Иммунофлюоресцентные зонды для фенотипирования лейкоцитов онкологических больных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат наук Захарова, Елена Николаевна

• Захарова, Елена Николаевна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Захарова, Елена Николаевна

Оглавление

ВВЕДЕНИЕ

Цель исследования

Задачи исследования

Научная новизна

Научно-практическая значимость

Внедрение результатов в клиническую практику

Личный вклад

Соответствие паспорту специальности

Публикации

Положения, выносимые на защиту

Апробация результатов

Структура диссертации

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ИММУНОФЕНОТИПИРОВАНИЕ ЛЕЙКОЦИТОВ В ОНКОЛОГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ

1.1. Проточная цитометрия как современный метод анализа клеточных популяций

1.2. Характеристика флуорофоров, используемых в проточной цитометрии для конъюгирования с моноклональными антителами

1.3. Иммунологические маркеры

1.4. Практическое использование проточной цитометрии в научных и

клинических исследованиях в онкологической практике

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.2. Доноры и онкологические больные

2.3. Получение асцитической жидкости

2.4. Выделение и очистка антител

2.5. Определение концентрации белка методом спектрофотометрии

2.6. Метод гель-фильтрации

2.7. Выделение мононуклеарных клеток периферической крови

2.8. Активация лимфоцитов ФГА

2.9. Прямая реакция иммунофлуоресценции (РИФ)

2.10. Непрямой метод иммунофлуоресцентного анализа

2.11. Метод проточной цитометрии

2.12. Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ СОБСТВЕННЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Получение флуоресцентных зондов на основе МКА серии ИКО и флуоресцентных красителей

3.1.1. Получение конъюгатов МКА с цианиновыми красителями 1тё-306, 1тё-504/506/507 и СуЗ

3.1.2. Получение конъюгатов МКА с синтетическим флуорофором А1еха-488

3.1.3. Получение конъюгатов МКА с флуорофором группы фикобилипротеинов

R-PE (фикоэритрин)

3.2. Исследование биологической активности полученных флуоресцентных зондов в одноцветном анализе субпопуляций лимфоцитов методом проточной цитофлуориметрии. Определение рабочих концентраций конъюгатов моноклональных антител с флуоресцентными зондами

3.2.1. Изучение биологической активности конъюгатов МКА с цианиновыми флуорофорами СуЗ, Imd-306, Imd-506

3.2.2. Изучение биологической активности конъюгатов МКА с синтетическим флуорофором А1еха-488

3.2.3. Изучение биологической активности конъюгатов МКА с РЕ

3.2.4. Исследование биологической активности полученных флуоресцентных зондов в многоцветном анализе субпопуляций лимфоцитов методом проточной цитофлуориметрии

3.2.4.1. Двухцветный анализ

3.2.4.2. Трехцветный анализ

3.3 Клиническая апробация набора флуоресцентных зондов

ГЛАВА 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СОКРАЩЕНИЯ, ВСТРЕЧАЮЩИЕСЯ В ТЕКСТЕ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунофлюоресцентные зонды для фенотипирования лейкоцитов онкологических больных»

ВВЕДЕНИЕ

Успехи лечения онкологических больных напрямую зависят от уровня и точности диагностических мероприятий, в том числе от результатов проводимых клинико-лабораторных исследований. Особенно отчетливо это прослеживается на примере диагностики и лечения гемобластозов, когда внедрение методов иммунологического фенотипирования клеток крови и костного мозга позволило разработать принципиально новые, эффективные схемы лечения заболеваний. Кроме того, в настоящее время в мире проводятся интенсивные исследования механизмов генерации противоопухолевого иммунного ответа у больных со злокачественными солидными новообразованиями и поиск прогностических иммунологических маркеров, коррелирующих с течением заболевания и клинической эффективностью лечения.

Так, определена роль «контрольных точек иммунитета» (immune checkpoint) — молекул, экспрессирующихся на определенных линейных (Т; B;NK) субпопуляциях лимфоцитов, и являющихся мишенями для таргетной иммунотерапии больных с солидными новообразованиями. При этом мониторинг иммунологических показателей является обязательной составляющей иммунотерапии с целью разработки индивидуальных подходов к назначению блокаторов «контрольных точек иммунитета» [Кадагидзе, З.Г., 2013].

На сегодняшний день методом предпочтения в научно-практической работе современной клинико-иммунологической лаборатории является проточная цитометрия. [Хайдуков C.B., 2010; Боженко В.К., 2009]. Этот метод позволяет проводить многопараметровые исследования на уровне единственной иммунокомпетентной клетки в пределах многоклеточного организма и оценивать фенотипическую и функциональную гетерогенность отдельных клеточных популяций [Симонова A.B., 2001].

Вместе с тем, по мере расширения технических и методических возможностей для выполнения лабораторных исследований, усложняются и аналитические задачи. Так, если еще недавно для количественного определения субпопуляций лейкоцитов считалось достаточным использовать монохромный

анализ клеточной популяции по единственному маркеру, то сейчас, согласно современным представлениям, следует выполнять комплексное исследование популяции одновременно по нескольким антигенам. Использование многоцветного (мультипараметрического) цитометрического анализа, который позволяет получать информацию о наличии и коэкспрессии нескольких антигенов на поверхности отдельных клеток, проводить оценку популяционного и субпопуляционного состава многокомпонентных клеточных систем. Для выполнения таких анализов применяются смеси нескольких флуоресцентных зондов (конъюгатов), каждый из которых обладает собственной антигенной специфичностью и индивидуальными спектральными характеристиками. Соответственно, возможности метода прямо зависят от разнообразия и свойств применяемых флуоресцентных зондов, подавляющее количество которых получают конъюгированием специфических для анализируемых молекул лигандов, в том числе — моноклональных антител к поверхностным и внутриклеточным антигенам, с флуорофорами. Данные лабораторные тест-системы являются необходимым компонентом не только для научных исследований в области онкологии, иммунологии, эпидемиологии, генетике, но и в широкой клинической практике.

В Российском онкологическом научном центре им. H.H. Блохина под руководством профессоров А.Ю. Барышникова и З.Г. Кадагидзе были получены и охарактеризованы моноклональные антитела (МКА) серии ИКО. Эти МКА более 30 лет используются в научной и диагностической работе лабораторий РОНЦ им. H.H. Блохина, а также в научных и лечебных учреждениях России как в реакциях непрямой, так и прямой иммунофлуоресценции (в виде конъюгатов с FITC и РЕ).

В ФГБУН «Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта» РАН

синтезирована группа оригинальных цианиновых флуорофоров, сходных по

физико-химическим свойствам с СуЗ и Су5, в частности соединения Imd-306 и

Imd-506 [Кузнецова В.Е., 2007-2008]. Для возбуждения флуоресценции Imd-306

необходим лазер с длиной волны 488,5 нм, для Imd-506 — красный диодный 635

нм, что делает последний потенциально пригодным не только для прямого

5

конъюгирования с биоактивным лигандом и последующего использования полученных зондов в двух-трехлазерных проточных цитометрах, но и для создания «тандемных» меток.

Таким образом, получение флуоресцентных зондов на основе отечественных моноклональных антител серии ИКО к дифференцировочным антигенам лейкоцитов человека и активных форм флуорофоров, в том числе, синтезированных в нашей стране, является актуальной задачей.

Цель исследования

Создание флуоресцентных зондов на основе моноклональных антител серии ИКО для анализа субпопуляционной структуры лейкоцитов онкологических больных методом проточной цитометрии.

Задачи исследования

1. Оптимизировать методы очистки моноклональных антител серии ИКО и способы их конъюгирования с флуорофорами РЕ, А1еха488 и СуЗ, а также с отечественными цианиновыми красителями Imd-306 и Imd-506/507/504.

2. Получить конъюгаты моноклональных антител серии ИКО к антигенам лимфоцитов человека CD4, CD8, CD16, CD20, CD25, CD38 и HLA-DR с флуоресцентными красителями РЕ, А1еха488, СуЗ, Imd-306 и Imd-506/507/504.

3. Исследовать специфическую активность созданных флуоресцентных зондов для оптимизации условий одноцветного анализа клеточных популяций методом проточной цитометрии.

4. Сформировать наборы флуоресцентных зондов для иммунофенотипирования лейкоцитов онкологических больных.

5. Оценить возможность применения и внедрения в практику полученных флуоресцентных зондов в исследования клеточных популяций в норме и у онкологических больных.

Научная новизна

Впервые получен набор флуоресцентных зондов на основе уникальных отечественных материалов — моноклональных антител серии ИКО и флуоресцентных красителей для мультипараметрического анализа клеточных популяций методом проточной цитометрии. Впервые в качестве флурофоров для создания конъюгатов с моноклональными антител использовались отечественные цианиновые красители Imd-ряда.

Научно-практическая значимость

Получена панель моноклональных антител серии ИКО к дифференцировочным антигенам лейкоцитов человека, конъюгированных с различными флуорохромами для исследования субпопуляционной структуры клеточного звена иммунитета больных с солидными новообразованиями. Создание и внедрение в практику многоцветных флуоресцентных зондов на основе моноклональных антител серии ИКО позволит отказаться от закупки дорогостоящих импортных аналогов.

Внедрение результатов в клиническую практику

Результаты исследования внедрены в практическую деятельность централизованного клинико-лабораторного отдела Научно-исследовательского института клинической онкологии ФГБНУ «РОНЦ им. H.H. Блохина».

Личный вклад

Автором самостоятельно проведен анализ отечественной и зарубежной литературы по теме диссертации, лично получены конъюгаты МКА с флуоресцентными красителями СуЗ, 1пк1-306, 1шё-506, А1еха-488, проведена оценка специфической активности полученных зондов, осуществлен анализ и интерпретация результатов работы, статистическая обработка полученных данных, написана и оформлена диссертационная работа.

Соответствие паспорту специальности

Научные положения диссертации соответствует паспорту специальности 14.01.12 онкология, конкретно пункту 3.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК МОН РФ.

Положения, выносимые на защиту

1. Оптимизированы методы выделения и очистки МКА серии ИКО и способы

их конъюгирования с флуорофорами РЕ, СуЗ, А1еха-488,1тс1-306 и 1тс1-506.

2. Конъюгирование МКА с флуорофорами не меняет иммунологические свойства антител. Вместе с тем, уникальность каждого клона гибридом-продуцентов МКА серии ИКО требует индивидуального подбора флуорофоров.

3. Продемонстрированы возможности одно-, двух-, трехцветного анализа субпопуляций лимфоцитов человека методом проточной цитометрии.

4. В результате проведенных исследований сформированы наборы флуоресцентных зондов, позволяющие проводить популяционный и субпопуляционный анализ лимфоцитов онкологических больных методом проточной цитофлуориметрии.

5. Клиническая апробация разработанных наборов с использованием периферической крови здоровых доноров и онкологических больных показала их высокую диагностическую эффективность, не уступающую зарубежным аналогам.

Апробация результатов

Диссертационная работа апробирована и рекомендована к защите 27 февраля 2015 года на совместной научной конференции с участием лаборатории медицинской биотехнологии, лаборатории фармакоцитокинетики, лаборатории

экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей, лаборатории клеточного иммунитета, лаборатории комбинированной терапии опухолей, лаборатории медицинской химии Научно-исследовательского института экспериментальной диагностики и терапии опухолей, с участием лаборатории клинической иммунологии опухолей централизованного клинико-лабораторного отдела Научно-исследовательского института клинической онкологии ФГБНУ «РОНЦ им. H.H. Блохина».

Структура диссертации

Диссертация изложена на 181 страницах машинописного текста, состоит из

глав «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты и обсуждение собственных исследований», «Заключение», «Выводы» и «Список литературы». Указатель литературы содержит 185 источников, из которых 80 отечественных и 105 иностранных. Работа иллюстрирована 9 таблицами, 74 рисунками.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ИММУНОФЕИОТИПИРОВАНИЕ ЛЕЙКОЦИТОВ В

ОНКОЛОГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ

1.1. Проточная цитометрня как современный метод анализа клеточных популяций.

Метод проточной цитометрпи (ПЦ) широко используется в клинической практике и научно-исследовательской работе в области медицины и биологии для многофакторного анализа состава и свойств клеточных популяций. Эта современная и информативная технология быстрого анализа клеточных субпопуляций пришла на смену традиционным гистохимическим и цитохимическим методам анализа [43, 82, 115].

Ряд существенных преимуществ делают этот метод особенно ценным для исследований в области онкологии. Благодаря огромной производительности этой технологии стало возможным обнаружить и охарактеризовать редкие события,

5 7

т.е. встречающиеся с частотой 10" -10" . Современные цитометры могут регистрировать несколько параметров для каждой отдельной клетки со скоростью до 100000 клеток в секунду, что гарантирует статистическую достоверность результатов [96].

Так, с помощью проточной цитометрии можно охарактеризовать

гетерогенные клеточные популяции по фенотипу, выявить отклонения,

происходящие в процессе онкогенеза [4, 36]. Этот метод дает возможность быстро

и объективно определять особенности пролиферации и достоверно выявлять

аномальное содержание ДНК в ядрах опухолевых клеток, анализировать

параметры клеточного цикла [6]. С помощью метода проточной цитометрии

показана связь между показателями клеточного иммунитета больных с

солидными опухолями и отдаленными клиническими результатами лечения [81,

27, 28, 29, 30, 129, 124, 161, 102] Изучение линейной структуры

иммунокомпетентных клеток у первичных больных необходимо для назначения

адекватной специфической терапии. Невозможно и проведение иммунотерапии

10

онкологическим больным без мониторинга иммунологических показателей [10, 9, 7, 8, , 37, 74, 76, 77]. С применением метода ПЦ решено множество задач биологии клетки, иммунологии, клеточной инженерии [46, 47, 32, 71, 72, 70]. К ним можно отнести определение антиген-специфических клеток с использованием технологии тетрамеров, цитометрическое определение цитокинов в биологических жидкостях, определение чувствительности базофилов in vitro в ответ на действие аллергенов, определение по мембранным маркерам хелперов первого типа и Т-регуляторных клеток [71].

На данный момент существует два направления метода: проточная цитометрия и проточная цитометрия-сортировка. Если первое направление представляет собой исключительно аналитический подход, то второе позволяет проводить сортировку клеток по интересующим исследователя характеристикам и проводить работу с отобранными субпопуляциями. После сортировки собранные популяции клеток или выделенные индивидуальные клетки могут быть использованы для последующего культивирования, введения экспериментальным животным, других методов анализа. Целый ряд научных исследований невозможен без использования цитометров-сортеров [153, 171, 173].

В основе метода проточной цитометрии лежит измерение параметров

каждой отдельно взятой клетки. Суспензию клеток под давлением прогоняют

через капилляр. При этом за счет наличия обволакивающей жидкости по краям

потока создается более высокое давление, чем в центре. Вследствие этого клетки,

стремясь попасть в область наименьшего давления, образуют поток, состоящий

фактически из одного ряда клеток. Когда такую струю пересекает

сфокусированный лазерный луч, в точке пересечения потока и луча

одновременно оказывается, как правило, только одна клетка, что позволяет

избежать артефактов, связанных с разной удаленностью клеток от точки

пересечения лазерного луча с потоком. При пересечении клеткой луча лазера

молекулы флуоресцентных красителей, связанных с клетками, переходят в

возбужденное состояние. Возвращаясь через короткое время в исходное

состояние, молекулы испускают кванты света. Это вторичное излучение,

11

имеющее строго определенную длину волны для каждого флуорохрома, проходя через оптическую систему прибора (линзы, фильтры, двухцветные зеркала), регистрируется высокочувствительными детекторами (фотоэлектронными умножителями), преобразующими его в электрические сигналы, поддающиеся компьютерной обработке [25,36 ,47, 165].

Иммуноцитофлуориметрический анализ клеток производится по трем основным парметрам: по прямому и боковому светоряссеянию, а также по интенсивности флуоресценции специфических зондов, связанных с поверхностью клеток.

Регистрация прямого светорассеяния FSC (forward side scatter), то есть рассеивание света от поверхности клеток под малыми углами от 2 до 19 позволяет определять размеры клеток.

Боковое светорассеяние SSC (side scatter) позволяет регистрировать рассеиваемые клеточными структурами лучи под углом 90°. Этот параметр отражает оптическую плотность цитоплазмы клеток, характер клеточных включений и гранулярность клетки. В данном случае гранулярность — это совокупность образований, формирующих клетку, включая любые клеточные органеллы и ядро. Использование этого параметра позволяет судить о соотношении размеров ядра и цитоплазмы, а также неоднородности или гранулярности цитоплазмы [36].

Данные цитометрического анализа по параметрам светорассеяния позволяют разделить и расположить в виде гистограммы лейкоциты периферической крови на три группы клеток — лимфоциты, моноциты и гранулоциты [90].

Третий параметр, получаемый с помощью метода ПЦ — детекция

вторичного светового излучения (флуоресценции) в разных спектральных

диапазонах. Кроме аутофлуоресценции, которой обладают все биологические

объекты, флуоресцентный сигнал исходит от специальных зондов, соединенных с

поверхностью клетки или окрашивающих ее внутренние структуры в процессе

предварительной подготовки образцов к анализу. Анализ флуоресценции клеток

12

позволяет получить наибольшее количество информации об исследуемом образце, поскольку даже клетки с идентичной морфологией могут отличаться по составу белков и других макромолекул в зависимости от выполняемой функции, стадии клеточного цикла и т.д. Флуоресценция клетки может возникать как за счет собственных химических соединений (автофлуоресценция), так и за счет применения специальных красителей. Применяются красители, специфически связывающиеся с теми или иными структурами и компонентами клеток (например, пропидиум йодид, связывающийся с ДНК) или конъюгаты красителей с моноклональными антителами, специфичными к определенным мембранным и цитоплазматическим антигенам клетки.

С помощью проточной цитометрии возможно измерить поляризацию флуоресценции, таким образом, исследователь получает информацию о степени вязкости мембран клеток, которая меняется в зависимости от их функционального состояния. По времени пролета частицы через зону анализа можно оценивать степень асимметричности клеток или исследуемых органелл [165].

Техническая возможность анализировать свойства индивидуальных клеток была воплощена более 20 лет назад в виде проточного цитометра [115, 139]. На сегодняшний день проточными цитофлуориметрами оборудовано огромное количество исследовательских лабораторий и медицинских учреждениий.

В настоящее время выпускают два основных типа приборов для проточной цитометрии: 1) простые в использовании аппараты, которые могут измерять флуоресценцию при двух и более длинах волн и светорассеяние под углом около 10° (малоугловое прямое рассеяние) и 90°; 2) большие клеточные сортеры, которые не только измеряют пять и более клеточных или ядерных параметров, но и сортируют частицы с заданным набором этих параметров.

Большинство проточных цитометров оснащено всего одним источником

возбуждения флуоресценции, как правило, аргоновым лазером, который

испускает зелено-голубой свет (488 нм). В двухлазерных приборах к аргоновому

лазеру добавлен красный гелий-неоновый (633-640 нм) или диодный лазер.

Возбуждение флуоресценции в УФ диапазоне (325-365 нм) возможно в

13

проточных цитометрах и клеточных сортерах, оснащенных ртутной лампой. Современные приборы оснащены фиолетовым диодным лазером (395-415 нм), который возбуждают флуоресценцию в длинноволновой области, что прежде было возможно только с применением дорогого, охлаждаемого водой криптонового лазера. На цитометрах, оснащенных аргоновым лазером(488 нм), возможно проводить измерение флуоресценции в более чем шести спектральных диапазонах: обычно около 525 нм (зеленый спектр), 575 нм (желтый), 610 нм (красно-оранжевый), 670 нм (красный), 710 нм (дальний красный) и 780 нм (ближний инфракрасный). Это позволяет различать сигнал от клеток, меченных флуоресцентными зондами, включающими в себя различные флуорофоры, в том числе флуоресцеин, фикоэритрин (РЕ), тандемные конъюгаты PE-Texas Red, РегСР-Су5.5 и РЕ-Су7, а также РегСР. Проточные цитометры, имеющие три лазера (488 нм, красный и фиолетовый лазер), позволяют добавить по меньшей мере два канала для измерений флуоресценции, возбужденной фиолетовым лазером (в том числе 430 и 530 нм для Cascade Blue и Cascade Yellow) и три канала для измерений флуоресценции, возбужденной красным лазером (в том числе 670 нм для аллофикоцианина (АРС), 710 нм для АРС-Су5 , и 780 нм для АРС-Су7). Все это позволяет проводить анализ сразу одиннадцати параметров. Однако такой сложный эксперимент требует тщательного выбора флуоресцентных зондов [170, 169].

1.2. Характеристика флуорофоров, используемых в проточной цитометрии для конъюгирования с моноклональными антителами

Поскольку живые интактные клетки, как правило, обладают незначительной

автофлуоресценцией, возможности метода проточной цитофлуориметрии прямо

зависят от разнообразия и свойств флуоресцентных зондов, доступных

исследователю. Под зондами понимаются биологически активные молекулы,

специфически взаимодействующие с определенными структурами клетки

(поверхностными или внутриклеточными антигенами, клеточными рецепторами,

отдельными биомакромолекулами) или накапливающиеся в отдельных

14

компартментах клеток (митохондрии, лизосомы, пероксисомы и т.д.). Большинство специальных зондов получают конъюгированием специфических биоактивных молекул (антител, лектинов, олигонуклеотидов и др.) с активными формами флуорофоров [111, 158].

Несмотря на огромное количество способных к флуоресценции веществ, список пригодных для проточной цитометрии флуорофоров резко ограничен жесткими требованиями к их физико-химическим и биохимическим свойствам:

спектры возбуждения и эмиссии таких веществ должны совпадать с оптическими диапазонами, предусмотренными для этого в конструкции цитометра;

их конъюгирование с биоактивными лигандами не должно изменять их собственных оптических характеристик, а также специфичности лиганда.

Желательным, хотя и не обязательным, свойством таких молекул должна быть их способность к необратимому (чаще всего - ковалентному) связыванию с молекулой лиганда.

Основными характеристиками флуорофоров является их способность к возбуждению флуоресценции монохроматическим светом конструктивно заданной длины волны с эмиссией вторичных квантов в узких спектральных диапазонах (FL1 = 520-530 нм, FL2 = 575-595 нм, FL3 = 610-630 нм, FL4 = 650670 нм), квантовый выход флуоресценции, коэффициент экстинкции, сдвиг Стокса и перекрывание спектров поглощения и эмиссии.

В проточной цитометрии для иммунофенотипирования клеточных популяций используются следующие красители:

Низкомолекулярные флуоресцентные красители.

АМСА — 7-амино-4-метилкумарин-3-уксусная кислота, флуоресценция возбуждается светом с длиной волны менее 350 нм с пиком эмиссии около 455 нм.

Cascade Blue ( Molecular Probes) — максимум возбуждения около 390 нм, максимум эмиссии менее 415 нм.

Cascade Yellow ( Molecular Probes) — максимум эмиссии около 550 нм.

Флуоресценция этих красителей возбуждается светом диодного фиолетового лазера.

FITC (флуоресцеин изотиоционат) — флуорофор с молекулярной массой 389 Да, максимум абсорбции 495 нм. Флуоресценция возбуждается светом аргонового лазера с длиной волны 488 нм, пик эмиссии 520 нм регистрируется в FL1-канале. Наиболее популярный краситель, его достоинствами является низкая цена, стабильность и длительный срок хранения. Квантовый выход достаточно высок, но варьирует в зависимости от рН. FITC также используется во флуоресцентной микроскопии.

Производные родамина

TAMRA — тетраметилродамин, очень слабо возбуждается светом с длиной волны 488 нм, поэтому не может широко использоваться в проточной цитометрии. Предназначен для использования в приборах с зеленым источником света, пик эмиссии менее 570нм. Устойчив к фотодеградации и нечувствителен к рН [92]. Однако конъюгация тетраметилродамина с белками приводит к уменьшению флуоресценции вследствие взаимодействия между молекулами метки и формированию нефлуоресцирующих производных с максимумом абсорбции 520 нм [92]. Родамин 101 — эмиссия около 615 нм, флуоресценция возбуждается светом с длиной волны в диапазоне 565-595 нм. Для того чтобы использовать в паре с флуоресцеином, необходимо к стандартному источнику света с длиной волны 488 нм добавить криптоновый лазер. В паре с флуоресцеином впервые использовался для двухцветного анализа: в виде изотиоционата (XRITC/TRITC) или сульфонилхлорида (Texas Red).

Су Dyes — органические соединения, содержащие два гетероциклических

радикала, соединенных цепью из нечетного числа метановых групп. В

зависимости от числа метановых групп в цепи различают цианины

(монометинцианины), карбоцианины (триметинцианины), дикарбоцианины

(пентаметинцианины) и т.д. Примером таких меток служат сульфопроизводные

индоцианиновых красителей Су2, СуЗ, Су3.5, Су5, Су5.5, Су7 [142, 92, 157, 99,

101, 180, 143, 137]. Широкое использование этих меток объясняется тем, что для

16

возбуждения флуоресценции используются типичные для многих проточных цитометров и флуоресцентных микроскопов источники света [137]. К тому же фоновая флуоресценция этих красителей очень низкая, эти метки флуоресцируют в длинноволновой части спектра по сравнению с автофлуоресценцией клеток [99, 137, 112].

Су2 — имеет спектральные характеристики абсорбции и эмиссии, схожие с таковыми у флуоресцеина.

Флуоресценция СуЗ может быть возбуждена лазером с длиной волны 488 -, 514-и532 нм, оптимально светом ртутной лампы с длиной волны 546 нм. Пик эмиссии СуЗ менее 565 нм, однако, значительная часть эмиссии распространяется и на фильтр пропускания, типичный для РЕ. Для Су5 хорошими источниками возбуждения флуоресценции являются Не№-лазер, Кг-лазер с длинами волн соответственно 633 и 647 нм, а также лазерные диоды с длиной волны около 650 нм[142]. Для Су5 максимум абсорбции 640 нм, пик эмиссии менее 660 нм.

Су5,5 — максимум абсорбции 675 нм, максимум эмиссии 695-700 нм. Абсорбция при 633 нм — достаточно для того чтобы использовать Су5-и Су5,5-меченые антитела в двухцветном анализе.

Су7 — абсорбция в ближнем инфракрасном диапазоне длин волн (менее 750 нм) и эмиссия менее 770 нм. Используется главным образом для получения тандемных конъюгатов.

Цианиновые красители могут неспецифично связываться с моноцитами и в

меньшей степени с гранулоцитами. Цианиновым флуорофорам свойствен

высокий квантовый выход флуоресценции и устойчивость к «выгоранию»,

присущая флуоресцеину, что позволяет получать на их основе стабильные зонды

с надежно регистрируемым сигналом флуоресценции [98, 142, 143 108, 109]. Это

семейство выглядело бы весьма перспективным для использования в проточной

цитометрии, однако спектры возбуждения и эмиссии этих веществ достаточно

узки, и любая химическая модификация их молекулы параллельно смещает как

максимум эмиссии, так и максимум возбуждения флуоресценции. В результате

модифицированное производное перестает флуоресцировать под

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Захарова, Елена Николаевна, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Артамонова, Е.В. Роль иммунофенотипирования опухолевых клеток в диагностике и прогнозе рака молочной железы: дис... д-ра мед. наук: 14.01.12 / Артамонова Елена Вячеславовна. - М., 2003. - 311 с.

2. Артамонова, Е.В. Роль иммунофенотипирования опухолевых клеток в диагностике и прогнозе рака молочной железы / Е.В. Артамонова // Иммунология гемопоэза. - 2009. - Т. 6, № 1. - С. 8-51.

3. Артамонова. Е. В. Результаты применения полиоксидония у больных раком молочной железы / Е. В.Артамонова, О. В. Короткова, Т. Н. Заботина, А. А. Феденко, 3. Г. Кадагидзе, Л. В. Манзюк // Материалы Всерос. науч.- практ. конф. «Отечественные противоопухолевые препараты». — М., 2005. — Т. 4, № 1. — С. 96—97.

4. Барышников, А.Ю. Иммунологический фенотип лейкозной клетки. /А.Ю. Барышников, З.Г. Кадагидзе, Л.А. Малахова, H.H. Тупицын. — М.: Медицина. — 1989, —С. 240

5. Барышников, А.Ю. Экспрессия антигена CD44 у больных метастатической меланомой кожи / Н.В. Голубцова, О.С. Бурова, А.Е. Бармашов, П.К. Иванов, К.А. Барышников, К.А. Парсункова, Г.З. Чкадуа, И.Н. Михайлова // Российский биотерапевтический журнал. — 2013. — Т. 12. — № 4. — С. 17-20.

6. Боженко, В.К. Проточная цитометрия осадка мочи в диагностике рака мочевого пузыря / В.К. Боженко, А.Д. Каприн, Т.М. Кулинич, П.В. Нестеров // Вопросы онкологии. — 2009. — Т. 55.— № 3. — С. 278-284.

7. Борунова, A.A. Динамика экспрессии антигена CD25 на поверхности лимфоцитов больных меланомой при вакцинотерапии / A.A. Борунова, Г.З. Чкадуа, Т.Н. Заботина, Л.В. Демидов // Российский биотерапевтический журнал. — 2005. —№1. —С.З

8. Борунова, A.A. Изучение субпопуляции CD 16+ лимфоцитов у онкологических больных на фоне вакцинотерапии / A.A. Борунова, Г.З. Чкадуа, Т.Н. Заботина, З.Г. Кадагидзе // Медицинская иммунология. — 2006. — Т.8. —

№2-3, —С. 334

9. Бору нова, A.A. Иммунофенотнп лимфоцитов больных меланомой на фоне вакцинотерапии/ A.A. Борунова, Г.З. Чкадуа, Т.Н. Заботина, JI.B. Демидов // Российский биотерапевтический журнал. — 2005. — №1. — С. 8

10. Буркова, A.A. Иммунотерапия: мониторинг субпопуляций лимфоцитов / A.A. Буркова, Т.Н. Заботина, З.Г. Кадагидзе // Медицинская иммунология. — 2002. — Т. 4. — № 2. — С. 291

11. Воробьев, И. А. Современное состояние и перспективы проточной цитофлуориметрии / И.А. Воробьев // 2-я Международная школа по практической проточной цитометрии. — 2001. — С. 34-36

12. Галактионов, В.Г. Иммунология: учебник / В.Г. Галактионов. — Москва: издательство МГУ. — 1998. — 480 с.

13. Голубцова, Н.В. Изменение сывороточного содержания антигена CD44 у больных меланомой / Н.В. Голубцова, А.Е. Бармашов, О.С. Бурова, П.К. Иванов, К.А. Барышников, К.А. Парсункова, Г.З. Чкадуа, И.Н. Михайлова.// Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Противоопухолевая терапия: от эксперимента к клинике». Москва, 20-21 марта 2014. Российский биотерапевтический журнал. — 2014. - Т. 13. - №1. - С.73.

14. Голубцова, Н.В. Изменение сывороточного содержания растворимых молекул HLA I класса, антигена CD8 и растворимого комплекса HLA-I-CD8 у больных диссеминированной меланомой в процессе вакцинотерапии / Н.В. Голубцова, И.Н. Михайлова, В.В. Новиков, К.А. Барышников, Н.Б. Преснякова, Е.В. Огородникова, H.H. Петенко, К.А. Парсункова, О.С. Бурова, Г.З. Чкадуа, JI.B. Демидов, А.Ю. Барышников // Российский биотерапевтический журнал. —2010. — Т. 9, —№3, —С. 41-45.

15. Голубцова, Н.В. Определение специфических противоопухолевых антител у больных диссеминированной меланомой в процессе вакцинотерапии / Н.В. Голубцова, Е.В. Степанова, А.Е. Бармашов, О.С. Бурова, К.А. Барышников, И.Н. Григорьева, М.А. Барышникова, М.В. Огородникова, Г.З. Чкадуа, П.К. Иванов, И.Н. Михайлова, JI.B. Демидов, А.Ю. Барышников // Российский

биотерапевтический журнал. — 2012. — Т. 11. — № 3. — С. 25-28.

16. Гостюжова, Е.А. Сывороточное содержание растворимых дифференцировочных антигенов при разном цитогенетическом статусе больных хроническим миелолейкозом / Е.А. Гостюжова, Н.Б. Преснякова, H.A. Добротина, С.А. Волкова, В.В. Новиков // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. — 2008. — № 5. — С. 89-95.

17. Давыдов, М.И. Метод проточной цитометрии в оценке минимального поражения костного мозга у больных раком / М.И. Давыдов, H.H. Тупицын, Т.А. Григорьева, O.A. Безнос, O.A. Повалихина, И.К. Воротников, В.Ю. Сельчук // Иммунология гемопоэза. — 2014. — Т. 12. — № 1-2. — С. 8-17.

18. Дубинкин, И.В. Моноклональные реагенты анти А и анти-В с новыми свойствами / И.В. Дубинкин, Т.В. Подгорная, С.И. Донсков // Трансфузиология. — 2009. — Т. 10. — № 1-2. — С. 28.

19. Дубинкин, И.В. Получение и испытание моноклональных анти DVI-антител / И.В. Дубинкин, Т.В. Горшкова, P.C. Каландаров, С.И. Донсков // Трансфузиология. — 2009. — Т. 10. — № 1-2. —С. 27-28.

20. Жаворонок, С. Перспективы клинико-лабораторного использования растворимой формы антигена CD95 / С. Жаворонок, Н. Москалева, О. Тумаш, А. Барышников // Наука и инновации. — 2014. — Т. 3. — № 133. — С. 67-72.

21. Заботина, Т.Н. Значение экспрессии маркера CD3+CD16+CD56+ у онкологических больных // Т.Н. Заботина, О.В. Короткова, С.А. Хатырев, З.И. Токарева, К.И. Жорданиа, И.В. Паниченко, И.И. Бокин, Г.Н. Мачак, И.С. Чернов, З.Г. Кадагидзе // Российский иммунологический журнал. — 2008. — Т.2(11). — №2-3. —С. 306

22. Заботина, Т.Н. Оценка функциональной активности клеток гранулоцитарно-макрофагального звена иммунитета больных раком слизистой оболочки полости рта / Т.Н. Заботина, Н.Ю. Очеева, О.В. Короткова, В.Т. Циклаури, Е.Г. Матякин, З.Г. Кадагидзе // VI съезд оноклогов и радиологов стран СНГ, материалы съезда 14 октября 20 Юг, г. Душанбе. — 2010. — С. 67-68

23. Заботина, Т.Н. Субпопуляционная структура лимфоцитов у больных раком

яичников / Т.Н. Заботина, О.В. Короткова, A.A. Борунова, Н.Ю. Очеева, И.И. Бокин, К.И. Жорданиа, И.В. Паниченко, В.Ю. Сельчук, В.В. Кузнецов, З.Г. Кадагидзе // Вестник РОНЦ им. H.H. Блохина. — 2010. — Т. 21. — №1. — С. 4651

24. Зуева, Е.Е. Иммунофенотипирование в диагностике острых лейкозов / Е.Е. Зуева // Российский Биомедицинский Журнал. — 2003. — т.4. — С. 132, 471-478.

25. Зуева, Е.Е. Проточная цитометрия. Анализ изображения. Получение и представление данных /Е.Е. Зуева // Российский Биомедицинский Журнал. — 2005. — № 4 (131) — С.465—470

26. Зурочка, A.B. Изменение представлений об оценке иммунного статуса человека, новые проблемы и подходы к их решению / A.B. Зурочка, C.B. Хайдуков // Медицинская иммунология. — Материалы XI всероссийского научного Форума "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2007". — 28-31 мая 2007. — Т. 9. — № 2-3. — С. 339-340.(89)

1 27. Кадагидзе, З.Г. Иммунологический профиль лимфоцитов крови у онкологических больных / З.Г. Кадагидзе, Е.Г. Славина, Т.Н. Заботина, А.И. Черткова, О.В. Короткова, A.A. Борунова // Российский биотерапевтический журнал. — 2013. — Т. 12. — № 2. — С. 38.

28. Кадагидзе, З.Г. Основные субпопуляции регуляторных лимфоцитов у больных злокачественно меланомой и раком молочной железы / З.Г. Кадагидзе, А.И. Черткова, Т.Н. Заботина, О.В. Короткова, A.A. Борунова, Е.Г. Славина // Иммунология. — 2014. — Т. 35. — № 2. — С. 64-67.

29. Коровушкина, К.А. Оценка состояния иммунитета при опухолях тела матки , / К.А. Коровушкина, A.A. Бабаев, Т.В. Котельникова, Е.Ю. Конторщикова, Д.И.

Князев, Д.В. Новиков, Н.Б. Преснякова, А.Ю. Барышников, В.В. Новиков // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. — 2010. — № 2-2. — С. 653-658.

30. Короленкова, Л.И. Растворимые молекулы адгезии (CD54, CD50,CD18), HLAI и CD8 как отражение иммунных взаимодействий у больных CIN и раком шейки матки / Л.И. Короленкова, Е.В. Анисенкова, A.A. Бабаев, В.В. Новиков //

Российский биотерапевтический журнал. — 2012. — Т. 11. — № 2. — С. 29.

31. Короткова, О.В. Субпопуляции лимфоцитов периферической крови больных РМЖ / О.В. Короткова, Т.Н. Заботина, JI.B. Скотаренко, A.A. Борунова, Н.Ю. Очеева, И.К. Воротников, З.Г. Кадагидзе // Российский биотерапевтический журнал. —2011. —№ 3. —Том 10. —С. 95

32. Кудрявцев, И.В.. Проточная цитометрия в экспериментальной биологии./ И.В. Кудрявцев, С.В.Хайдуков, А.В.Зурочка, В.А.Черешнев. — Екатеринбург: РИО УрО РАН. — 2012. — 192с.

33. Кузнецова, В.Е. Водорастворимые цианиновые красители для технологии биологических микрочипов / В.Е. Кузнецова, Т.А. Лукьянова, В.А. Василисков, О.В. Харитонова, A.B. Чудинов, A.C. Заседателев // Известия Академии наук. Серия химическая. — 2007. — № 12. — С. 2355-2359.

34. Кузнецова, В.Е. Новые индодикарбоцианиновые красители для технологии биологических микрочипов // В.Е. Кузнецова, В.А. Василисков, О.В. Антонова, В.М. Михайлович, A.C. Заседателев, A.B. Чудинов // Биоорганическая химия. — 2008. —Т. 34. —№ 1, —С. 141-144.

35. Кузнецова, В.Е. Новые несимметричные индодикарбоцианиновые красители / В.Е. Кузнецова, A.B. Давыдов, В.А. Василисков, A.A. Стомахин, A.B. Чудинов, A.C. Заседателев // Известия Академии наук. Серия химическая. — 2007, —№ 11. —С. 2186.

36. Луговская, С.А. Иммунофенотипирование в диагностике гемобластозов / Кафедра КЛД, Луговская, С.А., Почтарь М.Е., Тупицин H.H. — Москва, 2005.

37. Моисеева, И.В. Иммунотерапия перевиваемого рака молочных желез интерлейкином -2: зависимость продолжительности жизни от изначального гематологического статуса / Е.В. Моисеева, С.Г. Семушина, Д.А. Аронов, А.Н. Мурашев, A.M. Шишкин, В.К. Боженко / Вестник Российского научного центра рентгенорадиологии Минздрава России // — 2012. —Т. 4. — № 12. — С. 27.

■ 38. Муругин, В.В. Применение мультипараметрической проточной цитометрии для одновременной оценки функции и фенотипа NK - клеток / В.В. Муругин, М.В. Пащенков, Б.В. Пинегин // Иммунология. — 2012. — Т. 33. — №3. — С.

128-133.

39. Пащенков M.B. Изучение условий дифференцировки CD4+ цитотоксических Т-лимфоцитов / М.В. Пащенков, Б.В. Пинегин // Российский аллергологический журнал. — 2011. — № 4. — С. 284-286.

40. Пащенков, М.В. Выявление и характеризация цитолитических CD8+- и CD4+- Т-клеток / М.В. Пащенков, Н.Е. Муругина, В.В. Муругин, Б.В. Пинегин // Иммунология.— 2010.— Т. 31. —№ 1. —С. 4-12.

41. Пащенков, М.В. Экспрессия CDS-ассоциированных генов в циркулирующих СБ4+цитотоксических лимфоцитах у здоровых доноров / М.В. Пащенков, Б.В. Пинегин // Иммунология. — 2013. — Т. 34. — № 2. — С. 72-75.

42. Пинегин, Б.В. Разработка тест-системы для оценки продукции Т-лимфоцитами человека B-клеточных ростовых факторов на основе использования отечественных Т-специфических моноклональных антител /Б.В. Пинегин; К.Е. Балашов, П.С. Бачурин, О.М. Котова, A.B. Филатов // Иммунология. — 1989. — № 2. — С. 84.

43. Пинчук, В.Г. Иммуноцитохимия и моноклональные антитела в онкогематологии / В.Г. Пинчук, Д.Ф. Глузман, В.А. Надгорная, И.В. Абраменко, А.Г. Бердова, Е.П. Ветрова, А.И. Евсевьева, М.Д. Луцик, М.Ю. Полудненко, С.П. Сидоренко, Л.М. Скляренко, Л.Н. Шлапацикая, О.В. Юрченко Под общей редакцией В.Г. Пинчука, Д.Ф. Глузмана. — АН УССР, Институт проблем онкологии им Р.Е.Кавецкого, Киев: Наук. Думка, 1990. — 232 с.

44. Подольский, П.Н. Роль многопараметрического анализа в прогнозе развития кардиальных осложнений при лимфоме Ходжкина / П.Н. Подольский, П.В. Даценко, Г.А. Паньшин, В.М. Сотников, Ю.Д. Мельник, В.К. Боженко // Вопросы онкологии. — 2009. — Т. 55. — № 4._ с. 447-450.

45. Подольский, П.Н. Факторы риска гематологической токсичности и многопараметрический анализ показателей периферической крови при лимфоме Ходжкина (часть I): статистический анализ / П.Н. Подольский, П.В. Даценко, Г.А. Паньшин, В.М. Сотников, В.К. Боженко // Вестник Российского научного центра рентгенорадиологии Минздрава России. — 2009. — Т. 1. — № 9. — С. 15.

46. Полетаев, А.И. Проточная цитометрия и сортировка в цитологии, молекулярной биологии, биотехнологии и медицине / А.И. Полетаев // ИНТ серия «Общие проблемы физико-химической биологии». 1989. — Т. 12. — С. 88.

47. Потапнев, М. Методы проточной цитометрии в медицинских и биологических исследованиях / под ред. М. Потапнева. — Минск: ГУРНМБ, 2003. — 136с.

48. Серебровская, Л.В. Особенности преаналитического этапа для иммунофенотипирования клеток периферической крови./ Л.В.Серебровская, Л.А.Иванова, С.В.Хайдуков // Медицинская иммунология. — 2011. — Т.13. — №6. — с. 639-646

49. Симонова, A.B. Фенотип лимфоцитов крови при воспалительных заболеваниях человека / A.B. Симонова. — Москва: ИНТО, 2001.(1)

50. Скотаренко Л.В. Особенности Т-клеточного иммунитета при раке молочной железы / Скотаренко Л.В., Воротников И.К., Кадагидзе З.Г., Шамилов Ф.А. // Опухоли женской репродуктивной системы. - 2011г.- №4,- с. 24-27

51. Соколов, А.Н. Влияние повторных трансфузий пула аутологичных лимфоцитов с интерлейкином - 2 на содержание Т-клеточной и NK-клеточной популяции лимфоцитов крови у больных с рецидивами острых миелоидных лейкозов / А.Н. Соколов, E.H. Паровичникова, М.В. Пащенков, Б.В. Пинегин, В.Г. Савченко / Гематология и трансфузиология. — 2012. — Т. 57. — № S3. — С. 7980.

52. Соколова, Д.В. Анти - М UC-1 иммунолипосомальная конструкция доксорубицина для направленной доставки в опухоль / Д.В. Соколова, Е.В. Тазина, М.А. Кортава, П.К. Иванов, Е.В. Игнатьева, А.П. Полозкова, Е.М. Трещалина, H.A. Оборотова, А.Ю. Барышников // Российский биотерапевтический журнал. — 2011. — Т. 10. — № 3. — С. 99-104.

53. Тотолян, А.А Клетки иммунной системы / А.А.Тотолян, И.С. Фрейдлин. — СПб.: Наука, 2000. — Т. 1,2. — 231с.

. 54. Филатов, A.B. Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов человека с помощью панели моноклональных антител / A.B. Филатов, Н.С.

Бачурин, H.A. Маркова, А.Ю. Кирюхин, В.В. Щербухин // Гематология и трансфузиология. — 1990. — Т. 35. — № 4. — С. 16.

55. Филатов, A.B. Панель моноклональных антител к антигенам человеческих лимфоцитов / A.B. Филатов, П.С. Бачурин, H.A. Маркова, Н.Е. Сурнакова // Экспериментальная онкология. — 1989. — Т. 11. — № 2. — С. 29.

56. Филатов, A.B. Получение моноклональных антител к антигену LYT-3.2 /

A.B. Филатов, A.B. Червонский, Б.Д. Брондз // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1984. — Т. 98. — № 8. — С. 223-226.

57. Филюшкина, И.Ю. Изменение сывороточного содержания растворимых лейкоцитарных антигенов у больных РМЖ / И.Ю. Филюшкина, Н.В. Голубцова,

B.В. Новиков, М.А. Барышникова, З.А. Соколова, А.И. Чкалина, Е.В. Борисова, П.К. Иванов, И.К. Воротников, А.Ю. Барышников // Российский биотерапевтический журнал. — 2014. — Т. 13. — № 1. — С. 23-26.

58. Фрейдлин И. С. Как читать иммунограмму // Соросовский образовательный журн, — 1997, —№7. —С. 25—31. 11.

59. Хайду ков С.В .Многоцветный анализ в проточной цитометрии для медико-биологических исследований // Диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук. — Санкт-Петербург-2008.

60. Хайду ков, C.B. Вопросы современной проточной цитометрии. Клиническое применение. / С.В.Хайдуков, А.В.Зурочка. —Челябинск: Изд-во «Челябинская

• государственная медицинская академия». — 2008. — 196с.

61. Хайдуков, C.B. Глава 3. Высокотехнологичные лабораторные исследования. Проточная цитометрия Клиническая лабораторная диагностика. Национальное Руководство. / (С.В.Хайдуков, А.В.Зурочка, А.Тотолян Арег, Е.В.Наумова. Под редакцией В.В.Долгова, В.В.Меньшикова) Том 1. — Москва: издательская группа «ГЭОТ AP-Медиа». — 2012.— 103-134с.

62. Хайдуков, C.B. Идентификация малых популяций лимфоцитов периферической крови условно здоровых доноров с использованием многоцветного цитометрического анализа / С.В.Хайдуков, А.В.Зурочка,

B.А.Черешнев. // Вестник Уральской Медицинской Академической Науки. — 2010. — №2/1 (29). — С. 77-78.

63. Хайдуков, C.B. Избранные вопросы современной проточной цитометрии. / Под ред.С.В. Хайдукова и A.B. Зурочки. — Челябинск: Изд-во «Челябинская государственная медицинская академия». — 2007. — 84с.

64. Хайдуков, C.B. Иммунофенотипирование клеток периферической крови при помощи проточной цитометрии. Стандартизация методов / C.B. Хайдуков // Медицинская иммунология. — Материалы XI всероссийского научного Форума "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2007". — 28-31 мая 2007. — Т. 9. — № 23, —С. 342.(88)

65. Хайдуков, C.B. Иммунофенотипирование. Стандартизация метода проточной цитометрии / C.B. Хайдуков // Russian Jornal of Immunology. 2-я конференция "Иммунология репродукции", Сочи, 15-18 мая. — 2007. — Vol. 9. — Supplement 4. — С. 143-144

66. Хайдуков, C.B. Многоцветный цитометрический анализ. Идентификация NK-клеток / C.B. Хайдуков, A.B. Зурочка // Российский Иммунологический Журнал. — 2008. — № 2(11). — 1. — С. 20-30 (60)

67. Хайдуков, C.B. Многоцветный цитометрический анализ. Идентификация Т-клеток и их субпопуляций по экспрессии aß-TCR и yô-TCR / A.B. Зурочка, C.B. Хайдуков, В.А. Черешнев // Медицинская иммунология. — 2008. — № 10(2-3). —

C. 115-124 (61)

68. Хайдуков, C.B. Основные и малые популяции лимфоцитов периферической крови человека и их нормативные значения (методом многоцветного цитометрического анализа) / C.B.Хайдуков, A.B.Зурочка, А.Тотолян Арег,

B.А.Черешнев. // Медицинская иммунология. — 2009. — Т.П. — №2-3. —

C.227-238.

69. Хайдуков, C.B. Подходы к стандартизации метода проточной цитометрии для иммунофенотипирования. Настройка цитометров и подготовка протоколов для анализа/ C.B. Хайдуков // Медицинская иммунология. — 2007. — № 9(6). — С. 569-574

70. Хайдуков, C.B. Проточная цитометрия как современный метод анализа в биологии и медицине / C.B. Хайдуков, A.B. Зурочка // Медицинская иммунология. — 2007. —№ 9(4-5). — С. 373-378 (51)

71. Хайдуков, C.B. Расширение возможностей метода проточной цитометрии для клинико-иммунологической практики / C.B. Хайдуков, A.B. Зурочка // Медицинская иммунология. — 2008. — № 10(1). — С. 5-13.(55)

72. Хайдуков, C.B. Цитометрический анализ в клинической иммунологии. / С.В.Хайдуков, A.B.Зурочка, В.А.Черешнев. — Екатеринбург: УрО РАН. — 2011. — 220с.

73. Хлябич, Г.Н. Усовершенствованная технология получения моноклональных антител для определения трансфузионно опасных антигенов эритроцитов / Г.Н. Хлябич, И.В. Дубинкин, С.И. Донсков, Ю.С. Суханов, JI.B. Персанова // Вестник службы крови России. — 2010. — № 1. — С. 5-9.

74. Циклаури, В.Т. Иммунокрригирующая терапия в комплексном лечении больных раком слизистой оболочки полости рта / В.Т. Циклаури // Автореферат диссертации. — Москва.— 2012.

75. Чмутин, Е.Ф. Разработка терапевтических моноклональных антител для онкологии: достижения и перспективы / Е.Ф. Чмутин, П.К. Иванов, A.C. Гриневич // Российский биотерапевтический журнал. — 2009. — Т. 8. — № 3. — С. 27-36.

76. Шамилов, Ф.А. Влияние полиоксидония на субпопуляции интратуморальных лимфоцитов у больных раком молочной железы / Ф.А. Шамилов, Г.А. Елыпина, Д.А. Буров, Я.В. Вишневская, Н.В. Чхиквадзе, Д.И. Зернов, В.В. Тимошенко, В.Ю. Сельчук, H.H. Тупицын // Иммунология — 2013. —№4. — С.209-213.

77. Шамилов, Ф.А. Возможности изучения субпопуляций интратуморальных лимфоцитов методом проточной цитометрии на материале кор-биопсии опухоли у больных раком молочной железы / Ф.А. Шамилов, Я.В. Вишневская, В.Ю. Сельчук, Е.М. Погодина, Д.И. Зернов, Н.В. Чхиквадзе, В.В. Тимошенко, H.H. Тупицын // Опухоли женской репродуктивной системы. — 2012г. — №3-4. — с. 29-33

78. Шахова, К.А. Диагностическая значимость иммунологических показателей при доброкачественных и злокачественных опухолях тела матки / К.А. Шахова, А.А. Бабаев, О.С. Янченко, Е.Ю. Конторщикова, К.Н. Конторщикова, В.В. Новиков, А.Ю. Барышников // Медицинский альманах. — 2013. — № 2(26). — С. 177-180.

79. Янченко, О.С. Особенности иммунного статуса больных миомой матки и раком эндометрия / О.С. Янченко, Е.Ю. Конторщикова, К.А. Шахова, В.В. Новиков // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. — 2012. — № 2-3. — С. 300-303.

80. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. — Москва: «Медицина», 1999.

81. .Cheever, М.А. Antigen-driven long term-cultured Т cells proliferate in vivo, distribute widely, mediate specific tumor therapy, and persis long term as functionally memory T cells / M.A. Cheever, D.B. Thompson, J.P. Klarnet et al. // J. Exp. Med. -1986.-Vol. 163.-P. 1100-1112

82. Allman, R. Flow cytometry: principles and application. In: Clinical Flow cytometry. Principles and application/ R.Allman, Ed. by K.D. Bauer, R.E. Duque, T.V. Shankey. — Proceedings RMS. — 1993. — Vol.28. — №2. — P. 45-54.

83. Anderson, G.P. Improved fluoroimmunoassays using the dye Alexa Fluor 647 with the RAPTOR, a fiber optic biosensor / G.P. Anderson, N.L. Nerurkar // J. Immunol. Methods. —2002. — Vol. 271 — P. 17-24

84. Angadi, C.V. Lack of Leu-3a epitope on T-helper (CD4) lymphocytes / C.V. Angadi // J. Clin. Lab. Anal. — 1990. — Vol. 4(3) — P. 193-195

85. Ballard, J.L. Comparison of Alexa Fluor and CyDye for practical DNA microarray use / J.L. Ballard, V.K. Peeva, C.J. deSilva, J.L. Lynch, N.R. Swanson // Mol. Biotechnol. — 2007. — Jul. — Vol. 36(3). — P. 175-83.

86. Bergeron, M. Quantitative analysis of leukocyte membrane antigen expression: normal adult values / M. Bergeron. J.K. Nicholson, S. Phaneuf, T. Ding, N. Soucy, A.D. Badley, A. Bikoue, F. George, P. Poncelet, M. Mutin, G. Janossy, and J. Sampol // Cytometry. — 1996. — Vol. 26. — P. 137-147.

87. Berlier, Judith E. Quantitative Comparison of Long-wavelength Alexa Fluor Dyes to Cy Dyes: Fluorescence of the Dyes and Their Bioconjugates / Judith E. Berlier, Anca Rothe, Gayle Buller, Jolene Bradford, Diane R. Gray, Brian J. Filanoski, William G. Telford, Stephen Yue, Jixiang Liu, Ching-Ying Cheung, Wesley Chang, James D. Hirsch, Joseph M. Beechem, Rosaria P. Haugland, and Richard P. Haugland // J. Histochem. Cytochem. — 2003. — Vol. 51. — P. 1699-1712

88. Berzofsky, J.A. The contrasting roles of NKT cells in tumor immunity / J.A. Berzofsky, M. Terabe // Curr. Mol. Med. — 2009. — Vol. 9. — P. 667-72

89. Bonifacino, J. Current Protocols in Cell Biology / J. Bonifacino, M. Dasso, J. Harford, K. Lippincott-Schwartz, J. Yamada eds. — New York: Wiley &Sons, 2002.— Vol 2. — 16.5.1-16.5 22

90. Bossuyt, X. Comparative analysis of whole blood lysis methods for flow cytometry / X. Bossuyt, G.E. Marti, T.A. Fleisher // Cytometry. — 1997. — Vol. 30. — P. 124-133.

91. Boyse, E.A. Some futher data on cytotoxic isoantibodies in the mouse / E.A. Boyse, L.J. Old, E. Stokert // Ann. N.-Y. Acad. Sci. - 1962. - Vol. 99. - P. 574-587

92. Brismar, H. Spectra and fluorescence lifetimes of lissamine rhodamine, tetramethylrhodamine isothiocyanate, Texas Red, and cyanine 3.18 fluorophores: influences of some environmental factors recorded with a confocal laser scanning microscope / H. Brismar, O. Trepte, J. Ulfhake // Histochem. Cytochem. — 1995. — Vol. 43,—P. 699-707

93. Caccamo, N. CXCR5 identifies a subset of Vy9V82 T cells which secrete IL-4 and IL-10 and help B cells for antibody production / N. Caccamo, L. Battistini, M. Bonneville, F. Poccia, J.J Fournie, et al. // J Immunol. — 2006. — Vol. 177. — P 52905295

94. Cullander, C Imaging in the far-red with electronic light microscopy: requirements and limitations / C. Cullander // J. Microsc. — 1994. — Vol. 176. — P. 281-286

95. DeNardo, D.G. Leucocyte complexity in breast cancer predicts overall survival and functionally regulates response to chemotherapy / D.G. DeNardo et al. // Cancer

discovery. - 2011. - Vol. 1, N 1. - P. 54-67.

96. Di NMKOla, M., Quantization of CD34+ peripheral blood hematopoietic progenitors for autografting in cancer patients / M. Di NHKOla, S. Siena, M. Bregni, F. Peccatori, M. Magni, F. Ravagnani, L. Zorzino, G. Bonadonna, A.M. Gianni // Int. J. Artif. Organs. — 1993. — Suppl. 5. — P. 80-82.

97. Dunne, J. Selective expansion and partial activation of human NK cellsand NK ■ receptor-positive T-cellsby IL-2 and IL-15 / J. Dunne, S. Lynch, C. O" Farrelly, S.

Todryk, J. E. Hegarty, C. Feighery, D. G. Doherty // J. Immunol. — 2001. — Vol. 167.

— N6. —P. 3129—3138.

98. Ernst, L.A.Cyanine dye labeling reagents for sulfhydryl groups / L.A. Ernst, R.K. Gupta, R.B. Mujumdar, A.S. Waggoner // Cytometry. — 1989. — Vol. 10 (1). — P. 310.

99. Flanagan Jr, J.H. Jr, Functionalized tricarbocyanine dyes as near-infrared fluorescent probes for biomolecules / J.H. Flanagan Jr, S.H. Khan, S. Menchen, S.A.Soper, R.P. Hammer // Bioconjug. Chem. — 1997.— Vol. 8— P. 751-756

100. Fossati, G. Melanoma cell lysis by human CTL clones: differential involvement of T3, T8 and HLA antigens / G. Fossati, A. Anichini, G. Parmiani // Int. J. Cancer. -

' 1987.-Vol. 39.-P. 689-694.

101. Fradelizi, J. Quantitative measurement of proteins by western blotting with Cy5-coupled secondary antibodies. / J. Fradelizi, E. Friederich, M.C. Beckerle, R.M. Golsteyn // Biotechniques. — 1999. — Vol. 26. — P. 484^186

102. Frey, A. B. Effector-phase tolerance: another mechanism of how cancer escapesantitumor immune response / A. B. Frey, N. Monu // J. Leukoc. Biol. — 2006.

— Vol. 79. —P. 652—662.

103. Giaretti, W. Flow cytometry and applications in oncology / W. Giaretti // J. Clin. Pathol. — 1997. — Vol. 50. — P. 275-277

' 104. Ginaldi, L. Differential expression of T cell antigens in normal peripheral blood lymphocytes: a quantitative analysis by flow Cytometry / L. Ginaldi, N. Farahat, E.Matutes, M. De Martinis, R. Morilla, D. Catovsky // J. Clin. Pathol. — 1996. — Vol. 7. —P. 539-44.

105. Glazer, A.N. Fluorescent tandem phycobiliprotein conjugates: emission wavelength shifting by energy transfer / A.N. Glazer, L. Stryer //Biophys. J. — 1983. — Vol. 43. —P. 383-386 (18)

106. Gruber, H.J. Anomalous fluorescence enhancement of Cy3 and Cy3.5 versus anomalous fluorescence loss of Cy5 and Cy7 upon covalent linking to IgG and noncovalent binding to avidin / H.J.Gruber, C.D. Hahn, G. Kada, C.K. Riener, G.S.Harms, W. Ahrer, T.G. Dax et al. // Bioconjug. Chem. — 2000. Vol. 11. — P. 696704

107. Gruber, H.J. Preparation of thiol-reactive Cy5 derivatives from commercial Cy5 succinimidyl ester / H.J. Gruber, G. Kada , B. Pragl, C. Riener, C.D. Hahn, G.S. Harms, W. Ahrer, T.G. Dax, K. Hohenthanner, H.G. Knaus // Bioconjug. Chem. — 2000 Mar-Apr/—Vol. 11(2). —P. 161-6

108. Hahn, C.D. Labeling of antibodies with Cy3-, Cy3.5-, Cy5-, and Cy5.5 monofunctional dyes at defined dye/protein ratios / C.D. Hahn, C.K. Riener, H.J. Gruber // Single Molec. — 2001. — Vol. 2. — P. 149-153

109. Hahn, C.D. Labeling of antibodies with Cy3-, Cy3.5,-Cy5-, and Cy5.5-monofimctional dyes at defined dye/protein ratios. Cualing HD. Automated analysis in flow cytometry / Christoph. D. Hahn, Christian K. Riener, Hermann J. Gruber // Cytometry. — 2000. — Apr. — Vol.15.— № 42(2). — P. 110-3

110. Hardy, R.R. Purification and coupling of fluorescent proteins for use in flow cytometry. In: Handbook of Experimental Immunology, 4th ed. DM Weir, LA Herzenberg, C Blackwell, and LA Herzenberg, editors / R.R. Hardy // Boston: Blackwell Scientific Publications. — 1986. — pp. 31.1-31.12

111. Haugland, R.P. Antibody conjugates for cell biology in Current protocols in cell biology / R.P. Haugland. —Wiley & Sons, 2001. — Unit 16.5

112. Haugland, R.P. Handbook of Fluorescent Probes and Research Products. 9th ed. Eugene, OR/ R.P. Haugland // Molecular Probes. — 2002. — Section 1.3

113. Hawley Foss, N.C. Selection of lymphocyte gating protocol has an impact on the , level of reliability of T-cell subsets in aging specimens / N. C. Hawley Foss, F. Mandy

// Cytometry. — 2002. — Vol. 50. — P. 53-61.

114. Hayball, J.D. Altered superantigenic ligands demonstrate the quantitative nature of T-cell activation / J.D. Hayball, R.A. Lake //Immunology and cell biology/ — 2000. — Vol. 78(6). —P. 623-632

115. Haynes J. Principles of flow cytometry // Cytometry Suppl. 1988. Vol. 3. P. 7-17

116. Hernberg M., Muhonen T., Pyrhonen S. Can the CD4+/CD8+ ratio predict the outcome of interferon-a therapy for renal cell carcinoma? / M. Hernberg, T. Muhonen, S. Pyrhonen // Ann. Oncol. — 1997. — Vol. 8. — P. 71—77.

117. Hirsch, J.D. Easily reversible desthiobiotin binding to streptavidin, avidin, and other biotin-binding proteins: uses for protein labeling, detection, and isolation / J.D. Hirsch, L. Eslamizar, B.J. Filanoski, N. Malekzadeh, R.P. Haugland, J.M.Beechem, R.P. Haugland // Anal. Biochem. — 2002. — Vol. — 308. — P. 343-357

118. Hultin, L E CD20 (pan-B cell) antigen is expressed at a low level on a subpopulation of human T lymphocytes / L. E. Hultin, M. A. Hausner, J. V. Giorgi, P. M. Hultin // Cytometry. — 1993. — Vol 14. — P. 196-204

119. Ibegbu, C.Use of human CD3 monoclonal antibody for accurate CD4+ and CD8+ lymphocyte determinationsin macaques: phenotypic characterization of the CD3-CD8+ cell subset / C. Ibegbu, A. Brodie-Hill, A. P. Kourtis, A. Carter, H. McClure, Z. W. Chen, A. J. Nahmias // J. Med. Primatol. — 2001. — Vol. 30, N 6. — P. 291—298.

120. Janeway. Ch. Immunobiology / Ch. Janeway, P. Travers, M. Walport, M. Shlomchik. — 6-th edition. — New York and London: Garland Science, 2005. — 800 P.

121. Jani, I.V. Multiplex immunoassays by flow cytometry for diagnosis and surveillance of infectious diseases in resource-poor settings / I.V Jani, G. Janossy, D.W.G. Brown, and F. Mandy // Lancet Infect. Dis. — 2002. — Vol. 2. — P. 243-250.

122. Janossy, G. Affordable CD4_-T-Cell Counting by Flow Cytometry: CD45 Gating for Volumetric Analysis / G. Janossy, I.V. Jani, N.J. Bradley, A. Bikoue, T. Pitfield, D.K. Glencross // Clinical and doagnostic laboratory immunology. —Sept. 2002. — P. 1085-1094

123. Janossy, G. Affordable CD4+ T-cell counts on «single-platform» flow cytometers. I. Primary CD4 gating. / G. Janossy, I. V. Jani, and W. Gohde. // Br. J.

Haematol. — 2000. — Vol. 111. — 1198-1208

124. Jewettl, A. Emerging Mechanismsof Immunosuppression in Oral Cancers / A. Jewettl, C. Head, N. A. Cacalano // J. Dent. Res. — 2006. — Vol. 85, N 12. — P. 1061—1073.

125. Jonuleit, H. Identification and Functional Characterization of Human CD4+CD25+T Cells with Regulatory Properties Isolated from Peripheral Blood / H. Jonuleit, E. Schmitt, M. Stassen, A. Tuettenberg, J. Knop, A.H. Enk // J. Exp. Med. Volume. — 2001. — Vol. 193(11). — P.1285-1294.

126. Klein, E. Separation and characteristicsof tumor-infiltrating lymphocytes in man / E. Klein, F. Vanky, U. Galili et al. // Contemp. Top. Immunobiol. - 1980. - Vol. 10. -P. 79-107.

127. Klein, G. Demonstration of resistance against methylcholantreneinduced sarcomas in the primary autochtonous host / G. Klein, H.O. Sjogren, E. Klein et al. // Cancer Res. - 1960. - Vol. 20. - P. 1561-1572.

128. Knuth, A. T-cell-mediated cytotoxicity against autologous malignant melanoma: analysis with interleukin 2-dependent T-cell cultures / A. Knuth, B. Danowski, H.F. Oettgen et al. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1984. - Vol. 81. - P. 3511-3515.

129. Knutson, K. L.T-Cell Immunity to the Folate Receptor Alpha IsPrevalent in Women With Breast or Ovarian Cancer / K. L. Knutson, C. J. Krco, C. L. Erskine, K. Goodman, L. E. Kelemen, P. J. Wettstein, P. S. Low, L. C. Hartmann, K. R. Kalli // J. Clin. Oncol. — 2006. — Vol. 24. — P. 4254-^261.

130. Kripke M.L. Antigenicity of murine skin tumors induced by ultraviolet light // J. Natl. Cancer Inst. - 1974. - Vol. 53. - P.1333-1336.

131. Kronick, M.N. Immunoasay tehniques with flourescent phycobiliprotein conjugates/ M.N. Kronick, P.D. Grossman // Clin. Chem. — 1983. — V. 29. — P. 1582.

132. Kronick, M.N. The use of phycobiliproteins as flourescent labels in immunoassay/ M.N. Kronick // J.Immunol. Meth. — 1986. — V. 92(1). — P. 1-13

133. Kuznetsova, V.E. Synthesis, properties and bioconjugation of water-soluble asymmetric indodicarbocyanine dyes / V.E. Kuznetsova, V.A. Vasiliskov, A.S.

Zasedatelev, A.V. Chudinov // Mendeleev Communications. — 2008. — T. 18. — № 3.

— C. 138-140.

134. Laurence, J. T-Cell Subsets in Health, Infectious Disease, and Idiopathic CD4+T Lymphocytopenia / J. Laurence // Annals of Internal Medicine. — 1993. — 119(1). — P.55-62

135. Leclerc, J.C. Cell-mediated reaction against tumors induced by oncorna viruses . I. Kinetics and specificity of the immune response in murine sarcoma virus (MSV)-induced tumors and transplanted lymphomas / J.C. Leclerc, E. Gomard, J.P. Levy // Int. J. Cancer. - 1972. - Vol. 10. - P. 589-601.

136. Levi, F.A. Circadian rhythms in circulating T lymphocyte subtypes and plasma testosterone, total and free Cortisol in five healthy men / F.A. Levi, C. Canon, Y. Touitou, J. Sulon, M. Mechkouri, E.D. Ponsart, et al. // Clin. Exp. Immunol. — 1988.

— Vol. 71, —P. 329-335

137. Lin, Y. Synthesis and properties, of sulfhydryl-reactive near-infrared cyanine fluorochromes for fluorescence imaging / Y. Lin , R. Weissleder , C.H. Tung // Mol. Imaging. — 2003. — Apr. — Vol. 2(2). — P. 87-92.

138. Malone, J.L. Sources of variability in repeated T-helper lymphocyte counts from human immunodeficiency virus type 1-infected patients: total lymphocyte count fluctuations and diurnal cycle are important / J.L. Malone, T.E. Simms, G.C. Gray, K.F. Wagner, J.R. Bürge, D.S.Burke //J. Acquir. Immune. Defic. Syndr. — 1990. — Vol.3.

— 144-151

139. Melamed, M.R. An historical review of the development of flow cytometers and sorters/ M.R. Melamed., P.F. Mullaney, H.M. Shapiro, ed. M.R. Melamed, T. Lindmo and M.L. Mendelsohn) // Flow cytometry and sorting. —2nd edn. — New York: Wiley-Liss, 1990, —PP. 1-9.

140. Moore, W.A. Data analysis in flow cytometry/ W.A. Moore, R.A. Kautz, In: D.M. Weir, L.A. Herzenberg, C.M. Blackwell, L.A. Herzenberg, editors. — Handbook of experimental immunology. — 4th edition. — Edinburgh: Blackwell Scientific, 1986.

— P. 30.1-30.11.

141. Moriya, N. Mechanisms of HLA-DR antigen expression in phytohemagglutinin-

activated T cells in man. Requirement of T cell recognition of self HLA-DR antigen expressed on the surface of monocytes / N. Moriya, K. Sanjoh, S. Yokoyama and T. Hayashi // The Journal of Immunology. — 1987. — Vol. 139(10). — P. 3281-3286.

142. Mujumdar, R.B. Cyanine dye labeling reagents: sulfoindocyanine succinimidyl esters / R.B. Mujumdar, L.A. Ernst, S.R. Mujumdar, C.J. Lewis, A.S. Waggoner // Bioconjug. Chem. — 1993. — Vol. 4. — P. 105-111

143. Mujumdar, S.R. Cyanine-labeling reagents: sulfobenzindocyanine succinimidylesters / S.R. Mujumdar, R.B. Mujumdar, C.M. Grant, A.S. Waggoner // Bioconjug. Chem. —1996. — Vol. 7. — P. 356-362

144. Mukherji, B. Clonal analysis of cytotoxic T cell response against human melanoma / B. Mukherji, T.J. MacAlister // J. Exp. Med. - 1983. - Vol. 158. - P. 240245.

145. Negler, A. Comparative studies of human FcRIII-positive and negative natural killer cells / A.Negler, L.L. Lanier, S. Cwirla and J.H. Phillips // The Journal of Immunology. — 2002. — Vol. 143(10). —P. 3183-3191

1 146. Oi, V.T. Fluorescent phycobiliprotein conjugates for analyses of cells and molecules / V.T. Oi, A.N. Glazer, L.Stryer //J. Cell. Biol. — 1982. — V.93. — P. 981

147. Ormerod, M.G. Flow cytometry; A practical approach / M.G. Ormerod. — Oxford: IRL Press, 1990. — 304 p.

148. Owens, M.A. Flow cytometry principles for clinical laboratory practice. Quality Assurance for Quantitative Immunophenotyping / M.A. Owens, M.R. Loken. — Wiley-Liss, Inc., 1995. —228 p.

149. Panchuk-Voloshinaa, N. Alexa Dyes, a Series of New Fluorescent Dyes that Yield Exceptionally Bright, Photostable Conjugates / N. Panchuk-Voloshinaa, R.P.

, Haugland, J.Bishop-Stewart, M.K. Bhalgat, P.J. Millard, F.Mao, W.Y. Leung, and R.P. Haugland //Journal of Histochemistry and Cytochemistry. — 1999. — Vol. 47. — P. 1179-1188

150. Parks, D.R. Fluorecsence-activated cell sorting: theory, experimental optimization, and application in jymphoid cell biology / D.R. Parks, L.A. Herzenberg //

' Meth. Enzymol. — 1984. — Vol. 108. — P. 197-241

151. Perez, O. D.LFA-1 signaling through p44/42 iscoupled to perforin degranulation in CD56+CD8+ natural killer cells / O. D. Perez, D. Mitchell, G. C. Jager, G. P. Nolan // Blood. — 2004. — Vol. 104. — P. 1083—1093.

152. Pragl, B. Synthesis, characterization, and application of Cy dye- and Alexa dye-labeled hongotoxin (1) analogues.The first high affinity fluorescence probes for voltage-gated K_channels / B. Pragl, A. Koschak, M. Trieb, G. Obermair, W.A. Kaufmann, U. Gerster, E. Blanc, et al. // Bioconjug. Chem. — 2002. — Vol. 13. — P. 416-425

153. Rack, K.A. Characterization of three de novo derivative chromosomes 16 by «reverse chromosome painting» and molecular analysis / K.A. Rack, P.C. Harris, A.B. MacCarthy, R. Boone, H. Raynham, M. McKinleyt, M. Fitchett, C.M. Towe, P. Rudd, J.A.L. Armour, R.H.Lindenbaum, V.J.Buckie // Am. J. Hum. Genet. — 1993. — Vol. 52, —P. 987-997.

154. Randolph, J.B. Stability, specificity and fluorescence brightness of multiply-labeled fluorescent DNA probes / J.B.Randolph, A.S. Waggoner // Nucleic Acids Res. — 1997/ — Vol. 25. — P. 2923-2929

155. Reichert, T. Lymphocyte subset reference ranges in adult Caucasians / T. Reichert, M. De Bruyere, V. Deneys, T. Totterman, P. Lydyard, F. Yuksel, et al. // Clin. Immunol. Immunopathol. — 1991. — Vol. 60. — P. 190-208

156. Rodriguez, A. R.Influence of interleukin-15 on CD8+ natural killer cellsin human immunodeficiency virustype 1-infected chimpanzees / A. R. Rodriguez, B. P. Arulanandam, V. L. Hodara, H. M. McClure, E. K. Cobb, M. T. Salas, R. White, R. R. Murthy // J. Gen. Virol. — 2007. — Vol. 88. — P. 641—651.

157. Roederer, M. Cy7PE and Cy7APC: bright new probes for immunofluorescence / M. Roederer, A.B. Kantor, D.R. Parks, L.A. Herzenberg //Cytometry. — 1996. — Vol. 24.-191-197

158. Roederer, M. Methods for fluorescent conjugation of monoclonal antibodies / M. Roederer. — 1997. — http://www.drmr.com/abcon

159. Rouse, B.T. Anti-theta serum-induced suppression of the cellular transfer of tumour-specific immunity to syngeneic plasma cell tumour / B.T. Rouse, M. Rollinghoff, N.L. Warner // Nat. New Biol. - 1972. - Vol. 238. - P. 116-117.

160. Ruffel, B. Leucocyte composition in human breast cancer / B. Ruffel, A. Au, H.S. Rugo et al. // PNAS. - 2012. - Vol. 109, N 8. - P. 2796-2801.

161. Saito, T. Spontaneousapoptosisof CD8+ T lymphocytesin peripheral blood of patientswith advanced melanoma / T. Saito, G. Dworacki, W. Gooding, M. T. Lotze, T. L. Whiteside // Clin. Cancer. Res. — 2000. — Vol. 6. — P. 1351—1364.

162. Schuler, B. Specific labeling of polypeptides at amino-temiinal cysteine residues using Cy5-benzyl thioester / B. Schuler, L.K. Pannell // Bioconjug. Chem. — 2002. — Vol. 13(5). —P. 1039-43.(36)

163. Senju, M. Two-color immunofluorescence and flow cytometric analysis of peripheral blood lymphocyte subsets in Caucasian and Japanese healthy subjects / M. Senju, K. Makiyama, K. Hara, F. Hulstaert, J.N. Lowder, D.P. Jewell // Jpn. J. Med. — 1991. — Vol. 30(6). — P. 509-15.

164. Shalekoff, S. Effects of AntHKOagulants and Temperature on Expression of Activation Markers CD1 lb and HLA-DR on Human Leukocytes / S. Shalekoff, L. Page-Shipp, C. Tiemessen // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology/ — 1998.

— Vol. 5(5). —P. 695-702.

165. Shapiro, H.M. Practical flow Cytometry / H.M. Shapiro. — N.Y., Chichester, Brisbane,Toronto & Singapore: WILEY-LISS Inc. — 1995. — 542 P.

166. Shershov, V.E. Near-infrared heptamethine cyanine dyes. Synthesis, spectroscopic characterization, thermal properties and photostability / V.E. Shershov, M.A. Spitsyn, V.E. Kuznetsova, E.N. Timofeev, O.A. Ivashkina, I.S. Abramov, T.V. Nasedkina, A.S. Zasedatelev, A.V. Chudinov // Dyes and Pigments. — 2013. — T. 97.

— №2. —C. 353-360.

167. Spaggiari, G.M. Soluble HLAclass I molecules induce natural killer cell apoptosis through the engagement of CD8: evidence for a negative regulation exerted by members of the inhibitory receptor superfamily / G.M. Spaggiari, P. Contini, R. Carosio, M. Arvigo, M. Ghio, D. Oddone, A. Dondero // Blood. — 2002. — Vol. 99(5).

— P. 1706-14.(48)

168. Spellman, C.W. Ultraviolet light, tumors and suppressor T cells / C.W. Spellman, R.A. Daynes // Hum. Pathol. -1981. - Vol. 12. - P. 299- 301.

169. Steinkamp, J.A. A modular detector for flow cytometric multHKOlour flourecsense measurments / J.A. Steinkamp, R.C. Habbersett, C.C. Stewart // Cytometry. — 1987. — Vol. 8. — P. 353.

170. Stewart, C.C. Four colour compensation / C.C. Stewart, S.J. Stewart // Cytometry. — 1999. — Vol. 3 8 (4). — P. 161 -175

171. Stratieva-Taneeva, P.A. Bispecific monoclonal antibodies to human Interleikin 2 and horseredish peroxidase / P.A. Stratieva-Taneeva, S.V. Khaidukov, V.A. Kovalenko, I.V. Nazimov, L.V. Samochvalova, V.A. Nesmeyanov // Hybridoma. — 1993. — Vol. 12, —N3, —P. 271-284.

172. Subleski, J.J. The split personality of NKT cells in malignancy, autoimmune and allergic disorders / J.J. Subleski, Q. Jiang, J.M. Weiss, R.H. Wiltrout // Immunotherapy. — 2001, —Vol. 10. —P. 1167-84

173. Teixeira, G. Immunological evaluation of harvested stem cells obtained by leukapheresis after chemotherapy / G. Teixeira, B. Lenormand, P. Jean, D. Fardoun, E. Sumereau-Dassin, D. Bastit, H. Tilly, H. Piguet, M. Monconduit, J.P. Vannier // Am. J. Hematol. — 1992. — Vol. 39. — N 3. — P. 172-175.

174. Telford, W.G. Cryptomonad algal phycobiliproteins as fluorochromes for extracellular and intracellular antigen detection by flow cytometry / W.G. Telford, M.M. Moss, J.P. Morseman, F.C.T. Allnutt // Cytometry. — 2001. — Vol. 44(1). — P. 16-23(39)

175. Telford, W.G. Cyanobacterial stabilized phycobilisomes as fluorochromes for extracellularantigen detection by flow cytometry / W.G. Telford, M.M. Moss, J.P. Morseman, F.C.T. Allnutt // J. Immunol. Methods — 2001. — Vol. 254. — P. 13-30

176. Terstapper, L.W. Five-dimensional flow cytometry as a new approach for blood and bone marrow differentials / L.W. Terstapper, M.R. Loken //Cytometry. — 1988. — Vol. 9(6). —P. 548.(30)

177. Tevethia, S.S. Requirement of thymus-derived theta-positive lymphocytes for rejection of DNA-virus (SV 40) tumors in mice / S.S. Tevethia, J.W. Blasecki, G. Vanek et al. // J. Immunol. - 1974. - Vol. 113. - P. 1417-1423.

178. Timofeev, E.N. New indocyanine derivatives for the synthesis of fluorescently

labeled oligonucleotides / E.N. Timofeev, V.E. Kuznetsova, A.S. Zasedatelev, A.V. Chudinov // Letters in Organic Chemistry. — 2009. — T. 6. — № 1. — C. 71-76.

179. Tjioe, I. Phycoerythrin-Allophycocyanin: A Resonance Energy Transfer Fluorochrome for Immunofluorescence / I. Tjioe, T. Legerton, J. Wegstein, L.A. Herzenberg, and M. Roederer //Cytometry. — 2001. — Vol. 44. — P. 24 -29 (25)

180. Toutchkine, A. Facile synthesis of thiol-reactive Cy3 and Cy5 derivatives with enhanced water solubility / A. Toutchkine, P. Nalbant, K.M. Hahn // Bioconjug. Chem.

— 2002. —Vol. 13, —P. 387-391 (8)

181. Wan, Fai Ng. Human CD4+CD25+ cells: a naturally occurring population of regulatory T cells / Fai. Ng. Wan, P.J. Duggan, F. Ponchel, G. Matarese, G. Lombardi, A. D. Edwards, J.D. Isaacs, R.I. Lechler // Blood. — 2001. — Vol. 28(9). — P. 27362744. (84)

182. Ward, P.L. Major histocompatibility complex class I and unique antigen expression by murine tumors that escaped from CD8+ T cell dependent surveillance / P.L. Ward, H.K. Koeppen, T. Hurteau et al. // Cancer Res. - 1990. - Vol. 50. - P. 38513858

183. Whiteside, T.L. Role of Human Natural Killer Cells in Health and Disease / T.L Whiteside, R.B. Herberman // Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. — 1994. —P. 125-133.(46)

184. Yu, X. The role of B7 costimulation in CD4/CD8 T cell homeostasis / X. Yu, S. Fournier, J. P. Allison, A. H. Sharpe., R. J. Hodes // J. Immunol. — 2000. — Vol. 164.

— P. 3543—3553.

185. Zola, H.CD molecules 2005: human cell differentiation molecules / H/ Zola, et al. // Blood. — 2005. — 109 (9). — P. 3123-6