Иммунологический анализ защитных реакций моллюсков тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Баскаков, Алексей Владимирович

• Баскаков, Алексей Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Баскаков, Алексей Владимирович

Список сокращений.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Гуморальные защитные реакции моллюсков.

1.2. Клеточные защитные реакции моллюсков.

2. Материалы и методы.

2.1. Экспериментальные животные.

2.2. Содержание животных.

2.3. Иммунизация животных.

2.4. Получение гемолимфы.

2.5. Химические реактивы, использованные в работе.

2.6. Оценка гуморальных защитных реакций.

2.6.1. Оценка титров гемагглютининов.

2.6.2. Оценка титров гемолизинов.

2.6.3. Оценка лигандных специфичностей лектинов.

2.6.4. Оценка возрастной динамики лектинов гемолимфы.

2.6.5. Оценка динамики лектинов в ответ на вторичную иммунизацию.

2.6.6. Оценка изменений активности агглютининов в ответ на протеолитическую обработку гемолимфы.

2.6.7. Оценка изменений активности агглютининов в ответ на обработку гемолимфы солянокислым цистеином.

2.7. Оценка клеточных защитных реакций.

2.7.1. Выделение и оценка морфологии гемоцитов.

2.7.2. Оценка адгезивности гемоцитов.

2.7.3. Оценка фагоцитарной активности гемоцитов.

2.7.4. Оценка продукции гемоцитами активных форм кислорода.

2.7.5. Оценка внутриклеточного содержания катионных белков.

2.7.6. Оценка пероксидазной активности в клеточной и плазменной фракциях гемолимфы.

2.8. Статистические методы.

3. Результаты исследований.

3.1. Гуморальные защитные реакции моллюсков.

3.1.1. Динамика уровней гемагглютининов в гемолимфе гастропод в ответ на иммунизацию.

3.1.2. Динамика уровней гемолизинов в гемолимфе гастропод в ответ на иммунизацию.

3.1.3. Динамика уровней гемагглютининов в гемолимфе и слизистом секрете Anodonta cygnea в ответ на иммунизацию.

3.1.4. Динамика уровней гемолизинов в гемолимфе и слизистом секрете Anodonta cygnea в ответ на иммунизацию.

3.1.5. Динамика уровней гемагглютининов и гемолизинов в плазме Planorbius corneus и Lymnaea stagnalis в ответ на иммунизацию.

3.1.6. Лигандная специфичность лектинов гастропод.

3.1.7. Лигандная специфичность лектинов Anodonta cygnea

3.1.8. Возрастная динамика лектинов гемолимфы Achatina fulica в ответ на иммунизацию.

3.1.9. Специфичность лектинов гемолимфы Achatina fulica в ходе гуморальной реакции.

3.1.10. Возрастная динамика лектинов гемолимфы

Anodonta cygnea в ответ на иммунизацию.

3.1.11. Специфичность лектинов гемолимфы Anodonta cygnea в ходе гуморальной реакции.

3.1.12. Динамика уровней лектинов в гемолимфе Achatina fulica в ответ на вторичную иммунизацию.

3.1.13. Изменение активности агглютининов в ответ на протеолитическую обработку гемолимфы.

3.1.14. Изменение активности агглютининов в ответ на обработку гемолимфы солянокислым цистеином.

3.2. Клеточные защитные реакции моллюсков.

3.2.1. Морфологическая характеристика гемоцитов.

3.2.2. Адгезионная активность гемоцитов.

3.2.3. Фагоцитарная активность гемоцитов.

3.2.4. Продукция гемоцитами активных форм кислорода.

3.2.5. Внутриклеточное содержание катионных белков.

3.2.6. Пероксидазная активность гемолимфы.

4. Обсуждение результатов.

4.1. Гуморальные защитные реакции моллюсков: сравнительно иммунологический анализ.

4.2. Клеточные защитные реакции моллюсков: сравнительно-иммунологический анализ.

5. Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунологический анализ защитных реакций моллюсков»

Актуальность проблемы

Исторически сравнительная иммунология была одним из первых разделов иммунологии, становление и развитие которой было связано с трудами И.И.Мечникова. В настоящее время не осталось никаких сомнений в том, что только на основе эволюционного подхода в иммунологических исследованиях возможно решение проблем становления системы иммунного надзора, его первичной функции, основных путей развития, глубинных (и не до конца раскрытых) механизмов иммунорегуляции, кооперации разных путей иммунного ответа, его изменении при патологических состояниях.

Распознавание "свое"-"чужое" - центральное звено в защитных реакциях, имеющее принципиальное значение не только для выживания каждого организма, но и для функционирования всех его клеточных систем, любых лиганд-рецепторных взаимодействий, межклеточной и внутриклеточной сигнализации. С этой точки зрения защитные системы беспозвоночных животных являются весьма удобной моделью, ибо сочетают относительно небольшое число клеточных типов, имеющих ограниченный набор распознающих структур, с высокой эффективностью и устойчивостью всей системы иммунного надзора в целом. Защитные реакции беспозвоночных долгое время рассматривались как примитивные взаимодействия, базирующиеся главным образом на неспецифической фагоцитарной активности клеток их циркуляторных систем [Cooper, 1976]. На сегодняшний день установлено, что эти взаимодействия сопровождаются сложными и не до конца изученными реакциями на уровне отдельных клеточных популяций и связаны с реорганизацией морфологии и метаболизма каждой клетки в ходе этих реакций.

Одним из активно исследуемых с точки зрения организации защитных систем таксоном беспозвоночных является тип Моллюски (MOLLUSCA) -большая древняя группа первичноротых животных, защитная система которых сформировалась на основе многочисленных анатомических и химических барьеров, предотвращающих повреждение основных тканей, потерю внутриполостной жидкости и проникновение патогенных микроорганизмов [Cooper, 1976; Glinski, 1997].

На сегодняшний день комплексный сравнительный подход к анализу защитных реакций моллюсков пока не нашел должного отражения в практике сравнительно-иммунологических и цитологических исследований.

Гуморальные защитные реакции моллюсков осуществляются с помощью биологически активных молекул гемолимфы, видное место среди которых занимают лектины - белки или гликопротеины неиммунной природы, способные к агглютинации и преципитации гликоконъюгатов, локализованных на клеточных поверхностях. Современная литература содержит многочисленные сведения о биохимической структуре лектинов гемолимфы моллюсков, однако анализ динамики и спектра лигандных специфичностей этих факторов в ходе защитной реакции и на различных этапах онтогенеза на сегодняшний день изучены явно недостаточно; наряду с исследованием клеточных механизмов и их взаимосвязи с гуморальными реакциями представляются перспективными направлениями работы.

Комплексный сравнительно-иммунологический и цитологический подходы к изучению защитных реакций моллюсков являются кратчайшим путем к созданию единой теории, объединяющей неспецифические и специфические реакции этих беспозвоночных, и позволят внести существенный вклад в разработку проблемы становления системы иммунного надзора в эволюции. Цель исследования

Целью настоящего исследования был анализ гуморальных и клеточных защитных реакций ряда представителей брюхоногих и двустворчатых моллюсков.

Задачи исследования

1) оценить динамику уровней гемагглютининов и гемолизинов гемолимфы моллюсков в ходе ответной реакции на введение стандартного иммунологического антигена - эритроцитов барана;

2) определить спектр специфичностей и некоторые биохимические свойства лектинов гемолимфы в отношении ряда лигандов углеводной природы;

3) оценить характер возрастных изменений и специфичности лектинов гемолимфы Achatina fulica и Anodonta cygnea в ответ на введение антигена; изучить динамику лектинов гемолимфы Achatina fulica в ответ на вторичное введение антигена;

4) оценить морфологический состав клеток гемолимфы моллюсков и некоторые аспекты их функциональной активности (адгезию, фагоцитоз, продукцию активных форм кислорода, содержание катионных белков и пероксидазы).

Научная новизна и теоретическая значимость работы

Основным научным достижением работы является сравнительно-иммунологический анализ клеточных и гуморальных защитных реакций ряда брюхоногих и двустворчатых моллюсков с помощью классических иммунологических методов.

Впервые показана отрицательная динамика уровней гемагглютининов (ГА) в гемолимфе брюхоногих моллюсков в ответ на введение стандартного иммунологического антигена - эритроцитов барана. Впервые изучена динамика гемолизинов (ГЛ) в гемолимфе гастропод в ответ на стимуляцию ЭБ.

Впервые проведенный анализ динамики лектинов как гемолимфы, так и слизистого секрета двустворчатого моллюска A.cygnea выявил достоверный прирост концентраций агглютининов и лизинов в ответ на введение ЭБ.

Впервые установлен спектр углеводных специфичностей ГА и ГЛ гемолимфы исследованных видов брюхоногих и двустворчатых моллюсков. Показано, что в качестве основных лигандов для лектинов выступают N-ацетилированные сахара, моносахариды и компоненты бактериальных клеточных стенок (ЛПС и фосфорилхолин).

Впервые проведен анализ возрастных изменений уровней лектинов в гемолимфе Achatina fulica и Anodonta cygnea разных возрастов. Показано, что у брюхоногого моллюска Achatina fulica с возрастом происходит повышение концентрации конституциональных гемагглютининов и снижение титров индуцибельных гемолизинов. Для двустворчатого моллюска Anodonta cygnea впервые обнаружено двухкратное снижение концентраций как гемагглютининов, так и гемолизинов, которые являются индуцибельными факторами гемолимфы.

Впервые показано, что агглютинирующая активность лектинов гемолимфы моллюсков достоверно возрастает под влиянием восстанавливающих агентов (на примере солянокислого цистеина) и подавляется протеолитическими ферментами (на примере трипсина). Этот результат может служить теоретической основой гипотезы о мультимерном строении молекул гемагглютининов моллюсков.

Впервые для гемоцитов моллюсков всех исследуемых видов показана способность к адгезии; продукции супероксиданиона и выбросу реактантов во внеклеточную среду; накоплению пептидов катионной природы и вовлечению этих молекул в клеточные защитные реакции; способность к секреции пероксидазы в ответ на антигенную стимуляцию моллюсков.

Работа носит экспериментально-теоретический характер и относится к области сравнительной иммунологии.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Гуморальные защитные реакции брюхоногих и двустворчатых моллюсков осуществляются с помощью углевод-связывающих белков лектинов, обеспечивающих агглютинацию и лизис антигенов; уровень лектинов изменяется с возрастом и в ответ на введение антигена. В качестве основных лигандов для лектинов гемолимфы моллюсков выступают N-ацетилированные сахара, моносахариды и компоненты бактериальных клеточных стенок.

2. Клеточные защитные реакции моллюсков осуществляются с помощью циркулирующих клеток гемолимфы - гемоцитов, способных к адгезии, фагоцитозу, продукции супероксиданиона, внутриклеточному накоплению катионных белков, синтезу и секреции пероксидазы в ответ на антигенную стимуляцию. Апробация работы

Материалы диссертации представлены на 4-й и 5-й научных конференциях с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (г.Санкт-Петербург, 2000-2001 гг.); Всероссийском совещании "Клеточная биология на пороге XXI века" (г. Санкт-Петербург, 2000); научной конференции "Актуальные проблемы фундаментальных исследований в области биологии и медицины", посвященной 110-летию НИИЭМ РАМН (г. Санкт-Петербург, 2000); 5-й Санкт-Петербургской ассамблее молодых ученых и специалистов (г. Санкт-Петербург, 2000); XII Международном Совещании по эволюционной физиологии, посвященном памяти акад. Л.А.Орбели (г. Санкт-Петербург, 2001г.), научных семинарах кафедры цитологии и гистологии СПбГУ (1998-2000г.); научном семинаре Беломорской биологической станции им. акад. О.А.Скарлато Зоологического института РАН (2000г.).

Работа выполнена при поддержке Российского Фонда Фундаментальных Исследований (гранты № 98-04-49877 и № 01-04-49207), гранта "Фундаментальные исследования высшей школы в области естественных и гуманитарных наук. Университеты России" (проект № 992669; 2000, 2001 гг.) и стала победителем конкурсов персональных

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Баскаков, Алексей Владимирович

ВЫВОДЫ

1. У брюхоногих моллюсков Planorbarius corneus и Achatina fulica в ответ на введение эритроцитов барана происходит снижение титра агглюнинирующей и повышение титра лизирующей активностей гемолимфы. У другого брюхоногого моллюска Lymnaea stagnalis в ответ на введение ЭБ отмечено снижение титра обеих активностей. У двустворчатого моллюска Anodonta cygnea в ответ на введение эритроцитов барана отмечено повышение титров обеих активностей как в гемолимфе, так и в слизистом секрете.

2. Гемагглютинины и гемолизины брюхоногих и двустворчатых моллюсков специфичны главным образом к N-ацетилированным сахарам, моносахаридам и компонентам бактериальных клеточных стенок; при этом в ходе гуморальной реакции спектр специфичностей агглютининов и лизинов Anodonta cygnea изменяется, а у Achatina fulica остается неизменным. Гемагглютинирующие и гемолитические свойства могут быть присущи одним и тем же или различным молекулам с мультимерной структурой.

3. У Anodonta cygnea и Achatina fulica наблюдаются возрастные изменения уровней агглютинирующих и литических факторов гемолимфы: у годовалых, шести- и двенадцатилетних Anodonta cygnea происходит снижение титров как агглютининов, так и лизинов в гемолимфе, в то время как при переходе от годовалых к трехлетним Achatina fulica обнаруживается снижение уровней лизинов и повышение уровней агглютининов, что не сопровождается наличием механизмов иммунологической памяти, усиления или ускорения вторичного ответа.

4. Гиалиновые агранулярные гемоциты, обладающие макрофагоподобной структурой, найдены у всех изученных видов моллюсков. У Planorbarius corneus и Anodonta cygnea имеются также лимфоцитоподобные клетки гемолимфы. Гранулярные гемоциты ни у одного из изученных видов не обнаружены.

156

5. Гемоциты моллюсков всех исследованных видов обладают способностью к адгезии и фагоцитозу частиц зимозана in vitro. Для макрофагоподобных гемоцитов показана способность к продукции супероксиданиона (по данным НСТ-теста); в макрофагоподобных гемоцитах обнаружены также катионные белки (по данным ЛКТ-теста). В клетках и бесклеточной гемолимфе всех изученных видов выявлена пероксидазная активность, уровень которой изменяется в ответ на введение зимозана.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Баскаков, Алексей Владимирович, 2002 год

1. Барнс Р., Кейлоу П., Олив П., Голдинг Д. Беспозвоночные: новый обобщенный подход. М.: Мир, 1992. - 583 с.

2. Галактионов В.Г. Иммунитет в эволюции многоклеточных животных // Успехи соврем, биологии. 1982. Т.93. № 1. С. 29-43.

3. Галактионов В.Г. Очерки эволюционной иммунологии. М.: Наука, 1995. -256 с.

4. Гинецинская Т.А., Добровольский А.А. Частная паразитология. М.: Высшая школа, 1978. - 303 с.

5. Горышина Е.Н., Чага О.Ю. Сравнительная гистология тканей внутренней среды с основами иммунологии. Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1990. - 320 с.

6. Догель В.А. Зоология беспозвоночных. М.:Высшая школа, 1975.-560 с.

7. Дуглас С.Д., Куи П.Г. Исследование фагоцитоза в клинической практике. -М.: Медицина, 1983. 110 с.

8. Заварзин А.А. Очерки эволюционной гистологии крови и соединительной ткани // Избранные труды. Т.4. М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1953. 720 с.

9. Земсков В.М. Фагоцитоз: физиологические и молекулярные аспекты // Успехи совр. биол. 1972. - Т.98, № 2. - С. 1-20.

10. Иванов А.В., Полянский Ю.И., Стрелков А.А. Большой практикум по зоологии беспозвоночных (Типы: Сипункулиды, Моллюски, Щупальцевые, Иглокожие). М.: Высшая школа, 1985. Т.З. - 390 с.

11. Иванов Ю.И., Погорелюк О.Н. Статистическая обработка результатов медико-биологических исследований на микрокалькуляторах по программам. М.: Медицина, 1990. - 224 с.

12. Иржак Л.И. Эволюция системы крови // Эвол. физиол. Л., 1983.-140 с.

13. Купер Э. Сравнительная иммунология. М.: Мир, 1980. - 422 с.

14. Лакин Н.А. Биометрия. М.: Высшая школа, 1985. - 290 с.

15. Ланге М.А., Потапина Н.В., Ильинская О.П., Хрущев Н.Г. Исследование тканей внутренней среды моллюсков в связи с проблемой эволюциигистогенезов // Эволюционные идеи в биологии. Труды J10E. 1984. Т.85, вып. 1.

16. Лахтин В.М. Лектины в исследовании белков и углеводов // Итоги науки и техники. Сер. Биотехнология. Т.2. М.: ВИНИТИ, 1987. 288 с.

17. Логинов А.А. Гомеостаз: философские и общебиологические аспекты.-Минск: Вышейш. шк., 1979. 176 с.

18. Лоенко Ю.Н., Глазкова В.Е., Артюков А.А., Оводова Р.Г. Лектины морских беспозвоночных // Успехи соврем, биологии,-1992.-Т.112, № 5-6.- С. 785-794.

19. Лойда 3., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М.: Мир, 1982. - 272 с.

20. Луппа X. Основы гистохимии. М.: Мир, 1980. - 343 с.

21. Луцик М.Д., Панасюк Е.Н., Луцик А.Д. Лектины. Львов: Вища шк., 1981.- 156 с.

22. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. -Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1989. 344 с.

23. Назаров П.Г., Софронов Б.Н. С-реактивный белок в системе иммунорегуляции // Иммунология. 1986. - № 4. - С. 12-18.

24. Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. М.: Медицина, 1978.- 127 с.

25. Пигаревский В.Е. К усовершенствованию метода окраски катионных белков лизосом полиморфноядерных лейкоцитов лабораторных животных и человека // Арх. пат. 1975. - № 4. - С. 77-79.

26. Пигаревский В.Е. Лизосомально-катионный тест // Клиническая морфология нейтрофильных гранулоцитов: Сб.науч.тр.-Л., 1988.-С.87-101.

27. Полевщиков А.В. Лектины в защитных реакциях беспозвоночных // Журнал общей биологии. 1996. - Т.57, № 6. - С.718-739.

28. Руководство по зоологии. Беспозвоночные. / под ред. Догеля В.А и Зенкевича Л.А. М.-Л., 1940. - С. 280-506.

29. Фримель Г. Иммунологические методы. М.: Медицина, 1987. - 472 с.

30. Чернохвостова Е.В. Действие сульфгидрильных реагентов на Ig-антитела // Успехи совр. биол. 1972. - Т.73, № 3. - С. 444-448.

31. Adema С.М., van Deutekom-Mulder Е.С., van der Knaap W.P., Sminia T. Schistosomicidal activities of Lymnaea stagnalis haemocytes: the role of oxigen radicals // Parasitology. 1994. - Vol. 109, № 4. - P. 479-485.

32. Adema C.M., Mohandas A., van der Knaap W.P., Sminia T. Separation of Lymnaea stagnalis hemocytes by density gradient centrifugation // Dev. Сотр. Immunol. 1994. - Vol. 18, № 1. - P. 25-31.

33. Agrawal A., Mitra S., Ghosh N., Bhattacharya S. C-reactive protein (CRP) in haemolymph of a mollusc, Achatina fulica Bowdich // Indian. J. Exp. Biol. 1990. - Vol. 28, № 8. - P. 788-789.

34. Armstrong P.W., Quigley J.P. Humoral immunity: 0C2- macroglobulin activity in the plasma of molluscs // Veliger. 1992. - Vol. 35, № 3. - P. 161-164.

35. Arreguin-Espinosa R., Arreguin-Lozano B. Biochemical properties of hemagglutinins in the mollusk Pomacea flagellata II Biochem. Mol. Biol. Int. -1997. Vol. 43, № 6. - P. 1241-1251.

36. Asokan R., Arumugam M., Mullainadhan P. Activation of prophenoloxidase in the plasma and haemocytes of the marine mussel Perna viridis Linnaeus II Dev. Сотр. Immunol. 1997. - Vol. 21, № 1. - P. 1-12.

37. Axelsson В., Kimura A., Hammarstrom S., Wigzell H., Nilsson K., Mellstadt H. Helix pomatia a hemagglutinin: selectivity of binding to lymphocyte surface glycoproteins on T cells and certain В cells // Eur. J. Immunol. 1978. - Vol. 8, № 11.-P. 757-764.

38. Barcia R., Cao A., Arbeteta J., Ramos-Martinez J.I. The IL-2 receptor in hemocytes of the sea mussel Mytilus galloprovincialis Lmk 11IUBMB Life. 1999. -Vol. 48, №4.-P. 419-423.

39. Basu S., Sarkar M., Mandal C. A single step purification of a sialic acid binding lectin (Achatinin H) from Achatina fulica snail // Mol. Cell. Biochem. -1986. Vol. 71, № 2. - P. 149-157.

40. Bayne C.J., Loker E.S., Yui M.A. Interactions between the plasma proteins of Biomphalaria glabrata (Gastropoda) and the sporocyst tegument of Schistosoma mansoni (Trematoda) // Parasitology. 1986. - Vol. 92, № 3. - P. 653-664.

41. Bayne C.J. Molluscan immunobiology: isolation of an Aeromonas formicans which escapes the internal defence system of Helix pomatia II Dev. Сотр. Immunol. 1982. - Vol. 6, № 4. - P. 675-682.

42. Beaven A.E., Paynter K.T. Acidification of the phagosome in Crassostrea virginica hemocytes following engulfment of zymosan // Biol. Bull. 1999. - Vol. 196, № 1.-P. 26-33.

43. Biswas C., Mandal C. The role of amoebocytes in endotoxin-mediated coagulation in the innate immunity of Achatina fulica snails // Scand. J. Immunol. -1999.-Vol. 49, №2.-P. 131-138.

44. Bramble L., Anderson R.S. Modulation of Crassostrea virginica hemocyte reactive oxygen species production by Listonella anguillarum // Dev. Сотр. Immunol. 1997. - Vol. 21, № 4. - P. 337-348.

45. Brossmer R., Wagner M., Fischer E. Specificity of the sialic acid-binding lectin from the snail Cepaea hortensis II J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267, № 13. - P. 8752-8756.

46. Cajaraville M.P., Pal S.G. Morphofunctional study of the haemocytes of the bivalve mollusc Mytilus galloprovincialis with emphasis on the endolysosomal compartment // Cell. Struct. Funct. 1995. - Vol. 20, № 5. - P. 355-367.

47. Clatworthy A.L., Grose E. Immune-mediated alterations in nociceptive sensory function in Aplysia californica II J. Exp. Biol. 1999. - Vol. 202, № 5. - P. 623630.

48. Clatworthy A.L. Neural-immune interactions an evolutionary perspective // Neuroimmunomodulation. - 1998. - Vol. 5, № 3-4. - P. 136-142.

49. Conte A., Ottaviani E. Nitric oxide synthase activity in molluscan hemocytes // FEBS. Lett. 1995. - Vol. 365, № 2-3. - P. 120-124.

50. Cooper E.L. Immunity and neoplasia in Mollusks // Isr. J. Med. Sci. 1976. -Vol. 12, № 4-5. - P. 479-494.

51. Cooper E.L., Suzuki M.M. Cytotoxic reactions in invertebrates the earth-worm model // SOS. Publications. Fair. Haven, New Yersly. 1996. - P. 23-42.

52. Cooper J.E. Bleeding of pulmonate snails // Lab. Animals. 1994. - Vol. 28, № 3. - P. 277-278.

53. Couch L., Hertel L.A., Loker E.S. Humoral response of the snail Biomphalaria glabrata to trematode infection: observations on a circulating hemagglutinin // J. Exp. Zool. 1990. - Vol. 255, № 3. - P. 340-349.

54. Crichton R., Lafferty K.I. The discrimination capacity of fagocytic cells in the chiton (Liolophura gaimardi) II Immunologycal Phylogeny. N.Y.: L.: Plenum Press, 1975. P. 89-98.

55. Dam Т.К., Sarkar M., Ghosal J., Choudhury A. A novel galactosil-binding lectin from the plasma of the blood clam, Anadara granosa (L) and a study of its combining site // Moll. Cell. Biochem.-1992.-Vol.l 17, № 1. P. 1-9.

56. Davids B.J., Yoshino T.P. Integrin-like RGD-dependent binding mechanism involved in the spreading response of circulating molluscan phagocytes // Dev. Сотр. Immunol. 1998. - Vol. 22, № 1. - P. 39-53.

57. Dikkeboom R., Tijnagel J.M., van der Knaap W.P. Monoclonal antibody recognized hemocyte subpopulations in juvenile and adult Lymnaea stagnalis : functional characteristics and lectin binding // Dev. Сотр. Immunol. 1988. - Vol. 12, № l.-P. 17-32.

58. Dikkeboom R., van der Knaap W.P., Meuleman E.A., Sminia Т. A comparative study on the internal defense system of juvenile and adult Lymnaea stagnalis И Immunology. 1985. - Vol. 55, № 3. - P. 547-553.

59. Dikkeboom R., van der Knaap W.P., van den Bovenkamp W., Tijnagel J.M., Bayne C.J. The production of toxic oxygen metabolites by hemocytes of different snail species // Dev. Сотр. Immunol-1988.-Vol. 12, № 3. P. 509-520.

60. Eichmann K., Uhlenbruck G., Baldo B.A. Similar combining specificities of invertebrates precipitins and mouse mieloma protein J 539 to (3 (1—6) galactans // Immunochemistry. 1976. - Vol. 13, № l.-P. 1-6.

61. Fawcett L.B., Tripp M.R. Chemotaxis of Mercenaria mercenaria hemocytes to bacteria in vitro II J. Invertebr. Pathol. 1994. - Vol. 63, № 3. - P. 275-284.

62. Futura E., Yamaguchi K., Aikawa M., Shimozawa A. Phagocytosis by hemolymph cells of the lang slug, Incilaria fruhstorferi Collinge (Gastropoda: Pulmonata) // Anat. Anz. 1987. - Vol. 163, № 2. - P. 89-99.

63. Glinski Z., Jarosz J. Molluscan immune defenses // Arch. Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 1997. - Vol. 45, № 2-3. - P. 149-155.

64. Graczyk Т.К., Cranfield M.R., Conn D.B. In vitro phagocytosis of Giardia duodenalis cysts by hemocytes of the Asian freshwater clam Corbicula flumineall Parasitol. Res. 1997. - Vol. 83, № 8. - P. 743-745.

65. Granath W.O. Jr., Yoshino T.P. Lysosomal enzyme activities in susceptible and refractory strains of Biomphalaria glabrata during the course of infection with Schistosoma mansoni II J. Parasitol. 1983. - Vol. 69, № 6. - P. 1018-1026.

66. Grimm-Jorgensen Y. Somatostatin and calcitonin modulate gastropod internal defense mechanisms // Dev. Сотр. Immunol. 1987. - Vol. 11, № 3. - P. 487-499.

67. Harris R.A., Preston T.M., Southgate V.R. Purification of an agglutinin from the haemolymph of the snail Bolinus nasutus and demonstration of related proteins in other Bulinus spp // Parasitology. 1993. - Vol. 106, № 2. - P. 193-198.

68. Ishiyama I., Uhlenbruck G. On the nature of the anti-dextran activity of the Helix pomatia " anti-A" agglutinin // Zeitschrift fur Naturforschung. 1971. - B. 26B, № 11.-S. 1198-1199.

69. Kamiya H., Muramoto K., Goto R. Naturally occuring hemolysin in the marine snail Tigali gigas И Bull. Jap. Soc. Sci. Fish. 1991. - Vol. 57, № 11. - P. 21092113.

70. Kletsas D., Sassi D., Franchini A., Ottaviani E. PDGF and TGF-beta induce cell shape changes in invertebrate immunocytes via specific cell surface receptors // Eur. J. Cell. Biol. 1998. - Vol. 75, № 4. - P. 362-366.

71. Kumazawa N.H., Morimoto N. Chemotactic activity of hemocytes derived from a brackish-water clam, Corbicula japonica, to Vibrio parahaemolyticus and Escherichia coli strains // J. Vet. Med. Sci.-1992.-Vol.54, № 5. P. 851-855.

72. Kurachi S., Song Z., Takagaki M., Yang Q., Winter H.C., Kurachi K., Goldstein I.J. Sialic-acid-binding lectin from the slug Limax flavus cloning, expression of polypeptide, and tissue localization // Eur. J. Biochem. - 1998. - Vol. 254, №2.-P. 217-222.

73. Lisgarten J.N., Chattopadhyay Т.К., Pitts J.E., Palmer R.A. Crystallisation of Helix pomatia agglutinin (HPA), a protein from the edible snail // Acta. Cristallogr. D. Biol. Cristallogr. 1999. - Vol. 55, № 11. - P. 1903-1905.

74. Malham S.K., Runham N.W., Secombes C.J. Lysozyme and antiprotease activity in the lesser octopus Eledone cirrhosa fZam.XCephalopoda) 11 Dev. Сотр. Immunol. 1998. - Vol. 22, № 1. - P. 27-37.

75. Mandal C., Basu S. An unique specificity of a sialic acid binding lectin Achatinin H, from the hemolymph of Achatina fulica snail // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1987. - Vol. 148, № 2. - P. 795-801.

76. Mandal C., Basu S., Mandal C. Physiochemical studies on achatinin H, a novel sialic acid-binding lectin // Biochem. J. 1989. - Vol. 257, № l.-P. 65-71.

77. Mandal C., Biswas M., Nagpurkar A., Mookerjea S. Isolation of a phosphoryl choline-binding protein from the hemolymph of the snail, Achatina fulica II Dev. Сотр. Immunol. 1991. - Vol. 15, № 4. - P. 227-239.

78. Mandal C., Chowdhury M. The polyclonal activation of lymphocytes and T cell mitogenicity by a unique sialic-acid-binding lectin from the hemolymph of Achatina fulica snail // Immunopharmacology.-1990.-Vol.20, № 2.-P. 63-72.

79. Marticon-Gondran M., Letocart M. Internal defenses of the snail Biomphalaria glabrata II J. Invertebr. Pathol.-1999.-Vol. 74, № 3. P.224-234.

80. Marticon-Gondran M., Letocart M. Internal defenses of the snail Biomphalaria glabrata II J. Invertebr. Pathol.-1999.-Vol. 74, № 3. P.235-247.

81. Marticon-Gondran M., Letocart M. Internal defenses of the snail Biomphalaria glabrata II J. Invertebr. Pathol.-1999.-Vol. 74, № 3. P.248-254.

82. Mc Cormick-Ray M.G., Howard T. Morphology and mobility of oyster hemocytes: evidence for seasonal variations // J. Invertebr. Pathol. 1991. - Vol. 58,№2.-P. 219-230.

83. Melo V.M., Fonseca A.M., Vasconcelos A.F., Carvalho A.F. Toxic, antimicrobial and hemagglutinating activities of the purple fluid of the sea hare Aplysia dactilomela Rang // Braz. J. Med. Biol. Res. 1998. - Vol. 31, № 6. - P. 785-791.

84. Mendoza H., Faye I. Immunoglobulin superfamily proteins in invertebrates // SOS. Publications. Fair. Haven, New Yersly.-1996.- P.285-302.

85. Mitra D., Sarkar M. A galactose specific agglutinin from the hemolymphof the snail Achatina fulica: purification and characterization // Dev. Сотр. Immunol. 1988. - Vol. 12, № 1. - P. 33-42.

86. Mitra D., Sarkar M., Allen A.K. Further characterization of the cold agglutinin from the snail Achatina fulica II Biochem. J. 1987. - Vol. 242, № 2. - P. 331-338.

87. Mitra D., Sarkar M., Allen A.K. Purification and characterization of an agglutinin from mucus of the snail Achatina fulica II Biochimie. 1988. - Vol. 70, № 12.-P. 1821-1829.

88. Mitta G., Hubert F., Noel Т., Roch P. Myticin, a novel cysteine-rich antimicrobial peptide isolated from haemocytes and piasma of the mussel Mytilus galloprovincialis II Eur. J. Biochem. 1999. - Vol. 265, № 1. - P. 71-78.

89. Mitta G., Vandenbulcke F., Hubert F;, Roch P. Mussel defensins are synthesised and processed in granulocytes then released into the plasma after bacterial challenge // Dev. Сотр. Immunol.- 1999. Vol. 23, № 6. - P.443-449.

90. Monti D., Salvioli S., Cossarizza A., Franceschi C., Ottaviani E. Cytotoxicity and cell death : studies on molluscan cells and evolutionary considerations // Acta. Biol. Hung. 1992. - Vol. 43, № 1-4. - P. 287-291.

91. Mullainadhan P., Renwrantz L. Comparative analysis of agglutinins from hemolymph and albumin gland of Helix pomatia II J. Сотр. Physiol. B. 1989. -Vol. 159, №4. -P. 443-452.

92. Noel D., Bachere E., Mialhe E. Phagocytosis associated chemiluminescence of hemocytes in Mytilus edulis (Bivalvia) // Dev. Сотр. Immunol. 1993. - Vol. 17, №6.-P. 483-493.

93. Odo S., Kamino K., Maruyama Т., Harayama S. Biochemical characterization of a Ca dependent lectin from the hemolymph of a photosymbiotic marine bivalve, Tridacna derasa (Roding) // J. Biochem.(Tokyo). - 1995. - Vol. 117, № 5. -P. 965-973.

94. Olafsen J.A., Fletcher T.C., Grant P.T. Agglutinin activity in Pacific oyster (iCrassostrea gigas) hemolymph following in vivo Vibrio anguillarum challenge // Dev. Сотр. Immunol. 1992. - Vol. 16, № 2-3. - P. 123-138.

95. Ottaviani E., Caselgrandi E., Fontanili P., Franceschi C. Evolution, immune responses and stress: studies on molluscan cells // Acta. Biol. Hung. 1992. - Vol. 43, № 1-4.-P. 293-298.

96. Ottaviani E., Franchini A., Fontanili P. The presence of immunoreactive vertebrate bioactive peptide substances in hemocytes of the freshwater snail Viviparus ater (Gastropoda, Prosobranchia) // Cell. Moll. Neurobiol. 1992. - Vol. 12, №5.-P. 455-462.

97. Ottaviani E., Franchini A., Franceschi C. Presense of immunoreactive corticotropin-releasing hormone and Cortisol molecules in invertebrate haemocytesand lower and higher vertebrate thymus // Histochem. J. 1998. - Vol. 30, № 2. -P. 61-67.

98. Ottaviani E., Franchini A., Franceschi C. Presence of several cytokine-like molecules in molluscan hemocytes // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. -Vol. 195, № 2. - P. 984-988.

99. Ottaviani E., Franchini A., Hanukoglu I. In situ localisation of ACTH receptor-like mRNA in molluscan and human immunocytes // Cell. Mol. Life. Sci.- 1998. Vol. 54, № 2. - P. 139-142.

100. Ottaviani E., Franceschi C., Sonetti D., Stefano G.B. Antagonizing effect of morphine on the mobility and phagocytic activity of invertebrate immunocytes // Eur. J. Pharmacol. 1995. - Vol. 276, № 1-2. - P. 35-39.

101. Ottaviani E., Montagnani G. Immunodetection of haemocyte subpopulations by N-acetylmuramic acid antibody in Planorbius corneus (L.) (Gastropoda, Pulmonata) // Histochem. J. 1989. - Vol. 21, № 11. - P. 675-678.

102. Ottaviani E., Sassi D., Kletsas D. PDGF and TGF-beta-induced changes in cell shape of invertebrate immunocytes: effect of calcium entry blockers // Eur. J. Cell. Biol. 1997. - Vol. 74, № 4. - P. 336-341.

103. Ottaviani E. The blood cells of the freshwater snail Planorbius corneus (Gastropoda, Pulmonata) // Dev. Сотр. Immunol. 1983. - Vol.7, № 2. - P. 209216.

104. Ozeki Y. Purification and cell attachment activity of a D-galactose-binding lectin from the skin of sea hare, Aplysia kurodai II Biochem. Mol. Biol. Int. 1998.- Vol. 45, № 5. P. 989-995.

105. Pipe R.K., Farley S.R., Coles J.A. The separation and characterisation of haemocytes from the mussel Mytilus edulis И Cell. Tissue. Res. 1997. - Vol. 289, № 3. - P. 537-545.

106. Pipe R.K. Hydrolytic enzymes associated with the granular haemocytes of the marine mussel Mytilus edulis II Histochem. J. 1990. - Vol. 22, № 11. - P. 595603.

107. Sarkar M., Bachhawat B.K., Mandal C. A new cold agglutinin from Achatina fulica snails // Arch. Biochem. Biophys. 1984. - Vol. 233, № l. - p. 286-289.

108. Sassi D., Kletsas D., Ottaviani E. Interactions of signaling pathways in ACTH (l-24)-induced cell shape changes in invertebrate immunocytes // Peptides. 1998. -Vol. 19, №6.-P. 1105-1110.

109. Scheeweiss H., Renwrantz L. Analysis of the attraction of haemocytes from Mytilus edulis by molecules of bacterial origin // Dev. Сотр. Immunol. 1993. -Vol. 17, №5.-P. 377-387.

110. Sen G., Mandal C., Chowdhury M. Albumen gland of the snail Achatina fulica is the site for synthesis of Achatinin H, a sialic acid binding lectin // Moll. Cell. Biochem. 1992. - Vol. 117, № 2. - P. 133-138.

111. Soderhall K., Iwanaga S., Vasta G.R., Beck G., Habicht G.S. Cytokines in invertebrates // SOS. Publications. Fair. Haven, New Yersly. 1996. - P. 131-154.

112. Soderhall K., Iwanaga S., Vasta G.R. New directions in invertebrate immunology // SOS. Publications. Fair. Haven, New Yersly. 1996. - P. 1-494.

113. Soelter J., Janssen E., Uhlenbruck G. Precipitin reaction of pneumococcal C-polysacharide with the lectin from Tridacna squamosa and Tridacna maxima II Eur. J. Cell. Biol. 1983. - Suppl. 4 . - P. 19.

114. Suzuki Т., Mori K. A galactose-specific lectin from the hemolymph of the pearl oyster, Pinctada fucata martensii // Сотр. Biochem. Physiol. B. 1989. -Vol. 92, № 3. - P. 455-462.

115. Suzuki Т., Mori К. Hemolymph lectin of the pearl oyster, Pinctada fucata martensii: a possible non-self recognition system // Dev. Сотр. Immunol. 1990. -Vol. 14, №2.-P. 161-173.

116. Swarnakar S., Chowdhury P.S., Sarkar M. N-glycolylneuraminic acid specific lectin from Pila globosa snail // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991. - Vol. 178, № l.-P. 85-94.

117. Torreilles J., Guerin M.C., Roch P. Peroxidase-release associated with phagocytosis in Mytilus galloprovinciaiis haemocytes // Dev. Сотр. Immunol. -1997. Vol. 21, № 3. - P. 267-275.

118. Tripp M.R. Agglutinins in the hemolymph of the hard clam, Mercenaria mercenaria II J. Invertebr. Pathol. 1992. - Vol. 59, № 3. - P. 228-234.

119. Tripp M.R. Phagocytosis by hemocytes of the hard clam, Mercenaria mercenaria II J. Invertebr. Pathol. 1992. - Vol. 59, № 3. - P. 222-227.

120. Tunkijjanukij S., Giaever H., Chin C.C., Olafsen J.A. Sialic acid in hemolymph and affinity purified lectins from two marine bivalves // Сотр. Biochem. Physiol. B. Biochem. Mol. Biol. 1998. - Vol. 119, № 4. - P. 705-713.

121. Tunkijjanukij S., Olafsen J.A. Sialic acid-binding lectin with antibacterial activity from the horse mussel: further characterization and immunolocalization // Dev. Сотр. Immunol.-1998.-Vol. 22, № 2. P. 139-150.

122. Uhlenbruck G., Karduck D., Pearson R. Different Tridacnins in different Tridacnid clams: a comparative study // Сотр. Biochem. Physiol. B. 1979. - Vol. 63, № l.-P. 125-129.

123. Weiss IM., Kaufmann S., Mann K., Fritz M. Purification and characterisation of perculin and perlustrin, two new proteins from the shell of the mollusc Haliotis laevigata II Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - Vol. 267, № 1. - P. 17-21.

124. Wilson M.P., Carrow G.M., Levitan I.B. Modulation of growth of Aplysia neurons by an endogenous lectin 11 J. Neurobiol. 1992. - Vol. 23, № 6. - P. 739750.

125. Yang R., Yoshino T.P. Immunorecognition in the freshwater bivalve, Corbicula fluminea. II. Isolation and characterization of a plasma opsonin with hemagglutinating activity // Dev. Сотр. Immunol. 1990. - Vol. 14, № 4. - P. 397-404.

126. Yayne C.J., Boswell C.A., Loker E.S., Yui M.A. Plasma components which mediate cellular defences in the gastropod mollusk, Biomphalaria glabrata 11 Dev. Сотр. Immunol. 1985. - Vol. 9, № 3. - P. 523-530.

127. Yuasa H.J., Futura E., Nakamura A., Takagi T. Cloning and sequencing of three C-type lectins from body surface mucus of the lung slug, Incilaria fruhstorferi И Сотр. Biochem. Physiol. B. Biochem. Mol. Biol. 1998. - Vol. 119, № 3. - P. 479-484.

128. Zelck U., Becker W. Lectin binding to cells of Schistosoma mansoni sporocysts and surrounding Biomphalaria glabrata tissue // J. Invertebr. Pathol. -1990. Vol. 55, № l.-P. 93-99.

129. Zipris D., Gilboa-Garber N., Susswein A.J. Interaction of lectins from gonads and haemolymph of the sea hare Aplysia with bacteria // Microbios. 1986. - Vol. 46, № 188-189.-P. 193-198.