Иммуноцитохимический метод в дифференциальной диагностике первичных и метастатических новообразований внутригрудной локализации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат биологических наук Мехеда, Лариса Владимировна

• Мехеда, Лариса Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мехеда, Лариса Владимировна

Список сокращений.

Цель исследования.

Глава 1 Обзор литературы.

Глава 2 Материалы и методы исследования.

2.1. Характеристика материала.

2.1.1. Получение и подготовка материала к исследованию.

2.2. Приготовление препаратов с использованием методов ЖЦ.

2.3. Метод иммуноцитохимического исследования.

Глава 3 Результаты собственных исследований.

3.1. Использование метода «Жидкостная цитология» для приготовления препаратов.

3.2. Иммуноцитохимический метод в определении гистологической формы опухоли.

3.3. Цитологический и ИЦХ анализ первичных опухолей легкого.

3.4. ИЦХ диагностика метастазов в лёгкие.

3.5. Сопоставление результатов цитологического с ИЦХ и. гистологического с ИГХ исследований.

3.6. Обсуждение результатов собственных исследований.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммуноцитохимический метод в дифференциальной диагностике первичных и метастатических новообразований внутригрудной локализации»

в тех случаях, когда затруднено или невозможно дооперационное получение материала для гистологического исследования.

Сопоставление результатов определения экспрессии молекулярных маркеров при ИЦХ и ИГХ проводилось рядом исследователей. Получена хорошая корреляция. Совпадение результатов этих исследований составило от 61% до 92% (Глухова Е.И., 2003; Лукашина М.И., 2003; Афанасьева З.А. и соавт., 2003; 2004; Bozzetti С., 2006 и соавт.).

ИЦХ в своем развитии значительно отстала от ИГХ. Это было связано с трудностями выполнения исследований на обычных мазках. Необходимым условием для точной оценки морфологии клеток при цитологическом исследовании является высокое качество препарата. Эффективность цитологической диагностики зависит от многих факторов: способа и качества получения материала, соблюдения методик фиксации и окрашивания, опыта и профессионализма цитопатолога, от формулировки диагноза, использования дополнительных, современных методов исследования и т.д. (Чепурная Ю.Ю., 2004). Нередко традиционное цитологическое исследование ассоциируется с высоким уровнем ложноотрицательных и ложноположительных результатов (Петрова Г.В., 2003; Grace А. и соавт., 2002).

С появлением жидкостной цитологии (ЖЦ) и, соответственно, возможностью приготовления качественных монослойных препаратов, их стандартизации, ИЦХ выходит на совершенно новый уровень. Сведения об использовании ЖЦ в ИЦХ исследовании в изученной отечественной литературе единичны (Савостикова М.В. 2010).

Жидкостная цитология (ЖЦ) (Liquid based cytology - LB С) по праву занимает важное место среди методов, нацеленных на улучшение качества цитологических препаратов, повышение эффективности цитологической диагностики. Тонкослойные препараты позволяют использовать современные методы автоматизированного скрининга и компьютерные технологии, а также дают возможность проводить молекулярно - биологические исследования. (Шабалова И.П., 2001; 2002; Vassilacos Р. и соавт., 2002; Abulafia О. и соавт., 2003; Parker Е.М. и соавт., 2004; Thienpont L. и соавт., 2004).

ИЦХ исследование может стать решающим, когда имеются трудности в определении гистологического строения опухоли; позволяет обнаружить даже единичные клетки опухоли в пунктате, установить источник метастазирования при невыявленном первичном очаге, определить происхождение метастаза при первично множественных опухолевых поражениях на дооперационном этапе.

Для решения этих задач сегодня может применяться широкий спектр цитоспецифических маркеров. Это тиреоглобулин для выявления метастазов и первичной диагностики папиллярного и фолликулярного рака, кальцитонин - для опухолей из С-клеток, а также простатоспецифический антиген для опредления рака предстательной железы. В настоящее время установлена органоспецифичность метастазов по экспрессии высоко- и низкомолекулярных цитокератинов. (Савелов Н.А и соавт., 2005). Экспрессия Melana А, меланосомного антигена НМВ - 45 позволяет в 80 -100% случаев диагностировать метастазы пигментсодержащей меланомы. Применение моноклональных антител НВМЕ - 1 к мезотелиальному антигену позволяет в 90% наблюдений отличить злокачественную мезотелиому от реактивных изменений мезотелия. Кроме того, экспрессия белков - факторов транскрипции, таких как TTF-1, Cdx2, TFE3 позволяют различить аденокарциному легкого, желудочно-кишечного тракта, подтвердить наличие почечноклеточного рака и т.п.

Таким образом, использование ИЦХ исследований, методов жидкостной цитологии позволит значительно расширить возможности цитологической диагностики первичных и метастатических поражений легких.

Клинические аспекты актуальности.

Согласно последней классификации, рак легкого, подразделяется на две большие группы: мелкоклеточный (MKPJI) и немелкоклеточный (HMPJI) и характеризуется принципиально разными подходами к объему лечения. (ВОЗ, 2004). При HMPJI, как правило, используется хирургический метод лечения. При MKPJ1 - всегда рассматривается консервативная терапия. Обязательным условием для адекватного выбора схемы лечения является чётко установленная гистологическая форма новообразования. Цитологическое исследование приобретает особую ценность при периферическом PJI, когда опухоль недоступна для биопсии. Заключения «немелкоклеточный рак лёгкого» клиницисту недостаточно для определения тактики лечения. Необходимо на дооперационном этапе четко определиться с диагнозом: аденокарцинома (АК), плоскоклеточный рак (ПРЛ), крупноклеточный рак (КРЛ), диморфный рак, карциноид и проч. Кроме того, среди органов, наиболее часто поражаемых метастазами, легкие занимают одно из ведущих мест. Частота и характер метастазирования зависят, как правило, от первичной локализации опухоли. Изолированное метастатическое поражение легких встречается в 6-30% случаев. Для некоторых локализаций злокачественных опухолей (саркомы мягких тканей, рак почки, хорионэпителиома матки) легкие являются как бы мишенью и в 60-70% случаев длительное время остаются единственным местом отдаленного метастазирования. Примерно у 1/3 больных с изолированным поражением легких наблюдаются единичные метастазы, которые в 70-90% случаев располагаются на периферии легких и потому могут подвергаться хирургическому или комбинированному лечению. Современные подходы в диагностике позволяют добиться у части больных не только положительного эффекта лечения, но и выздоровления. (Трахтенберг А.Х., Пикин О.В., Паршин В.Д., 2009; Рыбакова Н.И., 1964; Самсонов В.А., 1970; Дымарский Л.Ю, 1966; Левшин В.В., 1970; Miller К.М., 1987; Thomford N.R., 1995).

Хирургу, ещё до оперативного вмешательства, важно знать природу опухолевых изменений в лёгких, так как это напрямую связано с объемом планируемой операции - от краевой резекции при метастатическом поражении, до лобэктомии с систематической медиастинальной лимфодиссекцией (СМЛД) при РЛ. При срочном интраоперационном морфологическом исследовании заключение, в плане первичной органной принадлежности опухоли, часто неинформативно, что заставляет хирурга ограничиваться атипичной резекцией лёгкого. При получении заключения при плановом морфологическом исследовании: «Рак лёгкого», необходимо выполнять повторное хирургическое вмешательство в объеме анатомической резекции лёгкого с СМЛД. Итак, по-прежнему открыт вопрос о возможности дифференциальной диагностики новообразований легких. Цель исследования - усовершенствование цитологической диагностики первичных и метастатических образований внутригрудной локализации с использованием жидкостной цитологии и иммуноцитохимического метода. Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:

1. Изучены возможности цитологического и ИЦХ - методов в диагностике первичных и метастатических образований внутригрудной локализации.

2. Сопоставлены и проанализированы результаты ИЦХ и ИГХ исследований при первичных и метастатических образованиях внутригрудной локализации.

3. Выработан алгоритм цитологического и ИЦХ подхода в определении диагностически и экономически оптимальной панели антител при установлении гистологической формы и органной принадлежности опухолевых образований внутригрудной локализации.

4. Оценены преимущества и недостатки использования жидкостной цитологии при ИЦХ исследовании.

5. Проведен анализ и установлены причины ошибок цитологической и ИЦХ диагностики в определении гистологической формы и органной принадлежности опухолевых образований внутригрудной локализации. Научная новизна

На морфологическом материале, полученном из новообразований легких, внутригрудных лимфатических узлов и плевры сопоставлены данные традиционной цитологии и цитологии с использованием ИЦХ с результатами гистологии и гистологии с использованием ИГХ, что позволило оценить эффективность цитологического исследования, диагностическую точность ИЦХ реакций в опухолях различного гистологического типа и органной принадлежности.

Предложен новый подход к приготовлению и обработке цитологических препаратов для ИЦХ исследования с использованием ЖЦ, что позволяет стандартизировать исследование, получить клетки в монослое и сэкономить дорогостоящие реактивы, снизив их расход в 6-8 раз, сократить время приготовления и просмотра материала. Научно-практическая значимость

На основании проведенного анализа предложен принципиально новый подход в приготовлении и обработке цитологических препаратов, позволяющий сэкономить реактивы, снизив их расход, сократить время приготовления и микроскопического анализа материала.

Выработан алгоритм цитологического и ИЦХ подхода в определении диагностически и экономически оптимальной панели антител при установлении гистологической формы опухоли лёгкого и органной принадлежности при метастатическом поражении.

Данный алгоритм, позволяющий сэкономить реактивы, снизив их расход, сократить время приготовления и просмотра материала, может быть рекомендован к внедрению в практику онкологических учреждений.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Мехеда, Лариса Владимировна

Выводы

1. При рутинном цитологическом исследовании материала из опухолей уверенный диагноз с указанием гистологической формы опухоли выносится лишь в 56% случаев.

Заключения, в которых о гистологической форме опухоли говориться в предположительной форме или она не указывается вообще составляют 44%.

Уверенный диагноз с указанием органной принадлежности опухоли в 48% заключений.

2. В диагностике первичных опухолей внутригрудной локализации, в группе больных раком легкого цитологический + ИЦХ метод демонстрирует при определении гистогенеза и органоспецифичности опухоли диагностическую точность 97,3%.

3. В группе больных с метастатическим поражением легких, внутригрудных лимфатических узлов и плевры цитологический + ИЦХ метод демонстрирует диагностическую точность при определении гистогенеза и органоспецифичности опухоли - 98,9%.

4. Разработанный алгоритм проведения ИЦХ исследований для подтверждения гистологической формы опухоли, или её органной принадлежности позволяет в ряде случаев ограничиться двумя - тремя МКАТ и не требует развертывания широкой (дорогостоящей) панели антител.

5. Использование метода жидкостной цитологии позволяет повысить качество и информативность препаратов с 79% при обычном способе приготовления материала до 99%; исключить неоправданные расходы дорогостоящих реактивов и времени медицинского персонала на обработку, просмотр и интерпретацию препаратов; стандартизировать препараты для исследования.

6. Заключение.

41

Если при рутинном исследовании препаратов цитологом выдано заключение типа

Злокачественное новообразование» (без дополнительнительных уточнений) проводилось ИЦХ с ЭМА (или ОЦК) и вимет ином.

Д.

При ЭМА (+) и виментин (-) что подтверждает предположение об эпителиальной природе опухоли).

В этом случае, а так же в случае если при традиционном исследовании препаратов цитопатологом выдано заключение типа «рак (без дополнительных уточнений)» проводилось исследование с ТТИ (маркер для аденокарциномы лёгкого и рака щитовидной железы из А-клеток). тт (+)

ТТР1 (+) при Тиреглобулине (-) ^ аденокарцинома лёгкого

ТТП (+) при Тиреглобулине (+) рак щитовидной железы**

Описанный алгоритм можно изобразить в виде схемы:

При ТТИ (-), а так же, если при традиционном исследовании препаратов цитопатологом высказано предположение о наличии плоскоклеточного рака если ЦК 5/6 (+) 4 рак плоскоклеточный; еслиЦК 5/6 (-), или, если при отрицательном ТТР1, цитопатолог сохраняет уверенность в том, что изучаемая эпителиальная опухоль аденогенного происхождения, использовались:

СК7 положительный в клетках молочной железы, аденокарциномы легкого СК20 обычно отрицательный в клетках аденокарциномы легкого *

Тиреоглобулин всегда отрицательный в клетках опухолей легкого.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мехеда, Лариса Владимировна, 2012 год

1. Агамова К. А., Тихомирова Е.Е, //Современные достижения и перспективы развития цитологической диагностики в легочной патологии//Диагностика и лечение рака легкого. М., 1984. - С.58-63.

2. Афанасьева З.А. // Комплексная диагностика рака щитовидной железы // Автореф. дис. канд. мед. наук. Казань, 2000.

3. Афанасьева З.А., Володина Г.И., Петров C.B., Гилязутдинов И.А. //Опухоли гормонально-зависимых и гормонопродуцирующих органов// под ред. проф. И.А. Гилязутдинов и проф. Р.Ш. Хасанова. -М: МЕДпресс-информ, 2004. С. 49 - 89.

4. Беляев A.M., Раскин Г.А., Захаренко A.A., Кондрацов С.А. //Иммуноцитохимическое исследование цитологических препаратов жидкостной цитологии злокачественных плевритов и асцитов// том 12,Физиология, январь 2011, стр. 179-184.

5. Волченко H.H., Гладунова З.Д., Славнова E.H., Ермолаева А.Г., //Цитологическая диагностика в легочной патологии// Актуальные проблемы в онкопульмонологии. «Всероссийская научно -практическая конференция». Мурманск. 2002.

6. Волченко H.H., Гладунова З.Д., Славнова E.H., Ермолаева А.Г., Мельникова В.Ю. //Срочная интраоперационная цитологическая диагностика при опухолях различных локализаций// Пособие для врачей. М. - 2004. - С. 3.

7. Волченко H.H., Савостикова М.В., //Атлас цитологической и иммуноцитохимической диагностики опухоли// Москва. 2010.

8. Волченко H.H., Гладунова З.Д., Славнова E.H., Ермолаева А.Г., Мельникова В.Ю. //Цитологический метод в выявлении метастатического поражения лимфатических узлов// Российский онкологический журнал №3, 2010, с. 12.

9. Давыдов М. И., Полоцкий Б. Е. Современные принципы выбора лечебной тактики и возможность хирургического лечения немелкоклеточного рака легкого.// Сб. «Новое в терапии рака легкого» под редакцией Н.И. Переводчиковой, М. 2003, 41-53

10. Давыдов М.И. Полоцкий Б.Е. //Хирургическое лечение немелкоклеточного рака легкого. Современные принципиальные позиции. Анналы Московского онкологического общества//, №2, 1997, 16-17.

11. Давыдов М.И., Пирогов А.И., Полоцкий Б.Е. и др. //Современные принципы хирургического лечения рака легкого. // I съезд онкологов стран СНГ 1996г. Материалы съезда, часть 2, стр. 375.

12. Давыдов М.И., Полоцкий Б.Е. //Хирургическое лечение немелкоклеточного рака легкого. Современные принципиальные позиции // Анналы Московского онкологического общества.- 1997.-№2.- С. 16- 17.

13. Давыдов М.И. //Хирургический метод в лечении мелкоклеточного рака легкого// В кн. "Новое в терапии рака легкого".

14. Давыдов М. И., Аксель Е. М. //Статистика рака легкого в СНГ и России// Ежеквартальный научно-практический журнал «Вестник РОНЦ им.Н.Н.Блохина», том 20, N3 (77), прил. 1, июль-сентябрь 2009.

15. Имянитов E.H., Хансон К.П., //Молекулярная онкология: клинические аспекты// Санкт-Петербург. Издательский дом СПбПМАПО. 2007., с.27-56.

16. Казанцева И.А., Федосенко А.К., Гуревич J1.E., //Иммуногистохимические исследования в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных поражений щитовидной железы.// Архив патологии 2001; 4: 18.

17. Кешта P.A. //Молекулярно-биологические маркеры как факторы прогноза при саркоме мягких тканей // Автореф. дис. на соиск. уч. степ. канд. мед. наук. М. - 2003.

18. Коган Е.А., Угрюмов Д.А. //Соотношение процессов пролиферации и клеточной гибели в немелкоклеточном раке легкого с железистой дифференцировкой на разных стадиях опухолевой прогрессии// Архив патологии 2002. - Вып. 1 - С. 33 - 37.

19. Коган Е.А., Жак Г., Кайзер У., Шилли М., Виттен А., Шурман М., Шерер А., Хавеманн К. Иммуногистохимия биомолекулярных маркеров рака легкого. // Архив патологии 1997, 6: 23-30.

20. Криволапов Ю.А., Белянин В.Л. //Морфологические различия фолликулярных лимфом и фолликулярной гиперплазии лимфатических узлов// Архив патологии. №5, том 65, Москва, 2003, с.17-20.

21. Ковригина A.M., Пробатова H.A. //Морфоиммуно-гистохимическая дифференциальная диагностика лимфомы Ходжкина с лимфоидным преобладанием и В-крупноклеточных лимфом// Архив патологии -том 67, № 4. 2005. - С. 10 - 16.

22. Лактионов K.K. Плоскоклеточный рак легкого (значение клинико-морфологических и молекулярно-генетических характеристик опухоли в прогнозировании результатов хирургического лечения).// Дис. докт.мед.наук. М.,2004.

23. Лукашина М.И., Жукова Л.Г., Глухова У.И. и др. //Сравнение иммуноцитохимического и иммуногистохимического методов определения биомаркеров при раке молочной железы// Клин. Лаб. Диагностика. 2002. - № 8. - С. 37 - 40.

24. Лукашина М.И. //Экспрессия биомаркеров при раке молочной железы// Дис. на соиск. уч.ст.к.м.н., М., 2003.

25. Малаев С.Г. //Опухолевые плевриты и метастатические опухоли легких// Мед. Помощь. 2000. - № 2. - С. 16 - 18.

26. Петров C.B. //Иммуногистохимическая диагностика опухолей щитовидной железы, матки, яичников, яичек// В.: Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. Казань: РИЦ «Титул», 2000; 72.

27. Петров C.B., Райхлин Н.Т. //Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека// Казань 2004 С.7 -57.

28. Пожарисский K.M., Леенман Е.Е. //Значение иммуногисто-химических методик для определения характера лечения и прогноза опухолевых заболеваний// Архив патологии М., №5, том №62, 2000, С. 3 - 11.

29. Пожарисский K.M., Леенман Е.Е. //Прогностическое и предсказательное значение иммуногистохимических маркеров при онкологических заболеваниях// Материалы III съезда онкологов и радиологов СНГ. Минск 2004. - часть И. - с. 113.

30. Полоцкий Б.Е. Хирургическое лечение немелкоклеточного рака легкого (результаты, факторы прогноза и биологические особенности опухоли).// Дис. докт.мед.наук. М., 1995.

31. Савостикова М.В. //Иммуноцитохимическое исследование в диагностике и важнейших факторов прогноза злокачественных и доброкачественных образований// Автореф. дис. на соиск. уч. степ, канд. мед. наук. М. - 2003.

32. Свиридова Т.Е., Коган Е.А., Пальцев М.А. и соавт. //Гистологические и молекулярно-биологические маркеры злокачественности в различных вариантах папиллярного рака щитовидной железы// Архив патологии. 2002. - №6. - С. 19 - 23.

33. Трахтенберг А.Х., Чиссов В.И. //Клиническая онкопульмонология// М. ГЭОТАР Медицина, 2000. - 600 С.

34. Трахтенберг А.Х., Франк Г.А., Волченко H.H., Стукалов М.А., Колбанов К.И. //Медиастинальная лимфоаденэктомия при немелкоклеточном раке легкого// Пособие для врачей. 2003.

35. Чепурная Ю.Ю. //«Клиническое значение жидкостной цитологии в диагностике заболеваний шейки матки»// Дисс. К.м.н., Москва 2004.

36. Чиссов В.И., Трахтенберг А.Х., Франк Г.А., Волченко H.H., Стукалов

37. М.А., Колбанов К.И. //Варианты регионарного метастазирования118немелкоклеточного рака легкого и выбор объема медиастинальной лимфоаденэктомии.// Российский онкологический журнал. 2003. -№2.-С. 4-10.

38. Шабалова И.П. //Интерактивные программы и молекулярные исследования для оптимизации цитологической диагностики// Дис.д.м.н., Москва, 2002. 227с.

39. Шапиро Н.А. //Цитологическая диагностика опухолей легких (морфологические и клинические аспекты, проблемы)// Дис.д.м.н., Москва, 1977.

40. Шапиро Н.А. //Цитологическая диагностика заболеваний легких// Цветной атлас, 2005. с. 8-33.

41. Эллиниди В.Н., Аникеева Н.В., Максимова Н.А. //Практическая иммуногистоцитохимия// Методические рекомендации, Санкт -Петербург, 2002.

42. Эндрю Р.Хериет, Кевин С.Гаттер //Молекулярная клиническая диагностика. Методы// Под ред. С.Херрингтона и Дж.Макги. Издательство «МИР» 1999. С. 20 50.

43. Юдин Д.И. Молекулярно-генетические особенности опухоли в индивидуальном прогнозировании результатов хирургического лечения немелкоклеточного рака легкого // Дисс. докт. мед. наук, 2005.

44. Abulafia О., Pezzullo J.C., Shere D.V. //Performance of ThinPrep liguid-based cervical cytology in comparison with conventionally prepared Papanicolaou smears: a guantitative survey// Gynecologic Oncology. -2003.-Vol. 90.-№ l.-P. 137-144.

45. Agnelli A. //Quimioterapia em cancer de deux pulmáo pequeñas células// Q: Younes RN, editor. Tumores Torácicos. Rio de Janeiro meds. In 1997. pp. 269-80.

46. Alexopoulou D., Tsiambas E., Lambropoulou S., Kompotis K., Papaspyrou S., Karameris G.A. //Morphometric and immunocytochemical study of acase of malignant melanoma in fine needle aspiration specimen// Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2). - P. 48.

47. Andy C., Turner L.F., Neher J.O.// Is the ThinPrep better than conventional Pap smear at detecting cervical cancer?// J.Fam.Pract. 2004. - Vol. 53. -№4.-P. 313-315.

48. Bai X.Z., Masters J.R., 0,Donoghue N., h coaBT. //Prognostic markers in clinically localized prostate cancer// Int. J. Oncol. 1999. - Vol. 14. - P. 785-791.

49. Bai Hongwei. Sung C., James. Steinhoff Margaret M. //ThinPrepR Pap Test promotes detection of glandular lesions of the endocervix.// Diagn. Cytopathol. 2000. - 23, № 1. - C. 19 - 22.

50. Bilchik A., Miyashiro M., Kelley M. h coaBT. //olecular detection of metastatic pancreatic carcinoma cells using a multimarker reverse transcriptase-polymerase chain reaction assay// Cancer. 2000; 88: 1037.

51. Biscotti Charles V., Shorie Julie H., Gramlich Terry L., Easley Kirk A. //ThinPrepR vs. conventional smear cytologic preparations in analyzing fine needle aspiration specimens from palpable breast masses// Diagn. Cytopathol. - 1999.-21, №2.-C. 137-141.

52. BozzettrC., Nizzoli R., Naldi N., h coaBT. // Fine needle aspiration technigue for the concurrent immunocytochemical evaluation of multiplebiologic parameters in primary breast carcinoma // Breast Cancer Res Treat., 1994. V. 32, p. 221 228.

53. Calaminici M., Piper K., Norton A.J. //CD23 expression in mediastinal large B-cell lymphomas // Histopathology. 2004. - Vol.45. - P. 619 -624.

54. Caraway NP, Stewart J. Primary effusion lymphoma. Pathology Case Reviews. 2006;11.

55. Carella R., Deleonardi G., D'Errico А. и соавт. // Immunohistochemical panels for differentiating epithelial malignant mesothelioma from lung adenocarcinoma: a study with logistic regression analysis.// Am J. Surg. Pathol. 2001; 5:3.

56. Chang F., Vu C., Chandra А. и соавт.// Endoscopic ultrasound guided fine needle aspiration cytology of pancreatic neuroendocrine tumours: cytomorphological and immunocytochemical evaluation//Cytopathology. -2006.-Vol. 17, №1. -P.10 - 17.

57. Choi HR, Batsakis JG, Zhan F, h coaBT. Differential expression of p53 gene family members p63 and p73 in head and neck squamous tumorigenesis. Hum Pathol. 2002; 33:158-164.

58. Colby TV, Koss MN, Travis WD, eds. //Tumors of the Lower Respiratory Tract.// Washington, DC: Armed Forces Institute ofPathology; 1995. Atlas of Tumor Pathology; Third Series,Fascicle 13.

59. Cho EY, h coaBT. Fine needle aspiration cytology of solitary fibrous tumours of the pleura. Cytopathology. 2007; 18:20.

60. Dabbs DJ. Immunohistology of metastatic carcinoma of unknown primary. In Diagnostic Immunhistochemistry, D. Dabbs, ed, 2nd ed, 2006, Philadelphia, Churchill LivingstoneElsevier, p: 180.

61. Dail D.H., Cagle P.T., Marchevsky A.M., Khoor A., Geisinger K., Pugatch B., Finkelstein S.D., Kerr K., Brambilla C. // Metastases to the lung// Tumours of the Lung Secondary tumours, P. 122-124

62. DeLellis RA, Hoda RS. Immunochemistry and molecular biology in cytological diagnosis. In Koss' Diagnostic cytology and its histopathologic bases. 5th ed, 2006. Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins, p. 1635.

63. Doi S., Woodhouse N. //Ablation of thyroid remnant and 1311 dose in differentiated thyroid cancer// J. Clin. Endocrin. 2000. - Vol. 52. - P.765 -773.

64. Dorovitsa C., Lavranou E., Kontou P., Apatzidou K., Alexandraki A. and Kalogerakos N. //Comparative study of ThinPrep and conventional smears in cervical cytology.// Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2). - P. 25.

65. Duffy M.J., //Evidence for the clinical use of tumour markers.// Ann. Clin. Biochem. 2004. - Vol. 41. - P. 370 - 377.

66. Duray P.H., Palazzo J., Gown A.M. h coaBT. //Melanoma cell heterogeneity; a study of two monoclonal antibodies compared with S-100 protein in paraffin sections // Cancer. 1988; 61: 2460.

67. Eloubeidi M.A, Tamhane A, Chen V.K., Cerfolio R.J. //Endoscopic ultrasound guided fine-needle aspiration in patients with non-small cell lung cancer and prior negative mediastinoscopy// Ann. Thorac. Surg. -2005.-Vol.80, N4.-P. 1231-1239.

68. Fletsch PA, Abati A. //Immunocytochemistry in effusion cytology. A contemporary review.// Cancer (Cancer Cytopathol). 2001; 93:293.

69. Folpe A.L., Schmidt R.A., Chapman D., Gown A.M. //Poorly differentiated synovial sarcoma. Immunohistochemical distinction from primitive neuroectodermal tumors and high-grade malignant peripheral nerve sheat tumors.// Am J. Surg Pathol. 1998; 22; 673.

70. Fulciniti F., Benincasa G., Troncone G. h coaBT. //Cytopathologic features of the follicular variant of papillary thyroid carcinoma on FNAB samples: Experience with 16 cases// Acta cytol. 1999. - 43, № 4. - P. 725 - 726.

71. Gabric S and Kern I. //Two color immunostaining of pleural effusions with BerEP4 and CK5/6 // Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2). - P. 14.

72. Geisinger KR, h coaBT. Effusions. In Modern cytopathology. Geisinger KR, et al, eds.Philadelphia, Churchill Livingstone, 2004, p. 257.

73. Gia-Khanh Nguyen//ES SENTIALS OF LUNG TUMOR CYTOLOGY//Laboratory Medicine and Pathology University Of AlbertaEdmonton, Alberta, Canada, 2008. P. 2-104

74. Gown A.M., //Carcinomas: determination of primary site using immunohistochemical technigues.// DAKO Facts 2002; 1: 9.

75. Grace A., McBrearty P., Troost S. h coaBT. //Comparative study: conventional cervical and ThinPrep Pap test in a routine clinical setting // Cytophathology. 2002. - Vol.13. - №4. - P. 200-205.

76. Guillou L., Wadden C., Calouje E. h coaBT., // S-100 protein reactivity in synovial sarcomas a potentially frequent diagnostic pitfall. Immunohistochemical analysis of 100 cases. App Immunohistochem. -1996; 4: 167.

77. Guiter Gerardo E.,Gatscha Rose Marie, Zakowski Maureen F. // ThinPreRvs. Conventionals mearsin fine needle aspirations of sarcomas: Amorphological and immunocytochemicals tudy.// Diagn.Cytopathol. -1999. 21. №5.-C. 351 -354.

78. Gray JA, Nguyen GK. Primary pulmonary rhabdomyosarcoma diagnosed by fine needle aspiration cytology. Diagn Cytopathol. 2003; 29:181.

79. Hanly AJ, Elgart GW, Jorda M, h coaBT. Analysis of thyroid transcription factor-1 and cytokeratin 20 separates Merkel cell carcinoma from small cell carcinoma of lung. J Cutan Pathol. 2000;27:118-120.

80. Hans C.P., Weisenburger D.D., Greiner T.C. //Confirmation of the molecular classification of diffuse large B-cell lymphoma by immunohistochemistry using tissue microarray // Blood. 2004. - Vol. 103. - P. 275 - 282.

81. Harrow E. M., Abi-Saleh W., Blum J. et all.// The utility of transbronchial needle aspiration in the staging of bronchogenic carcinoma//Ibid. 2000. -Vol. 161.-P. 601-607.

82. Harris, Harald Stein, James W.Vardiman // Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues// Pathology & Genetics / World Health Organization Classification of Tumours/ IARCPress, Lyon, 2001, p. 109 115.

83. Hong Zhang, Jing Liu, Philip T Cagle, Timothy Allen C, Alvaro C Lagaand Dani S Zander //The difference between pulmonary small cell124carcinoma from poorly differentiated squamous cell carcinoma: immunohistochemical approach// Mod Pathol 2005; 18:111-8

84. Husain M, Nguyen GK. //Cytopathology of granular cell tumor of the lung.// DiagnCytopathol. 2000; 23: 294.

85. Jing Liu and Anwar Farhood // Thyroid Transcription Factor 1 Immunocytochemical Staining of Pleural Fluid Cytocentrifuge Preparations for Detection of Small Cell Lung Carcinoma// Acta Cytologica. - 2004. -V.48. - № 5 - P 635 - 640.

86. Jaishree Jagirdar //Application of Immunohistochemistry to the Diagnosis of Primary and Metastatic Carcinoma to the Lung// Arch Pathol Lab Med. 2008; 132:384-396.

87. Jaishree Jagirdar //Application of Immunohistochemistry to the Diagnosis of Primary and Metastatic Carcinoma to the Lung // Arch Pathol Lab Med. 2008;132:384-396

88. Ionescu DN, h coaBT. //Nonsmall cell lung carcinoma with neuroendocrine differentiation-an entity of no clinical or prognostic significance//. Am J Surg Pathol. 2007; 31:26.

89. Younes, R., Gross JL, Deheinzelin D. //Follow-up in lung cancer: how often and for what purpose? //Chest. 1999, 115 (6) : 1494-9.

90. Kandaraki C., Politi E., Apostolopoulos C., Kyritsi Th., Stoforou E.,

91. Argyrakos T. end Koutselini E. // Diagnostic utility of HBME-1, Calretinin125and Cytokeratin 5-6 in pleural effusions// Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2).-P. 15.

92. Kaufmann O, Dietel M. Expression of thyroid transcription factor-1 in pulmonary and extrapulmonary small cell carcinomas and other neuroendocrine carcinomas of various primary sites. Histopathology. 2000;36:415-420.

93. Kim J.J., Wright T.C., Goldie S.J. //Cost-effectiveness of alternative triage strategies for atypical sguamous cells of undetermined significance // JAMA. 2002. - Vol. 287. - P. 2382 - 2390.

94. Koss LG, Melamed MR. //Tumors of the lung: conventional cytology and aspiration biopsy. In Koss' Diagnostic cytology and its histopathologic bases// 5th ed, Koss LG, Melamed MR, eds. Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins. 2006, p 643.

95. Limaye A., Connor A.J., Huang X., Luff R. //Comparative analysis of conventional Papanicolaou test and fluid based thin - layer method// Arch. Pathol. Lab. Med. - 2003. - Vol. 127. - P. 200 - 204.

96. Lin O, h coaBT. //Immunohistochemical staining of cytologic smears with MIB-1 helps distinguish low-grade from high-grade neuroendocrine neoplasms. //Am J Clin Pathol 2003; 120:209-216.

97. Miettinen M.//Immunohistochemical marker for gastrointestinal, urothelial and Merkel cell carcinoma.// Mod Pathol. 1995; 8: 384 - 388.

98. Mountain CF.//Changes in the international staging system for lung cancer//Chest. 1997, 111 (6) : 1710-7.

99. Naruke T, R Tsuchiya, condo-H, H Asamura, H. Nakayama //The consequences of staging in lung cancer. Chest. 1997, 112 (4 Suppl): 242S-248S.

100. Nguyen GK, h coaBT. //Cytodiagnosis of bronchogenic carcinoma and neuroendocrine tumor of the lung by transthoracic fine-needle aspiration. //Diagn Cytopathol, 2000; 23:431.

101. Nizzoli R., BozzettrC., Savoldi L., h coaBT. //Immunocytochemical assay of estrogen and progesterone receptors in fine needle aspirates from breast cancer patients // Acta Cytol., 1994. V. 38, p. 933 938.

102. Nizzoli R., BozzettfC., Crafa P. h coaBT. //Comparison of the results of immunocytochemical evalution of HER2/neu on fine needle aspirates from primary breast carcinomas // Diagn. Cytopathology, - 2003. -Vol.28.-P.142-146.

103. Odashiro AN, h coaBT. //Primary lung leiomyosarcoma detected by bronchoscopy cytology// Diagn Cytopathol. 2005; 33: 220.

104. Ogino S, h coaBT. //Cytopathology of oncocytic carcinoid tumor of the lung mimicking granular cell tumor. A case report.// Acta Cytol 2000; 44:247-250.

105. Olszewski W.T.//Cytology of lung metastases differential diagnosis// 30th Congress of Cytology. - 2004. - P.31.

106. Osinsky S., Gluzman D.F., Grebelnaya N.I. h coaBT. //Immunocytochemical detection of tumor cells in bone marrow of patients with pancreatic cancer// Pancreatology. 2002. - 2. - 326.

107. Park SY, h coaBT. //Panels of immunohistochemical markers help determine primary sites ofmetastatic adenocarcinoma.// Arch Pathol Lab Med. 2007; 131: 1561.

108. Parkin M., Tyczynski J.E., Boffetta P., Samet J., Shields P., Caporaso N. //Lung cancer epidemiology and etiology// Tumours of the Lung. P. 12 -13.

109. Parotti M., Landolfi S., Volante M. //Surgical Pathology Update 2001 18 th European Congress of Pathology / S. Hauptmann, M. Dietel, M. Sobrinho Simoes. - 2001. - P. 195 - 197.

110. Pralong C., J. L. Pauze and Due C. // Cytologic criteria for papillary breast tumors on fine needle aspiration by ThinPrep.// Cytopathology . -2004. - V. 15 (Suppl. 2). - P. 4.

111. Protopapas Z., Westcoff J.L.//Transthoracic needle biopsy of mediastinal lymph nodes for staging lung cancer and other cancers// Radiology. 1996. - Vol. 199. - P. 489-496.

112. Raab SS, h coaBT. //Metastatic tumors in the lung: a practical approach to diagnosis. In Practical pulmonary pathology.// Leslie KO and Wick WR, eds. Philadelphia, Churchill Livingstone, 2005, 603.

113. Shimosato Y, Noguchi M. Pulmonary neoplasms. In Sternberg's Diagnostic surgical pathology. 4th ed, 2004. Mills SE, et al, eds. Philadelphia, Lippincott Williams & Wilkins,l 173.

114. Somers K., Poppe K., Verfaillie G., Velkeniers B. and Bourgain C.//Liguid based cytology in FNA of thyroid nodules// Cytopathology . -2004. - V. 15 (Suppl. 2). - P. 46.

115. Sotiropoulou G., Plyta S., Delliou E., Panoussi A., Papagika A., Alexiadou A., Poulianou E. and Kalargirou C.H. // Difficulties in the diagnosis of malignant mesotheliomas in effusions.// Cytopathology . -2004.-V. 15 (Suppl. 2).-P. 17.

116. Taylor C.R. and Cote C.R. //Immunomicroscopy: a diaqnostic tool for the surgical pathologist.// Philadelphia, 1997.

117. Tezuka F., Hamanaka K., Oikawa H. and Higashiiwai H. //Liguid-based cytology in Japan: diagnostic efficacy and validity of the ThinPrep method in cervical cytology.// Cytopathology . 2004. - V. 15 (Suppl. 2). -P. 38.

118. Thienpont L., Cochand-Priollet B„ Willems J.S. and Schelfhout A.M. //Value of immunocytochemistry in thyroid liguid based cytology// Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2). - P. 46.

119. Travis WD, h coaBT. //Pathology and genetics of tumours of the lung, pleura, thymusand heart. In WHO Classification of Tumors// Lyon, IARCPress, 2004.

120. Traktenberg A., Frank G., Volchenko N., Kolbanov K., Stucalov M.,Pikin O. //The optimal extent of mediastinal lymphadenectomy in patients with nonsmall cell lung cancer// The European Cancer Conference (ECCO 12). - Kopenhagen. - 2003. - P. 322.

121. Tsampra G. and Gomousa-Michael M. //Immunocytochemical profile of metastatic malignancy in effusions. A clue to the primary site// Cytopathology . 2004. - V.15 (Suppl. 2). - P. 17.

122. Utz J.P., Patel A.M., Edell E.S. //The role of transcarinal needle aspiration in the staging of bronchogenic carcinoma// Chest. 1993. - Vol. 104.-P. 1012-1016.

123. Vassilacos P., Carrel S., Petignat P. и соавт. //Use of automated primary screening on liguid-based, thin-layer preparations// Acta Cytol. -2002. Vol.46. -№ 2. - P. 291-295.

124. Vyberg M. //Metastatic tumors of unknown origin: immunohistochemical approach and pitfalls.// DAKO facts 2001; 1 (2): 17.

125. Wang BY, Gil J, Burstein DE, и соавт. //p63 in pulmonary epithelium, pulmonary squamous neoplasms and other pulmonary tumors.// Hum Pathol. 2002;33:921-926.

126. Weintraub J., Morabia A. //Efficacy of a liguid based thin layer method for cervical cancer screening in a population with a low incidence of cervical cancer.// Diagn. Cytopathol. - 2000. - 22, № 1. - C. 52 - 59.

127. Wiatrowska BA, и соавт. //Large cell neuroendocrine carcinoma of the lung: proposed criteria for cytologic diagnosis.// Diagn Cytopathol 2001; 24:58.

128. Whitaker D, h coaBT. //Mesothelioma.// In Diagnostic cytopathology, 2nd ed, Gray W,McKee GT, eds, 2003, London, Churchill Livingstone, p. 205.

129. Yao Jorge I., Cangiarella Joan F., Cohen Jean Marc. H coaBT. //Lymphomas of T-cell origin: A cytologic and immunophenotypic study // Acta Cytol. - 1999.- V.43,№5.- P.943.

130. Zachou K., Tzartza E., Skenteri A., Orologa A., Kostopoulou E., Boni K. // Ascitic fluid, peritoneal washing and cul de sac aspiration cytology in women under the age of 40: a retrospective study.// Cytopathology . 2004. - V. 15 (Suppl. 2).-P. 17.

131. Zoppi J. A., Rotundo A.V., Sundblad A.S //Correlation of immunocytochemical and immunohistochemical determination of estrogen and progesterone receptors in breast cancer.// Acta Cytol. 2002. - V.46-P.337 -340.