Интерстициальная коллагеназа (ММП-1) и её эндогенные регуляторы при трансформации фибробластов геном Е7 вируса папилломы человека 16 типа (HPV16) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Рыжакова, Ольга Сергеевна

• Рыжакова, Ольга Сергеевна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Рыжакова, Ольга Сергеевна

Оглавление.2

Список сокращений.

Введение.6

Глава I Обзор литературы.9

1.1. Общая характеристика ММП.9

1.2. Структура ММП.12

1.3. Характеристика основных подсемейств ММП.17

1.3.1. Коллагеназы.17

1.3.2. Желатиназы.22

1.3.3. Стромелизины.

1.3.4. Матрилизины.24

1.3.5. Мембраносвязанные ММП.25

1.3.6. Неклассифицированные ММП.26

1.4. Регуляция активности ММП.28

1.4.1. Регуляция транскрипции.28

1.4.2. Активация про-ММП.30

1.4.3. Эндогенные тканевые ингибиторы ММП (ТИМП).32

1.5. Роль ММП в опухолевой прогрессии.33

1.5.1. ММР-1 или коллагеназа-1(интерстициальная коллагеназа) в прогрессии опухоли.35

1.5.2. МТ1-ММР- мембраносвязанная ММП- в клеточной инвазии.37

1.5.3. Роль коллагеназы —3 - ММР-13 в прогрессии опухоли.40

1.5.4. ММР-8 - коллагеназа —2 (коллагеназа нейтрофилов) в прогрессии опухоли .41

1.6. Некоторые регуляторные функции ММП.42

Глава П Материалы и методы исследования.45

ПЛ. Использованные материалы.45

11.1.1. Список использованных реактивов.45

11.1.2. Клеточные линии.

Н.1.3. Клинический материал.

II.2. Методы исследования.48

11.2.1. Одновременное выделение ДНК и РНК гуанидинизотиоцианатным методом.48

11.2.2. Реакция обратной транскрипции РНК.49

11.2.3. Исследование экспрессии генов.50

II.2.3.1 Полимеразная цепная реакция (RT-PCR).52

II.2.3.2. Электрофорез в агарозном геле.

11.2.4. Определение коллагенолитической активности.52

11.2.4.1. Выделение коллагена из кожи крыс.

11.2.4.2. Определение концентрации коллагена по содержанию оксипролина.

И.2.4.3. Получение меченного флуоресцеинизотиоцианатом коллагена.53

II.2.4.4.Определение коллагенолитической активности.55

11.2.5. Идентификация коллагеназ IV типа, с помощью метода зимографии.

11.2.6. Иммуногистохимическое исследование.

Глава III Результаты исследования и их обсуждение.58

Ш.1. Сравнительное исследование экспрессии ММП-1. МТ1-ММП.59

ТИМП-1 и уАП на модели фибробластов крысы

111.1.1. Экспрессия генов ММП-1, МТ1-ММП, ТИМП-1 и уАП.69

Ш.1.2. Исследование коллагенолитической активности ММП.62

Ш.2. Сравнительное исследование экспрессии ММП-1. ММП-2 МТ1-ММП. уАП. ТИМП-1.2 в коммерческих клеточных линиях карцином шейки матки человека, ассоциированных с HPV-16 и HPV-18. .68

Ш.2.1. Экспрессия генов ММП-1, ММП-2, МТ1-ММП и эндогенных регуляторов их активности.68

111.2.2. Сравнительное исследование коллагенолитической активности.72

Ш.З. Исследование экспрессии ММП-1. МТ1-ММП. ММП-2. ММПуАП. ТИМП-1. ТИМП-2 в плоскоклеточных карциномах шейки матки,.74

Ш.3.1. Эспрессия генов ММП-1, МТ1-ММП, ММП-2, ММП-9, уАП, ТИМП-1 и ТИМП-2 в плоскоклеточных карциномах шейки матки.75

Ш.3.2. Исследование коллагенолитической активности.77

111.3.3. Исследование ММП-2, ММП-9 методом зимографии.79

III.3.4. Иммуногистохимическое исследование.80

Выводы.85

Список опубликованных работ по теме диссертации.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Интерстициальная коллагеназа (ММП-1) и её эндогенные регуляторы при трансформации фибробластов геном Е7 вируса папилломы человека 16 типа (HPV16)»

Матриксные металлопротеиназы или ММП относятся к семейству цинковых кальций-зависимых металлопротеиназ, функция которых связана с обменом белков соединительно-тканного матрикса (СТМ). Эти ферменты в совокупности способны гидролизовать все компоненты СТМ. ММП играют решающую роль в таких биологических процессах, как эмбриогенез, ремоделирование и репарация тканей, а также при развитии ряда патологических процессов, таких как ревматоидные артриты, остеоартриты, аневризмы аорты, периодонтиты, аутоимунные поражения кожи (1, 2) и т.д.

Особое место отводится ММП в развитии процессов инвазии и метастазирования опухолей. Тканевые коллагеназы (ММП-1, ММП-8, ММП-13), наряду с желатиназами (ММП-2, ММП-9), относятся к ММП и играют решающую роль в развитии этих процессов, поскольку они специфически гидролизуют белки группы коллагена — одного из основных компонентов СТМ. Коллагеназы, и в частности интерстициальная коллагеназа (ММП-1), специфически гидролизуют фибрилярные коллагены I, II, III, V и IX типов (2), которые составляют 25% от общего белка организма человека. Нативные фибриллярные коллагены устойчивы к действию протеолитических ферментов. ММП-1 специфически запускает гидролиз фибриллярных коллагенов, при этом она гидролизует всего одну связь в молекуле этого белка, находящуюся на расстоянии Ул длины молекулы от С-конца. Образующиеся фрагменты способны денатурировать в физиологических условиях и далее подвергаться действию широкого спектра протеиназ, тем самым ММП-1 обеспечивает развитие деструктивного процесса (2). Желатиназы гидролизуют коллаген IV типа -основу базальных мембран (3). Этим двум группам ферментов принадлежит ключевая роль в разрушении соединительно-тканного барьера при развитии инвазивного онкологического процесса.

В настоящее время интенсивно исследуются вопросы, связанные с экспрессией ММП при онкогенной трансформации. На клеточных системах показано влияние различных онкогенов на экспрессию ММП, однако вопросы связанные с эндогенной регуляцией активности этих ферментов исследованы недостаточно.

Нами было исследовано влияние гена Е7 вируса папиллом человека 16 типа (HPV16) на экспрессию ММП и их эндогенных регуляторов.

Вирусы папиллом (HPV) высокого риска - HPV16 и HPV18 являются этиологическими факторами возникновения рака шейки матки (4, 5, 6). Эти типы HPV являются наиболее агрессивными и широко распространенными. За открытие ключевой роли вируса HPV в возникновении рака шейки матки доктору Харольду цур Хаузену в 2008 году была присуждена Нобелевская премия. В настоящее время созданы вакцины против онкогенных вирусов папиллом человека, которые в ряде стран уже используются для предотвращения рака шейки матки. По статистическим данным в мире регистрируется до 500 тысяч новых случаев рака шейки матки, а женщины развивающихся стран подвержены этому заболеванию в 10 раз больше, чем остальные. Рак шейки матки занимает второе место, после рака молочной железы, по частоте заболеваемости и смертности от рака у женщин. Установлено, что основными трансформирующими генами вирусов папиллом человека являются гены Е6 и Е7 (4, 5, 6). У 90% больных раком шейки матки обнаруживаются транскрипты генов Е6 и Е7 в биопсийном материале. Однако функциональный потенциал генов Е6 и Е7 остается недостаточно изученным. Так недостаточно исследовано изменение протеолитического потенциала клеток и тканей, в частности интерстициальной коллагеназы, при трансформации их этим вирусом, что может служить важным маркером инвазивного процесса.

Настоящая работа является продолжением и частью исследований, проводимых в лаборатории биохимии и химической патологии белков ГУ НИИ БМХ РАМН и направленных на выяснение роли ММП в многоступенчатом процессе канцерогенеза. Целью настоящего исследования является выяснение особенностей экспрессии интерстициальной коллагеназы (ММП-1), эндогенных регуляторов ее активности, как факторов инвазии, при онкогенной трансформации фибробластов геном Е7 HPV16.

В соответствии с указанной целью поставлены следующие задачи:

1) Провести сравнительные исследования экспрессии ММП-1 , и эндогенных регуляторов её активности: тканевого ингибитора ММП - ТИМП-1 и активатора плазминогена уракиназного типа - уАП на фибробластах крысы, иммортализованных LT геном вируса полиомы и трансформированных геном Е7 HPV16. Исследования провести на уровне мРНК и белка.

2) На коммерческих клеточных линиях, полученных из опухолей шейки матки женщин: SiHa, Caski, Hela, С4-1, а также линии клеток СЗЗА, не содержащей копий HPV, провести сравнительные исследования экспрессии ММП-1, ММП-14 и ММП-2 ММП-9 (как двух групп ферментов, отвечающих за развитии инвазивного процесса), а также регуляторов их активности ТИМП-1, ТИМП-2 и у-АП на уровне мРНК и энзимологическом уровне.

3) Исследовать экспрессию ММП-1, ММП-2, ММП-9 и МТ1-ММП, а также ТИМП-1, ТИМП-2 и у-АП на операционных образцах плоскоклеточных карцином шейки матки, ассоциированных с геном Е7 HPV16 с использованием RT-PCR и методами иммуногистохимии и энзимологии.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Рыжакова, Ольга Сергеевна

Выводы.

1. Трансформация фибробластов крысы геном Е7 HPV16 сопровождается увеличением деструктивного (инвазивного) потенциала клеток, которое связано с увеличением экспрессии мРНК фермента — мембраносвязанной матриксной металлопротеиназы (МТ1-ММП) и снижением экспрессии тканевого ингибитора ММП (ТИМП-1), в то время как экспрессия активатора - уАП (активатора плазминогена уракиназного типа) остается на уровне контроля. Эти данные согласуются с увеличением коллагенолитической активности (ММП-1, МТ1-ММП) в трансформированных фибробластах и снижением уровня эндогенных ингибиторов (ТИМП-1, ТИМП-2) в этих клетках.

2. Иммортализация фибробластов крысы LT-геном вируса полиомы сопровождается увеличением деструктивного потенциала клеток, хотя на значительно более низком уровне, чем в трансфомированных фибробластах, и связано с увеличением экспрессии мРНК фермента (МТ1-ММП) и активатора (уАП), которое приводит к увеличению коллагенолитической активности ферментов (ММП-1, МТ1-ММП).

3. В коммерческих линиях клеток человека, трансформированных онкогенами HPV18 (Hela, С4-1), деструктивный потенциал значительно выше, чем в клетках, трансформированных онкогенами HP VI6 (Siha, Caski). Увеличение деструктивного потенциала всех линий клеток связано с увеличения экспрессии ММП-1 и МТ1-ММП, в то время как экспрессия ММП-2 существенно не изменяется, а ММП-9 была обнаружена только в линии клеток Hela. Экспрессия ТИМП-1 и ТИМП-2 находится на уровне контроля.

4. В большинстве взятых во время операции образцов плоско клеточных карцином шейки матки экспрессия ММП носит более выраженный характер, чем в исследованных клеточных линиях. Деструктивный потенциал образцов опухолей ассоциирован с экспрессией ММП-1 и ММП-9 (и в меньшей степени ММП-2), а также с низким уровнем экспрессии ТИМП-1, ТИМП-2 и МТ1-ММП. Иммуногистохимические данные по экспрессии ММП-1, ММП-2, Ml 111-9 в опухолевой ткани имеют обратную корреляцию с данными по степени дифференцировки клеток (коэффициенты корреляции — 0,5, 0,43 и 0,36 соответственно), а данные по экспрессии ММП-1 и ММП-9 имеют прямую корреляцию с данными о наличии метастазов (коэффициенты корреляции - 0,4 и 0,37 соответственно).

5. В прилегающей к опухоли морфологически нормальной ткани обнаружена существенная экспрессия ММП-1, ММП-2, ММП-9, которая, по-видимому, вносит свой дополнительный вклад в увеличение деструктивного потенциала опухоли.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Рыжакова О.С., Соловьева Н.И. Метод определения активности тканевых коллагеназ с помощью коллагена меченного флуоресцеин изотиоцианатом. //Биомедицинская химия. - 2005. - Т. 51. - С. 432-438.

2. Рыжакова О.С., Гуреева Т.А, Журбицкая В.А., Соловьева Н.И. Экспрессия интерстициальной коллагеназы и эндогенных регуляторов ее активности в фибробластах , трансформированных геном Е7 HPV-16. //Биомедицинская химия.-2007. - Т. 53. - С. 322-331.

2а. Ryzhakova O.S., Gureeva Т.А., Zhurbitskaya V.A., Solovyeva N.I. Expression of interstitial collagenase and its endogenous regulators in immortalized and transformed by HPV16 E7 gene fibroblasts. // Biochemistry (Moscow) Supplement Series B: Biomedical Chemistry.- 2007.- Vol.1.- №4.-pp. 342-347

3. Рыжакова O.C., Киселева Н.П., Завалишина Л.Э., Андреева Ю.Ю., Петров А.Н., Франк Г.А., Соловьева Н.И. Экспрессия матриксных металлопротеиназ и их эндогенных ингибиторов в плоскоклеточных карциномах шейки матки. //Материалы международной конференции « Протеолиз, механизмы его регуляции и роль в физиологии и патологии клетки» - Минск. — 2007. - С.68-69

4. Рыжакова О.С., Гуреева Т.А., Соловьева Н.И. Экспрессия интерстициальной коллагеназы и эндогенных регуляторов ее активности в иммортализованных и трансформированных геном Е7 HPV-16 фибробластах. //Материалы VI симпозиума "Химия протеолитических ферментов". - Москва. -2007. - С.137.

5. Соловьева Н. И., Гуреева Т. А., Рыжакова О.С. Матриксные металлопротеиназы и их эндогенные регуляторы в клетках трансформированных онкогенами HPV16 и HPV18. //Материалы IV съезда Российского общества биохимиков и молекулярных биологов. - Новосибирск - 2008. - С.222

6. Рыжакова О.С., Завалишина Л.Э., Андреева Ю.Ю., Франк Г.А., Соловьева Н.И. Матриксные металлопротеиназы и их тканевые ингибиторы в плоскоклеточных карциномах шейки матки. //Материалы IV съезда Российского общества биохимиков и молекулярных биологов. — Новосибирск. - 2008. -С.444.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Рыжакова, Ольга Сергеевна, 2008 год

1. Kerkela Е., Saarialho-Kere U. Matrix metalloproteinases in tumor progression: focus on basal and squamous cell skin cancer // Exp. Dermatol.-2003- Vol. 12.-P.109-125.

2. Ala-Aho R., Kahari V.-M. Collagenases in cancer // Biochemie -2005- Vol.87-P.273-286

3. Nabeshima K., Inoue Т., Shimao Y. and Sameshima T. Matrix metalloproteinases in tumor invasion: Role for cell migration// Pathology International-2002- Vol. 52-P.255-264

4. Longwarth M. S., Laimins L. A. Pathogenesis of Human Papillomaviruses in Differentiating Epithelia// Microbiology and Molecular Biology Reviews-2004,-P.362-372

5. Munger K., Baldwine A., Edwards К., M. et al., Mechanism of Human Papillomavirus- Indused Oncogenesis // Journal of Virology -2004 P. 11451-11460

6. Um S.-J., Lee S.-Y., Kim E.-J., Myoung J., Down-regulation of pappilomavirus E6/E7 oncogene by arsenic trioxide in cervical carcinoma cells // Cancer Letters- 2002-181 P. 11 -22

7. Lynch C., Matrisian L. Matrix metalloproteinases in tumor-host cell communication// Differentiation-2002-Vol. 70-P. 561-573

8. Folgueras A.R, Pendas A. M., Sanchez L. M., Loprz-Otin C. Matrix metalloproteinases in cancer: from new functions to improved inhibition strategies//1.t. J. Dev. Biol.-2004-Vol. 48-P. 411-424

9. Overall С. M., Molecular determinants of metalloproteinase substrate specificity: matrix metalloproteinase substrate binding domains, modules, and exosites // Mol. Biotechnol.- 2002-Vol. 22-P. 51-86.

10. Bjorlund M., Koivunen E., Gelatinase-mediated migration and invasion of cancer cell // Biochemica et biophysica Acta-2005-Vol. 1755-P. 37-69.

11. Maskos K., Crystal structure of MMPs in complex with physiological and pharmacological inhibitors // Biochemie-2005-Vol. 87-P. 249-263

12. Zucker S., Pei D., Cao J,. Loprz-Otin C. Membrane type-matrix metalloproteinases (MT-MMP) //-Curr. Top Dev. Biol.-2003-Vol. 54-P. 1-74.

13. Pardo A., Selman M., MMP-1: the elder of the family // The International Journal of Biochemistry & Cell Biology-2005-Vol. 37-P. 283-288

14. Nagase H., Visse R., Murphy G. Structure and function of matrix metalloproteinases and TIMPs. // Cardiovascular Research-2006-Vol. 69-P. 562-573

15. Соловьева Н.И. Матриксные металлопротеиназы и их биологические функции // Биоорганическая химия 1998- Т. 24, №4 - с.245-255.

16. Holmback К., Bianco P., Yamada S., Birkedal-Hansen Н., МТ1-ММР: А Tethered Collagenase//-Journal of Cellular Physiology-2004-Vol. 200-P. 11-19

17. John A., Tuszynski G., The role of matrix metalloproteinases in tumor angiogenesis and tumor metastasis // Pathology Oncology Research-2001-Vol. 7-№l.

18. Van Wart H, Birkedal-Hansen H. The cysteine switch: a principle of regulation of metalloproteinase activity with potential applicability to the entire matrix metalloprotein-ase gene family // Proc Natl Acad Sci U S А-1990-Vol. 87-P. 55785582.

19. Nagase H, Woessner J F. Matrix metalloproteinases//-J. Biol. Chem.-1999-Vol. 274-P. 21491-21494.

20. Gross J., Lapiere C.M., Collagenolytic activity in amphibian tissues: a tissueculture assay // Proc. Natl.Acad. Sci. USA-1962-Vol. 48-P. 1014-1022.

21. Goldberg G.I., Wilhelm S.M., Kronberger A., Bauer E.A.,. Grant G.A, Eisen A.Z., Human fibroblast collagenase. Complete primary structure and homology to an oncogene transformation-induced rat protein // J. Biol. Chem.-1986-Vol. 261-P. 66006605.

22. Overall C.M., Lopez-Otm C., Strategies for MMP inhibition in cancer: innovations for the post-trial era//Nat. Rev. Cancer-2002-Vol. 2-P. 657-672.

23. Egeblad M., Werb Z., New functions for the matrix metalloprotein-ases in cancer progression//-Nat. Rev. Cancer-2002-Vol. 2-P. 161-174.

24. Giambernardi T.A., Grant G.M., Taylor G.P., Hay R.J., Maher V.M., McCormick J.J., Klebe R.J., Overview of matrix metalloproteinase expression in cultured human cells // Matrix Biol.- 1998-Vol. 16-P. 483-496.

25. Lindsey M.L. MMP Induction and Inhibition in Myocardial Infarction: Special Issue: The Matrix Metalloproteinases: New Insights into Myocardial Remodeling // Heart Failure Reviews-2004-Vol. 9-P. 7-19.

26. Prikk K., Maisi P., Pirila E., Sepper R., Salo Т., Wahlgren J., Sorsa Т., In vivo collagenase-2 (MMP-8) expression by human bronchial epithelial cells and monocytes/macrophages in bronchiectasis//-.!. Pathol.- 2001-Vol. 194-P. 232-238.

27. Lindy O., Konttinen Y.T., Sorsa Т., Ding Y., Santavirta S., Ceponis A., Lopez-Otin C., Matrix metalloproteinase 13 (collagenase 3) in human rheumatoid synovium // Arthritis Rheum.- 1997-Vol. 40-P. 1391-1399.

28. Mao D., Lee J.K., VanVickle S.J., Thompson R.W., Expression of collagenase-3 (MMP-13) in human abdominal aortic aneurysms and vascular smooth muscle cells in culture // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1999-Vol. 261-P. 904910.

29. Knauper V., Lopez-Otin C., Smith В., Knight G., Murphy G., Biochemical characterization of human collagenase-3 //J. Biol. Chem.-1996-Vol. 271-P. 1544-1550.

30. Ashworth J.L., Murphy G., Rock M.J., Sherratt M.J., Shapiro S.D., Shuttleworth C.A., Kielty C.M., Fibrillin degradation by matrix metalloproteinases: implications for connective tissue remodeling // Biochem. J.- 1999-Vol. 340-P. 171— 181.

31. Fosang A.J., Last К., Knauper V., МифЬу G., Neame P.J., Degradation of cartilage aggrecan by collagenase-3 (MMP-13) // FEBS Lett.- 1996-Vol. 380-P. 1720.

32. Nagase H., Hooper. L., Zink metalloproteinases in health and disease, Ed.N.M // Taylor & Francis Ltd.-1996- P. 286-292

33. Sato H. A matrix metalloproteinase expressed on the sureface of invasive tumor cells // Nature-370-Р. 61-65

34. Kinoshita T, Sato H, Okada A. et al. TIMP-2 promotes activation of progelatinase A by membrane-type 1 matrix metalloprotein-ase immobilized on agarose beads // J. Biol. Chem.-1998-Vol. 273-P. 16 098-16 103.

35. Atkinson J. J. & Senior R. M., Matrix Metalloproteinase-9 in Lung Remodeling // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol.- 2003-Vol. 28-P. 12-24.

36. Visse R., Nagase H. Matrix Metalloproteinases and Tissue Inhibitorsof Metalloproteinases Structure, Function, and Biochemistry // Circ Res.-2003-Vol. 92-P. 827-839.

37. Sternlicht m. D. & Werb Z.Annu. Copyright (c) 2001 how matrix Metalloproteinases Regulate Cell BEHAVioRRev // Cell Dev. Biol.-2001-Vol. 17-P. 463-516

38. Muller D., Breathnach R., Engelmann A., et al. Expression of collagenase-related metalloproteinase genes in human lung or head and neck tumours // Int J Cancer-1991-Vol. 48-P. 550-556.

39. Polette M., Claver C., Muller D., Abecassis J., Binninger I., Birembaut P. Detection of mRNAs encoding collagen-ase-l and stromelysin-2 in carcinomas of the head and neck by in situ hybridization // Invasion Metast-1991-Vol. 11-P. 76-83.

40. Rechardt O., Elomaa O., Vaalamo M., et al. Stromelysin-2 is upregulated during normal wound repair and is induced by cytokines // J. Invest. Dermatol.-2000-Vol. 115-P. 778-787.

41. Sternlicht M., Lochter A., Sympson С J., et al. The stromal proteinase MMP3/stromelysin-l promotes mammary car-cinogenesis // Cell.-1999-Vol. 98-P. 137-146.

42. McCawley L., Matrisian L. M. Matrix metalloproteinases: multifunctional contributors to tumor progression // Mol. Med. Today-2000-Vol. 6-P. 149-156.

43. Suzuki M., Raab G., Moses M.A., Fernandez C.A. & Klags-brun M. Matrix metalloproteinase-3 releases active hep-arin-binding EGF-like growth factor by cleavage at a specific juxtamembrane site // J. Biol. Chem.-1997-Vol. 272-P. 3173031737

44. Dunsmore S., Saarialho-Kere U. K., Roby J. D., et al. Matri-lysin expression and function in airway epithelium // J. Clin. Invest.-1998-VoI. 102-P. 1321-1331.

45. Saarialho-Kere U., Vaalamo M., Puolakkainen P., Airola K., Parks W. C., Karjalainen-Lindsberg M. L. Enhanced expression of matrilysin, collagenase, and stromelysin-1 in gastrointestinal ulcers // Am. J. Pathol.-1996-VoI. 148-P. 519-526.

46. Basset P., Bellocq J. P., Wolf C., et al. A novel metalloprotein-ase gene specifically expressed in stromal cells of breast carcinomas //Nature- 1990-Vol. 348-P. 699-704.

47. Muller D., Breathnach R., Engelmann A., et al. Expression of collagenase-related metalloproteinase genes in human lung or head and neck tumours // Int. J. Cancer-1991-Vol. 48-P. 550-556

48. Karelina Т., Goldberg G. I., Eisen A. Z. Matrilysin (PUMP) correlates with dermal invasion during appendageal development and cutaneous neoplasia // J. Invest. Dermatol.-1994-Vol. 103-P. 482-487

49. Park H., Ni J., Gerkema F. E., Liu D., Belozerov V. E., Sang Q. X. Identification and characterization of human endo-metase (Matrix metalloproteinase-26) from endometrial tumor // J. Biol. Chem.-2000-Vol. 275-P. 20540-20544.

50. Sato H., Takino Т., Okada Y., et al. A matrix metalloprotein-ase expressed on the surface of invasive tumour cells //Nature-1994-Vol. 370-P. 61-65

51. Will H., Hinzmann В. cDNA sequence and mRNA tissue distribution of a novel human matrix metalloproteinase with a potential transmembrane segment // Eur. J. Biochem.-1995-Vol. 231-P. 602-608.

52. Puente X., Pendas A. M., Llano E., Velasco G., Lopez-Otin C. Molecular cloning of a novel membrane-type matrix metalloproteinase from a human breast carcinoma// Cancer. Res.-1996-Vol. 56-P. 944-949.

53. Llano E., Pendas A. M., Freije J. P., et al. Identification and characterization of human MT5-MMP, a new membrane-bound activator of progelatinase a overexpressed in brain tumors // Cancer. Res.-1999-Vol. 59-P. 2570-2576.

54. Pei D. Leukolysin/MMP25/MT6-MMP. a novel matrix metalloproteinase specifically expressed in the leukocyte lineage // Cell. Res.-1999a-Vol. 9-P. 291-303.

55. Velasco G., Cal S., Merlos-Suarez A., et al. Human MT6-matrix metalloproteinase: identification, progelatinase A activation, and expression in brain tumors // Cancer. Res.-2000-Vol. 60-P. 877-882.

56. Knauper V., Will H., Lopez-Otin C., et al. Cellular mechanisms for human procollagenase-3 (MMP-13) activation. Evidence that MT1-MMP (MMP-14) and gelatinase a(MMP-2) are able to generate active enzyme // J. Biol. Chem.-1996-Vol. 271-P. 17124-17131.

57. Nelson A., Fingleton В., Rothenberg M. L., Matrisian L. M. Matrix metalloproteinases: biologic activity and clinical implications // J. Clin. 0ncol.-2000-Vol. 18-P. 1135-1149.

58. Zhou Z., Apte S. S., Soininen R., et al. Impaired endochon-dral ossification and angiogenesis in mice deficient in membrane-type matrix metalloproteinase I // Proc. Natl. Acad. Sci.-2000-Vol. 97-P. 4052-4057.

59. Holmbeck K., Bianco P., Caterina J., et al. MTl-MMP-de-ficient mice develop dwarfism, osteopenia, arthritis, and connective tissue disease due to inadequate collagen turnover// Cell-1999-Vol. 99-P. 81-92

60. Basset P., Bellocq J. P., Wolf C., et al. A novel metalloprotein-ase gene specifically expressed in stromal cells of breast carcinomas //Nature-1990-Vol. 348-P. 699-704

61. Rouyer N., Wolf C., Chenard M. P., et al. Stromelysin-3 gene expression in human cancer: an overview // Invasion Metastasis-1994-Vol. 14-P. 269-275.

62. Shapiro S., Kobayashi D., Ley T. J. Cloning and characterization of a unique elastolytic metalloproteinase produced by human alveolar macrophages // J. Biol. Chem.-1993-Vol. 268-P. 23824-23829

63. Vaalamo M., Karjalainen-Lindsberg M. L., Puolakkainen P., Kere J., Saarialho-Kere U. Distinct expression profiles of stromelysin-2 (MMP-10), collagenase-3

64. MMP-13), macrophage metalloelastase (MMP-12), and tissue inhibitor of metalloproteinases-3 (T1MP-3) in intestinal ulcer-ations // Am. J. Pathol.-1998-Vol. 152-P. 1005-1114

65. Shipley J., Wesselschmidt R. L., Kobayashi D. K., Ley T. J., Shapiro S. D. Metalloelastase is required for macrophage-mediated proteolysis and matrix invasion in mice //Proc. Natl. Acad. Sci. U S A-1996-Vol. 93-P. 3942-3946

66. Stracke J. O., Hutton M., Stewart M., et al. Biochemical characterization of the catalytic domain of human matrix metalloproteinase 19. Evidence for a role as a potent basement membrane degrading enzyme // J. Biol. Chem.-2000-Vol. 275-P. 1480914816

67. Llano E., Pendas A. M., Knauper V., et al. Identification and structural and functional characterization of human en-amelysin (MMP-20) // Biochemistry-1997-Vol. 36-P. 15101-15108

68. Pei D., Kang Т., Qi H. Cysteine array matrix metalloprotein-ase (CA-MMP) /ММР-23 is a type II transmembrane matrix metalloproteinase regulated by a single cleavage for both secretion and activation // J. Biol. Chem. 2000-Vol. 275-P. 3398833997

69. Lohi J., Wilson C. L., Roby J. D., Parks W. C. Epilysin, a novel human matrix metalloproteinase (MMP-28) expressed in testis and keratinocytes and in response to injury //-J. Biol. Chem.-2001-Vol. 276-P. 10134-10144.

70. Marchenko G., Strongin A. Y. MMP-28, a new human matrix metalloproteinase with an unusual cysteine-switch sequence is widely expressed in tumors // Gene.-200lb-Vol. 265-P. 87-89.

71. Uria J. A., Jimenez M. G., Balbin M., Freije J. M. & Lopez-Otin C. Differentialeffects of transforming growth factor-beta on the expression of collagenase-1 and collagenase-3 in human fibroblasts // J. Biol. Chem-1998-Vol. 273-P. 9769-9777.

72. Pendas A. M., Balbin M., Llano E., Jimenez M. G. & Lopez-Otin C. Structural analysis and promoter characterization of the human collage-nase-3 gene (MMP 13) // Genomics.-1997-Vol. 40-P. 222-33

73. Karin M., Liu Z G., Zandi E. AP-1 function and regulation // Curr. Opin. Cell. Biol.-1997-Vol. 9-P. 240-246.

74. Wasylyk C., Gutman A., Nicholson R., Wasylyk B. The c-Ets oncoprotein activates the stromelysin promoter through the same elements as several non-nuclear oncopro-teins // EMBO J.-1991-Vol. 10-P. 1127-1134

75. Denhardt D. Oncogene-initiated aberrant signaling engenders the metastatic phenotype: synergistic transcription factor interactions are targets for cancer therapy // Crit. Rev. Oncog.-1996-Vol. 7-P. 261-291

76. Tower G. В., Coon С. I., Belguise K., Chalbos D. & Brinckerhoff С. E. Fra-1 targets the AP-1 site/2G single nucleotide polymorphism (ETS site) in the MMP-1 promoter // Eur. J. Biochem.-2003-Vol. 270-P. 4216-25

77. Westermarck J., Kahari V.M., Regulation of matrix metalloproteinase expression in tumor invasion//FASEB J.-1999-Vol. 13-P. 781-792.

78. Bjo'rklund M., Koivunen E., Gelatinase-mediated migration and invasion of cancer cells // Biochimica et Biophysica Acta-2005-Vol. 1755-P. 37 69

79. Suzuki K., Enghild J. J., Morodomi Т., Salvesen G. & Nagase H. Mechanisms of activation of tissue procollagenase by matrix metalloproteinase 3 (stromelysin) // Biochemistry-1990-Vol. 29-P. 10261-10270

80. Zhai Y., Hotaiy К. В., Nan В., Bosch F. X., Munoz N., Weiss S. J., & Cho K.R. Expression of membrane type 1 matrix metalloproteinase is associated with cervical carcinoma progression and invasion // Cancer Research-2005-Vol. 65-P. 6543-6550.

81. Fingleton В., Matrix metalloproteinases: roles in cancer and metastasis. I I Front Biosci.-2006-Vol.ll-P. 479-491.

82. Nagase H., Woessner J. F Jr. Matrix metalloproteinases // J. Biol. Chem.-1999-Vol. 274(31 )-P.21491-21494.

83. Baker A.H., Edwards D.R., Murphy G., Metalloproteinase inhibitors: biological actions and therapeutic opportunities // J. Cell Sci.-2002-Vol. 115-P. 3719-3727

84. Nasr M., Ayyad S. В., El-Lamie I. K., Mikhail M. Y. Expression of matrix metalloproteinase-2 in preinvasive and invasive carcinoma of the uterine cervix // Eur. J. Gynaecol. C>ncol.-2005-Vol. 26(2)-P. 199-202.

85. Brummer O., Bohmer G., Hollwitz В., Flemming P., Petry K. U. Kuhnle H.Source, MMP-1 and MMP-2 in the Cervix Uteri in Different Steps of Malignant

86. Transformation-An Immunohistochemical // Gynecologic C)ncology-2002-Vol. 84-P. 222-227.

87. Kang Y., Siegel P.M., Shu W., Drobnjak M., Kakonen S.M., Cor-don-Cardo C., Guise T.A., Massague J. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone// Cancer Cell -2003- 3-P. 537-549.

88. Etoh Т., Inoue H., Yoshikawa Y., Barnard G.F., Kitano S., Mori M., Increased expression of collagenase-3 (MMP-13) and MT1-MMP in oesophageal cancer is related to cancer aggressiveness// Gut-2000-47 -P.50—56.

89. Nikkola J., Vihinen P., Vlaykova Т., Hahka-KemppinenM. V. , Kahari M., Pyrhonen S., High collagenase-1 expression correlates with a favourable chemoimmunotherapy response in human meta-static melanoma// Melanoma Res.-2001 -11 -P. 157-166.

90. Moilanen M., Pirila E., Grenman R., Sorsa Т., Salo Т., Expression and regulation of collagenase-2 (MMP-8) in head and neck squamous cell carcinoma//J. Pathol. -2002197 -p.72-81.

91. Balbin M., Fueyo A.,. Tester A.M, Pendas A.M., Pitiot A.S., Astu-dillo A., C.M. Overall, Shapiro S.D., Lopez-Otin C., Loss of collage-nase-2 confers increased skin tumor susceptibility to male mice//Nat. Genet. -2003- 35 -P.252-257.

92. Coussens L. M., Fingleton В., Matrisian L. M. Matrix metalloproteinase inhibitors and cancer: trials and tribulations // Science-2002 -295(5564) -P. 23872392.

93. Komissarova E. V., Soyfer M. V., Pavlova L. S., Kisseljov F.L. Oncol. Rep.-1995-Vol. 2-P. 1169-1174

94. Zhurbitskaya V. A., Fedorova L. I., Yartseva N. M., Savel'eva L. V., Zelenin A. V., Kisseljov F. L., Mol. Biol.-1999-Vol. 33-P.243-247

95. Yartseva N., Komissarova E., Zhurbitskaya V., Kisseljova N., Pavlova L., FedortsevaR., Kisseljov F., Oncol. Rep.-1997-Vol. 4-P. 629-635

96. Schwarz E., Freese U. K., Gissmann L., Mayer W., Roggenbuck В., Stremlau A., zur Hausen H. Structure and transcription of human papillomavirus sequences incervical carcinoma cells //Nature.- 1985-Vol. 314-P. 111-114.

97. Callahan D. E, Karim A, Zheng G, Tso P. O, Lesko S. A., Quantitation and mapping of integrated human papillomavirus on human metaphase chromosomes using a fluorescence microscope imaging system //Cytometry.-1992; 13(5):453-461.

98. Mincheva A., Gissmann L., zur Hausen H. Chromosomal integration sites of human papillomavirus DNA in three cervical cancer cell lines mapped by in situ hybridization//Med. Microbiol. Immunol.-1987-Vol. 176-P. 245-256.

99. Chirgwin J. M., Przybyla A. E., MacDonald R. J., Rutter W. J. Isolation of biologically active ribonucleic acid from sources enriched in ribonuclease // Biochemistry-1979-Vol. 18-P.5294-5299.

100. Samoylova E.V., Shaikhaiev G.O., Petrov S.V., Kisseljova N.P., Kisseljov F.L., //Int. J. Cancer,-1995-Vol. 610P. 337-341.

101. Ivanova Т., Vinikurova S., Petrenko A., Eshilev E. Solovyova N., Kisseljov F., Kisseljova N., // Int. J. Cancer-2004-Vol. 108-P. 882-886.

102. Рыжакова О.С., Соловьева Н.И. Метод определения активности тканевых коллагеназ с помощью коллагена меченного флуоресцеин изотиоцианатом. // Биомедицинская химия-2005.-Т. 51-С. 432-438.

103. Kato Y., Yamashita Т., Ishikawa M., Relationship between expression of matrix metalloproteinase-2 and matrix metalloproteinase-9 and invasion ability of cervical cancer cells. // Oncology Reports.-2002-Vol.9(3)-P.565-569.

104. John A., Tuszyski G. The Role of Matrix Metalloproteinases in Tumor

105. Angiogenesisand Tumor Metastasis // Pathology oncology research-2001-№ 1-Vol 7,

106. Sheu В., Ysu S., Ho H., A novel role of metalloproteinase in cancer-mediated immunosupression // Cancer Res. 2001 -61(1)- P. 237-242.

107. Rauvala M., Aglund K., Puistola U., Turpeenniemi-Hujanen Т., Horvath G., Willen R., Stendahl U. Matrix metalloproteinases-2 and -9 in cervical cancer: different roles in tumor progression // Int. J. Gynecol. Cancer.-2006-Vol. 16(3)-P. 1297-302.

108. Arguello-Ramirez J., Perez-Cardenas E., Delgado-Chavez R., Solorza-Luna G., Villa-Trevino S., Arenas-Huertero F. Matrix metalloproteinases-2, -3, and -9 secreted by explants of benign and malignant lesions of the uterine cervix // Int. J. Gynecol.

109. Cancer.-2004-Vol. 14(2)-P. 333-40.