Иммуномодулирующие и радиозащитные свойства биологически активных веществ из морских гидробионтов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Потапова, Вера Владимировна

• Потапова, Вера Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Потапова, Вера Владимировна

ВВЕДЕНИЕ 6 ОЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Коррекция радиационных иммунодефицитов.

1.1 Радиационные имму но дефициты.

1.2 Коррекция радиационных иммунодефицитов.

ГЛАВА 2. Морские гидробионты - источники уникальных БАВ. 36 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. Материалы и методы.

ГЛАВА 4. Иммуномодулирующее действие нДНК и ГГГ.

4.1 Влияние нДНК и ГТГ на гуморальное звено иммунитета.

4.2 Влияние нДНК и ГГГ на клеточное звено иммунитета.

4.3 Влияние нДНК и ГГГ на массу, клеточность лимфоидных органов и количество лейкоцитов интактных мышей.

ГЛАВА 5. Радиозащитное действие нДНК и ГГГ.

5. 1 Влияние нДНК и ГГГ на массу, клеточность лимфоидных органов и количество лейкоцитов облученных мышей. 73 5. 2 Влияние нДНК и ГГГ на формирование стволовых кроветворных клеток. 88 5. 3 Влияние нДНК и ГГГ на выживаемость и среднюю продолжительность жизни облученных мышей.

ГЛАВА 6. Влияние нДНК и ГГГ на продукцию цитокинов (ИЛ-3, ГМ-КСФ, ФНО-а, ИФН-у, ИЛ-10) клетками крови здоровых доноров.

6.1 Влияние нДНК и ГГГ на продукцию ИЛ-3.

6.2 Влияние нДНК и ГГГ на продукцию ГМ-КСФ.

6.3 Влияние нДНК и ГГГ на продукцию ФНО-а.

6.2 Влияние нДНК и ГГГ на продукцию ИФН-у.

6.3 Влияние нДНК и ГГГ на продукцию ИЛ-10. 106 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ 127 РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

ИССЛЕДОВАНИЙ В МЕДИЦИНСКУЮ НАУКУ И ПРАКТИКУ

УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммуномодулирующие и радиозащитные свойства биологически активных веществ из морских гидробионтов»

Актуальность исследования.

С иммунобиологических позиций состояние здоровья современного человека и человечества в целом характеризуется двумя особенностями: снижением иммунной реактивности населения и, как следствие, повышением уровня острых и хронических заболеваний [103, 124]. Этим обусловлен растущий интерес врачей практически всех специальностей к проблеме иммунотерапии. Препараты, оказывающие действие на иммунитет, начинают широко применяться в клинической практике при самых разнообразных заболеваниях. Коррекция вторичных имму но дефицитов является в настоящее время актуальным, интенсивно развивающимся направлением терапии [61].

С точки зрения современной иммунологии острая лучевая болезнь (ОЛБ) также представляет собой вторичный иммунодефицит [14, 35, 104]. Исходя из роли системы иммунитета в механизме развития лучевого поражения организма, разработаны принципы профилактики и лечения ОЛБ с помощью иммунотропных лекарственных средств [35].

Среди иммуномодуляторов противолучевым действием в широком диапазоне доз облучения обладают нуклеиновые кислоты и, в том числе, препараты, содержащие дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) [24]. Исследования их радиозащитных свойств проводились, начиная еще с 60-х годов прошлого столетия, когда было обнаружено, что профилактическое и лечебное введение препаратов преимущественно высокополимерной гомо- и гетерологичной ДНК способствует повышению радиорезистентности облученных животных [7, 118]. Изучение действия ДНК на иммунную систему началось сравнительно недавно, что связанно с существовавшим ранее мнением об иммунологической инертности нуклеиновых кислот [106,

109, 249]. Известны также лейкостимулирующий, противоопухолевый, ранозаживляющий, противовирусный эффекты ДНК [84].

В настоящее время перспективным считается использование природных соединений в качестве сырья для создания лекарственных препаратов [72] и биологически активных добавок (БАД) к пище [117]. Поэтому все большее развитие получают исследования свойств биологически активных субстанций, выделенных из различных трав, семян, морских беспозвоночных, рыб, водорослей, грибов, наземных животных, микроорганизмов и т.д. [39, 88, 157, 172, 194, 226, 240].

По многочисленным литературным данным, морские гидробионты содержат уникальные биологически активные вещества (БАВ) разнонаправленного действия [10, 27, 64, 73, 82, 88, 92, 111]. Как природные источники, они характеризуются широкой и успешно воспроизводимой сырьевой базой, своим разнообразием и высокой эффективностью содержащихся в них БАВ, которые зачастую лишены отрицательных свойств, присущих веществам, полученным из традиционных источников [4].

В течение многих лет сотрудниками лаборатории иммунологии НИИЭМ СО РАМН совместно с Тихоокеанским институтом биоорганической химии ДВО РАН и Тихоокеанским научным рыбохозяйственным центром (ТИНРО-центр) проводится поиск соединений, обладающих иммуномодулирующей, радиозащитной, противоопухолевой, детоксицирующей активностью. Некоторые из этих веществ явились основой для создания БАД (тинростим, зостерин).

Известно, что при внедрении БАД не проходят ту жесткую всестороннюю экспертизу, которой подвергаются лекарственные препараты. В то же время, именно они чаще всего бесконтрольно и широко применяются населением. В связи с этим одним из направлений деятельности лаборатории иммунологии НИИЭМ СО РАМН становится изучение механизмов действия

Б АД широко применяемых как на Дальнем Востоке, так и в других регионах России.

В настоящей работе были исследованы радиозащитные и иммуномодулирующие свойства БАВ из молок морских гидробионтов, содержащих низкомолекулярную ДНК - ДНК из молок лосося (нДНК) и гидролизата из гонад гребешка (ГГГ).

БАВ нДНК является основным действующим веществом БАД к пище ДНКаС и ДНКаВИТ, разрешенных к использованию [97, 98, 116] и широко применяемых населением. Однако свойства нДНК изучены недостаточно полно, что и послужило причиной включения ее в это исследование.

ГГГ, полученный в лаборатории прикладной биохимии ТИНРО-центра методом ферментативного гидролиза, - новое, ранее неизученное вещество, биологическая активность которого была установлена при проведении скриннингового исследования различных БАВ морского происхождения. Преимуществом ферментативного гидролиза, в сравнении с другими видами - кислотным, щелочным, - является его простота, непродолжительность (около 5 часов), экономичность (используемый в реакции фермент пилорин получают из отходов лососевых рыб).

Таким образом, актуальность настоящей работы определяется тем, что в ней исследованы свойства нового БАВ, полученного из гонад гребешка, проработана экспериментальная база для возможного создания на его основе биологически активной добавки к пище, обоснована целесообразность использования ДНК-содержащих БАД в комплексе лечения вторичных иммунодефицитов, в том числе, радиационного генеза и дальнейшего изучения свойств нДНК и ГГГ с целью возможного создания на их основе в будущем лекарственных препаратов.

Цель работы:

Целью настоящей работы явилось изучение радиозащитных и иммуномодулирующих свойств ДНК из молок лососевых рыб и гидролизата из гонад гребешка для обоснования перспективности их применения при вторичных иммунодефицитах, в том числе и радиационного генеза и возможного создания на их основе лекарственных препаратов.

Основные задачи исследования:

1. Изучить действие различных доз нДНК и ГГГ на иммунные реакции гуморального и клеточного типа.

2. Исследовать влияние нДНК и ГГГ на кроветворение в интактном и облученном организме.

3. Определить эффективность различных доз и схем введения нДНК и ГГГ при костно-мозговом синдроме острой лучевой болезни.

4. Оценить воздействие нДНК и ГГГ на продукцию цитокинов (ИЛ-3, ГМ-КСФ, ФНО-а, ИФН-у и ИЛ-10) клетками крови здоровых доноров.

Научная новизна и теоретическая ценность работы:

Новизна работы заключается в том, что впервые на обширном экспериментальном материале показана иммуномодулирующая активность нДНК и ГТГ. Установлено, что БАВ оказывают выраженное влияние на гуморальный и клеточный иммунитет - обеспечивают увеличение числа антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей, изменяют интенсивность реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), индуцированную у мышей введением эритроцитов барана (ЭБ). В реакции бласттрансформации (РБТЛ) выявлено, что под действием БАВ происходив стимуляция спонтанной и митогениндуцированной пролиферации Т-лимфоцитов.

Впервые исследованы радиозащитные свойства нДНК и ГГГ. Доказана их способность при введении после воздействия ионизирующей радиации в дозах, вызывающих развитие костно-мозгового синдрома^ стимулировать репаративные процессы в кроветворной системе. Выявлено, что нДНК и ГГГ при: лечебной схеме введения обладают свойством увеличивать выживаемость и среднюю продолжительность жизни f (СПЖ) облученных животных.

Впервые установлено модулирующее действие нДНК и ГГГ на продукцию цитокинов (ИЛ-3, ГМ-КСФ, ФНО-а, ИФН-у и ИЛ-10) клетками крови здоровых доноров.

На основании полученных данных^ сделано: предположение, что стимулирующее действие ДНК-содержащих БАВ на систему кроветворения в облученном организме реализуется через иммунную систему.

Новизна результатов, подтверждена получением патентов на изобретения (2).

В результате проведенных исследований раскрыты некоторые механизмы- иммунотропного, и радиозащитного действия. ГГГ и нДНК Последняя: является основным действующим веществом таких широко применяемых населением биологически активных добавок к пище как ДНКаС и ДНКаВИТ, однако, механизмы действия нДНК до. сих пор, были мало изучены.

Практическая значимость.

На основании: результатов экспериментов разработаны дополнения к инструкции по: применению БАД, созданных на основе ДНК из молок лососевых рыб. ДНКаС и ДНКаВИТ рекомендуется применять в следующих случаях:

• При радиационных: иммунодефицитах (при облучении в дозах не превышающих костно-мозговой диапазон); в группах радиационного риска (персонал ремонтных подразделений атомных электростанций, рабочие урановых рудников и предприятий по переработке урановых руд, врачи рентгенологи, радиологи и т.д.), в том числе, у онкологических больных, получающих радиотерапию; • При вторичных иммунодефицитах, протекающих без клинических проявлений и регистрируемых только по изменениям в иммунологических тестах. Лица с такими нарушениями иммунной системы относятся по классификации P.M. Хаитова и др. [124] к группе, которой не показано назначение иммуномодулирующей терапии с использованием лекарственных препаратов.

Внедрение результатов исследования в медицинскую науку и практику.

1. Получены 2 патента на изобретение - №2230559 «Способ стимулирования колониеобразования кроветворных клеток-предшественников в селезенке при облучении животных» (ДНК из молок лососевых рыб) и №2236456 «Способ стимулирования колониеобразования кроветворных клеток-предшественников в селезенке при облучении животных» (гидролизат из гонад гребешка).

2. Советом экономической безопасности на основании инвентаризации принадлежащего нам патента №2230559 «Способ стимулирования колониеобразования кроветворных клеток-предшественников d селезенке при облучении животных» установлена фактическая возможность его использования для внедрения или инвестирования (письмо №Д-25 от 28.12.2004).

3. В ООО «Биополимеры» (г. Партизанск) направлено письмо, в котором рекомендовано расширить область применения БАД на основе низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб (ДНКаС и ДНКаВИТ).

4. В ТИНРО-центр направлено письмо, в котором рекомендовано продолжить исследование свойств гидролизата из гонад гребешка для возможного создания на его основе биологически активной добавки к пище.

Апробация результатов диссертационной работы:

Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН (Владивосток, 2005).

Материалы диссертации представлены на IV Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием (Владивосток, 2003 г.), Международной научно-практической конференции «Цитокины. Воспаление. Иммунитет» (Санкт-Петербург, 2002 г.), IV всемирном конгрессе по астме, IX международном конгрессе по клинической патологии, X и XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Пермь, 2003 и 2004 г.), Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование» (Пермь, 2003 и 2004 г.), Объединенном иммунологическом форуме (Екатеринбург, 2004 г.), Региональной научной конференции «Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии» (Владивосток, 2004 г.), VI Дальневосточной онкологической конференции «Вопросы диагностики и лечения злокачественных опухолей» (Владивосток, 2004 г.), научной сессии Дальневосточного отделения РАН и Сибирского отделения РАМН (Владивосток, 2004 г.).

По материалам диссертации опубликована 21 работа - 4 статьи и 15 тезисов, получены 2 патента на изобретение.

Объем и структура диссертации. Ма териал диссертации изложен на 158 страницах машинописного текста, проиллюстрирован 11 таблицами и 19 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, заключения, общих выводов, рекомендаций практическому здравоохранению, указателя литературы (138 отечественных и 125 иностранных источников).

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Потапова, Вера Владимировна

127 ВЫВОДЫ:

1. Применение низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб и гидролизата из гонад гребешка вызывает усиление образования эндогенных и экзогенных селезеночных колоний, что проявляется как при профилактической так и при лечебной схеме введения БАВ, однако, при использовании последней это действие более выражено. Наиболее значимый эффект получен при дозе 10 мг/кг.

2. Введение низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб и гидролизата из гонад гребешка мышам через час после облучения способствует более полному и раннему восстановлению числа лейкоцитов, а также массы и клеточности лимфоидных органов - тимуса и селезенки и клеточности костного мозга.

3. Низкомолекулярная ДНК из молок лососевых рыб и гидролизат из гонад гребешка повышают уровень выживаемости и увеличивают среднюю продолжительность жизни облученных мышей. Это действие является более выраженным при лечебной схеме применения БАВ в дозе 10 мг/кг. Полученный эффект практически равнозначен как при подкожном, так и при пероральном введении нДНК и ГГГ.

4. Низкомолекулярная ДНК из молок лососевых рыб и гидролизат из гонад гребешка оказывают иммуностимулирующее дозозависимое действие на гуморальное звено иммунного ответа. Наиболее значительное повышение количества АОК по сравнению с контролем наблюдалось при введении БАВ в индуктивную фазу антителообразования, при дозах 10 и 100 мг/кг. Низкомолекулярная ДНК из молок лососевых рыб и гидролизат из гонад гребешка вызывали незначительное повышение титра сывороточных антител, дозозависимого эффекта при этом практически не отмечалось.

5. Низкомолекулярная ДНК из молок лососевых рыб и гидролизат из гонад гребешка оказывают выраженное дозозависимое влияние на клеточный иммунитет, стимулируя развитие реакции ГЗТ. При этом наибольшая эффективность наблюдалась при введении БАВ в дозе 10 мг/кг - нДНК только в индуктивную, а ГТТ в индуктивную и в эффекторную фазы иммунного ответа. С помощью РБТЛ установлено, что БАВ способствуют активации процесса пролиферации лимфоцитов.

6. Низкомолекулярная ДНК из молок лососевых рыб и гидролизат из гонад гребешка оказывают модулирующее действие на секрецию ИЛ-3, ГМ-КСФ, ФНО-а, ИФН-у и ИЛ-10 клетками крови здоровых доноров, повышая исходно низкую их концентрацию, снижая исходно высокую и не оказывая существенного влияния при среднем уровне их секреции. Исследуемые БАВ оказывают более выраженное стимулирующее действие на продукцию провоспалительных (ФНО-а), нежели противовоспалительных цитокинов (ИЛ-10).

7. Введение низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб обуславливает повышение уровня цитокинов, вырабатываемых преимущественно Txl-клетками (ИФН-у), т.е. может способствовать развитию клеточного иммунного ответа. Напротив, гидролизат из гонад гребешка оказывает равнозначное действие на выработку цитокинов Txl и Тх2.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В МЕДИЦИНСКУЮ НАУКУ И ПРАКТИКУ.

1. Разработаны дополнения к инструкциям по применению Б АД, созданных на основе низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб.

ДНКаС и ДНКаВИТ рекомендуется применять в следующих случаях:

• При радиационных иммунодефицитах (при облучении в дозах не превышающих костно-мозговой диапазон); в группах радиационного риска (персонал ремонтных подразделений атомных электростанций, рабочие урановых рудников и предприятий по переработке урановых руд, врачи рентгенологи, радиологи и т.д.), в том числе, у онкологических больных, получающих радиотерапию;

• При вторичных иммунодефицитах, протекающих без клинических проявлений и регистрируемых только по изменениям в иммунологических тестах. Лица с такими нарушениями иммунной системы относятся по классификации Р.М Хаитова и др. [124] к группе, которой не показано назначение иммуномодулирующей терапии с использованием лекарственных препаратов.

• Для профилактики различных заболеваний, и, в частности, в периоды сезонного повышения заболеваемости ОРВИ, в целях укрепления общей резистентности организма и повышения его сопротивляемости к инфекции;

• На этапах выздоровления, для устранения астенического синдрома и повышения адаптационных механизмов организма.

130

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Конец XX - начало XXI столетия характеризуется значительным ростом заболеваний, обусловленных нарушениями в системе иммунитета [61, 103]. Развивающийся на фоне дисфункции иммунной системы вторичный иммунодефицит (ВИД) не только осложняет клиническое течение, но и прогноз в клинике внутренних болезней [103].

Формированию ВИД могут способствовать многочисленные факторы инфекционной и неинфекционной природы, загрязнение окружающей человека внешней среды, острые и хронические стрессы, нарушение питания, длительное применение медикаментов, обладающих иммунодепрессивными и иммуносупрессивными свойствами, физические и психоэмоциональные травмы и многое другое [52, 122, 125].

Нарушение нормального функционирования иммунной системы определяет более тяжелое, затяжное течение любых болезней, способствует генерализации воспалительных процессов, развитию осложнений, снижению и/или отсутствию клинического эффекта на проведение базисной терапии.

С этим связан необычайно большой интерес врачей практически всех специальностей к проблеме иммунотерапии. Препараты, оказывающие действие на иммунитет, начинают широко применяться в клинической практике при самых разнообразных заболеваниях [61, 103].

Согласно В.М. Манько и др. [72], большинство современных иммуномодуляторов оказывают выраженное побочное действие, вследствие чего, немногие из них используются в широкой клинической практике. Это требует разработки новых средств для регуляции нарушенных функций иммунной системы.

В последние годы все большее развитие получают исследования, направленные на выделение из различных трав, семян, морских водорослей, грибов, животных биологически активных субстанций, характеризующихся иммуномодулирующим действием [39, 88, 147, 172, 194, 226, 240], созданием на их основе фармакологических препаратов [72] и биологически активных добавок к пище [117].

По многочисленным литературным данным морские гидробионты содержат уникальные БАВ разнонаправленного действия [10, 27, 64, 73, 82, 88, 92, 111]. Это связанно с условиями их существования в водной среде, характеризующейся высоким содержанием соли, низким освещением или полным его отсутствием, высоким давлением и необычно высокими или низкими температурами. Подобные условия жизни обеспечивают отличие морских организмов и их метаболитов, от организмов с земной биологией [170, 204]. Как природные источники они характеризуются не только разнообразием и высокой эффективностью содержащихся в них БАВ, которые зачастую лишены отрицательных свойств, присущих веществам, полученным из традиционных источников, но и широкой и успешно воспроизводимой сырьевой базой [4]. Последнее обстоятельство может оказаться важным при необходимости получения каких-либо определенных химических веществ (белков, полисахаридов, нуклеиновых кислот и т.д.) в промышленном масштабе.

Известно, что нуклеиновые кислоты и, в частности ДНК, обладают иммуностимулирующими свойствами [123]. На сегодняшний день иммунотропное действие обнаружено у ДНК из молок осетровых рыб (деринат) и бактериальной ДНК.

В данной работе исследовались иммуномодулирующие и радиозащитные свойства ДНК-содержащих БАВ из морских гидробионтов -нДНК и ГГГ. В состав нДНК входит 79,0% ДНК, 7,8% белка, 2,1% липидов и 10,7% воды; ГГГ - 35,2% ДНК, 54,4% белка, 0,4% липидов и 10,0% воды [42, 10]. Различное содержание ДНК, преобладание в составе ГГГ белка могут обуславливать отличие в степени выраженности эффектов вызываемых исследуемыми веществами.

Необходимо отметить, что существует некоторое сходство между нДНК и деринатом: молекулярная масса составляющей их ДНК, высокий процент ее содержания [5, 42]. нДНК получают из молок лососевых рыб. Она является основным действующим веществом БАД к пище ДНКаС и ДНКаВИТ, разрешенных к использованию [97-98, 116] и широко применяемых населением. Однако механизм действия БАВ нДНК изучен недостаточно полно, что и послужило причиной включения ее в это исследование.

ГГГ, выделяют из гонад гребешка, он получен в лаборатории прикладной биохимии ТИНРО-центра и является новым, не изученным ранее веществом, биологическая активность которого была установлена при проведении скриннингового исследования различных БАВ морского происхождения.

В задачи данного исследования входило изучение влияние нДНК и ГГГ на реакции специфического иммунного ответа. Действие БАВ на гуморальное звено иммунитета оценивалось путем подсчета АОК в селезенке и определения титра гемагглютининов в сыворотке крови интактных мышей.

В результате проведенных экспериментов было установлено, что наиболее значительное повышение количества АОК по сравнению с контролем наблюдалось при введении БАВ в индуктивную фазу гуморального иммунного ответа в дозах 10 и 100 мг/кг. Индекс стимуляции при применении нДНК составил 2,6-2,5. ГГГ оказывал менее выраженное, по сравнению с нДНК, и также преимущественное воздействие на индуктивную (ИС=2,0-1,9) фазу образования АОК. Исследуемые БАВ вызывали незначительное повышение титра сывороточных антител, дозозависимого эффекта при этом практически не отмечалось.

Преимущественное влияние БАВ на индуктивную фазу иммунного ответа может быть обусловлено их влиянием на любой из процессов, протекающих в этот период - активацию (выход клеток из фазы покоя в Sфазу клеточного цикла) или пролиферацию лимфоцитов. Также, представляется возможным, что эффект нДНК и ГГГ опосредуется через действие на Тх2-клетки и выработку ими цитокинов, необходимых для развития этих процессов.

Изучение влияния БАВ на клеточное звено иммунитета проводилось с помощью РБТЛ и реакции ГЗТ. Известно, что активация (бласттрансформация) лимфоцитов является наиболее ранней реакцией лимфоидной ткани на поступление в организм антигена. Эта реакция представляет собой начальный этап иммунного ответа и имеет большое значение для его развития, так как изначально число клеток, составляющих клоны лимфоцитов, невелико [138].

С помощью РБТЛ было установлено, что нДНК и ГГГ обладают способностью стимулировать спонтанную и митогениндуцированную пролиферацию Т-лимфоцитов. Этот эффект БАВ является дозозависимым -наиболее выраженное действие наблюдалось при их введении в дозе 10 и 100 мг/кг. нДНК практически одинаково увеличивала как спонтанную (ИС=1,8), так и митогениндуцированную пролиферативную (1,6-1,8) активность лимфоцитов. ГГГ в большей степени повышал уровень спонтанной (ИС=2,0-1,9) и в меньшей степени (ИС=1,5-1,6) митогениндуцированнои пролиферации лимфоидных клеток.

В основе реакции ГЗТ лежит иммунное воспаление, в развитии которого основную роль играют активированные макрофаги. Сенсибилизированные С04+-Т-клетки осуществляют вовлечение макрофагов в реакцию путем их активации. Известно, что реакция ГЗТ протекает в 2 фазы - индуктивную и эффекторную, которые развиваются в результате введения сенсибилизирующей и разрешающей доз антигена [138].

Наибольшая эффективность при введении БАВ наблюдалась при дозе 10 мг/кг. нДНК оказывала более выраженное действие на индуктивную фазу ГЗТ, при введении за 3-е суток (ИС=1,8) и за сутки (ИС=1,7) до сенсибилизирующей дозы тимусзависимого антигена (ЭБ). Применение ГГГ обеспечивало наибольший прирост массы лапки у мышей как при введении одновременно с сенсибилизирующей дозой ЭБ (ИС=1,8), так и перед введением разрешающей дозы ЭБ (ИС=1,6), то есть и в индуктивную и в эффекторную фазу.

Усиление реакции ГЗТ, наблюдаемое в 1-ю фазу клеточного иммунного ответа может быть обусловлено влиянием БАВ на процессы активации СБ4+-Т-клеток и дифференцировки их в Txl. В свою очередь, действие ГГГ на эффекторную фазу ГЗТ, может опосредоваться через стимуляцию Txl к выработке цитокинов и индуцирование процесса активации макрофагов.

Стимулирующее воздействие БАВ' на гуморальное и клеточное звено иммунитета коррелировало с их влиянием на массу и клеточность лимфоидных органов, вызывая повышение этих показателей у интактных мышей, что может быть обусловлено стимуляцией под действием' БАВ процессов пролиферации и дифференцировки В- и Т-лимфоцитов.

С точки зрения современной иммунологии острая лучевая болезнь (ОЛБ) также представляет собой вторичный иммунодефицит панцитопенического типа. Для н§го характерны: массовая гибель лимфоцитов (в большей степени В-клеток); повреждение СКК костного мозга и связанное с этим медленное восстановление клеточного пула; поражение гуморального звена иммунитета, развитие дисфункции тимуса и дисбаланс Тх1/Тх2, в результате чего первоначально развивается нарушение антибактериальной защиты, а в более поздние сроки противоопухолевой и противовирусной резистентности [14, 35, 104].

Исходя из роли системы иммунитета в механизме развития лучевого поражения организма, разработаны принципы профилактики и лечения ОЛБ с помощью иммунотропных лекарственных средств [35]. Еще в 60-х годах прошлого столетия было обнаружено, что нуклеиновые кислоты, в том числе

ДНК, обладают противолучевым действием и эффективны в широком диапазоне доз облучения [7, 24, 118]. Было проведено множество экспериментов, посвященных изучению радиозащитных свойств ДНК, которые связывали только с ее непосредственным влиянием на стволовые клетки костного мозга и гемопоэз, возможность иммуноопосредованного действия не рассматривалась. Первоначально в экспериментах в основном о о применялась высокополимерная (1,2x10 -2x10 кДа) ДНК и именно с молекулярной массой исследователи связывали ее радиозащитный эффект. Однако, как было показано Н.И. Рябченко и др. [112] и Е.Е. Чеботаревым и др. [127], низкомолекулярная (2х105-5х105 кДа) ДНК также обладает терапевтической эффективностью.

Согласно Ю.И. Касьяненко и др. [93], высокомолекулярная ДНК -дорогое вещество, технология ее выделения многостадийна, трудоемка и требует дорогостоящего оборудования и реактивов. В связи с этим у нас я стране и за рубежом она производится в незначительном количестве, как правило, для химико-аналитических целей. В свою очередь, из-за упрощенного технологического процесса выделения, разработанного ученными ТИНРО-центра, низкомолекулярная ДНК является значительно более дешевой и доступной. Кроме того, существует мнение, что для наилучшего проникновения ДНК в клетку ее масса не должна превышать 500 кДа (цитируется по 42).

Радиозащитные свойства нДНК и ГГГ оценивались по их действию на массу и клеточность лимфоидных органов, СКК (метод эндо- и экзоколониеобразования), выживаемость и среднюю продолжительность жизни у животных, облученных в костно-мозговом диапазоне доз.

По степени угрозы для жизнедеятельности всего организма радиационные повреждения отдельных его тканей и систем не равнозначны. Костный мозг и органы иммунной системы, в первую очередь тимус, являются критическими органами при тотальном облучении организма в костно-мозговом диапазоне доз (1-10 Гр) [14].

Изучение влияния нДНК и ГГГ на кроветворение, массу лимфоидных органов и клеточность костного мозга, тимуса, селезенки и на 1, 3, 9, 14 и 23 сутки после облучения (6,5 Гр) показало, что введение исследуемых БАР способствует более раннему и полному восстановлению этих показателей у животных опытных групп, получавших БАВ.

Усиление регенераторных процессов на тканевом уровне является результатом репаративных процессов на клеточном и субклеточном уровне, непосредственно связанных с генетическим аппаратом клетки, а именно с ДНК.

Эволюционно у живых организмов сформировалась устойчивость к действию повреждающих факторов внешней среды. Одним из ведущих механизмов резистентности к модифицирующему влиянию повреждающих агентов на уровне биологического вида является репарация ДНК. Она обеспечивает защиту генома от генотоксического и мутагенного действия факторов химической и биологической природы [42]. При повреждении структуры ДНК и/или процессов ее репарации развиваются патологические процессы, влияющие на нормальное функционирование органов и систем организма. Так, по мнению Е.Ю. Москалевой и др. [89], причиной развития вторичных иммунодефицитов являются структурные нарушения ДНК лимфоцитов, возникающие под действием различных повреждающих факторов. К таким факторам относится и радиация.

Особенность биологического действия ионизирующей радиации состоит в том, что оно реализуется через образование радиационноиндуцируемых радикалов кислорода и воды, главными мишенями которых являются ДНК, хромосомы, мембраны [14, 69]. Наиболее радиопоражаемыми являются клетки, находящиеся в фазе митотического цикла.

Радиационные дефекты ДНК инициируются многочисленными радиационно-химическими реакциями по механизму прямого и косвенного действия излучения, а также токсическим действием высокореакционных продуктов хиноидной природы [14, 60]. Такие повреждения ДНК проявляются в виде изменений азотистых оснований, одно- и двунитевых разрывов ДНК, щелочнолабильных сайтов, сшивок ДНК-белок и меж- и внутримолекулярных сшивок [14].

Репаративный синтез ДНК - одно из фундаментальных явлений в поддержании клеточных популяций. Клетки в S-фазе клеточного цикла, особенно в ее начале, наиболее чувствительны к действию ионизирующей радиации по показателю задержки деления [190, 246]. Другое последствие радиационного нарушения репликации ДНК - так называемый неполный ее биосинтез [190] непосредственно связан с остановкой деления клеток в фазе g2 и их гибелью [184].

Тяжесть и исход лучевой болезни при костно-мозговом синдроме ОЛБ напрямую зависят от степени и характера поражения стволовых элементов клеточных популяций. Эквивалентом СКК условно, так как тождественность их не установлена, считают колониеобразующие единицы в селезенке (КОЕс) облученных мышей [85].

В данной работе для изучения влияния БАВ на КОЕс использовались методы эндо- и экзоколониеобразования [250-252]. Было установлено, что нДНК и ГГГ значительно стимулируют образование колоний в селезенках облученных мышей, что наблюдалось как при профилактической, так и при лечебной схеме введения, однако при использовании последней это действие было более выраженным. Оно имело дозозависимый характер и в большей степени проявлялось при введении нДНК (ИС=2,2) и ГГГ (ИС=2,1) в дозе 10 мг/кг. Также было установлено, что БАВ обладают способностью выводить СКК из фазы покоя в S-фазу клеточного цикла с последующей клеточной репликацией. При исследовании влияния биополимеров на способность ККМ формировать КОЕ-ГМ, БОЕ-Э и КОЕ-ГЭММ-колонии было установлено, что под действием нДНК наблюдается стимуляция (ИС=8,7) преимущественно эритроидных клеток-предшественников. Под действием в 2,9 раза ГГГ повышалось количество КОЕ-ГЭММ.

Таким образом, введение исследуемых БАВ вызывает активацию СКК, обеспечивающую усиление процессов пролиферации и дифференцировки гемопоэтических клеток-предшественников. Согласно данным литературы такое действие можно объяснить возможным усвоением экзогенной ДНК тканями и клетками облученного организма и использованием ее в процессе пострадиационного восстановления [46, 74, 105] в качестве предшественников для синтеза собственной ДНК клеток [46]. Тем самым ДНК-содержащие БАВ оказывают стимулирующее действие на репродуктивную функцию клеток, сокращая период митотического блока, и способствуют более ранней и быстрой регенерации повреждений тканевых структур. Не исключено, что одним из механизмов радиозащитного действия исследуемых БАВ является связывание радиотоксинов хиноидной природы и предотвращение тем самым их повреждающего действия на геном клеток критических органов [78].

Выживание животного при воздействии на него ионизирующей радиации в костно-мозговом диапазоне доз создает четкую модель радиорезистентного состояния организма [69]. Поэтому, заключение о радиозащитном действии БАВ можно сделать на основании его влияния на выживаемость и среднюю продолжительность жизни животных [40].

При введении различных доз БАВ до и после облучения, наибольшая эффективность наблюдалась при лечебной схеме применения и дозе 10 мг/кг. Установлено, что ГГГ и нДНК при подкожном введении повышали выживаемость облученных животных на 25-30%, при введении per os на 2025% соответственно. Продолжительность жизни облученных мышей при лечебном применении, вне зависимости от способа введения парентерального или перорального, увеличивалась в среднем в 2 раза.

По-видимому, повышение этих показателей под действием БАВ является следствием стимуляции ими репаративных процессов на клеточном и субклеточном уровнях, регенеративных на тканевом уровне, в результате чего в более ранние сроки происходит восстановление массы и клеточности тимуса, селезенки, костного мозга, количества лейкоцитов крови и нормализуются нарушенные функции иммунной и кроветворной систем. То есть, влияние нДНК и ГГГ на основной интегральный показатель радиорезистентности - выживаемость животных в костно-мозговом диапазоне доз - является результатом суммирования различных путей реализации этого механизма.

Известно, что рост и развитие наименее дифференцированных клеток-предшественниц, из которых происходит восстановление кроветворения при облучении в дозах, вызывающих костно-мозговую форму ОЛБ [102], контролируется гемопоэзиндуцирующим микроокружением [29, 131, 188, 259]. Согласно современным представлениям, в формировании ГИМ принимают участие различные клеточные элементы и продукты их жизнедеятельности, входящие в состав как стромы, так и паренхимы кроветворных органов. Контроль над процессами кроветворения элементы ГИМ осуществляют посредством прямых контактов с гемопоэтическими клетками и через продукцию цитокинов [30, 241].

К ранним гемопоэтическим ростовым факторам относят ИЛ-3, ГМ-КСФ, ФНО-а [101]. ИЛ-3 является ростовым и дифференцировочным фактором, регулирующим гемопоэз на уровне стволовых и наиболее ранних предшественников кроветворных клеток. Он представляет собой преимущественно экстренный регулятор кроветворения, проявляющий свое действие при стрессе [44, 138, 198, 202]. ГМ-КСФ поддерживает пролиферацию несколько более дифференцированных, хотя также юных клеток [101, 191, 224]. Точками приложения ГМ-КСФ, как и ИЛ-3, являются мультипотентный предшественник КОЕ-ГЭММ, а также БОЕ-Э [ 142, 191, 224, 248]; ФНО-а на фоне подавленного кроветворения индуцирует выход СКК из фазы Go в S-фазу клеточного цикла [101, 154, 228, 233].

Для интерпретации результатов; всех доноров условно делили на 3 группы (ориентируясь на, исходный уровень продукции цитокинов): с исходногнизкими, со средними и с исходно высокими показателями.

Полученные результаты показали, что нДНК и ГГГ оказывают модулирующее действие на? выработку всех исследованных цитокинов клетками крови здоровых доноров, повышая исходно низкое их содержание, снижая1 исходно высокую и не оказывая существенного влияния при среднем уровне: их концентрации. В группах с исходно низкими показателями БАВ проявляют стимулирующее, но не равнозначное по интенсивности действие на продукцию цитокинов. нДНК и ГГГ вызывают выраженную секрецию ГМ-КСФ (ИС=5,8-9,7) и в меньшей степени; влияют на продукцию клетками крови доноров ИЛ-3 (ИС=4,4-3,2) и ФНО-а (ИС=2,5-3,3). Под действием нДНК наблюдается; более значительное, по сравнению с ШЫО (ИС=Т,9), повышение уровня ИФН-у (ИС=3,3). Добавление к культуре клеток ГГГ способствует практически равной стимуляции продукции как ИЛ-10, так и ИФН-у (ИС=2,6-2,7).

Эти результаты свидетельствуют о том, что БАВ оказывают более выраженное стимулирующее действие - на продукцию провоспалительных (ФНО-а), нежели противовоспалительных цитокинов (ИЛ-10). Введение нДНК обуславливает повышение уровня цитокинов, вырабатываемых преимущественно Txl-клетками (ИФН-у), т.е. может способствовать развитию клеточного иммунного ответа. Напротив, ГГГ оказывает равнозначное действие на выработку цитокинов Txl и Тх2. Аналогично мнению К.Ф. Ким с соав. [17] подобный эффект можно объяснить действием ГГГ не на дифференцировку, а лишь на синтез соответствующих цитокинов.

Сопоставление иммуностимулирующего' действия БАВ: и бактериальной ДНК, позволяет: определить некоторое сходство. Однако, по данным литературы, иммуностимулирующее действие бактериальной ДНК обусловлено наличием ^ в ее структуре неметилированных CpG-динуклеотидов в- составе определенных последовательностей [205, 234]; Подобные GpG-динуклеотиды не обнаружены в ДНК позвоночных, в которой; напротив, присутствуют иммуно-нейтрализующие/иммуносупрессивные мотивы [109]. Исходя; из' этого, можно сделать предположение, что либо иммуностимулирующий эффект бактериальной ДНК обусловлен не только GpG-динуклеотидами, либо в молекуле ДНК позвоночных существуют свои собственные структуры, ответственные за ее активирующее влияние на иммунную систему. Это делает перспективным' дальнейшее изучение нДНК и 111, их структуры и механизма действия.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что нДНК и ГГГ обладают иммуномодулирующими и радиозащитными свойствами.

Механизм иммуномодулирующего действия обусловлен влиянием исследуемых БАВ на развитие процессов гуморального и клеточного иммунного ответа и продукцию внутри- и межсистемных регуляторных факторов - цитокинов.

Противолучевое действие нДНК и ГГГ реализуется через непосредственное участие в репаративных процессах поврежденных радиацией клеток, и, в первую очередь, гемопоэтических стволовых клеток костного мозга. Тем самым, БАВ укорачивают период митотического блока и способствуют более раннему выходу СКК из фазы Go в S-фазу клеточного цикла и стимулируют их дальнейшую пролиферацию и дифференцировку: Результатом является: более быстрая регенерация тканей критических органов - костного мозга и лимфоидных органов и восстановление нормального функционирования гемопоэтической и иммунной систем. Подобный вывод согласуется с данными литературы [7, 118]. Однако, по нашему мнению, механизм радиозащитного действия БАВ помимо непосредственного влияния на пораженные радиацией клетки, может опосредоваться и через иммунную систему - В- и Т-лимфоциты, которые участвуют в регуляции гемопоэза [87]. Важную роль в восстановлении кроветворения облученного организма играют гуморальные факторы, выделяемые тимусом, вероятность участия которых при применении БАВ подтверждает тот факт, [18, 126], что у облученных животных опытных групп наблюдается более значительное, по сравнению с контролем, увеличение массы и клеточности тимуса. Кроме того, радиозащитное действие БАВ может реализовываться и через активацию гемопоэзиндуцирующего микроокружения, и в частности, через стимуляцию продукции ранних гемопоэтических ростовых факторов (ИЛ-3, ГМ-КСФ и ФНО-а). Все это свидетельствует о сложности и многогранности механизма противолучевого действия исследуемых БАВ.

Полученные результаты изучения свойств нДНК позволяют частично раскрыть механизм иммуностимулирующего действия БАД, созданных на ее основе, и расширить область их применения.

Согласно P.M. Хаитову и др. [124], установление иммунодефицита еще не является основанием для назначения иммуномодуляторов. Для обоснованного проведения иммунотерапии необходимо провести клинико-иммунологическое исследование. По его результатам авторы выделяют 3 группы людей: в первую входят лица, имеющие клинические признаки нарушения иммунитета и изменения иммунологических показателей; во вторую - лица с клиническими признаками нарушений иммунной системы при отсутствии изменений иммунологических показателей; в третью - лица, имеющие только изменения иммунологических показателей без клинических признаков недостаточности иммунной системы. И, если назначение иммуномодулирующей терапии однозначно показано в первых 2-х группах, то третьей рекомендован только иммунологический мониторинг. Представляется возможным, что применение ДНК-содержащих БАД у этой группы лиц, особенно при нарушении клеточного звена иммунитета, будет способствовать восстановлению нарушенных иммунологических показателей и предотвратит дальнейшее развитие иммунодефицита.

Экспериментально установлено, что нДНК не только оказывает радиозащитное действие, но и обладает способностью стимулировать развитие преимущественно клеточного иммунного ответа, что может предотвратить возникновение дефицита Тх1 в поздние сроки после облучения [128]. Это позволяет рекомендовать ДНК-содержащие БАД при радиационном поражении (не превышающем костно-мозговой диапазон доз); у групп радиационного риска (персонал ремонтных подразделений атомных электростанций, рабочие урановых рудников и предприятий по переработке урановых руд, врачи рентгенологи, радиологи и т.д.); и обосновывает их применение у онкологических больных, получающих радиотерапию.

Кроме того, ДНК-содержащие БАД могут быть использованы: о для профилактики различных заболеваний, и, в частности, в периоды сезонного повышения заболеваемости ОРВИ, в целях укрепления общей резистентности организма и повышения его сопротивляемости к инфекции; о на этапах выздоровления, для устранения астенического синдрома и повышения адаптационных механизмов организма.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Потапова, Вера Владимировна, 2005 год

1. Ранжировали попарные разности, как положительные, так иотрицательные в один общий ряд по возрастанию;

2. Находили отдельно суммы положительных и отрицательных разностей.Меньшую из двух сумм разностей, без учета ее знака, использовали вкачестве фактически установленной величины Т-критерия.

3. Активность лекарственных средств, полученных на основе нативной ДНК, в отношении РНК- и ДНК-содержащих вирусов / Ю.П. Вайнберг, Д.Н. Носик, Э.Н. Каплина и др. // Клинич. Медицина. 1995, №6. - С.3-5.

4. Афанасьев, Б.В. Родоначальные кроветворные клетки человека / Б.В.Афанасьев, В.А. Алмазов Л.: Наука, 1985. - 204 с.

5. Барабой, В.А. Чернобыль: 10 лет спустя. Медицинские последствия радиационных катастроф / В.А. Барабой. Киев: Чернобыльинтеринформ, 1996.- 187 с.

6. Беседнова, Н.Н. Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок рыб -перспектива клинического применения (методические рекомендации для врачей) / Н.Н. Беседнова, Л.Н. Эпштейн. Владивосток, 2002 - 38 с.

7. Беседнова, Н.Н. Иммунеактивные пептиды из гидробионтов и наземных животных / Н.Н. Беседнова, Л.Н. Эпштейн. Владивосток, 2004. - 248 с.

8. Белоус, A.M. Экзогенные нуклеиновые кислоты и восстановительные, процессы / A.M. Белоус, В.П. Годин, ЕЛ. Панков. М: Медицина, 1974. -200 с.

9. Белоусова, О.И. Радиация и система крови / О.И. Белоусова, П.А. Горизонтов, М.И. Федотова. М.: Атомиздат, 1978. - 128 с.

10. Беляков, И.М. Клетки стромы тимуса. Тимусное микроокружение / И.М. Беляков, А.А. Ярилин, О.И. Кузьменок // Иммунология. 1992, №3. - С. 312.

11. Биологически активная пищевая добавка — дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) из молок лососевых / Ю.И. Касьяненко, JI.M. Эпштейн, А.К. Гажа и др. //Известия ТИНРО. 1999. - Т. 125. - С. 139-146.

12. Биохимические основы действия радиопротекторов / Е.Ф. Романцев, В.Д. Блохина, З.И. Жуланова и др. М.: Атомиздат, 1980. - 168 с.

13. Васин, М.В. Средства профилактики и лечения лучевых повреждений > М.В. Васин. М.: Медицина, 2001.-314 с.

14. Вернигорова, JI.A. Радиозащитная эффективность некоторых токсинов / JI.A. Вернигорова, А.А. Лебедев. // Радиобиология. 1986. - Т. 26, №4. - С. 532-535.

15. Вершигора, А.Е. Общая иммунология: Учеб. пособие / А.Е. Вершигора, -Киев: Выща шк., 1989. 736 с.

16. Влияние тимических пептидов на синтез и внутриклеточное содержание некоторых цитокинов / К.Ф. Ким, С.В. Климова, В.А. Дьяконова и др. // Иммунология. 2002, №5. - С. 274-279.

17. Влияние тимозина на образование селезеночных колоний в аллогенной и сингенной схемах / О.В. Семина, Т.Н. Семенец, A.M. Поверенный и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1980. — Т. 90, №9. - С. 334-336.

18. Возканов, А.Ф. Цитокины. Биологические и противовоспалительные свойства / А.Ф. Возканов, А.К. Бутенко, К.П. Вак. Киев: Наукова Думка,1998. 317 с.

19. Вопросы инфекции, иммунитета и аллергии при острой лучевой болезни / Н.Н. Клемпарская, О.Г. Алексеева, Р.В. Петров и др. М.: Медгиз, 1958. -201 с.

20. Воробьев, А.А. Принципы классификации и стратегия применения иммуномодуляторов в медицине / А.А. Воробьев. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2002, №4. - С. 93-98.

21. Гажа, А.К. Иммуноактивный пептид из оптических ганглиев кальмара: автореф. дис. . канд. мед. наук / А.К. Гажа. М, 1986. - 23 с.

22. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. М.: Практика,1999.-500 с.

23. Гончаренко, Е.Н. Противолучевые средства природного происхождения / Е.Н. Гончаренко, Ю.Б. Кудряшов // Успехи соврем, биологии. 1991. - Т. 3, №2.-С. 302-315.

24. Грех, И.Ф. Защитное действие некоторых пиримидиновых производных от рентгеновских лучей у белых мышей / И.Ф. Грех // Мед. радиология. -1958. Т. 3, №6.-С. 67.

25. Турина, Л.И. Роль морепродуктов в энтеральном питании при хирургическом лечении заболеваний желудка: дис. . канд. мед. наук / Л.И. Турина. Владивосток, 1990. - 130 с.

26. Давидович, В.В. Аминокислоты двустворчатых моллюсков: биологическая роль и применение в качестве Б АД /В.В. Давидович, Т.Н. Пивненко // Известия ТИНРО.-2001.-Т. 129.-С. 146-153.

27. Дин, Р. Процессы распада в клетке / Р. Дин. М.: Медицина, 1971. - 254 с.

28. Дыгай, A.M. Роль межклеточных взаимодействий в регуляции гемопоэза / A.M. Дыгай, В.П. Шахов. Томск, 1989. - 224 с.

29. Дыгай, A.M. Воспаление и гомепоэз / A.M. Дыгай, Н.А. Клименко. Томск: Изд-во ун-та, 1992. - 276 с.

30. Еляков, Г.Б. Морская биоорганическая химия как основа для морской биотехнологии / Г.Б. Еляков // 1-й Международный конгресс «Биотехнология — состояние и перспективы развития» 14-18 окт., 2002. — Владивосток, 2002. - С. 18-19.

31. Епифанова, О.И. Периоды покоя и пролиферации в жизненном цикле клеток / О.И. Епифанова, В.В. Терских // Журн. общей биологии. 1968, №4. - С.392-402

32. Жестяников, В.Д. Восстановление и резистентность клетки / В.Д. Жестяников. JL: Наука, 1968. - 351 с.

33. Запорожец, Т.С. Иммуномодулирующая активность биогликанов морских беспозвоночных: дис. . канд. мед. наук / Т.С. Запорожец. -М, 1986. 169 с.

34. Иванов, А.А. Иммунологические подходы в лечении и профилактике радиационных поражений / А.А. Иванов, В.Н. Мальцев // Мед. радиология и радиац. безопасность. 1999. - Т. 44, №4. - С. 5-16.

35. Игнатенко, JI.A. Иммуномодулирующие и радиозащитные свойства транслама: дис. . канд. мед. наук / JI.A. Игнатенко. М, 1986. - 160 с.

36. Ильин, JI.A. Радиационная безопасность и защита: справочник / JI.A. Ильин, В.Ф. Кириллов, И.П. Коренков. М.: Медицина, 1996. - 336 с.г

37. Иммунология: Практикум / Е.У. Пастер, В.В. Овод, В.К. Позур и др. -Киев: Выща шк., 1989. 304 с.

38. Иммуносупрессивная активность экстракта высшего мицелиального гриба Polyporus Squamosus / Ал.А. Бабахин, А.А. Ведерников, Ак.А. Бабахин и др. // Иммунология. 1999, №4. - С. 47-52.

39. Исследование радиозащитных свойств продуктов природного происхождения при однократном тотальном облучении мышей / Э.А. Тарахтий, И.А. Кшнясев, Б.Г. Юшков и др. // Радиац. биология. Радиоэкология. 2000.- Т. 40, №6. - С. 668-673.

40. Караськов, A.M. Эффективность применения натриевой соли ДНК при инфаркте миокарда / А.М. Караськов, Ю.П. Вайнберг, А.П. Волков // Воен.-мед. журн. 1995, №6. - С.64-65.

41. Кетлинский, С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Кетлинский, А.С. Симбирцев, А.А. Воробьев. СПб.: Гиппократ, 1992. - 256 с.

42. Кетлинский, С.А. Современные аспекты изучения цитокинов / С.А. Кетлинский // Russ. J. Jmmunol.- 1999. Т. 4, №1. - С. 46-52.

43. Кириллова, Е.Н. Лечебное действие гетерологичной ДНК при фракционированном пролонгированном облучении / Е.Н. Кириллова, Р.Е. Либинзон // Радиобиология. 1973. - Т. 13, вып. 3. - С. 44-48.

44. Клемпарская, Н.Н. Аллергия и радиация / Н.Н. Клемпарская, Г.М. Львицина, Г.А. Шальнова. М.: Медицина, 1968. - 276 с.

45. Клемпарская, Н.Н. Иммунотерапия экспериментальной острой лучевой болезни / Н.Н. Клемпарская, Е.С. Горбунова, Н.Н. Добронравова. М.: Энергоиздат, 1981. - 102 с.

46. Клиническая иммунология: Учебник для студентов мед. вузов / Под ред.

47. A.В. Караулова. М.: Мед. информац. агенство, 1999. - 604 с.

48. Ковальчук, Л.В. Система цитокинов / Л.В. Ковальчук, Л.В. Ганковская, Э.И. Рубанова. Москва: РГМУ, 1999. - 74 с.

49. Кольман, М.В. Влияние экстрактов голотурий на неспецифическую резистентность и профилактику послеродовых осложнений у экспериментальных животных: дис. . канд. мед. наук / Кольман М.В.Владивосток, 2004. 134 с.

50. Контроль и регуляция иммунного ответа / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, В.М. Манько и др. М.: Медицина, 1981. - 312 с.

51. Корнеева, Е.А. Иммунофизиология истоки и современные аспекты развития / Е.А. Корнеева // Аллергия, астма и клинич. иммунология. -2000, №8. -С. 36-44.

52. Коррекция вторичных радиационных иммунодефицитов / Г.М. Яковлев,

53. B.C. Смирнов, В.Х. Хавинсон и др. // Воен.-мед. журн. 1991, №1. - С. 4446

54. Коррекция радиационных иммунодефицитов / B.C. Смирнов, В.Х. Хавинсон, Г.М. Яковлев и др. СПб.: Наука, 1992. - 32 с.

55. Красных, И.Г. Радиозащитное действие некоторых новых производных пурина и пиримидина / И.Г. Красных, B.C. Шашков, О.Ю. Магидсон // Фармакология и токсикология. 1961. - Т. 24, №5. - С. 572-577.

56. Критский, Г.А. О нуклеиновых блоках ДНК при воздействии ионизирующей радиации / Г.А. Критский, А.А. Абидов // 2-й Всесоюзный биохимический съезд, 1969. Москва, 1969. - С. 15.

57. Кудряшов, Ю.Б. О химической защите от ионизирующей радиации низкой интенсивности / Ю.Б. Кудряшов // Радиац. биология. Радиоэкология. -1997.- Т. 37, №4. С. 673-675.

58. Кудряшов, Ю.Б. Современные проблемы противолучевой химической защиты организмов / Ю.Б. Кудряшов, Е.Н. Гончаренко // Радиац. биология. Радиоэкология. 1999.- Т. 39, №2-3. - С. 197-211.

59. Кузин, A.M. Структурно-метаболическая гипотеза в радиобиологии / A.M. Кузин. М.: Атомиздат, 1970. - 222 с.

60. Кузнецов, В.П. Концепция иммунокоррекции при многофакторных иммунодефицитных состояниях инфекционных и онкологических заболеваниях / В.П. Кузнецов, Д.Л. Беляев, А.А. Бабаянц // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. — 1996, №5. С. 104-110.

61. Лаженцева, Л.Ю. Влияние антимикробного препарата из липидов морских рыб на возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний: дис. . канд. мед. наук / Л.Ю. Лаженцева. Владивосток, 2000. - 190 с.

62. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высш. школа, 1990. - 352 с.

63. Лебедев А.В. Азотистые экстрактивные вещества мышечной ткани беспозвоночных / А.В. Лебедев // Журн. эволюц. биохимии и физиологии.- 1974, Т. 10.-С. 232-242.

64. Легеза, В.И. Новая классификация профилактических противолучевых средств / В.И. Легеза, В.Г. Владимиров // Радиац. биология. Радиоэкология.- 1998.- Т. 38, №4. С. 416-425.

65. Лемешко, Т.Н. Морфо-функциональная оценка влияния жира печени минтая на организм животных: дис. . канд. мед. наук / Т.Н. Лемешко. -Владивосток, 1994. 198 с.

66. Любавская, Т.Я. Антимикробные и иммуномодулиругащие свойства комплексных экстрактов из трепанга японского: автореф. дис. . канд. мед. наук / Т.Я. Любавская. Владивосток, 1996. - 29 с.

67. Мазурик, В.К. Биохимические механизмы влияния ДНК и тимидина на организм животного при пострадиационном восстановлении. Радиация и организм / В.К. Мазурик, Л.Е. Брынсина, Д.К. Подгродченко. Обнинск, 1967.-С. 148-151.

68. Мазурик, В.К. Некоторые биохимические детерминанты и маркеры радиорезистентности организма млекопитающих / В.К. Мазурик, В.Ф. Михайлов // Радиац. биология. Радиоэкология. 1997.- Т. 37, №4. - С. 512521.

69. Малахова, Н.М. Влияние некоторых морепродуктов на обмен белков и липидов в эксперименте и клинике: дис. . канд. мед. наук / Н.М. Малахова. Владивосток, 1973. - 164 с.

70. Мальцев, В.Н. Количественные закономерности радиационной иммунологии / В.Н. Мальцев. М.: Энергоатомиздат, 1983. - 85 с.

71. Манько, В.М. Иммуномодуляция: история, тенденции развития, современное состояние и перспективы / В.М. Манько, Р.В. Петров, P.M. Хаитов // Иммунология. 2002. - Т. 23, №3. - С. 132-142.

72. Медико-биологическое исследование икры морского ежа / Ж.Б. Левингтон, Т.Л. Химич, Е.А. Ятченко и др. // Изв. ТИНРО. 1999. - Т. 125. - С. 254259.

73. Муксинова, К.Н. Репарация радиационных повреждений хромосом клеток костного мозга при введении высокополимерной гомологичной ДНК / К.Н. Муксинова, Г.Г. Русинова, Р.Е. Либинзон // Радиобиология. 1971. - Т. 11, вып. 1.-С. 69-73.

74. Мулындин В.А. Влияние экстрактов кукумарии японской на неспецифическую резистентность у экспериментальных животных: дис. . канд. мед. наук / В.А. Мулындин. Владивосток, 2002. - 131 с.

75. Низкомолекулярная РНК. Получение, гидролиз и применение в медицине / В.М. Земсков, М.Ю. Лидак, A.M. Земсков и др. Рига: Зинатне, 1985. - 188 с.

76. О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных форм работы с использованием экспериментальных животных: Приказ №755 МЗ

77. СССР от 12.08.77 г. URL: http://www.cyber.ma.nsc.ru.

78. О механизме терапевтического действия экзогенной ДНК при лучевом поражении / A.M. Кузин, В.А. Копылов, А.Ф. Ревин и др. // Радиобиология. 1985. - Т. 25, вып. 5. - С. 680-683.

79. Пашук, J1.K. Препараты ДНК как потенциальные терапевтические средства / Л.К. Пашук, Г.Н. Апрышко, Е.М. Трещалина // Хим:-фармац. журн. — 1995.-Т. 29. №6.-С. 61-64.

80. Переверзев, А.Е. Кроветворные колониеобразующие клетки и физические стресс-факторы / А.Е. Переверзев. Л.: Наука, 1986. - 172 с.

81. Петров, Р.В. Иммунология острого лучевого поражения / Р.В. Петров. М.: Госатомиздат, 1962. - 199 с.

82. Петров, Р.В. Трансплантационный иммунитет и радиационные химеры / Р.В. Петров, Ю.М. Зарецкая. М.: Медицина, 1965. - 228 с.

83. Пищевая биологически активная добавка из мидий / М.В. Новикова, Н.И Рехина, Т.В. Беседина и др. // Вопр. питания. 1998, №1. - С. 10-13.

84. Повреждение ДНК лимфоцитов и иммунодефицитные состояния / Е.Ю. Москалева, Н.А. Федоров, О.А. Кизенко и др. // Вест. Рос. акад. мед. наук. 1993, №4.-С. 12-17.

85. Позднякова, Ю.М. Влияние эндогенных ферментов на состав олигонуклеотидов при их выделении из гонад гидробионтов / Ю.М. Позднякова, Т.Н. Пивненко, Ю.И. Касьяненко // Приклад, биохимия и микробиология. 2003. - Т. 39, №5. - С. 524-529.

86. Позднякова, Ю.М. Технология биологически активных добавок к пище на основе ферментативного гидролиза гонад гидробионтов: дис. . канд.технич. наук / Ю.М. Позднякова. Владивосток: ТИНРО-центр, 2003, 125 с.

87. Получение высокополимерной ДНК из молок осетровых рыб / Ю.П. Вайнберг, Э.Н. Каплина, П.А. Кольцов и др. // Хим. фарм. журн. — 1982, №7 С.67-70.

88. Получение и свойства производных ДНК из молок лососевых / Ю.И. Касьяненко, Ю.В. Ковалева, JI.M. Эпштейн и др. // Изв. ТИНРО-центра. -1997.-Т. 120.-С 37-43.

89. Получение и характеристика белковых гидролизатов с использованием ферментных препаратов различной специфичности / Т.Н. Пивненко, Ю.М. Позднякова, В.В. Давидович и др. // Известия ТИНРО-центра. 1997. - Т. 120.-С. 23-31.

90. Пухов, В.В. Противолучевые свойства оксолиновой кислоты при пролонгированном радиационном воздействии / В.В. Пухов, С.Б. Данияров // Радиобиология. 1988. - Т. 28, №2. - С. 279-281.

91. Региональные проблемы здоровья населения России / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, И.В. Орадовская и др. М.: ВИЬЖГИ, 1999. - С. 175-185.

92. Регистрационное удостоверение №004977.Р.643.10.2002 от 30.10.2002.

93. Регистрационное удостоверение №004978.Р.643.10.2002 от 30.10.2002.

94. Репаративное действие препаратов нуклеиновых кислот при экспериментальной язве желудка / А.С. Логинов, Ю.П. Вайнберг, П.А. Кольцов и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины 1991, №7. - С. 5960.

95. Рогачева, С.А. Влияние ДНК на кроветворение нормальных животных / С.А. Рогачева, Г.Г. Русинова, Э.Г. Шарова // Цитология. 1970. - Т. 12, №7.-С. 912-918.

96. Рогачева, С.А. Экспериментальное обоснование применения цитокинов при острой лучевой болезни / С.А. Рогачева // Радиац. биология. Радиоэкология. 1998. - Т. 38, вып. 6. - С. 854-872.

97. Рогачева, С.А. Изучение противолучевого действия интерлейкина-1 р в эксперименте / С.А. Рогачева, А.С.Симбирцев, К.Н. Муксинова // Радиац. биология. Радиоэкология. 1994. - Т. 34, вып. 3. - С. 419-423.

98. Роль иммунокоррекции в общеклинической практике / JI.B. Лусс, А. Бхардварж, Н.Г. Пучкова и др. // Internation. J. Immunorehabilitation. 2000.Т. 2, №1. - С. 138-144.

99. Роль системы иммунитета в радиационном поражении организма. Развитие гипотезы / А.А. Иванов, В.Н.Мальцев, A.M. Уланова и др. // Мед. радиология и радиац. безопасность. 2001. - Т. 46, №3. - С. 64-78.

100. Русинова, Г.Г. Включение экзогенной ДНК в ткани облученных животных / Г.Г. Русинова, Р.Е. Либинзон // Радиобиол. 1976. - Т. 16, вып. 3. - С. 333-338.

101. Рыкова, Е.Ю. Активирующее влияние ДНК на иммунную систему / Е.Ю. Рыкова, П.П. Лактионов, В.В. Власов // Успехи, соврем, биологии. 2001. -Т. 121, №2. - С.160-171.

102. Семанив, Е.В. Экспериментальное медико-биологическое обоснование рационального использования в питании населения дальневосточных культивированных моллюсков: дис. . канд. мед. наук / Е.В*. Семанив. -Владивосток, 1999. 169 с.

103. Сепиашвили, Р.И. Основы физиологии иммунной системы / Р.И. Сепиашвили. Москва: Медицина, 2003. - 241 с.

104. Серебряная, Н.Б. ДНК как иммуностимулятор / Н.Б. Серебряная, А.А. Новик // Мед. иммунол. 2001. - Т. 3, №1. - С. 27-34.

105. Соболева, Э.П. Применение ДНК при цитопении, вызванной миелосаном / Э.П. Соболева, С.А. Рогачева // Бюл. эксперим. биологии и медицины — 1976, №4.-С. 409-411.

106. Ш.Слуцкая, Т.Н. Сравнительная характеристика сушенных- трепанга и кукумарии / Т.Н. Слуцкая // Исследование по технологии рыбных продуктов. Владивосток: ТИНРО, 1972. - вып. 3. - С. 139-146.

107. Сравнительный анализ терапевтического действия нативной, денатурированной и гидролизованной ДНК / Н.И. Рябченко, Б.П. Иванник,

108. A.Г. Конопляников и др. // Радиобиология. — 1973. Т.13, вып. 5. - С. 734737.

109. Тимофеев-Ресовский, Н.В. Введение в молекулярную радиобиологию (физико-химические основы) / Н.В. Тимофеев-Ресовский, А.В. Савич, М.И. Шальнов. М., 1981. - 320 с.

110. Ткаченко, З.Я. Влияние экзогенной ДНК на рост перевиваемой саркомы 45 /З.Я. Ткаченко // Онкология. 1979, вып. 13. - С. 61-64.

111. Троицкий, B.JL Влияние ионизирующих излучений на иммунитет /

112. B.Л.Троицкий, М.А. Туманян. М.: Медицина, 1958. - 199 с.

113. ТУ №9283-010-00038155-99. Дата внедрения 01.02.2000:

114. Федорова, Т.А. Нуклеиновые кислоты и белки в организме при лучевом поражении / Т.А. Федорова, О.Я. Ерещенко, В.К. Мазурик. М.: Медицина, 1972. - 407 с.

115. Фрейдлин, И.С. Дефекты цитокиновой сети и принципы их коррекции / И.С. Фрейдлин // Иммунология. 1998, №6. - С. 23-25.

116. Фрейдлин, И.С. Прикладные аспекты современного учения о цитокинах / И.С. Фрейдлин // Тихоокеан. мед. журн. 1999, №3. - С. 13-19.

117. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы / P.M. Хаитов // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2000. - Т. 86. - С. 257-267.

118. Хаитов, P.M. Иммуногенетика и иммунология: резистентность к инфекции / P.M. Хаитов, В.М. Манько, Л.П. Алексеев Ташкент: Медицина, 1991. -456 с.

119. Хаитов, P.M. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2003. - Т. 24, №4.-С. 196-203.

120. Хаитов, P.M. Иммуномодуляторы и некоторые аспекты их клинического применения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Клинич. медицина. 1996, №8. -С. 7-12.

121. Хаитов, P.M. Экологическая иммунология / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, Х.И. Истамов. М.: ВНИРО, 1995. - 218 с.

122. Хаитов, P.M. Факторы, контролирующие рециркуляцию кроветворных стволовых клеток. IV. Влияние тимозина на миграцию и дифференцировку КСК / P.M. Хаитов, Л.М. Черменева, Л.В. Рябова // Цитология. 1979. - Т. 21, №9.-С. 1058-1064.

123. Чеботарев, Е.Е. Защитное действие ДНК при нейронном облучении /Е.Е. Чеботарев, Э.Э. Рябова, В.М. Индык // Вопросы радиобиологии. -Минск, 1969.-С. 128-134.

124. Чекановская, Л.А. Влияние препарата гамма-плант на продукцию ФНО-а, ИЛ-1(3, и ИЛ-6 мононуклеарами периферической крови человека in vitro / Л.А. Чекановская, Ф.В. Генералов // Вопр. мед. химии. 2001. - Т. 47, вып. 2.-С. 34-41.

125. Череев, А.Н. Медицинская иммунология: что это и как практиковать ее в Европе / А.Н. Череев, JI.B. Ковальчук // Rus. J. Immunol. 1998. - Т. 3, №1. -С. 1-4.

126. Чертков, И.Л. Существует ли стволовая кроветворная клетка / И.Л. Чертков // Молекуляр. биология. 1984. - Т. 18, вып. 3. - С. 565-573.

127. Чертков, И.Л. Как обеспечивается поддержание кроветворной системы / И.Л. Чертков, Н.И. Дризе // Гематол. и трансфузиол. 1998. - Т. 43, №4. -С. 3-8.

128. Шубик, В.М. Ионизирующее излучение и иммунитет / В.М. Шубик. М.: Атомиздат, 1962. - 149 с.

129. Шубик, В.М. Иммунологические исследования в радиационной гигиене / В.М. Шубик. М.: Энергоатомиздат, 1987.- 143 с.

130. Шубик, В.М. Долгое эхо Чернобыля / В.М. Шубик. Спб.: Теза, 1996. -193 с.

131. Эффективность высокополимерной ДНК при лечении острой лучевой болезни / Р.Е. Либинзон, В.В. Константинова, К.Н. Муксинова и др. // Радиобиол. 1963. - Т. 3, №1. - С. 111-116.

132. Ярилин, А.А. Радиация и иммунитет / А.А. Ярилин // Радиац. биология. Радиоэкология. 1997.- Т. 37, №4. - С. 597-603.

133. Ярилин, А.А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / А.А. Ярилин // Иммунология. — 1997, №5. С. 714.

134. Ярилин, А.А. Основы иммунологии: Учебник / А.А. Ярилин. М.: Медицина, 1999. - 608 с.1. Иностранная литература

135. A broad-spectrum antifungal from the marine sponge Hyrtios erecta / R.K. Pettit, S.C. McAllister, G.R. Pettit et al. // Int. J. Antimicrob. Agents 1998. - №9. -P. 147-152.

136. Acanthosterol sulfates A-J: ten new antifungal steroidal sulfates from a marine sponge Acanthodendrilla sp. / S. Tsukamoto, S. Matsunaga, N. Fusetani et al. /,' J. Nat. Prod. 1998. - Vol. 61 - P. 1374-1378.

137. Activities of four purified growth factors on highly enriched human hematopoietic progenitor cells / A. Strife, C. Lambek, D. Wisniewski et al. // Blood. 1987. - №5. - P. 508-523.

138. Agosterol A, a novel polyhydroxylated sterol acetate reversing multidrug resistance from a marine sponge of Spongia sp. / S. Aoki, Y. Yoshioka, Y. Miyamoto et al. // Tetrahedron Lett. 1998 - Vol. 39. - P. 6303-6306.

139. An antifungal cyclodepsipeptide, cyclolithistide A, from the sponge Theonella swinhoei / D.P. Clark, J. Carroll, S. Naylor et al. // J. Org. Chem. 1998. - Vol. 63-P. 8757-8764.

140. Aneiros, A. Bioactive peptides from marine sources: pharmacological properties and isolation procedures / A. Aneiros, A. Garateix 11 J. Chromatogr. B. Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. -2004. Vol. 803, №1. - P. 41-53.

141. Antimalarial activity of kalihinol A and new relative diterpenoids from the okinawan sponge, Acanthella sp. / H. Miyaoka, M. Shimura, H. Kimura et al. // Tetrahedron. 1998. - Vol. 54-P. 13467-13474.

142. Antimicrobial and immunological activity of ethanol extracts and fractions from Isopyrum thalictroides / N. Ivanovska, S. Philipov, R. Istatkova et al. // J. Ethnopharmacol. 1996. - №2-3. - P. 143-151.

143. Antimicrobial indolequinones from the mid-intestinal gland of the muricid gastropod Drupella fragum / Y. Fukuyama, C. Iwatsuki, M. Kodama et al. // Tetrahedron. 1998.-Vol. 54-P. 10007-10016.

144. Bacterial DNA containing. CpG motifs stimulates lymphocyte-dependent protection of mice against lethal infection with intracellular bacteria / K.L. Elkins, Т.К. Rhinehart-Jones, S. Stibitz et al. // J. Immunol. 1999. -Vol. 162. - P. 22912298.

145. Ballas, Z.K. Induction of natural killer activity in murine and human cells by CpG motifs in oligodeoxynucleotides and bacterial DNA / Z.K. Ballas, W.L. Rasmussen, A.M. Krieg//J. Immunol. 1996. - Vol. 157. - P. 1840-1845.

146. Bird, A.P. CpG islands as gene markers in the vertebrate nucleus / A.P. Bird // Trends Gene. 1987. - Vol. 3. - P. 342-347.

147. Citotoxic effects of WR 2721 on mouse testicular cells / M.L. Meistrict, M.V. Finch, N. Hunter et al. // Intern. J. Radiat. Oncol. Biol. Physiol. 1984. -Vol.10, №9. -P. 1551-1554.

148. Comparative immunopharmacology and toxicology of the bisbenzylisoquinoline alkaloids tetrandrine and berbamine / C.W. Wong, W.K. Seow, T.S. Zeng et al. // Int. J. Immunopharmacol. 1991. №5. - P. 579-585.

149. CpG containing oligonucleotides are efficient adjuvants for induction of protective antiviral immune responses with T-cell peptide vaccines / A. Oxenius, M.A. Martinic, H. Hengartner et al. //J. Virol. 1999.-Vol. 73. P. 4120-4126.

150. CpG DNA induces sustained IL-12 expression in vivo and resistance to Listeria monocytogenes challenge / A.M. Krieg, L. Love-Homan, A-K. Yi et al. // J. Immunol. 1998. - Vol. 161. - P. 2428-2434.

151. CpG-DNA-specific activation of antigen-presenting cells requires stress kinase activity and is preceded by non specific endocytosis and endosomal maturation / H. Hacker, H. Mischak, Th. Miethke et al. // EMBO. 1998. - Vol. 17. - P. 62306240.

152. CpG motifs in bacterial DNA activates leukocytes through the pH-dependent generation of reactive oxygen species / A.-K. Yi, R. Tuetken, T. Redford et al. // J. Immunol. 1998. - Vol. 160. - P. 4755-4761.

153. CpG motifs in bacterial DNA trigger direct B-cell activation / A.K. Krieg, A-K. Yi, S. Matson et al. // Nature. 1995. - Vol. 374. - P. 546-549.

154. CpG motifs present1 in bacteria DNA rapidly induce lymphocytes to secrete interleukin 6, interleukin 12, and interferon gamma / D.M. Klinman, A.K. Yi,4

155. CpG-oligodeoxynucleotides co-stimulate primary T cells in the absence of antigen-presenting cells / S. Bendigs, U. Salzer, G.B. Lipford et al. // Europ. J. Immunol. 1999. - Vol. 29, №4. - P. 1209-1218.

156. CpG oligodeoxynucleotides down regulate macrophage class II MHC antigen processing / R.S. Chu, D. Askew, E.H. Noss et al. // J. Immunol. 1999. -Vol. 163. - P. 188-1194.

157. Cutting edge: CpG ligodeoxynucleotides trigger protective and curative Thl responses in lethal murine leishmaniasis / S. Zimmerman, O. Egeter, S. Hausmann et al. // J. Immunol. 1998. - Vol. 160. - P. 3627-3630.

158. Ding, Q. Pyrroloquinoline and Pyridoacridine Alkaloids from marine sources / Q. Ding, K. Chichak, J.W. Lown // Curr. Med. Chem. 1999. - №6. - P. 1-27.

159. Direct stimulation of cytokines (IL-la , TNF-a , IL-6, IL-2, IFN-y and GM-CSF) in whole blood. Comparison with isolated PBMC stimulation / D. De Groote, P.F. Zangerle, Y. Gevaert et al. // Cytokine. 1992. - №4. - P. 239-248.

160. Donia, M. Marine natural products and their potential applications as anti-infective agents / M. Donia, M.T. Hamann // Lancet. Infect. Dis. 2003. - Vol. 3. - №6. - P. 338-348.

161. Drugs from the sea: conotoxins as drug leads for neuropathic pain and other neurological conditions / D. Alonso, Z. Khalil, N. Satkunanthan et al. // Mini Rev. Med. Chem. 2003. - Vol. 3, №7. - P. 785-787.

162. Effect of a garlic derivative (alliin) on peripheral blood cell immune responses / H. Salman, M. Bergman, H. Bessler et al. // Int. J. Immunopharmacol. 1999. -№9.-P. 589-597.

163. Effect of homologous tumor DNA on the evolution of SV40-induced hamster sarcoma / E. Nastac, M. Stoian, M. Iosipenco et al. // Virologie. 1985. - Vol. 36, №1.- P. 31-36.

164. Enhancement of antigen-presenting cell surface molecules involved in cognate interactions by immunostimulatory DNA sequences / E. Martin-Orozco, H. Kobayashi, J. Van Uden et al. // Int. Immunol. 1999.-Vol. 11. - P. 1111-1118.

165. European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and Other Scientific Purposes Strasbourg, 18.Ш.1986. URL: http://conventions.coe.int/Treaty/rus/Treaties/Html/123 .htm

166. Faulkner, D.J. Marine natural products / D. J. Faulkner // Nat. Prod. Rep. 2000. -Vol.17.-P. 7-55.

167. Faulkner, D.J. Highlights of marine natural products chemistry (1972-1999) / D.J. Faulkner // Nat. Prod. Rep. 2000. - Vol. 17. - P. 1-6.

168. Fe3+/DNA complex induced an anti-human immunodeficiency virus factors in CD4+ lymphocyte cell lines / D. Nossik, E. Kaplina, N. Nossik et al. // Acta Virologica. 1999. - Vol. 43. - P. 32-37.

169. Fenical W. New pharmaceuticals from marine organisms / W. Fenical // Trends Biotechnol.-1997. Vol. 15, №9. P. 339-341.

170. Fishman, M.A. Thl/Th2 cross regulation / M.A. Fishman, A.S. Perelson // J. Theor. Biol. 1994. - №1. - P. 25-56.

171. Frondoside C, a new nonholostane triterpene glycoside from the sea cucumber Cucumaria frondosa: structure and cytotoxicity of its desulfated derivative / S.A. Avilov, O.A. Drozdova, V.I. Kalinin et al. // Can. J. Chem. 1998. - Vol. 76. -P. 137-141.

172. Gene expression in IFN-gamma-activated murine macrophages / C.A. Pereira, M. Modolell, J.R. Frey et al. // Braz. J. Med. Biol. Res. 2004. - №12. - P. 1795-1809.

173. Gordon, M.Y. Physiology and function of the haemopoietic microenvironment / M.Y. Gordon // Brit. J. Haematol. 1994. - Vol. 86, №2. - P. 241-243.

174. Griffiths, T.D. Age-dependence of the x-ray-induced deficiency in DNA synthesis in HeLa S3 cells during Generation 1 / T.D. Griffiths, L.J. Tolmach // Radiat. Res. 1975. - Vol. 63, №3. - P. 501-530.

175. Guan, H. 21th century, China Marine Drugs (in Chinese) / H. Guan, M. Geng, C. Wang // Chinese J. Marine Drugs. 2000. - Vol. 19. - P. 44-47.

176. Haefner, B. Drugs from the deep: marine natural products as drug candidates / B. Haefner // Drug Discov. Today. 2003. - №8. - P. 536-544.

177. Hallock, Y.F. Frondosins A HlV-inhibitory sesquiterpene hydroquinonc derivatives from Euryspongia sp. / Y.F. Hallock, J.H. Cardellina, M.R. Boyd // Nat. Prod. Lett. 1998. - №11.-P. 153-160.

178. Hardy, C.L. Cellular interactions in hemopoeitic progenitor cell homing: a review / C.L. Hardy, J.J. Minguell // Scanning Microse. 1993. - Vol. 7, №1. -P. 333-341.

179. Hartmann, G. CpG DNA as a signal for growth, activation and maturation of human dendritic cells / G. Hartmann, G. Weiner, A.M. Krieg // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999.-Vol. 96.-P. 9305-9310.

180. Hopwood, L.E. Deficient DNA synthesis and mitotic death in x-irradiated HeLa cells / L.E. Hopwood, L.J. Tolmach // Radiat. Res. 1971. - Vol. 46, №1. - P. 70-84.

181. Human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) stimulates immature marrow precursors but no CFU-GM, CFU-G, or CFU-M / F.J. Bot, L. van Eijk, P. Schipper et al. // Exp. Hematol. 1989. - №3. - P. 292-295.

182. IFN-gamma promotes- IL-6 and IgM secretion in response to CpG motifs in bacterial DNA and oligodeoxynucleotides / A K. Yi, J.H. Chace, J.S. Cowdery et al. //J. Immunol. -1996. - Vol.156. - P. 558-564.

183. IL-10-producing and naturally occurring CD4+ Tregs: limiting collateral damage / A. O'Garra, P.L. Vieira, P. Vieira et al. // J. Clin. Invest. 2004. -№10.-P. 1372-1378.

184. Immunomodulating activity of seaweed extract on human lymphocytes in vitro / B.E. Shan, Y. Yoshida, E. Kuroda et al. // Int. J. Immunopharmacol. 1999. №1. -P. 59-70.

185. Immunostimulatory DNA: sequence-dependent production of potentially harmful or useful cytokines / G.B. Lipford, T. Sparwasser, M. Bauer et al. // Eur. J. Immunol. 1997. - Vol.12. - P. 3420-3426.

186. Immunostimulatory DNA sequences function as T helper-1-promoting adjuvants / M. Roman, E. Martin-Orozco, J.S. Goodman et al. // Nature Med. 1997. -Vol. 3,-№8.-P. 849-854.

187. Ismail, N. More antigen-dependent CD4(+) T cell / CD4(+) T cell interactions are required for the primary generation of Th2 than of Thl cells / N. Ismail, P.A. Bretscher // Eur. J. Immunol. 2001. - №6. - P. 1765-1771.

188. Isolation and characterization of adociavirin, a novel HIV-inhibitory protein from the sponge Adocia sp. / B.R. O'Keefe, T. Erim, J.A. Beutler et al. // FEBS Lett. 1998. - Vol. 43. - P. 85-90.

189. Isolation of 1-methylherbipoline salts of halisulfate-1 and of suvanine as serine protease inhibitors from a marine sponge, coscinoderma mathewsi / J. Kimura, E. Ishizuka, Y. Nakao et al. // J. Nat. Prod. 1998. - Vol. 61- P. 248-250.

190. Ivanovic, Z. Interleukin-3 and ex vivo maintenance of hematopoietic stem cells: facts and controversies / Z. Ivanovic // Eur. Cytokine Netw. 2004. - №1. - P. 6-13.

191. Jasplakinolide: interaction with radiation and hyperthermia in human prostata carcinoma and Lewis lung carcinoma / H.Takeuchi, G. Ara, E.A. Sausville et al. // Cancer Chemother. Pharmacol. 1998. - Vol. 42 - P. 491-496.

192. Jing, Lei. Marine Natural Product Database / Lei Jing, A. Jiaju Zhou // J. Chem. Inf. Comput. Sci. 2002. - Vol. 42. - №3. - P. 742 -748.

193. Karlin, S. Heterogeneity of genomes: measures and values / S. Karlin, I. Ladunga, B.E. Blaisdell // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - Vol. 91. - P. 12837-12841.

194. Karpfel, Z. Effect of pyrimidine deoxyrifonucleotides on the regeneration of bone-marrow in irradiated mice / Z. Karpfel, J. Sjska, V. Drasil // Nature (Lond.).- 1959.-Vol. 183.-P. 1600-1601.

195. Kasakura, S. A role for T-helper type 1 and type 2 cytokines in the pathogenesis of various human diseases / S. Kasakura // Rinsho Byori. 1998. - №9. - P. 915-921.

196. Kaul, P.N. Compounds from the sea with actions on the cardiovascular and central nervous systems / P.N. Kaul // Fed. Proc. 1981. - Vol. 40, №1. - P. 10-14.

197. Konig, G.M. Antiplasmodial and cytotoxic metabolites from the Maltese sponge Agelas oroides / G.M. Konig, A.D. Wright, A. Linden // Planta Med. 1998 -Vol. 64 - P. 443-447.

198. Krieg, A.M. CpG DNA: a pathogenic factor in systemic lupus,erythematosus? / A.M. Krieg //J. Clin. Immunol. 1995. - Vol. 6. - P. 284-292.

199. Lagrannge, P.H. Influence of dose and rout of antigen infection of T-cells / P.H. Lagrannge, J.B. Mackaness, Т.Е. Miller // Exp. Med. 1 974. - Vol. 1 39. -P. 528-542.

200. MacGhee, J.R. The secretory immune system / J.R. MacGhee, J. Mesteclcy // Ann. N. Y. Asad. Sci. 1983. - Vol. 409. - P. 265-276.

201. Macrophage activation by immunostimulatory DNA / K.J. Stacey, D.P. Sester, M.J. Sweet et al. // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 2000. - Vol. 247. - P. 4158.

202. Macrophages sense pathogens via DNA motifs: induction of tumor necrosis, factor-alpha-mediated shock / T. Sparwasser, T. Miethke, G. Lipford et al. // Eur. J. Immunol. 1997. - №7 - P. 1671-1679.

203. Mayer, A.M. Marine Pharmacology in 1998: Antitumor and Cytotoxic Compounds / A.M. Mayer // The Pharmacologist. 1999. - Vol.41, №4. - P. 159-164.

204. Mayer, A.M. Marine pharmacology in 1999: antitumor and cytotoxic compounds / A.M. Mayer, V.K. Lehmann // Anticancer Res. 2001. - Vol. 21, №4.-P. 2489-2500.

205. Mayer, A.M. Marine pharmacology in 2000: antitumor and cytotoxic compounds / A.M.Mayer, K.R. Gustafson // Int. J. Cancer. 2003. - Vol.105, №3. — P. 291-299.

206. Mayer, A.M. Marine, pharmacology in 2001-2: antitumour and cytotoxic compounds / A.M. Mayer, K.R. Gustafson // Eur. J. Cancer. 2004. - Vol. 40, №18.-P. 2676-2704.

207. Messina, J.P. Stimulation of in vitro murine lymphocyte proliferation by bacterial DNA / J.P. Messina, G.S. Gjlkeson, D.S. Pisetsky // J. Immunol. -1991.-Vol. 147.-P. 1759-1764.

208. Mestecky, J. Immunoglobulin A (IgA): molecular and cellular, interactions involved in IgA biosynthesis and immune response / J. Mestecky, J.R. McGhee // Adv. Immunol. 1987. - V. 40. - P. 153-245.

209. Migliaccio, A.R. Effect of recombinant hematopoietic growth factors on proliferation of human marrow progenitor cells in serum-deprived liquid culture / A.R. Migliaccio, G. Migliaccio, J.W. Adamson // Blood. 1988. - №4. - P. 1387-1392.

210. Mitogenicity of DNA from different organisms for murine В cells / S. Sun, C. Beard,R. Jaenisch et al.//J. Immunol. 1997. - Vol. 159. -P. 3119-3125.

211. Mitra, S.K. Immunomodulatory effect of IM-133 / S.K. Mitra, M. Gupta, D.N. Sarma // Phytother. Res. 1999. - №4. - P. 341-343.

212. Naamidine A is an antagonist of the ,epidermal growth factor receptor and an in vivo active antitumor agent / B.R. Gopp, C.R. Fairchild, L. Cornell et al. // J: Med. Chem.- 1998- Vol.41 P. 3909-3.911.

213. Neta, R. Relationship of TNF to interleukins / R. Neta, T.J. Sayers, J.J. Oppenheim // Immunol: Ser.- 1992. Vol. 56. P. 499-566.

214. Newman, D:J. Marine natural products and: related compounds in clinical and advancedvpreclinicalitrials / D.J. Newman, G.M. Cragg // J: Nat. Prod: 2004. -Vol. 67, №8.-P. 1216-1238.

215. Nucleosomes and DNA bind to specific cell-surface molecules on murine cells and induce cytokine production / S .H. Hefeneider, K.A. Cornell, L.E. Brown et al. // Clin Immunol. Immunopathol. 1992. - Vol. 63, №3. - P. 245-51.

216. O'Brien, S.M. Cytokines: abnormalities;in major depression and,implications for pharmacological treatment / S.M. O'Brien, L.V. Scott, T.G. Dinan // Hum. Psychopharmacol. 2004. - №6. - P. 397-403.

217. Pisetsky, D.S. The influence of base sequence on the immunostimulatory properties of DNA / D.S. Pisetsky // Immunol. Res. 1999. Vol. 19, №1.- P.35-46.

218. Popi, A.F. Interleukin-10 secreted by B-l cells modulates the phagocytic activity of murine macrophages in vitro / A.F. Popi, J.D. Lopes, M. Mariano // Immunology. 2004; - №3. - P: 348-354.

219. Preferential induction of a Thl immune response and inhibition of specific IgE antibody formation by plasmid DNA immunization / E. Raz, H. Tighe, Y. Sato et al. // Proc. Natl. Asad. Sci. USA. 1996. - Vol. 93. - №10. - P. 5141-5145.

220. Production of proinflammatory cytokines and cytokines involved in the TH1/TH2 balance is modulated by pentoxifylline / J. Bienvenu, C. Doche, M.-C. Gutowski et al. // J Cardiovasc Pharmacol. 1995. - Vol. 25, №2. - 80-84.

221. Proksch, P. Drugs from the sea opportunities and obstacles / P. Proksch, R. Edrada-Ebel, R. Ebel // Marine drags. - 2003. - №1. - P. 5-17.

222. Radiobiology of a differentiating cell system in vitro / J. Borsa, D. Ewing, D.L. Dudle et al. // Intern. J. Radiat. Biol. 1982. - Vol. 41. - P. 369-388.

223. Raychaudhuri, S.P. Immunomodulatory effects of peptide T on Thl/Th2 cytokines / S.P. Raychaudhuri, E.M. Farber, S.K. Raychaudhuri // Int. J. Immunopharmacol. 1999. №9. - P. 609-615.

224. Savary, C.A. Inhibition of human bone marrow and myeloid progenitors by IL-2 activated lymphocytes / C.A. Savary, E. Lotzova // Exp. Hematol. - 1990. -Vol. 18, №10.-P. 1085-1089.

225. Savkovic, N. Recovery of reproductive ability by homologous testes DNA of rats irradiated during the infantile period / N. Savkovic // Nature (Lond.). -1964. Vol. 203. - P. 1297-1298.

226. Savkovic, N. Recovery effect of heterologous deoxyribonucleic acid from various organs on irradiated mice / N. Savkovic, J. Kasaki, S. Hajduncknovic // Nature (Lond.). 1966. - Vol. 211. - P. 1179-1180.

227. Seewaldt, S. Interleukin-10 is crucial for maintenance but not for developmental induction of peripheral T cell tolerance / S. Seewaldt, J. Alferink, I. Forster // Eur. J. Immunol.- 2002. №12. - P. 3607-3616.

228. Shimada, S. Antitumor activity of the DNA fraction from Mycobacterium bovis BCG. II. Effects on various syngeneic mouse tumors / S. Shimada, O. Yano, H. Inoue // J. Nat. Cancer Inst. 1985. - Vol. 74. - №3. - P. 681-688.

229. Sinclair, W.K. Cyclic x-ray responses in mammalian cells in vitro / W.K. Sinclair // Radiat. Res. 1968. - Vol. 33. - №3. - P. 620-643.

230. Sparwasser, T. Immunostimulatory CpG-oligodeoxynucleotides cause extramedullary murine hemopoiesis / T. Sparwasser, L. Hultner, E.S. Koch //J. Immunol. 1999. -Vol. 162. - P. 2368-2374.

231. Stimulating spectrum of human recombinant multi-CSF (IL-3) on human marrow precursors: importance of accessory cells / F.J. Bot, L. Dorssers, G.Wagemaker et al.//Blood. 1988. - №6. - P. 1609-1614.

232. Stollar, B.D. Antibodies to DNA / B.D. Stollar // CRC Crit. Rev. Biochem. -1986. -№1.-p. 1-36.

233. Till, J. Early repair processes in marrow cells irradiated and proliferating in vivo / J. Till, E.A. McCulloch // Radiat. Res. 1961. - Vol. 14. - P. 213-222.

234. Till, J. A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells / J. Till, E.A. McCulloch // Radiat. Res. 1963. - Vol. 18. - P. 96105.

235. Till, J. Repair processes in irradiated mouse hematopoietic tissue / J. Till, E.A. McCulloch // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1964. - Vol. 114. - P. 115-125.

236. The role of CpG dinucleotides in DNA vaccines / A.M.Krieg, A.-K. Yi, J. Schorr et al. // Trends Microbiol. 1998. - Vol. 6. - P. 23-27.

237. The role of surface in binding in the activation of human В cells by phosphorothioate oligodeoxynucleotides / H. Liang, C.F. Reich, D.S. Pisetsky et al. // Scand. J. Immunol. 2001. - Vol. 54, №6. - P. 551-563.

238. Tunkijjanukij, S. Sialic acidbinding lectin with antibacterial activity from the horse mussel: further characterization and immunolocalization / S. Tunkijjanukij, J.A. Olafsen // Dev. Сотр. Immunol. 1998. - Vol. 22. - P. 139150.

239. Walter, M.R. Structural analysis of IL-10 and Type I interferon family members and their complexes with receptor / M.R. Walter // Adv. Protein. Chem. 2004. -Vol. 68.-P. 171-223.

240. Whitfield, J.F. The effects of calcium, agmatine and posphat on mitosis in normal and irradiated population of rat thymocytes / J.F. Whitfield, T. Youdale // Exp. Cell Res. 1966. - Vol. 43. - P. 602-610.

241. Wilson, J.G. Adhesive interactions in hemopoiesis / J.G. Wilson // Acta Haematol. 1997. - Vol. 97, №1-2. - P. 6-12.

242. Yan, X. Concept Design of Computer-Aided Study on Traditional Chinese Drug / X. Yan, J. Zhou, H. Zhi // J. Chem. Inf. Comput. Sci. 1999. - Vol. 39. - P. 86-89.

243. Yerne, N.K. Plaque formation in agar by single antibody producing / N.K. Yerne, F.N. Nordin // Science. 1963. Vol. 140. - P. 405-407.

244. Yi, A-K. Rapid induction of mitogen activated protein kinases by immune stimulatory CpG DNA / A.-K. Yi, A.M. Krieg //J. Immunol. 1998. -Vol. 161. P. 4493-4497.

245. Zdanov, A. Structural features of the interleukin-10 family of cytokines / A. Zdanov // Curr. Pharm. Des. 2004. - Vol. 31. - P. 3873-3884.