Идентификация аминокислот активного центра транспортеров органических катионов (ОСТs), участвующих в связывании кортикостерона тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Шацкая, Наталья Владимировна

• Шацкая, Наталья Владимировна
• кандидат наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат наук Шацкая, Наталья Владимировна

Оглавление

Список сокращений

Цель работы

1. Обзор литературы

1.1 Транспортеры семейства SLC22

1.2 Функциональные характеристики транспортеров ОСТ

1.3 Субстратные свойства транспортеров ОСТ

1.4 Клеточная локализация субтипов ОСТ

1.5 Полиморфизм и мутации транспортеров ОСТ

1.6 Клиническая значимость транспортеров ОСТ

2. Материалы и методы

2.1 Материалы

2.1.1 Реактивы

2.1.2 Радиоактивные соединения

2.1.3 Ферменты и наборы

2.1.4 Оборудование

2.2 Молекулярно биологические методы

2.2.1 Приготовление плазмид дикого типа, точечных мутантов и химерных

конструктов

2.2.2 Линеаризация плазмидной ДНК

2.2.3 Спектрофотометрический анализ ДНК

2.2.4 Электрофорез ДНК

2.2.5 Транскрипция мРНК с матрицы ДНК

2.2.6 Электрофорез РНК

2.3 Система экспрессии в ооцитах лягушки Xenopus Laevis

2.3.1 Лапоротомия Xenopus Laevis

2.3.2 Приготовление ооцитов для инъекций

2.3.3 Стадии развития ооцитов

2.3.4 Микроинъекции РНК в ооциты

2.3.5 Измерение транспорта

2.3.6 Расчеты и статистика

3. Результаты

3.1 Функциональная характеристика химер, созданных на базе транспортера

ЮСТ1 с заменой фрагментов на соответствующие из ЮСТ2

3.2 Анализ активности химер

3.3 Измерение значений Км для ТЕА

3.4 Взаимодействие кортикостерона с конструктами с точечными мутациями на базе транспортера ЮСТ1

3.5 Взаимодействие катионных субстратов с мутантами ЮСТ1, имеющими высокое сродство к кортикостерону

3.6 Ингибирование кортикостероном мутантов на базе ЮСТ2, содержащих единичные замены аминокублот из ЮСТ1

4. Обсуждение

5. Литература

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Идентификация аминокислот активного центра транспортеров органических катионов (ОСТs), участвующих в связывании кортикостерона»

Цель работы.

Субтипы транспортера ОСТ имеют перекрывающиеся субстратные свойства, но различное распространение по тканям, регуляцию и селективность для субстратов и ингибиторов [Koepsell et al., 2003]. Например, стероидные гормоны ингибируют транспорт органических катионов у всех трех субтипов ОСТ, но с разным сродством, характерным для каждого субтипа [Koepsell et al., 2003]. Стероиды трже участвуют в долгосрочном регулировании транспортера ОСТ2, но не имеют такого влияния на ОСТ1 [Urakami et al., 2000; Shu et al., 2001]. Известно, что при ингибировании ОСТ кортикостероном значения IC5o составили: для человеческого ОСТ1 -10 мкМ, для человеческого ОСТ2 -30 мкМ, для человеческого ОСТЗ -0.2 мкМ, для крысиного ОСТ1 -150 мкМ, для крысиного ОСТ2-4 мкМ и для крысиного ОСТЗ -5 мкМ [Grundemann et al., 1998; Wu et al., 1998; Zhang et al., 1998; Arndt et al., 2001; Hayer- Zillgen et al., 2002].

Целью настоящей работы было определить аминокислоты транспортера гОСТ2, которые определяют высокое сродство белка к кортикостерону в сравнении с

субтипом транспортера ОСТ1.

Для этих целей на основе транспортера ЮСТ1 была сконструирована серия химерных белков, в которой белок был разделен на 16 частей (включающих в себя: предполагаемые трансмембранные домены, внутри- и внеклеточные петли) и каждая из этих частей была заменена на соответствующию область из ЮСТ2 транспортера. Для характеризации этих химерных конструктов измерялся транспорт 10 мкМ [14С]ТЕА и относительные константы Михаэлиса-Ментен Km транспорта TEA и ингибирования TEA транспорта прокаинамидом и кортикостероном.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Шацкая, Наталья Владимировна

4. Обсуждение.

Среди большого числа субстратов и ингибиторов, включая TEA и МРР, которые имеют практически одинаковое сродство к транспортерам ЮСТ1 и ЮСТ2, есть те, которые имеют значительные различия в сродстве к белкам, это например, кортикостерон, прокаинамид, циметидин [Arndt etal., 2001].

Мы предполагаем, что гомологии или различия в специфической селективности для разных соединений могут зависеть от нескольких аминокислот, которые отличаются у транспортеров ЮСТ1 и ЮСТ2. Чтобы проверить эту гипотезу мы поэтапно заменили различные участки транспортера ЮСТ1 соответствующими районами из ЮСТ2. Таким образом, мы сконструировали 16 химерных белков на основе транспортера ЮСТ1. В случае ингибирования транспорта TEA с помощью 450 мкМ прокаинамида ни одна из замен не изменила уровень ингибирования с типа ЮСТ1 на тип ингибирования ЮСТ2. Однако замена трансмембранного домена 9 с фланкирующими регионами (Химера 9) показала уменьшение степени ингибирования транспорта при концентрации прокаинамида 450мкМ частично, хотя и существенно отличимо от констант ингибирования ЮСТ1 и ЮСТ2. Эти данные говорят об участии 9 трансмембранного домена в связывании прокаинамида и участии дополнительного фрагмента транспортера, структурно отличающегося у ЮСТ1 и ЮСТ2.

Однако, при замене 10 трансмембранного домена транспорт TEA при ингибировании кортикостероном с концентрацией 4 мкМ и 200мкМ изменялся с типа ингибирования как у ЮСТ1 на тип ингибирования, который наблюдается у транспортера ЮСТ2. Важность этого района была позже подтверждена более детальными исследованиями ингибирования транспорта TEA и МРР при помощи кортикостерона, при этом были получены значения Ю50, которые практически совпадали с аналогичными значениями для дикого типа ЮСТ2. Из этого можно заключить, что аминокислоты, определяющие высокую афинность транспортера ЮСТ2 к кортикостерону, расположены в этом предполагаемом домене.

На рисунке 21 показана последовательность предполагаемого 10 трансмембранного домена для семейства ОСТ: ЮСТ1, ЮСТ2, ЮСТЗ и

человеческого ОСТЗ (hOCT3) с фланкирующими регионами, а также значения 1С50, которые были определены для ингибирования транспортеров ОСТ кортикостероном [Gründemann et al., 1998; Wu et al., 1998; Arndt et al., 2001]. Аминокислоты Gly439, Glu456, Leu457, Tyr458, Pro459, и Thr460 (нумерация для ЮСТ1) являются консервативными практически для всех членов семейства SLC22, в то время как, аминокислоты - Trp430, Arg440, Gly442, Thr444, Val453, и Asn454 являются консервативными только для подсемейства ОСТ. Также надо заметить, что транспортер ЮСТЗ имеет практически одинаковое сродство к кортикостерону с ЮСТ2. Мы обнаружили три положения, которые являются определяющими для высокого сродства к кортикостерону у гОСТ2 в отличии от ЮСТ1,а с ЮСТЗ они содержат одинаковые аминокислоты (Ile443, Glu448) или похожие по свойствам аминокислоты, как у ЮСТ2 (Phe443 у ЮСТЗ и Туг443 у ЮСТ2). Это подтверждает гипотезу, о том что аминокислоты в положениях 443, 447 и 448 играют важную роль в сродстве к кортикостерону. В тоже время, сравнение показало, что аминокислоты отличающиеся у ЮСТ2 и ЮСТЗ в положениях 432, 433, 435, 437, 441, 449, 451, 455 _ менее критичны для связывания кортикостерона. Интересно отметить, что аминокислоты в 10 трансмембранном домене и прилегающих к нему участках одинаковые для транспортеров ЮСТЗ и ИОСТЗ, в то время как значения IC50 для ингибирования транспорта катионов кортикостероном для ЮСТЗ в сравнении с ЮСТЗ в двадцать раз меньше. Это может означать, что во взаимодействие кортикостерона с транспортерами ОСТ вовлечены еще другие домены (или домен) которые и вносят эти различия в разницу в сродстве к кортикостерону у

транспортеров hOCT3 и ЮСТЗ.

Замена выбранных нами аминокислот вносит существенный вклад в изменение сродства к кортикостерону у транспортера ЮСТ1. Обе замены (Leu447Tyr и Gln448Glu) значительно уменьшают IC5o для ингибирования транспорта TEA, но только комбинация этих двух замен вместе дает значение IC5o, которое совпадает со значением для дикого типа гОСТ2 (рисунок 14, таблица 6). В то же время, двойная замена уменьшает значение IC50 для ингибирования транспорта МРР до значения, которое все равно значительно отличается от аналогичного для ЮСТ2. И только комбинация, при которой заменены три аминокислоты одновременно A443I/L447Y/Q448E приводит к появлению высокого сродства к кортикостерону у транспортера ЮСТ1. Интересно отметить, что относительное сродство к TEA и МРР у тройного мутанта возросло в сравнении с диким типом (28 ± 3 в отличии от

75 ± 11мкМ для TEA и 1.1 ± 0.2 в отличии от 5.6 ± 1 мкМ для МРР) (рисунок 18 и 19, таблица 8). Эти данные позволяют сделать заключение, что во-первых - эти аминокислоты являются частью сайта связывания TEA и МРР у транспортера ЮСТ1, поскольку мутация с комбинацией трех аминокислот одновременно в одном витке а-спирали может увеличить сродство транспортируемого субстрата только в случае если они лежат в субстрат-связывающем центре или очень близко к нему. А во-вторых: кортикостерон взаимодействует с субстрат-связывающим центром.

Различия в значениях Ю5о для ингибирования транспорта TEA и МРР кортикостероном в случае двойного мутанта rOCT1(L447Y/Q448E) говорят о наличии аллостерических взаимодействий между транспортируемыми катионами (TEA и/или МРР) и ингибитором кортикостероном, которые требуют одновременного связывания субстрата и ингибитора. Значение IC50 для ингибирования транспорта TEA кортикостероном было в 4.5 раза ниже, чем значение IC5o для ингибирования транспорта МРР. Поскольку концентрация [14С]ТЕА=10 мкМ, которая использовалась для измерения транспорта была в ~ 1/7 раза меньше Км для ЮСТ1 дикого типа и мутанта rOCT1(L447Y/Q448E), а концентрация [3Н]МРР =0.1 мкМ была ~ 1/50 меньше Км для ЮСТ1 дикого типа и ~ 1/10 меньше чем Км для мутанта rOCT1 (L447Y/ Q448E), поэтому разницу в значениях Ю5о для этих конструктов нельзя объяснить конкурентной заменой кортикостерона на TEA и МРР. Конкурентная замена кортикостерона на TEA или МРР может увеличить значение 1С50 для ингибирования транспорта TEA на 14% и значение IC50 для транспорта МРР на 2% (ЮСТ1 дикий тип) или на 10% для rOCT1(L447Y/Q448E). Поскольку это не является причиной, то можно заключить что разные значения Ю5о, которые определены для ингибирования транспорта TEA в сравнении с ингибированием транспорта МРР кортикостероном для мутанта ЮСТ1 (L447Y/Q448E) говорят о наличии различных аллостерических эффектов для TEA в отличии от МРР на связывание кортикостерона или на наличие аллостерического эффекта для одного из этих субстратов. Довольно сложно провести границу между аллостерическим эффектом, обусловленым связыванием субстрата или изменением конформации под действием субстрата в транспортном цикле.

430 О

хо о

1о II

00 ххххх

гост 1 WLi !V Т ACLGRMGAT i VI iQMVCLVNAELYPT 150

ГОСТ 2 WLKIТIACLGRMGITMAY EMVCLVNAE L Y РТ 4-6

гОСТЗ WLRTTVATLGRLGiTVÄFKIVYLVNSELYPT 5

ьостз wlrttvatlgrlgit::afeivylwselypt 0.2

Рисунок 21. Последовательность 10 трансмембранного домена транспортеров ОСТ с фланкирующими регионами. Показаны значения 1С50 для ингибирования транспорта кортикостероном [Gründemann et al., 1998; Wu et al„ 1998; Arndt et al., 2001]. Жирным шрифтом выделены аминокислоты, которые консервативны у ЮСТ1 и по крайней мере одного из транспортеров, х- выделены аминокислоты консервативные в семействе SLC22, о- выделены аминокислоты консервативные у ОСТ транспортеров

ТМН10

Наши данные, по участию аминокислот из 10 трансмембранного домена в связывании субстрата, были подтверждены недавними исследованиями транспортеров кролика: ОСТ1 и ОСТ2, показывающими что аминокислота Glu447, которая гомологичена Glu448 у ЮСТ2, является ответственной за высокое сродство к циметидину модельного субстрата NBD-TMA у транспортера гЬОСТ2 в сравнении с rbOCH [Zhang X. et al. 2005]. Замена аминокислот в положении E447Q давала константу ингибирования, которая значительно отличалась от константы для rbOCTI, и следущая мутация - N353L не изменяла связывающих свойств транспортера гЬОСТ2. Комбинация, в которой заменялись обе аминокислоты E447Q и N353L, приводила к полному изменению сродства от типа как у дикого типа гЬОСТ2 к типу - rbOCTI. Однако надо отметить, что в случае этой замены происходит уменьшение сродства; таким образом, интерпритация этих данных самих по себе, как доказательство для участия данных аминокислот в сайте связывания должно делаться осторожно, поскольку это может быть эффектом непрямого влияния мутаций на изменение сродства (например, как результат конформационной нестабильности). Но в нашем случае, мутации наоборот приводят к увеличению сродства, что позволяет делать нам прямые заключения.

Роль аминокислот, которые были заменены в положении 447, была подтверждена тем фактом, что замена глутамата на лизин или аргинин полностью инактивировало транспортную активность этого мутанта, и мутант E447L показывал сильное уменьшение транспорта и сродства к TEA. В то же время, мутант E447L сохранял сродство к VHH и продолжал его транспортировать на нормальном уровне [Zhang X. et al. 2005]. Эти данные подтверждают гипотезу о наличии в транспортере органических катионов нескольких перекрывающихся сайтов связывания и роль аминокислоты в положении 448 (в ЮСТ1) как части

связывающего центра.

Предыдущие эксперименты на интактных ооцитах, с кратковременным

ингибированием, с применением элекрофизиологических измерений, и эксперименты с фиксированным потенциалом на мебране ориентированной внутренней стороной наружу показали, что субстрат-связывающий центр транспортера ОСТ может быть расположен как на внутреней, так и на внешней стороне ммбраны [Volk et al., 2003]. Эти эксперименты показывают, что сродство к кортикостерону и TEA у ЮСТ2 было различным на разных сторонах мембраны. Для кортикостерона было показано только частичное конкурентное ингибирование с

транспортируемыми субстратами - холином и TEA. Поскольку ингибирование кортикостероном с обоих сторон плазматической мембраны было зависимым от мембранного потенциала подобно значениям Км определенным для транспорта катионов внутрь или наружу клетки [Budiman et al., 2000; Volk et al., 2003], было высказано предположение, что кортикостерон может связываться с субстрат связывающим центром с наружней и внутренней стороны мембраны, и что связывающие центры для других субстратов частично перекрываются [Volk et al.

2003].

В последних экспериментах, выполненных в нашей группе, с применением электрических измерений мутантов ЮСТ1, содержащих мутации L447Y и Q448E с возросшим сродством к кортикостерону, было обнаружено, что эти мутации изменяют сродство к кортикостерону с обоих сторон мембраны - внутри- и внеклеточной. Поскольку маловероятно, что две соседних аминокислоты могут принимать участие в двух различных сайтах связывания (внутри- и внеклеточном) то, исходя из наших данных можно предположить, наличие одного связывающего центра, который может быть в двух конформациях: обращенным наружу и внутрь клетки, что более вероятно, чем присутствие двух различных связывающих центров [Volk С. and Koepsell Н., неопубликованные данные].

Поскольку кортикостерон гидрофобен то, в экспериментах с клетками или ооцитами, он может проникать внутрь и взаимодействовать с обеих сторон мембраны. Эксперименты с ингибированием, которые представлены в данной работе, не позволяют нам различить изменили ли мутации сродство к кортикостерону с внутренней или с внешней стороны субстрат-связывающего центра или поменялось сродство с обеих сторон. Поскольку мы использовали 30 минутный период инкубации в присутствии кортикостерона для измерения транспорта, и прединкубировали ооциты с необходимыми концентрациями, то концентрация кортикостерона была одинаковой и снаружи и внутри ооцитов за этот период. Наиболее вероятно, что наши измерения характеризуют сайт связывания кортикостерона в информации обращенной внутрь ооцита, поскольку эта информация имеет более высокое сродство к кортикостерону [Arndt et al., 2001; Volk et al., 2003]. Это предположение подтверждается тем фактом, что значение Ю50 для ингибирования кортикостероном транспорта катионов в условиях, когда концентрация ингибитора уравновешена снаружи и внутри клетки, было равным

значению 1С50, полученному после короткого применения кортикостерона к внутриклеточной стороне плазматической мембраны.

Различное влияние аминокислот, рассмотренных в данной работе, исследовалось не только в нашей лаборатории. При исследовании влияния на транспорт аминокислот из 4 трансмембранного домена белка ЮСТ1, было обнаружено, что замены Тгр218 на тирозин и Туг222 на лейцин приводят к значительному уменьшению сродства к TEA и МРР, в то время как замены Y222 на фенилаланин и Т226 на аланин уменьшают сродство только TEA или МРР, соответственно [Рорр et al„ 2005]. Более ранние исследования влияния аминокислот на изменение транспорта гОСТ1 показали, что у мутанта D475E сродство к TEA и некоторым ингибиторам значительно возросло, но при этом это никак не изменило его взаимодействие с МРР [Gorboulev et al„ 1999].

Дальнейшие исследования подтвердили, что аминокислота Asp475 играет ключевую роль в субстрат-связывающем центре у транспортеров OCT [Wolf et al„ 2001] также как и аминокислота в гомологичной позиции у всех транспортеров субсемейства ОАТ, которая обычно бывает положительно заряженной. Например, мутант R478D транспортера камбалы ОАТ1 поддерживал транспорт моновалентного аниона РАН (хотя и с меньшей скоростью в сравнении с транспортером дикого типа). Также в этой работе были отмечены похожие эффекты, обнаруженные у ортолога ОАТ1 крысы, при взаимодействии с различными субстратами, был использован метод, при котором производились точечные мутации, для определения аминокислот, которые влияют на транспортную активность ЮАТЗ. Гомологичная замена в транспортере ЮАТЗ (R454D) привела к сильному изменению во взаимодействии с РАН [Feng et al., 2001], а при замене нескольких гидрофобных аминокислот в 7 трансмембраннном домене (W334A, F335A, Y341A, и Y342Q) и одной в 8 трансмембраннном домене (F362S) происходило заметное уменьшение транспорта РАН и циметидина, и небольшое влияние на транспорт более гидрофобного субстрата сульфата эстрона [Feng et al., 2002]. Что позволяет сделать вывод, что структура транспортера ОАТЗ имеет основной связывпающий домен, а не отдельный сайт связывания.

В последнее время были получены кристаллические структуры транспотеров суперсемейства MFS: пермеазы лактозы LacY [Abramson et al., 2003] и глицерин-3-фосфат транспортера GIpT [Huang et al., 2003]. Обе структуры имеют очень похожую укладку что позволяет заключить, что структура транспортеров

этого

суперсемейства довольно консервативна [Vardy et al. 2004]. Исходя из этого, в нашей группе была построена трехмерная модель структуры транспортера ЮСТ1 с помощью гомологичного моделирования [Popp et al., 2005] (Рисунок 22). Моделью для построения кристаллической структуры послужила структура транспортера LacY которая имеет 29% сходства с транспортером ЮСТ1.

Как видно из рисунков 22 и 23 на модели транспортера ЮСТ1 имеется большая полость которая доступна с внутриклеточной стороны мембраны. Эта полость в молекуле ЮСТ1 формируется трансмембранными доменами: 1, 2, 4, 5, 7, 8, 10 и 11. Подтверждением этой модели является тот факт, что было определено, что аминокислоты W218, Y222 и Т226 из 4-го трансмембранного домена, находятся в сайте связывания [Popp et al. 2005]; также как и аминокислоты А443, L447 и Q448, которые описаны в настоящей работе, из 10-го трансмембранного домена, и аминокислота D475 из 11-го трансмембранного домена, которая была исследована ранее [Gorboulev et al. 1999] все находятся в этой полости. Интересно отметить, что в соответсвии с моделью эти аминокислоты находятся на одинаковом уровне в этой большой полости. Они могут являться частью субстрат-связывающего центра, находящегося здесь. При сравнении размеров полости с размерами молекул ТЕА, МРР и кортикостерона видно, что размеры позволяют связывание более чем одной молекулы одновременно [Popp et al. 2005].

Рисунок 22. Структурная модель транспортера гОСТ1(из Popp et al. 2005).

A, модель транспортера ЮСТ1, с отмеченными номерами доменов.

B, молекулярные структуры ТЕА, МРР и кортикостерона, с относительными размерами относительно модели ЮСТ1.

Рисунок 23. Структурная модель транспортера ЮСТ1, показывающая полость транспортера с выделенными аминокислотами, входящими в сайт-связывания.

Описанный выше аллостерический эффект может быть обусловлен взаимодействием между субстрат-связывающими центрами в молекуле мономера или димера транспортера, между существующими субстрат-связывающими центрами мономера транспортера или кратковременными взаимодействиями между TEA (и/или МРР) и кортикостеронав одном сязывающем центре. Несмотря на необходимость дальнейших экспериментов для выяснения четких различий между этими возможностями, мы предполагаем что коротковременные аллостерические взаимодействия в одном субстрат-связывающем центре - являются наиболее возможным объяснением.

Трехмерная модель транспортера ЮСТ1 подтверждает наличие только одного субстрат-связывающего центра у мономера ЮСТ1 и показывает, что аминокислоты в сязывающем центре, которые важны для связывания TEA и кортикостерона, находятся на достаточном растоянии для одновременного связыания этих соединений. В трехмерной модели ЮСТ1 расположение 10-го домена, входящего в полость, позволяет кортикостерону взаимодействовать с аминокислотами L447 и Q448.

Аллостерические взаимодействия между катионом, связавшимся с одной молекулой транспортера ЮСТ1-мономера и кортикостероном связазавшимся с другой молекулой транспортера ЮСТ1-мономера в димере или олигомере менее вероятны, поскольку взаимодействия наблюдались после мутации в связывающем центре транспортера ЮСТ1 [в мутанте rOCT1(L447Y/Q448E)]. В настоящей работе, аллостерический эффект между двумя лигандами наблюдался у мутанта ЮСТ1 (L447Y/Q448E), но не у дикого типа ЮСТ1. Это показывает, что для аалостерических взаимодействий необходимо взаимодействие между аминокислотами 447Y и 448Е в структуре молекулы ЮСТ1. Однако, поскольку мы наблюдали аллостерические взаимодействия на МРР и других субстратах на диком типе человеческого транспортера ОСТ1 и ОСТЗ [U. Roth and Н. Koepsell, неопубликованные данные] мы интерпретируем аллостерические взаимодействия которые наблюдались у мутанта rOCT1(L447Y/Q448E) как демонстрацию утверждения описанного выше (т.е, что лиганды связывающиеся с субстрат-связывающим центром ОСТ могут демонстрировать аллостерические взаимодействия).

Картирование поверхности субстрат-связывающего центра транспортеров ОСТ при помощи кристаллизации комплекса лиганда с транспортером и с помощью

характеризации точечных мутаций, может помочь при разработке лекарств, которые будут транспортироваться определенными субтипами ОСТ, ингибировать определенные ОСТ или не взаимодействовать с выбранными субтипами транспортеров. Это поможет влиять на адсорбцию лекарств в тонком кишечнике и на их почечнуюи печеночную экскрецию и, таким образом, модулировать физиологические функции, которые контролируются транспортерами ОСТ. Взаимодействие кортикостерона и других глюкокортикоидов с транспортерами ОСТ имеет важное значение для клинической практики. Например, ОСТ1 и ОСТ2 отвечают за люминальное высвобождение ацетилхолина из бронхиального эпителия в легких, и аэрозоли, содержащие глюкокортикоид будезонид возможно ингибируют эту функцию [Lips К. et al, 2005]. Взаимодействие кортикостероидов с hOCT3 наиболее вероятно, поскольку этот транспортер имеет самое большое сродство к кортикостерону среди ОСТ. Подобно другим белкам OCT, hOCT3 переносит моноаминонейротрансмиттеры. Среди других белков, экспрессирующихся в клетках гладкой мускулатуры кровеносных сосудов и нейронов головного мозга присутствует и hOCT3 [Slitt et al., 2002; Horvath et al., 2003; Schmitt et al., 2003; Vialou et al., 2004]. Ингибирование hOCT3 может приводить к повышению артериального давления и к изменению поведения [Vialou et al., 2004].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шацкая, Наталья Владимировна, 2006 год

Литература:

1. Abramson, J., Smirnova, I., Kasho, V., Verner, G„ Kaback, H.R., Iwata, S (2003). Structure and mechanism of the lactose permease of Escherichia coli. Science 301, 610-615.

2. Alnouti Y, Petrick JS, Klaassen CD (2006). Tissue distribution and ontogeny of organic cation transporters in mice. Drug Metab Dispos 34(3):477-482.

3. Ambudkar SV, Kimchi-Sarfaty C, Sauna ZE, Gottesman MM. (2003). P-glycoprotein: from genomics to mechanism. Oncogene 22(47):7468-7485.

4. Arndt, P., Volk, C„ Gorboulev, V., Budiman, T„ Popp, C„ Ulzheimer- Teuber, I., Akhoundova, A„ Koppatz, S„ Bamberg, E., Nagel, G„ Koepsell, H. (2001). Interaction of cations, anions, and weak base quinine with rat renal cation transporter rOCT2 compared with rOCT1. Am Jour Physiol: Renal Physiol 281: F454- F468.

5. Bahn A, Prawitt D, Buttler D, Reid G, Enklaar T, Wolff NA, Ebbinghaus C, Hillemann A, Schulten H-J, Gunawan B, Fazesi L, Zabel B, Burckhardt G (2000). Genomic structure and in vivo expression of the human organic anion transporter 1 (hOAT1) gene. Biochem Biophys Res Commun 275:623-630.

6. Barendt WM, Wright SH (2002). The human organic cation transporter (hOCT2) recognizes the degree of substrate ionization. Jour Biol Chem 277:2249122496.

7. Bendayan, R„ Sullivan, J.T., Shaw, C„ Frecker, R.C., Sellers, E.M. (1990). Effect of Cimetidine and ranitidine on the hepatic and renal elimination of nicotine in humans. Eur. Jour Clin Pharmacol 38, 165- 169.

8. Borst SE, Snellen H G (2001). Metformin, but not exercise training, increases insulin responsiveness in skeletal muscle of Sprague-Dawley rats. Life Sci 69:1497-1507.

9. Briz O, Serrano MA, Rebollo N, Hagenbuch B, Meier PJ, Koepsell H, Marin JJG (2002). Carriers involved in targeting the cytostatic bile acid-cisplatin derivatives cis-diammine-chloro-cholylglycinate-platinum( II) and cis- diammine-bisursodeoxycholate-platinum(ll) toward liver cells. Mol Pharmacol 61:853-860.

10.Budiman T, Bamberg E, Koepsell H, Nagel G (2000). Mechanism of electrogenic cation transport by the cloned organic cation transporter 2 from rat. Jour Biol Chem 275:29413-29420.

11. Busch AE, Quester S, Ulzheimer JC, Waldegger S, Gorboulev V, Arndt P, Lang F, Koepsell H (1996a). Electrogenic properties and substrate specificity of the polyspecific rat cation transporter rOCT1. Jour Biol Chem 271:32599-32604.

12. Busch AE, Quester S, Ulzheimer J C, Gorboulev V, Akhoundova A, Waldegger S, Lang F, Koepsell H (1996b). Monoamine neurotransmitter transport mediated by the polyspecific cation transporter rOCT1. FEBS Lett 395:153156.

13. Busch AE, Karbach U, Miska D, Gorboulev V, Akhoundova A, Volk C, Arndt P, Ulzheimer J C, Sonders M S, Baumann C, Waldegger S, Lang F, Koepsell H (1998). Human neurons express the polyspecific cation transporter hOCT2, which translocates monoamine neurotransmitters, amantadine, and memantine. Mol Pharmacol 54:342-352.

14. Cargill M, Altshuler D, Ireland J, Sklar P, Ardlie K, Patil N, Lane CR, Lim EP, Kalyanaraman N, Nemesh J, Ziaugra L, Friedland L, Rolfe A, Warrington J, Lipshutz R, Daley GQ, Lander ES (1999). Characterization of single-nucleotide polymorphisms in coding regions of human genes. Nat Genet. 22:231-238.

15. Caspary WF, Creutzfeldt W (1971). Analysis of the inhibitory effect of biguanides on glucose absorption: inhibition of active sugar transport. Diabetologia. 7:379-385.

16.Cha SH, Sekine T, Kusuhara H, Yu E, Kim JY, Kim DK, Sugiyama Y, Kanai Y, Endou H (2000). Molecular cloning and characterization of multispecific organic anion transporter 4 expressed in the placenta. J Biol Chem. 275:4507-4512.

17.Cha SH, Sekine T, Fukushima J-l, Kanai Y, Kobayashi Y, Goya T, Endou H (2001). Identification and characterization of human organic anion transporter 3 expressing predominantly in the kidney. Mol Pharmacol. 59:1277-1286.

18. Chen JJ, Li Z, Pan H, Murphy DL, Tamir H, Koepsell H, Gershon MD (2001). Maintenance of serotonin in the intestinal mucosa and ganglia of mice that lack the high-affinity serotonin transporter: abnormal intestinal motility and the expression of cation transporters. J Neurosci. 21:6348-6361.

19. Chen R, Jonker JW, Nelson J A (2002). Renal organic cation and nucleoside transport. Biochem Pharmacol. 64:185-190.

20. Dantzler, W.H., Wright, S.H. (1997). Renal tubular transport of organic anions and cations. In: Goldstein, R.S. (Ed.), Comprehensive Toxicology. V.7. Renal Toxicology. Pergamon, New York, pp. 61-75.

21. Davidson MB, Peters AL (1997). An overview of metformin in the treatment of type 2 diabetes mellitus. Am J Med. 102:99-110.

22. Döring F, Dorn D, Bachfischer U, Amasheh S, Herget M, Daniel H (1996). Functional analysis of a chimeric mammalian peptide transporter derived from the intestinal and renal isoforms. J Physiol. 497(3):773-9.

23. Dresser MJ, Gray AT, Giacomini KM (2000). Kinetic and selectivity differences between rodent, rabbit, and human organic cation transporters (OCT1). J Pharmacol Exp Ther. 292:1146-1152.

24. Dresser MJ, Xiao G, Leabman MK, Gray AT, Giacomini KM (2002). Interactions of n-tetraalkylammonium compounds and biguanides with a human renal organic cation transporter (hOCT2). Pharmac Res. 19:1244-1247.

25. Eisenhofer G (2001). The role of neuronal and extraneuronal plasma membrane transporters in the inactivation of peripheral catecholamines. Pharmacol Ther. 91:35-62.

26. Elferink RPJO, Meijer DKF, Kuipers F, Jansen PLM, Groen AK, Groothuis GMM (1995). Hepatobiliary secretion of organic compounds; molecular mechanisms of membrane transport. Biochim Biophys Acta. 1241:215-268.

27. El-Mir M-Y, Nogueira V, Fontaine E, Averet N, Rigoulet M, Leverve X (2000). Dimethylbiguanide inhibits cell respiration via an indirect effect targeted on the respiratory chain complex I. J Biol Chem. 275:223-228.

28. Enomoto A, Kimura H, Chairoungdua A, Shigeta Y, Jutabha P, Cha SH, Hosoyamada M, Takeda M, Sekine T, Igarashi T, Matsuo H, Kikuchi Y, Oda T, Ichida K, Hosoya T, Shimokata K, Niwa T, Kanai Y, Endou H (2002). Molecular identification of a renal urate-anion exchanger that regulates blood urate levels. Nature 417:447-452.

29.Eraly SA, Nigam SK (2002). Novel human cDNAs homologous to drosophila Orct and mammalian carnitine transporters. Biochem Biophys Res Commun. 297:1159-1166.

30. Feng B, Dresser MJ, Shu Y, Johns SJ, Giacomini KM (2001). Arginine 454 and lysine 370 are essential for the anion specificity of the organic anion transporter, rOAT3. Biochemistry. 40:5511-5520.

31. Feng B., Shu Y., Giacomini K. (2002). Role of aromatic transmembrane residues of the organic anion transporter, rOAT3, in substrate recognition. Biochemistry. 41:8941-8947.

32. Ciarimboli G, Struwe K, Arndt P, Gorboulev V, Koepsell H, Schlatter E, Hirsch JR (2004). Regulation of the human organic cation transporter hOCT1. Journal of Cellular Physiology. 201(3):420-428.

33.Ciarimboli G, Ludwig T, Lang D, Pavenstädt H, Koepsell H, Piechota HJ, Haier J, Jaehde U, Zisowsky J, and Schlatter E (2005). Cisplatin Nephrotoxicity Is Critically Mediated via the Human Organic Cation Transporter 2. American Journal of Pathology. 167:1477-1484.

34.Gorboulev V, Ulzheimer JC, Akhoundova A, Ulzheimer-Teuber I, Karbach U, Quester S, Baumann C, Lang F, Busch AE, Koepsell H. (1997). Cloning and characterization of two human polyspecific organic cation transporters. DNA Cell Biol. 16:871-881.

35. Gorboulev V, Volk C, Arndt P, Akhoundova A, Koepsell H (1999). Selectivity of the polyspecific cation transporter rOCT1 is changed by mutation of aspartate 475 to glutamate. Mol Pharmacol. 56:1254-1261.

36.Graefe KH, Bonisch H (1988). The transport of amines across the axonal membranes of noradrenergic and dopaminergic neurones. In Trendelenburg U. and Weiner N. (eds), Handbook of experimental pharmacology. Catecholamines I. Springer-Verlag, Berlin, pp 193-245.

37. Gründemann D, Gorboulev V, Gambaryan S, Veyhl M, Koepsell H. (1994). Drug excretion mediated by a new prototype of polyspecific transporter. Nature. 372:549-52.

38..

39. Gründemann D, Babin-Ebell J, Martel F, Ording N, Schmidt A, Schomig E (1997). Primary structure and functional expression of the apical organic cation transporter from kidney epithelial LLC-PK1 cells. J Biol Chem. 272:1040810413.

40. Grundemann D, Schechinger B, Rappold GA, Schomig E (1998a). Molecular identification of the corticosterone- sensitive extraneuronal catecholamine transporter. Nature neurosci. 1:349-352.

41 .Grundemann D, Koster S, Kiefer N, BreidertT, Engelhardt M, Spitzenberger F, Obermaller N, Schomig E (1998b). Transport of monoamine transmitters by the organic cation transporter type 2, OCT2. J Biol Chem. 273:30915-30920.

42. Grundemann D, Schomig E (2000). Gene structures of the human nonneuronal monoamine transportersEMT and OCT2. Hum Genet. 106:627-635.

43.Halushka MK, Fan J-B, Bentley K, Hsie L, Shen N, Weder A, Cooper R, Lipshutz R, Chakravarti A (1999). Patterns of single-nucleotide polymorphisms in candidate genes for blood-pressure homeostasis. Nat Genet. 22:239-247.

44. Hayer M, Bonisch H, Brass M (1999). Molecular cloning, functional characterization and genomic organization of four alternatively spliced isoforms of the human organic cation transporter 1 (hOCT1/ SLC22A1). Ann Hum Genet. 63:473-482.

45.Hayer-Zillgen M, Brass M, Bonisch H (2002). Expression and pharmacological profile of the human organic cation transporters hOCT1, hOCT2 and hOCT3. Br J Pharmacol. 136:829-836.

46. Henderson P. J. F and M. C. J. Maiden. (1990). Homologous sugar transport proteins in Escherichia coli and their relatives in both prokaryotes and eukaryotes. Philos. Trans. R. Soc. London Ser. B. 326:391-410.

47.Hosoyamada M, Sekine T, Kanai Y, Endou H (1999). Molecular cloning and functional expression of a multispecific organic anion transporter from human kidney. Am J Physiol Renal Physiol. 276:122-128.

48.Hundal RS, Krssak M, Dufour S, Laurent D, Lebon V, Chandramouli V, Inzucchi SE, Schumann WC, Petersen KF, Landau BR, Shulman Gl (2000). Mechanism

by which metformin reduces glucose production in type 2 diabetes. Diabetes. 49:2063-2069.

49. Ji L, Masuda S, Saito H, Inui К (2002). Downregulation of rat organic cation transporter ЮСТ2 by 5/6 nephrectomy. Kidney Int. 62:514-524.

50.Kakehi M, Koyabu N, Nakamura T, Uchiumi T, Kuwano M, Ohtani H, Sawada Y (2002). Functional characterization of mouse cation transporter mOCT2 compared with mOCT1. Biochem Biophys Res Commun. 296:644-650.

51.Karbach U, Kricke J, Meyer-Wentrup F, Gorboulev V, Volk C, Loffing-Cueni D, Kaissling B, Bachmann S, Koepsell H (2000). Localization of organic cation transporters OCT1 and OCT2 in rat kidney. Am J Physiol Renal Physiol. 279:679-687.

52.Kekuda R, Prasad PD, Wu X, Wang H, Fei YJ, Leibach FH, Ganapathy V. (1998). Cloning and functional characterization of a potential-sensitive, polyspecific organic cation transporter (OCT3) most abundantly expressed in placenta. J Biol Chem. 273:15971-9.

53.Kerb R, Brinkmann U, Chatskaia N, Gorbunov D, Gorboulev V, Mornhinweg E, Keil A, Eichelbaum M, Koepsell H (2002). Identification of genetic variations of the human organic cation transporter hOCT1 and their functional consequences. Pharmacogenetics. 12:591-595.

54.Khamdang S, Takeda M, Noshiro R, Narikawa S, Enomoto A, Anzai N, Piyachaturawat P, Endou H (2002). Interactions of human organic anion transporters and human organic cation transporters with nonsteroidal antiinflammatory drugs. J Pharmacol Exp Ther. 303:534-539.

55.Kimelblatt BJ, Cerra F B, Calleri G, Berg MJ, McMillen MA, Schentag JJ (1980). Dose and serum concentration relationships in cimetidine-associated mental confusion. Gastroenterology. 78:791-795.

56. Koehler MR, Wissinger B, Gorboulev V, Koepsell H, Schmid M (1997). The two human organic cation transporter genes SLC22A1 and SLC22A2 are located on chromosome 6q26. Cytogenet Cell Genet. 79:198-200.

57. Koepsell H, Schmitt BM, Gorboulev V (2003). Organic cation transporters. Rev Physiol Biochem. Pharmacol. 150:36-90.

58. Koepsell H. (2004). Polyspecific organic cation transporters: their functions and interactions with drugs. Trends Pharmacol Sci. 25(7):375-381.

59. Koepsell H and Endou H (2004). The SLC22 drug transporter family. Pflugers Arch - Eur J Physiol. 447:666-676.

60. Kwong SC, Brubacher J (1998). Phenformin and lactic acidosis: a case report and review. J Emerg Med. 16:881-886.

61.Leabman MK, Huang CC, Kawamoto M, Johns SJ, Stryke D, Ferrin TE, DeYoung J, Taylor T, Clark AG, Herskowitz I, Giacomini KM. (2002). Polymorphisms in a human kidney xenobiotic transporter, OCT2, exhibit altered function. Pharmacogenetics. 12:395-405.

62. De La Horra C, hernando N, Lambert G, Forster I, Biber J, Murer H (2000). Molecular determinants of pH sensitivity of the Type I la Na/P(i) cotransporter. Jour Biol Chem. 275(9):6284-6287.

63.Lecureur V, Guillouzo A, Fardel O (1998). Differential expression of the polyspecific drug transporterOCTI in rat hepatocarcinoma cells. Cancer Lett. 126:227-233.

64. Lips K, Volk C, Schmitt B, Pfeil U, Arndt P, miska D, Ermert L, KummerW, Koepsell H (2006). Polyspecific cation trasnporters mediate luminal release of acetylcholine from bronchial epithelium. Am J Respir Cell Mol Biol. 33:79-88.

65. Mehrens T, Lelleck S, Aetinkaya I, Knollmann M, Hohage H, Gorboulev V, Boknik P, Koepsell H, Schlatter E (2000). The affinity of the organic cation transporter rOCT1 is increased by protein kinase C-dependent phosphorylation. J Am Soc Nephrol. 11:1216-1224.

66.Meyer-Wentrup F, Karbach U, Gorboulev V, Arndt P, Koepsell H (1998). Membrane localization of the electrogenic cation transporter rOCT1 in rat liver. Biochem Biophys Res Commun. 248:673-678.

67. Miller C. (2000). Ion channels: doing hard chemistry with hard ions. Curr Opin Chem Biol. 4(2):148-151.

68.Mooslehner KA, Allen ND (1999). Cloning of the mouse organic cation transporter 2 gene, Slc22a2, from an enhancer-trap transgene integration locus. Mamm Genome. 10:218-224.

69.Motohashi H, Sakurai Y, Saito H, Masuda S, Urakami Y, Goto M, Fukatsu A, Ogawa O, Inui Kl (2002). Gene expression levels and immunolocalization of organic ion transporters in the human kidney. J Am Soc Nephrol. 13:866-874.

70. Müller J, Lips K, Metzner L, Neubert R, Koepsell H, Brandsch M (2005). Drug specificity and intestinal membrane localization of human organic cation trasnporters (OCT). Bioch. Pharmac. 70:1851-1860.

71. Nagel G, Volk C, Friedrich T, Ulzheimer J C, Bamberg E, Koepsell H (1997). A réévaluation of substrate specificity of the rat cation transporter rOCT1. J Biol Chem. 272:31953-31956.

72. Nestler JE. (2001). Metformin and the polycystic ovary syndrome. J Clin Endocrinol Metab. 86:1430.

73. Nishiwaki T, Daigo Y, Tamari M, Fujii Y, Nakamura Y (1998). Molecular cloning, mapping, and characterization of two novel human genes, ORCTL3 and

0RCTL4, bearing homology to organic-cation transporters. Cytogenet Cell Genet. 83:251-255.

74.0kuda M, Saito H, Urakami Y, Takano M, Inui K. (1996). cDNA cloning and functional expression of a novel rat kidney organic cation transporter, OCT2. Biochem. Biophys. Res. Commun. 224:500-507.

75.0kuda M, Urakami Y, Saito H, Inui K-l (1999). Molecular mechanisms of organic cation transport in OCT2-expressing Xenopus oocytes. Biochim Biophys Acta. 1417:224-231.

76. Owen MR, Doran E, Halestrap AP (2000). Evidence that metformin exerts its antidiabetic effects through inhibition of complex 1 of the mitochondrial respiratory chain. Biochem J. 348:607-614.

77. Pao SS, Paulsen IT, and Saier MH (1998). Major facilitator superfamily. Microbiol Mol Biol Rev. 62: 1-34.

78. Paulsen IT (2003). Multidrug efflux pumps and resistance: regulation and evolution. CurrOpin Microbiol. 6(5):446-451.

79. Pietig G, Mehrens T, Hirsch JR, Aetinkaya I, Piechota H, Schlatter E (2001). Properties and regulation of organic cation transport in freshly isolated human proximal tubules. J Biol Chem. 276:33741-33746.

80. Popp C, Gorboulev V, MullerTD, Gorbunov D, Shatskaya N, Koepsell H. (2005). Amino acids critical for substrate affinity of rat organic cation transporter 1 line the substrate binding region in a model derived from the tertiary structure of lactose permease. Mol Pharmacol. 67(5):1600-1611.

81.Reid G, Wolff NA, Dautzenberg FM, Burckhard G (1998). Cloning of a human renal p-aminohippurate transporter, hROATl Kidney Blood Press Res. 21:233-237.

82. Reidenberg, M.M., Camacho, M., Kluger, J., Drayer, D.E. (1980). Aging and renal clearance of procainamide and acetylprocainamide. Clin. Pharmacol. Ther. 28: 732- 735.

83.Roch-Ramel F, Besseghir K, Murer H (1992). Renal excretion and tubular transport of organic anions and cations. In Windhager EE (ed) Handbook of physiology (a critical, comprehensive presentation of physiological knowledge and concepts). Oxford University Press, New York, Oxford, pp 2189-2262.

84. Saier MH (2000). A functional-phylogenetic classification system for transmembrane solute transporters. Microbiol. Mol Biol Rev. 64:354-411.

85.Schentag J J, Cerra FB, Calleri G, DeGlopper E, Rose JQ, Bernhard H (1979). Pharmacokinetic and clinical studies in patients with cimetidine-associated mental confusion. Lancet. 1:177-181.

86.Schweifer N, Barlow DP (1996). The Lx1 gene maps to mouse chromosome 17 and codes for a protein that is homologous to glucose and polyspecific transmembrane transporters. Mamm Genome. 7:735-740.

87.Sekine T, Watanabe N, Hosoyamada M, Kanai Y, Endou H (1997). Expression cloning and characterization of a novel multispecific organic anion transporter. J Biol Chem. 272:18526-18529.

88.Sekine T, Kusuhara H, Utsunomiya-Tate N, Tsuda M, Sugiyama Y, Kanai Y, Endou H (1998). Molecular cloning and characterization of high-affinity carnitine transporter from rat intestine. Biochem Biophys Res Commun. 251:586-591.

89. Slitt AL, Cherringtion NJ, Hartley DP, LeazerTM, Klaassen CD (2002). Tissue distribution and renal developmental changes in rat organic cation transporter mRNA levels. Drug Metab Dispos. 30:212-219.

90.Somogyi A., Heinzow B (1982). Cimetidine reduces procainamide elimination. N. Engl. J. Med. 307: 1080.

91.Somogyi, A., McLean, A., Heinzow, B. (1983). Cimetidine-procainamide pharmacokinetic interaction on man: evidence of competition for tubular secretion of basic drugs. Eur. J. Clin. Pharmacol. 25: 339-345.

92.Sugawara-Yokoo M, Urakami Y, Koyama H, Fujikura K, Masuda S, Saito H, Naruse T, Inui K-l, Takata K (2000). Differential localization of organic cation transporters rOCT1 and rOCT2 in the basolateral membrane of rat kidney proximal tubules. Histochem Cell Biol. 114:175-180.

93. Sun W, Wu RR, van Poelje PD, Erion MD (2001). Isolation of a family of organic anion transporters from human liver and kidney. Biochem Biophys Res Commun. 283:417-422.

94. Sweet DH, Wolff NA, Pritchard JB (1997). Expression cloning and characterization of ROAT1, the basolateral organic anion transporter in rat kidney. J Biol Chem. 272:30088-30095.

95.Takeda M, Khamdang S, Narikawa S, Kimura H, Kobayashi Y, Yamamoto T, Cha SH, Sekine T, Endou H (2002). Human organic anion transporters and human organic cation transporters mediate renal antiviral transport. J Pharmacol Exp Ther. 300:918-924.

96.Tamai I, Yabuuchi H, Nezu J-l, Sai Y, Oku A, Shimane M, Tsuji A (1997). Cloning and characterization of a novel human pH-dependent organic cation transporter, OCTN1. FEBS Letters. 419:107-111.

97.Tamai I, Ohashi R, Nezu J-l, Yabuuchi H, Oku A, Shimane M, Sai Y, Tsuji A (1998). Molecular and functional identification of sodium ion-dependent, high affinity human carnitine transporter OCTN2. J Biol Chem. 273:20378-20382.

98.Tamai I, Ohashi R, Nezu J-l, Sai Y, Kobayashi D, Oku A, Shimane M, Tsuji A (2000). Molecular and functional characterization of organic cation/carnitine transporter family in mice. J Biol Chem. 275:40064-40072.

99.Terashita S, Dresser MJ, Zhang L, Gray AT, Yost SC, Giacomini KM (1998). Molecular cloning and functional expression of a rabbit renal organic cation transporter. Biochim BiophysActa. 1369:1-6.

100. Turnheim K, Lauterbach FO (1977). Absorption and secretion of monoquaternary ammonium compounds by the isolated intestinal mucosa. Biochem Pharmac. 26:99-108.

101. Ullrich, K.J. (1994). Specificity of transporters for dorganic anionsT and dorganic cationsT in the kidney. Biochim. Biophys. Acta. 1197, 45-62.

102. Urakami Y, Nakamura N, Takahashi K, Okuda M, Saito H, Hashimoto Y, Inui K-l (1999). Gender differences in expression of organic cation transporter OCT2 in rat kidney. FEBS Lett. 461:339-342.

103. Urakami Y, Okuda M, Saito H, Inui Kl (2000). Hormonal regulation of organic cation Transporter OCT2 expression in rat kidney. FEBS Lett. 473:173176.

104. Urakami Y, Akazawa M, Saito H, Okuda M, Inui K-l (2002). cDNA cloning, functional characterization, and tissue distribution of an alternatively spliced variant of organic cation transporter hOCT2 predominantly expressed in the human kidney. J Am Soc Nephrol. 13:1703-1710.

105. Van Montfoort JE, Mailer M, Groothuis GMM, Meijer DKF, Koepsell H, Meier PJ (2001). Comparison of "type I" and "type II" organic cation transport by organic cation transporters and organic anion-transporting polypeptides. J Pharmacol Exp Ther. 298:110-115.

106. Vardy E, Arkin I, Gottschalk K, Kaback R, Schuldiner S (2004). Structural conservation in the major facilitator superfamily as revealed by comparative modeling. Protein Science, 13:1832-1840.

107. Velazquez EM, Mendoza S, Hamer T, Sosa F, Glueck CJ (1994). Metformin therapy in polycystic ovary syndrome reduces hyperinsulinemia,

insulin resistance, hyperandrogenemia, and systolic blood pressure, while facilitating normal menses and pregnancy. Metabolism. 43:647-654.

108. Verhaagh S, Schweifer N, Barlow DP, Zwart R (1999). Cloning of the mouse and human solute carrier 22a3 (Slc22a3/SLC22A3) identifies a conserved cluster of three organic cation transporters on mouse chromosome 17 and human 6q26-q27. Genomics. 55:209-218.

109. Wallace D.M (1987). Large- and small-scale phenol extractions. In Methods Enzymol 152: 33-41.

110. Wessler I, Kirkpatrick CJ, Racke K (1999). The cholinergic "pitfall": acetylcholine, a universal cell molecule in biological systems, including humans. Clin Exp Pharmacol Physiol. 26:198-205.

111. Wessler I, Roth E, Schwarze S, Weikel W, Bittinger F, Kirkpatrick CJ, Kilbinger H (2001). Release of nonneuronal acetylcholine from the human placenta: difference to neuronal acetylcholine. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 364:205-212.

112. Wolff NA, Werner A, Burkhardt S, Burckhardt G (1997). Expression, cloning and characterization of a renal organic anion transporter from winter flounder. FEBS Letters. 417:287-291.

113. Wolff NA, Granwald B, Friedrich B, Lang F, Godehardt S, Burckhardt G (2001). Cationic amino acids involved in dicarboxylate binding of the flounder renal organic anion transporter. J Am Soc Nephrol. 12:2012-2018.

114. Wright SH, Dantzler WH (2004). Molecular and cellular physiology of renal organic cation and anion transport. Physiol Rev. 84:987-1049.

115. Wu X, Kekuda R, Huang W, Fei YJ, Leibach FH, Chen J, Conway SJ, Ganapathy V. (1998). Identity of the organic cation transporter OCT3 as the

extraneuronal monoamine transporter (uptake2) and evidence for the expression of the transporter in the brain. J Biol Chem. 273:32776-32786.

116. Wu X, George RL, Huang W, Wang H, Conway SJ, Leibach FH, Ganapathy V. (2000a). Structural and functional characteristics and tissue distribution pattern of rat OCTN1, an organic cation transporter, cloned from placenta. Biochimica et Biophysica Acta. 1466:315-327.

117. Wu X, Huang W, Ganapathy ME, Wang H, Kekuda R, Conway SJ, Leibach FH, Ganapathy V (2000b). Structure, function, and regional distribution of the organic cation transporter OCT3 in the kidney. American Journal of Physiology . Renal Physiology. 279:449-458.

118. Yabuuchi H, Tamai I, Nezu J-l, Sakamoto K, Oku A, Shimane M, Sai Y, Tsuji A (1999). Novel membrane transporter OCTN1 mediates multispecific, bidirectional, and pH-dependent transport of organic cations. The Journal of pharmacology and experimental therapeutics. 289:768-773.

119. Yonezawa A, Masuda S, Nishihara K, Yano I, Katsura T, and Inui K (2005). Association between tubular toxicity of cisplatin and expression of organic cation transporter rOCT2 (Slc22a2) in the rat. Biochemical Pharmacology. 70(12): 1823-1831.

120. Youngblood G. and Sweet D. (2004). Identification and functional assessment of the novel murine organic anion transporter Oat5 (Slc22a19) expressed in kidney. American Journal of Physiology. Renal Physiology. 287:236-244.

121. Zhang L, Dresser MJ, Gray AT, Yost SC, Terashita S, Giacomini K M (1997a). Cloning and functional expression of a human liver organic cation transporter. Mol Pharmacol. 51:913-921.

122. Zhang L, Dresser MJ, Chun JK, Babbitt PC, Giacomini KM (1997b). Cloning and functional characterization of a rat renal organic cation transporter isoform (rOCTIA). J Biol Chem. 272:16548-16554.

123. Zhang L, Schaner ME, Giacomini KM (1998). Functional characterization of an organic cation transporter (hOCT1) in a transiently transfected human cell line (HeLa). J Pharmacol Exp Ther 286:354-361.

124. Zhang L, Gorset W, Dresser MJ, Giacomini KM (1999). The interaction of n-tetra-alkylammonium compounds with a human organic cation transporter, hOCT1. J Pharmacol Exp Ther. 288:1192-1198.

125. Zhang X, Collins Kl, Greenberg LM (1995). Functional evidence that transmembrane 12 and the loop between transmembrane 11 and 12 form part of the drug-binding domain in P-glycoprotein encoded by MDR1. Jour Biol Chem 270(10):5441-5448.

126. Zhang X, Evans KK, Wright SH (2002). Molecular cloning of rabbit organic cation transporter rbOCT2 and functional comparisons with rbOCTl Am J Physiol Renal Physiol. 283:124-133.