Иммуноферментный анализ антител к пептидным биорегуляторам и белкам системы гемостаза в норме и при патологии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Савицкая, Юлия Анатольевна

• Савицкая, Юлия Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Савицкая, Юлия Анатольевна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ_3

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ_7

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ_8

«биорегуляторы системы гемостаза»

1.1. Белковые факторы регуляции системы гемостаза_8

1.1.1. Общая характеристика тромбина и его природных ингибиторов_10

1.1.2. Биологическая функция тромбина и его природных ингибиторов при развитии патологии

14

1.1.3. Методы определения тромбина, его природных ингибиторов и их использование в диагностике заболеваний __19

1.2. Пептиды ренин-ангиотензиновой и калликреин-кининовой систем_20

1.2.1. Структура и физиологическая роль ангиотензина II и брадикинина_21

1.2.2. Значение пептидов ренин-ангиотензиновой и калликреин-кининовой систем в норме и при развитии рада заболеваний_24

1.2.3. Методы определения пептидов: ангиотензина II и брадикинина, и возможность их применения в медицинской диагностике_31

1.3. Взаимосвязь биорегуляторов системы гемостаза_32

1.3.1. Ренин-ангиотензиновая и калликреин-кининовая системы_32

1.3 .2. Факторы системы свёртывания крови и пептидные биорегуляторы_36

1.4. Роль гуморального иммунитета в регуляции системы гомеостаза при патологии_37

1.4.1. Естественные антитела к физиологически активным соединениям и их биологическая функция__38

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ_41

2.1. Материалы исследования_41

2.2. Методы исследований_42

2.3. Получение конъюгатов гаптенов на полимерном носителе_43

2.3.1. Получение конъюгата ангиотензина II_43

2.3.2. Получение конъюгата брадикинина_43

2.4. Выделение сывороточных белков из плазмы крови_43

2.4.1. Выделение антитромбина III из плазмы крови_43

2.4.2. Иммунохимический анализ чистоты антитромбина III_44

2.4.3. Выделение а2-макроглобулина из сыворотки крови_45

2.5. Получение иммуноспецифических реагентов для метода латексной агглютинации_46

2.5.1. Получение моноспецифической антисыворотки к антитромбину III_46

2.5.2. Синтез конъюгата на основе СМК-латекса__47

2.5.3. Метод латексной агглютинации_47

2.6. Разработка метода ИФА выявления естественных антител к белкам и гаптенам _._47

2.6.1. Определение рабочего разведения сыворотки и концентрации антигена_47

2.6.2. ИФА белков и пептидов в сыворотке крови человека_48

2.7. Выделение антител к брадикинину и ангиотензину П из сыворотки крови человека _49

2.7.1. Получение сорбента для аффинной хроматографии,_49

2.7.2. Выделение антител к брадикинину и ангиотензину II аффинной хроматографией__49

2.8. Определение специфичности и аффинности выделенных на аффинном сорбенте антител к брадикинину и ангиотензину П_50

2.8.1. Выбор условий проведения ингибиторного ИФА_50

2.8.2. Ингибиторный ИФА для оценки специфичности и аффинности антител к брадикинину и ангиотензину II________50

2.8.3. Определение специфичности антител к брадикинину и ангиотензину II_50

2.8.4. Расчёт константы аффинности антител _51

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ_52

3.1. Получение реагентов для проведения ИФА определения антител к белкам и пептидным биорегуляторам_52

3.1.1. Синтез конъюгированных антигенов пептидов на полимерной матрице_53

3.1.2. Выделение белковых факторов системы гемостаза: антитромбина III и а2-макроглобулина

53

3.1.3. Получение конъюгата для определения антитромбина III методом латексной агглютинации __54

3.2. Разработка ИФА определения антител к пептидным биорегуляторам системы гемостаза_56

3.2.1. Определение уровня антител к ангиотензину II и брадикинину в сыворотке крови доноров и больных__59

3.2.2. Определение уровня антител к ангиотензину II в сыворотке крови больных_62

3.2.3. Определение уровня антител к брадикинину в сыворотке крови больных_63

3.2.4. Исследование иммунохимических свойств естественных антител к пептидным биорегуляторам системы гемостаза_63

3.2.5. Практическая значимость выявления антител к пептидным биорегуляторам системы гемостаза_65

3.3. ИФА определения антител к белковым факторам системы гемостаза и его применение в клинике_71

3.3.1. Определение методом ИФА антител к антитромбину III_71

3.3 .2. Практической значимость выявления антител к антитромбину III_72

3.3.3. Определение антител методом ИФА к тромбину и его природным ингибиторам_73

3.3.4. Установление взаимосвязи между уровнем антител к белковым факторам системы гемостаза и биохимическими показателями этой системы_

3.3.5. Влияние терапии на показатели системы гемостаза и гуморального иммунитета у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями и нарушением обмена веществ_77

ВЫВОДЫ_82

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ _ _ __83

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммуноферментный анализ антител к пептидным биорегуляторам и белкам системы гемостаза в норме и при патологии»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

Исследования последних лет направлены на разработку новых методов иммунохимического анализа низкомолекулярных пептидных биорегуляторов и белков, играющих важную роль в патогенезе ряда заболеваний заболеваний.

Хорошо известно, что изменения гемостаза, связанные с функционированием его основных звеньев - белковых факторов системы свёртывания крови человека: тромбина и его ингибиторов (антитромбина III и аг-макроглобулина), а также пептидных биорегуляторов калликреин-кининовой и ренин-ангиотензиновой систем, имеют большое значение в патогенезе атеросклероза, ишемической болезни сердца, гипертонии, нарушении обмена веществ.

В основе сердечно-сосудистых катастроф (острый инфаркт миокарда, инсульт) лежит, как правило, тромбоз, обусловленный активацией тромбоцитов и процессов свёртывания крови.

Вот почему актуальна задача создания надёжных диагностических методов контроля, позволяющих следить за состоянием организма человека, которые можно использовать в норме и при проявлении патологических симптомов.

В нашей стране и за рубежом используются традиционные подходы для создания диагностических тест-систем, которые заключаются в разработке способов количественного определения белковых либо пептидных факторов, участвующих в механизме развития заболевания.

Однако из литературных данных, известно насколько длительно создание надёжного и простого иммунохимического метода анализа перечисленных выше соединений. Это, в первую очередь, связанно с трудоёмкостью разработки специфического анализа и высокой чувствительностью, так как эти вещества в активном состоянии существуют в организме человека в небольших концентрациях и быстро метаболизируются, что затрудняет их выявление в сыворотке крови.

С другой стороны, в настоящее время выполнены исследования, свидетельствующие о наличии в организме здорового человека иммуноглобулинов, взаимодействующих с рядом эндогенных биорегуляторов и называемых естественными антителами.

При патологических состояниях происходит изменение нормального уровня е-ат, которое, как правило, связано с нарушением метаболизма того или иного эндогенного соединения, участвующего в патогенезе заболевания.

Вот почему большой интерес представляет обнаружение и изучение роли е-ат к ряду пептидных и белковых регуляторов системы гемостаза, изменение метаболизма которых имеет место при сердечно-сосудистых заболеваниях и нарушении обмена веществ. К ним относятся, в первую очередь, тромбин и его природные ингибиторы, а также пептиды - брадикинин и ангиотензин II.

Исследования по выявлению и изучению свойств е-ат к этим соединениям позволяют создать новые методы иммунохимического анализа, как для изучения механизма перечисленных выше заболеваний, так и для их диагностики.

Цель и задачи исследования.

Цель данного исследования заключается в разработке различных вариантов твердофазного иммуноферментного анализа естественных антител к пептидным биорегуляторам и белкам системы гемостаза для практического применения в клинике заболеваний сердечно-сосудистой системы и нарушения обмена веществ.

В СООТВЕТСТВИИ С ПОСТАВЛЕННОЙ ЦЕЛЬЮ ОПРЕДЕЛЕНЫ СЛЕДУЮЩИЕ ЗАДА ЧИ: ^ осуществить получение иммунохимических реагентов для разработки иммуноферментного анализа: синтезировать антигены пептидов (брадикинина и ангиотензина II) на полимерной матрице, разработать хроматографические способы выделения белков (аг-макроглобулина и антитромбина III); разработать иммуноферментные методы определения антител к брадикинину и ангиотензину II, оценить возможность использования иммуноферментного анализа антител для данных биорегуляторов в клинике сердечно-сосудистых заболеваний и нарушения обмена веществ;

выделить с помощью аффинной хроматографии антитела к брадикинину и ангиотензину II из сыворотки крови доноров и больных сердечно-сосудистыми заболеваниями, и исследовать их иммунохимические свойства; оптимизировать условия выявления твердофазным иммуноферментным анализом антител к тромбину и его природным ингибиторам (а2-макроглобулину и антитромбину III) в сыворотке крови людей; "Ф провести сравнительный анализ содержания специфических антител к белкам и пептидным биорегуляторам системы гемостаза в сыворотке крови доноров и

больных сердечно-сосудистыми заболеваниями и нарушением обмена веществ для выявления взаимосвязи с биохимическими показателями этой системы и установления практической значимости разработанных вариантов иммуноферментного анализа.

Научная новизна работы. => Разработаны новые способы получения конъюгатов пептидных биорегуляторов на полимерной матрице. Синтезированы искусственные антигены брадикинина и ангиотензина П с использованием 4-полинитрофенилакрилата. => В сыворотке крови доноров и больных сердечно-сосудистыми заболеваниями и нарушением обмена веществ обнаружено наличие антител к эндогенным пептидным биорегуляторам. Причём, у больных по сравнению с донорами установлено изменение уровня антител к брадикинину и ангиотензину II. => На основе проведённых исследований разработаны оригинальные методы твёрдофазного иммуноферментного анализа антител к пептидным биорегуляторам в сыворотке крови людей. Показана возможность их использования в практической медицине. => Приготовлен новым способом иммуносорбент для аффинной хроматографии; впервые из сыворотки крови доноров и больных сердечно-сосудистыми заболеваниями выделены антитела к брадикинину и ангиотензину II и исследованы их иммунохимические свойства.

Практическая ценность работы.

Полученные в работе результаты по созданию новых методов ИФА для выявления е-ат к белкам и пептидным биорегуляторам имеют большое значение для практического использования в медицине.

Так, проведён сравнительный анализ содержания антител к тромбину и его ингибиторам, а также к брадикинину и ангиотензину II в сыворотке крови доноров и больных сердечно-сосудистыми заболеваниями и нарушением обмена веществ, в результате которого установлена взаимосвязь с биохимическими показателями, используемыми в качестве оценки состояния больного и течения этих заболеваний. Показана практическая ценность разработанныдх методов иммуноферментного анализа.

Совместно с сотрудниками Клиники лечебного питания Института питания РАМН подготовлен проект методических рекомендаций по практическому применению данных методов иммуноферментного анализа в клинике.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Иммуноферментный способ анализа, основанный на выявлении антител к белкам системы гемостаза (тромбину и его ингибиторам) в сыворотке крови, можно использовать в качестве контроля за состоянием организма человека в норме и при появлении патологических изменений.

2. Обнаружено наличие в сыворотке крови человека антител к пептидным биорегуляторам гемостаза (брадикинину и ангиотензину II). Выявлено изменение, по сравнению с нормой, уровня антител к этим соединениям у людей, страдающих сердечно-сосудистыми заболеваниями и нарушением обмена веществ. Разработаны методы анализа антител к данным эндогенным веществам.

3. Установлена взаимосвязь между содержанием антител к тромбину, антитромбину III и аг-макроглобулину в сыворотке крови больных сердечно-сосудистыми заболеваниями и нарушением обмена веществ и биохимическими показателями, используемыми для характеристики течения и прогноза этих патологий в клинике. Показана практическая значимость разработанных методов иммуноферментного анализа.

Апробация работы.

Основные материалы и положения диссертационной работы доложены и утверждены:

иг- на межлабораторной конференции Института физиологически активных веществ РАН (протокол №1 от 24 апреля 1997 года);

»*- на межлабораторной конференции Московского научно-исследовательского института им. Г.Н. Габричевского (протокол №1 от 25 апреля 1998 года).

Результаты исследования также были доложены на:

иг- Международном конгрессе по аналитической химии (г. Москва, 1997 год);

иг Ш-ем Международном симпозиуме «Питание и здоровье. Б АД в профилактике и лечении наиболее распространённых заболеваний» (г. Тюмень, 1997 год).

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

А1 - ангиотензин I;

АП - ангиотензин II;

АД - артериальное давление;

осг-МГ - а2-макроглобулин,

АПС - аминопропилированное стекло;

АПФ - ангиотензин-превращающий фермент;

АТ - антитела;

АТШ - антитромбин III;

БК - брадикинин;

ВМК - высокомолекулярный кининоген; ГБ - гипертоническая болезнь; ГЛП - гиперлипопротеидемия;

ДВС-синдром - синдром диссеминированного внутрисосудистого свёртывания,

ДМФА - диметилформамид,

Е-ат - естественные антитела;

ЗФР - забуференный раствор,

ИБС - ишемическая болезнь сердца,

ИБХ РАН - Институт биоорганической химии Российской академии наук;

ИФА - иммуноферментный анализ;

ИЭФ - иммуноэлектрофорез по Грабару и Уильямсу;

Ка - константа аффинности;

КА - конъюгированные антигены;

КДИ - мета-толуол-сульфанат-1 -циклогексил-2(морфолин-этил)карбодиимид; ККС - калликреин-кининовая система; КНЦ - кардиологический научный центр; ЛА - латексная агглютинация;

МГУ им. М.В. Ломоносова - Московский Государственный университет им. М.В. Ломоносова;

МИТХТ им. М.В. Ломоносова - Московский институт тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова;

МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского - Московский научно-исследовательский институт

им. Г.Н. Габричевского;

ОИМ - острый инфаркт миокарда,

ПК - прекалликреин;

ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты;

РАМН - Российская академия медицинских наук;

РАН - Российская академия наук;

ПЭГ - полиэтиленгликоль;

РАС - ренин-ангиотензиновая система;

РИД - радиальная иммунодиффузия по Мапсш;

СГК - спонтанно-гипертензивные крысы;

СМК - сополимер стирола с метакриловой кислотой;

ТР - тромбин;

ЧСА - человеческий сывороточный альбумин; РВБ - 0.01 М солевой фосфатный буфер;

- иммуноглобулин класса в; ^М - иммуноглобулин класса М.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Савицкая, Юлия Анатольевна

ВЫВОДЫ

I. Получены иммунохимические реагенты для иммуноферментных методов анализа специфических антител к белкам и пептидным биорегуляторам гемостаза. Синтезированы оригинальным способом конъюгированные антигены брадикинина и ангиотензина II с использованием 4-полинитрофенилакрилата в качестве высокомолекулярной матрицы. Из сыворотки крови выделены высокоочищенные белки: аг-макроглобулин и антитромбин III с помощью аффинной хроматографии.

П. Оптимизированы условия проведения твердофазного иммуноферментного анализа для выявления в сыворотке крови больных и доноров антител к тромбину, а2-макроглобулину и антитромбину III. Доказана практическая значимость метода определения антител к антитромбину III при выборе терапии и установлении прогноза течения заболевания.

Ш. Обнаружены в сыворотке крови здоровых людей естественные антитела к брадикинину и ангиотензину II. Установлено изменение уровня специфических антител к данным биорегуляторам у больных с сердечно-сосудистыми патологиями и нарушением обмена веществ по сравнению с донорами. Показана возможность использования твердофазного иммуноферментного анализа антител к указанным биорегуляторам в клинике для наблюдения за эффективностью лечения.

ГУ. Аффинной хроматографией выделены антитела к брадикинину и ангиотензину II из сыворотки крови доноров и больных сердечно-сосудистыми патологиями. Установлено, что при возникновении заболевания происходит изменение аффинности и специфичности этих антител.

V. Установлена корреляционная зависимость между содержанием в сыворотке крови больных естественных антител к исследуемым антигенам и рядом биохимических показателей (концентрацией холестерина, триглицеридов, фибриногена, протромбиновым индексом, фибринолитической активностью), которые используются в качестве оценки состояния больных. Полученные при этом результаты показывают возможность использования методов определения уровня естественных антител к указанным выше соединениям в качестве дополнительного критерия для характеристики заболевания.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Савицкая, Юлия Анатольевна, 1998 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. «Аффинная хроматография: методы» под редакцией Дина П., Джонсона У., Мидла Ф. // Москва - «Мир» - 1988 - С.278.

2. Байрамов M.A. [докторская диссертация] «Калликреин-кининовая система крови при бронхо-лёгочных и сердечно-сосудистых болезнях у детей» // Москва - 1979.

3. Верееменко К.Н., Голобородько О.П., Кизим А.И. «Протеолиз в норме и при патологии» // Киев - «Вища школа» - 1988.

4. Власов В.В «Эффективность диагностических исследований» // Москва -«Медицина» - 1-ое издание - 1988 - С.297.

5. Глезер Г. А. «Динамика кровообращения при артериальной гипертонии» // Москва - «Медицина» - 1970 - С. 176.

6. Гомазков O.A. «Калликреин-кининовая система крови и регуляция гемодинамики» // Кардиология - 1973 -№7 - С. 136-150.

7. Гомазков O.A. [докторская диссертация] «Функциональное значение калликреин-кининовой системы крови в норме и при сердечно-сосудистой патологии» // Москва 1977.

8. Гомазков O.A., Коммисарова Н.В., Ланцберг Л.А. в книге «Актуальные проблемы общей патологии и патологической физиологии» под редакцией Черхуха М.А. // Москва - 1978 - выпуск 2 - С.56.

9. Гомазков O.A., Трапезникова С. С. «Биохимическая и физиологическая характеристика кининазной и ангиотензин-превращающей функции лёгких» // Успехи современной биологии - 1981 - №6 - С.652-654.

10. Гомазков O.A., Коммисарова Н.В. «Типы реагирования калликреин-кининовой системы крови при различных функциональных и патологических изменениях в организме» // Патологическая физиология и экспериментальная терапия - 1982 -№1 - С.70-76.

11. Гомазков O.A. «Функциональная биохимия регуляторных пептидов» // Москва -«Наука» - 1993 -С. 160.

12. Гомазков O.A. «Современные тенденции в исследовании физиологически активных пептидов» // Успехи современной биологии - 1996 - №1 - Т.116 -С. 60-68.

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22,

23.

24.

25.

26.

27.

Дзизинский A.A., Гомазков O.A. «Кинины в физиологии и патологии сердечнососудистой системы» // Новосибирск - «Наука» - 1976 - С.207. Елисеева Ю.Е., Орехович В.Н., Павлихина Л.В. и др. «Упрощённый метод определения калликреиногена и калликреина в сыворотке (плазме) крови человека в норме и при некоторых патологических состояниях» // Вопросы медицинской химии - 1974 - №6 - С.660-663.

Зорин H.A., Зорина P.M. «Вопросы онкологии» // 1988 - Т.34 - №6 - С.651-655. Зубаиров Д.М. «Биохимия свёртывания крови» // Москва - «Высшая школа» -1978.

«Иммунологические методы» // Москва - «Высшая школа» - 1990. Карпицкий В В. [докторская диссертация] «Соотношение различных компонентов регуляции калликреин-кининовой системы крови в патогенезе артериальной гипертензии» // Москва - 1986 - С.352.

Ковалёв И.Е., Полевая О.Ю. «Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям» // Москва - «Наука» - 1985 -С.302.

Ковалёв И.Е., Полевая О.Ю. «Антитела к физиологически активным соединениям» // Москва - «Медицина» - 1981 - С. 127.

Коммисарова Н.В. [кандидатская диссертация] «Сердечно-сосудистые расстройства и экстеразная активность калликреина» // Москва - 1979. Кудряшов Б.А. «Биологические проблемы регуляции жидкостного состояния крови и её свёртывания» // Москва - «Медицина» - 1975.

Лычёв В.Г. «Диагностика и лечение диссеминированного внутресосудистого свёртывания крови» // Москва - «Медицина» - 1993.

Минцер О.П., Угарова Б.Н., Власова В.В. «Методы обработки медицинской информации» // Киев - «Вища школа» - 1982 - С.250.

Остерман Л.А. «Хроматография белков и нуклеиновых кислот» // Москва -«Наука» - 1985 - С.536.

Пастер Е.У., Овод В.В., Позур В.К., Вихоть Н.К. «Иммунология: практикум» // Киев - «Вища школа» - 1989 - С. 130-152.

Пасхина Т.С. «Биохимические основы патологии сердечно-сосудистой системы» в книге «Молекулярные основы патологии» // Москва - 1966 - С .123-179.

28. Рутберг Р.А. «Простой и быстрый метод одновременного определения скорости рекальцификации и фибрина крови» // Лабораторное дело - 1961 - №5 - С.6-7.

29. Свищенко Е.П., Гомазков О.А., Заноздра НС., Яковлев А.А., Чёрногуз Л.С. «Соотношение ренин-ангиотензиновой и калликреин-кининовой систем крови при тестирующей нагрузке у больных артериальной гипертонией» // Кардиология -1984 - Т.24 - №3 - С. 79-81.

30. «Справочник лабораторных и функциональных показателей здорового человека» под редакцией Беляева М.П. // Москва - «Медицина»- 1992 - С.28.

31. Струкова С.М. «Структурно-функциональные особенности тромбина» в книге «Биохимия животных и человека» под редакцией Курского М.Д. // Киев - «Вища школа» - 1982 - С.26.

32. Уайт А., Хендлер, Смит Э., Хилл Р., Леман И. «Основы биохимии» // Москва -Мир - 1981 - том 3-С.1182-1183.

33. «Физиологически активные пептиды: справочное руководство» составитель Гомазков О. А. // Москва - 1995 - С. 150.

34. Цибиков Н.Н., Рудник МП., Кузник Б.И. «Определение антител к фактору II в эксперименте на мышах и клинике ДВС» // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 1985 - №4 - С.467-469.

35. Шастин Р.Н., Коровников К.А. «Брадикинин и его патогенетическое значение» // Патофизиологическая и экспериментальная терапия - 1965 - №1 - С.81-87.

36. Швец Н.И. [кандидатская диссертация] «Состояние калликреин-кининовой системы у больных гипертонической болезнью, сочетающейся с ишемической болезнью сердца» // Краснодар - 1981.

37. Шхвацабая И.К., Некрасова А.А. «Биологически активные субстанции (простагландины, кинины), их роль в регуляции артериального давления и развития артериальной гипертонии» // Кардиология - 1977 - Т. 17 - №2 - С. 136149.

38. Abligaard U. «Purification of two progressive antithrombins of human plasma» // Scand. J. Clin. Lab. Invest.-1967-Y.19.-P. 190-195.

39. Barrett A., Starkey Ph. «The interactio of a2-MG with proteinass» // Biochem. J. - 1973 -V.133 -№4-P.709-724.

40. Best C.F., Ito M., Oliverio M,I., Mannon P.J., Maeda N., Smithies O, Coffinan T.M. «Regulation of blood pressure by the type 1A angiotensin II receptor gene» // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1995 - V.92-P.3521-3525.

41. Bjork I., Jackson C.M., Jorvall H., Lavine K.K., Nordling K., Salsgiver W.J. «The active site of antithrombin III» // J. Biol. Chem. - 1982 - V.257 - P.2406-2411.

42. Blackburn M.N., Sibley C.C. «The heparin binding site of antithrombin III» // J. Biol. Chem. - 1980 - V.225 - P.824-826.

43. Brown R.K., Baker W.H., Peterkofsky A., Kaufman D.L. «Cristallisation and properties of a glicoprotein isolated from human plasma» // J. Amer. Chem. Soc. - 1954 - V.76 -P.4244-4245.

44. Buchanan G.R., Holtkamp C.A. «Reduced antithrombin III levela during L-asparaginase therapy» // Med. Pediatr. Oncol. - 1980 - V. 8 - P. 7-14.

45. Buller H.K., ten Cate J.W. «Antithrombin III infusion in undergoing peritoneovenous shunt operatin: failure in the prevention of dissiminated intravascular coagulatin» // Thromb. Haemostasis - 1983 - V.49 - P. 128-131.

46. Buller H.K., ten Cate J.W. «Acquiret antithrombin III deficiency laboratory diagnosis, incidence, clinical implications, and treatment with antithrombin III concentrate» // Am. J. Med. - 1989 - V.87(3B) - P.44-48.

47. Cambien F., Soubrier F. «The angiotensin converting enzyme. Molecular biology and implication of the gene polymorphism in cardiovascular diseases» // Hypertension: Pathophysiology, Diagnosis and Management - 1995 - P. 1667-1682.

48. Campbell D.J. «The site of angiotensin production.» // J. Hypertension - 1985 - V.3 -P. 199-207.

49. Campbell D.J. «Tissue renin-angiotensin system: sites of angiotensin formation» // J. Cardiovasc. Pharmacol. - 1987- V.10(Suppl. 7)-P.Sl-S8.

50. Campbell D.J. «Angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitors and kinin metabolism: evidence that ACE inhibitors may inhibit a kininase other than ACE» // Clin, and Exper. Pharmacol. - 1995 -V.22 - №12 - P.903-911.

51. Campbell D.J., Kladis A., Valentijn A. J. «Effects of losartan on angiotensin and bradykinin peptides and angiotensin converting enzyme» // J. Cardiovasc. Pharmacology - 1995 -V.26 - №2 - P.233-240.

52. Carmona A.K., Juliano L. «Inhibition of angiotensin converting enzyme and potention of bradykinin by retro-inverso analogues of short peptides and sequences related to

angiotensin I and bradykinin» // Biochem. Pharmacology - 1996 - V.51 - №8 - P.1051-1060.

53. Carey R.M., Siragy H.M., Jaffa A.A., Margolius H.S. «Renin-angiotensin system modulates renal bradykinin production» // Am. J. Physiology - 1996 - V. 271(4 Pt 2) -P.1090R-1095R.

54. Carretero OA., Scicli A.G. «Kinins as regulators of blood flow and blood pressure, in Laragh J.H., Brenner B.M. (eds)» // Hepertension: Pathophysiology, Diagnosis and Management - 1990 - P. 805-817.

55. Chan V., Chan T.K. «Antithrombin III in fresh and cultured human endotelial cells: a natural anticoagulant from the vascular endotelium» // Throm. Res. - 1979 - V.15 -P.209-213.

56. Chu Z.M., Beilin L.J. «The role of angiotensin converting en2yme and nitric oxide in the enhanced systemic depressor responses to bradykinin in pregnant rats» // Clin Exp Pharmacol Physiology - 1995 -V.22 - №6-7 - P.481-483.

57. Correa F.M.A., Viswanathan M., CiufFo G.M., Tsutsumi K., Saavedra J.M. «Kidney angiotensin II receptors and converting enzyme in neonatal and adult Wistar-Kyoto and spontaneously hypertensive rats» // Peptides - 1995 - V. 16 - №1 - P. 19-24.

58. Curling J.M. «Methods of plasma protein fraction.» // Ac. Press. - 1980 - P.61-62.

59. Danckwardt L., Shimizu I., Bonner G., Rettig R., Unger T. «Converting enzyme inhibition in kinin deficient Brown-Norway rats» // Hypertension - 1990 - V.4 - P.429-435.

60. Davie E.W., Ratnoff O.D. «Waterfall sequence of intrinsic blood clotting» // Science -1964 - V.145 -P.1310-1312.

61. Derkx F., Bouma B., Schalenkamp M P., Schalenkamp M.A. «An intrinsic factor XII-prekallikrein dependent pathway activates the human plasma renin-angiotensin system» // Nature - 1979 - V.280 - №5720 - P.315-316.

62. Dixon I.M., Ju H. «Effect of angiotensin II on myocardial collagen gene expression» // Mol. Cell. Biochem. - 1996 -Y. 163-164 - P.231-237.

63. Dorer F.E., Ryan J.W., Stewart J.M. «Hydrolysis of bradykinin and its higher homologues by angiotensin-converting enzyme» // Biochem. J. - 1974 - V.141 - P.915-917.

64. Dzau V.J. «Cardiac renin-angiotensin system. Molecular and functional aspects» // Amer. J. Med. - 1988 - V.84(Suppl. 3A) - P.22-27.

65. Dzau V.J. «Local expression and pathophysiological role of renin-angiotensin in the blood vessels and heart»// Basic. Res. Cardiol. - 1993 - V.88(Suppl. 1) - P. 1-14.

66. Elisseeva Y.E., Orekhovich V.N., Pavlikhina L.V., Alexeenko L.P. «Carboxycathepsin as key regulatory component of two physiological systems involved in regulation of blood pressure» // Clin. Chim. Acta. - 1971 - V.31 - P.413-419.

67. Erdos E.G. «Conversion of angiotensin I to angiotensin II.» // Am. J. Med. - 1976 - V.60

- P. 749-759.

68. Erdos E.G., Yang H.Y.T. «An enzyme in microsomal fraction of kidney that inactivates bradykinin» // Life. Sci. - 1967 - V.6 - P.569-574.

69. Fenoy F.J., Scicli A.G., Carretero O A., Roman R.J. «Effect of an angiotensin II and kinin receptor antagonist on the renal hemodynamic response to captopril» // Hypertension -1991 -V. 17-P. 1038-1044.

70. Ferguson W.S., Finly T.H. «Localization of disulfide bond in hyman antithrombin III require for heparin accelerated thrombin inactivatin» // Arch. Biochema. Biophys. - 1983

- V.221 - P.304-307.

71. Ferreira S.H., Greene L.J., Alabaster V.A., Bakhle Y.S., Vane J.R. «Activity of various fractions of bradykinin potentiating factor against angiotensin I converting enzyne» // Nature - 1970 -V.225 - P.379-380.

72. Friedman J. «Human thrombin autoantibodies» // Thrombosis. Research. - 1978 - V.13 -P.681-688.

73. Ganrot P.O., Nilehn J.E. «Competition between plasmin and thrombin for a2-macroglobulin» // Clin. Chim. Acta. - 1967 - V.17 - P.511-519.

74. Ganrot P.O., Schersten B. «Serum cc2-MG concentration and its variation with age and sex.» // Clin. Chim. Acta. - 1967 - V. 15 - P. 113-122.

75. Ganten D., Ganten U., Lee M.A., Paul M., Bader M. «Physiological characterization of the hypertensive transgenic rat TGR(mREN2)» // Am. J. Physiology - 1996 - V.270 -P.919-929.

76. Ganten D., Lang R.E., Lehmann E., Unger Th. «Brain angiotensin: on the way to becoming a well studied neuropeptide system» // Biochem. Pharmacology - 1984 - V.13 -P.3523-3528.

77. Ganten D. «The tissue renin-angiotensin system as a target for converting enzyme inhibitors» // Naunyn-Schmiedebergs Arch. Pharmacology - 1989 - V.340 - P. 19-26.

78. Gomez R.A., Lynch K.R., Chevalier R.L., Wilfong N., Everett A., Carey R.M. «Renin and angiotensinogen gene expression in maturating rat kidney» // Am. J. Physiology - 1988 -V.236 - P.F252-F259.

79. Griesbacher T., Lembeck F. «Pathophysiological and possible physiological roles of kinins in the pancreas» // Immunopharmacology - 1996 - V.33 - P.336-338.

80. Guilbert B., Dighiero G., Avrameas S. «Naturally occurring antibodies against nine common antigens in human sera. Detection isolation and characterization» // Journal Immunology - 1982 - V. 178 - P.2779-2787.

81. Hall J.E., «The renin-angiotensin system: renal actions and blood pressure regulation» // Compr. Ther. - 1991 -V.17- P.8-17.

82. Hall J.C., Pauli R., Wison K.M. «Materna and fetal sguelac of anticoagulotion during pregnancy» // Amer. J. Med. - 1980 - V.68 - P. 122-140.

83. Hanz B.M., Steckelings U.M., Artuc M., Paul M., Stoll M. «Angiotensin II stimulates proliferation of primary human keratinocytes via a non-ATI, non-AT2 angiotensin receptor» // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1996 - V.229 - №1 - P.329-33.

84. Harpel P.C. «Studies on human plasma a2-macroglobulin-enzyme interaction. Evidence for proteolytic modification of subunits chain structure» // J. Exp. Med. - 1973 - V.138 -P.508-521.

85. Haverback B.J., Dyce B., Bandy H.F., Wirtschafter S.K., Edmondson H.A. «Protein binding of pancreatic proteolytic enzymes» // J. Clin. Invest. - 1962 - V.41 - P.972-980.

86. Heder G., Bottger A., Siems W.-E., Rottmann M., Kertscher U. «The enzymatic degradation of bradykinin in semen of varios species» // Andrologia - 1994 - V.26 -P.295-301.

87. Hedner U., Nilsson I.M. «Antithrombin III in a clinical material» // Thromb. Res. - 1973 -V.3 - P.631-641.

88. Hirsh J., Piovella F., Pini M. «Congenital antithrombin III deficiency» // Amer. J. Med. -1989 - V.87(3B) - P.34-38.

89. Imboden H., Mosimann R., Felix D. «The neuronal role of angiotensin II in thirst, sodium appetite, cognition and memory» // Biol Rev Camb. Philos. Soc. - 1996 - V.71 - №4 -P.545-559.

90. Inglessis N., Nussberger J., Hagman M., Hiesseprovost O., Insuasty J., Reid J., Menard J., Brunner H.R. «Comparison of the angiotensin II antagonist UP269-6 with the angiotensin

converting enzyme inhibitor enalapril in normotensive volunteers challenged with angiotensin 1» // J. Cardiovasc. Pharmacology - 1995 - V.25 - №6 - P.986-993.

91. Inishi Y., Okuda T., Kurokawa K. «Modulation of renal responses to angiotensin II in spontaneously hypertensive rats» // Japan Heart Journal - 1994 - V.35 -№4 - P.510-513.

92. Ishida H., Scicli AG., Carretero O.A. «Role of angiotensin converting enzyme and other peptidases in in vivo metabolism of kinins» // Hypertension - 1989 -V.14 - P.322-327.

93. Ishida H., Scicli A.G., Carretero O.A. «Contributions of various rat plasma peptidases to kinin hydrolysis» // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1989 - V.251 - P.817-820.

94. Johnston C.I., Fabris B., Jandeleit K. «Intrarenal renin-angiotensin system in renal physiology and pathophysiology» // Kidney Int. Suppl. - 1993 - V.42 -P.59-63.

95. Jordan R.E., Oosta G.M., Gardner W.T., Rosenberg R.D. «The kinetics of haemostatic enzyme - antithrombin in the presence of low molecular weight heparin» // J. Biol. Chem.

- 1980-V.255-P. 10081-10090,

96. Karp G.I., Marcum J.A., Rosenberg R.D. «The role of tryptophan residues in heparin-antithrombin interactions» // Arch. Biochem. Biophys. - 1984 -V.233 - P.712-720.

97. Kawaguchi H., Kitabatake A. «Renin-angiotensin system in failing heart» // J. Mol. Cell. Cardiol. - 1995 - V.27 - №1 - P.201-209.

98. Knot E A R., ten Cate J.W., Drijfhout H.R., Kahle L.H., Tytgat G.N. «Antithrombin III metabolism in patients with liver cirrosis» // Journal. Clinical Pathology - 1984 - V.37 -P.523-530.

99. Kowalski E., Kopek M., Newiarowski S. «An evalution of the euglobulin method for the determination of fibrinolysis» // Journal. Clinical Pathology - 1959 - V.12 - №3 - P.215-218.

100. Krieger J.E., Dzau V.J. «Molecular biology of hypertension» // Hypertension - 1991 -V.18 (Suppl. I) - P.I3-I17.

101. Kuzuo H., Honda M., Tanaka K., Kuramochi T., Morioka S., Takabatake T., Yamori Y. «Direct effects of angiotensin I, angiotensin II an ACE inhibitor and a serine proteinase inhibitor on cultured heart cells from spontaneously hypertensive rats» // Clin. Exp. Pharmacology Physiology - 1995 - V.22 - №2 - P.82-86.

102. Lamontagne D., Nadeau R., Adam A. «Effect of enalaprilat on bradykinin and des-Arg9-bradykinin release following reperfusion of the ischaemic rat heart» // Br J. Pharmacology

- 1995 - V. 115 - №3 - P.476-478.

103. Lanchantin G.E., Plesset ML., Friedmann J.A., Hart D.W. «Dussoiation of esterolytic and clotting activities of thrombin by trypsin-binding macroglobulin» // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1966 - V.121 - P.444-449.

104. Linz W., Wiemer G., Gohlke P., Unger T., Scholkens B.A. «Contribution of kinins to the cardiovascular actions of angiotensin converting enzyme inhibitors» // Pharmacol Rev. -1995 - V.47 - №1 - P.25-49.

105. Lippoldt A., Paul M., Fuxe K. «The brain renin-angiotensin system: Molecular mechanisms of cell to cell interactions» // Clin Exp Hypertension - 1995 - V. 17 - №1-2 -P.251-266.

106. Mattson D.L., Roman R.J. «Role of kinins and angiotensin II in the renal hemodynamic responce to captopril» // American Journal Physiology - 1991 - V.260 - P.F670-F679.

107. Miller-Andersson M., Borg H., Andersson L.O. «Purifikation of antithrombin III by affinity chromatography» // Tromb. Res. - 1974 - V.5 - P.439-452.

108. Mitchell T.J., Reilly T.M. «Amino acid sequence determination of three monoclonal antibodies» // Pept. Res. - 1990 - V.3 - №6 - P.277-281.

109. Nakayma H., Theda Sh., Akoi Sh.. «Antibodies to nonensymatically glucosilated albumin in the human serum» // Biochem. Biophys. Res. Commus. - 1985 - V, 131 - P.720-725.

110. Nodermann B., Nystom C., Bjork I. «The size and shape of human and bovine antithrombin III» // Eur. J. Biochem. - 1977 - V.78 - P. 195-203.

111. Ondetti M.A., Cushman D.W. «Enzymes of the renin-angiotensin system and their inhibitors» // Ann Rev Biochem. - 1982 - V.51 - P.283-308.

112. Oosta G.M., Gardner W.T., Beeler D.L , Rosenberg R.D «Multiple ftmctinal domains of the heparin molecule» // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1981 - V.78 - P.829-833.

113. Osullivan J.B., Harrap S.B. «Resetting blood pressure in spontaneously hypertensive rats: The role of bradykinin» // Hypertension - 1995 - V.25 - №2 - P. 162-165

114. Oyama T.T., Vora J.P., Thompson M.M. «Interactions of the kallikrein-kinin and renin-angiotensin systems in experimental diabetes» // Diabetes - 1997 - V.46 - №1 - P. 107112.

115. Petersen E E., Dudek-Wojcechowska G., Sottup-Jensen L., Magnusson S. «The primary structure of antithrombin III (heparin-cofactor). Partial homology between ai-antitrypsine and antithrombin III» // In: The physiological inhibitors of coagulation and fibrinolysis -Amsterdam - Elsevier Nort Holland - 1979 - P.43-54.

116. Phillips M.I., Kimura B. «Converting enzyme inhibitors and brain angiotensin» // J. Cardiovasc. Pharmacology - 1986 - V.8 (Suppl. 10) - P.582-590.

117. Pontieri V., Lopes O.U., Ferreira S.H. «Hypertensive effect of captopril: Role of bradykinin and prostaglandinlike substances» // Hypertension - 1990 - V.15 - P.I55-I58.

118. Quick A. «On constitution of protrombin» // American Journal Physiology - 1943 - V.2 -№140 - P.212-220.

119. Regoli D., Park W.K., Rioux F. «Pharmacology of angiotensin» // Pharm. Rev. - 1974 -V.26 - №2 - P.69-123.

120. Richardson J.B., Beaulnes A. «The cellular site of action of angiotensin» // J. Cell. Biology. - 1971 - V.51 - №2 - P.419-432.

121. Rinderknecht H., Geokas M.C. «On the physiological role of a2-macroglobulin» // Bioch. et Bioph. Asta. - 1973 - V.295 - P.233-344.

122. Sakharov I.Y., Danilov S.M. «Affinity chromatography and some properties of the ACE from human heart» // Biochim. et. Biophys. Acta. - 1987 - V.923 - P. 143-149.

123. Schipper H.G., ten Cate J.W. «Antithrombin III transfusion in patiens with hepartic cirrosis» // Br. J. Haemontology - 1982 - V.52 - P.25-33.

124. Schunkert H., Hense H.W. «Molecular genetics of cardiovascular diseases» // Dtsch Med Wochenschr. - 1995 - V.120 - №15 - P.533-539.

125. Sealey J.E., Altas S.A., Laragh J. «Linking the kallikrein and renin systems via activation inactive renin» // Amer. J. Med. - 1978 - V.65 - P.994-1000.

126. Shultze H.E., Heimburger N., Heide K., Haupt H. «Preparation and characterization of a2-trypsin inhibitor and a2-plasmin inhibitor of human serum» // In: Proc. 9th Congr. Europ. Societ. Haemat. Basel. - 1963 - P. 1315.

127. Spaethe R. «Haemostasis (physiology, pathophysiology, diagnosis)» // Munchen-AHS-Deutshland GmbH - 1985.

128. Stewart J.M. «Bradykinin antagonists: development and applications» // Biopolymers (Peptide Science) - 1995 - V.37 - P. 143-155.

129. Stokes G.S. «The renin-angiotensin system its physiology and role in disease states» // Anaesth Intensive Care - 1983 - VI1 - P.369-76

130. Stpittmatter S.M., Snyder S.H. «Angiotensin converting enzyme in the male rat reproductive system: autoradiographic visualization of angiotensin converting enzyme in rat brain with [H3]-captopril» // Endocrinology - 1985 - V. 115 - P.2332-2341.

131. Taugner R., Hackenthal E., Rix E., Nobiling R., Poulsen K. «Immunocytochemistry of the renin-angiotensin II, and converting enzyme in the kidney of mice, rats, and three shrews» // Kidney Int. - 1982 - V.22 (Suppl. 12) - P.S33-S44.

132. Tpippodo N.C., Panchal B.C., Fox M. «Repression of angiotensin II and potentiation of bradykinin contribute to the synergistic effects of dual metalloprotease inhibition in heart failure» // J. Pharmacol. Exp. Ther. - 1995 - V.272 - №2 - P.619-627.

133. Ueyama N., Yanagisawa T., Kawai T., Sonegawa M., Baba H., Mochizuki S., Kosakai K. «Nonpeptide angiotensin II receptor antagonists. Synthesis and biological activity of pyridine derivatives» // Chem. Pharmaceut. Bull. - 1994 - V.42 - №9 - P.1841-1844.

134. linger T., Csikys T., Gallinat S. «Extrarenal aspects of angiotensin II function» // Europe Journal Endocrinology - 1997 - V. 136 - №4 - P.349-58.

135. Ushio-Fukai M., Griendling K.K., Lassugue B. «Angiotensin II signaling in vascular smooth muscle. New concepts» // Hypertension - 1997 - V.29(l Pt 2) - P.366-373.

136. Wickerhauser R.W. «Preparatin, characterization and measurement of antithrombin III» // J. Biol. Chem. - 1979 - V.270 - P.5408-5413.

137. Yang H.Y., Erdos E.G., Levin Y. «A dipeptidyl carboxypeptidase that converts angiotensin I and inactivates bradykinin» // Biochim. Biophys. Acta. - 1970 - V.214 -P.374-376.

138. Ye R.D., Darrow A.L., Fung-Leung W.P., Santulli R.J. «Biological consequences of thrombin receptor deficiency in mice» // Thromb Haemostasis - 1996 - V.76 - №6 -P. 860-866.

139. Zhuo J., Alcorn D., Allen AM., Mendelsohn F.A.O. «High resolution localisation of angiotensin II receptors in rat renal medulla» // Kidney Int. - 1992 - V.42 - P. 1372-1380.

140. Zhou G., Brilla C.G., Maisch B., Weber K.T. «Hormonal regulation of cardiac fibroblast function» // Europe Heart Journal - 1995 - V.16 (Suppl C) - P.45-50.