Иммунобиологические свойства штамма ERA-CB 20M вируса бешенства и разработка на его основе антирабической вакцины тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Лосич, Милана Анатольевна

• Лосич, Милана Анатольевна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Лосич, Милана Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Классификация, структура и свойства вируса бешенства

1.1.1 Классификация лиссавирусов

1.1.2 Морфология и структура вируса бешенства

1.1.3 Репродукция вируса бешенства

1.2 Эпизоотологические особенности бешенства

1.2.1 Ситуация с бешенством в РФ

1.2.2 Бешенство в других странах мира

1.3 Диагностика бешенства

1.3.1 Метод флуоресцирующих антител и его аналоги

1.3.2 Выделение вируса бешенства как метод диагностики

1.3.3 Серологические методы диагностики

1.3.4 Молекулярные методы диагностики и исследования

1.4 Профилактика бешенства у человека и животных

1.4.1 Штамммы вирусов бешенства, применяемые при производстве аптирабических вакцин

1.4.2 Антирабические вакцины

1.4.3 Рекомендации к антирабическим вакцинам

1.4.4 Адъюванты для антирабических вакцин

Глава 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы

2.1.1 Материалы

2.1.1.1 Вирусы

2.1.1.2 Культуры клеток

2.1.1.3 Референтные сыворотки

2.1.1.4. Экспериментальные животные

2.1.1.5 Адъюванты

2.1.1.6 Коммерческие ИФА наборы

2.1.1.7 Среды и растворы

2.1.1.8 Реагенты

2.1.1.9 Оборудование

2.1.2 Методы

2.1.2.1 Культивирование вируса бешенства штамм ERA-CB 20М

2.1.2.2 Культивирование штамма CVS-11 вируса бешенства

2.1.2.3 Титрование вируса в культуре клеток

2.1.2.4 Определение инфекционной активности вируса

2.1.2.5 Титрование вируса на белых беспородных мышах

2.1.2.6 Инактивация вируса бешенства штамм ERA-CB 20М

2.1.2.7 Определение контаминации бактериальной и грибной микрофлорой

2.1.2.8 Антигенные свойства

2.1.2.9 Определение титра антирабических вируснейтрализующих антител в сыворотках крови животных методом FAVN

2.1.2.10 Определение патогенности вируса для животных

2.1.2.11 Определение иммуногенной активности методом NIH на белых беспородных мышах

2.1.2.12 Индикация вируса бешенства

2.1.2.13 Выделение РНК

2.1.2.14 Получение кДНК

2.1.2.15 Проведение ПЦР

2.1.2.16 Очистка образцов из геля

2.1.2.17 Секвенирование

2.1.2.18 Анализ результатов секвенирования

2.1.2.19 Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Изучение культуральных свойств вакцинного вируса бешенства штамм ERA-CB 20М

3.1.1 Определение спектра наиболее чувствительной линии клеток для получения вакцинного вируса бешенства штамм ERA-CB 20М

3.1.2 Количественное определение гликопротеина вируса бешенства

3.1.3 Оптимизация условий получения гликопротеина вакцинного штамма ERA-CB 20М вируса бешенства

3.1.4 Определение оптимальных условий инфицирования клеток и способов культивирования вакцинного вируса штамм ERA-CB 20М

3.1.5 Изучение иммунобиологических свойств вакцинного вируса бешенства

штамм ERA-CB 20М

3.1.6. Изучение нейровирулентных и патогенных свойств штамма ERA-CB 20М вируса бешенства

3.1.7 Изучение антигенных свойств вакцинного вируса бешенства штамм ERA-CB 20М в опытах на лабораторных и диких животных

3.1.8 Определение иммуногенной активности вакцины из штамма ERA-CB 20М

3.1.9 Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей фрагментов

генов N- и G - белка штамма ERA-CB 20М вируса бешенства

3.2 Разработка экспериментальной серии вакцины против бешенства из штамма ERA-CB 20М вируса бешенства

3.2.1 Подбор адъюванта

3.2.2 Изготовление экспериментальных образцов антирабических вакцин для собак и кошек

3.2.3 Оценка безвредности, антигенной активности и стабильности вакцин «РАБИКС» и «РАБИФЕЛ» в лабораторных условиях

3.2.3.1 Определение внешнего вида и цвета

3.2.3.2 Определение стерильности

3.2.3.3 Определение безвредности и реактогенности

3.2.3.4 Определение иммуногенной активности

3.2.3.5 Определение антигенной активности вакцины «Рабикс»

3.2.3.6 Определение антигенной активности вакцины «Рабифел»

3.2.3.7 Оценка антигенной активности вакцины «Рабикс» на естественно-восприимчивых животных

3.2.3.8 Оценка антигенной активности вакцины «Рабифел» на естественно-

восприимчивых животных

3.3 Разработка ИФА тест - системы для первичного скрининга полученных пулов культурального вируссодержащего материала из штамма ERA-CB 20М вируса бешенства

3.3.1 Разработка тест системы ИФА на основе МКА 1С5 для определения G-белка в вакцинных полуфабрикатах

3.3.2 Сравнительное определение белка методом ИФА с зарубежными аналогами иммуноферментного анализа для определения гликопротеина

3.3.3 Анализ зависимости значения количества гликопротеина методом ИФА от

индекса иммуногенности вакцинного препарата методом NIH

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ

Выводы

Практические предложения

Список литературы

Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунобиологические свойства штамма ERA-CB 20M вируса бешенства и разработка на его основе антирабической вакцины»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

Бешенство - это острое нейровирусноё заболевание, передаваемое человеку через укусы лисы, собаки, волка и других плотоядных животных, среди которых в естественной среде обитания вирус распространяется также при укусах. Мишенью вируса является центральная нервная система. Вирус бешенства (ВБ) принадлежит к отряду Mononegavirales, семейству Rhabdoviridae, роду- Lyssaviruss и является единственным из царства Vira, поражающим всех теплокровных животных, в том числе и человека со 100 % летальностью [3,11].

Глобальный характер распространения и многогастальность рабической инфекции привели к формированию большого разнообразия вариантов ВБ: бешенство лис, собак, арктическое бешенство, бешенство скунсов, енотов, мангуст, летучих мышей и др., а также их биологических субвариантов [11].

Так, по оценке Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ), бешенство входит в пятерку инфекционных болезней, общих для человека и животных, наносящих наибольший социальный и экономический ущерб [10,103]. В РФ бешенство регистрируется в 63 регионах страны, представляя собой серьезную угрозу как для животных, так и для человека. С ростом числа бездомных собак и кошек возрастает и число случаев обращения людей за антирабической помощью [14,20].

Для профилактики бешенства у человека и животных разработаны и используются инактивированные культуральные вакцины против бешенства, а также живые оральные вакцины, которые применяются только для диких животных. При этом основным показателем иммуногенности ангирабических вакцин является их способность индуцировать у иммунизированных животных синтез антирабических вируснейт-рализующих антител. Поэтому решающим условием разработки вакцин является подбор такого сочетания штамма вируса и адъюванта, который

позволит стимулировать у вакцинированных животных напряженный и длительный антирабический иммунитет.

Сложная эпизоотическая ситуация по бешенству в РФ [14,16] требует разработки новых, более высокоиммуногенных вакцин. В связи с этим весьма актуальными представляются исследования, направленные на изучение различных штаммов ВБ и разработку технологии приготовления антирабических вакцин с использованием адъювантов нового поколения.

Цель исследования: изучить иммунобиологические свойства вакцинного штамма ERA-CB 20М вируса бешенства и разработать на его основе антирабичсскую вакцину.

Задачи исследования:

1. Изучить спектр чувствительности различных линии клеток к вакцинному штамм ERA-CB 20М вируса бешенства.

2. Определить оптимальные условия культивирования вируса бешенства штамм ERA-CB 20М in vitro.

3. Изучить нейровирулентные свойства и патогенность вакцинного штамма ERA-CB 20М вируса бешенства для животных при различных способах введения.

4. Изучить антигенные свойства вируса бешенства штамм ERA-CB 20М в опытах на естественно - восприимчивых животных.

5. Изучить иммуногенные свойства вируса бешенства штамм ERA-CB 20М на белых беспородных мышах методом NIH.

6. Провести молекулярно-генетический анализ штамма ERA-CB 20М вируса бешенства.

7. Приготовить экспериментальные серии культуральной инактивиро-ванной вакцины на основе штамма ERA-CB 20М вируса бешенства в комбинации с различными адъювантами: ГОА и Abisco R-100.

8. Разработать иммуноферментную тест-систему (ИФА) на основе мо-ноклональных антител (МкА) 1С5 для оценки содержания гликопротеина (G-белка) ВБ в вируссодержащей культуральной жидкости.

Научная новизна работы. В результате проведенных исследований впервые для получения нового вакцинного вируса бешенства был использован новый принцип селекции, основанный на определении количественного уровня экспрессии гликопротеипа- главного иммуногена вируса бешенства. Впервые определен спектр чувствительных культур клеток для репликации вакцинного штамма ERA-CB 20М вируса бешенства и разработаны оптимальные условия культивирования вакцинного вируса. Определена патоген-ность вируса бешенства штамма ERA-CB 20М.

Впервые дана характеристика биологических свойств штамма ERA-CB 20М вируса бешенства. Изучены антигенные и иммуногенные свойства вируса штамма ERA-CB 20М на различных видах животных: мышах, песцах, собаках и кошках. Впервые проведен филогенетический анализ фрагментов генов N и G вакцинного штамма ERA-CB 20М вируса бешенства. Установлено отличие от референтного штамма SAD1 по первичной структуре на 10% и 15% соответственно.

Практическая значимость работы. В рамках выполненной работы на основе нового принципа селекции из популяции вируса бешенства штамм ERA получен новый вакцинный вирус штамм ERA-CB 20М с наиболее высоким уровнем экспрессии G-белка, на базе которого разработана новая высо-коиммуногенпая антирабическая вакцина для ветеринарных целей.

Разработана технология изготовления антирабической вакцины из ВБ штамм ERA-CB 20М с использованием нового иммуностимулирующего комплекса Abisco R-100 в качестве адыованта. Для оценки поствакцинального антирабического иммунитета у животных внедрён флуоресцентный вируснейтрализующий тест (метод FAVN), рекомендованный ВОЗ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Перевиваемая линия клеток почки сирийского хомячка (ВНК-21-13С) является наиболее пригодной для производства инактивированной

культуральной аитирабической вакцины из штамма ERA-CB 20М вируса бешенства.

2. Способ селекции вакцинного штамма ВБ по уровню синтеза

поверхностного гликопротеина G.

3. Созданные на основе штамма ERA-CB 20М экспериментальные серии

вакцины против бешенства в комбинации с современным адъювантом Abisco R-100 полностью отвечают требованиям, предъявляемым к антирабическим вакцинам.

4. Разработанная на основе МкА 1С5 иммуноферментная тест-система

пригодна для контроля G-белка ВБ при производстве аптирабических вакцин. Апробация работы. Результаты исследований доложены и обсуждены на: Международном семинаре на базе Кубанского Аграрного Университета «Современные аспекты в диагностике и профилактике бешенства согласно требованиям ВОЗ» (г. Краснодар, 2011); XIX и XXI Московском Международном Ветеринарном Конгрессе (г. Москва, 2011, 2013); Международной научно-практической конференции «Современные методы диагностики и средств профилактики бешенства» (г. Санкт-Петербург, 2012); Международном Семинаре по вопросам контроля и борьбы с бешенством, (г. Санкт-Петербург, 2012); Rabies Serology Meeting ANSES (Нанси, Франция, 2013).

Публикации научных работ. По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 5 статей в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендуемых ВАК при Минобрнауки РФ.

Личный вклад соискателя. Все экспериментальные и теоретические исследования по теме диссертации проведены лично соискателем. Молекулярно-биологические исследования и эксперименты по оценке эффективности вакцинных препаратов на животных выполнены совместно с сотрудниками отдела прикладной вирусологии и биотехнологии ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского». Все материалы, представленные в диссертационной работе, обобщены и проанализированы лично автором.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 139 стр. машинописного текста и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. Материалы диссертации иллюстрированы 26 таблицами и 15 (из них 3 фото) рисунками. Список литературы включает 132 источника (21 отечественный и И 1 зарубежных авторов).

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Классификация, структура и свойства вируса бешенства.

Вирус бешенства - единственный из царства Vira, который поражает исключительно млекопитающих, в том числе человека, в глобальном масштабе с летальностью 100% [3,11].

По оценке Всемирной Организации Здравоохранения, бешенство входит в пятерку инфекционных болезней, общих для человека и животных, наносящих наибольший социальный и экономический ущерб [103,122].

Репродукция вируса бешенства в центральной нервной системе -свидетельство высшей специализации не только среди рабдовирусов [6,59]. Глобальный характер распространения и многогастальность рабической инфекции привели к формированию большого разнообразия вариантов вируса бешенства (ВБ): бешенство лис, собак, арктическое бешенство, бешенство скунсов, енотов, мангуст, летучих мышей и другие, а также их биологических субвариантов [6].

По классификации Международного Комитета по таксономии вирусов, вирус бешенства (ВБ), относится к отряду Mononegavirales, семейству Rhabdoviridae, роду Lyssavirus [94,95]. 1.1.1 Классификация лиссавирусов.

До недавнего времени род Lyssavirus охватывал 7 генотипов [11,40]. Первый генотип включает вирусы классического бешенства (ВБ), обозначенные как штаммы уличного (дикого) ВБ (в т. ч. вирусы «дикования», или «арктического бешенства»), выделенные от наземных млекопитающих, насекомоядных, плодоядных и кровососущих летучих мышей, а также фиксированные (вакцинные) ВБ [3,11]. Эти вирусы широко распространены в Европе, Азии, Северной и Южной Америке, а также Африке. 2-й генотип - Лагос-Бат - включает вирусы, выделенные от плодоядных летучих мышей, собак и кошек в Центральной и Южной Африке [45,46]. На данный момент нет информации о патогенности этих вирусов для

человека. 3-й генотип - Мокола - выделен от землероек, человека, собак и кошек в Центральной и Южной Африке. У вируса Мокола основной хозяин неизвестен. 4-й генотип - Дувенхейдж - выделен от человека, укушенного летучей мышыо, и летучих мышей в ЮАР и Зимбабве [3,66]. 5-й генотип -лиссавирус европейских летучих мышей 1-го типа циркулирует в Европе, в т. ч. в европейской части России. В России вирус был выделен от 11-летней девочки, укушенной в губу летучей мышыо [42,59]. 6-й генотип - лиссавирус европейских летучих мышей 2-го типа циркулирует в Европе, выделен также от человека в Финляндии и Шотландии. 7-й генотип - лиссавирус австралийских летучих мышей выделен также от 2 человек [3,83].

Однако российские ученые Кузьмин И.В., Ботвинкин А.Д. и Полещук Е.М., внесли существенный вклад и изменения в привычную таксономическую картину рода Lyssavirus [42,51,59,60]. Открытые ими 4 новых для науки лиссавируса (Араван, Иркут, Худжанд и Западно-Кавказский лиссавирус летучих мышей (3KJTM)) на территории бывшего СССР, а также выявление Кузьминым И.В. и др. [59,62] в Кении нового представителя рода лиссавирусов Shimoni bat virus, показало, что эти вирусы выделенные от летучих мышей, четко отличаются друг от друга и от всех известных 7 генотипов, что привело в 2009 году к пересмотру таксономии рода Lyssavirus Международным Комитетом по Таксономии Вирусов (МКТВ) [43,95,131].

Следовательно, согласно последнему решению международного комитета по таксономии вирусов (МКТВ), род Lyssavirus представлен видами (МКТВ признает только виды): Aravan virus, Australian bat lyssavirus, Duvenhage virus (DUVV), European bat lyssavirus type 1 and 2, Irkut virus, Khujand virus, Lagos bat virus (LBV), Mokola virus (MOKV), Rabies virus (RABV), Shimoni bat virus (ShiBV) и West Caucazian bat virus (WCBV).

Проведенные филогенетические исследования (секвенирование G-белка и перекрестные серологические реакции) позволили разделить лиссавирусы на три филогенетические группы [11,69,113]. К первой филогруппе относятся

следующие виды вирусов: вирус бешенства, Дувенхейдж, лиссавирус европейских летучих мышей 1 и 2 типа, лиссавирус австралийских летучих мышей, Араван, Иркут и Худжанг. Ко второй филогруппе - виды вирусов: Лагос бат, Мокола и Шимони бат вирус. К третьей филогруппе относится самый отдаленный в филогенетическом отношении от остальных лиссавирусов - Западно-Кавказский лиссавирус летучих мышей (ЗКЛМ). Для ЗКЛМ не обнаружено перекрестных по О-белку антигенных (серологических) связей ни с представителями первой, ни со второй филогруппой [11].

Среди лиссавирусов существует перекрестная антигенная связь на уровне нуклеопротеина. Уровень гомологии последовательности аминокислот достигает 78-93%. Это позволяет создавать общий диагпостикум для всех лиссавирусов (метод флюоресцирующих антител).

Характеризуя генетическое расстояние между видами лиссавирусов можно утверждать, что оно короче, чем между видами других родов КкаЪйоутйае и можно назвать, не делая большой ошибки, что все виды ЬуББауи'т - это вирусы бешенства, так как они вызывают клинически не отличимые (за исключением вируса Мокола) летальные энцефаломиелиты [29]. Вместе с тем, такая оценка не соответствует экологии рода Ьуззауи-т. Например, при анализе «взаимоотношений» представителей первой филогруппы выявляются необычные факты. Так, вирус бешенства и лиссавирус австралийских летучих мышей (ЛАЛМ) относительно близки по антигенным свойствам и филогенетической структуре. Однако вирус бешенства имеет глобальное распространение (за исключением Австралии и Антарктиды) среди потоядных и летучих мышей [3,11,], тогда как ЛАЛМ на сегодня ограниченно циркулирует только в Австралии [11]. Циркуляция других лиссавирусов в настоящее время на территории Австралии неизвестна.

С другой стороны лиссавирусы европейских летучих мышей 1 и 2 типа в рамках 1 филогруппы составляют единую монофилогенетическую группу не

с многочисленным «вековым соседом» вирусом бешенства, а с такими дальними родственниками как лиссавирус Дувенхейдж (Южная Африка), Иркут (Сибирь), Араван и Худжанг (Центральная Азия). Эти примеры свидетельствуют о том, что генетические расстояния недостаточны для определения вида лиссавирусов. Но сюрпризы распространения и циркуляции лиссавирусов на этом не заканчиваются. Принято считать, что родина вируса бешенства это Европа, с территории которой «космополитный» вирус бешенства предположительно собачьего происхождения в период европейской колонизации стал распространяться во многие регионы мира [2, 40]. В результате чего «космополитный» вариант вируса бешенства (ВБ) циркулировал только среди собак и диких плотоядных. Наряду с «космополитным» вариантом ВБ, интродуцируемым из Европы, в отдельных регионах Африки и Юго-Восточной Азии уже существовали природные очаги собачьего бешенства, которые отличались от интродуцируемых вирусов. Несмотря на ликвидацию собачьего бешенства в развитых странах, в других регионах Старого Света собаки продолжают оставаться причиной 90% смертности людей от бешенства [53,117].

В арктическом регионе земли циркулирует так называемый вариант арктического бешенства. Но совершенно неожиданной и трудно объяснимой оказалась информация о возможности циркуляции арктически подобного варианта ВБ в Индии, Центральной и Восточной Азии [31,33,49].

Как было отмечено выше, из 12 видов рода ¿у^яу/гм-у экология 11 связана с летучими мышами. Только экология ВБ (1-й генотип) связана как с наземными млекопитающими (главным образом плотоядными), так и с летучими мышами.

В связи с этим, важно подчеркнуть, что на сегодня нет доказательств циркуляции ВБ среди летучих мышей на территории Европы [98]. Вместе с тем, летучие мыши «Старого Света» успешно обеспечивают циркуляцию других видов лиссавирусов. Так, в Европе летучие мыши обеспечивают циркуляцию лиссавирусов европейских летучих мышей 1 и 2 типа и

Западно-Кавказского лиссавируса летучих мышей [11, 42]. В Азии -лиссавирусы Араван, Худжанг и Иркут [31,48,51]. В Африке - Лагос бат, Дувенхейдж и Шимони бат лиссавирусы [27, 30].

Более того, в ходе недавних исследований, проведенных в Кении, в четырех из пяти точек у нескольких видов летучих мышей рода Miniopterus в 17-26% обнаружены вируснейтрализующие антитела к лиссавирусу Западно-Кавказских летучих мышей (ЛЗКЛМ) [11]. Эти данные свидетельствуют о распространенности и широкой циркуляции ЛЗКЛМ (или серологически связанного с ним лиссавируса), так как летучие мыши рода Miniopterus широко распространены в тропиках и субтропиках Старого Света [26]. А единственный изолят ЛЗКЛМ на территории России позволяет предположить возможность трансконтинентального заноса этого лиссавируса во время сезонных миграций летучих мышей [3,11].

1.1.2 Морфология и структура вируса бешенства.

Вирионы имеют пулевидную форму, и их длина составляет в среднем 180 нм, а диаметр 75 нм. Вирион состоит из несегментированного генома, представленного одной молекулой спиралеобразно скрученной негативной РНК и 5 структурных белков (см. рисунок 1): нуклеопротеин (N), фосфопротеин (Р), матричным белком (М), гликопротеин (G) и РНК -зависимая РНК полимераза или большой белок (L- large protein). Геномная РНК не инфекционна.

Ribonuclcocapsid (RNP)

Рис. 1. Схема строения вириона вируса бешенства, семейства Rhabdoviridae,Viral Taxonomy, 1995.

Инфекционностью обладает нуклеокапсид или рибонуклеопротеид (РНП), состоящий из геномной РНК, тесно скрученной с 3-мя внутренними белками (L,N, Р). Нуклеокапсид «одет» мембранными белками (М, G) и бислойной липидной оболочкой, через которую проступают гликопротеиновые шипы длиной 8,3 нм.

1.1.3 Репродукция вируса бешенства.

Жизненный цикл вириона условно можно разделить на 3 фазы. Первая или ранняя фаза включает адсорбцию вириона на рецепторы чувствительных клеток, проникновение в клетку и раздевание. Во второй фазе происходит транскрипция и репликация вирусного генома, а также синтез вирусных белков. В третьей или поздней фазе - сборка и почкование вируса.

Один из наиболее важных клеточных рецепторов, к которым адсорбируются вирионы - это никотинацетилхолиновые рецепторы, которые расположены, главным образом, в нейромышечной бляшке на поверхности мышечных клеток и нейронов. Другие два рецептора - это нейрон-адгезивные молекулы CD56, которые также расположены на поверхности чувствительной клетки, и нейротропин (Р75). Эти данные позволили научно обосновать рекомендованные ВОЗ критерии определения категории тяжести укусов и показали, почему так опасны трансдермальные укусы -дерма состоит из 3-х слоев: мышечный слой, слой кровеносных капилляров и слой сплетения нервных окончаний. Поэтому, независимо от локализации трансдермального укуса, критерием которого является появление капли

крови, данное повреждение рассматривается как опасное и для гарантированного спасения укушенного назначается антирабический

<

иммуноглобулин и вакцина [3,113].

Проникновение вириона в клетку происходит путем слияния вирусной оболочки и мембраны чувствительных клеток. В результате освобождается РНП.

Во второй фазе сначала идёт так называемая «первичная транскрипция» 5 моноцистронных мессенджеров тРНК для >4,Р,М, в и Ь белков (таблица 1), которые кодируют синтез вирусных белков. Из них 4 тРНК: М,Р,М и Ь-т РНК транслируются к «свободноплавающим» в цитоплазме рибосомам, в которых синтезируются соответствующие структурные вирусные белки. Тогда как тРНК в-белка транслируется в трубчатый аппарат Гольджи внутриклеточной мембраны. Далее идет транскрипция с геномной РНК антигеномных (+) РНК. Последние, в свою очередь, служат матрицей для синтеза новых генераций (-) геномных РНК

[3].

Фаза транскрипции и репликации плавно переходит в финальную, третью фазу жизненного цикла вириона - фазу сборки и почкования. Если белки Ь, М, Р контролируют, главным образом, транскрипцию и репликацию, то М - белок занимает промежуточное положение между нуклеокапсидом и оболочкой вириона и участвует в конденсации РНП (т.е. придает ему пулевидную форму), сборке и почковании вируса [43].

Таблица 1

Структурные белки вируса бешенства

Белок Молекулярная масса кДа Молекул на вирион Пост-трасляционные модификации

Ь 180 20-150 -

в 70 (О,) 1800 гликозилирование

65(С2) пальмитирование

N 57 1750 фосфорилирование

М, 41 (М, II) 38(М, I) 950 фосфорилирование

На финальной стадии сборки нуклеокапсиды «одевают» вирусную оболочку, представленную М и в структурными белками, при этом более 80% молекул в-протеина расположены на поверхности вириона и представлены пронизывающими бислойную липидную оболочку гликопротеидными шипами, которые возвышаются над поверхностью вириона на 8,3 нм. Гликопротеин, как главный поверхностный белок вириона, детерминирует нейровирулентность, нейроинвазивность вируса, а также исход вирусной инфекции [1]. Так, замена одной аминокислоты аргинина в позиции 333 эктодомена в- белка вируса бешенства (1 генотип) значительно снижает патогенность вируса для взрослых мышей. Кроме того установлено, что степень патогенности вируса бешенства коррелирует со степенью экспрессии в-белка - самого мощного иммуногена и индуктора аппоптоза. Так, высокопатогенные штаммы вируса экспрессируют низкий уровень С- белка, низкий уровень МНС второго класса и не индуцируют аппоптоз нейронов, тогда как авирулентные штаммы вируса бешенства -наоборот [6]. В первом случае экспериментальные животные гибнут, а во втором выживают и выздоравливают [1,3,11].

1.2 Эпизоотологичеекие особенности бешенства.

Ежегодно в мире после укусов животными, больными бешенством, погибает от 55 ООО до 70 ООО людей, половина из которых дети [1, 13]. В 2011г. в РФ от бешенства погибло 13 человек, в т. ч. девятилетняя девочка из Подольского района Московской области, укушенная бездомной кошкой, больной бешенством [20].

1.2.1 Ситуация с бешенством в РФ.

Россия по классификации ВОЗ и МЭБ является неблагополучной по бешенству страной [6,11].

Бешенство у человека

В Российской Федерации за многолетний период эпидемиологического наблюдения бешенство среди людей можно охарактеризовать как инфекцию с циклическими колебаниями с промежутками в 2-3 года. С начала 70-х годов в нашей стране ежегодно регистрируется от 4-х до 22-х случаев заболевания. На протяжении последних лег наблюдается тенденция к росту показателей заболеваемости [9].

В 2008 году среди населения Российской Федерации было зарегистрировано 17 случаев бешенства в 10-ти субъектах страны, что в 2,1 раза больше по сравнению с 2007 годом. Самыми неблагополучными являются Южный и Центральный федеральные округа. За 11 месяцев 2009 г. в Российской Федерации зарегистрировано 10 случаев бешенства. За январь-февраль 2010 отмечено 4 случая бешенства: по 1 случаю в Республиках Дагестан, Калмыкия, Астраханской и Челябинской областях [20].

Ежегодно в России антирабическую помощь получают от 250 до 450 тысяч человек, пострадавших от укусов животных, из которых каждый четвертый - ребенок.

Показатель обращаемости за антирабической помощью в 2008 году составил в целом по стране 304 на 100 тысяч населения. Наиболее неблагоприятная ситуация, где показатели существенно превышали аналогичные уровни по Российской Федерации, складывалась в республиках Северная Осетия-Алания и Хакасия, Астраханской области, Еврейской автономной области, Чукотском автономном округе, Республике Тыва, Кабардино-Балкарской Республике, Воронежской, Орловской, Калужской областях.

Городские жители составили 77,3%. В Московской области в 2008-2009 гг. в 7-ми населенных пунктах были зарегистрированы случаи нападений

больных животных на группы людей с числом пострадавших от 8-ми до 14-ти человек.

Бешенство у животных

В многолетней динамике заболеваемости бешенством животных (лисица, енотовидная собака, волк, собаки, кошки и крупный рогатый скот) отмечается выраженная тенденция к росту со средним темпом 10% ежегодно. В последние годы инфекцию регистрировали в 63-х субъектах страны. Наиболее неблагополучными были регионы, входящие в Центральный и Приволжский федеральные округа. От укусов именно диких животных в 2008 году пострадало 7123 человека, что составило 1,6% от всех людей, обратившихся за антирабической помощью [9,10,14].

Только за январь-февраль 2010 года на территории РФ отмечено 796 (январь- 344, февраль - 452) случаев бешенства среди животных. Бешенство диагностировали у 397 лисиц, 3-х волков, 17 енотовидных собак, 2-х хорьков, 4-х корсаков, 2-х куниц, а так же у песца, белки и дикой кошки. Жертвами болезни стали 93 головы крупного рогатого скота и 7 голов мелкого рогатого скота, 14 лошадей, 168 собак и 86 кошек (по данным ФГУ «Центр ветеринарии» лаборатории эпизоотологии ВИЭВ) [20].

Эпизоотическая ситуация по бешенству на территории России, некоторых стран СНГ и Балтии в настоящее время проявляется эпизоотиями природного типа. Резервуаром вируса бешенства и основным источником на территории России являются дикие плотоядные и, прежде всего, лисицы, енотовидные собаки и волки, на Севере — песцы [9,19].

В государствах Закавказья, Средней Азии, южных областей Казахстана наличие природных очагов бешенства сочетается с проявлением энзоотии среди собак, корсаков [9,80].

Отдельным природным очагом называют наименьший по размерам участок земной поверхности, в пределах которого циркуляция возбудителя инфекции осуществляется без заноса из вне неопределенно долгий срок. При этом наблюдаются следующие друг за другом циклы подъема и спада

эпизоотии. В морфологической структуре отдельно взятого очага выделяют ядро, зоны выноса инфекции и постоянно свободные от возбудителя участки. На территории ядра имеются наиболее благоприятные условия для циркуляции возбудителя, обеспечивающие относительно стойкое его сохранение. Иногда при обширном природном очаге может быть несколько ядер. В пределах очага выделяют участки выноса. В них возбудитель обнаруживается у носителей лишь в период подъемов энзоотии. Третий элемент отдельного очага это территории свободные от возбудителя в связи с непригодностью их для обитания хозяев вируса бешенства [31,33].

В природном очаге бешенства самостоятельная циркуляция вируса осуществляется в популяции диких плотоядных животных или в популяции кровососущих и насекомоядных летучих мышей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Лосич, Милана Анатольевна, 2014 год

Список литературы

1. Баньковский Д. О. //Имммунобиологические свойства штамма ERA G 333 вируса бешенства для изготовления антирабической вакцины // автореферат, Щелково, 2010г.

2. Ведерников В..А..,Балдина И..В., //«И все-таки как лечить бешенство?».// Ветеринарная жизнь №5,Август 2008 г.

3. Грибенча С. В.,Львов Д.К. Рабдовирусы. //Руководство по вирусологии// под ред. Академика РАМН Д.К. Львова, М.: «МИА», 2008 г. С.586-588.

4. Грибенча C.B., Козлов А.Ю., Костина Л.В., Елаков А.Л., Лосич М.А., Цибезов В.В., Забережный А.Д., Алипер Т.И.//Получение моноклональных антител к нуклеопротеину вируса бешенства//Вопросы Вирусологии.-2013, №5- с.38-43.

5. Грибенча C.B., Лосич М.А., Грибенча Л.Ф., Непоклонова И.В./Новый принцип селекции вакцинного вируса на основе количественного уровня экспрессии G-белка- главного иммупогена вируса бешенства/./Вопросы Вирусологии.-2012г.-№2-С.44-47.

6. Глава 2.2.5. Бешенство. Руководство по диагностическим тестам и вакцинам для сухопутных животных (млекопитающих, птиц и пчел). Международная организация по здоровью животных (пятое издание).лабораторная диагностика 2004 г.

7. .Грибенча C.B., Фуралев В.А., Клюшник С.Ю. «Штамм гибридных клеток, используемый для получения моноклональных антител к G-белку вируса бешенства».//Авторское/свидетельство № 1631070.-М. 1990.

8. Грибенча C.B., Алипер Т.Н., Непоклонова И.В. Происхождение и характеристика вакцинного вируса бешенства штамм ERA-CB-20M // Труды и материалы 12 Ветеринарного конгресса. - Измайлово, 2002.

9. Груздев К.Н., Недосеков В.В., // Бешенство животных//, Москва,»Аквариум лтд.» 2001 г.

Ю.Комитет экспертов ВОЗ по бешенству, 8-й доклад. - Женева, 1994.

П.Львов Д.К., Грибенча C.B. с соавт.Бешенство. //Руководство по вирусологии// под ред. Академика РАМН Д.К. Львова, М.: «МИА», 2013 г. С.811-816.

12.Лосич М.А., Мухин А.Н., Раев С. А. и др. Использование иммуностимулирующих комплексов в антирабических вакцинах для мелких домашних животных // Труды ХУ1У (14) Московского Международного Ветеринарного Конгресса. М., 201 l.c.21-23

13.Методы лабораторных исследований по бешенству ВОЗ (третье издание). 1975.

М.Онищенко Г.Г. «Об усилении мероприятий по борьбе с бешенством в Россйской Федерации»//Постановление главного государственного врача Россйской Федерации от 29 августа 2008 года № 53//Российская газета 21.11.2008г.

15.0рлянкин Б.Г., Непоклонов Е.А., Алипер Т.И.,// Основы противовирусного иммунитета// Москва, 2011 г.,с. 17-20,66-78.

16.Селимов М.А. Бешенство. М., Медицина, 1978 г., с. 20-32.

17.Сафонов Г.А. Оценка антигенных и иммуногенных свойств штамма ERA G333 вируса бешенства / Сафонов Г.А., Баньковский Д.О. // Вестник РАСХН. 2010. №5. С.61-63

18.Сергеев В.А., Непоклонов Е.А., Алипер Т.И. // Вирусы и вирусные вакцины/. Москва,2007г. с.48-75.

19.Сюрин В.Н., Самойленко А.Я., Соловьев В.Б., Фомина Н.В., Бешенство// Вирусные болезни животных.-М,1998,с.57-65.

20.Эпизоотическая ситуация в РФ (2010 год). ФГУ ВНИИЗЖ ИАЦ Управления Ветнадзора г. Владимир/ Официальный сайт Россельхознадзора. http://www.fsvps.ru/fsvps/iac.

21.Яровая И.И., Колотвина П.В., Кохнович М.А., Грибенча C.B. Вирус бешенства. В «Клиническая лабораторная диагностика. Национальное руководство». Москва, Изд. Группа «ГЭОТАР МЕДИА», 2012, с. 645-649.

22. ABCD Guidlenes on: Rabies in cats// European Advisory Board on Cat Diseases. Manual,P. 1/22-1/17,June,2008.

23.Amer. J. Epidemiol. -1976. - Rabies. 104. - P. 294-298.

24.Benmansour A., Brahimi M., Tuffereau C., Coulon et all. Rapid Sequence Evolution of Street rabies Glycoprotein is related to the highly heterogeneous Nature of the Viral Population // Virology.-1992-Vol.l87-p.33-45.

25.Blancou J., La vaccination des renards contre la rage. // Annalles de Medecine Veterinaire -1985-p.l29, 329-337.

26. Cliquet F., Aubert M., Sagne L. //Jornal of Immunological Methods. 1998. 212.

27.Cliquet F., Aubert M. & Sagne L. (1998). Development of a fluorescent antibody virus neutralization test (FAVN test) for the quantification of rabies-neutralising antibody. J. Immunol. Methods, 212, 79-87.

28.Cliquet F., Sagne L., Schereffer J. L. & Aubert M.F.A. (2000). ELISA tests for rabies antibody titration in orally vaccinated foxes sampled in the fields. Vaccine, 18, 3272-3279.

29.Council of Europe (1997). Vaccinum rabiei inactivatum ad usum veterinarium. Inactivated Rabies Vaccine for Veterinary Use. European Pharmacopoeia, Third Edition. Monograph 0451. Editions of the Council of Europe, Strasbourg, France, 1776-1777.

30.Faber M., Pulmanausahakul M., Hadawadekar SS. et all. Over-expression of the rabies virus glycoprotein results in enhancement of opoptosis and antiviral immune response. J. Virology-2002 - Vol.76-3374-3381.

31.Gribencha S.V. Gribanova L. Ja., Malkov G.B., Barinsky I.F. Population structure of some street rabies virus strains.//Arch.virol.-1989-p.l04; 347-350.

32. Gribencha S.V., Vanag K.A., Barinsky I.F. Separation of 2 street rabies strain population into two biological variants //Acta virologica-1981-p/25,168.

33.Gribencha S.V. Vanag K.A. Obukhova V.R. Shubladze A.K. Experimental studies of chronic rabies.// Ann.virol (Institute of Pasteur)-1980-p. 131, 302-312.

34.Hooper D. G. The role of immune response in the pathogenesis of rabies// J. of Neurovirology-2005-Vol. 11 -p.88-92.

35.Macfarlan R.I., Dietzschold В., Koprowsky H. et all. Stimulation of cytotoxic T-lyphocyte responses by rabies virus glycoprotein and identification of on immunodominant domain.//Molecular immunology-1986-p.23,733-741.

36. Sarmento Luciana, Li Xia, Howerth Elizabeth et all. Glycoprotein - mediated induction of opoptosis limits the spread of attenuated rabies viruses in the central nervous system of mice. Journal of Neurovirology - 2005 - Vol.11 -571-581.

37.1-Iervijnen V. R. «Бешенство животных» // Ветеринарная жизнь, 2011 ; 7: стр.1.

38.Bruckner L. et al. Alternatives for potency testing of veterinary vaccines: rabies vaccine as a model // Develop. Biol. Stand. 1986. 64. 93 - 97.

39. Rooijakkers E.J.M. et. al. Development and evalution of alternative testing methods for the in vivo NIH potency test used for the quality control of inactivated rabies vaccine. In: Alternatives for Animal Testing in the Production and Quality Control of Vaccines: Present Practice and Prospectives, National Institute of Public Health and Environmental Protection Bilthoven. 1996. 9 — 17.

40.Badrane, H. and Tordo, N. Host switching in lyssavirus history from the chiroptera to States during 2008. J.Am. Vet. Med. Assoc. 2010, 237, 646-657.

41.Both, L., Banyard, A.C., Van Dolleweerd, C. et al. Passive immunity in the prevention of rabies. Lancet infect. Dis., 1012, 12, 397-407.

42.Botvinkin A. D., Poleschuk E. M., Kuzmin I. V. et al. Novel lyssaviruses isolated from bats in Russia// Emerg. Infect. Dis. — 2003. — Vol. 9 — P. 1623.

43. Dietzgen R.G., Colisher, C.H., Kurath, G. et a! (2011). Family Rabdoviridae. In virus Taxonomy.Ninth Report of the international Committee on Taxonomy of viruses, King, A.M.Q., Adams, M.J., Carstens, E.B. end Lefkowitz, E.J., eds (Elsevier Academic Press, San Diego, С A), pp. 686-714.

44.Dietzgen R. G. and Kuzmin I. V. Taxonomy of Rabdoviruses in Rhabdoviruses Molecular taxonomy, Evolution, Genomics, Ecology, Host-vector interactions, Cytopatology and Control. Edited by Ralf G. Dietzgen and Ivan Kuzmin. 24 May 2012, pp. 13-22.

45.Durr, S., Naissengar, S., Mindekem, R. et al. Rabies diagnosis for developing countries. PIos Negl. Trop. Dis. 2008, 2, p. 206.

46.Fayaz, A., Simani, S., Janani, A. et al. Antybody persistence, 32 years after postexposure prophilaxis with human diploid cell rabies vaccine (HDCV). Vaccine, 2011,29,3742-3745.

47.Finke S., Conzelmann K. K. Replication strategies of rabies virus // Vir. Res. — 2005 —Vol. 111. — P. 120-131.

48.Freuling C., Beer M., Conraths F.J. et al. Novel Lissavirus in a natterer's bat, Germany. Emerg. Infect. Diss. 2011, v. 17, pp. 1519-1522.

49.Gribencha S. V., Gribanova L. Ya., Malkov G. B. et al. Population structure of some street rabies virus strains//Arch. Virol. - 1989. -Vol. 104. - P. 347-350.

50. Gribencha, S., Gribencha, L., Barinsky, I. et al. Monoclonal antibody to rabies virus glycoprotein is more effective than polyclonal immune globulin. In Xlth International Congress of Virology. Sydney, Australia, 1999, p. 351-352.

51.Hanlon, C.A., Kuzmin, I.V., Blanton, J.D. et al. Efficacy of Rabies biologies against new lissaviruses from Eurasia. Virus. Res. 2005, 111, 44-54.

52.Hemachudha T., Wacharapluesadee S., Lumbertdaecha B. et al. Sequence analysis of rabies virus in humans exhibiting encephalitic or paralytic rabies // J. Infect. Dis. — 2003. — Vol. 188. — P. 960—966.

53.Hemachudha T., Wacharapluesadee S., Wilde H. et al. Pathophysiology of human paralytic rabies //J. Neurovirol. - 2005. -Vol. 11. - P. 93-100.

54.Henderson S., Leibnitz G., Turbull M. et al. False-positive human immunodeficiency virus seroconversion is not uncommon following rabies vaccination // Clin. Diagn. Immunol. — 2002. —Vol. 4. — P. 942-943.

55.Hooper D. G. The role of immune responses in the pathogenesis of rabies. J. Neurovirol. — 2005.— Vol. 11. —P. 88-92.

56. Jackson, A.C., Zhen, F.F. Pathogenesis of Rabies//Neurovirol. 2005, Vol.11, p. 74-75.

57.Jacson, A.C. and Wunner, W.H. Future Developments and Challenges. In "Rabies", Second edition, Edited by Alan C. Jacson and William M. Wunner. Copiright Elsevier in 2007, p. 629-637.

58.Karin Lovgren Bengtsson, Bror Morein and Albert DME Osterhaus. Iscom technology-based Matrix M adjuvant; success in future vaccines relies on formulation. April 2011. Vol. 10. № 4. P. 401 -401. DOI\ erv.l 1.25.

59.Kuzmin I. V., Hughes G. J., Botvinkin A. D., Gribencha, S.V. and Ruprecht, C.E. Arctic and Arctic-like rabies viruses: distribution, phylogeny and evolutionary history. Epidemiol. Infect. 2008a, 136, 509-519.

60.Kuzmin I. V., Niezgoda, M., Franca, R. et al. Possible emergence of West Caucazian bat virus in Africa. Emerg. Infect. Dis. 2008b, 14, 1887-1889.

61.Kuzmin I. V.,Mayer A.E., Niezgoda M. et al. Shimoni bat virus - a new representative of the lissavirus genus//Virus Res., 2010. -V.149.-p. 197-210.

62.Kuzmin I. V.,Orciari, L.A., Aray, Y.T. et al. Bat lyssavirus (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences. Virus Res. 2003, 97, 65-79.

63.Kuzmin I. V. and Tordo N. Genus Lyssavirus in Rhabdoviruses. Molecular taxonomy, Evolution, Genomics, Ecology, Host-vector interactions, Cytopatology and Control. Edited by Ralf G. Dietzgen and Ivan Kuzmin. 24 May 2012, pp.3758.

64.Losich Milana, Aliper T.I./ Analysis of vaccine-induced antirabic humoral immunity in carnivores (dogs, cats and grey foxes)./ Rabies serology meeting, Nansy, Franse, 2013.

65.Lodmell D., Smith J., F.sposito J., Ewalt L. Crossprotection of mice against a global spectrum of rabies virus variants// J. Virol. - 1995. - Vol. 69, Ny 8. -P. 256-261.

66.Marcotter, W., Van Eeden, C., Kuzmin I. V. et al. Epidemiology and patogenicity of African bat lyssaviruses. Dev. Biol. (Basel), 2008b, 131, 317-325.

67.Marston, D.A., Horston, D.L., Ngeleja C. et al. Icoma lyssavirus: identification of a hihly divergent novel Lyssavirus in an African civet. Emerg. Infect. Ois. 2012, 18. 664-667.

68.Macfarlan R.I., Dietzschold B., Koprowsky H. et all. Stimulation of cytotoxic T-lyphocyte responses by rabies virus glycoprotein and identification of on immunodominant domain.//Molecular immunology-1986-p.23,733-741.

69.Mannen K., Niramatsu K., Mifune K., Sakamoto S. Conserved nucleotide seguence of rabies virus cDNA encoding the nucleoprotein // Virus Gen. -1991.-Vol. 5.-P. 69-73.

70.Manz, D. Markierungsversuche an Füchsen im Revier als Vorbereitung fur eine mb'gliche spatere perorale Vakzination gegen Tollwut. Fortschritte der Veterinärmedizin (1976) 25, 263-269.

71.Martinezarends A. Supcrantigcn properties of the rabies virus nucleocapsid // INTERCIECIA. - 1997. - Vol. 22, Iss 2. - P. 68-72.

72.Miller J. International Congress of infection and parasitic disease. 6-th. Warszawa, 1974. VI.

73.Pastoret, P.-P., Brochier, B., Blancou, J., Artois, M, Aubert, A., Kieny, M.P., Lecocq, J.P., Languet, B., Chappius, G., and Desmettre, P. Development and deliberate release of vaccinia-rabies recombinant virus for the oral vaccination of foxes against rabies. In Binns, M.B. and Smith, G.I. (eds.). Recombinant Poxviruses CRC Press, Baton Roca, USA. -1992. -P. 163-209.

74.Pastoret, P.-P., Brochier, B., Blancou, J., Languet, B., Thomas, L., Paquot, A., Bauduin, B., Costy, F., Antoine, FI., Kieny, M.P., I.ecocq, J.P., Debruyn, J., and Desmettre, P. First field trial of fox vaccination against rabies with a vaccinia-rabies recombinant virus. Veterinary record. -1988. -V. 123.-P. 481-483.

75.Pastoret, P.P., Frisch, R., Blancou, J., Wolff, F., Brochier, Ë. and Schneider, L.G. Campagne internationale de vaccination antirabique du renard par voie orale menee au grand-duchc de Luxembourg, en Belgique et en France. Annales de Medecine Vétérinaire (1987). 131, 441-447.

76.Perrin P., Lafon M., Versmisse P. & Sureau P. Application d'une melhodc immunoenzymatique au titrage des anticorps antirabiques neutralisants en cultures cellulaires. J. Biol. Stand., (1985). 13, 35-42.

77.Rosatte R.C., Lawson K.F., Machines C.D. Development of baits to deliver oral rabies vaccine to raccoons in Ontario // J. Wildl. Dis. -1998. - V. 34, N 3.-P. 647-652.

78.Rupprecht CE, Blass L, Smith K, et al. Human infection due to a recombinant vaccinia-rabies glycoprotein virus. // N Engl J Med 2001;345:582-6.

79.Sagara J., Kawai A. Identification of heat shock protein in the rabies virion.// Virol. - 1992. - Vol. 190, JVb2. - P. 845-848.

80.Scheider L.G., Shoop U. Pathogenesis of rabies and rabies - line viruses. Ann. Just. Pasteur, 1972.

81.Schneider L.G., Cox J. H. Bat lyssavirus in Europe // Curr. Top. Microbiol. Immunol. -1994. - V. 187, N2 2. - P. 207-218.

82.Schneider, L. G. Der Feldversuch zur oralen Immunisierung von Füchsen gegen die Tollwut. Kurztagung des WHO Tollwutzentrums Tubingen und des Deutschen Jagdschutzverbandes, February 18, 1989. Bundesforschungsanstalt fur Viruskrankheiten der Tiere, Tubingen, Germany, (1989) 1-16.

83.Schneider, L.G., Cox, J.H., Miiller, W.W., and Hohnsbeen, K.P. Current oral rabies vaccination in Europe: an interim balance. Review of Infectious Diseases (1988) 10, S654-S659.

84.SerokovaD. Zyuwet. 1975. VI1.

85.Smith J. S., Orciari L, Yager P. A. Molecular epidemiology of rabies in United States // Semin. Virol -1995. - V. 6, Ns 4. - P. 387-400.

86.Smith J., Summer J., Roumillat L. Enzyme-linked immunosorbent assay for rabies antibody in hybridoma culture fluids and its application to differentiation of street and laboratori strains of rabies virus // J. Clin. Microbiol. - 1984. - Vol. 19, № 2. - P. 267-272.

87.Smith J.S., Yager P.A. & Baer G.C. (1973). A rapid reproducible test for determining rabies neutralizing antibody. Bull. WHO, 48, 535-541.

88.Steele F., Wandeler A., Capt P., Schneider L. Oral immunization of foxes against rabies // Zbl. Vet. Med. -1982.- Bd. 29. - S. 372-396

89.Steck, F., Wandeler, A., Bichsei, P. Capt, S., and Schneider, L. Oral immunisation of foxes against rabies. Zentralblatt fur Veterinärmedizin, Reihe (1982) B 29, 372-396.

90.Svrcek S., Durove A., Ondrejka R. et al. Immunogenic and antigenic activity of an experemental oral vaccine prepared from the strain Vnukovo-32/107// Vet Med.- 1995 - V. 40, N3. - P. 87-96.

91.T. Mueller, L. Geue, J. Klemt, T. Selnorst, J. Frost, C. Bunzenthal, K. Zimmmer, E. Vanek. VACCINE-ASSOCIATED RABIES in Germany and Austria. The 16 international conference on RABIES in the AMERICAS. Canada, 2005.p 44.

92.Tollis M., Dietzschold B., Viola C., Koprowski H. Immunization of monkeys of with rabies ribonucleoprotein (RNP) confers protective immunity against rabies //Vaccine. - 1991. - Vol. 9. - P. 134-136.

93.Tordo N. Characteristics and molecular biology of the rabies virus // Laboratory techniques in rabies 4-th ed. - Geneva, 1996. - P. 28-45.

94.Tordo N., Poch O. Structure of rabies virus // Campbell J., Charlton K. eds Rabies. - Boston, Kluwer Academic Publishers. - 1988. - P. 25-45.

95.Virus Taxonomy: Sixth Report of the International committee on Taxonomy of Viruses. - 1995. - 458 p.

96.Vos, A., Neubert, A., Aylan, O., Schuster, P., Pommerening, E., Miiller, T., and Chivatsi, D.C. An update on safety studies of SAD B19 rabies virus vaccine in target and non-target species. Epidemiology and Infection. -1999.-V. 123.-P. 165-175.

97.Wandeler A. I. Oral immunization of wildlife // The natural history of rabies. - 2nd ed. - Boca Baton - CRC Press, 1991. - P. 485-503.

98.Wandeler A. Oral immunization against rabies: afterthoughts and foresight. Schweizer Archiv for Tierheilkunde. -2000. - V. 142. -P. 455-462.

99.Wandeler, A., Pfotenhauer, P., and Stocker, C. Ueber die Verwendung von Ködern zu biologischen Untersuchungen an Füchsen. Revue Suisse de Zoologie (1975) 82, 335-348.

100.Wandeler, A.I., Bauder, W., Prochaska, S., and Steck, F. Small mammal studies in a SAD baiting area. Comparative Immunology, Microbiology and infectious Diseases (1982) 5, 173-176.

101.Wandeler, A.I., Capt, S., Kappeler, A., and Hauser R. Oral immunization of wildlife against rabies: concept and first, field experiments. Review of Infectious Diseases 10: (1988) S649-S653.

102.Westerling, B. A Field trial on oral immunization of raccoon dogs and foxes against rabies in Finland 1988-1989. Rabies bulletin Europe (1989) 13(2)942.

103.WHO. Expert Committee on Rabies. Geneva, Monograph series N0 23.

104.WHO. Rabies Bulletin Europe information surveillance research. 2001, 3/200, V 24, N0 3.

105.Wiktor T. et al. Antigenic properties of rabies virus components // J. Immunol. - 1973.-N«4,-P. 243-251.

106.Wiktor T., Flamand A., Koprowski H. Use of monoclonal in diagnosis of rabies virus infection and differentiation of rabies and rabies-related viruses // J. Virol. Meth. - 1980. - N> 1. - P. 33-46.

107.Wiktor T.J., Koprowcki H, Rorkel B. Localized rabies infection in mice. Proc. soc. exp. biol. 1972. VI40 JST° 3.

108.Wiktor T., Koprowski H. Use of Hybridoma monoclonal antibodies, in the detection of antigenis differences between rabies and rabies-related vims proteins // J. gen. Virol. - 1980. - Vol. 48. - P. 97-104.

109.Wilhelm, U. and Schneider L.G. Oral immunization of foxes against rabies - practical experiences of a field trial in the Federal Republic of Germany. Bulletin of the World Health Organization (1990) 68, 87-92.

110.Winkler W.G., Shaddok J. H., Williams L W.// Oral rabies vaccine evaluation of its infectivity in three species of rodents.

111.Moore, P.R., Jansen, C.C., Graham, G.C. et al. Emerging tropical diseases in Australia. Part 3. Australian bat lyssavirus. Ann. Trop. Med. Parazitol., 2010, 104, 613-621.

112.Nadin-Davis, S.A. and Real, L.A. Molecular phylogenetics of the lyssaviruses -insights from a coalescent approach. Adv. Virus Res. 2011, 79, 203-238.

113.Neri P., Bracci L., Rustici M. et al. Sequence homology between HIV-1 gp!20, rabies virus glycoprotein and snake venom neurotoxins. Is the nicotinic acetylcholine receptor an HIV receptor? //Arch.Virol. — 1990.—Vol. 190 —Vol. 114. —P. 265-269.

114.Nicolau, St.S., Constantinescu, N. M., Cajal, N. "Turbarea", Bucuresti, 1962, p.61-72.

115.Prosniak, M., Faber, M., Hanlon, C.A. et al. Development of a cocktail of recombinant-expressed human rabies virus-neutralizing monoclonal antibodies for post exposure prophylaxis of rabies. S. Infect. Dis., 2003, 188, 53-56.

116.Rupprecht, C.E. and Slate, D. Rabies prevention and Control: Advances and Challenges. In Rhabdoviruses. Molecular taxonomy, Evolution, Genomics, Ecology, Host-vector interactions, Cytopathology and Control. Edited by Ralf G. Dietzgen and Ivan Kuzmin. 24 May 2012, p.215-252.

117.Slean, S.E., Hanlon, C., Weldon, W. et al. Identification and characterization of a human monoclonal antibody that potently neutralizes a bread panel of rabies virus isolates. Vaccine, 2007, 25(15):2800-10.

118.Smith, J.S., Orciari, L.A.,Yages, P.A. et al. Epidemiologic and historical relationships among 87 rabies virus isolates as determined by limited sequence analysis. J. Infect. Dis. 1992, 166, 296-307.

119.Smith, T.G., Wu, X., Franka, R. and Rupprecht, C.E. Design of future rabies biologies and antiviral drugs. Adv. Virus Res. 2011, 79, 345-363.

120.Srinivasan A., Burton E. C., Kuehnert M. J. et al. Transmission of rabies from on organ to four transplant recipients //N. Engl. J. Med. — 2005. — Vol. 352. — P. 1103-1111.

121.Tordo, N., Ceccaldi, P.E., Gaudin, Y., Wandeler, A. Rabdovirus: Rabies. In topley&Wilson's microbiology and microbial infections, 10th edn, Collier, L. and Mahy, B. (London, UK), 2005, p. 1104-1136.

122.Traenhart, O. Human rabies and its prevention. In Historical perspective of Rabies in Europe and the Mediterranean Basin, by A.A. King, A.R. Fooks, M. Aubert and A.I. Wandeler, eds. 2004, p. 325-395.

123.WHO consultation on a monoclonal antibody cocktail for rabies post exposure treatment. World Health Organisation, 2002, Geneva, Switzerland.

124.WHO Expert Consultation on Rabies: first report//WHO technical report series. — 2004, №931, p. 18.

125.Winkler, W.G. and Baer G.M. Rabies immunization of red foxes (Vulpes fulva) with vaccine in sausage baits. American Journal of Epidemiology (1976) 103,408-415.

126.Winkler, W.G., McLean, R G., and Cowart, J.C. Vaccination of foxes against rabies using ingested baits. Journal of Wildlife Disease (1975) 11, 382-388.

127. World Health Organisation Laboratory Techniques in Rabies, Fourth Edition, Meslin F.-X., Kaplan M.M. & Koprowski H., eds. WHO, Geneva, Switzerland. (1996).

128.Wunner W. Structure of rabies viruses // World's debt to Pasteur. - 1985. -P. 171-186.

129.Wilde H., Khawplod P., Khamoltham T. et al. Rabies control in South and Southeast Asia // Vaccine. — 2005 — Vol. 23 — P. 2284-2289.

130.Willoughby R. E., Tieves K. S., Hoffman G. A., et al. Survival after treatment of Rabies with induction of coma // N. Engl. J. Med. — 2005. - Vol. 352 — P. 25082514.

131.Wu, X., Hu, R. and Smith, T.G. Current Approaches in Lissavirus Vaccine Development and Future Challenge. In Rhabdoviruses. Molecular taxonomy, Evolution, Genomics, Ecology, Host-vector interactions, Cytopathology and Control. Edited by Ralf G. Dietzgen and Ivan Kuzmin. 24 May 2012, p. 253-269.

132.Wiktor T.J., Doherty P.C. & Koprowski H. (1977). In vitro evidence of cellmediated immunity after exposure of mice to both live and inactivated rabies virus. Proc. Natl Acad. Sei. USA, 74, 334-338.

133.World Health Organization Expert Committee on Biological Standards. Thirty-Fifth Report (1985). World Health Organization Technical Report Series No. 725. WHO, Geneva, Switzerland.