodies./ P.Harrison [et al.] // Brit. J. Hematol. - 1996. - Vol. 95.-P. 443-451.

115. Interleukin 1 induces ferritin heavy chain in human muscle cells. /Y. Wei [et al.] // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1990. - Vol. 169- P. 289296.

116. Irreversible inhibition of putrescine-stimulated S-adenosyl-L-methionine decarboxylase by Berenil and Pentamidin / E. Karvonen [et al.] // Biochem. J. - 1985. - Vol. 231. - P. 165-169.

117. Isolation of scFv fragments specific to OmpD of Salmonella Typhimurium / T. Meyer. - 2011. - Vol. 147. - P. 162-169.

118. Israel, H. A. Immunomagnetic separation: A tool microbiology / H. A. Israel // Amer. Biotechnol. Lab. - 1994. - Vol. 12. - P. 50-52.

119. Khlebtsov, B. N. Enhanced solid-phase immunoassay using gold nanoshells: effect of nanoparticle optical properties / B. N. Khlebtsov, N. G. Khlebtsov // Nanotechnology. 2008. - Vol. 19. - P. 435703.

120. Khosravi, M. J. A sensitive timeresolved immunofluorometric assay for ferritin in serum with monoclonal antibodies / M. J. Khosravi, M. A. Chan, A. C. Bellem // Clin. Chim. Acta. - 1988. - Vol. 175. - P. 267-276.

121. Kohler, G. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predetermined specificity / G. Kohler, C. Milstein // Nature. - 1975. - Vol. 256. - P. 495-497.

122. Kuna, A. T. Serological markers of inflammatory bowel disease / A. T. Kuna // Biochem Med (Zagreb). - 2013. - Vol. 23. - P. 28-42.

123. Kuwabara, S. Amino acid sequence of tuberculin active protein from Mycobacterium tuberculosis / S. Kuwabara // J. Biol. Chem. - 1975. - Vol. 250. -P. 2543-2568.

124. Kwon, G. S. Polymeric micelles for delivery of poorly water-soluble compounds / G. S. Kwon // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. - 2003. -Vol. 20.-P. 357-403.

125. Lalvani, A. Diagnosing tuberculosis infection in the 21st century: new tools to tackle an old enemy / A. Lalvani // Chest. - 2007. - Vol. 131. - P. 1898-1906.

126. Lipton, C. R Guidelines for the validation and use of immunoassay for determination of introduced proteins in biotechnology enhanced crops and derived food ingredients / C. R. Lipton // Food Agr. Immunol. - 2000. - Vol. 12.-P. 153-164.

127. Liu, B. Applying phage antibodies to proteomics: Selecting single chain Fv antibodies to antigens blotted on nitrocellulose / B. Liu, J. D. Marks // Anal. Biochem. - 2000. - Vol. 286. - P. 119-128.

128. Luminescent quantum dots for multiplexed biological detection and imaging / W.C.W. Chan // Curr. Opin. Biotechnol. - 2002. - Vol. 13. - P. 4046.

129. Ma, Z. Naked-eye sensitive detection of immunoglobulin G by enlargement of Au nanoparticles in vitro /Z. Ma, S.-F Sui // Angew. Chem. Int. Ed. - 2002. - Vol. 41. - P. 2176-2179.

130. Making antibodies by phage display technique / G. Winter // Ann. Rev. Immunol. - 1994. - Vol. 12. - P. 433-455.

131. Mauch, H. A solid-phase radioimmunoassay to detect anti-tuberculin antibodies in the guinea pig / H. Mauch, G. Kümel // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. - 1979. - Vol. 58. - P. 82-89.

132. Mclntyre, O. R. Laboratory investigation of myeloma.-in Myeloma. Biology and management / Eds. Malpas J. S., Bergsagel D. E., Kyle R. A. -Oxford; 1995.-P. 191-221

133. Meier-Dieter, U. Detection of enterobacterial common antigen on bacterial cell surfaces by colony-immunoblotting: effect of its linkage to

lipopolysaccharide / U. Meier-Dieter, G. Acker, H. Mayer // FEMS Microb. Let. - 1989. - Vol. 59. - P. 215-220.

134. Meulenberg E. P. Immunochemical Methods for Ochratoxin / A Detection: A Review // Toxins. - 2012. - Vol. 4. - P. 244-266.

135. Moeremans, M. Sensitive visualization of antigen-antibody reactions in dot and blot immune overlay assays with immunogold and immunogold/silver staining / M. Moeremans // J. Immunol. Meth. - 1984. -Vol. 74.-P. 353-360.

136. Monoclonal antibody successes in the clinic / J. M. Reichert [et al.] // Nat. Biotechnol. - 2005. - Vol. 23. - P. 1073-1078.

137. Munshi, N. Ultrasonic activated drug delivery from pluronic P-105 micelles / N. Munshi, N. Rapoport, W. G. Pitt // Cancer Lett. - 1997. - Vol. 118.-P. 13-19.

138. Murphy, R. M. Determining molecular weight distributions of antigen-antibody complexes by quasi-elastic light scattering / R. M Murphy, M. L. Yarmush, C. K. Colton // Biopolimers. - 1991. - Vol. 31. - P. 12891295.

139. Muyldermans, S. Antibody technology in proteomics. Brief Funct Genomic Proteomic / S. Muyldermans, D. Saerens, G.H. Ghassabeh // Brief Funct. Genomic Proteomic. - 2008. - Vol. 7. - P. 275-282.

140. Nakane, P. K. Enzyme-labelled antibodies: Preparation and application for the localization of antigens / P. K. Nakane, C. B. Priece // J. Histochem. Cytochem. - 1966. - Vol. 14. - P. 929-931.

141. Nelson, A. L. Dhimolea E, Reichert, J.M. Development trends for human monoclonal antibody therapeutics / A. L. Nelson, E. Dhimolea, J. Reichert // Nat. Rev. Drug Discov. - .2010. - Vol. 9. - P. 767-774.

142. Niemeyer, C. M. Nanobiotechnology: Concepts, Applications and Perspectives / C. M Niemeyer, C. A. Mirkin - Weinheim: Wiley-VCH, 2004. -P. 491.

143. Oellerich, M. Enzyme immunoassay in clinical chemistry: Present status and trends / M. Oellerich // J. Clin. Chem. Biochem. - 1980. - Vol. 18. -P. 197-208.

144. Ohyama, K. Proteomic approaches to profiling the humoral immune response and identifying disease-associated antigens./ K. Ohyama, N. Kuroda // Biol. Pharm. Bull. - 2012 - Vol. 35. - P. 409-412.

145. Olive, A. Elevated serum ferritin levels: associated diseases and clinical significance / A. Olive, J. Junca // Am. J. Med. - 1996. - Vol. 101. - P. 120-122.

146. Oppenheim, J. Immunophysiology: The Role of Cells and Cytokines in Immunity and Inflammation / J. Oppenheim, E. Shevach. - New York: Oxford University Press, 1990. - P. 424.

147. Optical readout of gold nanoparticle-based DNA microarrays without silver enhancement / G. A. Blab // Biophys. J. - 2006. - Vol. 90. - P. 13-15.

148. Optimizing the generation of recombinant single-chain antibodies against placental alkaline phosphatase / A. Sheikholvaezin, Hybridoma. - 2006. - Vol. 25. - P. 181- 192.

149. Overgaard, K. ELISA For Determination Of Total Coagulation Factor XII Concentration In Human Plasma / K. Overgaard, C. Koch, J. Gram // J Immunol Methods. - 2013. - Vol 394. - P.32-39.

150. Ozekinci, T. Comparison of tuberculin skin test and a specific T-cell-based test, T-Spot.TB, for the diagnosis of latent tuberculosis infection / T. Ozekinci, E. Ozbek, Y. Celik // J. Int. Med. Res. - 2007. - Vol. 35. - P. 696703.

151. Pai, J. C. Progress towards recombinant anti-infective antibodies / J. C. Pai, J. N. Sutherland , J. A. Maynard //J. Recent Pat Antiinfect Drug Discov. -2009.-Vol. 4.-P. 1-17.

152. Partial purification and characterization of ferritin from the liver and intestinal mucosa of chickens, turtledoves and mynahs / A. Mete [et al.] // Avian Pathol. - 2005. - Vol. 34. - P. 430-434.

153. Pattarino, F. Topical delivery systems for azelaic acid: Effect of the suspended drug in microemulsion / F. Pattarino, M. E. Carlotti, M. R. Gasco // Pharmazie. - 1994. - Vol.49. - P. 72-73.

154. Paust, S. Adaptive immune responses mediated by natural killer cells / S. Paust, B. Senman , U. H. von Andrian // Immunol Rev. -2010. - Vol. 235.-P. 286-96.

155. Penn, S. G. Nanoparticles for bioanalysis / S. G Penn., L. He, M. J. Natan // Curr. Opin. Chem. Biol. - 2003. - Vol. 7. - P. 609-615.

156. Peruski, A. H. Immunological methods for detection and identification of infectious disease and biological warfare agents / A. H. Peruski, L. F Peruski // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 2003. - Vol. 10. - P. 506513.

157. Phage antibodies: Filamentous phage displaying antibody variable domains / J. McCafferty [et al.] // Nature. - 1990. - Vol. 348. - P. 552-554.

158. Phage Display Antibody-Based Proteomic Device Using Resonanace-Enhanced Detection / N. Stich [et al.] // J. Nanosci. Nanotechnol. -2002.-Vol. 2-P. 375-381.

159. Phage display for target-based antibacterial drug discovery. / D. J / Christensen [et al.] // Drug Discov. To- day. -. 2001. - Vol. 6. - P. 721727.

160. Phage Display for the Generation of Antibodies for Proteome Research, Diagnostics and Therapy / Thomas Schirrmann [et al.] // Molecules. -2011. - Vol.16. - P. 412-426.

161. Phage display-based identification and potential diagnostic application of novel antigens from Mycoplasma mycoides subsp. mycoides

small colony type / S. Naseem [et al.] // Vet. Microbiol. - 2010. - Vol. 142. - P. 285-292.

162. Phage-display selection of a human single-chain Fv antibody highly specific for melanoma and breast cancer cells using a chemoenzymatically synthesized GM3-carbohydrate antigen / K. J. Lee [et al.] // J. Am. Chem. Soc. -2002.-Vol. 124.-P. 12439-12446.

163. Purification, electrophoretic behavior, and kinetics of iron release of liver ferritin of Dasyatis akajei / B. M. Kong [et al.] // J. Protein Chem. - 2003. -Vol. 22.-P. 61-70.

164. Quantitative cell bioimaging using gold-nanoshell conjugates and phage antibodies / V. A. Khanadeev [et al.] // J. Biophotonics. - 2011. - Vol. 4. -P. 74-83.

165. Radbruch, A. Flow Cytometry and Cell Sorting / A. Radbruch. -Berlin: Springer-Verlag, 1992.-P. 355.

166. Rahbarizadeh, F. Production of novel recombinant single-domain antibodies against tandem repeat region of MUC1 mucin / F. Rahbarizadeh [et al.] // Hybrid Hybridomics. - 2004. - Vol. 23. - P. 151-159.

167. Ross, G. Identification of human limfocyte subpopulations by surface marker analysis / G. Ross // Blood. - 1979. - Vol. 53. - P. 799-811.

168. Selection and identification of mimic epitopes for gastric cancer-associated antigen MG7 Ag, / S. X Leng [et al.] // Molecular Cancer Therapeutics. - 2003. - Vol. 2. - P. 301-306.

169. Selection of tumor-binding ligands in cancer patients with phage display libraries / D. N. Krag [et al.] // Cancer Res. - 2006. - Vol. 66. - P. 7724 -7733.

170. Singer, J. M. The latex fixation test. I. Application to the serological diagnosis of rheumatoid arthritis / J. M. Singer, C. M. Plotz // Amer. J. Med. -1956.-Vol. 21.-P. 888-891.

171. Skikne, B.S. Ferritin excretion and iron balance in humans / B.S. Skikne, A.D.Cooke // Brit. J. Haematol. - 1995. - Vol. 90. - P. 681-687.

172. Smith, G.P. Filamentous fusion phage: novel expression vectors that display cloned antigens on the virion surface / G.P. Smith // Science. -1985.-Vol. 228.-P. 1315-1317.

173. Smith, G. P. Phage display / G. P. Smith., V. A. Petrenko // Chem. Rev. - 1997. - Vol. 97. - P. 391-410.

174. Spectroturbidimetry as applied to biomedical and immunological investigations / S. Yu. Shchyogolev. [et al.] // In: Optical Methods of Biomedical Diagnostics and Therapy / Ed. Tuchin V.V. Proc. SPIE. - V. 1981. - Bellingham: SPIE Press, 1993. - P. 67-87.

175. Spencer, R.C. Use of Counter and rocket immunoelectrophoresis in acute respiratory infections due to Streptococcus pneumonia / R. C. Spencer , M. A. Savage // J Clin Pathol. -1976. - Vol 29. - P. 187-190.

176. Studies of Listeria monocytogenes-antibody binding using electro-orientation / V. D, Bunin [et al.] // Biosens. Bioelectron. - 2004. - Vol. 19. - P. 1559-1561

177. Surek, B. Visualization of antigenic proteins blotted onto nitrocellulose using the immuni-gold-staining (IGS)-method / B. Surek, E. Latzko // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1984. - Vol. 121. - P. 284-289.

178. Theil. E. C. Ferritin: at the crossroads of iron and oxygen metabolism // J. Nutr. - 2003. - Vol. 133.-P. 1549-1553.

179. The electrical method of investigation of the antigen-antibody and enzyme-enzyme inhibitor. Reaction using chemically modified electrodes / Yamamoto N Yalow [et al.] // Chem. Lett. - 1978. - Vol. 7. - P. 245-246.

180. The molecular cloning and characterization of murine ferritin heavy chain, a tumor-necrosis factor-inducible gene / S. V. Torti [et al.]. // J. Biol. Chem. - 1988. - Vol. 263. - P. 1263-1264.

181. The serotyping of Azospirillum Spp by cell gold immunoblotting / V. A. Bogatyrev [et al.] // FEMS Microbiol. Lett. - 1992. Vol. 96. - P. 115-118.

182. Ueda, H. Sensitive noncompetitive measurement of small molecules by open sandwich immunoassay / H. Ueda // Pharm. Soc. Jap. - 2007. - Vol. 127.-P. 71-80.

183. Van Furth, R. Cells of the mononuclear phagocyte system. Nomenclature in terms of sites and conditions / R. Van Furth // In: Mononuclear phagocytes: Functional aspects - Hague: Martinus Nijhoff Publishers, 1980. -P. 1-30.

184. Ward, A. J. Microemulsions as topical drug delivery vehicles. I. Characterization of a model system / A. J. Ward, K. J. O'Neill // Drug Dev. Ind. Pharm.- 1988.-Vol. 14.-P. 1203-1219.

185. Willats, W. G. T. Phage display: Practicalities and prospects / W. G. T. Willats // Plant Mol. Biol. - 2002. - Vol. 50. - P. 837-854.

186. Wigzell, H. Lymphocyte receptors // In: Immunology 80 / H. Wigzell, H. Binz ; Eds. Fougereau M., Dausset J. -London, New York: Akademic Press, 1980. - P. 94.

187. Woodburn, K. The alteration of plasma lipoproteins by Cremophor EL / K. Woodburn, D. Kessel // J. Photoch. Photobiol. B. - 1994. - Vol. 22. -

X

P. 197-201.

188. Yalow, R. S. Assay of plasma insulin in human subjects by immunological methods / R. S. Yalow, S. A. Berson // Nature. - 1959. - Vol. 184.-P. 1648-1649.

189. Yau, K.Y.F. Emerging trends in the synthesis and improvement of hap ten-specific recombinant antibodies / K. Y. F Yau, H. Lee, J. C. Hall // Biotechnol. Adv. - 2003. - Vol. 21. - P. 599-637.

190. Yerly, D. Delayed drug hypersensitivity: models of T-cell stimulation / D. Yerly, J. Adam, W.J. Pichler // Br. J. Clin. Pharmacol. - 2011. -Vol. 71.-P. 701-707.