Иммунобиологические свойства полиреактивно трансформированных иммуноглобулинов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Химич, Наталья Владимировна

• Химич, Наталья Владимировна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Химич, Наталья Владимировна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

РАЗДЕЛ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Антитела: структура и функции

1.1.1. Полиспецифичность как одно из свойств естественных антител

1.2. Влияние различных физико-химических факторов на структуру и функции антител

1.2.1. Влияние тиоцианата кальция на антигенсвязывающие функции антител

1.2.2. Влияние рН на антигенсвязывающие функции антител

1.2.3. Влияние металлов на конформационные изменения антител

1.2.4. Влияние мочевины на конформационные изменения антител по данным дифференциальной спектрофотометрии

1.2.5. Механизмы усиления активности антител in vivo. Влияние активных форм кислорода, органических растворителей и липаз на антигенсвязывающие функции антител

1.3 Механизмы, лежащие в основе полиреактивной трансформации нативных иммуноглобулинов класса G

1.4 Строение липополисахаридов грамотрицательных энтеробактерий

РАЗДЕЛ 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Объекты исследования

2.2. Получение нативных иммуноглобулинов класса G

2.3. Получение полиреактивно трансформированных иммуноглобулинов

2.4. Электрофорез в полиакриламидном геле

2.5. Иммуноферментный анализ

2.5.1. Взаимодействие антител с липополисахаридом энтеробактерий

2.5.2. Взаимодействие антител с денатурированной однонитевой и высокополимерной нативной ДНК

2.5.3. Взаимодействие человеческого сывороточного альбумина

с липополисахаридом энтеробактерий

2.5.4. Определение авидности антител

2.5.5. Взаимодействие антител со стафилококковым белком А

2.5.6. Анализ конкурентного ингибирования связывания антител

2.5.7. Влияние обработки перйодатом натрия на взаимодействие антител с липополисахаридом энтеробактерий

2.5.8. Влияние обработки боратом натрия на взаимодействие антител

с липополисахаридом энтеробактерий

2.5.9. Вклад гидрофобных взаимодействий в связывание антител

с липополисахаридом энтеробактерий

2.5.10. Вклад электростатических взаимодействий в связывание антител с липополисахаридом энтеробактерий

2.6. Коньюгирование

2.6.1. Коньюгирование липополисахарида Escherichia coli К235

с флуоресцеинизотиоцианатом

2.6.2. Коньюгирование суспензии Escherichia coli КЗО и Staphilococcus aureus с флуоресцеинизотиоцианатом

2.7. Проточная цитофлуориметрия

2.7.1. Взаимодействие флуоресцентно меченного липополисахарида с. липополисахарид-связывающими рецепторами гранулоцитов и моноцитов периферической крови

2.7.2. Определение поглотительной способности гранулоцитов периферической крови

1 2.8. Люминол-зависимая хемилюминесценция

РАЗДЕЛ 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Взаимодействие полиреактивно трансформированных • иммуноглобулинов с липополисахаридом энтеробактерий и другими

антигенами

3.2. Влияние Т\уееп-20 и хлорида натрия на взаимодействие полиреактивно трансформированных иммуноглобулинов с липополисахаридом энтеробактерий

3.3. Влияние тиоцианати калия и мочевины на связывание нативных иммуноглобулинов класса О и человеческого сывороточного ^ альбумина с липополисахаридом энтеробактерий

3.4. Изучение биологической активности полиреактивно

' трансформированных иммуноглобулинов

3.5. Индивидуальные особенности полиреактивной трансформации нативных иммуноглобулинов класса в в норме и при патологии

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ И ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

РАБОТЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунобиологические свойства полиреактивно трансформированных иммуноглобулинов»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. К настоящему времени установлена ведущая роль антитело-зависимых иммунных механизмов в защите организма человека от целого ряда инфекционных заболеваний бактериальной природы (Davies В. et al., 20Ы; Lopez-Collazo Е. et al., 2013; Esteban E. et al., 2013; Morris M.C. et al., 2015). В структуре возбудителей этих болезней важное место занимают условно-патогенные грамотрицательные энтеробактерий (Anwar М.А. et al., 2014; Putker F. et al., 2015). Ведущим фактором патогенности этих микроорганизмов является липополисахарид (ЛПС, эндотоксин), который обладает разнонаправленной биологической активностью и относится к числу наиболее мощных индукторов воспаления (Mohammadi Z., 2011; Morris M.C. et al., 2012; Zhang G. et al., 2013; Anwar M.A. et al., 2014; Rhee S.H., 2014; Schedlowski M. et al, 2014; Wyns H. et al., 2015). У больных с хирургической абдоминальной патологией ЛПС играет важную роль в развитии местных и системных воспалительных реакций, проявляющихся в виде нагноения раны, послеоперационной пневмонии, перитонита, сепсиса, полиорганной недостаточности (Мавзютов А.Р. и др., 2011; Дибиров М.Д. и др., 2012; Kohno Y. et al, 2013). При этом основной причиной попадания ЛПС в организм считается нарушение барьерной функции кишечника и усиление бактериальной транслокации (Sperandeo P. et al., 2009; Whitfield С. et al., 2014; Sang H.R., 2014; Putker F. et al., 2015). Попадая в кровь, ЛПС при участии липополисахарид-связывающего белка (LBP) взаимодействует с рецепторными мембранными белками клеток-мишеней (CD 14, MD2 и TLR-4) и формирует с ними гетеродимерный рецепторный комплекс, обеспечивающий трансдукцию сигнала. Обусловленная этим сигналом активация клеток-мишеней сопровождается синтезом провоспалительных цитокинов (TNF-a, IL-ip и др.), а также целого ряда биоактивных медиаторов небелковой природы, включая активные формы кислорода (АФК) (Mussap М et al., 2011; Scior Т. et al., 2013; Bohannon J.K. et al., 2013; Park B.S. et al., 2013; Liaunardy-Jopeace A. et al., 2014; Sender V. et al.', 2014;

Plociennikowska A. et al., 2015). По данным литературы, в очагах воспаления in vivo АФК могут воздействовать на нативные иммуноглобулины класса G, вызывая значительные изменения их свойств. Одним из результатов такого воздействия является полиреактивная трансформация иммуноглобулинов, под которой понимается увеличение их способности к связыванию с самыми различными антигенами (Бобровник С. А., 1999). В системе in vitro полиреактивная трансформация иммуноглобулинов происходит в присутствии высоких концентрация хаотропных реагентов, к которым, в частности, относится тиоцианат калия (Бобровник С.А., 2004; Bouvet J.P. et al., 2001).

Взаимодействие полиреактивно трансформированных иммуноглобулинов с различными модельными белками на сегодняшний день изучено достаточно хорошо (Бобровник С.А., 2002; Bouvet J.P. et al., 1998). Исследования, характеризующие взаимодействия полиреактивно трансформированных иммуноглобулинов с ЛПС различных грамотрицательных энтеробактерий, до настоящего времени не проводились. Между тем оценка потенциальной роли таких антител в нейтрализации биологической активности и клиренсе энтеробактериальных ЛПС представляет значительный интерес.

Цель работы: исследовать связывание полиреактивно трансформированных иммуноглобулинов (ПРИГ), полученных в системе in vitro, с ЛПС некоторых видов грамотрицательных энтеробактерий, и оценить биологическую активность таких ПРИГ.

Задачи исследования.

1. Изучить связывание ПРИГ с ЛПС грамотрицательных энтеробактерий Escherichia coli К235, Salmonella minnesota Re 595 и Salmonella enteritidis. Оценить вклад электростатических и гидрофобных взаимодействий во взаимодействии ПРИГ с ЛПС энтеробактерий Е. coli К235, S. minnesota Re 595 и S. enteritidis.

2. Изучить влияние ПРИГ на поглотительную способность гранулоцитов периферической крови; на индуцированную зимозаном продукцию АФК

нейтрофильными гранулоцитами; на ЛПС-связывающий потенциал гранулоцитов и моноцитов. 3. Сравнить способность к полиреактивной трансформации нативных иммуноглобулинов класса G, выделенных из сыворотки крови здоровых людей и больных с хирургической абдоминальной патологией (долихосигма, злокачественные новообразования).

Научная новизна. В работе охарактеризованы иммунобиологические свойства ПРИГ. Впервые показано, что предварительная обработка нативных иммуноглобулинов класса G тиоцианатом калия ведет к усилению их связывания с ЛПС энтеробактерий Е. coli К235, S. minnesota Re 595 и S. enteritidis. Установлено, что основной вклад во взаимодействие ПРИГ с ЛПС энтеробактерий вносят электростатические связи, тогда как гидрофобные связи менее значимы.

Впервые установлено, что ПРИГ усиливают поглотительную способность гранулоцитов периферической крови по отношению к различным тест-объектам; повышают продукцию АФК нейтрофильными гранулоцитами при использовании в качестве корпускулярного стимула зимозана, опсонизированного ПРИГ; снижают связывание ЛПС энтеробактерий с гранулоцитами и моноцитами.

Впервые показано, что нативные иммуноглобулины класса G больных с хирургической абдоминальной патологией (долихосигма, злокачественные новообразования) подвержены полиреактивной трансформации в меньшей степени, чем нативные иммуноглобулины класса G здоровых людей.

Научная и практическая значимость. Результаты исследований расширяют представления о вкладе ПРИГ в поддержание антигенного гомеостаза организма. Разработан методический подход, позволяющий выявлять индивидуальные Особенности полиреактивной трансформации

иммуноглобулинов, что может быть использовано для характеристики изменений их свойств при различных патологических состояниях. Предложен метод оценки опсонизирующей активности ПРИГ с помощью проточной цитофлуориметрии. Разработан метод оценки влияния ПРИГ на взаимодействие ЛПС энтеробактерий

с ЛПС-связывающими рецепторами гранулоцитов и моноцитов периферической крови.

Основные научные положения, выносимые на защиту:

1. Кратковременная инкубация нативных иммуноглобулинов класса G в растворе тиоцианата калия, резко усиливает их связывание с ЛПС условно-патогенных энтеробактерий ЛПС Е. coli К235, S. minnesota Re 595 и S. enteritidis.

2. В связывание ПРИГ с ЛПС Е. coli К235, S. minnesota Re 595 и S. enteritidis основной вклад вносят электростатические взаимодействия.

3. ПРИГ усиливают поглотительную способность гранулоцитов периферической крови; повышают продукцию АФК нейтрофильными гранулоцитами и снижают уровень связывания ЛПС с гранулоцитами и моноцитами.

4. У больных с хирургической абдоминальной патологией нативные иммуноглобулины класса G в меньшей степени подвержены полиреактивной Трансформации.

Апробация работы. Основные положения диссертации были освещены на: III международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы клинической и военно-морской медицины. Достижения, перспективы» (г. Севастополь, 2005 г.), IV открытой научно-практической конференции 2-го медицинского факультета ГУ «Крымский государственный медицинский университет имени С.И. Георгиевского» «Человек и микроорганизмы -параллельные миры», посвященная 70-летию со дня рождения профессора Ю.С. Кривошеина (г. Симферополь, 2009 г.), VIII международной научно-практической конференции «Юбилейные Пироговские чтения», посвященные 200-летию со дня рождения Н.И. Пирогова (г. Севастополь, 2010 г.), научно-практической конференции ГУ «Крымский государственный медицинский университет имени С.И. Георгиевского» «Клиническая эндотоксинология: итоги 10-летних достижений и дальнейшие перспективы (г. Симферополь, 2010 г.), открытой научно-практической конференции «Человек и микроорганизмы -параллельные миры», посвященная 125-летию со дня основания Института микробиологии и иммунологии имени И.И. Мечникова НАМИ Украины

(г. Симферополь, 2012 г.), .VI Конгрессе патофизиологов Украины «От экспериментальных исследований к клинической патофизиологии» (г. Ялта. Мисхор, 2012 г.).

Связь работы с научными программами, планами и темами. Диссертационная работа выполнена в рамках научно-исследовательских работ «Разработка и внедрение методов иммуноанализа липополисахаридов (эндотоксинов) грамотрицательных бактерий, антител к эндотоксинам и эндотоксин-связывающих рецепторов при инфекционной и неинфекционной патологии» (№ госрегистрации 0100Ш02155, шифр 2.116, срок выполнения 2000-2004 г.г.); «Разработка и внедрение методов диагностики состояния клеточного и гуморального антиэндотоксинового иммунитета в физиологии и патологии человека» (№ госрегистрации 0105Ш02205, шифр 02/1, срок выполнения 2005-2009 Г.г.).

Публикации. По теме кандидатской диссертации опубликовано 8 научных статей, из них 5 - статьи в рецензируемых научных журналах, 1 статья в сборнике, 3 информационных письма, 6 материалов и тезисов докладов на научных конференциях.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 136 страницах печатного текста (119 страниц основного текста) и включает введение, обзор литературы, методы, результаты, обсуждение, выводы и практические рекомендации. Материал иллюстрирован 40 рисунками и 7 таблицами. Библиографический указатель содержит 181 источник.

Методы исследования: биохимические (трансформация нативных иммуноглобулинов класса в в ПРИГ инкубацией с раствором тиоцианата калия, экспозиция нативных иммуноглобулинов класса в раствором мочевины, обработка человеческого сывороточного альбумина раствором тиоцианата калия); иммунологические (изучение связывания ПРИГ с антигенами методом иммуноферментного анализа; с помощью проточной цитофлуориметрии изучение влияния ПРИГ на поглотительную способность гранулоцитов; на ЛПС-связывающий потенциал гранулоцитов и моноцитов; с помощью

люминол-зависимой хемилюминесценции оценка продукции АФК гранулоцитами); статистические (для оценки достоверности полученных результатов).

Личный вклад соискателя. Автор самостоятельно провела информационный поиск, анализ источников литературы, вместе с научными руководителями была сформулирована цель и задачи, проведен анализ и обобщение полученных данных. Оформление первичной документации, статистическая обработка результатов автором проведены самостоятельно. Лабораторные исследования проводились в отделе экспериментальной и клинической иммунологии ЦНИЛ Медицинской академии имени С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «КФУ имени В.И. Вернадского» (зав. отделом -к.б.н. Гордиенко А.И.). В статьях, опубликованных в соавторстве, доля участия всех авторов равнозначная.

РАЗДЕЛ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Антитела: структура и функции

Изучение антител является актуальной задачей современной иммунологии, особенно той ее части, в которой исследуются вопросы гуморального иммунитета. К настоящему времени установлена ведущая роль иммунных механизмов, реализуемых при непосредственном участие антител, в патогенезе целого ряда серьезных заболеваний человека. Выяснение взаимосвязи между структурой и функцией антител, несомненно, важно как для расширения знаний о системе иммунитета, так и для создания нового подхода в диагностике (Хаитов P.M., 1998; Мягкова М.А. и др., 2000; Маянский А.Н., 2003).

' Антитела представляют собой сложно организованные высокомолекулярные гликопротеины, играющие чрезвычайно важное значение в защите организма человека и животных от инфекции (Мягкова М.А. и др., 2000; Маянский А.Н., 2003). Антитела синтезируются плазматическими клетками, предшественниками которых служат B-лимфоциты. Сами B-лимфоциты не секретируют антител, но распознают антигены с помощью мембранных антител, которые выполняют функцию антигенных рецепторов. Плазматические клетки лишены рецепторов, но обретая мощные белок-синтезирующие и секреторные потенции, служат основным источником антител (Маянский А.Н., 2003; Евстропова И.В., 2004; Ширяев Н.В., 2006; Nemazee D., 2000; Goodyear C.S. et al. 2005; Yang Y. et al. 2007; Capolunghi F. et al. 2008). Основная (первичная) функция антител заключается в связывании самых разнообразных антигенов. Это предрасполагает к элиминации чужеродных объектов благодаря функциональной кооперации с клеточными (фагоциты, естественные киллеры, тучные клетки) и гуморальными (комплемент) факторами врожденного иммунитета. Такие реакции формируются на основе лиганд-рецепторных взаимодействий, отражая вторичные (эффекторные) функции антител (Маянский А.Н., 2003; Евстропова И.В., 2004; Ширяев Н.В., 2006; Carrol М.С., 2004; Holers V.M., 2005; Baumgarth N. et al., 2005;

Nguyen D.H. et al., 2005; Cotter P.F. et al., 2006; Baxendale H.E. et al., 2008; Vani J. et al., 2008; Vollmers H.P., 2009).

Молекула антител класса G представлена двумя парами идентичных легких (L) и тяжелых (Н) пептидных цепей, ковалентно соединенных дисульфидными связями (S-S-связи). Незащищенный шарнирный участок отличается высоким содержанием пролина, имеет протяженную структуру и доступен для протеолитических ферментов. Папаин расщепляет молекулу антитела на два одинаковых Fab-фрагмента, каждый из которых имеет один антигенсвязывающий центр и Fc-фрагмент, неспособный связывать антиген. В дополнение к S-S-связям, соединяющим L- и Н-цепи, существуют S-S-связи, за счет которых в пептидной цепочке образуются петли. Петли компактно свернуты и формируют глобулярные домены с характерной ß-складчатой структурой. Каждая из цепей содержит по вариабельному (V) и константному (С) домену (в L-цепях - один V- и один С-домен; в Н-цепях - один V- и три С-домена). Вся глобула, напрминающая сэндвич, имеет гидрофобное ядро (Структура и функции антител, 1983; Волькенштейн М.В., 1991; Ширяев Н.В., 2006; Wilson I.A. et .al, 1994; Casali P. et .al, 1996). По данным рентгеноструктурного анализа, антигенсвязывающий центр молекулы антител представляет собой заполненную растворителем щель (полость), создаваемую поверхностями контакта VL- и Уц-доменов, и несущую антигенсвязывающие участки; при этом глубина щели определяется пространственной конфигурацией комплементарные антигена. Предполагается, что вся антигенсвязывающая область образует своего рода пространственную мозаику из полиморфных сайтов связывания, которые взаимодействуют с различными антигенными детерминантами в пределах одного антигена (Структура и функции антител, 1983; Wilson I.A. et .al, 1994). Изменение суммарного объема щели приводит к увеличению (или уменьшению) числа таких антигенсвязывающих участков. Последнее обстоятельство позволяет объяснить тот факт, что, несмотря на высокую специфичность молекул антител, к его активному центру могут присоединяться несколько отличающихся по структуре антигенов. Кроме того, такая "неспецифичность" антител, обусловленная

наличием многих подцентров связывания и способностью щели к вариации, резко снижает количество антител, необходимых организму для иммунного ответа на огромное количество антигенов и, следовательно, уменьшает объем генетического материала, кодирующего VL- и VH-домены антигенраспознающих рецепторов на поверхности антител (Структура и функции антител, 1983; Волькенштейн М.В., 1991; Ширяев Н.В., 2006; Wilson I.A. et .al, 1994; Casali Р. et .al, 1996).

Рис. 1.1.1. Структура молекулы иммуноглобулина класса С

(Ширяев Н.В., 2006).

Уь и Ун - вариабельные домены легких (Ь) и тяжелых (Н) цепей; С[, и Си - константные домены легких (Ь) и тяжелых (Н).

Таким образом, антигенсвязывающая область антител обладает исключительным разнообразием структурных вариантов, что создает основу для формирования гетерогенной популяции антител как биологических регуляторов. Различия в специфичности антител обусловлены очень небольшими изменениями их первичной структуры, благодаря которым разные участки активного центра, связываясь, становятся доступными для антигенов. Способность БаЬ-фрагмента взаимодействовать с несколькими антигенными детерминантами обеспечивает сохранение комплементарности к целому ряду не родственных антигенов

Аг-связывающий центр

(Мягкова М.А. и др., 2000; Casali P. et .al, 1996; Baumgarth N. et al., 2005; Vani J. et al., 2008; Vollmers H.P., 2009). Согласно существующим представлениям, антитела рассматриваются как полифункциональные адаптерные молекулы, которые, с одной стороны, реагируют с антигеном с помощью специфических антигенсвязывающих центров, а с другой, реализуют эффекторные функции. К последним относятся активация системы комплемента и взаимодействие с рядом Fcy-рецепторов, приводящее к опсонизации чужеродных клеточных элементов: Fab- и Fc-фрагменты антител не являются изолированными. Связывание антигена в активном центре, несомненно, сказывается на уровне эффекторных функций антител (Ширяев Н.В., 2006; Tischenko V.M. et al., 1998).

1.1.1. Полиспецифичность как одно из свойств естественных антител

Характерной особенностью естественных антител (еАт) является их полиспецифичность (Berneman A. et al., 1996; Bouvet J.P. et al., 1998, 2000, 2001; Notkins A.L., 2004; Fritzler M.J. et al., 2006; Chou M.Y. et al.,. 2009; Gronski P., et al., 2009). Эта особенность была обнаружена при исследовании антител сыворотки крови, реагирующих с набором аутоантигенов: актином, тубулином, миоглобином, альбумином. Несмотря на то, что антитела были выделены с помощью аффинной хроматографии, практически все они реагировали с несколькими антигенами данной панели. В то же время индуцированные иммунизацией антитела к актину были узкоспецифичными и не взаимодействовали, например, с тубулином в отличие от естественных антиактиновых антител. Это свидетельствует о том, что перекрестная реактивность еАт обусловлена именно их полиспецифичностыо, а не наличием общих эпитопов у перекрестно реагирующих антигенов (в данном случае актина и тубулина). Дальнейшие исследования, проведенные с моноклональными (мАт) и еАт, показали, что наблюдаемая полиспецифичность обусловлена не гетерогенностью популяции еАт, а присуща составляющим эту популяцию

индивидуальным молекулам (Bouvet J.P. et al., 1998, Devalapalli A.P. et al., 2006;

i " •

Chou M.Y. et al., 2009).

Кроме того, установлено, что полиспецифичность у-глобулинов более выражена для еАт и аутоантител (Ritter К. et al., 1998; Tian Q. et al., 2006; Zhang J. et al., 2009; Dennison S.M. et al., 2011). Показано, что антитела к ДНК у мышей аутоиммунных линий и у человека при системной красной волчанке, а также естественные анти-ДНК-антитела обладают широкой полиспецифичностью, в то время как индивидуальные анти-ДНК-антитела (для иммунизации использовали синтетические полинуклеотиды и/или ДНК после облучения ультрафиолетом) оказываются узкоспецифичными (Avrameas A. et al., 1991; Lee W. et al., 2002; Bruley-Rosset M. et al., 2003; Wellmann U. et al., 2005; Mietzner B. et al., 2008). Авторы считают, что полиспецифичность аутоантител, в частности анти-ДНК-антител, объясняется их структурными особенностями; высказано предположение, что активные центры этих антител содержат несколько гипервариабельных участков к различным антигенным детерминантам. Отмечено также и то, что при синтезе еАт и аутоантител используются немутированные эмбриональные гены, в то время как при иммунном ответе активируются мутированные гены (Avrameas A. et al., 1991; Houdayer M., et al., 1993; Chen Z.J. et al., 1995; Craig VJ. et al., 2010). Возможно, существует причинная связь между полиспецифичностью еАт и аутоантител и тем, что они являются продуктами эмбриональных генов (Ширяев Н.В., 2006; Bouvet J.P. et al., 2001). Считается, что полиспецифические еАт представляют собой эволюционно наиболее древний компонент системы гуморального иммунитета, которые, в отличие от специфических антиген-индуцированных антител, способны к непосредственному распознаванию и связыванию широкого спектра самых разных биологических молекул. Опосредованное полиспецифическими еАт первичное узнавание, с одной стороны, является эффекторной функцией создания барьера на пути чужеродных патогенных микроорганизмов, прежде всего бактерий и вирусов: антитело-зависимый лизис, осуществляемый киллерами или системой комплемента, вирус-нейтрализация,

опсонизация и активация компонентов комплемента, вызывающих положительный хемотаксис макрофагов. В то же время первичное узнавание можно квалифицировать и как индукторную функцию, поскольку осуществление перечисленных выше эффекторных реакций необходимо, главным образом, для стимуляции макрофагальной активности по отношению к инфекционным агентам и инициации "вторичного" узнавания, т.е. собственно иммунного ответа. Следовательно, обеспечивая первую линию защиты организма против вторжения возбудителей инфекционного процесса, полиспецифические еАт могут служить важным дополнительным фактором иммунитета (Мягкова М.А. и др., 2000; Witsch EJ. et al., 2006; Muller-Loennies S. et al., 2007; Zhang M. et al., 2007; Zhou Z.H. et al., 2007, 2013; Dennison S.M. et al., 2011; Kolberg J.et al., 2011; Mouquet H. et al., 2012). Кроме того, в ряде исследований было высказано предположение, что одной из функций полиспецифических еАт является удаление стареющих клеток и продуктов их распада, а также транспортирование различных метаболитов (Lee W. et al, 2002). Существует возможность образования полиспецифических еАт к эндогенным низкомолекулярным соединениям по антиидиотипическому механизму (Бобровник С.А. и др., 2003). Однако потенциальная роль полиспецифических еАт в этих процессах пока остается неясной.

1.2. Влияние различных физико-химических факторов на структуру и

функции антител

Конформация антигенсвязывающего центра антител и его способность взаимодействовать с соответствующими антигенными детерминантами определяется первичной аминокислотной последовательностью, которая, в свою очередь, обеспечивает ригидность белковой молекулы (Структура и функции антител, 1983; Волькенштейн М.В., 1991). Известно, что высокая специфичность взаимодействия антител с широким спектром самых разных соединений белковой и небелковой природы связана с тем, что наряду со стерической

комплементарностью Fab-фрагментов антител и антигенов и возможностью образования максимального числа связей имеют место конформационные изменения, ведущие к появлению индуцированного соответствия между реагирующими молекулами. Функциональные конформационные переходы строго дискретны и высокооперативны. Из-за компактной пространственной структуры антител в нативном состоянии и насыщения большого числа нековалентных связей "число вариаций возможных конформаций невелико. В связи с этим реализуются только те конформационные состояния, которые определяются функцией антител и возможностью ее регуляции (Демченко А.П., 1981; Волькенштейн М.В., 1991). Наряду с этим в целой серии экспериментальных работ, проведенных Бобровником С.А. (Бобровник С.А. и др., 1999, 2001, 2002, а также в исследованиях Bouveta J.P., Dighiero G. (Bouvet J.P. et al., 1998, 2001) было показано, что воздействие на нативные иммуноглобулины класса G хаотропными ионами, экстремально низкими либо высокими значениями рН; обработка липазами, органическими растворителями; действие АФК и некоторыми другими дестабилизирующими факторами ведет к полиреактивной трансформации антител, что проявляется в многократном усилении их способности к взаимодействию с самыми разными антигенами. Предполагается, что такая трансформация нативных антител класса G в ПРИГ может быть связана с определенными нарушениями упорядоченной структуры белковой молекулы вследствие ослабления гидрофобных связей между доменами L- и Н-цепей, что в свою очередь ведет к увеличению глубины и ширины антигенсвязывающей области и обнажению новых потенциальных участков взаимодействия с различными антигенными эпитопами (Структура и функции антител, 1983; Ширяев Н.В., 2006). При этом Ефетов К.А. с соавторами установил, что Fe-область белковой молекулы остается неизменной, в связи с чем ПРИГ сохраняют свою функциональную активность и способны оказывать существенное влияние на различные физиологические и патофизиологические

I

процессы (Бобровник С.А., 2003). Авторы цитируемых работ также показали, что ПРИГ усиливают фагоцитоз микроорганизмов, потенцируют развитие

специфического иммунного ответа на антигены с низкой иммуногенностью, являются одним из первичных защитных барьеров по отношению к инфекционным агентам, участвуют в катаболизме аутоантигенов и др. (Бобровник С.А. и др., 1993, 2002, 2003; Bouvet J.P. et al., 1998, 2001).

1.2.1. Влияние тиоцианата кальция на антигенсвязывающие функции антител

Модификация раствором тиоцианата калия структуры нативных иммуноглобулинов класса G существенно влияет на характер их антигенсвязывающих свойств, вызывая снижение лигандной специфичности антител и проявление авидности по отношению к широкому спектру антигенов (Бобровник С.А., 2002, 2004; Ильина JI.B. и др., 2003; Bouvet J.P. et al., 1998, 2001). Предполагается, что подобные изменения активности антител обусловлены высокой подвижностью полипептидных цепей Fab-фрагментов белковой молекулы, функционально необходимой для подстройки под структуру различных антигенов (Структура и функции антител, 1983; Бобровник С.А., 2002; Ширяев Н.В., 2006). Кроме того, экспериментальные данные, полученные Бобровником С.А. (Бобровник С.А., 2001, 2002), свидетельствуют о том, что трансформация нативных иммуноглобулинов класса G в ПРИГ, сопровождается резким усилением роли гидрофобных взаимодействий в процессах межбелкового ком'плексообразавания и существенно зависит от температуры (ПРИГ при низкой температуре значительно медленнее реагируют с иммобилизованными на поверхности твердой фазы антигенами нежели нативные иммуноглобулины класса G (Бобровник С.А., 2000, 2002; Craig V.J. et al., 2010). Поскольку одним из высоко показательных тестов, свидетельствующих об конформационных перестройках Fab-участков антител, является тест на изменение способности последних связывать некоторые флуоресцентные зонды, имеющие высокое сродство к гидрофобным областям молекул, Бобровник С.А. с соавторами изучили взаимосвязь между усилением реактивности ПРИГ в препарате нативных

иммуноглобулинов класса G и их взаимодействием с. 8-амино-1-нафтол-5-сульфокислотой (АНС). Особенно информативным оказался тот факт, что как оптимальная реакционная способность ПРИГ, так и максимум связывания АНС наблюдается после инкубации нативных иммуноглобулинов класса G с 3,5 М раствором тиоцианата калия, а дальнейшее увеличение концентрации тиоцианата калия приводит к снижению обоих показателей. Следовательно, степень индуцированных тиоцианатом калия конформационных изменений Fab-областей антител, приводящих к связыванию АНС и указывающих на усиление гидрофобных свойств поверхности данных PIT, прямо коррелирует с активностью ПРИГ (Бобровник С.А., 2001, 2002). Сделанные выводы получили убедительные подтверждения и в последующих экспериментах.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Химич, Наталья Владимировна, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине / Под ред. Грызунова Ю.А., Добрецова Д.Е.- М.: Мир, 1998 - С. 20-32.

2. Анисимова Н.Ю., Громова Е.Г., Кузнецова Л.С. и др. Прогностическое значение сывороточного уровня липополисахарида и липополисахарид-связывающего белка у онкологических больных с сепсисом // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии - 2011- №2 - С. 82-84.

3. Атамась С.П., Тэтин С.Ю., Троицкий Г.В. Влияние мочевины низкой концентрации на конформацию иммуноглобулинов по данным дифференциальной спектрофотометрии // Биофизика - 1990 - 35, №1 -С.36-38.

4. Беляев H.H., Хегай Л.А., Закирьянов Г.К. и др. Стафилококковый энтеротоксин А связывается с IgG в области Fc-фрагмента // Иммунология- 1991- №2 — С. 36-38.

5. Бобровник С.А. Механизм усиления активности полиреактивных иммуноглобулинов in vivo // Укр. 6ioxÍM. журн - 1999 - 71, №3.- С. 129-135.

6. Бобровник С.А. Липид-белковые взаимодействия и конформация белковых макромолекул // Укр. 6íoxím. журн - 2000.- 72, №2 - С. 101-103.

7. Бобровник С.А. Полиреактивные иммуноглобулины распознают гидрофобные участки белков // Укр. 6íoxím. журн - 2001- 73, №2 - С. 116-122.

8. Бобровник С.А. Полиреактивные иммуноглобулины и натуральные антитела являются функционально различными субстанциями // Укр. 6íoxím. журн.-2002.- 74, №5._ с. 49-54.

9. Бобровник С.А. Специфические и неспецифические взаимодействия антител и иммуноглобулинов с антигенами и способы анализа этих взаимодействий // Укр. 6íoxím. журн.- 2004.- 76, №5.- С. 132-139.

Ю.Бобровник С.А., Ефетов К.А., Петрова Ю.И. и др. Комплементсвязывающие и иммуномодулирующие свойства полиреактивных иммуноглобулинов // Укр. 6íoxím. журнал - 2003 - 75, №3 - С. 104-108.

11.Бобровник С.А., Маргитич В.М., Климашевский В.М. и др. Взаимосвязь между полиреактивными свойствами иммуноглобулинов и содержанием в них липидов // Укр. 6ioxiM. журн - 2001.- 73, №1 - С. 65-71.

12.Вестфаль О., Янн К. Бактериальные липополисахариды / Методы химии углеводов-М.: Мир, 1967 -С. 325-332.

П.Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Биофизика - 1991, т. 29, №1- С. 10-17.

14.Волькенштейн М.В. О структуре и динамике белков // Молекулярная биология.- 1991.- 25, №4.- С. 883-925.

15.Гайдаш Е.И., Гайдаш И.С. Гайдаш Д.И. и др. Влияние бактериальных липополисахаридов на фагоцитоз, перекисное окисление липидов и систему антиоксидантной защиты нейтрофилов и моноцитов // Укра'шський медичний альманах - 2013.- Т.16,№2.- С. 71-76.

16.Герасимов И.Г. Неоднородность нейтрофилов в фагоцитозе и респираторном взрыве // Клиническая лабораторная диагностика - 2004 - №6 - С. 34-36.

17.Гордиенко А.И. Новый подход к повышению специфичности определения антител к липополисахаридам грамотрицательных бактерий методом твердофазного иммуноферментного анализа // Укр. 6ioxiM. журн.- 2004.- 76, №6.- С. 130-135.

18.Гордиенко А.И. Улучшенный метод получения флуоресцентного зонда для определения липополисахарид-связывающих рецепторов методом проточной лазерной цитофлуориметрии // Таврический медико-биологический вестник.— 2007.- 10, №4.-С. 156-160.

19.Гордиенко А.И. Влияние плазмы крови и сывороточного альбумина на специфичность взаимодействия конъюгата липополисахарида с флуоресцеинизотиоцианатом с лейкоцитами периферической крови человека // 1мунолопя та алерголопя- 2008 - №2 - С. 107-113.

20.Гордиенко А.И, Бакова A.A., Химич Н.В., Белоглазов В.А. Уровни естественных антител к липополисахаридам энтеробактерий у постоянных доноров Республики Крым // Гмунолопя та алерголопя - 2003.— №4 - С. 31—36.

♦

21.Горд1енко A.I., Бшоглазов В.О. Cnoci6 визначення антитш до лшополюахарщцв грамнегативних бактер1й. Патент 70193А Украша, MKI7 А61К31/01, Заявл.29.12.2003. Опубл. 15.09.2004.

22.Горд1енко A.I, Бшоглазов В.О., XîmIh Н.В. Метод визначення поглинально'1 активное™ нейтрофинв i моноцнпв периферично!'кровь 1нформацшний лист-KnÏB, 2009.- №112.- С. 1-4.

23.Горд1енко A.I., Бшоглазов В.О., XÎMÎ4 Н.В. Метод визначення ендотоксин-зв'язуючих pei^enTopiB на моноцитах i гранулоцитах периферично'1 кровь 1нформащйний лист.- Кшв, 2010 - №122.- С. 1-3.

24.Демченко А.П. Ультрафиолетовая спектрофотометрия и структура белков-Киев.: Наук, думка, 1981 - 208 с.

25.Дибиров М.Д., Костюченко М.В., Елинсон В.М. и др. Энтеросорбционная и экстракорпоральная коррекция гомеостатических нарушений в лечении острой абдоминальной хирургической патологии, осложненной эндотоксикозом // Фундаментальные исследования - 2012 - № 1.- С. 39-42.

26.Друх В.М., Фархутдинов P.P., Загидуллин Ш.З. Метод изучения хемилюминесценции лейкоцитов цельной крови // Клиническая лабораторная диагностика - 2004, №12 - С. 41^3.

27.Дуглас С.Д., Куи П.Г. Исследование фагоцитоза в клинической практике,- М.: Медицина, 1983.- 112 с.

28.Дьяконов В.П. Справочник по алгоритмам и программам на языке бейсик для персональных ЭВМ.-М.: Наука, 1989-С. 144-147.

29.Евстропова И.В. В-1-лимфоциты: физиология, функции, популяционная гетерогенность // Иммунология - 2004 - № 1.- С. 46-56.

30.Ефетов К.А. Исследование иммуноглобулинов в норме и при патологии с помощью моноклональных антител и спектральных методов. Диссертация доктора биологических наук, Симферополь.- 1993- 267 с.

31.Ильина JT.B., Веревка C.B. Лигандиндуцированное структуирование полиреактивных иммуноглобулинов // Укр. 6îoxîm. журнал 2003.- 75, №6 - С. 56-61.

32.Иммуноферментный анализ / Под ред. Т. Нго и Г. Ленхоффа.- М.: Мир, 1988446 с.

33.Кабанов Д.С., Прохоренко И.Р. Структурный анализ липополисахарида грамотрицательных бактерий // Биохимия - 2010 - 75, N4- Р. 384-404.

34.Книрель Ю.А., Кочетков Н.К. Строение липополисахаридов грамотрицательных бактерий. I Общая характеристика липополисахаридов и структура липида А // Биохимия - 1993- 58, №2 - С. 166-181.

35.Книрель Ю.А., Кочетков Н.К. Строение липополисахаридов грамотрицательных бактерий. II. Структура кора // Биохимия- 1993- 58, №2.-С. 182-201.

36.Кожевников А.Д., Лешенкова Е.В., Сазонец Г.И. Способ обнаружения и метод количественного обнаружения модифицированного и/или денатурированного сывороточного альбумина человека // Клиническая лабораторная диагностика - 2004 - №2 - С. 39^2.

37.Козлов И.Г., Горлина Н.К., Чередеев А.Н. Рецепторы контактного взаимодействия//Иммунология - 1995-№4-С. 14-24.

38.Корогодская Е.Г., Умбетова К.Т., Белая О.Ф. и др. Разнообразие ЛПС/О-антигенов возбудителей кишечной инфекции у больных с ВИЧ-инфекцией на стадии вторичных заболеваний // Эпидемиология и инфекционные болезни - 2015 - Т.20, №1- С. 4-7.

39.Кочетков Г.А. Практическое руководство по энзимологии- М.: Высшая школа, 1980.-С. 16.

40.Кулинский В.И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита // Соровский образовательный журнал.-1999, №1.-С. 1-7.

41.Лакин Г.Ф. Биометрия. - Москва: Высшая школа, 1990. - 352 с.

42.Лифшиц В.М., Сидельникова В.И. Биохимические анализы в клинике.-Издательство: Триада - X, 2009 - С. 38-40.

43.Лиходед В .Г., Аниховская И.А., Хабриев Р.У. и др. Fc-зависимое связывание эндотоксинов гра.мотрицательных бактерий полиморфно-ядерными лейкоцитами крови человека // Микробиология - 1996 - №2 - С. 76-79.

44.Лиходед В.Г., Ющук Н.Д., Яковлев М.Ю. Роль эндотоксина грамотрицательных бактерий в инфекционной и неинфекционной патологии // Архив патологии - 1996-№2 -С. 8-13.

45.Мавзютов А.Р., Мавзютова Г.А., Бондаренко K.P. и др. Характер изменений уровня липополисахарид-связывающего белка при различных инфекционных процессах и дисбиозах // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии - 2011.- №2 - С. 66-72.

46.Мазуров Д.В., Дамбаева C.B., Пинегин Б.В. Оценка внутриклеточного киллинга стафилококка фагоцитами периферической крови с помощью проточной цитометрии // Иммунология.- 2000 - №2 - С. 57-59.

47.Мазуров Д.В., Хамибуллина К.Ф., Пинегин Б.В. Оценка поглощения бактерий гранулоцитами и моноцитами периферической крови методом проточной цитометрии // Иммунология - 2000, №1.- С. 57-61.

48.Малинка М.К., Петриев В.М., Подгородииченко В.К. Увеличение способности иммуноглобулинов, инкубированных при кислых значения pH, связывать отрицательно заряженные антигены // Иммунология - 2007, №1- С. 16-19.

49.Маянский А.Н. Лекции по иммунологии - Нижний Новгород: НГМА, 2003270 с.

50.Методы общей бактериологии / Под ред. Ф. Герхардта и др.-М.: Мир, 1984Т. 2.-472 с.

51.Методы исследований в иммунологии / Под ред. И. Лефковитса, Б. Перниса-М.: Мир, 1981.-С. 428—467.

52.Мягкова М.А., Трубачева Ж.Н., Панченко О.Н. Естественные антитела к физиологически активным соединениям // Иммунология- 2000-№6-С. 6-10.

53.Никитенко В.И., Захаров В.В., Бородин A.B. и др. Роль транслокации бактерий в патогенезе хирургической инфекции // Хирургия.- 2001 - №4.- С. 63-66.

54.0лиферук Н.С., Пинегин Б.В. Определение фагоцитарного, числа лейкоцитов периферической крови по отношению к Staphilococcus aureus с помощью проточной цитометрии // Иммунология.- 2007 - №4 - С. 236-240.

55.0стерман JI.A. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. - М.: Наука.-1985.-536 с.

56.Пермяков Н.К., Аниховская И.А., Лиходед В.Г. и др. Иммуноморфологическая оценка резервов связывания эндотоксина полиморфно-ядерными лейкоцитами // Архив патологии.- 1995 - №2 - С. 4-7.

57.Потапов А.Л., Бабанин A.A., Гордиенко А.И. и др. Гуморальный антиэндотоксиновый иммунитет и его изменения после абдоминальных операций // Бшь, знеболювання i штенсивна терашя.- 2006.-№1(д) - С. 60-62.

58.Рочев В.П., Черешнев В.А., Фельдблюм И.В. Регуляторное влияние антител на закономерности формирования специфической фагоцитарной реакции на микроорганизмы // Иммунология - 1991- №4- С. 19-21.

59.Сорокина Д.А. Гетерогенность сывороточного альбумина // Вопросы мед. химии.- 1991.-37, №2.-С. 14-17.

60.Структура и функции антител / Под ред. Л. Глинна, М. Стьюарда- М.: Мир.- 1983.- 200 с.

61.Тимербулатов М.В., Хафизов Т.Н., Мавзютов А.Р. Влияние хирургического доступа на уровень эндотоксинемии // Хирургия. Журнал имени Н.И. Пирогова.- 2013.- №1.- С. 39-42.

62.Троицкий Г.В., Тэтин С.Ю., Ефетов К.А. Влияние дегидратации на междоменные взаимодействия в иммуноглобулине G и его фрагментах // Биофизика.- 1984,- 29, №4.- С. 578-582.

63.Тэтин С.Ю., Атамась С.П., Троицкий Г.В. Особенности начальных этапов денатурации иммуноглобулинов при лимфопролиферативных заболеваниях // Докл. АН УССР. Сер. Б. Геол., хим. и биол. наука.- 1987.- №10.- С. 79-82.

64.Устьянцева И.М., Хохлова О.И., Петухова О.В. и др. Прогностическая значимость маркеров воспаления, липополосахарид-связывающего протеина и

лактата в развитии сепсиса у пациентов с политравмой // Политравма.- 2014.— №3- С. 15-23.

65.Хаитов P.M., Пииегин Б.В., Чередеев А.Н. Оценка иммунной системы человека: современное состояние вопроса, сложности и достижения // Иммунология.- 1998-№6-С. 8-10.

бб.Чекнев С.Б. Сопоставление эффектов меди и цинка в условиях их взаимодействия с человеческим сывороточным у-глобулином // Иммунология.- 2006.- №4.- С. 212-215.

67.Чекнев С.Б., Бабаева Е.Е. Эффекторные свойства ассоциированных с у-глобулином фракций, содержащих углеводные компоненты // Медицинская иммунология - 2005- 6, №3-5- С. 186-189.

68.Ширяев Н.В. Эволюционное прошлое IgG млекопитающих в свете современных знаний о структуре и функционировании данной белковой молекулы // Иммунология - 2006.- №1- С. 58-60.

69.Яковлев М.Ю. "Эндотоксиновая агрессия" как предболезнь или универсальный фактор патогенеза заболеваний человека и животных // Успехи совр. биол.- 2003- 123, №1.-С. 31-40.

70.A1-Hendy A., Toivanen P., Skurnik M. Rapid method for isolation and staining of bacterial lipopolysaccharide // Microbiol. Immunol - 1991.- 35, N 2 - P. 331-333.

71.Anwar M.A., Choi S. Gram-negative marine bacteria: structural features of lipopolysaccharides and their relevance for economically important diseases // Mar Drugs.-2014.- 12, N5.-P. 2485-2514.

72.Avrameas A.,Ternynck T., Faridabano N., Buttin. Polyreactive anti-DNA monoclonal antibodies and a derived peptide as vectors for the intracytoplasmic and intranuclear translocation of macromolecules // Cell Biology- 1998- 95-P. 5601-5606.

73.Barclay G.R. Endotoxin-core antibodies: time for a reappraisal? // Intensive Care Med.- 1999.- 25, №5.- P. 427-429.

74.Baumgarth N., Tung J.W., Herzenberg L.A. Inherent specificities in natural antibodies: a key to immune defense against pathogen invasion // Semin. Immunopathol - 2005 - 26, N4 - P. 347-362.

75.Baxendale H.E., Johnson M., Stephens R.C. et al. Natural human antibodies to pneumococcus have distinctive molecular characteristics and protect against pneumococcal disease//Clin. Exp. Immunol-2008 - 151,N1-P. 51-60.

76.Bennion B.J., Daggett V. The molecular basis for the chemical denaturation of proteins by urea // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2003.- 100, N9 - P. 5142-5147.

77.Berneman A., Guilbert B., Eschrich S. et al. IgG auto-and polyreactivities of normal human sera//Mol. Immunol.- 1993-30-P. 1499-1510.

78.Bishop R.E. Fundamentals of endotoxin structure and function // Contrib. Microbiol.- 2005.-Vol. 12.-P. 1-27.

79.Biswas S.K., Lopez-Collazo E. Endotoxin tolerance: new mechanisms, molecules qnd clinical significance // Trends Immunol - 2009 - 30, N10 - P. 475-487.

80.Bohannon J.K., Hernandez A., Enkhbaatar P. et. al. The immunobiology of toll-like receptor 4 agonists: from endotoxin tolerance to immunoadjuvants // Shock - 201340, N6,-P. 451-462.

81.Bouvet J.P., Dighiero G. From polyreactive autoantibodiesto a la carte monoreactive antibodies to infectious agents: is it a small word after all? // Infect. Immun - 199866, N1.-P. 1-4.

82.Bouvet J.P., Dighiero G. Cross-reactivity and polyreactivity: the two sides of a coin // Immunol. Today.- 2000.- 21, N4.- P. 177-183.

83.I3ouvet J.P., Dighiero G. Polyreactivity is not an artefact // J. Immunol. Methods-2001.-254, N1-2.-P. 199-201.

84.Bouvet J.P, Stahl D., Rose S. et al. Induction of natural autoantibody activity following treatment of human immunoglobulin with dissociating agents // J. Autoimmun - 2001.- 16, N2.-P. 163-172.

85.Bradford M.M. An A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Analytical biochemistry.- 1976.- 72.- P. 248-254.

86.Bruley-Rosset M., Mouthon L., Chanseaud Y. et al. Polyreactive autoantibodies purified from human intravenous immunoglobulins prevent the development of experimental autoimmune diseases // Lab. Invest - 2003 - 83, N7 - P. 1013-1023.

87.Capolunghi F., Cascioli S., Giorda E. et al. CpG drives human transitional B cells to terminal differentiation and production of natural antibodies // J. Immunol - 2008.180, N2.-P. 800-808.

88.Carrol M.C. The complement system in regulation of adaptive immunity // Nat. Immunol.- 2004.- 5.- P. 981-986.

89.Casali P., Schettino E.W. Structure and function of natural antibodies // Curr. Topics Immunol. Microbiol.- 1996.-210.-P. 167-179.

90.Chen Z.J., Wheeler C.J., Notkins A.L. Antigen-binding B cells and polyreactive antibodies // J. Immunol.- 1995.- 25, N2.- P. 579-586.

91.Chou M.Y., Fogelstrand L., Hartvigsen K. et al. Oxidation-specific epitopes are dominant targets of innate natural antibodies in mice and humans // J. Clin. Invest— 2009.- 119, N5.-P. 1335-1349.

92.Cotter P.F., Van Eerden E. Natural anti-Gal and Salmonella-specific antibodies in bile and plasma of hens differing in diet efficiency // Poult Sci.- 2006- 85, N3.-P. 435-440.

93.Craig V.J., Arnold I., Gerke C., Huynh M.Q. et al. Gastric MALT lymphoma B cells express polyreactive, somatically mutated immunoglobulins // Blood - 2010.-115, N3.-P. 581-591.

94.Cross A.S. Anti-endotoxin vaccines: back to the future // Virulence - 2014.- 5, N1.-P. 219-225.

95.Current Protocols in Cytometry.- New York: John Wiley & Sons Inc., 1997.

96.Davies B., Cohen J. Endotoxin removal devices for the treatment of sepsis and septic shock // Lancet Infect Dis.- 2011.- 11, N1.- P. 65-71.

97.De Castro C., Parrilli M., Hoist O. et al. Microbe-associated molecular patterns in innate immunity: Extraction and chemical analysis of gram-negative bacterial lipopolysaccharides // Methods Enzymol - 2010 - 480- P. 88-115.

98.Dennison S.M., Anasti K., Scearce R.M. et al. Nonneutralizing HIV-1 gp41 «

envelope cluster II human monoclonal antibodies show polyreactivity for binding to phospholipids and protein autoantigens // J. Virol- 2011- Feb. 85, N3.-P. 1340-1347.

99.Devalapalli A.P., Lesher A., Shieh K. et al. Increased levels of IgE and autoreactive, polyreactive IgG in wild rodents: implications for the hygiene hypothesis // J. Autoimmun.- 2006.T- 64, N2.- P. 125-136.

100. Dimitrov J.D., Kazatchkine M.D., Kaveri S.V. et al. "Rational vaccine design" for HIV should take into account the adaptive potential of polyreactive antibodies // PLoS Pathog.- 2011,- 7, N6.- P. 1112-1121.

101. Esteban E., Ferrer R., Alsina L., Artigas A. Immunomodulation in sepsis: the role of endotoxin removal by polymyxin B-immobilized cartridge // Mediators Inflamm-2013.-22, N3.-P. 567-571.

102. Fritzler M.J., Behmanesh F., Fritzler M.L. Analysis of human sera that are polyreactive in an addressable laser bead immunoassay // Clin. Immunol.- 2006.120, N3.-P. 349-356..

103. Goodyear C.S., Silverman G.J. B cell superantigens: a microbe's answer to innate-like B cells and natural antibodies // Semin. Immunopathol - 2005- 26, N4.-P. 463-484.

104. Gronski P., Schridde C., Frsterling H.D. Polyreactive antibodies in multidonor-derived immunoglobulin G: Theory and conclusions drawn from experiments // Immunobiology- 2010.- May 215, N5 - P. 356-369.

105. Gunti S., Notkins A.L. Polyreactive Antibodies: Function and Quantification // J. Infect Dis.-2015.-212, Suppl l.-P. 2-6.

106. Heine H., Rietschel E.T., Ulmer A J. The biology of endotoxin // Mol. Biotechnol - 2001- 19, №3.-P. 279-296.

107. Hernandez T., de Acosta C.M., Lopez-Requena A. et al. Non-classical binding of a polyreactive a-type anti-idiotypic antibody to B cells // Mol. Immunol - 2010 - 48, ttl-3.-P. 98-108.

108. Holers VM.. Complement receptors and the shaping of the natural antibody repertoire // Semin. ImmunopathoL- 2005 - 26, N4 - P. 405-423.

109. Hoist O. The structures of core regions from enterobacterial lipopolysaccharides -£*n update // FEMS Microbiol Lett.- 2007.- 271, N1.- P. 3-11.

110. Houdayer M., Bouvet J.P., Wolff A. et al. Simultaneous presence, in one serum, of four monoclonal antibodies that might correspond to different steps in a clonal evolution from polyreactive to monoreactive antibodies // J. Immunol-1993- 150, N1.-P. 311-319.

111. Jacobsen C., Funding N.P., Moller H., Steensgaard J. Properties and immunochemical reactivities of native and modified human serum albumin // J. Biochem.- 2002.- 30.- P. 392-402.

112. Jurgens G., Muller M., Garidel P. et al. Investigation into the interaction of recombinant human serum albumin with Re-lipopolysaccharide and lipid A // J. Endotoxin Res - 2002 - 8, N2.- P. 115-126.

113. Kohno Y., Fukui N., Kageyama Y. et al. Case of septic shock caused by extended spectrum lactamase producing Escherichia coli after transrectal prostate biopsy, successfully treated by endotoxin adsorption therapy // Hinyokika Kiyo - 2013.- 59, N9.-P. 593-596.

114. Kolberg J., Ihle G., Thiede B. et al. Polyreactivity of monoclonal antibodies made against human erythrocyte membranes with various pathogenic bacteria // Hybridoma (Larchmt).- 2011.- Feb. 30, N1.- P. 1-9.

115. Kulhankova K., King J., Salgado-Pabon W. Staphylococcal toxic shock syndrome: superantigen-mediated enhancement of endotoxin shock and adaptive immune suppression // Immunol Res - 2014 - 59, N1-3 - P. 182-187.

116. Labrousse H., Adib-Conquy M., Avrameas S. Effect of temperature on the reactivities of polyreactive and monospecific monoclonal IgG antibodies // Res. Immunol.- 2007.- 148, N4.- C. 267-276.

117. Lacy M.J., Voss E.W. Direct adsorbtion of ssDNA to polystyrene for characterization of the DNA/anti-DNA interaction, and immunoassay for anti-DNA

auto-antibody in New Zealand white mice // J. Immunol. Methi - 1989 - 115, №1.— P. 87-89.

118. Lee W., Gaca J.G, Edwards L.A. et al. Binding of polyreactive antibodies to self versus foreign antigens // Immunobiology.- 2002 - 205, N1- P. 95-107.

119. Leon L.R., Helwig B.G. Role of endotoxin and cytokines in the systemic inflammatory response to heat injury // Front Biosci (Schol Ed).- 2010 - N2-P. 916-938.

120. Liaunardy-Jopeace A., Gay N.J. Molecular and cellular regulation of toll-like receptor-4 activity induced by lipopolysaccharide ligands // Front Immunol.- 20146, N5.-P. 473-479.

121. Lodowska J., Wolny D., Weglarz L. The sugar 3-deoxy-d-manno-oct-2-ulosonic acid (Kdo) as a characteristic component of bacterial endotoxin - a review of its biosynthesis, function, and placement in the lipopolysaccharide core // Can J. Microbiol.- 2013.- 59, N10.- P. 645-655.

122. Lopez-Abarrategui C., Del Monte-Martinez A., Reyes-Acosta O. et. al. LPS inmobilization on porous and non-porous supports as an approach for the isolation of anti-LPS host-defense peptides // Front Microbiol.- 2013.-N4.- P. 389-394.

123. Lopez-Collazo E., del Fresno C. Pathophysiology of endotoxin tolerance: mechanisms and clinical consequences // Crit Care.- 2013 - 17, N6 - P. 242-248.

124. Magnusdottir A., Vidarsson H., Orvar B.L. Barley grains for the production of endotoxin-free growth factors // Trends Biotechnol.- 2013.-31, N10 - P. 572-580.

125. Marshall J.C. Endotoxin in the pathogenesis of sepsis // Contrib Nephrol - 2010.167, N1- P. 1-13.

126. McMahon M.J., O'Kennedy R. Polyreactivity as an acquired artefact, rather than a physiologic property, of antibodies: evidence that monoreactive antibodies may gain the ability to bind to multiple antigens after exposure to low pH // J. Immunol. Methods.- 2000.- 241, N1-10 - P. 1-10.

127. Mietzner B., Tsuiji M., Scheid J. et al. Autoreactive IgG memory antibodies in patients with systemic'lupus erythematosus arise from nonreactive and polyreactive precursors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2008.- 105, N28.- P. 9727-9732.

128. Mohammadi Z. Endotoxin in endodontic infections: a review // J. Calif Dent Assoc.-2011.-39,N3.-P. 152-161.

129. Mold C., Rodic-Polic B., Du Clos T.W. Protection from Streptococcus pneumoniae infection by C-reactive protein and natural antibody requires complement but not Fc gamma receptors // J. Immunol- 2002- 168, N12.- P. 6375-6381.

130. Morris M., Li L. Molecular mechanisms and pathological consequences of endotoxin tolerance and priming // Arch Immunol Ther Exp (Warsz).- 2012.- 60, Nl.-P. 13-18.

131. Morris M.C., Gilliam E.A., Li L. Innate immune programing by endotoxin and its pathological consequences // Front Immunol - 2015 - N5- P. 680-689.

132. Mouquet H., Nussenzweig M.C. Polyreactive antibodies in adaptive immune responses to viruses // Cell Mol Life Sci.- 2012.- 69, N9.- P. 1435-1445.

133. Muller-Loennies S., Brade L., Brade H. Neutralizing and cross-reactive antibodies against enterobacterial lipopolysaccharide // Int. J. Med. Microbiol-2007.- 297.-P. 321-340.

134. Munford R.S. Sensing gram-negative bacterial lipopolysaccharides: a human disease determinant? Infect Immun - 2008 - 76, N2 - P. 454-465.

135. Mussap M., Noto A., Fravega M., Fanos V. Soluble CD 14 subtype presepsin (sCD14-ST) and lipopolysaccharide binding protein (LBP) in neonatal sepsis: new clinical and analytical perspectives for two old biomarkers // J. Matern Fetal Neonatal Med.- 2011.- 24, Suppl 2.- P. 12-14.

136. Nemazee D. Receptor editing in B cells // Adv. Immunol.- 2000- 74 - P. 89-92.

137. Nguyen D.H., Tangvoranuntakul P., Varki A. Effects of natural human antibodies against a nonhuman sialic acid that metabolically incorporates into activated and malignant immune cells // J. Immunol - 2005 - 175, N1- P. 228-236.

138. Notkins A.L. Polyreactivity of antibody molecules // Trends Immunol - 2004-25-P. 174-179.

139: Pandey S., Srivastava S.K., Ramana K.V. A potential therapeutic role for aldose reductase inhibitors in the treatment of endotoxin-related inflammatory diseases // Expert Opin Investig Drugs.- 2012 - 21, N3 - P. 329-339.

140. Park B.S., Lee J.O. Recognition of lipopolysaccharide pattern by TLR4 complexes // Exp Mol Med - 2013 - 45.- P. 92-97.

141. Plociennikowska A., Hromada-Judycka A., Borzecka K., Kwiatkowska K. Cooperation of TLR4 and raft proteins in LPS-induced pro-inflammatory signaling // Cell Mol Life Sci.-2015.- 72, N3.-P. 557-581.

142. Polissi A., Sperandeo P. The lipopolysaccharide export pathway in Escherichia coli: structure, organization and regulated assembly of the Lpt machinery // Mar Drugs.-2014.-12, N2.-P. 1023-1042.

143. Porcheray F., Fraser J.W., Gao B. et al. Polyreactive antibodies developing amidst humoral rejection of human kidney grafts bind apoptotic cells and activate complement // Am J. Transplant.- 2013.- 13, N10.- P. 2590-2600.

144. Pullen G.R., Fitzgerald M.G., Hosking C.S. Antibody avidity determination by ELISA using thiocyanate elution // J. Immunol. Methods- 1986:- 86, Nl.-P. 83-87.

145. Putker F., Bos M.P., Tommassen J. Transport of lipopolysaccharide to the Gramnegative bacterial cell surface // FEMS Microbiol Rev - 2015 [Epub ahead of print].

146. Reed J.L., Welliver T.P., Sims G.P. et al. Innate immune signals modulate antiviral and polyreactive antibody responses during severe respiratory syncytial virus infection // J. Infect Dis.- 2009.- 199, N8.- P. 1128-1138.

147. Rhee S.H. Lipopolysaccharide: basic biochemistry, intracellular signaling, and physiological impacts in the gut // Intest Res - 2014 - 12, N2 - P. 90-95.

148. Ritter K., Fudickar A., Heine N., Thomssen R. Autoantibodies with a protective function: polyreactive antibodies against alkaline phosphatase in bacterial infections // Med. Microbiol. Immunol.- 1997.- 186, N2-3.- C. 109-113.

149. Ronco C. Endotoxin removal: history of a mission. // Blood Purif- 2014 - 37, Suppl l.-P. 5-8.

150. Rusiecka-Ziolkowska J., Walszewska M., Stekla J., Szponar B. Role of endotoxin in pathomechanism of sepsis // Pol Merkur Lekarski- 2008- 25, N147.-P. 260-265.

151. Sang H.R. Lipopolysaccharide: Basic Biochemistry, Intracellular Signaling, and Physiological Impacts in the Gut // Intestinal Res - 2014- 12, N2 - P. 90-95.

152. Schedlowski M., Engler H., Grigoleit J.S. Endotoxin-induced experimental systemic inflammation in humans: a model to disentangle immune-to-brain communication // Brain Behav Immun - 2014 - N35 - P. 1-8.

153. Schmalz G., Krifka S. Schweikl H. Toll-like receptors, LPS, and dental monomers // Adv Dent Res.- 2011- 23, N3.- P. 302-306.

154. Scior T., Alexander C., Zaehringer U. Reviewing and identifying amino acids of human, murine, canine and equine TLR4 / MD-2 receptor complexes conferring endotoxic innate immunity activation by LPS/lipid A, or antagonistic effects by Eritoran, in contrast to species-dependent modulation by lipid Iva // Comput Struct Biotechnol J.- 2013.- N5 - P. 100-105.

155. Sender V., Stamme C. Lung cell-specific modulation of LPS-induced TLR4 receptor and adaptor localization // Commun Integr Biol.- 2014 - N7.- P. 87-95.

156. Shimada M., Kadowaki T., Taniguchi Y. et. al. The involvement of O-antigen polysaccharide in lipopolysaccharide in macrophage activation // Anticancer Res.-2012.- 36, N6.- P. 2337-2341.

157. Sperandeo P., Deho G., Polissi A. The lipopolysaccharide transport system of Gram-negative bacteria // Biochim Biophys Acta - 2009 - 17, N7 - P. 594-602.

158. Suffredini A.F., Noveck R.J. // Human endotoxin administration as an experimental model in drug development. Clin Pharmacol Ther- 2014- 96, N4.-P. 418-422.

159. Tan Y., Kagan J.C. A cross-disciplinary perspective on the innate immune responses to bacterial lipopolysaccharide // Mol Cell - 2014 - 54, N2 - P. 212-223.

160. Tian Q., Beardall M., Xu Y. et al. B cells expressing a natural polyreactive autoantibody have a distinct phenotype and are overrepresented in immunoglobulin heavy chain transgenic mice // J. Autoimmun - 2006.- 177,4 - P. 2412-2422.

161. Tischenko V.M., Abramov V.M., Zav'yalov V.P. Investigation of the cooperative structure of Fc fragments from myeloma immunoglobulin G // Biochemistry.-1998.-37, N16.-P. 5576-5581.

162. Tischenko V.M., Zav'yalov V.P. Long-term metastable conformation of human Fey subunit // Immunology Letters - 2002 - 84.- P. 241-245.

163i Tischenko V.M., Zav'yalova G.A., Bliznyukov O.P. et al. Thermodynamic, conformational and functional properties of the human Clq globular heads in the intact Clq molecule in solution // Mol. Immunol - 2001 - 40, N17 - P. 1225-1236.

164. Togbe D., Schnyder-Candrian S., Schnyder B. et al. Toll-like receptor and tumour necrosis factor dependent endotoxin-induced acute lung injury // Int J. Exp Pathol.-2007.- 88, N6 - P. 387-391.

165. Vani J., Elluru S., Negi V.S. et al. Role of natural antibodies in immune homeostasis: IVIg perspective // Autoimmun. Rev. J - 2008 - 7, N6 - P. 440^144.

166. Vollmers H.P., Brandlein S. Natural antibodies and cancer // N. Biotechnol-2009.- 25, N5- P. 294-298.

167. Wang X., Luo J., Guo Z. et al. Perturbation of the antigen-binding site and staphylococcal protein A-binding site of IgG before significant changes in global conformation during denaturation : an equilibrium study // J. Biochem.- 1997-325.-P. 707-710.

168. Wang X., Quinn P.J. Lipopolysaccharide: Biosynthetic pathway and structure modification // Prog Lipid Res.- 2010.- 49, N2.- P. 97-107.

169. Wellmann U., Letz M., Herrmann M. et al. The evolution of human anti-double-stranded DNA autoantibodies // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2005.- 102.-P. 9258-9263.

170. Whitfield C., Trent M.S. Biosynthesis and export of bacterial lipopolysaccharides // Annu Rev Biochem.- 2014.- N12.- P. 99-128.

171. Wilson I.A., Stanfield R.L. Antibody-antigen interactions: new structures and new conformational changes // Curr. Opin. Struct. Biol - 1994-N4- P. 857-867.

172. Witsch E.J., Cao H., Fukuyama H. et al. Light chain editing generates polyreactive antibodies in chronic graft-versus-host reaction // J. Exp. Med - 2006.203, N7.-P. 1761-1772.

173. Wyns H., Plessers E., De Backer P. et al. In vivo porcine lipopolysaccharide inflammation models- to study immunomodulation of drugs // Vet Immunol Immunopathol - 2015 - N15 - P. 127-130.

174. Xiong Y., Zhou Z.H., Notkins A.L. Pictorial demonstration of the simultaneous binding of multiple unrelated antigens to individual polyreactive antibody-producing B cells // Scand J. Immunol.- 2012.- 76, N3.- P. 342-343.

175. Yang Y., Tung J.W., Ghosn E.E., Herzenberg L.A., Herzenberg L.A. Division and differentiation of natural antibody-producing cells in mouse spleen // Proc. Natl. Acad. Sei. USA.- 2007.- 104, N11.- P. 4542-4546.

176. Zhang G., Meredith T., Kahne D. On the essentiality of lipopolysaccharide to Gram-negative bacteria // Curr Opin Microbiol.- 2013.-16, N6.- P. 779-785.

177. Zhang J., Jacobi A.M., Wang T. et al. Polyreactive autoantibodies in systemic lupus erythematosus have pathogenic potential // J. Autoimmun.- 2009 - 33, N3—4-P. 270-274.

1781 Zhang M, Carroll MC. Natural antibody mediated innate autoimmune response // Mol. Immunol.-2007.-44, N1-3.-P. 103-110.

179. Zhou Z.H, Tzioufas A.G, Notkins A.L. Properties and function of polyreactive antibodies and polyreactive antigen-binding B cells // J. Autoimmun.- 2007 - 29, N4.-P. 219-228.

180. Zhou Z.H., Wild X-, Xiong Y. et al. Polyreactive antibodies plus complement enhance the phagocytosis of cells made apoptotic by UV-light or HIV // Sei Rep — 2013.-N3.-P. 2271-2282.

181. Zhou Z.H., Zhang Y., Hu Y.F. et al. The broad antibacterial activity of the natural antibody repertoire is due to polyreactive antibodies // Cell Host Microbe - 2007.- 1, N1.-P. 51-61.