Иммунологическая характеристика и клиническое значение опухолевых клеток, циркулирующих в периферической крови больных распространенным раком молочной железы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Бжадуг, Оксана Борисовна

• Бжадуг, Оксана Борисовна
• кандидат медицинских наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Бжадуг, Оксана Борисовна

Введение

Глава I. Обзор литературы.

Глава II. Характеристика больных и методы исследования

Результаты собственных исследований

Выявление микрометастазов рака молочной железы в костном мозге и периферической крови методом проточной цитофлуориметрии

Иммуноцитофлуорометрическое выявление циркулирующих опухолевых клеток у больных распространенным раком молочной железы

Иммунологическое определение опухолевых клеток в костном мозге

Субпопуляции циркулирующих опухолевых клеток, циркулирующих в периферической крови больных раком молочной железы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунологическая характеристика и клиническое значение опухолевых клеток, циркулирующих в периферической крови больных распространенным раком молочной железы»

Актуальность темы исследования

Заболеваемость раком молочной железы в России, как и во многих странах, продолжает расти. В структуре заболеваемости женщин рак молочной железы устойчиво занимает 1 место, при этом у 37,3% впервые заболевших женщин диагностируется III или IV стадии заболевания. Прирост заболеваемости раком молочной железы в России составил с 1999 по 2004 г. 6,8%. Прирост стандартизованного показателя смертности составил 2,9% [4]. В западных странах в последние годы наблюдается тенденция к увеличению продолжительности жизни больных раком молочной железы. Так в США пятилетняя выживаемость больных РМЖ составляет 81%, в Западной Европе - 71%, а в Восточной Европе - 58%. Улучшение показателей выживаемости в США и Западной Европе является результатом ранней диагностики и успешного лечения с использованием современных диагностических и лечебных мероприятий.

В последние годы особое внимание уделяется более точному стадированию заболевания, а также поиску методов таргетной терапии рака молочной железы. Большое значение придается изучению биологически значимых характеристик заболевания, которые могут помочь при выборе наиболее эффективного вида противоопухолевого лечения.

Развитие современных технологий сделало возможным определение единичных опухолевых клеток в биоптатах костного мозга и в периферической крови. Считается доказанным, что обнаружение на этапе постановки диагноза микрометастазов в костном мозге влияет на время продолжительность времени до прогрессирования и общую выживаемость больных операбельным РМЖ.

Клиническое значение иммунологического определения опухолевых клеток, циркулирующих в периферической крови, остается не до конца понятным. Опухоли молочных желез гетерогенны по иммунофенотипу, что находит отражение в особенностях клинического течения, степени распространенности процесса, характере иммунного ответа и прогнозе заболевания. Есть все основания предполагать, что гетерогенность иммунофенотипа рака молочных желез присуща и циркулирующим в периферической крови опухолевым клеткам. Следовательно, течение и прогноз заболевания может определяться не только фактом обнаружения опухолевых клеток в периферическом кровеносном русле, но и качественным составом этих клеток. Изучение иммунофенотипа циркулирующих опухолевых клеток, может быть полезным в понимании механизмов метастазирования и лекарственной устойчивости рака молочной железы.

В этой связи представляется актуальным изучение количественного и качественного состава опухолевых клеток, циркулирующих в периферической крови больных диссеминированным и местно-распространенным раком молочной железы.

Цель работы.

Целью настоящего исследования является иммунофенотипическое изучение количественного и качественного состава опухолевых клеток, циркулирующих в периферической крови и костном мозге больных диссеминированным и местно-распространенным раком молочной железы.

Задачи исследования.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

1. Установить количество циркулирующих опухолевых клеток в периферической крови больных местно-распространенным и диссеминированным раком молочной железы иммуноцитофлуорометрическим методом с использованием моноклональных антител к мембранным панэпителиальным антигенам Egp34 и ВегЕр4.

2. Провести количественную оценку клеток рака молочной железы в костном мозге иммуноцитологическим методом с использованием МКА к панцитокератинам KL-1.

3. Охарактеризовать субпопуляции циркулирующих в периферической крови клеток рака молочной железы на основании экспрессии мономорфных детерминант молекул гистосовместимости II класса (HLA-DR) и рецептора апоптоза FAS/APO-1 (CD95).

4. Оценить клиническую значимость определения циркулирующих опухолевых клеток и их количества в динамике в процессе специфической противоопухолевой терапии у больных местно-распространенным и диссеминированным раком молочной железы.

Научная новнзна.

Впервые установлена частота обнаружения (41,3%) и охарактеризован субпопуляционный состав циркулирующих опухолевых клеток в периферической крови больных местно-распространенным и диссеминированным раком молочной железы. Показано, что циркулирующие в периферической крови опухолевые клетки гетерогенны по экспрессии молекул главного комплекса гистосовместимости II класса (HLA-DR) и рецептора CD95. В большинстве случаев отмечена выраженная пропорция HLA-DR-негативных и CD-95-негативных клеток. Выявление ЦОК наблюдается достоверно чаще при инфильтративно-дольковом раке и у больных в менопаузе. Микрометастазы в костном мозге до лечения обнаруживаются в 55% случаев рака молочной железы III-IV стадий и не имеют прямой ассоциации с наличием циркулирующих опухолевых клеток в крови. Доказано, что использование проточно-иммуноцитофлуорометрической количественной идентификации циркулирующих опухолевых клеток в крови больных раком молочной железы на основании отсутствия обще-лейкоцитарных антигенов CD45 и экспрессии мембранных панэпителиальных антигенов (ВегЕр4 и Egp34) с точностью 1 опухолевая клетка на 1 миллион лейкоцитов позволяет оценивать динамику ЦОК и, в комплексе со стандартными диагностическими методами, эффективность проводимой химиотерапии.

Научно-практическая значимость.

Обоснована необходимость определения циркулирующих опухолевых клеток у больных раком молочной железы с целью совершенствования оценки степени распространенности рака молочной железы. Метод внедрен в клиническую практику отделения клинической фармакологии и химиотерапии НИИ КО ГУ РОНЦ им. Блохина Н.Н. РАМН. Показано, что динамика ЦОК в процессе лечения отражает эффективность лечения (продолжительность интервала без прогрессирования) и является ценным прогностическим показателем. При оценке субпопуляционного состава ЦОК отсутствие экспрессии молекул HLA-DR может служить указанием на необходимость применения индукторов экспрессии HLA-DR (например, интерферонов) в HLA-DR-негативных случаях с целью восстановления возможности распознавания микрометастазов иммунной системой организма.

По теме диссертации опубликовано 3 статьи в российской научной прессе. Тезисы по теме диссертации представлены на конференции Европейского общества медицинских онкологов (ESMO), состоявшейся в июне 2003 г.

Материалы диссертации доложены на IV Российской конференции с международным участием «Иммунология гемопоэза» (тема конференции «Микрометастазы рака), состоявшейся 6 июня 2007 года.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Бжадуг, Оксана Борисовна

выводы

1. Циркулирующие в периферической крови опухолевые клетки выявляются у 41,3% больных диссеминированным раком молочной железы на основании наличия мембранных панэпителиальных антигенов (Egp34, ВегЕр4) при отсутствии экспрессии CD45; они характеризуются низкими показателями гранулярности и гетерогенны по размеру

2. Циркулирующие в периферической крови клетки рака молочной железы гетерогенны по экспрессии молекул главного комплекса гистосовместимости II класса (HLA-DR) и рецептора CD95. В большинстве случаев отмечается выраженная пропорция HLA-DR-негативных и С095-негативных клеток, что свидетельствует о неспособности презентировать опухоле-ассоциированные пептиды CD4+ Т-лимфоцитам и невозможности реализации клеточной гибели путем CD-95-опосредованного апоптоза.

3. Циркулирующие опухолевые клетки в периферической крови больных РМЖ IIIb-IV стадий достоверно чаще выявляются при инфильтративно-дольковом раке по сравнению с инфильтративно-протоковым раком (69,2% и 31%, р = 0,02) и у больных в менопаузе (47,8% и 26,7%, р = 0,045).

4. Обнаружение клеток рака молочной железы в периферической крови больных РМЖ IIIb-IV стадий не имеет прямой ассоциации с наличием иммуноцитологически выявляемых микрометастазов в костном мозге.

5. Микрометастазы в костном мозге до лечения обнаруживаются в 54,8% случаев рака молочной железы IIIb-IV стадий. Наличие микрометастазов в костном мозге больных на момент начала лечения не влияет на продолжительность интервала без прогрессирования и общую продолжительность жизни в этой группе больных. Морфологически доказанное метастатическое поражение костного мозга при диссеминированном раке молочной железы достоверно ухудшает показатели выживаемости без прогрессирования по сравнению с больными без метастазов в костном мозге (р = 0,03).

6. Общая продолжительность жизни больных РМЖ с метастазами в кости (при отсутствии висцеральных метастазов) и наличием ЦОК в периферической крови до начала лечения меньше, чем у больных без ЦОК (11 и 21,5 месяцев соответственно, р = 0,06). Взаимосвязи наличия ЦОК с продолжительностью времени до прогрессирования у больных раком молочной железы IIIb-IV стадий не установлено.

7. Динамика содержания циркулирующих опухолевых клеток в процессе химиотерапии в 71% случаев совпадает с клинической оценкой эффективности лечения. При нарастании количества циркулирующих опухолевых клеток, несмотря на хороший клинический эффект (полная или частичная регрессия опухоли) отмечено прогрессирование заболевания в короткие сроки после окончания противоопухолевой терапии.

8. Динамика содержания циркулирующих опухолевых клеток в процессе химиотерапии является дополнительным, объективным критерием эффективности лечения. У больных без увеличения количества циркулирующих опухолевых клеток после проведения полихимиотерапии, наблюдается достоверно более длительная продолжительность интервала без прогрессирования по сравнению с больными, у которых в динамике отмечалось повышение уровня циркулирующих опухолевых клеток, р = 0,0126.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Бжадуг, Оксана Борисовна, 2007 год

1. Богатырев В.Н. Изучение содержания ДНК и РНК в клетках опухоли методом лазерной проточной цитофлуорометрии и иммунологических показателей у больных с новообразованиями молочных желез. Диссертация канд. мед. Наук. Москва, 1983 г.

2. Вартапетян А. Полимеразная цепная реакция. Молекулярная биология. Вып.4, 926-936, 1991г.

3. Гарин A.M. Адъювантная и неоадъювантная химиотерапия. Противоопухолевая химиотерапия. Справочник под редакцией Н.И. Переводчиковой. стр. 176-177, 1996г.

4. Давыдов М.И., Аксель Е.М. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2004г. Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, т. 17, №3 (прил.1) 2006.

5. Давыдов М.И., Демидов Л.В., Поляков Б.И. Основы современной онкологии, Москва 2002, стр. 21-24.

6. Дейчман Г.И. Иммунологический надзор организма и отбор опухолевых клеток в процессе роста и прогрессии опухолей. Глава IX. 4 в издании Канцерогенез под редакцией Заридзе Д.Г. Москва. 2000.

7. Крохина О.В., Летягин В.П., Тупицын Н.Н. и соавторы. Рак молочной железы. Микрометастазы в костный мозг. Вестник Российского Онкологического Научного Центра РАМН имени Н.Н. Блохина. стр. 15-20, 3/2002.

8. Летягин В.П., Паниченко А.В., Крохина О.В. и др. Иммуноморфологическое стадирование рака молочной железы. Вестник Российского Онкологического Научного Центра РАМН имени Н.Н. Блохина. 2001 №3ю С. 44-47.

9. Луговская С.А., Почтарь М.Е., Тупицын Н.Н. Иммунофенотипирование в диагностике гемобластозов. Москва 2005.

10. Лушпикое Е.Ф., Амбросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз). Москва, 2001г.

11. Моисеенко В.М. "Естественная история " роста рака молочной железы. «Практическая онкология: избранные лекции" под редакцией С.А. Тюляндина и В.М. Моисеенко. 2004. Стр. 22.

12. Моисеенко В.М., Семиглазов В.Ф., Тюляндин С.А. Современное лекарственное лечение местно-распространенного и метастатического рака молочной железы. 1997. Стр. 11-25.

13. Перадзе М. Бесцитокиновая мобилизация стволовых гемопоэтических клеток у больных раком молочной э/селезы. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. 2004.

14. Петров С. В., Райхлин Н.Т. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. 2000.

15. Семиглазов В.Ф. Адъювантная химиотерапия рака молочной железы. Материалы IV Российской Онкологической Конференции. 2000 г, стр. 35 -40.

16. Семиглазов В.Ф. Меняющаяся роль хирургического и системного лечения операбельного рака молочной железы. Материалы VI Российской Онкологической Конференции. 2002 г, стр. 10-12.

17. Семиглазов В.Ф., Нургазиев К.Ш., Арзуманов А.С. и соавторы. Опухоли молочной железы (лечение и профилактика). Алматы, 2001. — 345с.

18. Ставровская А.А. Механизмы лекарственной устойчивости опухолевых клеток. Глава XII.2. в издании Канцерогенез под редакцией ЗаридзеД.Г. Москва. 2000.

19. Талаева Ш.Ж., Швецова Г.Н., Тулеуов А.Е. Апоптоз, опосредованный системой Fas-FasL (глава 8 в издании Рак молочнойжелезы под редакцией Н.Е. Кушлинского, С.М. Портного, К.П. Лактионова, Москва 2005).

20. Тупицын Н.Н. Иммунофенотип рака молочной железы (глава 2 в издании Рак молочной железы под редакцией Н.Е. Куишинского, С.М. Портного, К.П. Лактионова, Москва 2005.

21. Тюляндин С.А. Системная терапия операбельного рака молочной железы. «Практическая онкология: избранные лекции» под редакцией С.А. Тюляндина иВ.М. Моисеенко. 2004. Стр. 73-83.

22. Херрингтон С, Макги Д. Современная клиническая диагностика. Методы. 1999.

23. Aerts J, Wynendaele W, Paridaens et al. A real-time quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) to detect breast carcinoma cells in peripheral blood. Annals of Oncology 12: 39-46, 2001.

24. Baselga J., Tripathy D., Mendelsohn J. et al Phase II study of weekly intravenous recombinant humanized anti-pl85Her2 monoclonal antibody in patients with Her2/neu-over- expressing metastatic breast cancer. J. Clin. Oncol., 14: 737-744, 1996.

25. Berger U, Bettelheim R, Mansi JL et al. The relationship between micrometastasis in the bone marrow, histopathologic features of the primary tumor in breast cancer and prognosis. Am J Clin Pathol 90, 1-6, 1994.

26. Braun S, Kentenich C, Janni W et al. Lack of effect of adjuvant chemotherapy on the elimination of single dormant tumor cells in bone marrow of high-risk breast cancer patients. J Clin Oncol 2000, 18, 80-86.

27. Braun S, Pantel К et al. Prognostic significance of micrometastatic bone marrow involvement. Breast Cancer Res. Treat. — 1998 — Nov.- 52 (1/3)-P. 201-216.

28. Brown S. A pooled analysis of bone marrow micrometastasis in breast cancer. New England Journal of Medicine, 2005 Aug 25; 353(8) :793-802.

29. Braun S., Cevatli S., Assemi C. et al. Comparative analysis of Micrometastasis to the Bone marrow and Lymph Nodes of Node-Negative Breast Cancer Patients Receiving No Adjuvant therapy. J Clin Oncol, Vol 19, No5 (March 1), 2001: pp 1468-1475.

30. Braun S., Schlimok G., Heumos I. et al. erbB2 Overexpression on Occult Metastatic Cells in Bone Marrow Predicts Poor Clinical Outcome of Stage I-III Breast Cancer Patients. Cancer Research 61, 1890-1895, March 1, 2001.

31. Coombes RC, Berger U. Easton D et al. Prognostic significance of micrometastasis in Bone Marrow of patients with Primary Breast Cancer. Natl Cancer Inst Monogr 1986,1, 51-53.

32. Conha A., Cabrera Т., Ruiz-Cabello F., Garrido F. Can the HLA phenotype be used as a prognostic factor in breast carcinomas. //Int. J. Cancer. -1991. -V.6. -P. 146-154.

33. Conha A., Ruiz-Cabello F., Cabrera T. et al. Different patterns of HLA-DR antigen expression in normal epithelium, hyperplastic and neoplastic malignant lesions of the breast. //Eur. J. Immunogenet. //1995. -V.22, N4. -P.299-310.

34. Cote RJ, Rosen PP, lesser ML et al. Prediction of early relapse in patients with operable Breast Cancer by the detection of occult Bone Marrow Micrometastasis. J. Clin. Oncol. 1991,9,1749-1756;

35. Cristofanilli M., Budd G., Ellis M. et al. Circulating tumor cells, Disease Progression, and Survival in Metastatic Breast Cancer. New England Journal of Medicine. Vol. 351: 781-791 August 2004.

36. De Vita VT, Hellman S, Rosenberg SA. Cancer. Principles and Practice of Oncology. 6th Edition.

37. Dickson RB, Lippman ME Molecular Basis of breast cancer. Molecular Basis of cancer, Second edition: 313-342.

38. Diel I J, Kaufmann M, Costa SD, Holle R, Minckwitz GV et al. Micrometastatic breast cancer cells in bone marrow at primary surgery: prognostic value in comparison with nodal status. JNCO 88: 1652-1658, 1997.

39. Diel IJ, Kaufmann M, Goerner R et al, Detection of tumor cells in bone marrow ofpatients with primary breast cancer. A prognostic factor for distant metastasis. J. Clin. Oncol. 10(10): 1534-1539, 1992.

40. Diel I J, Solomayer E, Costa S et al. Reduction in new metastases in breast cancer with adjuvant clodronat treatment. N Engl. J. Med 1998; 339: 357-363.

41. Ditsch N, Mayer B, Rolle M, Untch M. Estrogen receptor expression profile of disseminated epithelial tumor cells in bone marrow of breast cancer patients. Recent Results Cancer Res. 2003;162:141-7.

42. Fehm Т., Sagalowsky A., CliffordE. et al. Cytogenetic Evidence That Circulating Epithelial Cells in Patients with Carcinoma Are Malignant. Clinical Cancer Research Vol. 8, 2073-2084, July 2002

43. Fidler IJ. Modulation of the organ microenvironment for treatment of cancer metastasis. J Natl Cancer Inst 1996; 87:1588-92.

44. Fisher B, Osborn K, Margolese R et al. Neoplasms of the breast. // Cancer medicine. 3d edition./Ed. By J. Holland et al. 1993. P. 1706-1774.

45. FolkmanJ: Tumor angiogenesis. Therapeutic implications. N Engl J Med 285:1182-1186, 1971

46. Franke W. W, Schiller D.L., Moll R., Winter S., Schmid E. Et al. Diversity of cytokeratins: differentiation specific expression of cytokeratin polypeptides in epithelial cells and tissues. J.Mol. Biol. — 1981 #153 — P. 933-959.

47. Funke I, Schraut W. Meta-analyses of studies on bone marrow micrometastasis: an independent prognostic impact remains to be substantiated. //J. Clin. Oncol. 1998 16, №2 - 557-566.

48. Funke I., Fries S., Rolle M et al. Comparative analyses of bone marrow micrometastases in breast and gastric cancer. // Int. J. Cancer — 1996-March, 15- Vol.65 №6-P. 755-761.

49. Gafforio JJ, Serrano MJ, Sanches-Rovira P et all. Detection of breast cancer cells in the peripheral blood is positively correlated with estrogen-receptor status and predicts for poor prognosis. Int J Cancer 2003 Dec 20; 107 (6): 984-90.

50. Gebauer G, Fehm T, Merkle E et al. Epithelial Cells in Bone Marrow of Breast Cancer Patients at time of Primary Surgery: Clinical

51. Outcome During Long-Term Follow-Up. J. Clin. Oncol 2001, 16, 36693674

52. Gerber В., Krause A., Muller et al. Simultaneus Immunohistochemical Detection of Tumor Cells in Lymph Nodes and Bone Marrow Aspirates in Breast Cancer and Its Correlation With Other Prognostic Factors. J. Clin. Oncol. 2001, 19, 960-971.

53. Ghossein R., Bhattacharya S., Rosai J. Molecular Detection of Micrometastases and Circulating Tumor Cells in Solid Tumors. Clinical Cancer Research Vol. 5, 1950-1960, August 1999.

54. Guba M., Cernaianu G., Koehl G. A Primary Tumor Promotes Dormancy of Solitary Tumor Cells before Inhibiting Angiogenesis. Cancer Research 61, 5575-5579, July 15, 2001.

55. Harbeck N, Untch M, Pache L et al. Tumor cell detection in the bone marrow of breast cancer patients at primary therapy: results of a 3-year median follow up. . Br J Cancer 69: 566-571, 1994.

56. Ikeda N, Miyoshi Y, Motomura К et al. Prognostic significance of occult bone marrow micrometastases of breast cancer detected by quantitative polymerase chain reaction for cytokeratin 19 mRNA. Jpn J Cancer Res. 2000 Sep;91 (9) :918-24.

57. Jung Y, Lee K, Kim H et al. Clinical Significance of Bone Marrow Micrometastasis Detected by Nested RT-PCR for Keratin-19 in Breast Cancer Patients. Japanese Journal of Clinical Oncology 33:167-172, 2003

58. Kerbel R.S. Inhibition of tumor angiogenesis as a strategy to circumvent acquired resistance to anti-cancer therapeutic agents. BioEssaya 1991; 13:31-6.

59. Kirk SJ, Cooper GG, Hoper M et al. The prognostic significance of marrow micrometastases in women with early breast cancer. European Journal Surgical Oncology 1990; 16: 481-485.

60. Klein С A, Blankenstein TJ, Schmidt-Kittler О et al. Genetic heterogeneity of single disseminated tumour cells in minimal residual cancer. Lancet 2002 Aug 31; 360 (9334): 683-9

61. Kohn EC, Liotta LA Metastasis and Angiogenesis: Molecular Dissection and Novel Application. Molecular Basis of cancer, Second edition: 163-171.

62. Kraeft S., Sutherland R., Gravelin L. et al. Detection and Analysis of Cancer Cells in Blood and Bone Marrow Using a Rare Event Imaging System. Clinical Cancer Research Vol. 6, 434-442, February 2000.

63. Kvalheim G., Naume В., Nesland J. et al. Minimal residual disease in breast cancer. Cancer and Metastasis Reviews 18: 101-108, 1999.

64. Litle VR, Lockett SJ, Palavicini MG. Genotype/phenotype analyses of low frequency tumor cells using computerized image microscopy. Cytometry 1996; 23:244-349.

65. Luzzi K. J., MacDonald I. C., Schmidt E. E. Dormancy of Solitary Cells after Successful Extravasation and Limited Survival of Early Micrometastases. American Journal of Pathology. 153:865-873, 1998.

66. Manhani AR, Manhani R, Soares et al. CK-19 expression by RTPCR in the peripheral blood of breast cancer patients correlates with response to chemotherapy. // Breast Cancer Res. Treat. — 2001 — Apr. Vol.66-M3-P.249-254.

67. Mansi Jl, Easton D, Berger U, et al. Bone Marrow Micrometastasis in Primary Breast Cancer: prognostic significance after 6 years follow-up. Eur. J. Cancer 1991, 27, 1552-1555

68. Mansi Jl. Outcome of primary-breast-cancer patients with micrometastases: a long-term follow-up study. Lancet 1999; 354:195-200.

69. Menard S, Squicciarini P, Luini A et al. Immunodetection of bone marrow micrometastases in breast carcinoma patients and its correlation with primary tumor prognostic features. Br J Cancer 69: 1126-1129, 1994.

70. Molino A., Pelosi G., Micciolo R. et al. Bone marrow micrometastases in breast cancer patients. Breast Cancer Research and Treatment 58, 123-130, 1999.

71. Moll R., Franke W.W., Schiller D.L. The catalog of human Cytokeratins: patterns of expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. //Cell. 1982-Nov. Vol. 31-P. 11-24.

72. Momburg F., Moldenhauer G., Hammerling G.J., Moller P. Immunohistochemical study of the expression of a Mr 34000 human epithelium specific surface glycoprotein in normal and malignant tissues. Cancer Res. 1987. V.47. P.2883-2891.

73. Mori, Datta Y., Adams P., Drobyski W. Sensitive detection of occult breast cancer by reverse-transcriptase polymerase chain reaction. J Clin Oncol. 1994 Mar; 12 (3):475-82.

74. Muller P., Weckerman D., Riethmuller G et al. Detection of genetic alterations in micrometastatic cells in bone marrow of cancer patients by fluorescence in situ hybridization. Cancer Genet Cytigenet 1996; 88: 8-16.

75. Naumov G., MacDonald I., Weinmeister P. Persistence of Solitary Mammary Carcinoma Cells in a Secondary Site. A Possible Contributor to Dormancy. Cancer Research 62, 2162-2168, April 1, 2002.

76. Offner S., Schmaus W., Witter K. et al. p53 gene mutations are not required for early dissemination of cancer cells. PNAS Vol.96, Issue 12, 6942-6946, 1999.

77. Palmieri G, Ascierto P, Perrone F et al. Prognostic Value of Circulating Melanoma Cells Detected by Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction. J. Clin. Oncol, Vol 21, Issue 5 (March), 2003: 767-773

78. Pantel K, Aignher C, Kollermann J et al Immunocytochemical Detection of isolated tumour cells in bone marrow ofpatients with untreatedstage С prostatic cancer. Eur. J. Cancer. 1995 - Vol. 31A - 10-P. 16271632.

79. Pantel K, Schlimock G, Braun S et al. Differential expression of proliferation-associated molecules in individual micrometastatic carcinoma cells. J.Natl. Cancer Inst.-1993- Vol. 85-P. 1419-1424 95

80. Pantel K. Detection and clinical relevance of micrometastatic cancer cells. Current Opinion in oncology 2000; 12:95-101.

81. Pantel K., Cote R., Fodstad J. Detection and Clinical Importance of Micrometastatic Disease. Journal of the National Cancer Institute, Vol. 91, No. 13, 1113-1124, July 7, 1999.

82. Pantel K., Schlimok G., Kutter D. Frequent down-regulation of major histocompatibility class I antigen expression on individual micrometastatic carcinoma cells. Cancer Research, Vol 51, Issue 17 47124715.

83. Racila E., Euhus D., Weiss A.J. et al. Detection and characterization of carcinoma cells in the blood. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1998 April 14; 4589-45-94.

84. Rak J, Filmus J, Kerbel RS. Reciprocal paracrine interactions between tumour cells and endothelial cells: the "angiogenesis progression" hypothesis. Eur J Cancer 1996; 32A: 2438-50.

85. Redding WN, Monaghan P, Imrie SF, et al. Detection of micrometastasis in patients with primary breast cancer. Lancet 1983, 2, 1271-1274. J

86. Salvadori B, Squicciarini P, Rovini D et al. Use of monoclonal antibody MBrl to detect micrometastases in bone marrow specimens of breast cancer patients. Eur J Cancer 26 (8): 865-867, 1990

87. Schindlbeck C, Janni W, Schaffer P et al. Tumor biology of primary breast cancer and minimal residual disease. Acta Med Austriaca 2002; 29 Suppl 59: 27-31

88. Schleiermacher G., Peter M., Oberlin O. et al. Increased Risk of Systemic Relapses Associated With Bone Marrow Micrometastasis and Circulating Tumor Cells in Localized Ewing Tumor. J. Clin. Oncol. 2003, 21:85-91.

89. Sehouli J, Konsgen D, Nimpsch R et al. Prognostic significance of epithelial cells in the blood of patients with gynecological malignancies. Anticancer Res. 2003 Sep-Oct; 23(5b): 4133-40.

90. Slade MJ, Smith BM, Sinnet HD et al. Quantative polymerase chain reaction for the detection of micrometastases in patients with breast cancer. J. Clin. Oncol. 17: 870-879, 1999.

91. Smith B, Selby P, Southgate J et al. Detection of melanoma cells in peripheral blood by means of reverse transcriptase and polymerase chain reaction. Lancet- 1991. Vol.338. P. 1227-1229.

92. Solomayer EF, Diel I J, Meyberg GC et al. Prognostic relevance of cathepsin D detection in micrometastatic cells in the bone marrow of patients with primary breast cancer. Breast Cancer Res Treat 1998 May; 49 (2): 145-54.

93. Stathopoulou A, Vlachonikolis D, Mavroudis D et al. Molecular detection of Cytokeratin-19-Positive Cells in the Peripheral Blood of Patients With Operable Breast Cancer: Evaluation of Their Prognostic Significance. J. Clin. Oncol. 2002,16, 3404-3412

94. Thurm H, Ebel S, Kentenich et al. Rare expression of epithelial cell adhesion molecule on residual micrometastatic breast cancer cells after adjuvant chemotherapy. Clin Cancer Res. 2003 Jul; 9 (7):2598-604.

95. Triparaneni G., Smith B.M., Singh A. et al. Monitoring minimal residual disease during adjuvant therapy in breast cancer (4 year follow-up). Annual meeting summaries, 2003

96. Uhr JW, Scheuermann RH, Street NE, Vitetta ES. Cancer dormancy: opportunities for new therapeutic approaches. Nat Med. 1997 May;3 (5):505-9.

97. Vogel I, Kalthojf H, Henne-Bruns D, Kremer B. Detection and prognostic impact of disseminated tumor cells in pancreatic carcinoma. Pancreatology 2002; 2 (2): 79-88

98. Wells C.A., Heryet A., Brochier J. et al. The immunocytochemical detection of axillary micrometastases in breast cancer. Br. J. Cancer. 1984. V50. P. 193-197.

99. Weitz J, Kienle P, Magener A, Koch M et al. Detection of disseminated colorectal cancer cells in lymph nodes, blood and bone marrow. Clin Cancer Res 1999 Jul; 5 (7): 1830-1836

100. Wiedswang G., Borgen E., Karesen R et al. Detection of isolated tumor cells in bone marrow is an independent prognostic factor in breast cancer. J. Clin. Oncol. 21(18): 3469-3478, 2003.

101. Winter S., Jarasch E.D., Schmid E„ Franke WW, Denk H. Differences in polypeptide composition of cytokeratin filaments, including tonofilaments, from different epithelial tissues and cells. //Eur. J. Cell Biol. -1980 -#22- P.371.0 /ЬО

102. Wong N.S., Kahn H.J., Zhang L. et al. Prognostic significance of circulating tumour cells enumerated after filtration enrichment in early and metastatic breast cancer patients.// Breast Cancer Res Treat. 2006 Mar 16

103. Xenidis N, Vlachonikolis I., Mavroudis D et al. Peripheral Blood circulating cytokeratin-19 mRNA-positive cells after the completion of adjuvant chemotherapy in patients with operable breast cancer. Annals of Oncology 14: 849-855, 2003.

104. Zhang J, Shen KW, Liu G et al. Antigenic profiles of disseminated breast tumor cells and microenvironment in bone marrow. Eur J Surg Oncol 2003 Mar; 29 (2): 121-126

105. Zia A, Schildberg FW, Funke I et al. MHC class I negative phenotype of disseminated tumor cells in bone marrow is associated with poor survival in ROMO breast cancer patients. Int J Cancer 2001 Aug 15; 93 (4): 566-70.