Иммобилизация пероксидазы хрена на водном силикагеле и СВ-1 с целью дальнейшего использования в аналитической химии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Котляр, Елена Геннадьевна

• Котляр, Елена Геннадьевна
• кандидат химических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат химических наук Котляр, Елена Геннадьевна

СОДЕРЖАНИЕ.

ВВЕДЕНИЕ.

I. ОБЗОР ИСТОЧНИКОВ ИНФОРМАЦИИ.

1.1. Структура и свойства пероксидазы.

1.2. Определение пероксидаз, их активности in vivo и in vitro.

1.3. Использование пероксидазы, иммобилизованной на различных носителях.

1.4. Использование в иммуноопределении пероксидаз различного происхождения.

1.5. Миметические пероксидазы.

1.6. Применение пероксидазы хрена в аналитической химии.

1.7. Возможные направления для проведения исследований.

II. АДСОРБЦИЯ НЕОРГАНИЧЕСКИХ И ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОКСИДАХ АЛЮМИНИЯ, КРЕМНИЯ И СОРБЕНТАХ СВ.

2.1. Общее положение теории сорбции.

2.1.1. Изотермы адсорбции.

2.1.2. Площадь, занимаемая одной адсорбированной молекулой.

2.1.3. Аттракционное взаимодействие.

2.2. Адсорбируемость.

2.2.1. Влияние на адсорбируемость природы сорбента.

2.2.2. Влияние на адсорбируемость природы растворителя.

2.2.3. Влияние на адсорбируемость электронного и молекулярного строения сорбата.

2.3. Общие вопросы хемосорбции.

2.4. Адсорбция с участием свободной пары электронов.

2.4.1. Кислород- и азотсодержащие поверхностно-активные вещества.

2.4.2. Серосодержащие вещества.

2.4.3. Природа адсорбционных сил.

III. ИЗУЧЕНИЕ СОРБЦИОННОГО КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА (ИХ) НА РАЗЛИЧНЫХ СОРБЕНТАХ.

3.1. Определение активности пероксидазы хрена в корнях растений.

3.2. Изучение процессов сорбции пероксидазы хрена на различных сорбентах.

3.2.1. Изучение сорбционной способности неорганических сорбентов по отношению к пероксидазе хрена.

3.2.2. Влияние рН на иммобилизацию пероксидазы хрена на водном силикагеле и СВ-1.

3.2.3. Изучение процесса сорбции пероксидазы хрена на водном силикагеле и СВ-1.

3.2.4. Изучения влияния сорбента на ферментативную активность пероксидазы хрена.

IV. КВАНТОВО-ХИМИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ПРОЦЕССА СОРБЦИИ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА.

4.1. Краткий обзор использованных методов.

4.1.1. Метод полного пренебрежения дифференциальным перекрыванием.

4.1.2. Метод MINDO.

4.1.3. Краткая характеристика методов AMI и РМЗ.

4.2. Теоретическое обоснование протекания процесса иммобилизации пероксидазы хрена на водном силикагеле и СВ-1 в кислой среде.

4.2.1. Моделирование сорбции пероксидазы хрена на водном силикагеле и СВ-1. 123.

V. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИММОБИЛИЗОВАННОГО ФЕРМЕНТА ДЛЯ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ.

5.1. Изучение возможности определения гидроксилсодержащих органических соединений.

5.2. Фотометрический метод определения фенолов и адреналина с использованием иммобилизованной на СВ-1 ПХ.

5.3. Титриметрический метод определения фенолов и адреналина с использованием иммобилизованной на СВ-1 ПХ.

5.4. Моделирование системы проточно-инжекционного анализа ФАВ с использованием иммобилизованной ПХ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммобилизация пероксидазы хрена на водном силикагеле и СВ-1 с целью дальнейшего использования в аналитической химии»

Одной из актуальных проблем аналитической химии сегодняшнего дня является проблема идентификации и количественного определения различных ферментов. Вместе с тем, ферменты составляют неотъемлемую часть современной биотехнологии и предприятия, занятые различными биотехнологическими процессами, используют самые разнообразные методики идентификации и количественного определения ферментов в различных товарных препаратах или материалах, из которых они их извлекают.

Обычно извлечение ферментов осуществляется с помощью молекулярных сит. Этот процесс в ряде случаев долгий, малоэффективный и дорогой. Практически не используются методы концентрирования и извлечения ферментов из природных материалов с использованием неорганических сорбентов. Это связано с тем, что большинство известных неорганических сорбентов либо вообще не концентрируют ферменты, либо обладает по отношению к ферментам небольшой емкостью. В результате предварительных исследований нами было установлено, что особым образом приготовленные силикагели, а также сорбент СВ-1 могут специфично сорбировать некоторые высокомолекулярные физиологически активные вещества, в том числе и ферменты.

Задачей исследования явился поиск концентрирующих агентов и концентрирование окислительно-восстановительных ферментов на природных сорбентах, а также на специально приготовленных силикагелях.

Работа включает следующие этапы:

- изучение изотерм сорбции пероксидазы хрена (ПХ) на водном силикагеле и сорбенте СВ-1;

- изучение влияния рН на процесс сорбции пероксидазы хрена;

- расчет термодинамических характеристик сорбции (энтальпии, энтропии, изобарно-изотермического потенциала) и представление механизма сорбции; 6

- использование пероксидазы, иммобилизованной на СВ-1 и водном силикагеле для идентификации и количественного определения ряда токсикантов в объектах окружающей среды (фенолов и их производных, адреналина).

В качестве задачи предполагается решение вопроса об использовании ферментных препаратов для технологических целей без выделения их с сорбента.

Научная новизна

Впервые проведена иммобилизация фермента пероксидазы хрена на природных алюмосиликатных сорбентах Астраханской области (СВ), дана оценка сорбционной емкости сорбента СВ-1 по отношению к ПХ. Современными квантово-химическими методами (AMI, РМЗ) произведен расчет аминокислот, углеводов, входящих в состав ПХ на водном силикагеле и на алюмосиликатах современными методами квантовой химии (методами РМЗ и AMI). Представлен механизм сорбции ПХ на данных сорбентах.

Практическая значимость

Для иммобилизации пероксидазы с целью ее дальнейшего использования в аналитической химии предложены водный силикагель и сорбент СВ-1, получаемый путем нехимической переработки опок Астраханской области, обладающий высокой сорбционной емкостью и низкой стоимостью. Разработаны методики определения фенолов и адреналина в водных растворах. Использование разработанных методик позволяет определять гидроксилсодержащие органические соединения быстро, надежно и без использования дорогостоящих реактивов.

Положения, выносимые на защиту

1. Результаты изучения изотерм сорбции и термодинамики сорбции ПХ на водном силикагеле и природном сорбенте СВ-1. 7

2. Результаты изучения кинетики пероксидазного окисления с использованием иммобилизованного на природном сорбенте СВ-1 и водном силикагеле пероксидазы хрена.

3. Результаты теоретических расчетов модели адсорбции аминокислот, углеводов, входящих в состав ПХ на поверхности алюмосиликатов и силикатов (теплоты образования и геометрия адсорбционных комплексов).

4. Результаты сравнительного анализа различных методов расчета, указанных моделей.

5. Механизм сорбции оксидаз на водном силикагеле и сорбенте СВ-1.

6. Спектрофотометрический и титриметрический методы определения гидроксилсодержащих органических соединений в водных растворах, основанные на использовании иммобилизованной на СВ-1 пероксидазы хрена.

Апробация работы

Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на итоговых научных конференциях Астраханского государственного педагогического университета (1997-2000), Всероссийской научной конференции по эколого-биологическим проблемам Волжского региона и Северного Прикаспия (Астрахань, 1998-2000), Международной конференции по аналитической химии (Москва, 2000), Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды с международным участием (Экоаналитика-2000, Краснодар, 2000).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 4 статьи и 7 тезисов докладов. 9

I. ОБЗОР ИСТОЧНИКОВ ИНФОРМАЦИИ

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Котляр, Елена Геннадьевна

ВЫВОДЫ

1. Изучены условия сорбции пероксидазы хрена из водных растворов на сорбентах СВ-1 и водном силикагеле: концентрация веществ, рН и температура. Показано, что сорбция протекает в диапазоне значений рН 4-6. В целом установлено, что СВ-1 способен более эффективно концентрировать пероксидазу хрена, чем водный силикагель. Получены изотермы Лэнгмюра сорбции ПХ, рассчитаны константы сорбции, величины предельной сорбции, основные термодинамические характеристики.

2. Процесс иммобилизации пероксидазы хрена на поверхности исследуемых сорбентов связан с образованием водородных межмолекулярных связей различных частей фермента с поверхностью сорбентов. Наибольшей теплотой образования характеризуются комплексы, в образовании которых принимают участие две и более водородных связи (комплекс с цистеином, тирозином, гистидином). Более высокие величины энальпии взаимодействия в случае сорбат-сорбент для СВ-1 можно объяснить возможностью образования дополнительной водородной связи с участием свободной орбитали атома алюминия и неподеленной пары азота аминогруппы, кислорода гидроксогруппы. Величины АН комплексов сорбат-сорбент для аминокислот и углеводов рассчитаны двумя полуэмпирическими методами (AMI, РМЗ) с хорошей сходимостью результатов. При этом следует отметить, что метод РМЗ дает более реальную структуру комплексов сорбат-сорбент.

3. Проведено теоретическое обоснование протекания процесса сорбции в кислой среде. Доказано, что происходит взаимодействие ионизированных в кислой среде аминогрупп фермента с гидроксогруппами сорбента. Проведено теоретическое изучение

160 влияния иона железа на процесс иммобилизации пероксидазы хрена на исследуемых сорбентах.

4. Проведено изучение влияния иммобилизации на ферментативную активность пероксидазы хрена. Полученные кинетические кривые позволяют сделать вывод о том, что на изучаемых сорбентах фермент сохраняет свою активность и дополнительно приобретает стабильность, что дает возможность его использования в экспрессных методиках в условиях полевой лаборатории.

5. Разработаны методики спектрофотометрического и титриметрического определения фенолов, адреналина с использованием иммобилизованной на СВ-1 ПХ. Как видно из представленных величин доверительного интервала большей точностью характеризуется спектрофотометрический ферментативный метод определения. Титриметрический метод привлекает своей простотой и экспрессностью. Данный метод позволяет определять фенолы для концентраций в интервале 10-100 нг, в то время как ферментативный метод с использованием фотометрирования позволяет снизить нижнюю границу до 1 нг.

6. Проведено изучение возможности использования иммобилизованного на СВ-1 фермента ПХ в проточном анализе. Полученные данные по определению адреналина в воде позволяют сделать вывод о возможности использования иммобилизованного фермента на менее 3 раз.

161

Основное содержание диссертации изложено в работах:

1. Алыков Н.М, Васильева Е.С., Котляр Е.Г., Попович Н.В., Морозов Б.Б., Титова O.JL, Яковлева JI.B. Сорбционное концентрирование на сорбентах группы СВ и последующее определение в природных объектах ряда ФАВ. // Естественные науки. Журн. фундаментальн. и прикладн. исследований. Изд-во АГПУ, 1999. № 1. С. 17-21.

2. Алыков Н.М., Котляр Е.Г. Сорбционное концентрирование пероксидаз на неорганических сорбентах. // Естественные науки. Журн. фундаментальн. и прикладн. исследований. Изд-во АГПУ. В печати.

3. Алыков Н.М., Котляр Е.Г. Сорбционное концентрирование пероксидаз на неорганических сорбентах // Тез. докл. Всеросс. конф. «Химический анализ веществ и материалов». Москва, 16-21 апреля 2000. С. 159-160.

4. Алыков Н.М., Пащенко К.П., Алыков H.H., Локтионова (Котляр) Е.Г. Изучение методами квантовой химии основных энергетических и структурных индексов кластеров сорбента СВ-1. // Тез. докл. итоговой научн. конф. АГПУ. 29 апреля 1997 г. Астрахань: Изд-во АГПУ, 1997. С. 32.

5. Алыков Н.М., Котляр Е.Г. Использование пероксидазы хрена для определения фенолов. // Тез. докл. итоговой научн. конф. АГПУ. 26 мая 2000 г. Астрахань: Изд-во АГПУ, 2000. С.7.

6. Алыков Н.М., Котляр Е.Г. Сорбционное концентрирование пероксидаз с целью аналитического использования. // Тез. докл. III

162

Всеросс. конф. «Экоаналитика-2000» с междунар. участием, Краснодар, 2000. Краснодар: Кубанский ун-т, 2000. С.253.

7. Алыков Н.М., Котляр Е.Г. Концентрирование растительных пероксидаз на водном силикагеле. // Эколого-биологические проблемы волжского региона и Северного Прикаспия. Материалы II Всероссийской научн. конф. 20-22 октября 1999 г. Астрахань: 1999. С. 27-28.

8. Алыков Н.М., Котляр Е.Г., Иванникова Е.Ю. Изучение растительных пероксидаз и их сорбции на водном силикагеле и сорбентах группы СВ. // Тез. докл. итоговой научн. конф. АГПУ. 22 апреля 1999 г. Астрахань: Изд-во АГПУ, 1999. С.43.

9. Алыков Н.М., Котляр Е.Г. Определение некоторых физиологически активных веществ с использованием пероксидазы хрена иммобилизованной на водном силикагеле и СВ-1. // Эколого-биологические проблемы волжского региона и Северного Прикаспия. Материалы III Всероссийской научн. конф. 4-6 октября 2000 г. Астрахань: 2000. С.40.

10.Алыков Н.М., Котляр Е.Г., Пащенко К.П. Теоретическое и экспериментальное изучение процесса сорбции пероксидазы хрена. // Эколого-биологические проблемы волжского региона и Северного Прикаспия. Матариалы III Всероссийской научн. конф. 4-6 октября 2000 г. Астрахань: 2000. С.38.

П.Алыкова Т.В., Клементьева A.B., Котляр Е.Г. Изучение сорбции фенолов на сорбенте СВ-1 с использованием реакции азосочетания. Всерос.науч.конф. «Эколого-биологические

163 проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия»: Астрахань, 19-20 октября. 1998. Материалы конференции С.5.

164

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Котляр, Елена Геннадьевна, 2000 год

1. Угарова Н.Н., Лебедева О.В.//Биохимия. 1978 Т.43. №10. С.1731-1742.

2. Saunders B.G., Holmes-Siedle А.С., Stark В.Р.// Peroxidase. Butterworth. 1964. London.

3. Maely A.C.// Methods Enzymol. 1955. V. 2. P. 801-813.

4. Clementi P., Palade C.E. //J.Cell. Biol. 1969. V. 41. P.33-58.

5. Shin J.H.C., Shannon L.M., Kay E., Lew I.Y.// J. Biol. Chem. 1971. V.246. P. 4546-4554.

6. Delincee H., Radola B.J. // Biochim. et. Biophys. acta. 1970. V. 200. P. 404407.

7. Shannon L.M., Kay E., Lew I.Y. // J. Biol. Chem. 1966. V.241. P. 2166-2172.

8. Welinder K.G., Smillie L.B, Schonbaum G.R. // Canad. J. Biochem. 1972. Y.50. P. 44-62.

9. Welinder K.G. // FEBS Letters. 1976. V.72. P. 19-23.

10. Welinder K.G., Smillie L.B.// Canad. J. Biochem. 1972. V.50. P.63-90.

11. Welinder K.G. // FEBS Letters 1973. V.30. P.243-245.

12. Угарова H.H., Рожкова Г.Д., Васильева Т.Е., Березин И.В.// Биохимия .1978. Т.43. Р.793-798.

13. Ellis W.D., Dunford Н.В.// Canad. J. Biochem. 1968. V.46. P.1231-1235. 14.Strickland E.H.//Biochim. et. Biophys. acta. 1968. V.46. P.1231-1235.

14. Chance В.// Science. 1949. V.109. P.204-208.

15. George P.//Nature. 1952. V.169. P.612-613.

16. Dunford H.B., Stillman J.S. // Coord.Chem.Rev.1976. V.19. P. 187-251.

17. Tamura M., Hori H. // Biochem.et biophys.acta. 1972. V.284. P. 20-29.

18. Yamada H., Yamazaki I. // Arch.Biochem. and Biophys. 1974. V.165. P.728-738

19. Critchlow H.E., Dunford H.B.// J. Biol, chem.1972. V. 247. P.3714-3725.

20. Ebermann R., Gehrinder W.// J.Chromatogr.1985 V. 348. №1. P.313-316.

21. Gantzer M.L.// Miles Lab.Inc. Пат. 4556640, США. Заявл. 29.06.83, № 508836. Опубл. 03.12.85. МКИ G 01 N 33/52. НКИ 436/66.165

22. Аронбаев Д.М., Аронбаева Н.И.//А.с. 1285374. СССР. Заявл. 12.12.84, N 3822043/28-13. Опубл.в Б.И. 1987. №3. МКИ G 01 N 33/58.

23. Alexander P.W., Maitra С.// Anal. Chim. acta. 1988. V. 208. №1-2. P.173-181.

24. WuT.G., Bellama J.M.// Anal.Lett. 1989. V.22. №5. P.l 107-1124.

25. Nolasco H., Moreno O. //J.Chromatogr.l991.V.539. №1. P.198-206.

26. Akaza I., AotaN. // Talanta.1990. V.37. №9. P.925-929.

27. Nohta H., Watanabe Т., Nagaoka H., Ohkura Y. // Anal.Sci.l991.V.7. №3.P.437- 441.

28. Revol Andre, Aguettant Daphne // Заявка 2677126 Франция, МКИ5 G 01 n 35/52, 21/78, с 12 Q 1/28. A 61 В/ FAMA (S.A.)-FR. N 9107256. Заявл. 27.05.91. Опубл. 04.12.92.

29. Yao Т., Sato M., Wasa T.// J. Chem. Soc. Jap. Chem. and Ind Chem. 1985. № 7. P.1501-1503.

30. Hwang Hoon, Dasgupta Purnendu K. // Microchim. acta. 1985, V.3 № 1-2. P. 77-78.

31. Abdel-Latif M.S., Suleiman A.A., Guilbant G.G. // Anal. Lett. 1988. V.21. №6. P.943-951.

32. Cosgrove M., Moody G.J., Thomas J.D.R. // Analyst. 1988. V.113. № 12. P.1811- 1815.

33. Tatsume Т., Okawa Y, Watanabe T. // Anal. Chem. 1989. V.61. № 21. P.2352-2355.

34. Botre F., Mazzei F., Lanzi M., Lorenti G., Botre CI. // Anal. Chem. acta. 1991. V.255. № 1. P.59-62.

35. Smit M.H., Rechnitz G.A. // Anal. Chem. 1992. V. 64. № 3. P. 245-249.

36. Tominaga M., Taniguchi I.A. // Bunscki kagaku. 1991. V. 40. № 11. P. 859861.

37. Tatsume Т., Gondaira M., Watanabe T. // Anal. Chem. 1992. V. 64. № 10. P.1183-1187.

38. Rap. Int. Congr. Anal. Sci., Chiba, 25-31 Aug., 1991 /Reda Т., Miyaoko S.,166

39. Ozawa S., Mitsushita F., Kobayashi D., Senda M. // Anal. Sci. 1991. 7. Pt. 2, Suppl. P. 1443-1446.

40. Wang Joseph, Naser najih // Anal. Lett. 1992. V. 25. № 6. P.999-1009.

41. Plenary, lecture: Pap. Meet. . Anal.Appl.Chem.Modif.Electrodes; Bristol, Jan. 7-8, 1992/Gorton L., Jonsson-Pettersson G., Csoregi E., Johansson K., Dominguez E., Marko-Varga G.//Analyst.l992. V.l 17. №8. P.1235-1241.

42. Hlavay J., Guilbaut G.// Acta. Chem. hung. Models Chem.1993. V.130. № 1. P.83-93.

43. Wang J., Lin Y. //Anal. Chem. acta. 1993. V. 271. № 1. P.53-58.

44. Marshall R.W., Gibson T.D. // Anal. Chem. acta. 1992. V. 266. № 2. P.309-315.

45. Dan Li Wang, Heller A. //Anal. Chem. 1993. V. 65. № 8. P.1069-1073.

46. Weller M.G., Weil L., Niessner R. // Microchim. acta. 1992. V.3. № 1-2. P.29-40.

47. Wang J., Dempsey E., Eremenko A., Smyth M.R.//Anal.Chim.acta. 1993. V. 279. №2. P.203-208.

48. Wang J., Chen Q. // Anal.Chem. 1993. V. 65. №19. p.2698-2700.

49. Cosnier S., Popescu I.C. // Anal. Chem. acta. 1996. V.319. № 1-2. P.145-151.

50. Morales A., Cespedes F., Munoz J., Martinez. Fabregas E., Alegret S.//Anal.chim.acta. 1996. V.332. №2-3. P131-138.51 .Li Jinghong, Yan Juchao, Deng Qing, Cheng Guangjin, Dong Shaojun // Electrochim. acta. 1997. V. 42. № 6. P. 961-967.

51. Rap 2 nd Workshop Biosens. and Bioanal. Techn. Environ. Anal., Lund, Sept. 11-13, 1997 / Lingren A., Emneus J., Ruzgas T., Gorton L., Marko Varga Gy. // Anal. chim. acta. 1997. V. 347. № 1-2. P. 51- 62.

52. Gonzales Martinez M.A., Morais S., Puchades R., Maquieira A., Abad A., Montoya A. //Anal. Chem. 1997. V.69. № 14. P.2812-2818.

53. Guo Yizhu, Dong Shaojun // Anal. Chem. 1997. V. 69. № 10. P.1904-1908.

54. Wang J, Liu Jie, Cepra G. // Anal. Chem. 1997. V.69. № 15. P.3124-3127.167

55. Tatsuma T., Ariyama K., Oyama N. 11 Anal. Chim. acta. 1996. V 318. № 3. P. 297-301.

56. Zhu Yimin, Zhang Jinghong, Dong Shaojun // Anal. Chim. acta. 1997. V. 353. № l.P. 45-52.

57. Kiba Nobidoshi, Itagaki Akito, Fukumura Satoru, Saegusa Kazuya, Furusawa, Motohisa//Anal. Chim. acta. 1997. V. 354. № 1-3. P. 205-210.

58. Heimoller P., Kurth H.-H., Rabong R., Gurner W.V., Kettrup A., Gab S. // Anal. Chem. 1998.V.70. № 7. P. 1437-1439.

59. Chut Shi Lin, Li Juan, Gan Swee Ngin //Analyst. 1997. V.122. № 11. P. 14311434.

60. Lvovich V., Scheeline A. // Anal. Chim. acta. 1997. V. 354. № 1-3. P.315-323.

61. Compagrnone D., Schweicher P., Kauffman J.M., Guilbault G.G. // Anal. Lett. 1998. V. 31. №7. P. 1107-1120.

62. Li Yuan-Zong, Town-shend Alan // Anal. Chim. acta. 1998. V.59. № 1-2. P. 149-156.

63. Liu Zhimung, Niwa O., Horinchi T., Kurita R., Torimitsu, Keulki // Pittsburgh Conf. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc., Orlando, Fla, March 7-12, 1999: PITTCON'99 Book Abitr. Orlando (Fla)., 1990. P. 751.

64. Williams E.J, Campbell A.K., Anal.Biochem. 1986. V.155. №2. P. 249-255.

65. Kricka L.J., Marcinkowski J.M., Wilding P., Lekhakula S. // Talanta. 1990. V. 37. № 10. P.971-974.

66. Janssens P.M.W., KornaatN., Tieleman R., Monnens L.A.H., Willems J.L. // Clin. Chem. 1992. V. 38. № 2. P.216-222.68.0'Toole AA., Kricka L.J., Thorpe G.H.G., Whitehead Th.P. // Anal.chim.acta. 1992. V. 266. №2. P. 193-1999.

67. Hara T., Nakamura K., Satomura S., Matsuura S.// Anal.Chem. 1994. V. 66. №3. P.351-354.

68. Kolosova A.Yu., Blintsov A.N., Samsonova J.,V., Egorov A.M.//1681.t.Congr.Anal.Chem., Moscow, June 15-21 1997. Abstr. V.2. Moscow. 1997. C.R2 .

69. Pap.2nd Workshop Biosens. And Bioanal. Techn. Environ. Anal., Lund. Sept. 11-13. 1997. V. 347. №1-2. P.187-198.

70. Zhang Honghica,Nacer N., Wojciechowski M., Stewart T.N., Shafer L., O'Daly J.P., Henkens R.W.//Pittsburgh Conf. Anal. Chem. and Appl.Spectrosc., Atlanta, Ga, March 16-21.1997. PITTCON'97:Book Abstr. Atlanta (Ga).1997. P. 1246.

71. Pfortner P., Weller M.G., NiessnerR. // Fresenius'J.Anal.Chem. Fresenius'Z. anal. Chem.. 1998. V.360. №2. P.192-1998.

72. Fawar Katmeh M., Godfrey A.J.M., Stevenson D., Aherne G.W.//Analyst. 1997. V. 122. №5. P.481-486.

73. Saito Y., Nakashima S., Mifune M., Odo J., Tanaka Y., Chikuma M., Tanaka

74. H.//Anal. Chim. acta. 1985. V.172. P.285-287. 76.Sun Shushend, Zheng Zhiping// Anal.Chem. 1990.V. 18. №4. P.329-333.

75. Ci Yunxiang, Chang Wenbao, He Hongbin, Liu Jingshi // Acta Sci.Natur. Univ. Pekinensis. 1990. V. 26. №4. P.454-460.

76. Mifune M., Odo J., Motohashi N., Saito Y., Iwado A., Tanaka Y., Chikuma M., Tanaka H.// Anal.Sci. 1991. V.7. №2. P.277-281.

77. Genfa Z, Dasgupta P.K.//Anal.Chem. 1992. V. 64. № 5. P.517-522.

78. Yoshmura Futoshi, Suzuki Takihiko, Samada Masaaki, Hobo Toshiyuki// Bunscki kagaku. 1992. V. 41. P. 191-196.

79. Wang Fang, Wu Yan Zhong, Wu Xiao - Wei, Shong Shu - Seng, Ci Yun -Xiang // Fresenius'J.Anal.Chem.1992. V. 344. №12. P.556-558 .

80. Ci Yun-Xiang, Tu Jian- Ke, Yao Feng Ji, Liu Zhao - Lan, Lin Sa, Zheng Wei - Qing // Anal.Chim.Acta.1993. V.277. № 1. P.67-72.

81. Kiranas E.R., Tzouwara Karayanni S.M., Karayannis M.I./ Analyst. 1993. V.118. № 6. P.727-729.169

82. Biomimetic of peroxidase and enzymatic assay for ascorbic acid / Zhu Min, Huang Xue Mei, Shen Han - Xi, Li Rong // Anal. Chim.acta. 1996. V. 334. №3. P.303-307.

83. Huang Xue Mei, Zhu Min, Mao Lu - Yuan, Shen Han - Xi // Anal. Sci.1997. V. 13. №1. P.145-147.

84. Mao Lu Yuan, Li Rong, Zhu Min, Huang Xue - Mei, Shen Han - Xi // Pittsburgh Conf. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc., Atlanta, Ga., March 1621,1997. PITTCON'97. Book Abstr. - Atlanta (Ga), 1997. P.25.

85. Li Yuan Zong, He Ning, Wang Xiaoging, Chang Wen - bas, Ci - Yun -xiang //Analyst. 1998. V.123. №2. P.359-364.

86. Murty K.V.S.S., Rao Ekambareswara К., Sastry Ch. Suryaprakasa // Analyst. 1984, V.1096. №3. P. 405-406.

87. Kawasaki Т., Tanabe K., Maeda M., Tsuji A.// Abstr Jap. Pittburgh Conf. And Expo. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc. Atlantic City, N. J., March 9-13, 1987. Pittsburgh, Pa. 1987. P. 116.

88. Долманова И.Ф., Шеховцова Т.Н., Стародумова Н.Н.// Журн. анал.химии. 1987. Т. 42 . №10. С.1824 1828.

89. Toci Jun' inchi.// Analyst. 1987. V. 112. №11. P.1565-1568.

90. Uchida K., Yoshzawa D., Tomoda M., Saito S.// Anal. Sci. 1987. V. 3. №2. P.181-183.

91. Siedel J., Deeg R., Seidel H., Mollering H., Staepels J., Gauhl H., Ziegenhorn J.// Anal Lett. 1988. V.21. №6. P. 1009-1017.

92. Brochot J.A., Siddiqu I.W. // Anal.chim.acta. 1989. V. 224. №2. P. 329-337.

93. Abstr.Plen and Keynote Lett. And Posters ISM, Wiesbaden, 28 Aug. 1 Sept., 1989 // Walter В., Ballsmiter R.//Fresenius'J. anal.Chem. 1989. V. 334. №7. P.718.170

94. Ngo T.T. // 197th ACS Nat.Meet, Dallas, Tex, Apr. 9-14, 1989: Abstr. Rap -Washington (D.C.). 1989. P.612.

95. Maslowka J, Owczarek A. // Przem. Chem. 1989. V. 68. № 9. P. 413-416 .

96. Пат. 4978612 США МКИ5 С 12 Й 1/61/ Kobayashi M, Sugao M.; Konica Corp. № 117799; Заявл. 05.11.87. Опубл. 18.12.90. Приор. 17.11.86. № 61273433 (приор. Япония). НКИ 435/10.

97. A.c. 1705745 СССР, МКИ5 G 01 № 33/48/ Пентюк A.A., Истомин В.М, Мусин P.A., Лычик Г.А, Луцюк Н.Б, Илика В.Г.; Винниц. мед. ин-т. № 4760330/14. Завл. 20.11.89. Опубл. 15.01.92. Бюл. № 2.

98. Walter В, Ballshmiter К. // Fresenius J. Anal. Chem. 1992. V. 342. № 10. P.827-833 .

99. Pascual С, Del Casillo M.D, Romay C. // Anal. Lett. 1992. V. 25. № 5. P.837-849.

100. С. Yun-Xiang, Tie Jian-Ke, Wang Qin-Wei, Chang Wen-Bao // Anal, chim. acta. 1992. V. 269. № 1. P.109-114.

101. Ohta Takafumi, Yamauchi Yuki, Takitani Shoji // Fresenius J. Anal. Chem. 1992. V. 343. № 6. P.550-552.

102. Долманова И.Ф, Золотова Г.А, Шеховцова Т.Н. // 15 Менделеев, съезд по общ. и прикл. химии. Минск, 24-29 мая, 1993. Т.1. Минск. 1993.С. 332-333.

103. Шеховцова Т.А, Беклемишев М.К, Долманова И.Ф. // Анал. объектов окруж. среды: Тез.докл 3 Всерос. конф. «Экоаналитика-98» с Международным участием, 20-25 сент, 1998. Краснодар. 1998. С. 451-452.

104. Wang J, Reviejo A.J. //Analyst. 1993. V. 118. № 9. P. 1149-1151.

105. Сафронов M.H, Балмасова С.И. // 4 Конф. «Биоантиоксидант», Москва, 2-4 июня, 1992: Тез.докл. Т.1. М. 1993. С. 227-228.

106. Vampola С, Matt J, Fan Т, Perguson В. // Pittsburg Conf, Anal. Anal. Chem. and Appl. Spectrosc. Atlanta, GA, March 8-12 th, 1993: Abstr. Atlanta, (GA). 1993. P. 406.171

107. Gazaryan I.G., Loginov D.B., Lialulin A.L., Shekhovtsova T.N. // Anal. Lett. 1994. V. 27. № 15. P. 2917-2930.

108. Shekhovtsova Т., Bagirova N., Gazaryan I. // Int. Congr. Anal. Chem., Moscow, June 15-21,1997: Abstr. V.2. Moscow. 1997. P 16.

109. Багирова H.A., Веселова И.А., Шеховцова Т.Н. // Анал. объектов окруж. среды: Тез.докл 3 Всерос. конф. «Экоаналитика-98» с Международным участием, Краснодар, 20-25 сент., 1998. Краснодар, 1998. С. 192.

110. Goral V.N., Nelen M.I., Ryabov A.D. // Anal. Lett. 1995. V. 28. № 12. P. 2139-2148.

111. Garcia Sanchez F., Navas Diaz A., Bonzalez Garcia J.A. // Anal. chim. acta. 1995. V. 310. №3. P. 399-406.

112. Kurova V.S., Goral V.N., Reshetova M.D., Ryabov A.D. // Int. Congr. Anal. Chem. Moscow, June 15-21, 1997: Abstr. T.l. Moscow, 1997. P. 17.

113. Mjadkova M., Panchenko O., Abramenko Т., Savitskaya J. // Int. Congr. Anal. Chem., Moscow, June 15-21,1997: Abstr. V.2. Moscow, 1997. P. 15.

114. Kolosova A. Yu., Blinkov A.N., Egorov A.M. // Int. Congr. Anal. Chem., Moscow, June 15-21, 1997: Abstr. V.2. Moscow. 1997. P.14.

115. Ling Ma Zhi, Ping Wang Yan, Xong Bai Tain // Pitsburgh Conf. Anal, chem. and Appl. Spectrosc., Atlanta, GA, March 16-21, 1997: PITTCON'97: Book Abstr. Atlanta (GA). 1997. P.498.

116. Zhu Min, Huang Xuemei, Li Jie, Shen Hanxi // Anal. chim. acta. 1997. V. 357. №3. P. 261-267.

117. Shekhovtsova T.N., Muginova S.V., Bagirova N.A. // Mendeleev Commun.- 1997. №3. P. 119-120.

118. Мугинова C.B., Веселова И.А., Шеховцова Т.Н. // Анал. объектов окруж. среды: Тез.докл 3 Всерос. конф. «Экоаналитика-98» с Международным участием, Краснодар, 20-25 сент., 1998. Краснодар. 1998. С. 343-344.172

119. Donahue William F. // Envion. Toxicol. and Chem. 1998. V. 17. № 5. P.783.787.

120. Baker W.L.// Anal. Lett. 1998. V. 31. № 8. P. 1325-1335.

121. Meyer J., Karst U. // // Pitsburgh Conf. Anal. chem. and Appl. Spectrosc.,

122. Orlando, Fla, March 7-12, 1999: PITTCON'99: Book abstr. Orlando (Fla).,1999. P. 562.

123. Kamidale Т., Tani Т., Watanabe Hiroto // Anal. Sei. 1998. V. 14. № 4. P.725.729.

124. Alykov N.M., Voronin N.I., Resnyanskaya A.S. // Ecological congress,1.ternational J. 1997. V. 1. N 3. P. 41.

125. Alykov N.M., Dedkov Y.M., Alykov N.N. Int. Simposium «ARS Separatoria' 98». GNIEW, Poland, June 15-18, 1998. Abstract V. 1. P. 35.

126. Алыков H.H. // Астраханский край: история и современность (к 280-летию образования Астраханской губернии. Астрахань, 26-27 ноября 1997.) Материалы Всероссийской научно-практической конференции. С. 239.

127. Алыков Н.М., Воронин H.H., Алыков H.H., Гламозда A.B. и др.// III Всерос. Конф. «Экоаналитика-98». Краснодар, 20-25 сентября 1998. Тез. докл. С. 171.

128. Клементьева A.B. // Астраханский край: история и современность (к 280-летию образования Астраханской губернии. Астрахань, 26-27 ноября 1997.) Материалы Всероссийской научно-практической конференции. С. 252.

129. Алыкова Т.В., Клементьева A.B., Котляр Е.Г. Всерос. конф. «Экологобиологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия».

130. Астрахань, 19-20 октября 1998. Матер, конф. С. 5.

131. Алыков Н.М., Алыкова Т.В., Васильева Е.С., Пащенко К.П. // Естественные науки. 1999. Т. 1. № 1. С. 12.

132. Яковлева JI.B. // Астраханский край: история и совремеенность (к 280-летию образования Астраханской губернии. Астрахань, 26-27 ноября1731997.) Материалы Всероссийской научно-практической конференции. С. 259.

133. Алыков Н.М., Гламозда A.B., Васильева Е.С., Титова O.JL, Яковлева JI.B. // Конференция по эколого- биологическим проблемам Волжского региона и Северного Прикаспия». Астрахань, 3-4 октября 1998. Тез. докл. С. 38.

134. Алыков Н.М., Васильева Е.С., Котляр Е.Г. и др. // Естественные науки. 1999. Т. 1. № 1.С. 17.

135. Алыков Н.М., Гламозда A.B., Морозов Б.Б., Титова О.Л., Яковлева Л.В., Васильев В.А. и др. // Материалы Российской конференции «Эколого- биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия». Астрахань, 19-20 октября 1998. Тез. докл. С. 11.

136. Alykova T.V., Vasiliev V.A., Kazmina Е.А., Klementiena A.V. // Internetional Congress on analitikal chemistry. Moscaw. June. 15-21 1997. Abstr. V. 2. P. 28.

137. Алыков H.M., Васильев В.А. // Всерос. науч. конф. «Экоаналитика-98». Краснодар. 22-25 сентября. 1998. Тез. докл. С. 170.

138. Алыкова Т.В., Васильев В.А., Казьмина Е.А., Кашина А.Н. и др. // Астраханский край: история и совремеенность (к 280-летию образования Астраханской губернии. Астрахань, 26-27 ноября 1997.) Материалы Всероссийской научно-практической конференции.

139. Нечаев Е.А. Хемосорбция органических веществ на оксидах и металлах. Харьков. В. Ш., Изд-во Харьковского университета, 1989. 144 с.

140. Giles С.Н., Мао Ewan T.N., Naruwa S.N., Smith D. // J. Chem. Soc. 1960. P. 3973-3993.

141. Дамаскин Б.Б., Петрий O.A., Батраков B.B. Адсорбция органических соединений на электродах. М., 1968.

142. Грег С., Синг К. Адсорбция, удельная поверхность, пористость. М., 1970.

143. Kipling Y.Y. Adsorption from solution of nonelectrolytes. N.-Y., 1965.174

144. Зелизный A.M., Литковец Е.А., Грущак В.Т // Укр. хим. жури. 1971. Т. 37, №4. С. 337-342.

145. Armistead C.G., Tyler A.J., Hockey J.A. // Trans. Far. Soc. 1971. Vol. 67, N. 2. P. 493-499.

146. Harkins W.J., Gans D.W. // J. Amer. Chem. Soc. 1931, V. 53, N. 17. P. 2804-2806.

147. Husbands D.J., Tailis W., Waldsax A. // Powder Technol. 1971. V. 5, N 1. P. 31-38.

148. Devis K.M., Denchar J.A., Jbbitson D.A. Adsorption of phenols from nonpolar solvents oh to silica gel // J. Chem. Soc. Far. Trans. Part 1. 1973. N 6. P. 1117-1126.

149. Адам H.K. Физика и химия поверхностей. М.; JL, 1947.

150. Филимонов В.Н. Исследование природы центров физической адсорбции методом инфракрасной спектроскопии // Основные проблемы теории физической адсорбции. М., 1970. С. 116-131.

151. Ветрова Г.А., Зелизный A.M., Литковец Е.А // Укр. хим. журн. 1970. Т. 36, № 7. С. 683-687.

152. Ветрова Г.А., Зелизный A.M., Литковец Е.А // Журн. физ. химии 1970. Т. 44, № 10. С. 2573-2576.

153. De Boer J.H., Houben G.M.M., Lippens B.C. // J. Catalysis. 1962. V. INI. P. 1-7.

154. Гарниченко Л.Г., Киселев В.Ф., Красильноков К.Г // Докл. АН СССР. 1959. Т. 125, № 6. С. 1277-1280.

155. Tamamushi В., Tamaki К. Adsorption of long-chain electrolytes at the solid/liquid interface. Part 2 // Trans. Far. Soc. 1959. V 55. N. 7. P. 1007-1012.

156. Фридрихсберг Д.А. Курс коллоидной химии. Л., 1974.

157. Giles С.Н., Easton J.A., Мс Kay R.B. // Trans. Far. Soc. 1966. V. 62, V 523. P. 1963-1975.

158. Muller К. // J. Res. Inst. Catalysis, Hokkaido Univ. 1967. V. 15, N 1. P. 8993.175

159. Schubert H. Zuz // Chem. Phus. Chem. und Anwendungsthech. grenzflächenaktiven Stoffe, Ber. 6. Int. Kongr. В (Gruppen 1-2). 1973. S. 169178.

160. Нечаев E.A., Волгина В .А. // Журн. физ. химии. 1974. Т. 48, № 9. С. 2309-2314.

161. Hirst W., // Trans. Far. Soc. 1959. Vol. 47. P. 315-322.

162. Giles C.H., Me Kay R.B. // J. Bacteriol. 1965. V. 89, N 2. P. 390-397.

163. Hesse G., Sauter O. //Naturwiss. 1947. V. 34. N 9. S. 277-288.

164. Rupprecht H., Biedermann M. // Colloid and Polimer Sei. 1974. V. 252, N 4. P.558-565.

165. White С.E., Gordon N.E. // J. Phys. Chem. 1928. V 32, N 3. P. 380-400.

166. Norman V.J. //Austral J. Chem. 1970. V. 23., N 11. P. 2171-2176.

167. Gurwitsch L. // Kolloid Z. 1923. V. 32, N 1. S. 80-91.

168. Rebinder P. //Z. Phys. Chem. 1927. V. 129, N 1. S. 161-175.

169. Jacques J., Mathieu J. P. // Bull. Soc. Chim. France. 1946. P. 94-98.

170. Chipalkatti H. R., Giles C. H, Vallance D. G. M. // J. Chem. Soc. 1954. P. 4375-4390.

171. Фукс H. A. // Успехи химии. 1949. T. 18, № 2. С. 206-236.

172. Ruiz S. R., Chovin P., Moureau H. // Bull. Soc. Chim. France. 1946. Vol. 13, N9-10. P. 592-594.

173. Basu S. // Chem. and Ind. 1956. N 29. P. 764-765.

174. Burkin A. R., Halsey G. // J. Chem. Soc. 1963. P. 1014-1023.

175. Flaig Baumann R., Neuwinger H. D., Boehn H. P. // Fortschr. Kolloide u. Polymere. 1971. Bd. 55, N 1. S. 7-15.

176. Giles C. H., Me Kay R. B. //J. Chem. Soc. 1961. P. 58-63.

177. Kagiga T., Sumida Y., Tachi T // Bull. Chem. Soc. Japan. 1971. V. 44, N 10. P. 1219-1223.

178. Айдлер P. К. Коллоидная химия кремнезема и силикатов. M.: Госстройиздат, 1959. 288 с.lie

179. Giles С. H., Mehta H. V., Stewart С. E., Subramanian R. V. // J. Chem. 1954. P. 4360-4374.

180. Волькенштейн Ф. Ф. Физико химия поверхности полупроводников. M., 1973.

181. Киселев А. В., Лыгин В. И. Инфракрасные спектры поверхностных соединений и адсорбированных веществ. М., 1972. 459 с.

182. Киселев В. Ф. Поверхностные явления в полупроводниках и диэлектриках. М., 1970.

183. Урбах М. И., Нечаев Е. А // Электрохимия. 1980. Т. 16, № 8. С. 12641268.

184. Brodskii A. M., Usbakh M. I. // Pgogress in Surface Sei. 1977. V. 8 (3). P. 103-122.

185. Brodskii A. M., Urbakh M. I. // Physica Status Solidi (b). 1976. V. 76. N 1. P. 93-104.

186. Бродский A. M., Урбах M. И. // Электрохимия. 1977. T. 13. № 2. С. 191200.

187. Бродский А. М., Урбах М. И. // Электрохимия. 1976. Т. 12. № 5. С. 826827.

188. Эндрюс Л., Кифер Р. Молекулярные комплексы в органической химии. М., 1967.

189. Нечаев Е. А., Федосеев Н. Ф., Звонарева Г. В. // Коллоид, журн. 1982. Т. 44, №6. С. 1185-1189.

190. Нечаев Е. А., Стрельцова О. А. // Коллоид, журн. 1978. Т. 40. № 1. С. 148-152.

191. Нечаев Е. А., Слолвьев Г. С. // Теор. и эксп. химия. 1971. Т. 6. № 6. С. 815-820.

192. Нечаев Е. А., Павличенко В. А., Белоусова Н. А., Силина Т. Ф. // Электрохимия, 1986. Т. 22. № 3. С. 320-324.

193. Дяткина С. Л., Дамаскин Б. Б. // Электрохимия. 1969. Т. 5. № 4. С. 438441.177

194. Киселев А. В. Межмолекулярные взаимодействия в адсорбции и хроматографии. М.: ВШ, 1986.

195. Герасимов Я. И. Курс физической химии.сТ. 1. М.: Химия, 1970.

196. Фролов Ю. Г. Курс коллоидной химии. М.: Химия, 1982.

197. Абрамзон А. А., Зайченко Л. П. И др. Поверхностно активные вещества. Л.: Химия, 1988.

198. Айлер Р. К. Химия кремнезема. М.: Мир, 1982.

199. Дункен X., Лыгин В. И. Квантовая химия адсорбции на поверхности твердых тел. М.: Мир, 1980. 288 с.

200. Жидомиров Г. Н., Чувылкин Н. Д. // Успехи химии. 1986. Т. 55. № 3. С. 353.

201. Губанов В. А., Жуков В. П., Литинский А. О. Полуэмпирические методы молекулярных орбиталей в квантовой химии. М.: Наука, 1976. 219 с.

202. Молекулярные постоянные неорганических соединений // Спр. под ред. К. С. Краснова. Л.: Химия, 1979. 446 с.

203. Рабинович В. А., Хавин 3. Я. Краткий химический справочнок. Л.: Химия, 1991.432 с.

204. Щембелов Г. А., Устынюк Ю. А., Мамаев В. М. и др. Квантокохимические методы расчета молекул. М.: Химия, 1980. 256 с.

205. Вилков Л. В., Мастрюков В. С., Садова Н. И. Определение химического строения свободных молекул. Л.: Химия, 1978. 224 с.

206. Методы расчета электронной структуры атомов и молекул. Под. ред. М. Г. Веселова. Л.: ЛГУ, 1976.

207. Лыгин В. И. // Журн. физич. химии. 1994. Т. 68. № 5. С. 866.

208. Лыгин В. И., Магомедбеков X. Г., Вагабов А. А. // Вестник МГУ. Химия. 1982. Т. 23. № 3. С. 278.

209. Литинский А. О., Лебедев Н. Г. // Журн. физич. химии. 1995. Т. 69. № 1. С. 138.178

210. Лыгин В. И., Магомедбеков X. Г., Лыгина И. А. // Журн. структ. Химии. 1981. Т. 22. №4. С. 156.

211. Лыгин В. И. // Кинетика и катализ. 1994. Т. 35. № 4. С. 526.

212. Бурштейн К. Я., Шорыгин П. П. Квантовохимические расчеты в органической химии и молекулярной спектроскопии. М.: Наука, 1989. 104 с.

213. Губина Л. Н., Лыгин В. И. // Журн. физич. химии. 1980. Т. 54. № 5. С. 1310.

214. Воронцова И. К., Михейкин И. Д. // Там же. 1993. Т. 67. № 9. С. 1805.

215. Воронцова И. К., Михейкин И. Д. // Там же. 1994. Т. 68. № 9. С. 1619.

216. Киселев А. В. // Успехи химии. 1956. Т. 25. Вып. 6. С. 705.

217. Киселев А. В. Межмолекулярные взаимодействия в адсорбции ихроматографии. М.: Высшая школа, 1986.

218. Травень В. Ф. Электронная структура и свойства органических молекул. М.: Химия, 1989.

219. Лыгин В. И., Улендеева А. Д., Беньковский В. Г., Ляпина Н. К. // Докл. АН СССР. 1977. Т. 233. № 2. С. 420.

220. Pariser R., Parr R.G.// J. Chem. Phys. 1953. V. 21. P. 466, 767.

221. Pople J.A.// Trans. Faraday. Soc. 1953. V. 49. P.1375.

222. Pople J.A., Segal.G.A. // J. Chem. Phys. 1965. V. 43. P. 136.

223. Dahl J.P., Ballhausen C.J.// Adv. Quant. Chem. 1968. V. 4. P.170.

224. Jug KM Theor. Chim. Acta. 1969. V. 14. P. 91.

225. Voigt В.// Theor. Chim. Acta. 1973. V. 31. P. 289.

226. Dixon R.N.// Mol. Phys. 1967. V.12. P.83.

227. Pople J.A, Beveridge D.L.// Approximate Molecular Orbital Theory. N.Y., Mc Graw-Hill Book. 1970

228. Duhl J.P., Johanson H. // Theor. Chim. Acta. 1968. V. 11. P. 8.

229. Becker C.A.L., Duhl J.P. // Theor. Chim. Acta. 1970. V.19. P.135.

230. Choplin F., Kaufman G. // Theor. Chim. Acta. 1972. V. 25. P. 54.

231. Jug KM Theor. Chim. Acta. 1973. V. 30. P. 231.

232. Brown R.D., Rody K.R.// Theor. Chim. Acta. 1970. V. 16. P. 175, 194.179

233. Brown R.D., James B.H., O'Dwyer M.F.// Theor. Chim. Acta. 1970. V.17. P. 264, 279.

234. Минкин В.И., Симкин Б.Я., Меняев P.M. // Теория строения молекул. М., Высшая школа, 1970. С.210-211

235. Stewart J.J.P. // J. Comput. Chem. 1989. V. 10. P.289

236. Кеннеди Дж. Ф., Кабрал И.М.А.// Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы М.: Мир, 1988. С. 30.

237. Оверчук Е.И., Войт A.B., Авраменко В.А. // Журн. физич. химии. 1994. Т. 68. №9. С. 1617. '1. На правах рукописи1. КОТЛЯР ЕЛЕНА ГЕННАДЬЕВНА

238. ИММОБИЛИЗАЦИЙ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА НА ВОДНОМ СИЛИКАГЕЛЕ И СВ-1 С ЦЕЛЬЮ ДАЛЬНЕЙШЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В АНАЛИТИЧЕСКОЙ ХИМИИил/ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук0200.02 Аналитическая химия1. Астрахань 2000

239. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

240. Цель работы. Поиск концентрирующих агентов и концентрирование окислительно-восстановительных ферментов на примере пероксидазы хрена (ПХ) на природных сорбентах, а также на специально приготовленных силикагелях.

241. В качестве задачи предполагается решение вопроса об использовании ферментных препаратов для технологических целей без выделения их с сорбента.

242. Положения, выносимые на защиту:

243. Результаты изучения процесса сорбции и термодинамики сорбции ПХ на водном силикагеле и природном сорбенте СВ-1.

244. Результаты изучения кинетики пероксидазного окисления с использованием иммобилизованной на природном сорбенте СВ-1, водном силикагеле пероксидазы хрена.

245. Механизм сорбции оксидаз на примере пероксидазы хрена на водном силикагеле и сорбенте СВ-1.

246. Ферментативные фотометрическая и титриметрическая методика определения гидроксилсодержащих органических соединений в водных растворах, основанные на использовании иммобилизованной на СВ-1 пероксидазы хрена.

247. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи и 7 тезисов докладов.

248. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, пяти глав, выводов и списка литературы (238 источников). Работа изложена на 179 страницах текста, содержит 16 рисунков и 22 таблицы.

249. ОБЗОР ИСТОЧНИКОВ ИНФОРМАЦИИ

250. АДСОРБЦИЯ ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОКСИДАХ АЛЮМИНИЯ, КРЕМНИЯ И СОРБЕНТАХ ГРУППЫ СВ

251. Методы исследования сорбции пероксидазы хрена на водном силикагеле и СВ-1

252. Аппаратура. Оптические плотности растворов измеряли на фотоэлектрическом колориметре КФК-3. Измерение рН готовых систем проводили на иономере И-130 (индикаторный электрод стеклянный, электрод сравнения - хлорсеребряный).

253. Общая схема проведения анализа. Влияние рН на сорбцию, определение констант сорбции, кинетику окислительно-восстановительной реакции с участием иммобилизованного фермента изучали в статическом режиме при температурах 25°С и 4°С, с ошибкой + 0,2°С.

254. Изучение сорбционной способности неорганических сорбентов по отношению к ПХ

255. Сорбировали ПХ следующим образом. В воронку на фильтр помещали 2 г сорбента, добавляли 2 см3 жидкой фазы, затем сорбент промывали дистиллированной водой и добавляли реактив Нади, пероксид водорода Одновременно готовилась и контрольная проба.

256. Рис. 1 Влияние рН на процесс сорбции пероксидазы хрена на водном силикагеле

257. Изучение процесса сорбции ПХна водном силикагеле и СВ-1

258. Рис. 2. Изотермы сорбции ПХ при различных температурах на СВ-1 (1 — при Т= 277 К, 2 при Т=298 К)1. С. 105 ед/см3

259. Рис. 3. Изотермы сорбции ПХ при различных температурах на водном силикагеле1 при Т= 277 К, 2 - при Т=298 К)