Иммунологические аспекты нарушения сперматогенеза у мужчин с бесплодием тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Тарасова, Марина Николаевна

• Тарасова, Марина Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Тарасова, Марина Николаевна

Введение

Глава 1. Современный взгляд на иммунологические факторы нарушения мужской репродуктивной функции

1.1. Причины нарушения мужской репродуктивной функции

1.2. Роль инфекции в развитии мужского бесплодия

1.3. Нарушения организации генетического материала сперматозоидов

1.4. Развитие аутоиммунных процессов репродуктивного тракта

1.5. Ингибин В - маркер сперматогенеза

1.6 Роль цитокинов в регуляции сперматогенеза

1.7. Способы оценки нарушений мужской репродуктивной функции

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Характеристика обследуемых групп

2.2. Методы исследования

2.2.1. Преаналитический этап исследований

2.2.2. Аналитический этап исследований

2.3. Статистическая обработка полученных данных

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1. Качественно-количественные показатели эякулята

3.2. Структурная организация половых клеток у мужчин с нормоспермией и патоспермией

3.3. Исследование антиспермального иммунитета у мужчин с нормоспермией и патоспермией

3.4. Исследование уровней медиаторов в сыворотке крови и семенной плазме

3.5. Корреляционные взаимосвязи исследованных показателей

Способ диагностики нарушений сперматогенеза мужчин с нормоспермией

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунологические аспекты нарушения сперматогенеза у мужчин с бесплодием»

В структуре бесплодного брака тенденция к росту мужского фактора и ухудшению качества спермы диктует необходимость пристального изучения существующей проблемы [6, 7,45, 71, 77, 78, 81].

Признанным интегральным критерием состояния мужской репродуктивной функции является исследование эякулята, включающее в себя оценку концентрации, подвижности и морфологии сперматозоида. Результаты исследования, рекомендованного ВОЗ, не всегда надежны т.к. фертильность бывает сохранена даже при значительных отклонениях показателей спермограммы от нормы, в то время как бесплодие может наблюдаться и у мужчин с нормоспермией [52, 67, 84].

В настоящее время одним из наиболее перспективных направлений в исследовании нарушений репродуктивной функции мужчин является изучение аномалий структурной организации хроматина мужских гамет, которые могут быть обусловлены эндогенными разрывами молекулы в процессе компактизации хроматина ядер сперматозоидов, инициацией процесса апоптоза в ходе сперматогенеза, окислительным стрессом в результате действия избыточной концентрации активных форм кислорода [28, 81, 86, 139]. Другим механизмом нарушения фертильности считается развитие аутоиммунных реакций против собственных сперматозоидов [31, 57].

Регуляция мужской репродуктивной функции является многоуровневой, с вовлечением не только эндокринной, но и других систем, в частности иммунной. Нормальное протекание процессов гаметогенеза обеспечивается взаимодействием большого количества клеток различного типа, которое осуществляется не только при непосредственных межклеточных контактах, но и за счет сложной системы цитокинов [44, 62].

На сегодняшний день отсутствует целостное представление о взаимодействии цитокиновых сигналов и процесса сперматогенеза. Ряд авторов придерживается точки зрения, что изменение уровня цитокинов ассоциируется не с эффективностью сперматогенеза, а, главным образом, с воспалительным процессом в мужском репродуктивном тракте, в других работах демонстрируется тесная корреляционная взаимосвязь уровня цитокинов с рутинными показателями спермограммы: концентрацией, подвижностью, морфологией [46, 62, 87, 95, 98].

Таким образом, определение роли иммунной системы в сперматогенезе является перспективной, так как появление новых знаний в этой области позволяет усовершенствовать диагностику и предложить новые методические подходы к анализу причин нарушения репродуктивной функции мужчины [31, 48].

Цель исследования: определить иммунологические факторы нарушения сперматогенеза у мужчин с бесплодием.

Задачи исследования

1. Выявить особенности структурной организации хроматина сперматозоидов у мужчин из супружеских пар с бесплодием.

2. Определить содержание цитокинов в сыворотке крови и эякуляте мужчин из бесплодных супружеских пар и здоровых фертильных мужчин.

3. Оценить взаимосвязь между иммунологическими параметрами и нарушением степени компактизации хроматина сперматозоидов мужчин из супружеских пар с бесплодием.

4. Разработать алгоритм обследования мужчин из числа бесплодных супружеских пар на основе наиболее информативных иммунологических показателей.

Научная новизна Определены особенности структурной организации хроматина половых клеток методом проточной цитометрии у мужчин из бесплодных супружеских пар. Установлено снижение степени компактизации хроматина сперматозоидов и повышение уровня дефектных клеток в эякуляте пациентов как при нормо-, так и при патоспермии.

Показано, что нарушение организации хроматина сперматозоидов сопровождается статистически значимым снижением концентрации ингибина В в сыворотке крови и повышением уровня антиспермальных антител в эякуляте.

Выявлена общая направленность ряда цитокиновых сигналов: повышение синтеза IL-ip, IL-8, TNF-a, IL-10 в спермальной плазме и возрастание концентрации IL-1RA и IL-8 в сыворотке крови, что позволяет дифференцировать пациентов из супружеских пар с бесплодием и фертильных мужчин.

Установлено, что у пациентов с нормоспермией при снижении степени компактизации хроматина сперматозоидов и/или повышении уровня дефектных клеток в эякуляте, наряду с выявленными общими признаками в продукции цитокинов, имеет место повышение концентраций IFN-y и TNF-a в сыворотке крови, а также концентрации CRP и ростового фактора TGF-(3 в спермоплазме.

Развитие патоспермии сопровождается усилением локальной продукции IL-2, IL-4 и IFN-y на фоне снижения концентрации IL-6.

Выявлены наиболее информативные показатели: степень компактизации хроматина сперматозоидов D/s, относительное содержание дефектных клеток HDS, концентрация ингибина В, на основании которых выведена формула определения диагностического индекса для оценки нарушений сперматогенеза у мужчин с нормоспермией, вошедшая в основу новой медицинской технологии (ФС № 208/248 от 19.11.2008).

Получен патент №2262107 на изобретение «Способ определения зрелости сперматозоидов» и приоритетная справка на изобретение «Способ диагностики мужского бесплодия» №2008115047.

Практическая значимость

Установлены наиболее информативные параметры для оценки нарушений сперматогенеза - степень компактизации хроматина сперматозоидов D/s, относительное содержание дефектных клеток HDS, концентрация ингибина В.

Разработан алгоритм лабораторного обследования пациентов из бесплодных супружеских пар при нормоспермии.

Использование разработанных критериев позволяет повысить эффективность диагностики нарушений мужского репродуктивного потенциала.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Нарушение организации хроматина сперматозоидов имеет место у пациентов из бесплодных супружеских пар не только при пато-, но и при нормоспермии.

2. Снижение концентрации ингибина В в сыворотке крови и повышение уровня антиспермальных антител у мужчин из супружеских пар с бесплодием сопровождается снижением степени компактизации хроматина сперматозоидов и повышением относительного количества дефектных клеток в эякуляте.

3. В зависимости от выраженности степени нарушений организации мужских половых клеток наблюдается изменение продукции цитокинов на локальном и системном уровнях.

4. Особенности структурной организации хроматина, содержание дефектных клеток в эякуляте и концентрация ингибина В в сыворотке крови могут служить дополнительными иммунологическими маркерами оценки репродуктивной функции мужчин.

Апробация диссертации

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на заседаниях Ученого Совета ФГУ «НИИ ОММ Росмедтехнологий», научно-практических конференциях ФГУ «НИИ ОММ Росмедтехнологий» (2007-2008г.г.). Материалы диссертации представлены на III съезде физиологов Урала (Екатеринбург, 2006г.); Республиканской научно-практической конференции «Инновационные технологии в охране репродуктивного здоровья женщины» (Екатеринбург, 2007г.), VI конференции иммунологов Урала (Ижевск, 2007г.), Международной научно-практической конференции «Репродуктивное здоровье населения Урала и Сибири» (Екатеринбург, 2008г.).

Публикации и внедрение

По материалам диссертации опубликовано 18 научных работ, в том числе 6 публикаций в печатных изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Результаты исследований, представленные в диссертации, внедрены в практику научной поликлиники ФГУ «НИИ ОММ Росмедтехнологий» г. Екатеринбурга; Центра семейной медицины г. Екатеринбурга; поликлиники «Ваш семейный доктор» г. Екатеринбурга; Свердловского областного центра планирования семьи и репродукции г. Екатеринбурга.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, главы с изложением результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка использованных сокращений и библиографического указателя, включающего 152 источника, в том числе 72 иностранных. Работа иллюстрирована 10 таблицами и 9 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Тарасова, Марина Николаевна

выводы

1. Выявлено снижение степени компактизации хроматина сперматозоидов и повышение уровня дефектных клеток в эякуляте у большинства (70% случаев) пациентов из бесплодных супружеских пар при нормоспермии.

2. Нарушение организации хроматина сперматозоидов у мужчин из супружеских пар с бесплодием сопровождается статистически значимым снижением концентрации ингибина В в сыворотке крови и повышением уровня антиспермальных антител в эякуляте.

3. Установлено повышение синтеза IL-1J3, IL-8, TNF-a, IL-10 в спермоплазме и возрастание концентрации IL-1RA и IL-8 в сыворотке крови у мужчин из супружеских пар с бесплодием при нормо- и патоспермии.

4. При нарушении структурной организации сперматозоидов у пациентов с нормоспермией повышается концентрация IFN-y и TNF-a в сыворотке крови и концентрация CRP и TGF-P в спермоплазме. Патоспермия сопровождается усилением локальной продукции IL-2, IL-4 и IFN-y на фоне снижения концентрации IL-6.

5. Степень компактизации хроматина сперматозоидов, содержание дефектных клеток в эякуляте и концентрация ингибина В в сыворотке крови могут служить дополнительными иммунологическими маркерами, позволяющими повысить эффективность диагностики нарушений репродуктивной функции мужчин.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для оценки риска развития нарушений сперматогенеза у мужчин из супружеских пар с бесплодным браком рекомендуется определение уровня IL-ip, IL-8, TNF-a, IL-10 в спермальной плазме и IL-1RA, IL-8 в сыворотке крови.

2. При диагностике мужского бесплодия рекомендуется включить в лабораторное обследование мужчин из супружеских пар с бесплодным браком следующие диагностические тесты: оценку зрелости сперматозоидов методом проточной цитометрии с определением показателя D/s, характеризующего степень компактизации хроматина сперматозоидов и относительного содержания дефектных клеток HDS и определение концентрации ингибина В в сыворотке крови методом ИФА.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Тарасова, Марина Николаевна, 2009 год

1. Абуауев, Н.К. Оценка состояния антибактериальной защиты организма мужчин с инфекционно-воспалительными заболеваниями мочеполовых органов / Н.К. Абуауев // Вестник дерматологии и венерологии. 2001. - №4. - С. 35-38.

2. Айзикович, Б.И. Роль цитокинов в регуляции сперматогенеза: современный взгляд на проблему / Б.И. Айзикович, И.В. Айзикович, О.Ю. Верба, В.А. Козлов // Иммунология. 2008. - №3. - С. 191 -193.

3. Аль-Шукри, С.Х. Информативность иммунологического анализа крови и эякулята в диагностике хронического простатита / С.Х. Аль-Шукри, Ю.А. Бобков, О.В. Галкина и др. // Урология. 2002. - №2. - С. 24-27.

4. Артифексова, А.А. Патогенетические аспекты мужской субфертильности как причины репродуктивных потерь / А.А. Артифексова // Проблемы репродукции. 1999. - №6. - С. 37- 41.

5. Артифексова, А.А. Этиология и патогенез репродуктивных потерь при нарушении гаметогенеза у мужчин: автореф. дисс. д-ра мед. наук / А.А. Артифексова. Казань, 2000. - 40 с.

6. Артюхин, А.А. Андрологические аспекты в охране репродуктивного здоровья / А.А. Артюхин // Медицина труда и промышленная экология. 1999. -№ 3. - С. 16-19.

7. Артюхин, А.А. Роль андрологии как составной части репродуктивной медицины в решении демографических проблем России / А.А. Артюхин // Вестник Российской АМН. 2007. - №11. - С. 50-52.

8. Атюшев, Г.П. Лейкоцитарная и эпителиально-десквамативная реакция у больных урогенитальными инфекциями группы ИППП разной этиологии, страдающих бесплодием / Г.П. Атюшев, Н.С. Мотавкина // Проблемы репродукции. 2006. - № 6. - С. 44-46.

9. Беломестнов, С.Р. Обоснование применения методов коррекцииэндотоксикоза в комплексе преконцепционной подготовки супружеских пар с невынашиванием беременности: автореферат дисс. кандидата мед. наук / С.Р. Беломестнов. Екатеринбург, 2006. - 23 с.

10. Божедомов, В.А. Влияние антиспермальных антител на мужскую репродуктивную функцию / В.А. Божедомов, О.Б. Лоран, Г.Т. Сухих // Андрология и генитальная хирургия. 2000. - №2. - С. 25-33.

11. Божедомов, В.А. Иммунологические причины бездетного брака (обзор литературы) / В.А. Божедомов, И.И. Гузов, О.В. Теодорович // Проблемы репродукции. 2004. - № 6. - С. 57-62.

12. Божедомов, В.А. Роль Mycoplasma hominis в мужском бесплодии / В.А. Божедомов, Л.З. Файзуллин, М.А. Николаева // Проблемы репродукции. 2004. - № 2. - С. 81-85.

13. Божедомов, В.А. Проблемы диагностики иммунологической причины мужского бесплодия / В.А. Божедомов, М.А. Николаева, Е.Л. Голубева, Е.И. Бокарева, А.А. Самко, Л.З. Файзуллин, О.В. Теодорович, Г.Т. Сухих // Проблемы репродукции. 2007. - №2. - С. 81-89.

14. Бойко, Н.И. Нарушение репродукции при простатите/синдроме хронической тазовой боли / Бойко Н.И. // Международный медицинский журнал. 2004. -№3. - С. 141-142.

15. Брагина, Е.Е. Электронно-микроскопическое изучение сперматозоидов человека и его роль в диагностике мужского бесплодия / Е.Е. Брагина, Р.А. Абдумаликов, Л.Ф. Курило // Проблемы репродукции. 2000. - № 6. - С. 62-70.

16. Бухарин, О.В. Роль микробного фактора в патогенезе мужского бесплодия / О.В. Бухарин, М.Д. Кузьмин, Ю.Б. Иванов // Журнал микробиологии. 2000. — №. 2.-С. 106-110.

17. Бухарин, О.В. Характеристики изменений в микробиоценозе у пациентов с хроническим неспецифическим уретритом / О.В. Бухарин, Ю.В. Иванов, М.Д. Кузьмин, С.В. Михайленко // ЖМЭИ. 1999. - №4. - С. 86-90.

18. Быков, В.А. Сперматогенез у мужчин в конце XX века / В.А. Быков // Проблемы репродукции. 2000. - № 1. - С. 6-12.

19. Воробьева, О.А. Методы оценки морфологии сперматозоидов и их прогностическое значение в программе ЭКО / О.А. Воробьева, О.А. Леонтьева, B.C. Корсак / Проблемы репродукции. 1995. - №3. - С. 71-76.

20. Воробьева, О.А., Влияние морфологии сперматозоидов на частоту оплодотворения и нарушение раннего эмбрионального развития / О.А. Воробьева, О.А. Леонтьева, B.C. Корсак / Цитология. 1996. - №38: 12 - С. 1248-1254.

21. Воробьева, О.А. Значение анализа организации хроматина ядер сперматозоидов в диагностике мужского бесплодия / О.А. Воробьева, М.В. Филатов, О.А. Леонтьева // Проблемы репродукции. 1997. - № 4. - С. 23-25.

22. Воробьева, О.А. Влияние аномальной организации хроматина сперматозоидов на развитие эмбрионов человека / О.А. Воробьева, М.В.

23. Филатов, О.А. Леонтьева // Проблемы репродукции. 1998. - № 1. - С. 14-18.

24. Воробьева, О.А. Особенности оплодотворения и доимплантационного развития эмбрионов человека в зависимости от показателей сперматогенеза: автореферат дисс. доктора мед. наук / О.А. Воробьева. С-Петербург, 2001. 37с.

25. Воробьева, О.А. Мужское бесплодие и нарушение структурной организации хроматина сперматозоидов. Существует ли связь? / О.В. Воробьева, А.В. Воскресенская, А.А. Одинцов, М.В. Филатов // Проблемы репродукции. 2005. - №6. - С. 56-62.

26. Воронцов, Т.Н. Физиологические аспекты локальной иммунорегуляции при лечении хронической урогенитальной хламидийной инфекции у мужчин: автореферат дисс. кандидата мед. наук / Т.Н. Воронцов. Курган, 2007. - 23с.

27. Габбасов, ЗА. Новый метод объективного и быстрого определения основных показателей спермы / З.А. Габбасов, Г.В. Тер-Аванесов // Проблемы репродукции. 1999. - №2. - С. 67-70.

28. Галимов, Ш.Н. «Кризис сперматозоида» и техногенное загрязнение окружающей среды / Ш.Н. Галимов, З.К. Амирова, Э.Ф. Галимова // Проблемы репродукции. 2005. - №2. - С. 19-22.

29. Гладкова, А.И. Тестостерон-ингибиновое взаимодействие при мужском бесплодии / А.И. Гладкова, П.Г. Морозов // Проблемы эндокринологии. 1991. -№1.- С. 21-30.

30. Говалло, В.И. Иммунология репродукции / В.И. Говалло. М.: Медицина, 1981.-304 с.

31. Гоголевский, П.А. Использование сперматид в процедуре ЭКО/ИКСИ / П.А. Гоголевский // Проблемы репродукции. 1998. - №2. - С. 5-10.

32. Дерябин, Д.Г. Смешанная урогенитальная инфекция у мужчин / Д.Г. Дерябин, С.Д. Борисов, С.В. Михайленко // ЖМЭИ. 2000. - №2. - С. 103-105.

33. Долгов, В.В. Лабораторная диагностика мужского бесплодия / В.В. Долгов, С.А. Луговская, Н.Д. Фанченко, И.И. Миронова, Е.К. Назарова, Н.Г. Ракова, С.С. Раков, Т.О. Селиванов, A.M. Щелочков // Москва. 2006. - 144с.

34. Евдокимов, В.В. Комплексное лабораторное исследование эякулята при заболеваниях мужской репродуктивной системы / В.В. Евдокимов, С.С. Раков, Н.А. Липатова // Клиническая лабораторная диагностика. 1995. - №6. - С. 114-116.

35. Есипов, А.С. Параметры эякулята у мужчин с репродуктивно значимыми инфекциями генитального тракта / А.С. Есипов // Проблемы репродукции. -2007. №4. - С. 64- 69.

36. Зациорская, С.Л. Микрофлора эякулята при нормо- и патоспермии / С.Л. Зациорская, З.М. Мартикайнен, Ю.К. Каменецкая // Материалы XXVI научной сессии, посвященные 100-летию кафедры акушерства и гинекологии СПбГМУ. С-Петербург. - 1999. - С. 199-201.

37. Кадагидзе, З.Г. Цитокины / З.Г. Кадагидзе // Практическая онкология. -2003. Т.4. - №3. - С. 131 - 139.

38. Калашникова, Е.А. Антигены сперматозоидов и антиспермальные антитела, ассоциированные с бесплодием / Е.А. Калашникова // Проблемы репродукции. -2004.-№4. -С. 55-59.

39. Калинина С.Н. Роль заболеваний, передающихся половым путем, в бесплодном браке / С.Н. Калинина, О.Л. Тиктинский, В.В. Михайличенко // Урология и нефрология. 1997. - №1. - С. 37-39.

40. Кетлинский, С.А. Цитокины /С.А. Кетлинский, А.С. Симбирцев // С.1. Петербург. 2008. - 550 с.

41. Коган, М.И. Содержание цитокинов ИЛ-6, ФНО-а, ИЛ-4 и FGF в семенной плазме у мужчин с нормо-, олиго- и олигоастенозооспермией и различной степенью фертильности / М.И. Коган, В.К. Ким // Бюллетень СО РАМН. 2008. - Приложение №1. - С. 27-30.

42. Коган, О.С. Андрологические заболевания актуальная медико-социальная проблема / О.С. Коган, В.Н. Симаков, Д.В. Романенко // Вестник обл. клинич. больницы. - 2002. - №. 1. - С. 29-30.

43. Комарова, М.В. Характеристика эякулята в оценке репродуктивных возможностей человека: автореферат дисс. кандидата биол. наук / М.В. Комарова. Уфа, 2000. - 30с.

44. Кореньков, Д.Г. Роль интерлейкина-2 в формировании аутоимунного бесплодия мужчин / Д.Г. Кореньков, В.П. Александров, В.Е. Марусанов, В.В. Михайличенко, А. В. Лукьянов // Материалы конференции «Мужское здоровье». 2003. - С.54.

45. Корякин, М.В. Анализ причин мужского бесплодия / М.В. Корякин, А.С. Акопян // Проблемы репродукции. 2000. - № 5. - С. 68-75.

46. Кубанова, А.А. Влияние урогенитального хламидиоза и уреа-микоплазмоза на состояние сперматогенеза мужчин / А.А. Кубанова, Н.К. Абуауев, Л.Ф. Курило, Е.Е. Брагина, Л.В. Шилейко, Е.М. Гришина // Вестник дерматологии и венерологии. 2000. - №6. - С. 7-11.

47. Кулаков, В.И. Иммунология репродукции / В.И. Кулаков, Г.Т. Сухих, Л.В. Ванько // Вестник РАМН. 1999. - №4. - С. 44-48.

48. Курило, Л.Ф. Оценка сперматогенеза по незрелым половым клеткам эякулята / Л.Ф. Курило, В.П. Дубинская, Т.В. Остроумова // Проблемы репродукции. 1995. - №3. - С. 33-38.

49. Леонтьева, О.А. Прогностическое значение показателей спермограммы в программе оплодотворения ооцитов человека в культуре / О.А. Леонтьева, О.А.

50. Воробьева, В.В. Козлов // Проблемы репродукции. 2000. - №5. - С. 39-41.

51. Маркова, Е.В. Фрагментация ДНК в сперматозоидах человека (обзор литературы) / Е.В. Маркова, А.С. Замай // Проблемы репродукции. 2006. -№4. - С. 42-50.

52. Мелещенко, А.Б. Проточная импульсная цитофлуорометрия сперматозоидов человека / А.Б. Мелещенко, A.JI. Кравцов, М.Ю. Ледванов // Лабораторное дело. 1991. - № 2. - С. 25-27.

53. Михайленко, А.А. Роль корреляционных взаимосвязей в оценке функциональных возможностей иммунной системы / А.А. Михайленко, Т.А. Федотова // Иммунология. 2000. - № 6. - С. 59 - 61.

54. Николаева, М.А. Выявление антиспермальных антител на поверхности живых сперматозоидов методом проточной цитофлуорометрии / М.А. Николаева, Г.В. Тер-Аванесов, Л.Н. Терехина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1990. - № 4. - С. 379-382.

55. Николаева, М.А. Антиспермальные антитела и бесплодие: неразрешимая проблема или перспективное направление исследований? / М.А. Николаева, А.Ю. Крутских, И.В. Короткова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2001.-№ 1.-С. 33-38.

56. Николаева, М.А. Антитела к антигенам сперматозоида человека в норме и при нарушениях репродуктивной функции: автореф. дисс. д-ра биол. наук / М.А.Николаева. Москва, 2007. - 44 с.

57. Новикова, Л.Н. Урогенитальные микоплазмы при нормо- и патоспермии / Л.Н. Новикова, О.А. Леонтьева, Ю.К. Каменецкая // Материалы XXVI научнойсессии, посвященные 100-летию кафедры акушерства и гинекологии СПбГМУ.- С-Петербург. 1999. - С. 317-321.

58. Останин, А.А. Сравнительная оценка уровня 17 цитокинов в сыворотке и цельной крови здоровых доноров методом проточной флюориметрии / А.А. Останин, Е.Р. Черных // Цитокины и воспаление. 2005. - №4. - С. 25-32.

59. Останин, А.А. Цитокиновый профиль семенной плазмы человека / А.А. Останин, Б.И. Айзикович, Е.Р. Черных // Проблемы репродукции. 2006. - № 6.- С. 65-74.

60. Перепелица, А.Н. Применение полиоксидония и ультразвука в комплексном лечении хронического бактериального простатита / А.Н. Перепелица, Н.К. Минаков, И.В. Карпухин // Иммунология. 2005. - №4. - С. 217-220.

61. Петрищев, B.C. Оценка морфологии сперматозоидов согласно строгим критериям / B.C. Петрищев // Проблемы репродукции. 2007. - №3. - С. 87-91.

62. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю.Реброва // М.: МедиаСфера. -2003.-312 с.

63. Романенко, A.M. Изменение ультраструктуры гематотестикулярного барьера в патогенезе бесплодия / A.M. Романенко // Врачебное дело. 1999. -№7.-С. 131-137.

64. Руководство ВОЗ по лабораторному исследованию эякулята человека и взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью. 4-е издание М: Мед Пресс.-2001.- 144с.

65. Рыжаков, Д.И. Мужское бесплодие и сексуальные дисфункции / Д.И. Рыжаков, С.Б. Артифексов // Н.Новгород. 2002. - 308 с.

66. Селиванов, Т.О. Клинико-лабораторные критерии фертильности при варикоцеле: автореферат дисс. кандидата мед. наук. / Т.О. Селиванов. -Москва.-2008.-26с.

67. Семенова, Е.В. Критерий оценки состояния хроматина ядер сперматозоидов человека с помощью техники проточной цитометрии тест на фертильность / Е.В. Семенова, Е.А. Дробченко, М.В. Филатов // Цитология. - 2002. - № 44:5. -С. 470-476.

68. Тер-Аванесов, Г.В. Эндокринное бесплодие у мужчин / Г.В. Тер-Аванесов, Т.В. Овсянникова, В.И. Кулаков, Р.А. Нерсесян // Проблемы репродукции. -1997.-№4.-С. 30-38.

69. Тиктинский, O.JI. Андрология / O.JI. Тиктинский, В.В. Михайличенко // С-Петербург: Медиа-Пресс. 1999. - 464с.

70. Токарь, В.И. Фтор и эндокринная система / В.И. Токарь, А.А. Жаворонков, С.В. Щербаков //Новосибирск: Наука. 1991. - 200с.

71. Устинкина, Т.И. Эндокринология мужской половой системы / Т.И. Устинкина // С-Петербург: Элби. — 2007. — 160с.

72. Устинов, Д.В. Цитокины семенной плазмы и их роль в этиологии мужского бесплодия (обзор литературы) / Д.В. Устинов, Б.И. Айзикович // Бюллетень СО РАМН. Приложение №1. - 2008. - С. 84-87.

73. Фанченко, Н.Д. Структура инфекции TORCH-комплекса у бесплодных пар в программе ЭКО / Н.Д. Фанченко, M.JI. Алексеева, Р.Н. Щедрина, JI.H. Кузьмичев, Б.В. Леонов, Е.А. Новиков, С.М. Муллабаева // Проблемы репродукции. 1997. - № 2. - С. 65-67.

74. Федорова, И.Д. Генетические факторы мужского бесплодия / И.Д. Федорова, Т.В. Кузнецова // Журнал акушерства и женских болезней. 2007. - том LVI. -выпуск №1.-С. 64-72.

75. Черешнев, В.А. Иммунологические и генетические факторы нарушения репродуктивной функции / В.А. Черешнев, И.В. Рыбина, Я.Б. Бейкин, Т.А. Обоскалова // Екатеринбург: УрО РАН, 2005. 174с.

76. Черкашин, В.Н. Мужской фактор при привычном невынашиваниибеременности / В.Н. Черкашин, И.Г. Зорин, С.И. Кулинич // Репродуктивная функция в супружеской паре: тез. докл. науч.-пр. конф. Екатеринбург. -1994.-С. 112.

77. Черний, В.И. Нарушения иммунитета при критических состояниях / В.И. Черний, А.Н. Нестеренко // Внутренняя медицина. 2007. - №3. - С. 16-34.

78. Agarwal, A. Role of sperm chromatin abnormalities and DNA damage in male infertility / A. Agarwal, Tamer M. Said // Human Reproduction. 2003. - Vol.9. -№4.-P. 331-345.

79. Agarwal, A. The effect of sperm DNA damage on assisted reproduction outcomes / A. Agarwal, S.S.R. Allamaneni // Minerva ginecology 2004. - №56. -P. 235-245.

80. Allegrucci, C. Circulating human antisperm antibodies recognize prostasomes / C. Allegrucci, G. Ronquist, B. Ove Nilsson // Am J Reprod Immunology 2001, -№46(3).-P. 211-219.

81. Alvarez, C. Biological variation of seminal parameters in healthy subjects / C. Alvarez, J.A. Castilla, L. Martinez //Human Reproduction 2003. - Vol. 18. - № 10.-P. 2082-2088.

82. Apedaile, A.E. Flow cytometry and microscopic acridine orange test: relationship with standart semen analisis / A.E. Apedaile, C. Garrett, Y. De Liu // Reprod. Biomed. Online. 2004. - Vol.8. - №4. - P. 398-407.

83. Appasamy, M. Relationship between male reproductive hormones, sperm DNA damage and marker of oxidative stress in men / M. Appasamy // Fertility andsterility. 2007. Vol.89. - №6. - P. 1850-1867.

84. Benchaib, M. Sperm DNA fragmentation decreases the pregnancy rate in an assisted reproductive technique / M. Benchaib, V. Braun, J. Lornage et al. // Human reproduction. -2003. -№18:5. P. 1023-1028.

85. Berkovitz, A. The morphological normalcy the sperm nucleus and pregnancy rate of intracytoplasmic injection with morphologically selected sperm / A. Berkovitz, F. Eltes // Human reproduction. 2004. - № 20:1 P. 47-51.

86. Burrello, N. Lower sperm aneuploidy frequency is associated with high pregnancy rates in ICSI programmes / N.Burrello et al. // Human Reproduction. -2003.- № 18.-P. 1371-1376.

87. Denison, Fiona C. Seminal plasma components stimulate interleukin-8 and interleukin-10 release / Fiona C. Denison, Vivien E. Grant, Andrew A. Calder, Rodney W. Kelly // Molecular Human Reproduction. 1999. - № 3. ~Vol.5. - P.220.226.

88. Eggert-Kruse, W. Antibodies to Chlamidia trachomatis in semen and relationship with parameters of male fertility / W. Eggert-Kruse, N. Buhlinger-Gapfarth, G. Rohr etal.//Human reproduction. 1996.-№11:7.-P. 1408-1417.

89. Eggert-Kruse, W. Relationship of seminal plasma interleukin (IL)-8 and IL-6 with semen quality / W. Eggert-Kruse // Human reproduction. 2001. - №16:3. - P. 517528.

90. Eggert-Krusse, W. Role for tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and interleukin 1-beta (IL-1 P) determination in seminal plasma during infertility investigation / W. Eggert-Krusse et al. // Fertility and sterility. 2007. - №87:4. - P. 810-823.

91. Erenpreiss, J. Toluidine blue cytometry test for sperm DNA conformation: comparison with the flow cytometric sperm chromatin structure and TUNEL assays / J. Erenpreiss, K. Jepson, A. Giwercman et al. // Human reproduction. 2004. - №19. -P. 2277-2282.

92. Erenpreiss, J. Sperm chromatin structure and male fertility: biological and clinical aspects / J. Erenpreiss, M. Spano, J. Erenpreisa, M. Bungum, A. Giwercman // Asian J. Andrology 2006. - № 8 (1). - P. 11-29.

93. Evenson, Donald P. Comparison of Human and Mouse Sperm Chromatin Structure by Flow, Cytometry / Donald P. Evenson, Zbigniew Darzynkiewcz, Myron

94. R. Melamed. CHROMOSOMA. 1980. - № 78. - P. 225-238.

95. Evenson, D. Relation of mammalian sperm chromatin heterogenety to fertility / D. Evenson, Z. Darzynkewicz, M.R. Melamed // Science. 1980. - №240. - P. 11311133.

96. Evenson, D. Utility of the sperm chromatin structure assay as a diagnostic and prognostic tool in the human fertility clinic / D.P. Evenson, L.K. Jost, D. Marshall et al. // Human reproduction. 1999. - №4. - P. 1039-1049.

97. Foresta, C. Inhibin В plasma concentrations in oligozoospermic subjects before and after therapy with follicle stimulating hormone /С. Foresta // Human reproduction. 1999. - №4. - P. 906-912.

98. Gandini, L. Study of apoptotic DNA fragmentation in human spermatozoa / L. Gandini, F. Lombardo, D. Paolo et al. // Human reproduction. 2000. - №15:4. - P. 830-839.

99. Giwerkman, A. Correlation between sperm motility and sperm chromatin structure assay parameters. / A. Giwerkman, J. Richthoff et al. // Fertility and sterility. -2003.-№80:6.-P. 1404-1412.

100. Gruschwitz Matthias S. Cytokine Levels in the Seminal Plasma of Infertile Males / Matthias S. Gruschwitz, Ruth Brezinschek, Hans-Peter Brezinschek // Journal of Andrology. 1996. -Vol. 17.-№2.-P. 158-163.

101. Hochreiter, W.W. Male accessory gland infection: standardization of inflammatory parameters including cytokines / W.W. Hochreiter // Andrology. -2003.-№35.-P. 300-303.

102. Hussenet, F. Tumour necrosis factor alpha and interleukin 2 in normal andinfected human seminal fluid / F. Hussenet, B. Dousset, J.L. Cordonnier, C. Jacob, B. Foliguet, G. Grignon, P. Nabet // Human Reproduction. 1993. - №3- P. 409-411.

103. Jarni, K. The finding of bacterias in the men semen by the PCR method / KJarni, Laerox I.-M. // Fertility and sterility. 1996. - №66. P. 109-111.

104. Kisa, Ufler. Seminal Plasma Transforming Growth Factor-p (TGF-p) and Epidermal Growth Factor (EGF) Levels in Patients with Varicocele / Ufler Kisa, Ba§ar M.Murad, Ferhat Mehmet, (^aglayan Osman // Turk J Med Science 2008. -№38(2).-P. 105-110.

105. Koumantakis, E. Increased levels of interleukin-8 in human seminal plasma / E. Koumantakis, I. Matalliotakis, D. Kyriakou, Y. Fragouli, K. Relakis // Andrologia .-1998.-V. 30. -P. 339-343.

106. Krause, W. Cellular and biochemical markers in semen indicating male accessory gland inflammation / W. Krause, C. Bohring, A. Gueth, S. Horster, A. Krisp, J. Skrzypek // Andrologia. 2003. - №35. - P. 279-282.

107. Lachaud, C. Apoptosis and necrosis in human ejaculated spermatozoa / C. Lachaud, J. Tesaric, M.L. Nacadas, C. Mendoza / Human reproduction. 2004. -№19:3.-P. 607-610.

108. Liu, D. Sperm nuclear chromatin normality: relationship with sperm morphology sperm zona pellucida binding and fertilization rates in vitro / D. Liu, Baker H.W. // Fertility and sterility. - 1992. - № 583:6. - P. 1178-1184.

109. Mather, J.P. Inhibin Activin and Their Binding Proteins Paracrine Regulators of Testicular Function / J.P. Mather, L.A. Krummen, P.E. Roberts, D.L Baly, Т.К. Woodruff // Serono Symposia Publications from Raven Press. 1994. - Vol.98. - P.67.80.

110. Molina, J. Chromatin status in human ejaculated spermatozoa from infertile patients and relationship to seminal parameters / J. Molina // Human Reproduction. -2001.-Vol.16.-№3.-P. 534-539.

111. Morrell, I. M. Reduced senescence and retained chromatin integrity in human sperm prepared by density gradient centrifugation / M. Morrell et al. / J. Andrology -2001.-№34.-P. 78-81.

112. Moskovtsev, S. Leukocytospermia: relationship to sperm desoxyribonucleic acid integrity in patients evaluated for male factor infertility / S. Moskovtsev // Fertility and sterility. 2007. - № 88:2. - P. 69-73.

113. Multukrishna, S. The contribution antimullers hormone and inhibin В in spermatogenesis damage / S. Multukrishna // Fertility and sterility. 2007. - №88:2. -P. 234-238.

114. Narenda, P. Singh. Effects of age on DNA double-strand breaks and apoptosis in human sperm / Narenda P. Singh et al. // Fertility and sterility. 2003. - №80(6). -P. 1420-1430.

115. Nasz-Esfahani, M.H. effect of sperm DNA damage and sperm protamine deficiency on fertilization and embryo development post ICSI / M.H. Nasz-Esfahani // Reproductive Biomedicine Online. 2005. - №8. - P. 198-205.

116. Naz, R. Interleukin-6 enchances the fertilizing capacity of human sperm by increasing capacitation and acrosome reaction / R. Naz, P. Kaplan // J. Androl. -1994. Vol.15. -№3. - P. 213-218.

117. Ombelet, W. Results of a questionnaire on sperm morphology assesment / W. Ombelet, H. Pollet, A. Bosmans / Human Reproduction. 1997. - №12. - P. 10151020.

118. O'Neill. Reduced sperm yield from testicular biopsies of vasectomized men is due to increasen apoptosis / O'Neill et al. // Fertility and sterility. 2007. - № 87:4. -P. 834-841.

119. Pierik, Frank Serum Inhibin В as a Marker of Spermatogenesis / Frank Pierik H., Jan T.M. Vreeburg, Theo Stijnen, Frank H.De Jong, Robertus F.A. Weber // Jornal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 1998. - Vol.83. - № 9. - P. 3110-3114.

120. Ramos, L. Assessment of DNA fragmentation of spermatozoa that were surgically retrieved from men with obstructive azoospermia / L. Ramos, P. Kleingeld, E. Meulman et al. // Fertility and sterility. 2002. - №77. - P. 233-237.

121. Rybar, R. Bull and boar sperm DNA integrity evaluated by sperm chromatinstructure assay in the Czech Republic / R. Rybar, L. Faldicova, M. Faldyna, M. Machatkova, J. Rubes // Vet. Medicine. Czech. - 2004. - №49(1). - P. 1-8.

122. Saleh, Ramadan A. Oxidative Stress and Male Infertility: From Research Bench to Clinical Practice / Ramadan A. Saleh, Ashok Agarwal // Journal of Andrology. 2002. - № 6. - Vol. 23. - P. 737-752.

123. Saleh, Ramadan A. Evaluation of nuclear DNA damage in spermatozoa from infertile men with varicocele / Ramadan A. Saleh et al. // Fertility and sterility.2003.-№12.-P. 1431-1436.

124. Schlegel, P.N. Yet another test of sperm chromatin structure / P.N. Schlegel, D.A. Paduch // Fertility and sterility. 2005. - №. 3 - P. 112-114.

125. Seli, E. Spermatozoal nuclear determinants of reproductive outcome: implications for ART / E. Seli, D. Sakkas // Human Reproduction Update. 2005. -№11:4.-P. 337-349.

126. Sharma, R. Sperm DNA damage and its clinical relevance in assessing reproductive outcome / R. Sharma, K. T.Said, A. Agarwal // Asian J Andrology2004.-№6.-P. 139-148.

127. Shimonovitz, S. High concentration of soluble interleukin-2 receptors in ejaculate with low sperm motility / S. Shimonovitz, V. Barak, D. Zacut, P. Ever

128. Hadani, A. Ben Chetrit, M. Ron // Human Reproduction. 1994. - №4. - P. 653-655.

129. Spano, M. Flow cytometric analysis for reproductive biology / M. Spano, D.P. Evenson//Biol. Cell. 1993.-Vol. 78.-№ 1-2.- P. 53-62.

130. Svenstrup, H. Mycoplasma genitalium attaches to human spermatozoa / H. Svenstrup // Human Reproduction. 2003. - Vol. 18. - № 10. - P. 2103-2109.

131. Tesaric, J. Late, but not early, paternal effect on human embryo development is related to sperm DNA fragmentation / J. Tesaric, E. Greco, C. Mendosa // Human reproduction. 2004. - № 3. - Vol.19.-P. 611-615,

132. Twigg, J.P. Oxidative damage to DNA in human spermatozoa does not preclude pronucleus formation at intracytoplasmic sperm injection / J.P. Twigg, D.S. Irvine, R.J. Aitcen // Human Reproduction. 1998. - №13. - P. 1864-1871.

133. Varum, S. Characterisation of human sperm populations using conventional parameters, surface ubiquitinations, and apoptosis marcers / S.Varum et al. // Fertility and sterility. 2007. - №87:3. - P. 572-583.

134. Zini, A. Correlations between two markers of sperm DNA integrity, DNA denaturation and DNA fragmentation, in fertile and infertile men / A. Zini, R. Bielcki, D. Phang et al. // Fertility and sterility. 2001. - №4. - P. 674-677.