Иммунобиология вируса иммунодефицита человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, доктор биологических наук Карамов, Эдуард Владимирович

• Карамов, Эдуард Владимирович
• доктор биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации доктор биологических наук Карамов, Эдуард Владимирович

Часть I. Общая характеристика работы.

1.1 Актуальность проблемы

1.2 Цели и задачи исследования.

1.3 Научная новизна работы.

1.4 Основные положения, выносимые на защиту.

1.5 Практическая ценность.

1.6 Личный вклад соискателя.

1.7 Апробация работы. 15 Часть И. Обзор литературы. Общие сведения о молекулярной биологии ретровирусов.

1. Геномная организация ретровирусов на примере ВИЧ-1.

2. Организация вириона.

3. Жизненный цикл ВИЧ-1.

3.1. Проникновение в клетку

3.2. Репликация.

3.3. Морфогенез и рилизинг.

4. Антигенная и генетическая вариабельность ВИЧ.

5. Биологические свойства ВИЧ.

6. Механизмы слияния оболочки ВИЧ с клеточной цитоплазматической мембраной (фузия).

7. Резистентность к азидотимидину при инфекции вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). щ 8. Проблемы и перспективы разработки вакцины против ВИЧ/СПИДа. 88 9. Разработка микробицидных препаратов. Микробициды - новое направление в борьбе с ВИЧ-инфекцией. 92 Часть III. Собственные исследования.

Глава 1. Материалы и методы. 96 1. Биологические свойства первичных изолятов ВИЧ-1 различных серотипов.

1.1 Пациенты.

1.2 Клеточные линии.

1.3 Мононуклеары периферической крови (МПК) здоровых доноров

1.4 Изоляция вирусных вариантов

1.5 Изоляты и штаммы ВИЧ-1.

1.6 Определение числа жизнеспособных клеток с помощью 1) МТТ-теста и 2) исключающего витального красителя трипанового синего

1.7 Определение биологического фенотипа изолятов ВИЧ-1.

1.7.1 Заражение МПК

1.7.2 Заражение клеток линий Н9, МТ-4, СЕМ, CEM-SS, Sup Т1 и ТНР

1.7.3 Заражение индикаторных монослойных клеточных линий U373.CD4.

1.7.4 МТ-2-тест.

1.7.5 Испытание антивирусной активности AZT.

1.8 Детекция антигенов ВИЧ-1 в культуральных супернатантах и плазме крови ВИЧ-инфицированных пациентов.

1.8.1 Иммуноферментный анализ.

1.8.2 Определение TCID50. 102 ^ 1.8.3 Обратнотранскриптазная реакция (OTP).

1.8.4 Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR).

1.8.5 Реакция непрямой иммунофлюоресценции (НИФ). 104 ф 1.9 Определение серотипа ВИЧ-1.

2. Изучение биологических свойств первичных изолятов ВИЧ-1: взаимосвязь между спектром клеточного тропизма, характером цитопатологии и клиническими особенностями течения инфекции.

3. Изучение дегидрогеназной активности инфицированных клеток и биологических свойств различных вариантов ВИЧ-1.

3.1 Клеточные линии

3.2 Определение 50%-ной инфекционной дозы (TCID50; 50% Tissue Culture Infectious Dose

3.3 Изоляты и штаммы

3.4 Определение концентрации корового антигена р24 ВИЧ

3.5 Измерение активности обратной транскриптазы

3.6 МТТ-метод

3.7 Изменение дегидрогеназной активности

3.8 Статистическая обработка.

4. Анализ биологических характеристик первичных изолятов ВИЧ-1 с помощью метода главных компонент.

5. Комплексная диагностика in vitro анти-ВИЧ эффективности AZT.

5.1 Пациенты.

5.2 Азидотимидин (AZT).

5.3 Определение цитотоксичности (CI; Cytotoxity Index) AZT

5.4 Определение анти-ВИЧ эффективности AZT (EI; AZT Efficiency

Index) на модели МПК пациента.

5.5 Определение AZT-чувствительности и индекса выживания клеток линии Н9, инфицированных первичными изолятами ВИЧ-1. Индекс выживания (VI; Viability Index) МПК.

5.6 МПК здоровых доноров

5.7 Изоляция ВИЧ.

5.8 Лимфобластоидная линия

6. Изучение расщепления СЗ-компонента комплемента в сыворотках пациентов с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД).

7. Изучение влияния аминокислотных замен в последовательности V3-петли gpl20 на антигенную кросс-реактивность между различными субтипами ВИЧ-1.

7.1 Сыворотки.

7.2 Синтетические пептиды.

7.3 Поликлональный сэндвич-ИФА для определения содержания вирусных антигенов.

7.4 ИФА на основе синтетических пептидов.

8. Изучение антигенной и генетической вариабельности ВИЧ-1.

8.1 Сыворотки

8.2 Синтетические пептиды

8.3 Конкурентный ИФА на основе синтетических пептидов.

8.4 Обработка результатов.

8.5 Иерархический кластер-анализ.

8.6 Многомерное шкалирование.

8.7 Метод главных компонент.

8.8 Двумерная ординация.

8.9 Вычисления 122 Ф 8.10 Генотипирование.

9. Изучение механизмов проникновения ВИЧ в клетку-мишень.

9.1 Синтетические пептиды. ф 9.2 Липидные бислои.

9.3 Липосомы.

9.4 Слияние липосом

9.5 Клеточные культуры

9.6 Вирус.

9.7 Определение ТСГО

9.8 Изучение цитотоксических свойств.

9.9 Тест синцитиеобразования.

9.10 Испытание антивирусной активности

9.11 Испытание действия конъюгатов пептида фузии

9.12 Исследование взаимодействия ВИЧ с клеткой.

9.13 Обратнотранскриптазная реакция.

9.14 Получение пептидных антисывороток.

9.15 Электронно-микроскопическое исследование препаратов пептида.

9.16 Твердофазный иммуноферментный анализ (непрямой вариант)

10. Изучение механизмов модуляции ВИЧ-инфекции при тепловом шоке.

10.1 Условия индукции теплового шока.

10.2 Двумерный электрофорез

11. СЕМ-К - клоны лимфобластоидных клеток человек, устойчивые к ВИЧ-1.

11.1 Получение клонов.

11.2 Электронно-микроскопическое исследование клеток СЕМ-К.

11.3 Проведение цитогенетического анализа.

11.4 Получение ДНК-зонда для выявления гена рецептора CD4.

11.5 Изучение экспрессии антигенов на поверхности клеток СЕМ-К.

11.6 Проведение трансфекции методом электропорации.

12. Ингибиторы различных стадий жизненного цикла ВИЧ.

12.1 Ингибирование репродукции вируса иммунодефицита человека в культуре клеток 5'-фосфитами 2',3 - дидезоксинуклеозидов.

12.2 Сульфатированные производные хитозана (СПХ).

12.3 Аджоен.

12.4 Пиперидины.

12.5 Олипифат

12.6 Характеристика клеточных линий и условий культивирования.

12.7 Вирусы.

12.8 Изучение цитотоксических свойств.

12.9 Исследование антивирусной активности.

12.10 Тест синцитиеобразования.

12.11 Иммуноферментный анализ.

12.12 Метод рекластрирования

12.13 Определение активности обратной транскриптазы.

12.14 Титрование ТСШ

13. Изучение механизмов анти-HIV активности ряда сульфатированных полисахаридов и пептидных фрагментов из первого домена молекулы СД4.

13.1 Сыворотки.

13.2 Синтетические пептиды.

13.3 ИФА. (непрямой вариант). 141 (С 13.4 ИФ А (конкурентный вариант).

13.5 ИФА (снятое ингибирующего действия DS пептидами в растворе).

13.6 Модификация пептидов.

13.7 Тест синцитиеобразования

13.8 Иммунизация кроликов

14. Изучение иммунологических свойств сывороток макак, иммунизированных TBI (кандидатом для анти-ВИЧ вакцины).

14.1 TBI (Т- and B-cell epitopes containing immunogen)

14.2 Изучение иммуногенной активности белка TBI

14.3 Изучение иммунологических свойств сывороток обезьян

14.4 Исследование иммунореактивности сывороток обезьян, иммунизированных TBI

14.5 Изучение нейтрализационных свойств сывороток.

15. Исследование нейтрапизационной активности сывороток мышей, иммунизированных гес (24-41).

15.1 гес(24-41).

15.2 Исследование нейтрализующей активности иммунных сывороток

15.3 Иммуногенность рекомбинантных белков ВИЧ

15.4 Изучение специфической активности гес(24-41) в ИФА.

15.5 Изучение специфической активности гес(24-41) в иммуноблоте.

15.6 Иммуногенные свойства конъюгата рекомбинантного белка гес(24

41) с Полиоксидонием.

15.7 Изучение пролиферативной активности клеток животных, иммунизированных гес (24-41).

Глава 2. Результаты и обсуждение.

Раздел 1. Биологические свойства ВИЧ-1.

1. Биологические свойства изолятов вируса иммунодефицита человека первого типа (ВИЧ-1).

1.1 Природные (wild) изоляты ВИЧ-1 и их биологические свойства.

1.2 Изучение биологического фенотипа изолятов ВИЧ-1.

1.3 Биологические свойства первичных изолятов ВИЧ-1 различных серотипов.

1.4 Изучение чувствительности изолятов ВИЧ-1 к азидотимидину.

2. Изучение биологических особенностей in vitro первичных изолятов ВИЧ-1 субтипа А, циркулирующих среди внутривенных наркоманов на территории бывшего СССР.

3. Биологические свойства первичных изолятов ВИЧ-1: взаимосвязь между спектром клеточного тропизма, характером цитопатологии и клиническими особенностями течения инфекции.

4. Анализ биологических характеристик первичных изолятов ВИЧ-1 с помощью метода главных компонент. Подходы к классификации.

5. Биологические свойства первичных изолятов ВИЧ-1 на различных стадиях инфекции.

6. Дегидрогеназная активность инфицированных клеток и биологические свойства различных вариантов ВИЧ-1.

7. Изучение расщепления СЗ-компонента комплемента в сыворотках пациентов с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД).

7.1 Состояние отдельных компонентов комплемента у больных с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД).

7.2 Глубокое расщепление СЗ-компонента комплемента в сыворотках пациентов с синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД).

0 13 Расщепление а-цепи человеческого СЗ с помощью рекомбинантной протеазы ВИЧ-1 (RPH) с образованием СЗа и C3d фрагментов.

8. Разработка экспериментально-клинической тест-системы для комплексной диагностики in vitro анти-ВИЧ эффективности AZT.

9. Анализ развития ВИЧ-инфекции по данным количественных определений вирусоспецифических ДНК и РНК.

9.1 Изучение репликации изолятов ВИЧ, обладающих AZT-устойчивым фенотипом.

9.2 Динамика изменения вирусологических и генетических маркеров репликативной активности ВИЧ в ходе терапии.

9.3 Анализ нуклеиновых кислот ВИЧ в ходе развития инфекции in vivo.

9.4 Изучение комплексности квазивидов ВИЧ-1 in vivo. 236 Раздел 2. Антигенная и генетическая вариабельность ВИЧ-1.

2.1 V3 -серотипы ВИЧ-1, представленные на территории России.

2.2 Изучение влияния аминокислотных замен в последовательности УЗ-петли gpl20 на антигенную кросс-реактивность между различными субтипами ВИЧ-1.

2.3 Серотипический профиль эпидемии ВИЧ-1 в Москве.

2.4 Изучение вариантов ВИЧ-1 серотипа А/С, циркулирующих популяции внутривенных наркоманов г. Тверь.

2.5 Серотипическая стратификация ВИЧ-1 в популяции внутривенных наркоманов на юге\юго-востоке Украины.

2.6 Анализ серологических свойств ВИЧ-1 из очага эпидемии в Гомельской области Белоруссии (1996 г.)

2.7 Нарастание серотипической гетерогенности ВИЧ-1 в

Светлогорском очаге (1996) через год после начала вспышки эпидемии.

2.8 Биологические свойства российских изолятов ВИЧ-1 и молекулярно-эпидемиологический мониторинг ВИЧ-инфекции на территории России и сопредельных стран.

2.9 Анализ иммунологической гетерогенности ВИЧ-1: «аргинин-глутаминовый триггер» в четвёртой позиции верхушечного тетрапептида V3 -петли gp120.

2.9.1 Иерархическая классификация коротких аминокислотных фрагментов, соответствующих использованным пептидам.

2.9.2 Иерархическая структура иммунореактивности в ИФА исследуемых сывороток по отношению к V3-имитирующим пептидам.

2.9.3 Многомерное шкалирование.

2.10 Анализ иммунологической гетерогенности ВИЧ-1: влияние свойств аминокислотных остатков, фланкирующих С-конец верхушечного тетрапептида УЗ-петли gp120.

2.10.1 Метод главных компонент.

2.10.2 Двумерная ординация.

2.11 Модель функционирования верхушечного эпитопа петли V3 gpl

ВИЧ-1 в составе комплекса с антителами

2.12 Соответствие рассматриваемой модели данным рентгеноструктурного анализа и известным закономерностям изменчивости V

2.13 Соответствие рассматриваемой модели экспериментальным данным.

2.14 Гипотеза о применимости рассматриваемой модели к механизму межбелковых взаимодействий при проникновении ВИЧ в клетку.

2.15. Применение модели для предсказания антигенных свойств V3имитирующих пептидов

Раздел 3. Механизмы проникновения ВИЧ в клетку-мишень.

1. Синтетические фрагменты СБ4-рецептора: блокирование ВИЧ-инфекции in vitro и иммунореактивность с сыворотками ВИЧ-инфицированных лиц.

2. Аджоен, как блокатор интегрин-зависимых процессов в системе клеток, инфицированных ВИЧ.

2.1 Изучение влияния аджоена на процессы слияния клеток на модели синцитиеобразования.

2.2 Изучение анти-ВИЧ активности Аджоена.

2.3 Исследование токсического действия аджоена на опухолевые клетки.

2.4 Обсуждение роли интегриновых рецепторов в процессе проникновения ВИЧ в клетку-мишень.

3. ВИЧ-1 gpl20 может блокировать адгезию, опосредованную CD2

LFA3.

4. Исследование пептидов фузии.

4.1 Взаимодействие пептидов, соответствующих N-концевым участкам легкой цепи гемагглютинина вируса гриппа (НАг) и трансмембранного гликопротеина вируса иммунодефицита человека (gp 41), с искусственными и естественными липидными мембранами.

4.2 Исследование пептидов фузии ВИЧ-1. Анализ взаимосвязи структуры и функции.

4.2.1 Изучение влияния пептидов на искусственные липидные мембраны.

4.2.2 Изучение действия синтетических пептидов фузии, соответствующих N-концевой области gp41 ВИЧ-1, на репликацию вируса. Анализ активности пептидов и их конъюгатов в тесте синцитиеобразования

4.2.3 Данные электронномикроскопического исследования и изучения иммунореактивности пептидов

4.2.4 Исследование влияния пептидов на репликацию ВИЧ 1(ELISА)

4.2.5 Обнаружение стадии жизненного цикла ВИЧ, являющейся мишенью для пептидов фузии gp

4.2.6 Обсуждение механизмов действия синтетических пептидов фузии, соответствующих N-концевой области gp

5. Суммарные данные позволили нам сформулировать оригинальную концепцию механизма проникновения ВИЧ в клетку

Раздел 4. Клеточные механизмы устойчивости к ВИЧ-инфекции.

1 Тепловой шок и вирус иммунодефицита человека.

2. Изучение механизмов амплификации провирусной ДНК и усиления репликации ВИЧ-1 в условиях теплового шока.

3. Индукция провируса в условиях теплового шока.

4. Исследование наличия антител против белков теплового шока в сыворотках ВИЧ-инфицированных пациентов.

5. СЕМ-К - клоны перевиваемой линии Т- клеток человека, устойчивые к ВИЧ-инфекции.

5.1 Получение клеточных клонов и их морфологическая характеристика.

5.2 Ретрансплантация опухоли СЕМ

5.3 Характеристика некоторых особенностей клеток СЕМ-К.

5.4 Изучение чувствительности клеток СЕМ-К к ВИЧ-1.

5.5. Изучение механизмов устойчивости клеточных клонов СЕМ-К к

ВИЧ-1 инфекции.

5.6 Изучение экспрессии антигенов на поверхности клеток СЕМ-К.

5.7 Цитогенетическое исследование клеток СЕМ-К.

5.8 Получение в клетках СЕМ-К вирусного потомства и изучение его свойств.

Раздел 5. Ингибиторы различных стадий жизненного цикла ВИЧ.

1. Изучение влияния производных природных нуклеозидов и их 5'фосфитов на репродукцию вируса иммунодефицита человека.

1.1 Разработка клеточной модели для скрининга ингибиторов репродукции ВИЧ.

1.2 Подавление репродукции ВИЧ 5'-фосфитами З'-азидо- 2',3'дидезоксинуклеозидов.

1.3 Изучение действия 2',3'-дидезоксинуклеозидов и их 5-фосфитов на репродукцию ВИЧ.

1.4 3'-(5-11-тетразол-2-ил)тимидины, проявляющие антивирусную активность.

2. Исследование репликации ВИЧ-1 in vitro под воздействием некоторых комбинаций химиопрепаратов.

2.1 Изучение влияния комбинации рибавирина и 5 - фосфитов 2', 3', дидезоксинуклеозидов на репродукцию ВИЧ-1.

2.2 Исследование комбинации азидотимидина и гидроксимочевины или ее аналогов на репликацию АЗТ-устойчивых вариантов ВИЧ-1.

3. Анти-ВИЧ-1 активность транс-дигидроксипиперидинов.

4. Антивирусная активность олипифата и его фракций на модели

ВИЧ-инфекции.

4.1 Олипифат и его противовирусные свойства.

4.2 Изучение цитотоксических свойств олипифата.

4.3. Изучение антивирусных свойств олипифата.

4.4 Изучение возможности возникновения резистентности к олипифату.

Раздел 6. Разработка вакцин против ВИЧ/СПИД.

1 . Изучение иммуногенности рекомбинантных белков ВИЧ.

1.1. Иммуногенность рекомбинантных белков ВИЧ-1 оценивалась по результатам иммунизации лабораторных животных (мышей).

1.2 Изучение специфической активности химерного рекомбинантного белка гес(24-41).

1.3. Изучение специфической активностиггес(24-41) в ИФА.

1.4. Изучение специфической активности гес(24-41) в иммуноблоте.

1.5 Исследование специфической активности сывороток мышей, иммунизированных гес (24-41).

1.6 Иммуногенные свойства конъюгата рекомбинантного белка гес(24

41) с полиоксидонием.

1.7 Исследование нейтрализующей активности сывороток мышей, иммунизированных гес (24-41).

1.8 Изучение пролиферативной активности клеток животных, иммунизированных гес (24-41).

2. Изучение иммунологических свойств сывороток макак, иммунизированных TBI (кандидатом для анти-ВИЧ вакцины).

2.1. Исследование развития гуморального и клеточного иммунного ответа у животных, иммунизированных иммуногенами TBI, HGP

30 и МАР-2.

2.2. Изучение иммунологических свойств сывороток обезьян, иммунизированных TBI.

2.3. Исследованы иммунореактивности сывороток обезьян, иммунизированных TBI.

2.4. Нейтрализационные свойства сывороток. 449 Раздел 7. Разработка микробицидных препаратов. Микробициды — новое направление в борьбе с ВИЧ-инфекцией.

1. Сульфатированные производные хитозана как ингибиторы ВИЧ-инфекции.

2. Исследование соотношения антивирусной и антикоагулянтной активностей сульфатированных производных хитозана.

3. Механизм анти-ВИЧ активности ряда сульфатированных полисахаридов и пептидных фрагментов из первого домена молекулы СД

3.1 Влияние модификации пептидов на их иммунореактивность.

3.2. DS блокирует взаимодействие между адсорбированными на твердой фазе пептидами и антителами из ВИЧ-положительной сыворотки.

3.3 DS взаимодействует с пептидами а растворе.

3.4. Снятие ингибирующего действия DS пептидами в растворе в тесте T^f синцитиеобразования.

3.5 Сопоставление свойств ряда сульфатированных полианионов.

3.6. Механизм ингибирующего действия пептида из VI CD4, по-видимому, аналогичен механизму антивирусной активности сульфатированных полисахаридов.

ВЫВОДЫ

Список опубликованных работ по теме диссертации

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунобиология вируса иммунодефицита человека»

1.1. Актуальность проблемы.

ВИЧ-инфекция стала самым опасным и широко распространенным инфекционным заболеванием в XXI веке. Ежегодно более 5 млн. человек заражаются вирусом иммунодефицита человека - этиологическим агентом ВИЧ-инфекции и ее терминальной стадии СПИДа. Со времени регистрации первых случаев болезни более 67 млн. человек были инфицированы и более 25 млн. уже умерло. Глобальное распространение, принявшее характер мировой эпидемии - пандемии, высокая смертность, передача вируса через кровь, внутриутробно и половым путем, отсутствие вакцины, микробицидов и широко доступных высокоэффективных и нетоксичных лекарств сделали проблему ВИЧ/СПИД одной из центральных в мировом здравоохранении. Открытый в начале 80-х гг. ВИЧ оказался лентивирусом, относящимся к семейству ретровирусов, для которых характерна интеграция в геном хозяина, длительная латенция и хроническая инфекция, высокая антигенная и генетическая изменчивость.

К настоящему времени во всем мире изолировано более тысячи штаммов ВИЧ, изучены нуклеотидные последовательности нескольких тысяч вирусов. А для 100 вирусов прочитана полная последовательность нуклеотидов и созданы молекулярные клоны. Установлено, что многие изоляты ВИЧ сильно различаются по своим биологическим свойствам; более того в разных регионах мира циркулируют различные субтипы и рекомбинантные формы ВИЧ. Создание коллекции и исследование свойств изолятов ВИЧ необходимо для решения как фундаментальных, так и прикладных задач, в том числе для разработки вакцины против ВИЧ/СПИД.

Со времени обнаружения CD4 рецептора, считалось, что именно Т-хелперы являются главной мишенью ВИЧ. Последующие исследования показали, что ВИЧ фактически является пантропным вирусом, способным использовать множество дополнительных корецепторов и клеточных механизмов для проникновения и поддержания инфекции. Исследование механизмов проникновения ВИЧ, клеточных механизмов модуляции ВИЧ-инфекции является важным звеном в понимании патогенеза ВИЧ/СПИД. Жизненный цикл ВИЧ весьма сложен и включает несколько стадий. Поиск специфических ингибиторов различных этапов репликации ВИЧ позволяет открывать новые препараты для лечения ВИЧ/СПИД. Именно таким образом были найдены нуклеозидные/нуклеотидные и ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы ВИЧ и ингибиторы протеазы ВИЧ. Актуальной остается задача поиска новых средств терапии ВИЧ/СПИД, в том числе комбинированной химиотерапии. До сих пор не решена проблема по разработке новых превентивных технологий на основе иммунобиологических препаратов — микробицидов, предотвращающих половую передачу ВИЧ и вакцин.

Настоящая работа выполнена в рамках плановых исследований НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН, Государственной программы "Борьба с наиболее распространенными заболеваниями" по проблеме СПИД и Межведомственной научно-технической программы " Вакцины нового поколения и медицинские диагностические системы будущего", РФФИ, РФТР.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Карамов, Эдуард Владимирович, 2003 год

1. Varmus Н. Retroviruses. // Science., 1988., v. 240., p. 1427-1433.

2. Bushman В., Fujiwara Т., Cragle R. Retroviral DNA integration directed by HIV integration protein in vitro. // Science., 1990., v. 249., p. 1555-1558.

3. Hauber J., Perkins A., Heimer E.P., Gullen G.R. Trans-activation of HIV gene expression is mediated by nuclear events. // PNAS US., 1987., v. 84., p. 6364-6386.

4. Weeks K., Ampe C., Schultz S. et al. Fragments of the HIV-1 tat protein specially bind TAR RNA. // Science., 1990., v. 249., p. 497-500.

5. Mallim M., McCarn D., Rusche J., Hauber J. et al. HIV-1 structural gene expression requires binding of the rev trans-activator to its RNA target sequence. // Cell., 1990., v. 60., p. 675-683.

6. Ovod V., Lagerstedt A., Ranki A. Immunological variation of immunohistochemical localization of Nef demonstrated with monoclonal antibodies. // AIDS., 1992., v. 6., p. 25-34.

7. Cheng-Mayer C., Lannello P., Shaw K. et al. Differentional effects of nef on HIV replication: implications for viral pathogenesis in the host. // Science., 1989., v. 246., p. 1629-1632.

8. Cohen E., Terwilliger E., Jalinoos Y. et al. Identification of HIV-1 vpr product and function. // J. Acad. Imm. Def. Syn., 1990., v. 3., p. 11-18.

9. Haseltine W.A. Molecular biology of AIDS virus: ten years of discovery hope for the future. // Plenary lecture, International AIDS symposium., 1991, June 16-21, Florence., Italy.

10. Haseltine W.A. Molecular biology of AIDS virus: ten years of discovery hope for the future. // In: Science Challenging AIDS. Basel: Karger, 1992., p. 71-106.

11. Gelderblom H.R., Ozel M., PauliG. Morphogenesis and morphology of HIV. Structure-function relations. // Arch. Virol., 1989., v. 106., p. 1-13.

12. Luban J, Bossolt KL, Franke EK, Kalpana GV, Goff SP. Human immunodeficiency virus type 1 Gag protein binds to cyclophilins A and B. // Cell 1993 Jun 18;73(6): 1067-78.

13. Kan N.C., Franchini G., Wong-Staal F. Identification of HIV sor gene product and detection of antibodies in human sera, //science., 1986., v. 231., p. 144-148.

14. Saib A, Puvion-Dutilleul F, Schmid M, Peries J, de The H. Nuclear targeting of incoming human foamy virus Gag proteins involves a centriolar step. J Virol 1997 Feb;71(2):l 15561.

15. Strebel K., Klimkait Т., Martin M.A. a novel gene of HIV-1, vpu, and its 16 kilodalton product. //Science., 1996., v. 14., p. 121-123.

16. Sodeik В, Ebersold MW, Helenius A. Microtubule-mediated transport of incoming herpes simplex virus 1 capsids to the nucleus. J Cell Biol 1997 Mar 10;136(5):1007-21.

17. Cocchi, F., A. L. DeVico, A. Garzino-Demo, S. K. Arya, R. C. Gallo, and P. Lusso. 1995. Identification of RANTES, MlP-la, MlP-lb as the major HIV-suppressive factors producedby CD8+ T cells. Science270:1811-1815.

18. Feng, Y., С. C. Broder, P. E. Kennedy, and E. A. Berger. 1996. HIV 1 entry cofactor: functional cDNA cloning of a seven-transmembrane, G protein-coupled receptor. Science 272;872-877.

19. Alkhatib, G., C. Combadiere, С. C. Broder, Y. Feng, P. E. Kennedy, 1996, CC CRK5: aRANTES, MlP-la, MlP-lb, receptoras fusion cofactorfor macrophage-tropicHIV-1. Science 272:1955-1958.

20. Dragic, Т., V. Litwin, G. P. Allaway, S. R. Martin, Y. Huang, K. A. Nagashirna, C. Cayanan, P. J. Maddon, R. A. Koup, J. P. Moore, and W. A. Paxton. 1996. IIIV-1 entry into CD4+ cells is mediated by the chemokine receptor CC-CRK-5. Nature 381:667-673.

21. Schwartz, J.-M. Heard, I. dark-Lewis, D. F. Legler, M. Loetscher, M. Baggiolini, and B. Moser. 1996. The CXC chemokine SDF-1 is the ligand for LESTR/fusin and prevents infection by T-cell-line-adapted HI V-l. Nature 382:833-835.

22. Karamov E.V.// VIII Int. Conf. on AIDS, Amsterdam The Netherlands, 1992, PoA 2456.

23. Tatarintcev A.V., Vrzheshch P.V., Schegolev A.A., Ershov D.E., Turgiev A.S., Karamov E.V. et al. Ajoene antagonizes integrin-dependent processesin HIV-infected T-lymphoblasts.// AIDS, 1992, v. 6., №10., p. 1212-1215.

24. De'Clercq E., Yamamoto N., Pauwels R. et al. Highly potent and selective inhibition of HIV-1 by the bicyclam derivate JM3100. // Antimicr. Agents and Chemot., 1994., p. 668674.

25. De Clercq E. Inhibition of HIV infection by bicyclams, highly potent and specific CXCR4 antagonists. // Mol Pharmacol 2000 May;57(5):833-9.

26. De Clercq E. Novel compounds in preclinical/early clinical development for the treatment of HIV infections. // Rev Med Virol 2000 Jul-Aug;10(4):255-77.

27. De Clercq E. Hamao Umezawa Memorial Award Lecture: "An Odyssey in the Viral Chemotherapy Field". // Int J Antimicrob Agents 2001 Oct;18(4):309-28.

28. De Clercq E. New developments in anti-HIV chemotherapy. // Curr Med Chem 2001 Nov;8(13):1543-72.

29. Gerlach LO, Skerlj RT, Bridger GJ, Schwartz TW. Molecular interactions of cyclam and bicyclam non-peptide antagonists with the CXCR4 chemokine receptor. // J Biol Chem 2001 Apr 27;276(17): 14153-60.

30. Liu H, Wu X, Newman M, Shaw GM, Hahn BH, Kappes JC. The Vif protein of human and simian immunodeficiency viruses is packaged into virions and associates with viral core structures. J Virol 1995 Dec;69(12):7630-8.

31. Goncalves J, Korin Y, Zack J, Gabuzda D. Role of Vif in human immunodeficiency virus ^ type 1 reverse transcription. J Virol 1996 Dec;70(12):8701-9.

32. Simon JH, Malim MH. The human immunodeficiency virus type 1 Vif protein modulates the postpenetration stability of viral nucleoprotein complexes. J Virol 1996 Aug;70(8):5297-305.

33. Sova P, Volsky DJ. Efficiency of viral DNA synthesis during infection of permissive and nonpermissive cells with vif-negative human immunodeficiency virus type 1. J Virol 1993 Oct;67(10) :6322-6.

34. Madani N, Kabat D. An endogenous inhibitor of human immunodeficiency virus in human lymphocytes is overcome by the viral Vif protein. J Virol 1998 Dec;72( 12): 10251 -5.

35. Simon JH, Gaddis NC, Fouchier RA, Malim MH. Evidence for a newly discovered cellular anti-HIV-1 phenotype. Nat Med 1998 Dec;4(12):l 397-400.

36. Chowers MY, Spina CA, Kwoh TJ, Fitch NJ, Richman DD, Guatelli JC. Optimal infectivity in vitro of human immunodeficiency virus type 1 requires an intact nef gene. J Virol 1994 May;68(5):2906-14.

37. Miller MD, Warmerdam MT, Gaston I, Greene WC, Feinberg MB. The human immunodeficiency virus-1 nef gene product: a positive factor for viral infection and replication in primary lymphocytes and macrophages. J Exp Med 1994 Jan 1 ;179(1): 10113.

38. Chowers MY, Pandori MW, Spina CA, Richman DD, Guatelli JC. The growth advantage conferred by HIV-1 nef is determined at the level of viral DNA formation and is independent of CD4 downregulation. Virology 1995 Oct l;212(2):451-7.

39. Schwartz O, Marechal V, Danos O, Heard JM. Human immunodeficiency virus type 1 Nef increases the efficiency of reverse transcription in the infected cell. J Virol 1995 Jul;69(7):4053-9.

40. Aiken C, Trono D. Nef stimulates human immunodeficiency virus type 1 proviral DNA synthesis. J Virol 1995 Aug;69(8):5048-56.

41. Pandori MW, Fitch NJ, Craig HM, Richman DD, Spina CA, Guatelli JC. Producer-cell modification of human immunodeficiency virus type 1: Nef is a virion protein. J Virol1996 Jul;70(7):4283-90.

42. Bukovsky AA, Dorfman T, Weimann A, Gottlinger HG. Nef association with human immunodeficiency virus type 1 virions and cleavage by the viral protease. J Virol 1997 Feb;71(2):1013-8.

43. Welker R, Kottler H, Kalbitzer HR, Krausslich HG. Human immunodeficiency virus type 1 Nef protein is incorporated into virus particles and specifically cleaved by the viral proteinase. Virology 1996 May l;219(l):228-36.

44. Bukrinsky MI, Sharova N, Dempsey MP, Stanwick TL, Bukrinskaya AG, Haggerty S, Stevenson M. Active nuclear import of human immunodeficiency virus type 1 preintegration complexes. Proc Natl Acad Sci U S A 1992 Jul 15;89(14):6580-4.

45. Cohen EA, Dehni G, Sodroski JG, Haseltine WA. Human immunodeficiency virus vprproduct is a virion-associated regulatory protein. J Virol 1990 Jun;64(6):3 097-9.f

46. Lu YL, Bennett RP, Wills JW, Gorelick R, Ratner L. A leucine triplet repeat sequence (LXX)4 in p6gag is important for Vpr incorporation into human immunodeficiency virus type 1 particles. J Virol 1995 Nov;69(ll):6873-9.

47. Paxton W, Connor RI, Landau NR. Incorporation of Vpr into human immunodeficiency virus type 1 virions: requirement for the p6 region of gag and mutational analysis. J Virol 1993 Dec;67(12):7229-37.

48. Kondo E, Mammano F, Cohen EA, Gottlinger HG. The p6gag domain of human immunodeficiency virus type 1 is sufficient for the incorporation of Vpr into heterologous viral particles. J Virol 1995 May;69(5):2759-64.

49. Mahalingam S, Khan SA, Jabbar MA, Monken CE, Collman RG, Srinivasan A. Identification of residues in the N-terminal acidic domain of HIV-1 Vpr essential for virion incorporation. Virology 1995 Feb 20;207(l):297-302.