Информативность полимеразной цепной реакции для диагностики туберкулеза легких тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Ларионова, Елена Евгеньевна

• Ларионова, Елена Евгеньевна
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ларионова, Елена Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8

1.1. Род микобактерий.

1.2. Микробиологические методы обнаружения и идентификации 11 микобактерий.

1.3. Молекулярно-генетические методы в детекции микобактерий.

1.4. Применение ПЦР в лабораторной диагностике туберкулеза.

Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 34-44 2.1. Материалы. 3 4 2.2 Методы.

Глава 3 ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ С 45-59 КУЛЬТУРАМИ Mycobacterium tuberculosis

3.1. Пороговая чувствительность выявления ДНК М.tuberculosis.

3.2. Выделение ДНК из культуры М.tuberculosis H37Rv.

Глава 4 УСЛОВИЯ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ 60-73 ПРОВЕДЕНИЯ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ

4.1. Подготовка образцов мокроты.

4.2. Выбор способа выделения ДНК из мокроты.

4.3. Установление оптимального объема образцов мокроты для 66 проведения ПЦР.

4.4. Сравнительное исследование чувствительности и 68 специфичности ПЦР тест-систем.

Глава 5 ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ В 74-91 ДИАГНОСТИКЕ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ

5.1. Роль ПЦР в выявлении возбудителя в мокроте больных 74 разными формами туберкулеза легких.

5.2. Обнаружение ДНК M.tuberculosis у больных туберкулезом 83 легких в процессе лечения.

5.3. Повышение результативности ПЦР при дополнительном 87 культивировании мокроты.

Глава 6 ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДОМ ПЦР 92-108 РАЗЛИЧНЫХ ОБРАЗЦОВ ДИАГНОСТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ОТ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ

6.1. Исследование биоптатов тканей.

6.2. Бронхоальвеолярные смывы, плевральные экссудаты и моча.

6.3. Использование крови в качестве диагностического материала.

6.4. Повышение результативности при использовании комплекса 105 диагностических образцов.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 109

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Информативность полимеразной цепной реакции для диагностики туберкулеза легких»

Актуальность исследования.

Туберкулез остается широко распространенным заболеванием. Ежегодно в мире регистрируется два-три миллиона новых случаев болезни, из них 10-12% составляют диссеминированные формы. Активные формы туберкулеза встречаются лишь у 0.5-1% населения земли. По данным ВОЗ за время жизни больной активным туберкулезом легких инфицирует 20 человек.

Длительное время туберкулез может протекать бессимптомно, а в ряде случаев заболевание диагностируется только после смерти. Таким образом, своевременная диагностика заболевания представляется весьма актуальной. Основным критерием лабораторной диагностики туберкулеза остается выявление возбудителя - Mycobacterium tuberculosis в диагностическом материале.

Традиционные микробиологические методы выявления возбудителя не всегда позволяют подтвердить диагноз туберкулез. Метод люминесцентной бактериоскопии и посева на питательные среды обладают низкой чувствительностью и обнаруживают М.tuberculosis в среднем лишь у 50-60% больных активным туберкулезом легких, в связи с этим внедрение методов быстрого и специфичного выявления М. tuberculosis может способствовать разрешению проблем обнаружения М tuberculosis. [Оттен Т.Ф., 1997].

В последнее десятилетие широкое распространение получили методы диагностики инфекционных заболеваний на основе выявления специфической ДНК или РНК возбудителя. Об этом свидетельствуют многочисленные исследования. [Gyllensten U.B., Cui X. et al., 1988; Cheab F.F., Kan Y.W. et al., 1989; Boddinghaus B. and Bottger E.C. et al., 1990; Ehlers S. and Hahn H. et al., 1994; Abu Al-Soud W., Radstrom P. et al., 1998; Honore-Bouakline S., and Herrmann J.L. et al., 2003].

В связи с этим внедрение в практику новых молекулярно-генетических методов исследования будет способствовать проведению диагностики туберкулеза в максимально короткие сроки и благодаря этому уменьшит уровень первичного инфицирования за счет раннего выявления больных и правильно организованной химиотерапии.

Поэтому целью настоящего исследования явилась оценка эффективности метода полимеразной цепной реакции для диагностики туберкулеза легких при использовании различного диагностического материала и определение места ПЦР в комплексе диагностических лабораторных исследований.

Задачи исследования;

• Оценить специфичность и аналитическую чувствительность ПЦР при выявлении ДНК М. tuberculosis с помощью различных отечественных тест-систем.

• Оптимизировать условия этапа подготовки проб и экстракции ДНК из различного диагностического материала от больных туберкулезом легких.

• Определить эффективность ПЦР в сравнении с традиционными микробиологическими методами люминесцентной бактериоскопии и культурального посева при диагностике различных форм туберкулеза легких.

• Изучить возможность использования ПЦР для контроля эффективности противотуберкулезной химиотерапии.

• Проанализировать возможность использования крови от больных туберкулезом легких для выявления ДНК M.tuberculosis методом ПЦР.

Научная новизна.

Наибольшая диагностическая значимость результатов ПЦР по сравнению с бактериоскопией и посевом выявлена для больных с ограниченными туберкулезными поражениями, такими как туберкулез внутригрудных лимфатических узлов, инфильтративный и очаговый туберкулез легких. Впервые показана диагностическая ценность ПЦР при выявлении M.tuberculosis из крови у больных туберкулезом легких.

Основные положения, выносимые на защиту.

• Информативность метода ПЦР для диагностики туберкулеза зависит от формы и распространенности туберкулезного процесса в легких, от способа предварительной обработки диагностических образцов и полноты выделения ДНК.

• Результаты ПЦР могут служить лабораторным критерием для оценки эффективности проводимой терапии у больных туберкулезом легких с отрицательными результатами бактериоскопии и культурального посева.

• Диагностическая ценность результатов ПЦР для больных туберкулезом легких увеличивается при предварительном культивировании мокроты, и использовании в качестве диагностического материала крови, мочи, плевральных экссудатов и биоптатов различных тканей.

Практическая значимость.

• Выбраны способы подготовки проб, повышающие чувствительность полимеразной цепной реакции при выявлении ДНК М. tuberculosis в различных диагностических образцах.

• Показано, что гуанидин как универсальный лизирующий агент способствует наиболее полному выходу ДНК М. tuberculosis, как из культур, так и любых диагностических образцов.

• Применение ПЦР при диагностике и оценке эффективности химиотерапии туберкулеза целесообразно только для групп больных с отрицательными результатами традиционных бактериологических методов.

Внедрение в практику.

Методические подходы, применяемые для повышения информативности результатов ПЦР, внедрены в работу отдела микробиологии ГУ ЦНИИТ РАМН.

Результаты диссертации используются при чтении цикла лекций в учебном центре ГУ ЦНИИТ РАМН для аспирантов и ординаторов и в курсе постдипломного образования для врачей и лаборантов по специальности микробиологическая диагностика туберкулеза легких.

Апробация диссертационного исследования, публикации. Основные положения диссертации представлены на 3 съезде научно-медицинской ассоциации фтизиатров (Екатеринбург, 1997), на II, III и IV Всероссийских конференциях "Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний", (Москва, 1998, 2000, 2002), на IV и VII Всероссийском конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1997, 2002), на симпозиуме «Иммунодиагностика и иммунореабилитация при лепре, туберкулезе и других хронических заболеваниях» (Астрахань, 1998), на 9 национальном конгрессе по болезням органов дыхания (Москва, 1999), на национальном конгрессе «Клинической иммунологии, аллергологии и иммунореабилитации» (Алма-Аты, 1999), на научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы туберкулеза и других гранул ематозных заболеваний» (Москва, 2001), на заседании секции микробиологии и иммунологии туберкулеза Московского отделения Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002, 2003).

Диссертационное исследование апробировано на совместном заседании отдела микробиологии и иммунологии ГУ ЦНИИТ РАМН (30.06.2004 г.) По теме диссертации опубликовано 19 печатных работ. Раздел 5.2. главы 5 выполнен совместно с д.м.н. Васильевой И.А. Раздел 5.3. главы 5 выполнен совместно с к.т.н. Севастьяновой Э.В. Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы 5 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов и заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 146 страницах машинописного текста, иллюстрирована 12 рисунками и 35 таблицами. Список литературы содержит 29 отечественных и 171 зарубежных источников.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Ларионова, Елена Евгеньевна

ВЫВОДЫ:

1. Испытанные амплификационные ПЦР тест-систем позволяют выявлять от

7 9

1.07x10" до 5.35x10" мкг ДНК, что соответствует 2-40 клеткам M.tuberculosis.

2. Лизис гуанидином с последующей сорбцией ДНК на диатомовой земле приводит к более полному выделению ДНК M.tuberculosis, а адекватно выбранный метод пробоподготовки для различных видов клинического материала позволяет снизить содержание ингибиторов в образцах ДНК.

3. Эффективность ПЦР для диагностики туберкулеза легких превышает эффективность бактериоскопии и посева и составляет при диссеминированном туберкулезе 85.7%, фиброзно-кавернозном туберкулезе -100%, инфильтративном - 81.3%, очаговом - 78.7%, плеврите - 85.7%, туберкулеме - 85.7%, первичном туберкулезном комплексе - 80.5%, туберкулезе внутригрудных лимфоузлов - 63.3%.

4. Метод ПЦР является определяющим для лабораторного контроля эффективности противотуберкулезной химиотерапии у больных туберкулезом легких с отрицательными результатами бактериоскопии и посева, так как у 52.1% больных динамика абациллирования мокроты была установлена только по результатам ПЦР.

5. У 100% животных с экспериментальным туберкулезом и у 47 % больных с тяжелыми туберкулезными процессами в легких, а также у 33.8% больных с ограниченными туберкулезными процессами в легких методом ПЦР в крови выявлялась ДНК M.tuberculosis, что является основанием для использования крови в качестве дополнительного диагностического материала при выявлении туберкулеза.

6. Предварительное культивирование мокроты, а также одновременное исследование различных образцов: мокроты, крови, мочи, бронхоальвеолярных смывов и экссудатов увеличивало число положительных результатов ПЦР у абациллярных больных, что повышало эффективность диагностики туберкулеза легких.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1. Для повышения значимости ПЦР при диагностике туберкулеза легких необходимо диагностический материал подвергать адекватной подготовке перед выделением ДНК.

2. При постановке ПЦР с диагностическим материалом, содержащим M.tuberculosis, для лизиса клеток можно использовать гуанидиновый метод.

3. Для повышения результативности ПЦР у больных туберкулезом легких с отрицательными результатами бактериоскопии и посева необходимо кратковременное культивирование мокроты на жидких питательных средах для последующего исследования методом ПЦР.

4. У больных туберкулезом с ограниченными процессами в легких для исследования методом ПЦР необходимо одновременно использовать комплекс диагностических образцов, таких, как кровь, мочу, бронхоальвеолярные смывы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ларионова, Елена Евгеньевна, 2005 год

1. Андреевская С.Н. Генетическая вариабельность M.tuberculosis семейства W. Конференция молодых ученых. Актуальные вопросы фтизиопульмонологии // М., 2003. - стр. 6-8

2. Биргер М.О. Руководство по микробиологическим методам // М., Медицина., 1982. - стр. 80.

3. Барри Блум Р. Туберкулез патогенез, защита, контроль // Москва. Медицина. 2002

4. Бочкарев Е.Г. Актуальные вопросы генодиагностики туберкулеза. // Иммунопатология, аллергология, инфектология 2000 - № 1- стр. 92-96

5. Вейсфейлер Ж.Г. Биология и изменчивость микобактерий туберкулеза и атипичные микобактерии // Будапешт. Венгрия 1975

6. Вишневский Б.И., Оттен Т.Ф. Актуальные вопросы современной микобактериологии // Новые технологии в диагностике и лечении туберкулеза различных органов и систем.- СПб.- 1998.- стр. 21-23

7. Владимирский М.А., Шипина Л.К. Молекулярно-биологические методы определения возбудителя туберкулеза // Реферативный сборник. Туберкулез. 1997.- № 2. - стр. 1-5

8. Голышевская В.И. Корнеев А.А., Черноусова Л.Н. Биологическая характеристика M.tuberculosis и трудности микробиологической диагностики туберкулеза // Пробл.Туб. 1995. - 2. - стр. 30-32

9. Голышевская В.И., Корнеев А. А., Черноусова Л.Н. Микробиологическая диагностика туберкулеза // Вестн.Рос.Акад.наук. 1995.-7. - стр. 16-18

10. Голышевская В.И., Черноусова Л.Н., Шашкина Е.Ф. и др. Применение ПЦР для диагностики туберкулеза легких // Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний. М., - 1998. - стр. 93-94

11. Демкин В.В., Скотникова О.И., Николаева Н.П. и др. Эффективность выявления микобактерий туберкулезного комплекса тест-системой, основанной на использовании принципа nested ПЦР // Генодиагностика в современной медицине. М., - 2000. - стр. 268 - 271

12. Журавлев В.Ю., Соловьева Т.Н., Суворов А.Н., Трес А.С. Этиологическая диагностика олиго и абациллярного туберкулеза органов дыхания // Туберкулез сегодня: проблемы и перспективы. М. -2000.-стр. 71-73

13. Иртуганова О.А., Смирнова Н.С., Галкина К.Ю., Мороз A.M., Иртуганова И.Д. Использование Cobas Amplicor для подтверждения результатов при выявлении M.tuberculosis с помощью ВАСТЕС 960 // материалы VII съезда фтизиатров 2003.

14. Иртуганова О. А., Смирнова Н.С., Слогоцкая JI.B и др. Автоматизированные методы культурального определения M.tuberculosis на жидких средах // Пробл.Туб.- 2001. № 3. - стр. 53-56

15. Калюк А.Н. Комплексные бактериологические исследования в диагностике туберкулеза // Туберкулез и экология- 1995. 3. стр. 28-31

16. Козулицына Т.И. Микробиологические исследования. // руководство для врачей: Туберкулез органов дыхания. М.,- 1981. стр. 136-149

17. Корнеев А.А., Пузанов В.А., Гришина Т.Д., Черноусова JI.H.

18. S и R формы М tuberculosis как проблема получения клонированных и фенотипически компетентных штаммов // Пробл.Туб.- 1996.- 2.- стр. 36-40

19. Оттен Т.Ф. Микобактериозы легких в период ухудшения эпидемической обстановки по туберкулезу // Новые технологии в диагностике и лечении туберкулеза различных органов и систем. — СПб. 1998.-2.- стр. 62-63.

20. Оттен Т.Ф. Нетуберкулезные микобактерий как возбудители заболеваний человека // Материалы VII съезда Всерос. общ. эпидемиол. микробиол.и паразитол.- М.- 1997. стр. 319 - 320

21. Покровский В.И., Подзеев O.K. Медицинская микробиология // .Гэотар медицина. 1999

22. Приказ МЗ РФ "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации" №109 от 21.03.2003г.

23. Смирнова Т.Г., Черноусова JI.H., Андреевская С.Н., Николаева Г.М.

24. К характеристике экспериментальной модели эндогенно-реактивированного туберкулеза: определение ДНК микобактерий в процессе химиотерапии // Пробл.Туб.- 2002.- 12. стр. 52-56

25. Стаханов В. А., Леви Д.Т., Владимирский М.А. Диагностика туберкулеза методом полимеразной цепной реакции // В сб.: Туберкулез сегодня: проблемы и перспективы. М. - 2000. - с. 85-87

26. Черноусова Л.Н., Николаева Г.М., Смирнова Т.Г. и др. // Определение содержания ДНК микобактерий в диагностическом материале от больных туберкулезом легких в процессе химиотерапии // Генодиагностика в современной медицине. М. - 2000.- стр. 291 - 292

27. Черноусова Л.Н., Севастьянова Э.В. и др. // Повышение эффективности диагностики абациллярного туберкулеза при сочетании ПНР-анализа с культуральным посевом // Генодиагностика в современной медицине. М.- 2000. - стр. 290-291

28. Черноусова Л.Н., Севастьянова Э.В. и др. Обнаружение M.tuberculosis в мокроте больных с ограниченными формами туберкулеза легких методом ПЦР // Туберкулез сегодня проблемы и перспективы. - М.-2000. - стр. 89-90.

29. Abu Al-Soud W., Radstrom P. Capacity of nine thermostable DNA polymerases to mediate DNA amplification in the presence of ПЦР-inhibiting samples. //Appl.Environ.Microbiol. 1998: -64: -3748-3753

30. Abu Al-Soud W., Radstrom P. Purification and characterization of ПЦР-inhybitory components in blood cells. // J.Clin.Microbiol. 2001: -39: -485493

31. Ales Tichopad, Anamarija Dzidic Michael W. Pfaffl. Improving quantitative real-time RT-ПЦР reproducibility by boosting primer-linked amplification efficiency // Biotechnology Letters. 2002: -24: -2053-2056

32. Ales Tichopad, Michael Dilgerl, Gerhard Schwarz and Michael W. Pfafo. Standardized determination of real-time ПЦР efficiency from a single reaction set-up // Nucleic Acids Research 2003: Vol. 31. No. 2012

33. Alugupally S., Olsson В., Larsson L. Detection of 2-eicosanol by gas chromatography mass spectrometry in sputa from patients with pulmonary mycobacterial infections. // J.Clin.Microbiol - 1993:- 31:- 1575-1578

34. Bachrach G., Colston M.J., Bercovier H. et al. A new single-copy mycobacterial plasmid, from Mycobacterium fortuitum which is compatible with the pAL5000 replicon // Microbiology. 2000. - Vol. 146. - No. 2. - P. 297-303

35. Balinda A.J.Giesendore, Jacqueline A.M., Vet, Sanjay Tyagi, Ewald J.M.G. Mensink, Frans J.M. Trijbels and Henk J.Blom. Molecular beacons: a new approach for semiautomated mutation analysis // Clinical Chemistry 1998. -44.-3.-482-486

36. Baiter M. AIDS now World's fourth biggest killer // Science. 1999. - No. 3. -P.1101 - 1102.

37. Beggs M.L., Crawford J.T., Eisenach K.D. Isolation and sequencing of the replication region of Mycobacterium avium plasmid // J.Bacteriol. 1998.-Vol. 177. - No. 17. - P. 4836-4840.

38. Beige J., Lokies J., Schaberg Т., Finckh U., Fischer M., Mauch H., Lode H., Ko.Hler B. and Rolfs A. Clinical Evaluation of a Mycobacterium tuberculosis ПЦР // Assay J.Clin.Microbiol. 1995.-p. 90-95-Vol. 33,-No. 1

39. Bennedsen J., Larsen S.O. Examination for tubercle bacilli by fluorescence microscopy. Scand. J.Resp.Dis. 1966. - V.47.-P.114-120

40. Bloom B.R., and Murray C.J.L. Tuberculosis: commentary on a reemergent killer// Science 1992.-257:-1055-1064

41. Boddinghaus В., Rogall Т., Flohr H., Blocker and Bottger E.C. Detection and identification of mycobacteria by amplification of rRNA. // J.Clin. Microbiol. 1990. -28:-1751-1759

42. Bonnet G., Tyagi S., Libcha A., Russel F.K. Thermodynamic basis of the enhanced specificity of structured DNA probes // Biophysics 1999 -Vol. 96 -p 6171-6176

43. Boom R., Sol C. and Wertheim-van Dillen P. Rapid purification of ribosomal RNAs from neutral agarose gels. // Nucleic Acids Res. 1990. -25>2195

44. Boom R., Sol C.J.A., Salimans M.M.H. Rapid and simple method for purification of nucleic acid // J.Clin.Microb. 1990. - Vol. 28. - No. 2. - P. 495-503.

45. Buck G.E., O'Hara L.C. and Summersgill J.T. Rapid, simple method for treating clinical specimens containing Mycobacterium tuberculosis to remove ДНК for polymerase chain reaction. // J.Clin. Microbiol. 1992. -30:-1331- 1334

46. Bustin S.A. Absolute quantification of mRNA using real-time reverse transcription polymerase chain reaction assays // Journal of Molecular Endocrinology 2000 25, 169-193

47. Butler W.R., Jost K.S., Kilburn J.O. Identification of mycobacteria by high-performance liquid chromatography // J.Clin. Microbiol. 1991. - Vol. 29.-No. 13.-P.2468-2472

48. Catanzaro A. // Diagnosis, differentiating colonization, infection, and disease. // Clin. Chest Med. 2002. 23:599-601

49. Cheab F.F., Kan Y.W. // Detection of specific DNA sequences by fluorescence amplification: a color complementation assay // Proc.Nat.Acad.Sci 1989.-Vol. 86,-No. 17.-P. 9178-9182

50. Chedore P., Jamieson F.B. Rapid molecular diagnostics of tuberculosis meningitis using the Gen-Probe Amplified Mycobacterium tuberculosis Detect Test in a large Canadian public health laboratory // J.Tuberc. Lung Dis -2002.- 6(10): -913-919

51. Chin D.P, Yajko D.M., Hadley W.K. et al. Clinical utility of a commercial test based on the polymerase chain reaction for detecting Mycobacterium tuberculosis in respiratory specimens // Am.J.Respir.Crit.Care Med. 1995. -Vol. 151.-No. 8.-P. 1872-1877

52. Chiyoji A., Kazue H., Tetsuo T. Rapid Identification of the Mycobacterium tuberculosis Complex by Immunochromatographic Assay Using Anti-MPB64 Monoclonal // Antibodies Journal of Clinical Microbiology 1999 -p. 3693-3697. -No. 11

53. Cirillo, J.D., Barletta R.G., Bloom B.R., and Jacobs W.R. A novel trans-poson trap for mycobacteria: isolation and characterization of S096. // J.Bacterial. 1991.- 173.-7772-7780.

54. Clad A. et al. Evidence of labile inhibitors in the detection of Chlamydia trachomatis in cervical specimens by polymerase chain reaction. // Eur J.Clin Microbiol Infect Dis 1996.- Sep. 15(9): -p744-747

55. Clark-Curtiss, J. E., Jacobs W.R., Do-cherty M.A., Ritchie L. R. and Curtiss I.R. Molecular analysis of DNA and construction ofgenomic libraries of Mycobacterium leprae. //J.Bacterial. 1985 -161 :-p 1093-1102

56. Clarridge J. E., Shawar R.M., Shinnick T.M. and Plikaytis B.B. Large-scale use of polymerase chain reaction for detection of Mycobacterium tuberculosis in a routine mycobacteriology laboratory. // J.Clin. Microbiol. -1993.-31 >2049-2056

57. Cole S.T., Brosch R., Parkhill J. et al. Deciphering the biology of Mycobacterium tuberculosis from the complete genome sequence // Nature. 1998. V.393. №6685. P.537-544

58. Dailloux M., Laurain C. Value of nucleic acid amplification methods Amplicor (Roche) and Amplified MTD (Gen-Probe) for the rapid diagnosis of tuberculosis // Ann.Biol.Clin.Paris. 1996. - Vol. 54.-P. 297-301

59. D'Amato R.F., lsemberg H.D., Hochshtein L. et al. Evaluation of the Roshe Septi-Check AFB system for the recovery of mycobacteria // J.Clin.Microbiol. 1991 - Vol. 29. - No. 15. - P. 2906-2908

60. Dar L., Sharma S.K., Bhanu N.V. et al. Diagnosis of pulmonary tuberculosis by polymerase chain reaction for MPB 64 gene: an evaluation in a blind study // Indian J.Chest Dis.Allied Sci. 1998. - Vol. 40.-No. l.-P. 5-16

61. Deneer H.G., Knight I. Inhibition of the polymerase chain reaction by mucolytic agents. // Clin.Chem. 1994. -40: -P 171-172

62. Dooley S.W., Jams W.R., Martone W.J. and Snider D.E. Multi-drug resistant tuberculosis. // Ann. Intern. Med. 1992 - 117: - P 257-259

63. Dragon A.D., Spadoro J.P., Madej R. Quality Control of Polymerase Chain Reaction. Diagnostic Molecular Microbiology. Principles and Applications. // Washington: ASM Press; 1993. p. 160 - 8

64. Ehlers S., Ignatius R., Regnath T. and Hahn H. Diagnosis of extrapulmonary tuberculosis by Gen-Probe amplified Mycobacterium tuberculosis direct test. // J.Clin.Microbiol. 1996. -N 34:-P 2275-2279

65. Ehlers S., Pirmann M., Zaki W. and Hahn H. Evaluation of a commercial rRNA target amplification assay for detection of Mycobacterium tuberculosis complex in respiratory specimens. Eur. // J.Clin.Microbiol. Infect. Dis. 1994. - N 13. - P827-829

66. Eiglmeier K., Pascopella L., Honort N., Jacobs W. R. and Cole S. T. An ordered collection of shuttle cosmids representing the chromosome of Mycobacterium leprae: some practical applications. // Unpublished data

67. Eisenach K.D., Cave M.D., Sifford D., Bates J.H. and Crawford J.T. Detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical sputum samples using a polymerase chain reaction. // Am. Rev. Respir. Dis. 1991. 144:1160-1163

68. Eriich H.A., Gelfand D., Sninsky J.J.Recent advances in the polymerase chain reaction // Science. 1991. - Vol. 252. - No. 10. - P. 1643 - 1651

69. Fiallo P., Williams D.L., Chan G.P., Gillis T.P. Effects of fixation on polymerase chain reaction detection of Mycobacterium leprae. // J.Clin. Microbiol. 1992. 30: 3095-3098

70. Forbes B.A. and Hicks K.E. Direct detection of Mycobacterium tuberculosis in respiratory specimens in a clinical laboratory by polymerase chain reaction. //J.Clin. Microbiol. 1993. 31:1688-1694

71. Fries J.W.U., Patel R.J., Piessens W.F. and Wirth D.F. Detection of untreated mycobacteria by using polymerase chain reaction and specific ДНК probes. //J.Clin. Microbiol. 1991.29:1744-1747

72. Frothingham R., Wilson K.H. Molecular phylogeny of the Mycobacterium avium complex demonstrates clinically meaningful divisions // J.Infect.Dis. 1994.-Vol. 169. - No. 2. - P. 305-312

73. Frothingham R., Wilson K.H. Sequence-based differentiation of strains in the Mycobacterium avium complex // J.Bacteriol. 1993. - Vol. 175. - No. 13.-P. 2818-2825

74. Gambof F., Manterola J.Ma. et al. Rapid detection of Mycobacterium tuberculosis in respiratory specimens, blood and other non-respiratory specimens by amplification of rRNA // Tuberc. Lung Dis 1997 1(6): 542555

75. Garcia-Quintanilla A., Garcia L., Tudo G. et al. Single-tube balanced heminested ПЦР for detecting Mycobacterium tuberculosis in smear-negative samples // J.Clin. Microbiol. 2000. - Vol. 38.-No. 3.-P. 1166-1169

76. Ginesu F., Pirina P., Sechi L.A. et al. Microbiological diagnosis of tuberculosis: a comparison of old and new methods // J.Chemother. 1998. Vol. Ю.-No. 4.-P. 295 -300

77. Griner H.F., Mayewski R.G., Mushlin F.Y. Selection and interpretation of diagnosis tests and procedures // Ann.Internal. Med. 1981. Vol.94.-P.555-600

78. Guilhot C., Gicquel В., Davies J.and Martin C. Isolation and analysis of IS6120, a new insertion sequence from Mycobacterium smegmatis. // Mot. Microbiol. 1992 6:107-113

79. Hance A.J., Grandchamp В., Levy-Frebault V. et al. Detection and identification of mycobacteria by amplification of mycobacterial DNA // Mol.Microbiol. 1989. Vol. 3. - No.5. - P. 843 - 849

80. Harrington B.J. 1966 J.gen. Microbiol 45.31.

81. Honore-Bouakline S., Vincensini J.P., Giacuzzo V., Lagrange P.H., and Herrmann J.L. Rapid Diagnosis of Extrapulmonary Tuberculosis by ПЦР: Impact of Sample Preparation and DNA Extraction // J. Clin.Microbiol., June 2003. p. 2323-2329 Vol. 41, No. 6

82. Ieven M. and Goossens H. Relevance of nucleic acid amplification techniques for diagnosis of respiratory tract infections in the clinical laboratory. //Clin. Microbiol. Rev. 1997. 10:242-256

83. Jacobs W.R., Kalpana G.V., Cirillo J.D., Pascopella L., Snapper S.B., Udani R.A., Jones W., Barletta R.G. and Bloom B.R. Genetic systems for the mycobacteria. // Methods Ensymol. 1991 204: 537-555

84. Jacobsen C.S., Rasmussen O.F. Development and application of a new method to extract bacterial DNA from soil based on separation of bacteria from soil with cation-exchange resin. // Appl.Environ.Microbiol. 1992

85. Jatana S.K., Nair M.N., Lahiri K.K., Sarin N.P. Polymerase chain reaction in the diagnosis of tuberculosis // Indian Pediatr. 2000. - Vol. 37. - No. 4.-P. 375-382

86. Jonas V., Alden M.J., Curry J. et al. Detection and identification of Mycobacterium tuberculosis directly from sputum sediments by amplification of rRNA // J.Clin.Microbiol. 1993. - Vol. 31. - No. 10. - P. 2410-2416

87. Kado C.I. and Liu S.-T. Rapid Procedure for Detection and Isolation of Large and Small Plasmids // J.Bacteriology, Mar. 1981. p. 1365-1373 Vol. 145, No. 3

88. Kafwabulula M., Ahmed K., Nagatake Т., Gotoh J., Mitarai S., Oizumi K., Zumla A. Evaluation of ПЦР-based metohods for the diagnisis of tuberculosis by identification of mycobacteria DNA in urine samples Int. J.Tuberc. Lung Dis. 2004. 6(8):732-737

89. Kaneko K., Ondera O., Miyatake T. and Tsuji S. Rapid diagnosis of tuberculous meningitis by polymerase chain reaction (ПЦР). // Neurology // 1990. 40: 1617-1618

90. Katila M.L., Katila P., Erkmjuntti-Pekkanen R. Accelerated detection and identification of mycobacteria with MGIT 960 and Cobas Amplicor systems // J.Clin.Microbiol. 2000. - Vol. 38.-No. 3.-P. 960 - 964

91. Katzman M. Use of oil overlays in "oil-free" ПЦР technology. // Bio-Techniques. 1993. 14: 36-40

92. Khan G., Kangro H.O., Coates P. J.and Heath R.B. Inhibitory effects of urine on the polymerase chain reaction for cytomegalovirus DNA. // J.Clin. Pathol. 1991.44:360-365

93. Kolattukudu P.E., Femandes N.D., Azad A.K. et al. Biochemistry and molecular gentics of cell-wall lipid biosynthesis in mycobacteria // Mol. Microbiol. 1997. - Vol. 24. - No. 1. - P. 263 - 270

94. Kolk A.H., Kox L.F., van Leeuwen J. et al. Clinical utility of the polymerase chain reaction in the diagnosis of extrapulmonary tuberculosis // Eur.Resp.J. 1998.-Vol. 11.-No. 6.-P. 1222-1226

95. Kramer F.R., Tyagi S., Alland D., Almadi O., Bratu D., Elhajj H. et al. Molecular Beacond Hybridization Probesfor the Detection of Nucleic Acids in Homogeneous Solutions

96. Kubica G.P., Dye W.E., Cohn M. L. and Middlebrook G. Sputum digestion and decontamination with N-acetyl-L-cysteinesodium hydroxide for culture of mycobacteria. // Am. Rev. Respir. Dis. 1963 87:775-779

97. Landegren U., Kaiser R., Caskey C.T., Hood L. DNA diagnostic: molecular techniques and automation // Science. 1988. - Vol. 242. - No. 1. - P. 229237

98. Lau J.Y.N., Qian K., Wu P.C., Davis G.L. Ribonucleotide vanadyl complexes inhibit polymerase chain reaction. // Nucleic Acids Res. 1993. 21: 2777

99. Le О.Ё., Bach K.H., Ho M.L. et al. Molecular fingerprinting of Mycobacterium tuberculosis strains isolated in Vietnam using IS6110 as probe // Tuberc. Lung Dis. 2000. - Vol. 80,-No. 2.-P. 75-83

100. Lebrun L., Espinasse F., Poveda J.D. et al. Evaluation of nonradioactive DNA probes for identification of mycobacteria // J.Clin.Microbiol. 1992. -Vol. 30.-No. 13.-P. 2476 - 2478

101. Li H., Gyllensten U.B., Cui X. et al. Amplification and analysis of DNA sequences in single human sperm and diploid cells // Nature. 1988. - Vol. 335.-No.3.-P. 414 - 417

102. Linares M.J., Pelaez M.J., Casal M. Application of high-performance liquid chromatography for identification of atypical mycobacteria // Clin. Mycobacter. 1998. - P. 185-187

103. Liquin M. Et al. Evaluation of practical chromatographic procedures for identification of clinical isolates of mycobacteria. J.Clin.Microboil. Jan.- -1991. vol.29, No.l, p. 120-130

104. Lsenberg H.D., D'Amato R.F., Heifets L. et al. Collaborative feasibility study of a biphasic system (Roshe Septi-Check AFB) for rapid detection and isolation of mycobacteria // J.Clin.Microbiol. 1991. - Vol. 29. - No. 9. - P. 1719-1722

105. Mangiapan G., Vokurka M., Schoub L., Cadranel J., Lecossier D., Van Embden J.and Hance A. Sequence capture ПНР improves detection of mycobacterial ДНК in clinical specimens. // J.Clin. Microbiol. 1996. 34:1209-1215

106. Martin C., Timm J., Rauzier, Gomez-Lus R., Davies J.and Gieguel B. Transposition of an antibiotic resistance element in mycobacteria. // Nature (London) 1990 345:739-743

107. Martin G. and Lazarus A. Epidemiology and diagnosis of tuberculosis. // Postgrad. Med. 2000. 108:42-54

108. Marttila H. Molecular genetics of drug-resistant Mycobacterium tuberculosis. И Turku, - 1999 - 79

109. Marttila H., Soini H., Huovmen P., Viljanen M. katG mutations in isoniazid-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates recovered from Finnish patients // Antimicr.Agents Chem. 1996. - Vol.40. - No.9. - P.2187-2189

110. McAdam R. A., Hermans P. W. M., van Soolingen D., Zainuddin Z. F., Catty D., van Embden J.D. A. and Dale J.W. Characterization of a Mycobacterium tuberculosis insertion sequence belonging to the IS3 family. // Mol. Microbiol. 1990 4:1607-1613

111. Michael W. Pfaffl. A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-ПЦР // Nucleic Acids Research, 2001 Vol. 29, No. 900

112. Miller A. Mastellone, Kim K., Colaninno P., Hochstein L. and D'Amato R. Rapid diagnosis of tuberculosis in various biopsy and body fluid specimens by the amplicor Mycobacterium tuberculosis polymerase chain reaction test. //Chest 1998.113:1190-1194

113. Mira-Guttierez J., Paredes-Salido F., Sasian-Matias P. et al. Value of a gas chromatography to identify some rapidly growing mycobacterial species // Clin. Mycobacter. 1998. - P. 193 - 198

114. Miyazaky Y, Koga H, Kohno S, Kaku M. Nested polymerase chain reaction for detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical samples. // J Clin Microbiol 1993; 31: 2228-2232

115. Moore D.F., Curry J.I. Detection and identification of Mycobacterium tuberculosis directly from sputum sediments by ligase chain reaction // J.Clin.Microbiol. 1998.-Vol. 36.-No. 4.-P. 1028-1031

116. Mordarska H., Mordarski M., Goodfellow M. Chemotaxonomic characters and classification of some nocardioform bacteria // J.Gen.Microbiol. 1972. -Vol. 71.-P.77-86

117. Morris A.J., Reller L.B. Reliability of cord formation in ВАСТЕС media for presumptive identification of mycobacteria // J.Clin.Microbiol. 1993. -Vol. 31 - No. 12 - P. 2533 - 2534

118. Newton C.R., Graham А. ПЦР. // Oxford: Bios Scientific Publishers; -1996. p.18-9

119. Nightingale S.D., Byrd L.T., Southern P.M. et al. Incidence of Mycobacterium avium-intracellulare complex in human immunodefeciency virus-positive patients. // J.lnf.Dis. 1992.-Vol.165. - No. 6. - P. 1082-1085

120. Nishimura N et al. Direct polymerase chain reaction from whole blood without DNA isolation // Ann Clin Biochem 2000 Sep;37 ( Pt 5):674-80

121. Nolte F.S, Metchock B. Murray P.R., Baron E.J., Pfaller M.A. et al. Mycobacterium // Manual of Clinical Microbiology Washingtone, 1995. -P.400 - 437

122. Panes M.G., Rauzier J.LaGranderie M. Gheorghiu M. and Gicquel B. Functional analysis of pAL5000, a plasmid Mycobacterium fortuitum: construction of a mini mycobacterium-Escherichia coli shuttie vector. // J.Bacterial. 1990 172:2793-2797

123. Pao C.C, Yen T.S.B, You J.B., Maa J.S., Fiss E.H., Chang C.H. Detection and identification of Mycobacterium tuberculosis by DNA amplification. // J Clin Microbiol 1990; 28: 1877-1880

124. Persing D.H, Cimino G.D. Amplification Product Inactivation Methods. Diagnostic Molecular Microbiology. Principles and Applications. // Washington: ASM Press; 1993. p. 105 - 21

125. Pierre C, Lecossier D, Boussougant Y, et ell. // Use of a reamplification protocol improves sensitivity of detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical samples by amplification of DNA. // J Clin Microbiol 1991; 29: 712-717

126. Portillo-Gomez, L., S. Morris, and A. Panduro. Rapid and efficient detection of extra-pulmonary Mycobacterium tuberculosis by ПЦР analysis. // Int. J.Tuberc. Lung Dis. 2000. 4:361-370

127. Querol J.M., Minguez J., Garcia-Sanchez E., Farga M.A., Gimeno C. and Garcia-de-Lomas J. Rapid diagnosis of pleural tuberculosis by polymerase chain reaction. // Am. J.Respir. Crit. Care Med. 1995.152:1977-1981

128. Rafi A., Naghily B. Efficiency of Polymerase Chan Reaction for The Diagnosis of Tuberculosis Meningitis // Back to Medical Jornal of IAS, -1998 v 11,4

129. Richter С., Kox L.F., Van-Leeuwen J.V. et al. ПЦР detection of mycobacteraemia in tanzanian patients with extrapulmonary tuberculosis // Eur.J.Clin.Microb.InfectDis. 1996.-Vol. 15.-No. 10.-P. 813-817

130. Rivera A., Tupasi T. Rapid and improved recovery rate of M.tuberculosis in mycobacteria growth indicator tube combined with solid Lowenstein Jensen medium // Int. J.Tubercle and Lung Diseases. 1997. - v. 1. -p. 454-459

131. Roberts G.D., Koneman E.W., Kim Y.K. Mycobacterium Manual of clinical microbiology//NY, 1991.-P. 304-309.

132. Rosenstraus M., Wang Z., Chang S. Y., DeBonville D. and Spadoro J.P. An internal control for routine diagnostic ПЦР: design, properties, and effect on clinical performance. // J.Clin. Microbiol. 1998. 36:191-197

133. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F.et al. Enzymatic amplification of P-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia // Science. 1985. - Vol. 230. - P. 1350-1354

134. Saiki R.K., Walsh P.S., Levenson C.H., Eriich H.A. Genetic analysis of amplified DNA with sequence-specific oligonucleotide probes // Proc.Nat.Acad.Sci. 1989. - Vol. 86. - P. 6230 - 6234

135. Salch A.F., Weyer В., Bruns U. Comparison of ВАСТЕС MGIT 960 with ВАСТЕС 460 and solid media for detection of mycobacteria in clinical specimens in clinical laboratory // Clin.Microb.and Infect. 1999. Vol.5, Suppl.3.-P.95.

136. Saltini C. Direct amplification of Mycobacterium tuberculosis deoxyribonucleic acid in paucibacillary tuberculosis // Eur.Respir.J.- 1998. -Vol. II.-No. 6.-P. 1215-1217

137. Sanjay Tyagi, Salvatore A.E. Marras, Jacqueline A.M. Vet, and Fred Russell Kramer. Molecular Beacons: Hybridization Probs for Detection of Nucleic Acids in Homogeneous Solutions //

138. Satsangi J., Jewell D.P., Welsh K., Bunce M. and Bell J.I. Effect of heparin on polymerase chain reaction. // Lancet 1994 343:1509-1510

139. Sewell D.L., Rashad A.L., Rourke W.J. et al. Comparison of the Septi-Check AFB and ВАСТЕС systems and conventional culture for recovery of mycobacteria // J.Clin.Microbiol. 1993. Vol. 31 - No. 13 - P. 2689 - 2691

140. Shinnik T.M., Good R.C. Mycobacterial taxonomy // Eur.J.Cli.Microb. // Infect.Dis. 1994.-Vol. 13. -No.3. - P.884-901

141. Siddiqi S.H., Libonati J.P., Middlebrook G. Evaluation of a rapid radiometric method for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis //J.Clin.Microbiol. 1981 - Vol. 13. - No.4. - P. 908-912

142. Sjobring U., Mecklenburg M., Andersen A.B., Miomer H. Polymerase chain reaction for detection of Mycobacterium tuberculosis II J.Clin.Microbiol. -1990. Vol. 28.-No. 7.-P. 2- 200 2204

143. Small L.C., Ramakrishnan L., Falkow S. Remodeling schemesof intracellular pathogens. // Science. 1994 Vol. 263. No.2. - P.637-639

144. Snapper S.B., Lugosi L., Jekkel A., Melton R.E., Kieser Т., Bloom B.R., and Jacobs Jr. Lysogeny and transfomation in mycobacteria: stable expression foreign genes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988 85:69876991

145. Snapper S.B., Melton R.E., Mustal S. Kieser Т., and Jacobs W.R., Jr. Isolation and characterization of efficient plasmid transformation mutants of Mycobacterium smegmatis. // Mol. Microbiol. 1990 4:1911-1919

146. Snider U.E. and Roper W. L. The new tuberculosis. // N. Engl. J.Med. -1992.326:703-705

147. Soini H. and Musser J.Molecular diagnosis of Mycobacteria. // Clin. Chem. -2001. 47:809-814

148. Sritharan V., Barker R. H. A simple method for diagnosis M.tuberculosis infection in clinical samples using ПЦР. Mol Cell Probes 1991; 5 ;3 85-395

149. Stager C.E., Libonati J.P., Siddiqi S.H. et al. Role of solid media when using in conjunction with the ВАСТЕС system for mycobacterial isolation and identification // J.Clin.Microbiol. 1991. - Vol. 29 - No. 1 - P. 154-157

150. Starnbach M.N., Falkow S., Tomkins L.S. Species-specific detection of Legionella pneumophila in water by DNA amplification and hybridization. J.Clin.Microbiol. 1989. 27: 1257-1261

151. Su W.J., Tsou A.P., Yang M.H. et al. Clinical experience in using polymerase chain reaction for rapid diagnosis of pulmonary tuberculosis // Chung Hua I Hsueh Tsa Chin (Taipei). 2000. Vol. 63.-No. 7.-P. 521-526

152. Suffys P., Palomino J.C., Cardoso Leao S. et al. Evaluation of the polymerase chain reaction for the detection of Mycobacterium tuberculosis III Int.J.Tuberc.Lung Dis. 2000. Vol. 4.-No.2.-P. 179-183

153. Takagi N., Hasegawa Y., Lchiyama S., Shibagaki Т., Shimmokata K. Polymerase chain reaction of pleural biopsy specimens for rapid diagnosis of tuberculosis pleuritis Int. // J.Tuberc. Lung Dis. 1998. 4:338-341

154. Tan M.F., Ng W.C., Chan S.H. Comparative usefulness of ПЦР in the detection of Mycobacterium tuberculosis in different clinical specimens // J.Med.Microbiol. 1997 V. 46.-No. l.-P. 164-169

155. Tchernooussova L.N., Levy D.T., Savinkova S.N., Smirnova T.G.

156. Molecular typing of M.tuberculosis complex laboratory strains from Russia. // 21st Annual Congress of the European Society of Mycobacteriology. Venna-Austria. July 2-5. 2000

157. Tchernooussova L.N., Levy D.T., Savinkova S.N., Smirnova T.G. Molecular typing of M. tuberculosis complex laboratory strains from Russia. // 21st Annual Congress of the European Society of Mycobacteriology, Venna-Austria, 2000, PMo70

158. Thibert L., Lapierre S. Routine application of high-performance liquid chromatography for identification of mycobacteria // J.Clin.Microbiol. -1993.-Vol. 31.-No. 9.-P. 1759-1763

159. Thierry D., Cave M.D., Eisenach K.D., Crawford J.T., Bates J.H., Gicquel B. and Guesdon J.L. IS6110, an IS-like element of Mycobacterium tuberculosis complex. //Nucleic Acids Res. 1990 18:188

160. Thierry D.A., Brisson-Noel A., Vincent-Levy-Frebault S. et al. Characterization of a Mycobacterium tuberculosis insertion sequence, IS 6110, and its application in diagnosis // J.Clin.Microb. 1990. Vol. 28. - No. 12.-P. 2668-2673

161. Truant J.P., Brett W.A. and Thomas W.Jr. Fluorescence microscopy of tubercle bacilli stained with auramine and rhodamine. // Henry Ford Hosp. Med. Bull. 1962 10:287-296

162. Viveiros M., Pinheiro S., Moreira P., Pacheco T. and Brum L. Evaluation of a commercial ligase chain reaction assay for the diagnosis of pulmonary andextra-pulmonary tuberculosis. // Int. J.Tuberc. Lung Dis.- 1999.-3:-508-514

163. Vlaspolder F., Singer P. and Roggeveen C. Diagnostic value of an amplification method (Gen-Probe) compared with that of culture for diagnosis of tuberculosis. //J.Clin. Microbiol. 1995. 33:2699-2703

164. Wahiberg J, Lundeberg J., Hultman Т., Uhlen M. General colorimetric method for DNA diagnostics allowing direct solid-phase genomic sequencing of the positive samples // Proc.Nat.Acad.Sci. 1990. -Vol. 87.-P. 6569 - 6573

165. Waleed Abu Al-Soud and Peter Radstrom. Purification and Characterization of ПЦР-Inhibitory Components in Blood Cells. // Journal of Clinical Microbiology, 2001. -p. 485-493, -Vol. 39, -No. 2

166. Wilson I.G. Inhibition and facilitation of nucleic acid amplification. // Appl.Environ.Microbiol. 1997. -10: -3741-3751

167. Wilson K.H., Blitchington R.B., Green R.C. Amplification of bacterial 16S ribosomal DNA with polymerase chain reaction. //j Clin Microbiol 1990; -28:-1942-1946

168. Wilson S.M., McNerney R., Nye P.M., Godfrey-Faussett P.D., Stoker N. G. and Voller A. Progress towards a simplified polymerase chain reaction and its application to diagnosis of tuberculosis. // J.Clin. Microbiol. 1993. -31 :-776-782

169. Winter N. M., Lagranderie, J.Rauzier, J.Timm, C. Leclerc B. Guy, M. P. Kieny, M. Gheorghiu, and B. Gicquel. Expression ofheterologous genes in Mycobacterium bovis BCG: induction of a cellular response against HIV-1 Nef protein.//Gene 1991 109:47-54

170. Yagupsky P.V., Kaminski D.A., Palmer K.M., Nolte F.S. Cord formation in BACTEC 7H12 medium for rapid, presumptive identification of Mycobacterium tuberculosis complex 1990. - Vol. 28. - No. 7. - P. 1451 -1453

171. Young D.B., and Cole S.T. Leprosy, tuberculosis and the new genetics. // J.Bacterial. 1993 -175:-1-6

172. Yuen K.Y., Chan K.S., Chan C.M. et al. Use of а ПЦР in routine diagnosis of treated and untreated pulmonary tuberculosis // J.Clin.Pathol. 1993 Vol. 46.-No. 3.-P. 318-322

173. Zainuddin Z.F., Dale J.W. Does Mycobacterium tuberculosis have plasmids? // Tubercle. 1990. Vol. 71. - No. 1. - P. 43-49