Иммунные механизмы интерференции РНК в противогриппозной защите тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Пашков Евгений Алексеевич

• Пашков Евгений Алексеевич
• кандидат наук
• 2024

Оглавление диссертации кандидат наук Пашков Евгений Алексеевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Вирус гриппа

1.1.1. Строение вируса гриппа

1.1.2. Мутационная изменчивость вируса гриппа

1.1.3. Цикл репродукции вируса гриппа

1.2. Механизмы противогриппозного иммунитета на уровне слизистых оболочек при гриппозной инфекции

1.2.1. Врождённый иммунитет: гуморальные факторы и вирус гриппа

1.2.2. Врождённый клеточный иммунитет при гриппозной инфекции

1.2.3. Клеточный и гуморальный адаптивный иммунный ответ при гриппозной инфекции

1.2.4. Механизмы ускользания вируса гриппа от иммунной системы

1.3. Терапия гриппозной инфекции

1.4. РНК-интерференция в качестве противовирусного подхода

1.4.1. Иммунный ответ при использовании РНК-интерференции

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.1.1. Выбор и синтез миРНК

2.1.2. Клеточные линии

2.1.3. Вирусы

2.1.4. Лабораторные животные

2.2. Методы

2.2.1. Культивирование клеточных линий

2.2.2. Определение титра вируса

2.2.3. Трансфекция миРНК

2.2.4. МТТ-тест

2.2.5. Выделение нуклеиновых кислот

2.2.6. Реакция обратной транскрипции

2.2.7. Полимеразная цепная реакция

2.2.8. Иммуноферментный анализ

2.2.9. Введение миРНК мышам с последующим заражением вирусом

гриппа

2.2.10. Статистические методы

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Выбор мишеней и создание панели миРНК к клеточным генам, участвующим в репродукции вируса гриппа А

3.2. Оценка токсического и специфического действия миРНК in vitro

3.3. Влияние миРНК на выработку цитокинов in vitro при гриппозной инфекции

3.4. Оценка противогриппозного эффекта миРНК при одиночном и комплексном подавлении экспрессии клеточных генов FLT4, Nup98 и

Nup205

3.5. Влияние миРНК на экспрессию цитокинов in vivo при гриппозной инфекции

3.6. Оценка противовирусного эффекта миРНК in vivo

3.7. Изучение влияния миРНК на экспрессию генов на модели in vivo

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунные механизмы интерференции РНК в противогриппозной защите»

Актуальность темы исследования

Грипп - острое инфекционное респираторное заболевание, причиной которого являются вирусы семейства Ortomyxoviridae. Имея высокий пандемический потенциал, в настоящее время вирусы гриппа являются одной из наиболее актуальных проблем для мирового здравоохранения. По данным ВОЗ, ежегодно около 1 млрд человек заболевают гриппозной инфекцией, и до 650.000 человек умирают от последствий этого заболевания [32]. Эта инфекция актуальна в том числе и для Российской Федерации [16]. Наиболее уязвимой группой населения для вируса гриппа оказываются дети до 6 лет, для них показатели заболеваемости составляют 450 человек на 10 тыс. населения, и лица в возрасте старше 60 лет. Параллельно с этим, среди лиц старше 15 лет показатель заболеваемости составляет 40 человек на 10 тыс. населения [10]. Реальная заболеваемость является более высокой, поскольку часть больных не всегда обращается за медицинской помощью, что приводит к искажению статистических данных.

Актуальность вируса гриппа также обусловлена его мутационной изменчивостью и резистентностью ко многим существующим на сегодняшний день лекарственным и профилактическим средствам [94, 101]. Остроту данному вопросу придаёт тот факт, что вирусы гриппа имеют в своей структуре белки, способные вызывать развитие вторичных иммунодефицитов. Одним из таких белков наиболее изученным является белок NS-1 (nonstructural protein-1). Одной из его основных функций является нарушение функционирования и активности интерферон-стимулирующих генов, протеинкиназы R, белков OAS, из-за чего снижается выработка ряда компонентов гуморального иммунитета, что приводит к недостаточности иммунного ответа [112].

На сегодняшний день существует ряд этиотропных, патогенетических, симптоматических и иммуномодулирующих препаратов, применяющихся для терапии гриппа. При этом достижение полного терапевтического эффекта от

применения этих препаратов невозможно из-за появления новых резистентных форм вируса гриппа [33, 90, 136, 146]. Для преодоления этой проблемы необходимы дизайн и разработка принципиально новых противовирусных препаратов. Одна из перспективных технологий создания специфических антивирусных препаратов основана на механизме РНК-интерференции [47, 57, 111]. Важным свойством разрабатываемых препаратов должна быть способность проявлять не только своё противовирусное действие несмотря на лекарственную устойчивость патогена, но и блокировать механизмы развития иммуносупрессии в ходе развития инфекционного процесса, посредством взаимодействия с Toll-подобными рецепторами 3, 7 и 8 типа (TLR), способными распознавать последовательности миРНК, что влечет за собой активацию врожденного иммунного ответа. Иммунная стимуляция TLR посредством миРНК открывает широкий диапазон вариаций клинического применения препаратов-регуляторов экспрессии генов. Например, препараты миРНК можно применять в качестве лекарственного средства против злокачественных новообразований и хронических вирусных инфекций в двух аспектах: вызывая нокдаун генов и стимулируя иммунные ответы.

Суть РНК-интерференции заключается в способности молекул малых интерферирующих РНК (миРНК) подавлять экспрессию целевых генов, что позволит применять его в качестве противовирусного средства. Первый случай эффективного применения миРНК в качестве противовирусного средства в лабораторных условиях был описан в 2001 году относительно респираторно-синцитиального вируса (РСВ) [29]. С того момента было исследовано применение миРНК в качестве терапевтического средства относительно не только РСВ, но и вирусов гриппа А и В, гепатита В и С, ВИЧ, где был показан выраженный противовирусный эффект на моделях in vitro [22, 115, 154].

Достигнутый к настоящему времени уровень молекулярно-биологических технологий позволяет осуществлять синтез различных соединений, имеющих высокую фармакологическую активность и специфичных по отношению к вирусным мишеням. Такой подход не всегда оправдывает себя, поскольку вирусы

гриппа подвержены высокой мутационной изменчивости посредством шифта и дрейфа. По мнению одного из пионеров в области исследования РНК-интерференции, M. Lesch, имеет смысл влиять на гены клетки-хозяина, экспрессия которых способствует внутриклеточной репродукции вирусов гриппа. Это связано с тем, что при блокировке одного из клеточных компонентов, способствующих вирусной репродукции, прервется жизненный цикл вируса, в результате чего тормозится его размножение и, как итог, супрессирующее влияние на иммунную систему [121].

Степень разработанности темы исследования

Несмотря на многолетнее изучение противогриппозного эффекта миРНК, начиная с работ Q.Ge (2006), S.Oliveira (2007), M.Robbins (2008), K.Zhou (2008), данные об их иммуномодулирующих свойствах при подавлении клеточных генов, важных для репродукции вируса гриппа, не были отражены в полной мере. Исследователями зачастую изучаются аспекты противовирусного эффекта при подавлении экспрессии вирусных и клеточных генов и проведение скрининга клеточных генов, важных для вирусной репродукции, однако практически не рассматривается иммуномодулирующий эффект при использовании молекул миРНК. Также в настоящее время не проводилось оценки изменения динамики показателей иммунного статуса при снижении вирусной репродукции посредством подавления клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205. Эти гены представляют особый интерес, поскольку ген FLT4 играет важную роль в процессе эндоцитоза вируса гриппа, а гены Nup98 и Nup205, кодирующие экспрессию белков ядерно-порового комплекса, участвуют в импорте и экспорте сегментов вирусной РНК в полость ядра. Снижение экспрессии указанных генов потенциально способно приводить к иммуномодулирующему и противовирусному эффекту.

Цели и задачи исследования

Исходя из этого, целью настоящего исследования являлось изучение иммуномодулирующего и противовирусного действия РНК-интерференции на

клеточные гены, важные для репродукции вируса гриппа на модели in vitro и in vivo.

Задачи исследования включают в себя:

1. Разработать панель таргетных миРНК на основании данных о клеточных факторах, важных для репродукции вирусов гриппа, для дальнейшего создания прототипа иммуномодулирующего и противогриппозного средства.

2. Исследовать иммуномодулирующую и противовирусную активность полученных миРНК к целевым клеточным генам на модели in vitro.

3. Провести оценку иммуномодулирующей и противовирусной активности полученных миРНК на модели in vivo.

4. Оценить противовирусный эффект миРНК на различные генетические варианты вируса гриппа А.

Положения, выносимые на защиту

1. Создана панель таргетных миРНК, одиночно и комплексно снижающих экспрессию целевых клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205.

2. Показано, что при использовании миРНК, направленных к клеточным генам FLT4, Nup98 и Nup205 на модели гриппозной инфекции, наблюдается изменение концентрации цитокинов, принимающих участие в противовирусном ответе, а также наблюдается устойчивое снижение вирусной репродукции, in vitro.

3. Показано, что при использовании миРНК, направленных к клеточным генам Nup98 и Nup205 на модели гриппозной инфекции, в верхних дыхательных путях (ВДП) наблюдается увеличение экспрессии провоспалительных цитокинов IL-ip, TNF-a, а затем противовоспалительного цитокина IL-10, на фоне снижения продукции провоспалительных цитокинов вирусной репродукции в легких, in vivo.

4. Использование миРНК, направленных к клеточным генам FLT4, Nup98 и Nup205, приводит к снижению репродукции разных штаммов вируса гриппа А (штаммы: A/WSN/1933 (H1N1), A/Brisbane/59/07 (H1N1), A/Kurgan/ H5N1 и A/California/7/09 (H1N1), in vitro и in vivo.

Научная новизна

Впервые разработано несколько оригинальных, не имеющих прямых и косвенных аналогов противовирусных композиций миРНК, направленных к наиболее консервативным участкам клеточных генов FLT4, ATP6AP1, ARCN1, Nup98, Nup205.

Впервые было показано, что одновременное подавление экспрессии генов FLT4, Nup98 и Nup205, приводит к каскадному повышению концентрации IFN-a, IFN-y, TNF-a и IL-10 in vitro.

На модели in vivo впервые показано, что применение комплексов миРНК Nup98.1, Nup205 и Nup98.1/Nup205 также приводит к повышению экспрессии про-и противовоспалительных цитокинов от 52,9 до 1036,6 ОЕ.

Впервые показано, что одновременное подавление экспрессии двух клеточных генов Nup98 и Nup205, чьи продукты экспрессии кодируют работу ядерно-порового комплекса и способствуют репродукции вируса гриппа, способно приводить к снижению вирусной активности in vivo без токсического эффекта для организма.

Впервые разработанные комплексы миРНК приводят к снижению репродукции различных штаммов вируса гриппа (A/WSN/1933 (H1N1), A/Brisbane/59/07 (H1N1), A/Kurgan/H5N1 и A/California/7/09 (H1N1) на моделях in vitro и in vivo.

Теоретическая и практическая значимость работы

В работе был продемонстрирован пример эффективного и нетоксичного применения молекул миРНК, направленных к клеточным генам FLT4, Nup98 и Nup205 in vitro и in vivo, чьи факторы экспрессии необходимы для репродукции вируса гриппа А. Продемонстрирован выраженный иммуномодулирующий и противовирусный эффект от одиночного и комплексного использования молекул миРНК, снижающих активность одного и более клеточных генов, чьи продукты экспрессии играют важную роль в репродукции различных штаммов вируса гриппа. Результаты проведённого исследования будут использованы при разработке лекарственного

препарата на основе РНК-интерференции, необходимого для терапии гриппозной инфекции, а также её экстренной профилактики.

Внедрение результатов в практику

Полученные данные внедрены в курс обучения по направлению «Микробиология, вирусология и иммунология» на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии им. А.А. Воробьёва ИОЗ им. Ф.Ф. Эрисмана Сеченовского Университета.

Методология и методы исследования

Методологической основой данного исследования являлись работы в области изучения молекулярных основ противовирусного иммунитета, эпигенетической регуляции экспрессии генов, чьи продукты экспрессии принимают важное значение в репродукции вируса гриппа.

Методы исследования включали сбор биологического материала (биоптаты кожи, цельная кровь, сыворотка крови) и необходимых медицинских данных от групп пациентов с АтД и группы сравнения. В работе использовались культуральные методы (культивирование клеточных культур), вирусологический метод (определение вирусного титра по методу Рамакришмана), молекулярно-генетические методы (проведение трансфекций молекул миРНК, ПЦР в реальном времени с обратной транскрипцией), иммунодиагностический метод (твердофазный иммуноферментный анализ). Результаты, полученные в ходе исследования, регистрировались и подвергались статистической обработке и визуализации.

Личный вклад

Научные результаты диссертационной работы Пашкова Е.А. получены им самостоятельно на базе кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии им. А.А. Воробьёва ИОЗ им. Ф.Ф. Эрисмана Сеченовского Университета, а также на базе лаборатории молекулярной иммунологии ФГБНУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова. Личный вклад автора состоит в самостоятельном дизайне

диссертационного исследования и выполнении всех лабораторных исследований, обработке и статистическом анализе полученных результатов, а также непосредственном написании самой работы. Проведён подбор миРНК, направленных на подавление клеточных генов FLT4, ATP6VP1, ACRN1, Nup98 и Nup205, выполнена оценка снижения экспрессии клеточных генов при трансфекции данных миРНК, проведён скрининг их противовирусного действия in vitro и in vivo, а также выполнена оценка иммуномодулирующих свойств полученных комплексов миРНК.

Вклад соавторов

При выполнении данного исследования методическая помощь была оказана сотрудниками ФГБНУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова: к.б.н. Файзулоевым Е.Б., д.м.н., профессором Нагиевой Ф.Г. и Ртищевым А.А. - при культивировании используемых в работе клеточных культур А549, MDCK и L929 и используемых в работе штаммов вируса гриппа, подборе последовательностей миРНК; к.б.н. Сидоровым А.В. и Абрамовой Н.Д. - помощь в подборе последовательностей праймеров для ПЦР; Самойликовым Р.В. - помощь в проведении экспериментов на модели in vivo и оценке иммуностимулирующих свойств миРНК.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность полученных результатов и обоснованность выводов базируется на достаточном объёме полученных экспериментальных результатов, тщательным подходом к выбору лабораторных методов исследования, а также применением статистических подходов обработки полученных результатов. Сформулированные выводы и практические рекомендации отражают результаты проделанной работы и согласуются с поставленными целью и задачами исследования. Диссертация апробирована на заседании кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии им. А.А. Воробьёва Института общественного здоровья им. Ф.Ф. Эрисмана ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.

И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет), протокол №06 от 19 февраля 2024 года.

Материалы диссертационной работы доложены на ХХУШ Международной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов» (Москва, Россия, 2021); на XXIX Международной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов» (Москва, Россия, 2022); на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Медицинская весна - 2022» (Москва, Россия 2022); на Восьмой научно-практической школе-конференции по аллергологии и клинической иммунологии для практикующих аллергологов-иммунологов, инфекционистов, педиатров, терапевтов и гинекологов (Сочи, Россия, 2022); на Первом Российском конгрессе по медицинской микробиологии и инфектологии (Москва, Россия, 2023); на Девятой научно-практической школе-конференции по аллергологии и клинической иммунологии для практикующих аллергологов-иммунологов, инфекционистов, педиатров, терапевтов и гинекологов (Сочи, Россия, 2023); на Научно-практической конференции, посвящённой 60-летию ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора «Эпидемиология и инфекционные болезни: связь времён и поколений» (Москва, Россия, 2023); на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы профилактики инфекционных и неинфекционных болезней: эпидемиологические, организационные и гигиенические аспекты» (Москва, Россия, 2023).

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Диссертационная работа соответствует научной специальности 3.2.7. Иммунология. Результаты проведенного исследования соответствуют пункту паспорта научной специальности 3.2.7. Иммунология №3: «изучение молекулярных и клеточных основ противобактериальной, противовирусной, противоопухолевой, противогрибковой, противопаразитарной иммунной защиты», пункту паспорта научной специальности 3.2.7. Иммунология №6: «разработка и

усовершенствование методов диагностики, лечения и профилактики инфекционных, аллергических и других иммунопатологических процессов» и пункту паспорта специальности 3.2.7. Иммунология №7: «разработка способов воздействия на иммунную систему с помощью фармакологических препаратов и методов иммунобиотерапии. Исследование эффективности и безопасности этих воздействий». Диссертационная работа соответствует специальности 1.5.10. Вирусология. Результаты проведенного исследования соответствуют пункту паспорта специальности 1.5.10. Вирусология №7: «изучение противовирусного иммунитета, иммунохимические исследования вирусных антигенов, изучение гуморального, клеточного иммунитета и иммунопатологических реакций» и пункту №8: «разработка мер предупреждения, диагностики и лечения вирусных заболеваний, совершенствование лабораторной диагностики, терапии, и иммунопрофилактики вирусных инфекций, проблемы санитарной вирусологии».

Публикации по теме диссертации

По результатам исследования автором опубликовано 13 работ, в том числе 5 статей в изданиях, индексируемых в международных базах Web of Science, Scopus, PubMed, MathSciNet, zbMATH, Chemical Abstracts, Springer), из них 3 обзора, 6 иных публикаций по теме диссертационного исследования, 2 публикации в сборниках материалов международных и всероссийских научных конференций.

Структура и объём диссертации

Диссертация изложена на 105 страницах машинописного текста, проиллюстрирована 13 таблицами и 22 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, выводов, списков сокращений и списка литературы. Список литературы содержит 19 отечественных и 141 зарубежный источник.

Источники финансирования

Работа поддержана грантом Сеченовского Университета «Университетский грант - 2020». Диссертационное исследование выполнялось с использованием научного оборудования центра коллективного пользования «НИИВС им. И.И. Мечникова».

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Вирус гриппа

Возбудители гриппозной инфекции - РНК-содержащие вирусы, относящиеся к семейству Orthomyxoviridae. Это семейство получило своё название из-за сродства к муцину, лежащему на поверхности поражаемых тканей, а также способности прикрепляться к поверхностным рецепторам клеток эпителия респираторного тракта [16].

Согласно общепринятой международной таксономии вирусов, семейство делится на 4 типа: Alphainfluenzavirus (IAV), Betainfluenzavirus (IBV), Gammainfluenzavirus (ICV), Deltainfluenzavirus (IDV) [64 ,95, 147]. Вирусы гриппа широко распространены в человеческой популяции, при этом следует отметить, что наиболее высокий эпидемический и пандемический потенциал имеют вирусы гриппа А. Важно учитывать, что вирусы гриппа А обнаружены и у других видов позвоночных, таких как птицы, крупный рогатый скот, некоторые водоплавающие, собаки и кошки [1].

Грипп характеризуется большим разнообразием симптомов. Его инкубационный период длится до трёх суток, далее начинается резкий подъём температуры тела до 38 °C — 40 °C, которой сопутствуют симптомы интоксикации: озноб, катаральные явления, боли в мышцах и суставах, головная боль и общая усталость. Помимо поражения дыхательной системы, грипп способен вызвать осложнения в работе таких систем, как сердечно-сосудистая, центральная нервная и мочеполовая [9, 11, 25, 29, 42, 104, 126].

Имеется также высокая вероятность развития бактериальных и грибковых осложнений [6, 154]. Ежегодно от гриппозной инфекции, страдает до 1 млрд человек в мире, из которых около 5 млн. переносят инфекцию в тяжёлой форме [32]. При этом, в особую группу риска смертельного исхода попадают беременные женщины, пожилые люди, лица с иммунодефицитом, люди, страдающие хроническими заболеваниями органов дыхательной, сердечно-сосудистой и мочеполовой систем.

1.1.1. Строение вируса гриппа

Вирус гриппа - сложный оболочечный вирус, имеющий шаровидную форму вириона, диаметром от 80 до 120 нм. Его геном представлен восемью сегментами РНК негативной полярности у типов А и В, и 7 сегментами РНК у типов С и Б. сегменты вирусной РНК (вРНК) связаны с РНК-зависимой РНК-полимеразой (ЯёЯр - КИА-ёерепё ККЛ-ро1ушегаве), необходимой для процесса репродукции вируса гриппа. Каждый сегмент вирусной РНК кодирует определённый вирусный белок. Главными факторами патогенности вирусов гриппа являются два белка: гемагглютинин (НА) и нейраминидаза (КЛ). В настоящее время известно 18 вариантов для НА и 11 вариантов для ИЛ, что приводит к постоянному появлению новых штаммов вируса гриппа А [42]. Основными белками вируса гриппа А (1АУ) являются поверхностные белки ИА и НА, матриксные белки ИР, М1 и М2, и белки РА, РВ1 и РВ2, входящие в состав комплекса РНК-зависимой РНК-полимеразы. Так же в вирионе содержится N8 белок, подразделяющийся на две субъединицы, N81 и N82, играющие роль в процессе подавления гуморального иммунного ответа, механизмов РНК-интерференции, а также нарушении процесса ядерного импорта и экспорта [62, 65, 95] (Рисунок 1; Таблица 1).

На Рисунке 1 представлено схематическое строение вируса гриппа. Также в Таблице 1 даны основные сведения о ключевых белках вируса гриппа.

Рисунок 1 - Строение вириона вируса гриппа

Таблица 1 - Белки вируса гриппа и их роль

Сегмент вРНК Кодируемый белок Характеристика белка Функция белка

1 РВ2 Белковый компонент вирусной полимеразы Распознавание участка «cap» на клеточной пре-мРНК. Обеспечивает связь с промотором на вРНК

2 РВ1 Белковый компонент вирусной полимеразы Субъединица вирусной RdRp, имеющая SDD-последовательность, участвует в процессе удлинения РНК цепи и транскрипции

РВ1-F2 Неструктурный белок Влияет на патогенность вируса, запускает апоптоз инфицированных клеток

3 РА Белок, обладающий эндонуклеазной активностью Отсоединение «сар» от мРНК хозяина и индуцирование вирусной транскрипции

4 НА Гликозилированный оболочечный белок Обеспечение прикрепления к сиаловым кислотам на поверхности клеток

5 NP Белковый компонент, формирующий вирусный рибонуклеопротеин (вРНП) Формирование вирусного капсида. Компоновка вирусной РНК с целью получения вРНП

6 NA Гликозилированный оболочечный белок Отщепляет остатки сиаловых кислот с клеточных мембран, обеспечивая выход сформированных вариантов

7 М1 Матриксный белок Связывается с мембраной клетки и обеспечивает формирование липидной оболочки вириона и его выход из клетки путём почкования. Способен взаимодействовать с оболочечными белками вируса, вРНП, белком NS2

M2 Трансмембранный белок Матриксный белок, формирующий «протонную помпу» в эндосоме, что способствует понижению рН, «раздеванию вируса» и выходу вРНП в цитоплазму

8 NS1 Неструктурный белок Выполняет иммуносупрессивную роль, подавляя выработку интерферонов и ингибируя активность миРНК, направленных к вирусному геному

NS2 (NEP) Неструктурный белок Обеспечивает транспорт вРНП из ядра в цитоплазму

1.1.2. Мутационная изменчивость вируса гриппа

Выделяют три механизма изменчивости вируса гриппа: рекомбинация, антигенный шифт, антигенный дрейф [20, 96]. Рекомбинация вирусов бывает гомологичной и негомологичной. При негомологичном варианте рекомбинации обмен участков нуклеотидных последовательностей происходит между разными сегментами вирусной РНК (вРНК). Такой вариант способен приводить к появлению новых высокопатогенных штаммов вируса гриппа [108, 131]. Гомологичная рекомбинация присуща вирусам, имеющим высокое сходство в нуклеотидных последовательностях [43]. Её механизм заключается в рекомбинации одинаковых сегментов среди различных штаммов вируса гриппа А [35]. Было доказано, что выделенные в разных регионах изоляты штамма Н9И2 имеют мозаичную структуру гена РА и общих «предков» Н5Ш и Н9И2 [55]. Поскольку вирус гриппа имеет сегментированный геном, этим обуславливается возможность возникновения антигенного шифта - появлением нового варианта 1АУ с другой комбинацией поверхностных мембранных белков из-за реассортации геномных сегментов родительских вирусов [123]. Штаммы, образовавшиеся в результате антигенного шифта склонны к высокому пандемическому потенциалу [37, 48, 92]. Антигенный дрейф обусловлен постепенным накоплением точечных мутаций в результате ошибок, совершаемых вирусной РНК-полимеразой. Из-за постепенного изменения в структуре НА и ИЛ, появляются новые штаммы вируса гриппа, отличные от предыдущих. Это способствует уходу вируса от иммунной системы хозяина, поскольку он будет рассматриваться как новый вариант антигена [50, 160]. Поверхностные белки вируса гриппа подвергаются воздействию антител в первую очередь, что приводит к их большей изменчивости.

1.1.3. Цикл репродукции вируса гриппа

Жизненный цикл вируса гриппа включает в себя несколько стадий: прикрепление к специфическому рецептору на поверхности клетки, вход вируса

в клетку посредством эндоцитоза, выход вирусного рибонуклеопротеина (вРНП) из эндосомы в цитоплазму клетки, образование новых вРНК в ядре и белков в цитоплазме, сборка и выход новых сформированных вирионов из клетки.

Процесс вирусной репродукции представлен на Рисунке 2. Инфекционный процесс начинается с распознавания вирусом специфического рецептора, содержащего сиаловые кислоты на мембране эпителиальных клеток верхних дыхательных путей и связывания с ним. После связывания с сиаловыми кислотами и адсорбции на клеточной мембране, происходит инициация процесса вирусного эндоцитоза, в результате чего образуется эндосома и вирус гриппа попадает в клетку. Далее в образовавшейся эндосоме происходит закисление её внутренней среды в результате активации ферментов-АТФаз, что способствует конформационному изменению НА и приводит к гемифузии вирусной оболочки с эндосомальной мембраной. Далее происходит открытие канала М2 для высвобождения вРНП путем изменения внутриэндосомального рН в более кислую сторону. НА далее образует шпилечный тример, способствуя образованию поры слияния, которая высвобождает вРНП в цитоплазму. Выявленные сигналы ядерной локализации на вРНП распознаются адаптерным белком импортин-а, что приводит к рекрутированию импортина-Р, который облегчает транспортировку вРНП через комплекс ядерных пор в ядро [66]. Репликация вирусного генома в нуклеоплазме происходит в два этапа. Первым этапом является транскрипция копий геномной РНК вируса позитивной полярности, так называемой комплементарной (кРНК). Затем, на матрице кРНК происходит транскрипция новых цепей вРНК негативной полярности. В цитоплазме происходит синтез таких вирусных белков как: РВ1, РВ2, РЛ и ИР. Эти белки проникают в ядро и там образуют комплексы вРНП с новообразованными вРНК. Для выхода синтезированных комплексов вРНП из ядра, необходима повышенная активность белков-нуклеопоринов и белков, ответственных за экспорт РНК из ядра [76]. Основную роль в финальной стадии цикла репродукции вируса гриппа, заключающегося в формировании и выходе нового вириона из клетки, играет белок М1. Его роль заключается в обеспечении формирования вириона на липидной оболочке и его выход из клетки

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Пашков Евгений Алексеевич, 2024 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Бродская, А. В. Разработка противовирусной композиции малых интерферирующих РНК для ингибирования репродукции вируса гриппа A: дис. ... канд. биол. наук : 03.02.02 - Вирусология / Бродская Александра Валерьевна; ФГБУ «Научно-исследовательский институт гриппа» Минздрава России. -Санкт-Петербург, 2018. - 118 с.

2. Влияние комплексов миРНК на репродукцию вируса гриппа A (Orthomyxoviridae: Аlphainfluenzavirus) in vivo / Е. А. Пашков, В. Ю.Момот, А. В. Пак, Р. В. Самойликов, Г. А. Пашков, Г. Н. Усатова, Е. О. Кравцова,

A. В. Поддубиков, Ф. Г. Нагиева, А. В. Сидоров, Е. П. Пашков, О. А. Свитич,

B. В. Зверев // Вопросы вирусологии. - 2023. - Т. 68. - № 2. - С. 95-104.

3. Действие противовирусных миРНК на выработку цитокинов in vitro / А. В. Пак, Е. А. Пашков, Н. Д. Абрамова, А. В. Поддубиков, Ф. Г. Нагиева, Е. А. Богданова, Е. П. Пашков, О. А. Свитич, В. В. Зверев // Тонкие химические технологии. - 2022. - Т. 17. - № 5. - С. 384-393.

4. Изучение экспрессии гена IL-ip под действием комплексов миРНК, обладающих противогриппозным действием / Е. А. Пашков, А. В. Пак, Н. Д. Абрамова, И. В. Яковлева, Н. О. Вартанова, Е. А. Богданова, Е. П. Пашков, О. А. Свитич, В. В. Зверев // Российский иммунологический журнал. - 2022. -Т. 25. - № 4. - С. 485-490.

5. Иммуномодулирующий эффект комплексов миРНК in vitro при гриппозной инфекции / Е. А. Пашков, Р. В. Самойликов, Г. А. Пряников, А. С. Быков, Е. П. Пашков, А. В. Поддубиков, О. А.Свитич, В. В. Зверев // Российский иммунологический журнал. - 2023. - Т. 26. - № 4. - С. 457-462.

6. Индукция вторичной бактериальной пневмонии у мышей при заражении пандемическим и лабораторным штаммами вируса гриппа H1N1 / И. А. Ленева, А. Ю. Егоров, И. Н. Фалынскова, Н. Р. Махмудова, Н. П. Карташова, Е. А. Глубокова, Н. О. Вартанова, А. В. Поддубиков // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2019. - Т. 96. - № 1. - С. 68-74.

7. Исследование противогриппозной активности комплексов миРНК против клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 на модели in vitro / Е. А. Пашков, М. О. Коротышева, А. В. Пак, Е. Б. Файзулоев, А. В. Сидоров, А. В. Поддубиков, Е. П. Быстрицкая, Ю. Е. Дронина, В. К. Солнцева, Т. А. Зайцева, Е. П. Пашков, А. С. Быков, О. А. Свитич, В. В. Зверев // Тонкие химические технологии. - 2022. - Т. 17. - № 2. - С. 140-151.

8. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учебник для студентов медицинских вузов / А. А. Воробьев, А. С. Быков, М. Н. Бойченко [и др.] - Москва : Издательство "Медицинское информационное агентство", 2022. - 704 с.

9. Нокдаун клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 как супрессор вирусной активности гриппа Ä/WSN/33 (H1N1) в культуре клеток A549 / Е. А.Пашков, Е. Б. Файзулоев, Е. Р.Корчевая, А. А. Ртищев, Б. С. Черепович, А. В. Сидоров,

A. В. Поддубиков, Е. П. Быстрицкая, Ю. Е. Дронина, А. С. Быков, О. А. Свитич,

B. В. Зверев // Тонкие химические технологии. - 2021. - Т. 16. - № 6. - С. 476-489.

10. Острые респираторные инфекции и грипп в период пандемии COVID-19 — к чему готовиться в сезоне 2021-2022 гг. / Д. В. Усенко, Н. Х. Тхакушинова, Т. Т. Шатурина [и др.] // РМЖ. Медицинское обозрение. - 2021. - Т. 5. - №11. - С. 721727.

11. Пашков, Е. А. Комплексный нокдаун клеточных генов посредством малых интерферирующих РНК с целью снижения репродукции вируса гриппа (штамм A/WSN/1933) / Е. А. Пашков, М. О. Коротышева // Материалы Международного молодежного научного форума «ЛОМОНОСОВ-2022» : Электронный ресурс / Отв. ред. И. А. Алешковский, А. В. Андриянов, Е. А. Антипов, Е. И. Зимакова. -Москва: МАКС Пресс, 2022. - ISBN 978-5-317-06824-0.

12. Пашков, Е. А. Подавление репродукции вируса гриппа (штамм A/WSN/1933) посредством малых интерферирующих РНК направленных к генам ядерно -порового комплекса / Е. А. Пашков, Г. А. Пашков // Материалы Международного молодежного научного форума «ЛОМОНОСОВ-2021» : Электронный ресурс / Отв. ред. И. А. Алешковский, А. В. Андриянов, Е. А. Антипов, Е. И. Зимакова.-

Москва : МАКС Пресс, 2021. - 1 электрон. опт. диск (DVD-ROM); 12 см. - 2000 экз. - ISBN 978-5-317-06593-5.

13. Перспектива применения препаратов на основе явления РНК-интерференции против ВИЧ-инфекции / Е. А. Пашков, А. В. Пак, Е. П. Пашков [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2022. - Т. 67. - № 4. - С. 278-289. - DOI 10.36233/0507-4088-124.

14. Перспектива создания специфических противогриппозных препаратов на основе синтетических малых интерферирующих РНК / Е. А. Пашков, Е. Б. Файзулоев, О. А. Свитич [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2020. - Т. 65. - № 4. -С. 182-190. - DOI 10.36233/0507-4088-2020-65-4-182-190.

15. Потенциал применения явления РНК-интерференции в терапии новой коронавирусной инфекции COVID-1 / Е. А. Пашков, Е. Р. Корчевая, Е. Б. Файзулоев [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2021. - Т. 66. - № 4. - С. 241-251. -DOI 10.36233/0507-4088-61.

16. Применение сверхмалых доз антител к гамма-интерферону в лечении и профилактике вирусных инфекций / А. Н. Васильев, С. А. Сергеева, М. В. Качанова [и др.] // Антибиотики и химиотерапия. - 2008. - Т. 53. - № 1. - С. 32-35.

17. Создание модели изучения противовирусного действия малых интерферирующих РНК in vitro / Е. А. Пашков, Е. Р. Корчевая, Е. Б. Файзулоев [и др.] // Санитарный врач. - 2022. - № 1. - С. 65-74. - DOI 10.33920/med-08-2201-07.

18. СТП-14.621.21.0008.12-2015. Методика определения цитотоксичности веществ МТТ-тестом на культуре нормальных клеток человека НЕК293 : утвержден 25 дек. 2015 г. // URL: http:// ipac.ac.ru/docs/ckp/metod_17.pdf.

19. Файзулоев, Е. Б. Изучение противовирусной активности антисмысловых РНК и рибозимов в отношении инфекции, вызываемой вирусом алеутской болезни норок : дис. ... канд. биол. наук : 03.00.06, 03.00.03 / Файзулоев Евгений Бахтиёрович ; науч. рук. В. В. Зверев, А. С. Борисенко ; Российская Академия медицинских наук ГУ НИИ Вирусных препаратов им. О. Г. Анджапаридзе. -Москва, 2002. - 109 с.

20. A complex system of small RNAs in the unicellular green alga Chlamydomonas reinhardtii / T. Zhao [et al.] // Genes Dev. - 2007. - Vol. 21. - № 10. - P. 1190-1203.

21. A novel influenza A virus mitochondrial protein that induces cell death / W. Chen, P.A. Calvo, D. Malide, J. Gibbs, U. Schubert, I. Bacik, S. Basta, R. O'Neill, J. Schickli, P. Palese, P. Henklein, J.R. Bennink, J.W. Yewdell // Nat Med. - 2001. - Dec. - Vol. 7. -№ 12. - P. 1306-1312. - DOI: 10.1038/nm1201-1306.

22. A review on current status of antiviral siRNA / A. Qureshi [et al.] // Rev Med Virol. - 2018. - Vol. 28. - № 4. - P. 1976.

23. A single mutation in the PB1-F2 of H5N1 (HK/97) and 1918 influenza A viruses contributes to increased virulence / G. M. Conenello, D. Zamarin, L. A. Perrone, T. Tumpey, P. Palese // PLoS Pathog. - 2007. - Oct 5. - Vol. 3. - № 10. - P. 1414-1421. -DOI: 10.1371/journal.ppat.0030141.

24. A universal influenza A and B duplex real-time RT-PCR assay / H. K. Lee [et al.] // J Med Virol. - 2012. - Vol. 84. - № 10. - P. 1646-1651.

25. Acute Influenza Encephalitis/Encephalopathy Associated with Influenza A in an Incompetent Adult / A. Edet [et al.] // Case Rep Crit Care. - 2020. - Dec 22. - DOI: 10.1155/2020/6616805.

26. Bandyopadhyay, A. S. Final frontiers of the polio eradication endgame / A. S. Bandyopadhyay, G. R. // Macklin Curr Opin Infect Dis. - 2020. - Oct. - Vol. 33. - № 5. -P. 404-410. - DOI: 10.1097/QTO.0000000000000667.

27. Binding of the influenza A virus NS1 protein to PKR mediates the inhibition of its activation by either PACT or double-stranded RNA / S. Li, J. Y. Min, R. M. Krug, G. C. Sen // Virology. - 2006. - May 25. - Vol. 349. - № 1. - P. 13-21. - DOI: 10.1016/j.virol.2006.01.005.

28. Biron, C. A. Initial and innate responses to viral infections-pattern setting in immunity or disease / C. A. Biron // Curr Opin Microbiol. - 1999. - Aug. - Vol. 2. -№ 4. - P. 374-381. - DOI: 10.1016/s1369-5274(99)80066-6.

29. Bitko, V. Nasal delivery of siRNA / V. Bitko, S. Barik // Methods Mol Biol. -2008. - Vol. 442. - P. 75-82.

30. Caligiuri, M. A. Human natural killer cells / M. A. Caligiuri // Blood. - 2008. -Aug 1. - Vol. 112. - № 3. - P. 461-469. - DOI: 10.1182/blood-2007-09-077438.

31. Capitanio, J. S. Nucleoplasmic Nup98 controls gene expression by regulating a DExH/D-box protein / J. S. Capitanio, B. Montpetit, R. W. Wozniak // Nucleus. - 2018. -Vol. 9. - № 1. - P. 1-8.

32. Centers for Disease Control and Prevention : сайт. - URL: https:// cdc.gov/flu/vaccines-work.

33. Characteristics of arbidol-resistant mutants of influenza virus: Implications for the mechanism of anti-influenza action of arbidol / I. A. Leneva, R. J. Russell, Y. S. Boriskin, A. J. Hay // Antiviral Res. - 2009. - Vol. 81. - № 2. - P. 132-140. - DOI: 10.1016/j.antiviral .2008.10.009.

34. Characterization of a mitochondrial-targeting signal in the PB2 protein of influenza viruses / S. M. Carr, E. Carnero, A. García-Sastre, G. G. Brownlee, E. Fodor // Virology.

- 2006. - Jan 20. - Vol. 344. - № 2. - P. 492-508. - DOI: 10.1016/j.virol.2005.08.041.

35. Chare, E. R. Phylogenetic analysis reveals a low rate of homologous recombination in negative-sense RNA viruses / E. R. Chare, E. A. Gould, E. C. Holmes // J Gen Virol.

- 2003. - Vol. 84. - № 10. - P. 2691-2703.

36. Chlanda, P. Protein-lipid interactions critical to replication of the influenza A virus / P. Chlanda, J. Zimmerberg // FEBS Lett. - 2016. - Vol. 590. - № 13. - P. 1940-1954.

37. Comparative global epidemiology of influenza, respiratory syncytial and parainfluenza viruses, 2010-2015 / T. T. Lam [et al.] // J Infect. - 2019. - Vol. 79. -№ 4. - P. 373-382.

38. Determination of 50% endpoint titer using a simple formula / M. A. Ramakrishnan [et al.] // World J Virol. - 2016. - Vol. 5. - № 2. - P. 85-86.

39. Dual Roles of Tumor Necrosis Factor Superfamily 14 in Antiviral Immunity / Y. Hou, Y. Wang, J. Chen, C. Chen // Viral Immunol. - 2022. - Nov. - Vol. 35. - № 9. - P. 579-585. - DOI: 10.1089/vim.2022.0070.

40. Effective siRNAs inhibit the replication of novel influenza A (H1N1) virus / W. Zhiqiang [et al.] // Antiviral Res. - 2010. - Vol. 85. - № 3. - P. 559-561.

41. Effective small interfering RNAs targeting matrix and nucleocapsid protein gene inhibit influenza A virus replication in cells and mice / H. Zhou [et al.] // Antiviral Res. -2007. - Vol. 76. - № 2. - P. 186-193.

42. Err, H. Emerging H6N1 influenza infection: renal problem to be studied / H. Err, V. Wiwanitkit // Ren Fail. - 2014. - Vol. 36. - № 4. - P. 662.

43. Evidence of intra-segmental homologous recombination in influenza A virus / W. Hao [et al.] // Gene. - 2011. - Vol. 481. - № 2. - P. 57-64.

44. Expanding the phenotypic spectrum of ARCN1-related syndrome / A. L. Ritter [et al.] // Genet Med. - 2022. - Vol. 24. - № 6. - P. 1227-1237.

45. Expression of the fms-like tyrosine kinase 4 gene becomes restricted to lymphatic endothelium during development / A. Kaipainen [et al.] // Proc Natl Acad Sci U S A. -1995. - Vol. 92. - № 8. - P. 3566-3570.

46. Finbow, M. E. The vacuolar H+-ATPase: a universal proton pump of eukaryotes / M. E. Finbow, M. A. Harrison // Biochem J. - 1997. - Vol. 324. - № 3. - P. 697-712.

47. Fire, A. Z. Gene silencing by double-stranded RNA / A. Z. Fire // Cell Death Differ. - 2007. - Vol. 14. - № 12. - P. 1998-2012. - DOI: 10.1038/sj.cdd.4402253.

48. Genetic compatibility and virulence of reassortants derived from contemporary avian H5N1 and human H3N2 influenza A viruses / L. M. Chen [et al.] // PLoS Pathog. -2008. - Vol. 4. - № 5.

49. Genome-wide RNAi screen identifies human host factors crucial for influenza virus replication / A. Lesch [et al.] // Nature. - 2010. - Vol. 463. - № 7282. - P.818-822.

50. Gouma, S. Challenges of Making Effective Influenza Vaccines / S. Gouma, E. M. Anderson, S. E. Hensley // Annu Rev Virol. - 2020. - Vol. 7. - № 1. - P. 495-512.

51. Guo, H. Evasion of natural killer cells by influenza virus / H. Guo, P. Kumar, S. Malarkannan // J Leukoc Biol. - 2011. - Feb. - Vol. 89. - № 2. - P. 189-194. - DOI: 10.1189/jlb.0610319.

52. Hale, B. Innate immune evasion strategies of influenza viruses / B. Hale, R. A. Albrecht, A. García-Sastre // Future Microbiol. - 2010. - Vol. 5. - P. 23-41.

53. Hayakawa, Y. CD27 dissects mature NK cells into two subsets with distinct responsiveness and migratory capacity / Y. Hayakawa, M. J. Smyth // J Immunol. -2006. - Feb 1. - Vol. 176. - № 3. - P. 1517-1524. - DOI: 10.4049/jimmunol.176.3.1517.

54. Hayden, M. S. Shared principles in NF-kappaB signaling / M. S. Hayden, S. Ghosh // Cell. - 2008. - Feb 8. - Vol. 132. - № 3. - P. 344-362. - DOI: 10.1016/j.cell.2008.01.020.

55. Homologous recombination as an evolutionary force in the avian influenza A virus / C.Q. He [et al.] // Mol Biol Evol. - 2009. - Vol. 26. - № 1. - P. 177-187.

56. Host cell copper transporters CTR1 and ATP7A are important for Influenza A virus replication / J. C. Rupp [et al.] // Virol J. - 2017. - Vol. 14. - № 1. - P. 11.

57. Host-directed combinatorial RNAi improves inhibition of diverse strains of influenza A virus in human respiratory epithelial cells / M. A. Estrin, I. T. M. Hussein, W. B. Puryear, A. C. Kuan, S. C. Artim, J. A. Runstadler // PLoS One. - 2018 - Vol. 13. -№ 5. - e0197246. - DOI: 10.1371/journal.pone.0197246.

58. Human host factors required for influenza virus replication / R. Konig [et al.] // Nature. - 2010. - Vol. 46. - № 7282. - P. 813-817.

59. Human immunodeficiency virus type 1 escapes from RNA interference-mediated inhibition / A. T. Das [et al.] // J. Virol. - 2004. - Vol. 78. - № 5. - P. 2601-2605.

60. IL-6 trans-signaling enhances CCL20 production from IL-1ß-stimulated human periodontal ligament cells / Y. Hosokawa, S. Shindo, I. Hosokawa, K. Ozaki, T. Matsuo // Inflammation. - 2014. - Apr. - Vol. 37. - № 2. - P. 381-386. - DOI: 10.1007/s10753-013-9750-8.

61. Immunogenicity and protection efficacy of replication-deficient influenza A viruses with altered NS1 genes / B. Ferko, J. Stasakova, J. Romanova, C. Kittel, S. Sereinig, H. Katinger, A. Egorov // J Virol. - 2004. - Dec. - Vol. 78. - № 23. -P. 13037-13045. - DOI: 10.1128/JVI.78.23.13037-13045.2004.

62. Induction and suppression of antiviral RNA interference by influenza A virus in mammalian cells / Y. Li [et al.] // Nat Microbiol. - 2016. - Vol. 2. - DOI: 10.1038/nmicrobiol.2016.250.

63. Induction of innate immunity and its perturbation by influenza viruses / M. U. Goraya, S. Wang, M. Munir, J. L. Chen // Protein Cell. - 2015. - Vol. 6. - № 10. - P. 712-721.

64. Influenza / F. Krammer [et al.] // Nat Rev Dis Primers. - 2018. - Vol. 4. -№ 1. - P. 3.

65. Influenza A: understanding the viral life cycle / T. Samji [et al.] // Yale J Biol Med. - 2009. - Vol. 82. - № 4. - P. 153-159.

66. Influenza A Virus Cell Entry, Replication, Virion Assembly and Movement / D. Dou [et al.] // Front Immunol. - 2018. - Vol. 9 - P. 1581.

67. Influenza A virus-induced degradation of eukaryotic translation initiation factor 4B contributes to viral replication by suppressing IFITM3 protein expression / S. Wang, X. Chi, H. Wei, Y. Chen, Z. Chen, S. Huang, J. L.Chen // J Virol. - 2014. - Aug. -Vol. 88. - № 15. - P. 8375-8385. - DOI: 10.1128/JVI.00126-14.

68. Influenza A virus-induced IFN-alpha/beta and IL-18 synergistically enhance IFN-gamma gene expression in human T cells / T. Sareneva, S. Matikainen, M. Kurimoto, I. Julkunen // J Immunol. - 1998. - Jun 15. - Vol. 160. - № 12. - P. 6032-6038.

69. Influenza A virus lacking the NS1 gene replicates in interferon-deficient systems / A. García-Sastre, A. Egorov, D. Matassov, S. Brandt, D. E. Levy, J. E. Durbin, P. Palese, T. Muster // Virology. - 1998. - Dec 20. - Vol. 252. - № 2. - P. 324-330. - DOI: 10.1006/viro.1998.9508.

70. Influenza A virus NS1 targets the ubiquitin ligase TRIM25 to evade recognition by the host viral RNA sensor RIG-I / M. U. Gack, R. A. Albrecht, T. Urano, K. S. Inn, I. C. Huang, E. Carnero, M. Farzan, S. Inoue, J. U. Jung, A. García-Sastre // Cell Host Microbe. - 2009. - May 8. - Vol. 5. - № 5. - P. 439-449.

71. Influenza A virus polymerase inhibits type I interferon induction by binding to interferon beta promoter stimulator 1 / A. Iwai, T. Shiozaki, T. Kawai, S. Akira, Y. Kawaoka, A. Takada, H. Kida, T. Miyazaki // J Biol Chem. - 2010. - Oct 15. -Vol. 285. - № 42. - P. 32064-32074. - DOI: 10.1074/jbc.M110.112458.

72. Influenza virus targets the mRNA export machinery and the nuclear pore complex / N. Satterly, P. L. Tsai, J. van Deursen, D. R. Nussenzveig, Y. Wang, P. A. Faria, A. Levay, D. E. Levy, B. M. Fontoura // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2007. - Feb 6. -Vol. 104. - № 6. - P. 1853-8. - DOI: 10.1073/pnas.0610977104.

73. Inhibition of influenza virus production in virus-infected mice by RNA interference / Q. Ge [et al.] // Proc Natl Acad Sci. - 2004. - Vol. 101. - № 23. - P. 8676-8681.

74. Inhibition of respiratory viruses by nasally administered siRNA / V. Bitko [et al.] // Nat Med. - 2005. - Vol. 11 - № 1. - P. 50-55.

75. Innate lymphoid cells promote lung-tissue homeostasis after infection with influenza virus / L. A. Monticelli, G. F. Sonnenberg, M. C. Abt, T. Alenghat, C. G. Ziegler, T. A. Doering, J. M. Angelosanto, B. J. Laidlaw, C. Y. Yang, T. Sathaliyawala, M. Kubota, D. Turner, J. M. Diamond, A. W. Goldrath, D. L. Farber, R. G. Collman, E. J. Wherry, D. Artis // Nat Immunol. - 2011. - Nov. - Vol. 12. - № 11. - P. 1045-1054. -DOI: 10.1031/ni.2131.

76. Interaction of the influenza a virus nucleocapsid protein with the viral RNA polymerase potentiates unprimed viral RNA replication / L. L. Newcomb [et al.] // J Virol. - 2009. - Vol. 83 - P. 29-36

77. Interferon-gamma inhibits influenza A virus cellular attachment by reducing sialic acid cluster size / C. H. Fong, L. Lu, L. L. Chen, M. L. Yeung, A. J. Zhang, H. Zhao, K. Y. Yuen, K. K. To // iScience. - 2022. - Mar 6. - Vol. 25. - № 4. - P. 104037. - DOI: 10.1016/j.isci.2022.104037.

78. Interleukin-1 and IL-23 induce innate IL-17 production from gammadelta T cells, amplifying Th17 responses and autoimmunity / C. E. Sutton, S. J. Lalor, C. M. Sweeney, C. F. Brereton, E. C. Lavelle, K. H. Mills // Immunity. - 2009. - Aug 21. - Vol. 31. -№ 2. - P. 331-341. - DOI: 10.1016/j.immuni.2009.08.001.

79. Interleukin-18 improves the early defence system against influenza virus infection by augmenting natural killer cell-mediated cytotoxicity / B. Liu, I. Mori, M. J. Hossain, L. Dong, K. Takeda, Y. Kimura // J Gen Virol. - 2004 Feb. - Vol. 85(Pt 2). -P. 423-428. - DOI: 10.1099/vir.0.19596-0.

80. Investigation of the anti-pseudorabies virus activity of interferon lambda 3 in cultured porcine kidney epithelial cells / H. Deng, Z. Jian, L. Zhu, F. Li, J. Zhao, J. Deng, X. Sun, Z. Xu // Vet Med Sci. - 2022. - Nov. - Vol. 8. - № 6. - P. 2444-2450. - DOI: 10.1002/vms3.933.

81. Jansen, E. J. Novel insights into V-ATPase functioning: distinct roles for its accessory subunits ATP6AP1/Ac45 and ATP6AP2/(pro) renin receptor / E. J. Jansen, G. J. Martens // Curr Protein Pept Sci. - 2012. - Vol. 13. - № 2. - P. 124-133.

82. Jordan, S. C. Innate and adaptive immune responses to SARS-CoV-2 in humans: relevance to acquired immunity and vaccine responses / S. C. Jordan // Clin Exp Immunol. - 2021. - Jun. - Vol. 204. - № 3. - P. 310-320. - DOI: 10.1111/cei.13582.

83. Kadam, R. U. Structural basis of influenza virus fusion inhibition by the antiviral drug Arbidol / R. U. Kadam, I. A. Wilson // Proc Natl Acad Sci US A. - 2017. -Vol. 114. - № 2. - P. 206-214.

84. Kak, G. Interferon-gamma (IFN-y): Exploring its implications in infectious diseases / G. Kak, M. Raza, B. K. Tiwari // Biomol Concepts. - 2018. - May 30. -Vol. 9. - № 1. - P. 64-79. - DOI: 10.1515/bmc-2018-0007.

85. Kaushal, A. Innate immune regulations and various siRNA modalities / A. Kaushal // Drug Deliv Transl Res. - 2023. - Nov. - Vol. 13. - № 11. - P. 2704-2718. - DOI: 10.1007/s13346-023-01361-4.

86. Kawai, T. Innate immune recognition of viral infection / T. Kawai, S. Akira // Nat Immunol. - 2006. - Feb. - Vol. 7. - № 2. - P. 131-137. - DOI: 10.1038/ni1303.

87. Kawai, T. The role of pattern-recognition receptors in innate immunity: update on Toll-like receptors / T. Kawai, S. Akira // Nat Immunol. - 2010. - May. - Vol. 11. -№ 5. - P. 373-384. - DOI: 10.1038/ni.1863.

88. Knockdown of FLT4, Nup98, and Nup205 Cellular Genes Effectively Suppresses the Reproduction of Influenza Virus Strain A/WSN/1933 (H1N1) In vitro / E. Pashkov, E. Korchevaya, E. Faizuloev, A. Rtishchev, B. Cherepovich, E. Bystritskaya, A. Sidorov, A. Poddubikov, A. Bykov, Y. Dronina, O. Svitich, V. Zverev // Infect Disord Drug Targets. - 2022. - Vol. 22. - № 5. - e250322202629. - DOI: 10.2174/1871526522666220325121403.

89. Kurbacheva, O.M. The role of barrier function of mucous membranes in allergic diseases and sublingual allergen-specific immunotherapy / O. M. Kurbacheva, M. E. Amanturlieva // Bulletin of Siberian Medicine. - 2017. - Vol. 16. - № 2. - P. 3246. - DOI: 10.20538/1682-0363-2017-2-32-46.

90. Lampejo, T. Influenza and antiviral resistance: an overview / T. Lampejo // Eur J Clin Microbiol Infect Dis. - 2020. - Vol. 39. - № 7. - P. 1201-1208. - DOI: 10.1007/s10096-020-03840-9.

91. Lin, D. H. The Structure of the Nuclear Pore Complex (An Update) / D. H. Lin, A. Hoelz // Annu Rev Biochem. - 2019. - Vol. 88. - P. 725-783.

92. Lindstrom, S. E. Genetic analysis of human H2N2 and early H3N2 influenza viruses, 1957-1972: evidence for genetic divergence and multiple reassortment events / S. E. Lindstrom, N. J. Cox, A. Klimov // Virology. - 2004. - Vol. 328. - № 1. -P. 101-119.

93. Livak, K. J. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method / K. J. Livak, T. D. Schmittgen // Methods. -2001. - Vol. 25. - № 4. - P. 402-408.

94. Lyons, D. M. Mutation and Epistasis in Influenza Virus Evolution / D. M. Lyons,

A. S. Lauring // Viruses. - 2018. - Vol. 10. - № 8. - P. 407.

95. Mahy, B. W. J. / Virology. Volume 1 / B. W. J. Mahy, V. T. Meulen. - Hodder Arnold, 2005. - 636 p.

96. Marintcheva, B. Modeling Influenza Antigenic Shift and Drift with LEGO Bricks /

B. Marintcheva // J Microbiol Biol Educ. - 2016. - Vol. 17. - № 2. - P. 300-301.

97. Matrix protein 2 of influenza A virus blocks autophagosome fusion with lysosomes / M. Gannagé, D. Dormann, R. Albrecht, J. Dengjel, T. Torossi, P. C. Rämer, M. Lee, T. Strowig, F. Arrey, G. Conenello, M. Pypaert, J. Andersen, A. García-Sastre, C. Münz // Cell Host Microbe. - 2009. - Oct 22. - Vol. 6. - № 4. - P. 367-380. - DOI: 10.1016/j.chom.2009.09.005.

98. McGill, J. Innate immune control and regulation of influenza virus infections / J. McGill, J. W. Heusel, K. L. Legge // J Leukoc Biol. - 2009. - Oct. - Vol. 86. - № 4. -P. 803-812. - DOI: 10.1189/jlb.0509368.

99. Mechanism and functions of membrane binding by the Atg5-Atg12/Atg16 complex during autophagosome formation / J. Romanov [et al.] // EMBO J. - 2012. -Vol. 31. - № 22. - P. 4304-4317.

100. Mechanisms of immune system activation in mammalians by small interfering RNA (siRNA) / B. Mansoori, A. Mohammadi, S. Shir Jang, B. Baradaran // Artif Cells Nanomed Biotechnol. - 2016. - Nov. - Vol. 44. - № 7. - P. 1589-1596. - DOI: 10.3109/21691401.2015.1102738.

101. Miravirsen dosing in chronic hepatitis C patients results in decreased microRNA-122 levels without affecting other microRNAs in plasma / M. H. van der Ree [et al.] // Aliment Pharmacol Ther. - 2016. - Vol. 43. - № 1. - P. 102-113.

102. Mutations in the NS1 protein of swine influenza virus impair anti-interferon activity and confer attenuation in pigs / A. Solórzano, R. J. Webby, K. M. Lager, B. H. Janke, A. García-Sastre, J. A. Richt // J Virol. - 2005. - Jun. - Vol. 79. - № 12. - P. 75357543. - DOI: 10.1128/JVI.79.12.7535-7543.2005.

103. Naesens, L. Antiviral therapies on the horizon for influenza / L. Naesens, A. Stevaert, E. Vanderlinden // Curr Opin Pharmacol. - 2016. - Oct. - Vol. 30. -P. 106-115. - DOI: 10.1016/j.coph.2016.08.003.

104. Neurologic complications of influenza / J.J. Ekstrand [et al.] // Semin Pediatr Neurol. - 2012. - Vol. 19. - № 3. - P. 96-100.

105. Nicholls, J. M. The battle between influenza and the innate immune response in the human respiratory tract / J. M. Nicholls // Infect Chemother. - 2013. - Mar. - Vol. 45. -№ 1. - P. 11-21. - DOI: 10.3947/ic.2013.45.1.11.

106. NKp46 O-glycan sequences that are involved in the interaction with hemagglutinin type 1 of influenza virus / M. Mendelson, Y. Tekoah, A. Zilka, O. Gershoni-Yahalom, R. Gazit, H. Achdout, N. V. Bovin, T. Meningher, M. Mandelboim, O. Mandelboim, A. David, A. Porgador // J Virol. - 2010. - Apr. - Vol. 84. - № 8. - P. 3789-3797. - DOI: 10.1128/JVI.01815-09.

107. Nucleoporin Nup98: a gatekeeper in the eukaryotic kingdoms / M. Iwamoto [et al.] // Genes Cells. - 2010. - Vol. 15. - № 7. - P. 661-669.

108. Orlich, M. Nonhomologous recombination between the hemagglutinin gene and the nucleoprotein gene of an influenza virus / M. Orlich, H. Gottwald, R. Rott // Virology. - 1994. - Vol. 204. - № 1. - P. 462-465.

109. Pathogen-induced human TH17 cells produce IFN-y or IL-10 and are regulated by IL-ip / C. E. Zielinski, F. Mele, D. Aschenbrenner, D. Jarrossay, F. Ronchi, M. Gattorno, S. Monticelli, A. Lanzavecchia, F. Sallusto // Nature. - 2012. - Apr 26. - Vol. 484. -№ 7395. - P. 514-518. - DOI: 10.1038/nature10957.

110. Pathogenicity of influenza viruses with genes from the 1918 pandemic virus: functional roles of alveolar macrophages and neutrophils in limiting virus replication and mortality in mice / T. M. Tumpey, A. García-Sastre, J. K. Taubenberger, P. Palese, D. E. Swayne, M. J. Pantin-Jackwood, S. Schultz-Cherry, A. Solórzano, N. Van Rooijen, J. M. Katz, C. F. Basler // J Virol. - 2005. - Dec. - Vol. 79. - № 23. - P. 14933-14944. - DOI: 10.1128/JVI.79.23.14933-14944.2005.

111. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans / A. Fire [et al.] // Nature. - 1998. - Vol. 391 - № 6669. - P. 806-811.

112. Potent inhibition of influenza virus replication with novel siRNA-chimeric-ribozyme constructs / P. Kumar [et al.] //Antiviral Res. - 2010. - Vol. 87. - № 2. -P. 204-212.

113. Protection against lethal influenza virus challenge by RNA interference in vivo / S. M. Tompkins [et al.] // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2004. - Vol. 101. - № 23. -P. 8682-8686.

114. Protocol Pub. No. MAN0007824 Rev.1.0 // URL: https://assets. thermofisher.com/TFS/Assets/LSG/manuals/Lipofectamine_2000_Reag_protocol.pdf.

115. Recombination resulting in virulence shift in avian influenza outbreak, Chile / D. L. Suarez [et al.] // Emerg Infect Dis. - 2004. - Vol. 10. - № 4. - P. 693-699.

116. Reed, L. J. simple method of estimating fifty per cent endpoints / L. J. Reed, H. Muench // Americ J Epidemiol. - 1938. - Vol. 27. - № 3. - P. 493-497.

117. Replication fitness determines high virulence of influenza A virus in mice carrying functional Mx1 resistance gene / D. Grimm, P. Staeheli, M. Hufbauer, I. Koerner, L. Martínez-Sobrido, A. Solórzano, A. García-Sastre, O. Haller, G. Kochs // Proc Natl Acad Sci US A. - 2007. - Apr 17. - Vol. 104. - № 16. - P. 6806-6811. - DOI: 10.1073/pnas.0701849104.

118. Rezkalla, S. H. Influenza-related viral myocarditis / S. H. Rezkalla, R. A. Kloner // WMJ. - 2010. - Vol. 109. - № 4. - P. 209-213.

119. RNA interference: biology, mechanism, and applications / N. Agrawal [et al.] // Microbiol Mol Biol Rev. - 2003. - V. 67 - № 4. - P. 657-85.

120. RNA interference of influenza virus production by directly targeting mRNA for degradation and indirectly inhibiting all viral RNA transcription / Q. Ge [et al.] // Proc Natl Acad Sci. - 2003. - Vol. 100. - № 5. - P. 2718-2723.

121. RNAi-based small molecule repositioning reveals clinically approved urea-based kinase inhibitors as broadly active antivirals / M. Lesch [et al.] // PLoS Pathog. - 2019. -Vol. 15. - № 3. - DOI: 10.1371/journal.ppat.1007601.

122. Rossman, J. S. Autophagy, apoptosis, and the influenza virus M2 protein / J. S. Rossman, R. A. Lamb // Cell Host Microbe. - 2009. - Vol. 6. - № 4. - P. 299-300.

123. Rouzine, I. M. Antigenic evolution of viruses in host populations / I. M. Rouzine, G. Rozhnova // PLoS Pathog. - 2018. - Vol. 14. - № 9.

124. Sarawar, S. R. Doherty Concurrent production of interleukin-2, interleukin-10, and gamma interferon in the regional lymph nodes of mice with influenza pneumonia / S. R. Sarawar, P. C. Doherty // J Virol. - 1994. - May. - Vol. 68. - № 5. - P. 3112-3119. - DOI: 10.1128/JVI.68.5.3112-3119.1994.

125. Sawyer, K. Progress with RNA Interference for the Treatment of Primary Hyperoxaluria / K. Sawyer, S. Leahy, K. D. Wood // BioDrugs. - 2022. - Vol. 36. -№ 4. - P. 437-441.

126. Seasonal Influenza Infections and Cardiovascular Disease Mortality / J. L. Nguyen [et al.] // JAMA Cardiol. - 2016. - Vol. 1. - № 3. - P. 274-281.

127. Seo, S. H. Tumor necrosis factor alpha exerts powerful anti-influenza virus effects in lung epithelial cells / S. H. Seo, R. G. Webster // J Virol. - 2002. - Feb. - Vol. 76. -№ 3. - P. 1071-1076. - DOI: 10.1128/jvi.76.3.1071-1076.2002.

128. Shaw, M. L. Role of Host Genes in Influenza Virus Replication / M. L. Shaw, S. Stertz // Curr Top Microbiol Immunol. - 2018. - Vol. 419. - P. 151-189.

129. Silverman, R. H. Viral encounters with 2',5'-oligoadenylate synthetase and RNase L during the interferon antiviral response / R. H. Silverman // J Virol. - 2007. - Dec. -Vol. 81. - № 23. - P. 12720-12729. - DOI: 10.1128/JVI.01471-07.

130. Sladkova, T. The role of cytokines in the immune response to influenza A virus infection / T. Sladkova, F. Kostolansky // Acta Virol. - 2006. - Vol. 50. - № 3. - P. 151162.

131. Small interfering RNA targeting M2 gene induces effective and long-term inhibition of influenza A virus replication / H.Y. Sui [et al.] // PLoS One. - 2009. -Vol. 4. - № 5. - P. 5671.

132. Soluble host defense lectins in innate immunity to influenza virus / W. C. Ng, M. D. Tate, A. G. Brooks, P. C. Reading // J Biomed Biotechnol. - 2012. - Vol. 2012. -732191. - DOI: 10.1155/2012/732191.

133. Stills, H. F. Jr. Adjuvants and antibody production: dispelling the myths associated with Freund's complete and other adjuvants / H. F. Jr. Stills // ILAR J. - 2005. - Vol. 46. -№ 3. - P. 280-293. - DOI: 10.1093/ilar.46.3.280.

134. Strieter, R. M. Cytokines in innate host defense in the lung / R. M. Strieter, J. A. Belperio, M. P. Keane // J Clin Invest. - 2002. - Mar. - Vol. 109. - № 6. - P. 699705. - DOI: 10.1172/JCI15277.

135. Structural basis for the sequence-specific recognition of human ISG15 by the NS1 protein of influenza B virus / R. Guan, L. C. Ma, P. G. Leonard, B. R. Amer, H. Sridharan, C. Zhao, R. M. Krug, G. T. Montelione // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2011. - Aug 16. -Vol. 108. - № 33. - P. 13468-13473. - DOI: 10.1073/pnas.1107032108.

136. Structure and inhibition of the drug-resistant S31N mutant of the M2 ion channel of influenza A virus / J. Wang, Y. Wu, C. Ma, G. Fiorin, J. Wang, L. H. Pinto [et al.] // Proc Natl Acad Sci USA. - 2013. - Vol. 110. - № 4. - P. 1315-1320.

137. Structure and inhibition of the drug-resistant S31N mutant of the M2 ion channel of influenza A virus / W. Jun [et al.] // Proc Natl Acad Sci USA. - 2013. - Vol. 110. -№ 4. - P. 1315-1320.

138. Tanaka, T. IL-6 in inflammation, immunity, and disease / T. Tanaka, M. Narazaki, T. Kishimoto // Cold Spring Harb Perspect Biol. - 2014. - Sep 4. - Vol. 6. -№ 10. -a016295. - DOI: 10.1101/cshperspect.a016295.

139. Targeting IL-10 Family Cytokines for the Treatment of Human Diseases / X. Wang, K. Wong, W. Ouyang, S. Rutz // Cold Spring Harb Perspect Biol. - 2019. -Feb 1. - Vol. 11. - № 2. - a028548. - DOI: 10.1101/cshperspect.a028548.

140. The cap-snatching endonuclease of influenza virus polymerase resides in the PA subunit / A. Dias, D. Bouvier, T. Crépin, A. A. McCarthy, D. J. Hart, F. Baudin, S. Cusack, R. W. Ruigrok // Nature. - 2009. - Apr 16. - Vol. 458. - № 7240. - P. 914918.

141. The emergence and spread of resistant influenza A (H1N1) viruses in Oceania, Southeast Asia and South Asia / A. C. Hurt [et al.] // Antiviral Res. - 2009. - №1. -P. 90-93.

142. The epidemiology and spread of drug resistant human influenza viruses / A. C. Hurt [et al.] // Curr. Opin. Virol. - 2014. - №.8. - P. 22-29.

143. The Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) promotes uptake of influenza A viruses (IAV) into host cells / T. Eierhoff [et al.] // PLoS Pathog. - 2010. - Vol. 6. - № 9.

144. The influenza virus protein PB1-F2 inhibits the induction of type I interferon at the level of the MAVS adaptor protein / Z. T. Varga, I. Ramos, R. Hai, M. Schmolke, A. García-Sastre, A. Fernandez-Sesma, P. Palese // PLoS Pathog. - 2011. - Jun. -Vol. 7. - № 6. - e1002067. - DOI: 10.1371/journal.ppat.1002067.

145. The mechanism of resistance to favipiravir in influenza / D. H. Goldhill, A. J. W. Te Velthuis, R. A. Fletcher, P. Langat, M. Zambon, A. Lackenby, W. S. Barclay // Proc Natl Acad Sci USA. - 2018. - Vol. 115. - № 45. - P. 11613-11618.

146. The PB2 subunit of the influenza virus RNA polymerase affects virulence by interacting with the mitochondrial antiviral signaling protein and inhibiting expression of beta interferon / K. M. Graef, F. T. Vreede, Y. F. Lau, A. W. McCall, S. M. Carr, K. Subbarao, E. Fodor // J Virol. - 2010. - Sep. - Vol. 84. - № 17. - P. 8433-8445.

147. Trushina, E. Mitochondrial complex I as a therapeutic target for Alzheimer's disease / E. Trushina, S. Trushin, M. F. Hasan // Acta Pharm Sin B. - 2022. - Vol. 12. -№ 2. - P. 483-495.

148. UFL1 attenuates IL-ip-induced inflammatory response in human osteoarthritis chondrocytes / G. Yang, Y. Wang, Y. Chen, R. Huang // Int Immunopharmacol. - 2020. -Apr. - Vol. 81. - 106278. - DOI: 10.1016/j.intimp.2020.106278.

149. Varghese, J. N. Structure of the influenza virus glycoprotein antigen neuraminidase at 2.9 A resolution / J. N. Varghese, W. G. Laver, P. M. Colman // Nature. - 1983. - May 5-11. - Vol. 303. - № 5912. - P. 35-40. - DOI: 10.1038/303035a0.

150. Vascular endothelial growth factor (VEGF) - key factor in normal and pathological angiogenesis / C. S. Melincovici [et al.] // Rom J Morphol Embryol. - 2018. - Vol. 59. -№ 2. - P. 455-467.

151. Viral Respiratory Pathogens and Lung Injury / N. Clementi, S. Ghosh, M. De Santis, M. Castelli, E. Criscuolo, I. Zanoni, M. Clementi, N. Mancini // Clin Microbiol Rev. - 2021. - Mar 31. - Vol. 34. - № 3. - e00103-20. - DOI: 10.1128/CMR.00103-20.

152. Voynow, J. A. Mucins, mucus, and sputum / J. A. Voynow, B. K. Rubin // Chest. -2009. - Feb. - Vol. 135. - № 2. - P. 505-512. - DOI: 10.1378/chest.08-0412.

153. Waithman, J. Dendritic cells and influenza A virus infection / J. Waithman, J. D. Mintern // Virulence. - 2012. - Nov 15. - Vol. 3. - № 7. - P. 603-608.

154. Wang, F. Biomimetic nanoparticles as universal influenza vaccine / F. Wang, G. Chen, Y. Zhao // Smart Mater Med. - 2020. - Vol. 1 - P. 21-23.

155. Watanabe, T. Cellular networks involved in the influenza virus life cycle / T. Watanabe, S. Watanabe, Y. Kawaoka // Cell Host Microbe. - 2010. - Vol. 7. - № 6. -P. 427-439.

156. Whangbo, J. S. Environmental RNA interference / J. S. Whangbo, C. P. Hunter // Trends Genet. - 2008. - Jun. - Vol. 24. - № 6. - P. 297-305.

157. Wheeler, A. H. Effect of mucin on influenza virus infection in hamsters / A. H. Wheeler, W. J. Nungester // Science. - 1942. - Jul 24. - Vol. 96. - № 2482. - P. 9293.

158. Wilcoxon-Mann-Whitney odds ratio: A statistical measure for ordinal outcomes such as EDSS / C. W. Howard, G. Zou, S. A. Morrow, S. Fridman, J. M. Racosta // Mult Scler Relat Disord. - 2022. - Mar. - Vol. 59. - P. 103516.

159. World Health Organization : офиц. сайт. - URL: https://who.int/ru/news-room/ detail/up-to-650-000-people-die-of-respiratory-diseases-linked-to-seasonal-flu-each-year.

160. Zhang, C. RNA therapeutics: updates and future potential / C. Zhang, B. Zhang // Sci China Life Sci. - 2022. - Vol. 8. - P. 1-19.